JP2011132166A - 抗アンドロゲン剤及び皮脂分泌抑制剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ラクトフェリンを含有することを特徴とする抗アンドロゲン剤、この抗アンドロゲン剤を有効成分として配合することを特徴とする皮脂分泌抑制剤、この抗アンドロゲン剤を有効成分として配合することを特徴とする養毛剤、およびラクトフェリンを有効成分とする抗アンドロゲン剤を含有する飲食品。
【選択図】なし
Description
特許文献1は、ざ瘡治療に関する文献で、請求項に「ざ瘡の治療に対する経口的な組成物を調製するための、ラクトフェリンを含んでなる乳漿タンパク質画分の使用」と記載されている。しかしその作用メカニズムに関しての詳細な記載はない。
特許文献2、3、4、5は、抗炎症、皮脂調節、抗菌活性およびβディフェンシン(抗菌ペプチド)産生促進に起因するざ瘡治療に関する文献である。特許文献3には、「加水分解乳タンパク質はこれまで毛髪および皮膚の状態を改善する際の使用が知られていた。この物質は乾燥肌での皮脂の流れを改善し、脂性肌での過剰な皮脂産生を低減させる皮脂調節剤として使用できる。」と記載されている。しかしながらラクトフェリンに関する記載は無い。特許文献6はラクトフェリンの抗酸化活性に起因する抗脱毛効果に関する文献であり、頭皮表面で生じた酸化ストレスが毛包に与える悪影響を軽減するという内容であるが、ラクトフェリンの抗アンドロゲン作用に関する記載はない。特許文献7はラクトフェリンの抗炎症活性に起因する頻尿および前立腺肥大の改善に関する文献であり、尿路を圧迫する炎症を鎮静化し、排尿を容易にするという内容であり、抗アンドロゲン作用に関する記載は無い。非特許文献1は、ラクトフェリンの皮脂に対する効果に言及しているが、その詳細な内容については具体的な開示がない。
本発明は、ラクトフェリンを含有することを特徴とする抗アンドロゲン剤、に関する。
本発明は、上記の抗アンドロゲン剤を有効成分として配合することを特徴とする皮脂分泌抑制剤、に関する。
本発明は、上記の抗アンドロゲン剤を有効成分として配合することを特徴とする養毛剤、に関する。
本発明は、ラクトフェリンを有効成分とする抗アンドロゲン剤を含有する飲食品に関する。
テストステロン5α−リダクターゼ阻害試験
<試験方法>
1.3.0mMテストステロン溶液(プロピレングリコールで溶解)0.1mlに、5mM Tris-HCl緩衝液(pH7.2)を0.5ml加えた。
2.更に、6.7mM NADPH溶液(5mM Tris-HCl緩衝液(pH7.2)に溶解)0.1mlならびにサンプル溶液(50%エタノールに溶解)0.05mlを加え、37℃で予備加熱後、酵素液(S-9、オリエンタル酵母)0.1mlを加えて1時間インキュベートを行った。
本試験において、ラクトフェリンは牛由来のラクトフェリンを調製して使用し、対照として、ノコギリヤシを使用した。
3.その後、3mlジクロロメタンを加えて反応を停止させ、0.5mlの内部標準溶液(0.1mg/mlのp-ヒドロキシ安息香酸n-ヘキシルエステル)を加え、10分間振とうし、3000rpmで10分間遠心分離した。
4.ジクロロメタン層を分取して、減圧乾燥を行った。乾燥物にメタノール5mlを加えて溶かし、試料溶液とした。得られた試料溶液からHPLCにより残存するテストステロンを定量した。
測定条件は、YMC A-302(内径4.6×150mm)カラムを使用し、カラム温度40℃、流速1ml/分の条件でメタノール/水(65/35)で溶離し、254nmで検出した。また、測定は内部標準物質法を用いて行い、阻害率(%)を次式から求めた。
阻害率(%)=(A−B)/(C−B)×100
A:試験液を加えたときのテストステロン量
B:コントロール30分のテストステロン量(試験液の代わりに、50%エタノール溶液を用いて、反応を行ったときのテストステロン量)
C:コントロール0分のテストステロン量(トリス−塩酸緩衝液、テストステロン、試験液および酵素液を混和した後に、NADPHを加える前に、ジクロロメタンを加えて反応を起こさないようにしたときのテストステロン量)
<試験結果>
得られた結果を図1に示す。図1から明らかなように、ポジティブコントロールであるノコギリヤシは1000ppmの濃度で約35%の阻害活性を示したが、ラクトフェリンについてはテストステロン5α−リダクターゼ阻害活性は認められなかった。
アンドロゲン受容体結合阻害試験
<試験方法>
1.アンドロゲン依存性マウス乳癌細胞SC−3細胞を、2% DCC処理FCS含有MEM培地を用いて、1.0×104 cells/well/100μlの細胞密度にて96穴マイクロプレートに播種、37℃、5%CO2−95% airの下で培養した。
2.24時間後に、試験試料および10−8MのDHTを添加したHMB培地(0.1% BSA含有Ham F12+MEM培地)に培地を交換して48時間培養する。
本試験において、ラクトフェリンは牛由来のラクトフェリンを調製して使用し、ポジティブコントロールとして、スピロノラクトンを使用した。
3.その後、MTT還元法により、ブルーホルマザンの吸収極大点である570nmの吸光度を測定し、細胞増殖を評価した。
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に650nmの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量とする。上記と並行して、試料単独でSC−3細胞に及ぼす影響をみるため、HMB培地にDHTを添加せず試料のみを添加して、同様の培養と測定を行なう。さらに、コントロールとして、試料およびDHTを添加しないHMB培地で培養した場合、および試料を添加せずDHTのみを添加したHMB培地で培養した場合についても同様の測定を行う。測定結果より、抗アンドロゲン作用を示す結合阻害率を次式により算出する。
結合阻害率(%)=〔{(A−B)−(C−D)}/(A−B)〕×100
A:DHT添加、試料無添加の場合の吸光度
B:DHT無添加、試料無添加の場合の吸光度
C:DHT添加、試料添加の場合の吸光度
D:DHT無添加、試料添加の場合の吸光度
<試験結果>
得られた結果を図2に示す。図2から明らかなように、ポジティブコントロールであるスピロノラクトンは10−5Mの濃度で約70%の結合阻害活性を示した。ラクトフェリンについても、濃度依存的結合阻害活性が認められ、60ppmの濃度において約85%の阻害活性を示した。
皮脂腺細胞培養試験
<試験方法>
1.本試験ではハムスター皮脂腺細胞培養キット KB−1000(クラボウ社製)を用いて行った。
正常ゴールデンハムスター耳介由来の皮脂腺細胞を5.0×104 cells/wellの密度で24ウェルプレートに播種した。試験期間中、テストステロンを1×10−6Mの濃度で含有させた培地で培養した。
2.コンフルエントになるまで数日培養後、試験試料を含有する培地に交換した。1日おきに試料培地で培地交換を行い、約2週間培養を続けた。
本試験において、ラクトフェリンは牛由来のラクトフェリンを調製して使用し、対照として、スピロノラクトンを使用した。
3.その後、皮脂合成測定キットSE−3001(クラボウ社製)を用いて、WST-8溶液を各ウェルに添加し、30分間37℃でインキュベートした。上清を450nmの波長で測定し、生細胞数を計測した。
4.更に、オイルレッドO染色し、顕微鏡観察をするとともに、100%イソプロパノールで抽出し、520nmの波長で測定し、脂質合成量を計測した。
次式により補正することで、細胞あたりの脂質合成量を比較した。
細胞あたりの脂質合成量の比較=吸光度B/吸光度A
吸光度A:細胞数測定値(450nm)
吸光度B:脂質合成量測定値(520nm)
<試験結果>
得られた結果を図3及び図4に示す。図3及び図4から明らかなように、ポジティブコントロールであるスピロノラクトンは1×10−5Mの濃度において、顕微鏡観察および吸光度測定において、コントロールと比較して皮脂の合成量が減少していた。一方、ラクトフェリンは、顕微鏡観察および吸光度測定において、濃度依存的に皮脂合成量を抑制し、10ppm、20ppmの濃度において皮脂合成量を60%まで抑制した。
下記処方にしたがって錠剤を調製した。
D−マンニトール 42.6%
乳糖 42.6
結晶セルロース 8.5
ヒドロキシプロピルセルロース 4.3
ラクトフェリン 2.0
100.0%
下記処方にしたがってチューインガムを調製した。
ガムベース 20.0%
砂糖 54.7
グルコース 14.5
水飴 9.3
香料 0.5
ラクトフェリン 1.0
100.0%
下記処方にしたがってキャンディを調製した。
砂糖 50.0%
水飴 31.4
クエン酸 1.0
香料 0.2
L−メントール 1.0
ラクトフェリン 2.0
水 14.4
100.0%
下記処方にしたがってチョコレートを調製した。
カカオビター 20.0%
全脂粉乳 20.0
カカオバター 17.0
粉糖 40.45
レシチン 0.45
香料 0.1
ラクトフェリン 2.0
100.0%
下記処方にしたがってビスケットを調製した。
砂糖 31.7%
小麦粉 26.8
片栗粉 26.8
バター 3.2
卵 10.2
重曹 0.3
ラクトフェリン 1.0
100.0%
下記処方にしたがってグミゼリーを調製した。
ポリデキストロース水溶液 39.0%
ソルビトール水溶液 8.0
パラチノース水溶液 9.0
マルトース水溶液 20.0
トレハロース水溶液 11.0
ゼラチン 10.0
酒石酸 1.0
ラクトフェリン 2.0
100.0%
下記処方にしたがって錠菓を調製した。
砂糖 46.65%
グルコース 19.0
ショ糖脂肪酸エステル 0.2
香料 0.15
ラクトフェリン 30.0
水 4.0
100.0%
下記処方にしたがってタブレットを調製した。
砂糖 35.85%
ショ糖脂肪酸エステル 0.15
ラクトフェリン 60.0
水 4.0
100.0%
下記処方にしたがってアイスクリームを調製した。
卵黄 11.0%
砂糖 14.0
牛乳 35.5
生クリーム 37.0
バニラビーンズ 0.5
ラクトフェリン 2.0
100.0%
下記処方にしたがってシャーベットを調製した。
オレンジ果汁 16.0%
砂糖 31.0
ラクトフェリン 3.0
水 50.0
100.0%
下記処方にしたがって飲料を調製した。
オレンジ果汁 30.0%
異性化糖 13.34
クエン酸 0.1
ビタミンC 0.04
香料 0.1
ラクトフェリン 2.0
水 54.42
100.0%
Claims (4)
- ラクトフェリンを含有することを特徴とする抗アンドロゲン剤。
- 請求項1に記載の抗アンドロゲン剤を有効成分として配合することを特徴とする皮脂分泌抑制剤。
- 請求項1に記載の抗アンドロゲン剤を有効成分として配合することを特徴とする養毛剤。
- ラクトフェリンを有効成分とする抗アンドロゲン剤を含有する飲食品。
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