JP2011184401A - メラニン産生抑制剤及び美白剤 - Google Patents

Abstract

【課題】メラニン産生抑制剤並びに美白剤を提供する。
【解決手段】イソババカルコンを含有するメラニン産生抑制剤および美白剤。
【選択図】図１

Description

本発明は、メラニン産生抑制剤及び美白剤に関する。

大気汚染やオゾン層の破壊により表皮に届く紫外線量は年々増加する傾向にあり、それに伴い、紫外線による肌のシミ、ソバカス、色黒などの肌悩みが大きくなっている。紫外線により、皮膚内に存在するチロシンがチロシナーゼ酵素の働きにより酸化されてメラニン色素が産生され、過剰に産生されるとシミ、ソバカス、色黒などの肌悩みとなる。このメラニン色素の産生を抑制し、シミ、ソバカス、色黒を予防する方法として従来よりアルブチンを配合した皮膚外用剤（特許文献１：特開昭６０−１６９０６号公報）、Ｌ-アスコルビン酸及びその誘導体であるＬ-アスコルビン酸のグルコース配糖体を配合した皮膚化粧料（特許文献２：特開平４−１８２４１２号公報）が提案されている。アルブチンを配合した化粧料（特許文献３：特開２００９−６７６９１号公報）や、Ｌ-アスコルビン酸及びその誘導体であるＬ-アスコルビン酸のグルコース配糖体を配合した美白剤は、美白効果が十分でなかったり、美白効果を示す成分を、美白効果を認める濃度に配合すると安全性に問題を生じることがあった。

また、イソババカルコンはインスリン疾患治療剤として知られているが、メラニン産生抑制効果の有無は知られていなかった（特許文献４：ＷＯ２００４／０９６１９８号公報）。

特開昭６０−０１６９０６号公報 特開平０４−１８２４１２号公報 特願２００９−６７６９１号公報 ＷＯ２００４／０９６１９８号公報

本発明は、安全であり、有用なメラニン産生抑制剤および美白剤の提供を課題とする。

上記の課題を解決するために研究を重ねた結果、イソババカルコンを有効成分とするメラニン産生抑制剤、及びイソババカルコンを含有する美白剤が有効であることに至った。

本発明はイソババカルコンを含有するメラニン産生抑制剤及び美白剤とすることにより、従来のメラニン産生抑制剤が添加された美白剤等よりもメラニン産生抑制作用が強い。さらに、活性濃度下で安全性が高いものである。

本発明のイソババカルコン単離、生成スキーム 本発明のイソババカルコンと陽性対照の化合物によるメラニン産生量を比較したグラフ

以下本発明の実施形態を更に詳細に説明する。
本発明に用いるイソババカルコンは分子量３２４、組成式Ｃ_２０Ｈ_２０Ｏ_４、次の化学式（１）の化合物である。

具体的には、化粧料等の人体に直接適用するメラニン産生抑制能を有する化合物を探索する目的で、ヒハツ等の植物抽出物から、メラニン産生抑制能を有することが期待される多数の化合物を、メラニン抑制能を測定する装置に通してスクリーニングし、メラニン抑制能が高い化合物を選定した。さらに人体に直接適用できる安全性を確認するために、安全性を確認する試験を行ない、メラニン抑制能が高く、かつ活性濃度において毒性を示さない化合物を探索した。
その結果、多数の化合物の中からメラニン産生抑制能が公知の化合物よりも優れ、安全性を備える化合物を特定し、この化合物がイソババカルコンである。
このように、イソババカルコンはヒハツ、Ａｎｔｈｙｌｌｉｓ ｈｅｒｍａｎｎｉａｅ等の植物に含まれており、それら植物抽出物から単離精製して得ることができる。

本発明のメラニン産生抑制剤は、美白作用を発現させるための使用にあたって、各種美白剤用の基剤や添加剤等と混合して、本発明の美白剤とすることができる。

本発明の美白剤は、種々の公知の形態及び用途、例えば美白用乳化化粧料、美白用クリーム、美白用化粧水、美白用油性化粧料、美白用パック剤、美白用ファンデーション、美白用オイル等として用いることができる。また、本発明の美白剤は、美白用皮膚外用医薬、美白用医薬部外品、美白用化粧料、美白用洗顔料、石鹸、制汗剤、入浴剤等を含む。また、本発明の美白剤は、直接皮膚に適用するものに限らず、美白用の経口剤、注射剤、経口医薬としても良い。

本発明のイソババカルコンを含有するメラニン産生抑制剤及び美白剤は通常使用される製剤化方法にしたがって、溶液上、ペースト状、固形状、粉粒体状等の任意の形態に製造することができる。
本発明のメラニン産生抑制剤及び美白剤には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、pH調整剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、他の美白剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。

油脂類としては、例えば、ツバキ油、月見草油、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ナタネ油、トウモロコシ油、ゴマ油、ホホバ油、胚芽油、小麦胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリン、等の液体油脂、カカオ脂、ヤシ油、硬化ヤシ油、パーム油、パーム核油、モクロウ、モクロウ核油、硬化油、硬化ヒマシ油等の固体油脂、ミツロウ、キャンデリラロウ、綿ロウ、ヌカロウ、ラノリン、酢酸ラノリン、液状ラノリン、サトウキビロウ等のロウ類、流動パラフィン、スクワレン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス等が挙げられる。

高級脂肪酸として、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）等が挙げられる。

高級アルコールとして、例えば、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、セチルアルコール、セトステアリルアルコール等の直鎖アルコール、モノステアリルグリセリンエーテル、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、オクチルドデカノール等の分枝鎖アルコール等が挙げられる。

シリコーンとして、例えば、鎖状ポリシロキサンのジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等、環状ポリシロキサンのデカメチルポリシロキサン等が挙げられる。

アニオン界面活性剤として、例えば、ラウリン酸ナトリウム等の脂肪酸塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の高級アルキル硫酸エステル塩、ＰＯＥラウリル硫酸トリエタノールアミン等のアルキルエーテル硫酸エステル塩、Ｎ−アシルサルコシン酸、スルホコハク酸塩、Ｎ−アシルアミノ酸塩等が挙げられる。

カチオン界面活性剤として、例えば、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等が挙げられる。

両性界面活性剤として、例えば、アルキルベタイン、アミドベタイン等のベタイン系界面活性剤等が挙げられる。

非イオン界面活性剤として、例えば、ソルビタンモノオレエート等のソルビタン脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体が挙げられる。

防腐剤として、例えば、メチルパラベン、エチルパラベン等を挙げることができる。

金属イオン封鎖剤として、例えば、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、エデト酸、エデト酸ナトリウム塩等のエデト酸塩を挙げることができる。

高分子として、例えば、アラビアゴム、トラガカントガム、ガラクタン、グアーガム、カラギーナン、ペクチン、寒天、クインスシード、デキストラン、プルラン、カルボキシメチルデンプン、コラーゲン、カゼイン、ゼラチン、メチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）、アルギン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ等）等のビニル系高分子、ベントナイト等を挙げることができる。

増粘剤として、例えば、カラギーナン、トラガカントガム、クインスシード、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ＣＭＣ、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシビニルポリマー、グアーガム、キサンタンガム等を挙げることができる。

粉体成分としては、例えば、タルク、カオリン、雲母、シリカ、ゼオライト、ポリエチレン粉末、ポリスチレン粉末、セルロース粉末等の体質顔料、無機白色顔料、無機赤色系顔料等の着色顔料、酸化チタンコーテッドマイカ、酸化チタンコーテッドタルク、着色酸化チタンコーテッドマイカ等のパール顔料、赤色２０１号、赤色２０２号等の有機顔料を挙げることができる。

紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸、サリチル酸フェニル、パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン等を挙げることができる。

紫外線遮断剤として、例えば、酸化チタン、タルク、カルミン、ベントナイト、カオリン、酸化亜鉛等を挙げることができる。

保湿剤として、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、キシリトール、マルチトール、マルトース、ソルビトール、ブドウ糖、果糖、ショ糖、乳糖、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸、シクロデキストリン等が挙げられる。

薬効成分としては、例えば、ビタミンＡ油、レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン等のビタミンＢ２類、ピリドキシン塩酸塩等のＢ６類、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム等のパントテン酸類、ビタミンＤ２、コレカルシフェロール等のビタミンＤ類、α−トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ−α−トコフェロール等のビタミンＥ類等のビタミン類を挙げることができる。

その他に薬効成分として、グルタチオン、ユキノシタ抽出物等の美白剤、ローヤルゼリー、ぶなの木エキス等の皮膚賦活剤、カプサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモール、カフェイン、タンニン酸、γ−オリザノール等の血行促進剤、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸誘導体、アズレン等の消炎剤、アルギニン、セリン、ロイシン、トリプトファン等のアミノ酸類、常在菌コントロール剤のマルトースショ糖縮合物、塩化リゾチーム等を挙げることができる。

さらに、カミツレエキス、パセリエキス、ワイン酵母エキス、グレープフルーツエキス、スイカズラエキス、コメエキス、ブドウエキス、ホップエキス、コメヌカエキス、ビワエキス、オウバクエキス、ヨクイニンエキス、センブリエキス、メリロートエキス、バーチエキス、カンゾウエキス、シャクヤクエキス、サボンソウエキス、ヘチマエキス、トウガラシエキス、レモンエキス、ゲンチアナエキス、シソエキス、アロエエキス、ローズマリーエキス、セージエキス、タイムエキス、茶エキス、海藻エキス、キューカンバーエキス、チョウジエキス、ニンジンエキス、マロニエエキス、ハマメリスエキス、クワエキス等の各種抽出物を挙げることができる。

美白用の経口剤としては、イソババカルコンをそのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは飲食品中に含有せしめて、栄養補助食品、機能性食品、健康食品、特定保健用食品又は通常食品の素材として使用できる。例えば、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの適当な助剤を添加することができる。
美白用の経口剤としてのイソババカルコンの有効投与量は、対象者の年齢、体重、症状、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の活性の強さ等により、適宜選択決定されるが、例えば、１日あたり１〜５０００ｍｇが好ましく、特に好ましくは１０〜１０００ｍｇである。これを１日に数回に分けて投与しても良い。

美白剤へのイソババカルコンの配合量としては、０．００００１〜８０質量％が好ましいが、必ずしもこれに制限されず、０．０００１〜８０質量％、さらに０．００１〜５０質量％としてもよい。

[イソババカルコンの抽出]
ヒハツ Ｐｉｐｅｒ ｌｏｎｇｕｍ（コショウ属インドナガコショウ）の実の乾燥物の分画を図１のように行った。ヒハツの実の乾燥物５gを１００％エタノールを用いて抽出し、１．７１gの抽出物を得た。エタノール抽出物を酢酸エチルと水によって液液分配し、酢酸エチル層をヘキサンとメタノールで液液分配を行った。９０％メタノール層をＴＧＫ−ＧＥＬ Ｇ３０００Ｓカラムで分画し、７０％エタノール層をシリカゲルカラム（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ＦＬ６０Ｄ ＣＨＣl_３：ＭｅＯＨ＝１００：０→９９：１→９０：１０）によって６つのフラクションに分けた。そこから得られたＦｒ．５をさらにＰｒｅｐ ＴＬＣ （Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ６０Ｆ_２５４、０．５ｍｍ ヘキサン：酢酸エチル=１：２）によって８つのフラクションに分けた。そこから得られたＦｒ.２をさらにＰｒｅｐ ＴＬＣ （Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ６０Ｆ_２５４、０．５ｍｍトルエン：アセトン=７：３）によって７つのフラクションに分けた。そこから得られたＦｒ．３をＨＰＬＣ（Ｓｕｎ Ｆｉｒｅ^ＴＭ Ｃ１８ ＯＢＤ ^ＴＭ １０μm ８５％ＭｅＯＨ）によってさらに３つの画分に分けた。そこから得られたＦｒ.２がイソババカルコンであった。

[イソババカルコンの同定]
前記Ｆｒ.２のイソババカルコンは、ＭＳのデータより３２５ ［Ｍ＋Ｈ］⁺, ６７１ [２Ｍ＋Ｎａ]⁺のピークを観測し、分子量は３２４であった。また、^１Ｈ-ＮＭＲと^１Ｈ-^１Ｈ−ＣＯＳＹおよびＬＣ／ＭＳによる構造解析でイソババカルコンの構造を推測し、^１Ｈ-ＮＭＲの化学シフトが文献値と一致することを確認した（表１）。前記Ｆｒ.２がイソババカルコンであることが、ＭＳ、ＮＭＲのデータより確認された。

（参考文献）
Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｃｈａｌｃｏｎｅｓ Ｆｒｏｍ Ａｎｔｈｙｌｌｉｓ ｈｅｒｍａｎｎｉａｅ. Ｌ． Ｐｉｓｔｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ. Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４２, ５, １４５５-１４５８, (１９９６)

[メラニン産生抑制試験]
イソババカルコンについて、以下の試験によって、メラニン産生抑制活性を測定した。

メラニン産生抑制活性は、以下の方法により求めた。イソババカルコン、陽性対照としてアルブチンを検体として、それぞれメタノールを用いて１０ｍｇ／ｍｌに調製した。Ｂ１６Ｆ１細胞をＤＭＥＭ に１０％ＦＢＳを添加した培地を用い、４ｘ１０^４ｃｅｌｌｓ／mlで２００μl播種し、１００ｎＭα−ＭＳＨおよびメタノールで溶解した検体をイソババカルコンでは終濃度０、１、１０、３０μｇ／ｍｌ添加し、アルブチンでは０、１、３、１０、３０、１００、３００、１０００μｇ／ｍｌ添加し、９６時間５％ＣＯ_２下で培養した。培養終了後、培養上清を４０５nmの波長により測定し、検体を培地に溶解したときの４０５nmの値を差し引き、メラニン量の定量値とした。
メラニン産生量（％）は、［ＮＬＥ４，Ｄ−ＰＨＥ７］α−ＭＳＨのみ処理したときの定量値をＡ、各濃度で検体を添加したときの定量値をＡｓとして、次式により求めた。
メラニン産生量（％）＝Ａｓ／Ａ×１００

結果を表２に示す。各検体濃度におけるメラニン産生量の測定値を用いてメラニン産生抑制のＥＣ５０（メラニン産生量が５０％となるときの培養液中の検体の濃度）を求めた。各検体濃度におけるメラニン産生量の測定値を図２にグラフ化した。

イソババカルコンを用いた場合のメラニン産生量は、イソババカルコンを３μｇ／ｍｌとした場合には、３１％にまで減少し、１０μｇ／ｍｌ及び３０μｇ／ｍｌにすると４％にまで低下した。
一方陽性対照であるアルブチンを使用した場合、３μｇ／ｍｌまでの濃度ではメラニン産生量が１００〜９８％とほとんど変化はなく、１０μｇ／ｍｌにまで濃度を上げるとようやく８４μｇ／ｍｌと若干メラニン産生量が低下するに留まる。さらにアルブチンの濃度を３０μｇ／ｍｌと更に高濃度にしてもまだメラニン産生量が４１％と、アルブチンが３μｇ／ｍｌの場合よりも高い結果を示した。アルブチンの濃度を３００μｇ／ｍｌ以上にして初めてイソババカルコンの濃度が１０μｇ／ｍｌのときと同程度になる。
このような、イソババカルコンとアルブチンのメラニン産生量に関する結果によれば、イソババカルコンはアルブチンよりもはるかに低濃度で十分なメラニン産生抑制を発揮する。

イソババカルコンで活性の認められた条件において細胞生存率をトリパンブルー細胞外排出試験によって測定した。検体はメタノールを用いて１０ｍｇ／ｍｌに調製した。
Ｂ１６Ｆ１細胞を２．５×１０^４ ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製し、２４ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ）に播種し（１ｍｌ／ｗｅｌｌ）、翌日、検体（イソババカルコン）１０μｇ／ｍｌを処理し３７ ℃、５％ CO_２で９６時間インキュベートした。続いて、細胞培養液をエッペンドルフチューブに移し、各ウェルを２００μlのＰＢＳ^-で２回洗浄し、エッペンドルフチューブに移した。次に、各ウェルに２００μlのトリプシン-ＥＤＴＡ溶液を加え、３７ ℃でインキュベートして細胞を遊離させ、エッペンドルフチューブに移した。これを遠心分離（１,５００×g、５分）して上清を除去し、２０μｌの新しい培地を加えた。これに５倍濃縮のトリパンブルー染色液（４ｍｇ／ｍｌ トリパンブルー（Ｓｉｇｍａ）、９ｍｇ／ｍｌ ＮａＣｌ）を５μl加え攪拌しサンプルを作成した。各サンプルを血球計算板（エルマ）に乗せ、顕微鏡視野内の全細胞数及び細胞内が青く染色された死細胞数を測定し、細胞生存率を求め細胞毒性の有無を調べた。細胞生存率（％）は、検体を添加しないときの定量値をＢ、各濃度で検体を添加したときの定量値をＢ_Ｓとして、次式により求めた。

[細胞生存率試験（トリパンブルー細胞外排出試験）]
細胞生存率（％）＝Ｂ_S／Ｂ×１００

検体１０μｇ／ｍｌ下で培養したときの細胞生存率は、９７．６（±０．３）％となり、活性濃度下における細胞毒性は認められなかった。よって、本発明のイソババカルコンを有効成分とするメラニン産生抑制剤や、イソババカルコンを含有する美白剤はメラニン産生抑制作用を示しながらも、細胞毒性がなく安全性が高いことが確認できる。

以下に、本発明の処方例を示す。それぞれ常法に従って製造した。
処方例１ 美白用ローション
成分 配合量（質量％）
１．グリセリン １０
２．１,３-ブチレングリコール ５
３．ブドウ糖 ２
４．エタノール ５
５．カルボキシビニルポリマー ０．０２
６．グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
７．ヒアルロン酸ナトリウム ０．００１
８．イソババカルコン ０．１
９．クエン酸 ０．０５
１０．クエン酸ナトリウム ０．１
１１．水酸化カリウム ０．０１
１２．精製水 残余

処方例２ 美白用クリーム
成分 配合量（質量％）
１．ステアリルアルコール ６
２．ステアリン酸 ２
３．スクワラン １０
４．オクチルドデカノール ５
５．オリーブ油 ５
６．１,３-ブチレングリコール ８
７．ポリエチレングリコール１５００ ４
８．POE(２５)セチルアルコールエーテル ３
９．モノステアリン酸グリセリル ２
１０．イソババカルコン ０．１
１１．精製水 残余

処方例３ 美白用パック
成分 配合量（質量％）
１．ポリビニルアルコール １５
２．カルボキシメチルセルロース ５
３．１,３-ブチレングリコール ５
４．エタノール １２
５．イソババカルコン ０．０５
６．POEオレイルアルコールエーテル ０．５
７．クエン酸 ０．０２
８．クエン酸ナトリウム ０．０４
９．精製水 残余

処方例４ 美白用錠剤
成分 配合量（質量％）
１．イソババカルコン ６３
２．乳糖 ２４
３．コーンスターチ １２
４．グアーガム １

処方例５ 美白用飲料
成分 配合量（質量％）
１．イソババカルコン １０
２．果糖ブトウ糖液糖 １５
３．クエン酸 １０
４．ビタミンC ５
５．香料 １
６．色素 １
７．精製水 残余

Claims (2)

1. イソババカルコンを有効成分とするメラニン産生抑制剤。
2. イソババカルコンを含有する美白剤。
   

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