JP2011504596A - サンプル中の分析物を定量測定する際に使用するための内部標準および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2007年11月26日に出願されたU.S.Provisional application Ser.No.61/004,288号の優先権を主張し、この開示全体を本明細書に参照として組み込む。
「正確度」という言葉は、当分野において承認されるものであり、標準または真の値に対する測定、即ち量の適合性の程度を記載している。例えば、分析物の定量の正確度の増大とは、実際または真の値により近い測定値を得る際の改善を指す。この改善は、複数の分析物の質量分析を利用する既存の測定方法を用いて得ることができる正確度に関して、正確度の増大%と同定できる/増大%を参照して記載できる。特定の実施形態において、正確度は、既存の技術と比較して10%を超える(または10%に等しい)、例えば12%を超える(または12%に等しい)、例えば14%を超える(または14%に等しい)、例えば16%を超える(または16%に等しい)、例えば18%を超える(または18%に等しい)、例えば20%を超える(または20%に等しい)、例えば30%を超える(または30%に等しい)、例えば40%を超える(または40%に等しい)を超える。
本発明は、化合物/分析物または化合物/分析物の混合物を分析するための新規な方法およびシステムを記載する。本発明の方法およびシステムは、分析物の複合混合物を分離し、これによってこの混合物を分解でき、こうした混合物の複数の構成成分の同時同定および定量分析が可能になる。
本発明は、例えば既知または本明細書において導入/改良される好適なクロマトグラフィ方法およびシステムのいずれかを利用できる。例えば、特定の実施形態において、クロマトグラフィ分離は、液体クロマトグラフィ、例えば高速液体クロマトグラフィ(HPLC)である。
本発明はまた、分析物を定量分析するのに有用な内部標準および内部標準試薬の両方を含む。例えば、1つの実施形態において、本発明は、同位体、例えば放射性もしくは安定同位体で標識されている、AccQTag(商標)またはこれらの機能性誘導体を含む分析物を定量分析するのに有用な内部標準試薬である。
次の実施例では、絶対定量LC/MS分析に使用するための本発明の内部標準の有用性を例示する。これらの実施例は、例示を目的とするためだけのものであり、いかなる様式によっても本発明の範囲を限定するものではない。
複数の分析物の量を決定することになっている場合(例えば、45個程度のアミノ酸を対象とするような臨床診断のためのアミノ酸)、分析物の全てについて同位体標識された標準を得るのは高価であり、面倒になる。この問題を避けるために、既存の技術は、同位体標識された標準のサブセットだけを使用することを必要とし、1つの標準に対して複数の分析物を定量する。このような妥協案は、異なる分析物の同位体標識された標準に対して定量された分析物に関する正確度および精密度が劣ることになり得る。
本出願を通して引用された全ての参照文献(参考文献、登録特許、公開特許出願、および同時係属中の特許出願)の内容は、この全体を本明細書に参照として明確に組み込む。
当業者であれば、単に通常の実験を使用して、本明細書に記載の本発明の特定の実施態様に対する多くの均等物を認識または確認することができる。このような均等物は、このあとの特許請求の範囲に包含されることを意図する。
Claims (57)
- サンプル中の複数の分析物を定量分析する方法であって、サンプル中の複数の分析物を定量分析するように、
a)サンプル中の分析物を第1の誘導体化剤で誘導体化し、サンプル中に分析物誘導体を形成すること、
b)既知の濃度の複数の分析物誘導体標準をサンプルに添加し、サンプル混合物を形成すること、
c)このサンプル混合物をクロマトグラフィ分離に供すること、
d)個々の分析物誘導体および分析物誘導体標準をそれぞれ検出すること、ならびに
e)サンプル中の各分析物誘導体の量を決定することであって、各分析物誘導体の量が応答係数計算によって決定されること、
を含む、方法。 - 分析物誘導体標準が、分析物標準を第2の誘導体化剤で誘導体化することによって形成されている、請求項1に記載の方法。
- 既知の濃度の分析物標準を第2の誘導体化剤で誘導体化し、既知の濃度の複数の分析物誘導体標準を形成する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 分析物誘導体および対応する分析物誘導体標準の検出は、1:1応答比として測定される、請求項1または3に記載の方法。
- 第1の誘導体化剤が、AccQTag(商標)、PicoTag(登録商標)、またはこれらの機能性誘導体である、請求項1または3に記載の方法。
- 第2の誘導体化剤が同位体を含む、請求項2または3に記載の方法。
- 同位体が放射性同位体または安定な同位体である、請求項6に記載の方法。
- 同位体が、13C、15N、および2Hから成る群から選択される安定な同位体である、請求項7に記載の方法。
- 第2の誘導体化剤が、同位体で標識されているAccQTag(商標)、PicoTag(登録商標)、またはこれらの機能性誘導体である、請求項2または3に記載の方法。
- 同位体が放射性同位体または安定な同位体である、請求項8に記載の方法。
- 同位体が、13C、15N、および2Hから成る群から選択される安定な同位体である、請求項9に記載の方法。
- 第1の誘導体化剤および第2の誘導体化剤が同じ分子の異なる同位体である、請求項4に記載の方法。
- 各分析物誘導体の量が、分析物誘導体ピークと分析物誘導体標準ピークとの応答比に、分析物誘導体標準の濃度を乗じることによって決定される、請求項4に記載の方法。
- 分析物誘導体の数が分析物誘導体標準の数に等しい、請求項1または3に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が5を超える、請求項1または14に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が10を超える、請求項1または14に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が15を超える、請求項1または14に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が20を超える、請求項1または14に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が25を超える、請求項1または14に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が30を超える、請求項1または14に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が35を超える、請求項1または14に記載の方法。
- サンプル中の分析物の数が45を超える、請求項1または14に記載の方法。
- 各サンプル分析物が一級または二級アミノ酸である、請求項1に記載の方法。
- サンプル中の複数の分析物が、小さい有機化合物、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸、ポリヌクレオチド、バイオマーカー、合成または天然ポリマー、およびこれらの混合物から成る群から選択される、請求項23に記載の方法。
- 分析物が、アミノ酸およびこれらの混合物から成る群から選択される、請求項2に記載の方法。
- アミノ酸が、既知の天然および非天然アミノ酸から成る群から選択される、請求項3に記載の方法。
- 各分析物誘導体および分析物誘導体標準の検出が、質量分析を用いて行なわれる、請求項1に記載の方法。
- 質量分析が、大気圧化学イオン化(APCI)、化学イオン化(CI)、電子衝撃(EI)、高速原子衝撃(FAB)、電界脱離/電界イオン化(FD/FI)、サーモスプレーイオン化(TSP)、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化質量分析(MALDI)、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型質量分析(MALDI−TOF)質量分析計、およびエレクトロスプレーイオン化(ESI)から成る群から選択される、請求項27に記載の方法。
- 質量分析がエレクトロスプレーイオン化(ESI)である、請求項28に記載の方法。
- クロマトグラフィ分離が液体クロマトグラフィである、請求項1に記載の方法。
- 液体クロマトグラフィが高速液体クロマトグラフィ(HPLC)である、請求項30に記載の方法。
- HPLCが順相HPLCである、請求項31に記載の方法。
- HPLCが逆相HPLCである、請求項31に記載の方法。
- クロマトグラフィ分離が、微生物カラム、キャピラリーカラム、分取カラム、またはナノカラムを用いて行なわれる、請求項1に記載の方法。
- クロマトグラフィ分離が少なくとも1つの移動相を含む、請求項1に記載の方法。
- 移動相が、次の溶媒、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、エチルアセタート、メチレンクロライド、ジエチルエーテル、メチルt−ブチルエーテル、ベンゼン、トルエン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、およびこれらの混合物から選択される、請求項35に記載の方法。
- 移動相が2つの溶媒の混合物を含む、請求項35に記載の方法。
- 第1の溶媒の比が約5%から約95%である、請求項37記載の方法。
- 少なくとも1つの移動層が不揮発性塩を実質的に含まない、請求項35に記載の方法。
- 移動層が約20mM未満の不揮発性塩を含む、請求項39に記載の方法。
- サンプル中の複数のアミノ酸を定量分析するための方法であって、サンプル中の複数のアミノ酸を定量分析するように、
a)サンプル中の分析物を第1の誘導体化剤で誘導体化してサンプル中にアミノ酸誘導体を形成すること、
b)既知の濃度の複数のアミノ酸誘導体標準をサンプルに添加してサンプル混合物を形成すること、
c)このサンプル混合物をクロマトグラフィ分離に供すること、
d)個々のアミノ酸誘導体およびアミノ酸誘導体標準のそれぞれを検出すること、ならびに
e)サンプル中の各アミノ酸誘導体の量を決定することであって、各アミノ酸誘導体の量が応答係数計算により決定されること
を含む、方法。 - サンプル中の複数の分析物の量を定量分析するための液体クロマトグラフィ/質量分析システムであって、
a)クロマトグラフィカラムおよびクロマトグラフィカラムを通る少なくとも1つの移動相をポンプ輸送するためのポンプを含むクロマトグラフィ分析システム、
b)分析物誘導体を検出可能な質量分析計を含む質量分析による分析システム、
d)AccQTag(商標)またはこれらの機能性誘導体を含む、サンプル中の分析物を誘導体化し、サンプル中に分析物誘導体を形成するために有用な第1の誘導体化剤、ならびに
e)同位体で標識されているAccQTag(商標)またはこれらの機能性誘導体を含む複数の分析物誘導体標準
を含む、システム。 - 分析物誘導体標準の数が10を超える、請求項42に記載のシステム。
- 同位体が放射性同位体または安定な同位体である、請求項42に記載の方法。
- 同位体が、13C、15N、および2Hから成る群から選択される安定な同位体である、請求44に記載の方法。
- サンプル中の複数の分析物の量を定量分析するための液体クロマトグラフィ/質量分析システムであって、
a)クロマトグラフィカラムおよびクロマトグラフィカラムを通る少なくとも1つの移動相をポンプ輸送するためのポンプを含むクロマトグラフィ分析システム、
b)分析物誘導体を検出可能な質量分析計を含む質量分析による分析システム、
d)AccQTag(商標)またはこれらの機能性誘導体を含む、サンプル中の分析物を誘導体化し、サンプル中に分析物誘導体を形成するために有用な第1の誘導体化剤、ならびに
e)同位体で標識されているAccQTag(商標)またはこれらの機能性誘導体を含む複数の分析物誘導体標準を生成できる試薬
を含む、システム。 - 同位体が放射性同位体または安定な同位体である、請求項46に記載の方法。
- 同位体が、13C、15N、および2Hから成る群から選択される安定な同位体である、請求47に記載の方法。
- 複数の分析物の分析物定量の精密度を増大させる方法であって、サンプル中の複数の分析物を分析物定量する精密度を増大させるように、
a)サンプル中の分析物を第1の誘導体化剤で誘導体化し、サンプル中に分析物誘導体を形成すること、
b)既知の濃度の複数の分析物誘導体標準をサンプルに添加し、サンプル混合物を形成すること、
c)このサンプル混合物をクロマトグラフィ分離に供すること、
d)個々の分析物誘導体および分析物誘導体標準をそれぞれ検出すること、ならびに
e)サンプル中の各分析物誘導体の量を決定することであって、各分析物誘導体の量が応答係数計算により決定されること
を含む、方法。 - 精密度が、既存の技術に比較して10%増大する、請求項49に記載の方法。
- 複数の分析物の分析物定量の正確度を増大させる方法であって、サンプル中の複数の分析物を分析物定量する正確度を増大させるように、
a)サンプル中の分析物を第1の誘導体化剤で誘導体化し、サンプル中に分析物誘導体を形成すること、
b)既知の濃度の複数の分析物誘導体標準をサンプルに添加し、サンプル混合物を形成すること、
c)このサンプル混合物をクロマトグラフィ分離に供すること、
d)個々の分析物誘導体および分析物誘導体標準をそれぞれ検出すること、ならびに
e)サンプル中の各分析物誘導体の量を決定することであって、各分析物誘導体の量が応答係数計算により決定されること
を含む、方法。 - 同位体で標識されているAccQTag(商標)またはこれらの機能性誘導体を含む分析物を定量分析するのに有用な内部標準試薬。
- 同位体が放射性同位体または安定な同位体である、請求項52に記載の方法。
- 同位体が、13C、15N、および2Hから成る群から選択される安定な同位体である、請求53に記載の方法。
- 既知の濃度の1以上の分析物と、同位体で標識されているAccQTag(商標)またはこれらの機能性誘導体を反応させることによって調製される、分析物を定量分析するのに有用な内部標準。
- 同位体が放射性同位体または安定な同位体である、請求項55に記載の方法。
- 同位体が、13C、15N、および2Hから成る群から選択される安定な同位体である、請求56に記載の方法。
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