JP2011050383A - 硬化をもたらす増殖性疾患の検出方法及びキット、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療剤、ならびに硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定する方法及びキット - Google Patents
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Abstract
【解決手段】生体試料における、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定することを含む、糖尿病性腎症の検出方法。そのキット。
【選択図】なし
Description
メサンギウム細胞の増殖と糸球体硬化は共に進行性の糸球体障害の主要な病理学的特徴である。多くの糸球体硬化を伴う疾患でメサンギウム細胞の増殖が見られる事は進行性の糸球体障害においてこのプロセスが重要である事を示唆している(非特許文献11(A1),非特許文献12(A2))。2つのイベントはほとんどの糸球体疾患で同時に見られるが、メサンギウム細胞の増殖がどのように糸球体硬化の進展に関与しているかは明らかではない。
血小板由来増殖因子(PDGF)がメサンギウム細胞の重要な分裂促進因子である事がin vivoでもin vitroでも示されている(非特許文献13(A3)、非特許文献14(A4))。PDGFが糸球体硬化の進展の鍵となる役割を果たしている事については、実験モデルだけではなくヒトの糸球体疾患でもいくつかの証拠がある(非特許文献13(A3))。PDGF-BBもまたメサンギウム細胞の増殖に重要であると報告されており(非特許文献15(A5))、残存腎モデルでは続いて糸球体硬化の進展が起きる(非特許文献16(A6))。ラットの糸球体腎炎モデルにおいてPDGFに対する中和抗体を投与したところ、メサンギウム細胞の増殖と糸球体硬化の両方が顕著に回復したが(非特許文献17(A7))、細胞増殖の抑制が糸球体硬化病変を抑制する機序はほとんど知られていない。
また、本発明は、PDGF-B鎖による活性化を阻害するPDGFβ受容体抗体(APB5)投与の効果をラットの糸球体腎炎において示し、PDGFシグナル伝達系が糸球体細胞増殖と糸球体硬化の両方を調節している事をin vivoとin vitroで示すことを目的とする。本発明は、糸球体細胞増殖と糸球体硬化に関わっている物質を利用した、硬化をもたらす増殖性疾患の検出方法及びキットを提供することも目的とする。さらに、本発明は、糸球体細胞増殖と糸球体硬化に関わっている物質の発現を抑制する作用を有する物質の用途を提供することも目的とする。さらにまた、本発明は、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定する方法及びキット、細胞外マトリックスの増殖阻害に有効な物質を同定する方法及びキット、ならびにα1IV型コラーゲンの発現抑制に有効な物質を同定する方法及びキットを提供することも目的とする。
ところで、多くの糸球体硬化を伴う疾患群において、メサンギウム細胞の増殖が認められることは、進行性の糸球体障害においてこのプロセスが重要である事を示唆しているが、細胞増殖と糸球体硬化の関連は明らかではない。最近本発明者らは糖尿病性の糸球体硬化において、糸球体硬化の主要な構成成分であるIV型コラーゲン(Col4)の過剰発現がSmad1により転写調節されている事を示した。本研究において、本発明者らはPDGF-B鎖による活性化を阻害するPDGFβ受容体抗体(APB5)投与の効果をラットの糸球体腎炎において示し、PDGFシグナル伝達系が糸球体細胞増殖と糸球体硬化の両方を調節している事をin vivoとin vitroで示した。
メサンギウム増殖性糸球体腎炎の実験モデル(Thy1 GN)は抗ラットThy-1.1モノクローナル抗体の一回の静脈注射によって誘発された。Thy1 GNにおいてメサンギウム細胞の増殖とCol4の発現は6日目で最大となった。Smad1、リン酸化Smad1(pSmad1)、リン酸化STAT3(pSTAT3)に対する免疫組織染色を行なった結果、糸球体のSmad1の発現ピークは6日目であり、メサンギウム増殖とピークが一致していた。糸球体のpSmad1の発現はThy1 GNの1日目より上昇し、発病後4日目に最大となった。APB5で処置したグループではメサンギウム細胞増殖も糸球体硬化も有意に減少した。Smad1、pSmad1、pSTAT3の発現もまたAPB5の投与により調査した全てのポイントで有意に減少していた。APB5処理はin vitroでpSmad1、pSTAT3の発現低下やCol4タンパクの発現の減少と付随してメサンギウム細胞の増殖を減少させた。培養メサンギウム細胞で、ドミナントネガティブなSTAT3の導入はCol4の発現を有意に低下させた。これらのデータは、STAT3とSmad1の活性化がメサンギウム細胞増殖から糸球体硬化への進展に関与している事を示唆している。
本発明は、これらの知見に基づいて完成されたものである。
(1) 生体試料における、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1、リン酸化Smad1、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定することを含む、硬化をもたらす増殖性疾患の検出方法。
(2) 生体試料における、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1、リン酸化Smad1、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定することを含む、硬化をもたらす増殖性疾患の進行度及び/又は治療の有効性を評価する方法。
(3) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1、リン酸化Smad1、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定するための試薬を含む、硬化をもたらす増殖性疾患を検出するためのキット。
(4) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1、リン酸化Smad1、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定するための試薬を含む、硬化をもたらす増殖性疾患の進行度及び/又は治療の有効性を評価するためのキット。
(5) 生体試料における、Smad1及び/又はSmad1活性化作用を有する物質の発現を測定することを含む、糖尿病性腎症の検出方法。
(6) 生体試料における、Smad1及び/又はSmad1活性化作用を有する物質の発現を測定することを含む、糖尿病性腎症の進行度及び/又は治療の有効性を評価する方法。
(7) Smad1及び/又はSmad1活性化作用を有する物質の発現を測定するための試薬を含む、糖尿病性腎症を検出するためのキット。
(8) Smad1及び/又はSmad1活性化作用を有する物質の発現を測定するための試薬を含む、糖尿病性腎症の進行度及び/又は治療の有効性を評価するためのキット。
(9) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制する作用を有する物質を有効成分として含む、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療剤。
(10) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制する作用を有する物質を有効成分として含む、細胞外マトリックスの増殖を阻害する薬剤。
(11) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制する作用を有する物質を有効成分として含む、α1IV型コラーゲンの発現を抑制する薬剤。
(12) 被験物質が、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制するか否かを判定することを含む、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定する方法。
(13) 被験物質が、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制するか否かを判定することを含む、細胞外マトリックスの増殖阻害に有効な物質を同定する方法。
(14) 被験物質が、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制するか否かを判定することを含む、α1IV型コラーゲンの発現抑制に有効な物質を同定する方法。
(15) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定するための試薬を含む、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定するためのキット。
(16) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定するための試薬を含む、細胞外マトリックスの増殖阻害に有効な物質を同定するためのキット。
(17) STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定するための試薬を含む、α1IV型コラーゲンの発現抑制に有効な物質を同定するためのキット。
また、本発明により、STAT3とSmad1の活性化が進行性の糸球体障害時の2つの現象、細胞増殖と糸球体硬化の相互作用を調節する鍵となるパスウェイにある事が示された。これにより、硬化をもたらす増殖性疾患の検出が可能となり、さらに、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療剤、細胞外マトリックスの増殖を阻害する薬剤、α1IV型コラーゲンの発現を抑制する薬剤が提供された。また、本発明により、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定する方法及びキット、細胞外マトリックスの増殖阻害に有効な物質を同定する方法及びキット、ならびにα1IV型コラーゲンの発現抑制に有効な物質を同定する方法及びキットが提供された。
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2003‐319538号の明細書および/または図面に記載される内容を包含する。
本発明は、生体試料におけるSmad1及び/又はSmad1活性化作用を有する物質の発現を測定することを含む、糖尿病性腎症の検出方法を提供する。
PDGFもまた、直接間接の別は不明であるが、本発明者らの研究(実施例2)より、Smad1を活性化する事が明らかである。
「Smad1を活性する」とは、Smad1のセリン残基をリン酸化する事および/または核内へ移行させる事をいう。
アクチビン受容体様キナーゼ3(ALK3)は、別名BMPR-IAで、アクチビン受容体様キナーゼ3(ALK3)は、BMPファミリーのタンパクに結合するtypeIレセプターの1つであり、セリンースレオニン型のレセプターである。BMPsと結合したALK3は、Smad1/5/8を活性化し、核内へのシグナル伝達を担っている。
TGF-βは、多岐にわたる作用を持ち、種々の細胞の増殖・分化、細胞外マトリックス産生、アポトーシス、免疫系などに重要な働きを持っている。TGF−βは、細胞表面の受容体に結合し細胞内へそのシグナルを伝達する。細胞内でのシグナル伝達には一連のSmadタンパク分子群が重要な役割を果たしている。
Smad1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー :5’-ACTACCACCACGGCTTTCAC-3’ (配列番号5)、リバースプライマー:5’-AATAGGATTGTGGGGTGAGC-3’ (配列番号6)
ALK1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’-ccgtcaagatct tctcctcg-3’ (配列番号7)、 リバースプライマー:5’-tcatgtctgaggcgatgaag-3’ (配列番号8)
BMP2のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’- cccagcgtgaaaagagagac-3’(配列番号9)、 リバースプライマー:5’- gagaccgcagtccgtctaag-3’(配列番号10)
BMP4のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’- tgagcctttccagcaagttt -3’(配列番号11)、 リバースプライマー:5’- cttccccgtctcaggtatca -3’(配列番号12)
あるいは、生体試料から全RNAを抽出し、適当なプローブを用いて、ノーザンハイブリダイゼーション法によりSmad1及び/又はSmad1活性化作用を有する物質のmRNAを測定してもよい。適当なプローブは、例えば、NCBI RefseqデータベースのNM_005900のヒト由来のSmad1のmRNAの塩基配列(配列番号1)、NCBI RefseqデータベースのNM_000020のヒト由来のアクチビン受容体様キナーゼ1のmRNAの塩基配列(配列番号2)、GenBankデータベースのACCESSION NM_001200 VERSION NM_001200.1のBMP2のmRNAの塩基配列(配列番号3)、GenBankデータベースのACCESSION NM_001202 VERSION NM_001202.2のBMP4のmRNAの塩基配列(配列番号4)などを基にして、これらの配列の一部又は全部の領域に特異的にハイブリダイズするように設計するとよい。プローブは32Pなどで標識されているとよい。
また、本発明は、Smad1及び/又はSmad1活性化作用を有する物質の発現を測定するための試薬を含む、糖尿病性腎症を検出するためのキットを提供する。
2.硬化をもたらす増殖性疾患の検出方法及びキット
本発明は、生体試料における、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1、リン酸化Smad1、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定することを含む、硬化をもたらす増殖性疾患の検出方法を提供する。
硬化をもたらす増殖性疾患とは、臓器の硬化が観察される疾患をいい、硬化に先立って、あるいは並行して細胞増殖および/または細胞外基質の増加が認められる状態を言う。これには、糖尿病性腎症、慢性糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎、巣状糸球体硬化症、Light Chain Disease(L鎖沈着病)、ループス腎炎、クリオグロブリン血症性腎炎、HIV関連腎炎、紫斑病性腎炎などの糸球体を障害する腎疾患、肝線維化、動脈硬化などを含む。
慢性糸球体腎炎とは、糸球体の炎症と進行性の破壊を起こす、腎臓疾患が慢性に持続している状態を言う。膜性増殖性糸球体腎炎、巣状糸球体硬化症、Light Chain Disease(L鎖沈着病)、ループス腎炎、クリオグロブリン血症性腎炎、HIV関連腎炎、紫斑病性腎炎などの疾患を含む症候群である。
糖尿病性腎症とは、糖尿病の代表的な合併症の1つであり、糖尿病による高血糖状態の持続により、腎機能が進行性に減少する状態を言う。
肝繊維化とは、肝硬変あるいは慢性肝炎などに見られ、肝類洞壁と肝細胞索の間(Disse腔)にコラーゲン等の細胞外基質の増加が認められる状態をいう。肝繊維化は肝細胞癌発生の危険因子であり、線維化が進むほど肝細胞癌の発生率が高くなる事が知られている。
動脈硬化とは、動脈壁が肥厚あるいは硬化する病変の総称であるが、酸化ストレスなどによる内皮細胞の傷害に起因する慢性炎症性・増殖性病変であると考えられている。動脈硬化の進行により、動脈の狭窄・閉塞が起こると血圧上昇、心筋梗塞、脳梗塞等を引き起こすが、臓器障害を起こす前の自覚症状は乏しい。
リン酸化Smad1は、Smad1のセリン残基がリン酸化され活性化された状態のものである。
STAT3のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’-agatgctcactgcgctgga-3’(配列番号21)、リバースプライマー:5’-tccaatgcaggcaatctgtt-3’(配列番号22)
Smad1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’-ACTACCACCACGGCTTTCAC-3’ (配列番号5)、リバースプライマー:5’-AATAGGATTGTGGGGTGAGC-3’ (配列番号6)
ALK1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’-ccgtcaagatct tctcctcg-3’ (配列番号7)、 リバースプライマー:5’-tcatgtctgaggcgatgaag-3’ (配列番号8)
ALK3のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’-tggcactgggatgaaatca-3’(配列番号23)、リバースプライマー:5’-tggttacataaattggtccga-3’(配列番号24)
BMP2のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’- cccagcgtgaaaagagagac-3’(配列番号9)、 リバースプライマー:5’- gagaccgcagtccgtctaag-3’(配列番号10)
BMP4のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマー:5’- tgagcctttccagcaagttt -3’(配列番号11)、 リバースプライマー:5’- cttccccgtctcaggtatca -3’(配列番号12)
あるいは、生体試料から全RNAを抽出し、適当なプローブを用いて、ノーザンハイブリダイゼーション法により、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1、リン酸化Smad1、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質のmRNAを測定してもよい。適当なプローブは、例えば、NCBI RefseqデータベースのNM_139276のヒト由来のSTAT3のmRNAの塩基配列(配列番号19)、NCBI RefseqデータベースのNM_005900のヒト由来のSmad1のmRNAの塩基配列(配列番号1)、NCBI RefseqデータベースのNM_000020のヒト由来のアクチビン受容体様キナーゼ1のmRNAの塩基配列(配列番号2)、NCBI RefseqデータベースのNM_004329のヒト由来のアクチビン受容体様キナーゼ3のmRNAの塩基配列(配列番号20)、GenBankデータベースのACCESSION NM_001200 VERSION NM_001200.1のBMP2のmRNAの塩基配列(配列番号3)、GenBankデータベースのACCESSION NM_001202 VERSION NM_001202.2のBMP4のmRNAの塩基配列(配列番号4)などを基にして、これらの配列の一部又は全部の領域に特異的にハイブリダイズするように設計するとよい。プローブは32Pなどで標識されているとよい。
硬化をもたらす増殖性疾患とは、前述の通りである。
本発明は、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制する作用を有する物質を有効成分として含む、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療剤を提供する。
硬化をもたらす増殖性疾患とは、前述の通りである。
本発明は、被験物質が、STAT3、リン酸化STAT3、Smad1及びリン酸化Smad1からなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を抑制するか否かを判定することを含む、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定する方法を提供する。
硬化をもたらす増殖性疾患とは、前述の通りである。
リン酸化STAT3及びリン酸化Smad1の発現は、それぞれ、抗リン酸化STAT3抗体(サンタクルスバイオテクノロジー)及び抗リン酸化Smad1抗体(カルビオケム)を一次抗体として用いる免疫染色により、測定することができる。
硬化をもたらす増殖性疾患とは、前述の通りである。
リン酸化STAT3又はリン酸化Smad1の発現を測定するための試薬の例としては、抗リン酸化STAT3抗体(サンタクルスバイオテクノロジー)及び抗リン酸化Smad1抗体(カルビオケム)などを挙げることができる。これらの抗体は前述した通りである。
Cell culture
正常な4週令のマウス(C57BL/6JxSJL/J)の腎糸球体由来のメサンギウム細胞株を樹立し、以前に報告した方法にしたがってメサンギウム細胞であることを同定した(S1)。メサンギウム細胞株は1mMグルタミン、100units/ml ペニシリン、100mg/ml ストレプトマイシン、20%FCSを加えてB培地(最少栄養培地と微量元素を添加したF12培地の3:1混合培地)にて培養した。培養細胞は腎糸球体メサンギウム細胞と判定されるための一般的な基準を満たした(S2)。AGEsまたはBSA処理は以前に報告した方法に従って行なった(S3)。
cDNA library construction and Yeast One-hybrid screening
AGEs処理をしたマウス腎糸球体培養細胞よりcDNAを調製しpGADベクターに挿入した。Yeast One-hybrid screeningはMATCHMAKER One-hybrid(Clontech, Palo Alto, California)キットを用いて行なった。マウス由来Col4遺伝子の27bpのタンデムリピート配列(TTCCTCCCCTTGGAGGAGCGCCGCCCG : CIV-1)(配列番号14)を酵母のintegration and reporter vectorであるpHISi(MATCHMAKER One-hybrid(Clontech, Palo Alto, California)またはpLacZi(MATCHMAKER One-hybrid(Clontech, Palo Alto, California)につないでCIV-1-pHISiとCIV-1-pLacZiベクターを作成し、それを直線化して酵母株YM4271(MATCHMAKER One-hybrid(Clontech, Palo Alto, California)の染色体に挿入した。CIV-1-pHISiとCIV-1-pLacZiを挿入した酵母を用いてAGEs処理したマウスメサンギウム細胞由来のcDNAライブラリーのOne-hybrid screeningを行なった。45mM 3-アミノ-1,2,4-トリアゾール(3-AT)を添加したSD/-His/-Leu培地でポジティブクローンを選択した。偽陽性クローンを除くためにβ-galactosidase filter lift assay(Clontech)を行ない、残った酵母のコロニーより回収したプラスミドを大腸菌(DH5α)に導入した。
ChIP assay
ChIP assay はLuo(S5)の方法に従った。抗Smad1抗体、抗Smad-4抗体(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, California)、コントロールIgGを使用して4℃でオーバーナイトした。CIV-1領域をPCRで増幅した。使用プライマーは5’側(5’-GGAGCTCCCCAATTTGTTG-3’) (配列番号15)、3’側(5’-CAGCCTCCGCCTCTTACC-3’) (配列番号16)である。PCR産物はアガロースゲル電気泳動で100bp前後であった。
Reporter assay
1.3×105 COS7細胞を10%FBSを添加したDulbeccoのイーグル培地(DMEM)を用いて6穴プレートで培養した。8時間後に750ngのCIV-1-LacZと同量のSmad-1を組み込んだベクター、あるいはダミーであるmockベクターを同時導入した。そして、内部コントロールとして75ngのCMV-LUC(CMVプロモーターの下流に蛍ルシフェラーゼ遺伝子をつないだもの)も導入した。導入にはFuGENE6 (Roche molecular biochemicals, Indianapolis, Indiana)を使用した。48時間後に細胞をreporter lysis bufferに回収し、β-ガルクトシダーゼ活性とルシフェラーゼ活性ををれぞれβ-galactosidase Reporter System(BD Bioscience, San Jose, California)とLucifarase Reporter Assay System(Promega, Madison, Wisconsin)を用いて測定し、β-ガラクトシダーゼ活性はルシフェラーゼ活性の測定結果で補正した。
RNase protection assay
既報(S6)に従いRNase protection assayを行なった。
このアッセイに用いたプローブの塩基配列はAcc No. U58992の1172-1433の配列で以下の通りである。
cccaccacc gtctgcaaga tccccagcgg gtgcagcttg aaaatcttca acaaccaaga gtttgctcag
ctactggcgc agtctgtgaa
ccacgggttc gagaccgtgt atgaactcac caaaatgtgc actattcgga tgagcttcgt
gaagggttgg ggagccgaat accaccggca ggatgttacc agcaccccct gctggattga
gatccatctg catggccctc tccagtggct ggataaggtt ctgacccaga tgg
(配列番号17)
Western blotting
メサンギウム細胞をAGEsまたは対照としてBSA存在下で72時間培養した。Sample bufferに細胞を回収し、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で解析し、ニトロセルロース膜にブロッティングし、501倍希釈した抗Smad1抗体および抗pSmad1抗体(Santa Cruz Biotechnology)を反応させ、enhanced chemiluminescence detection system(Invitrogen, Carlsbad, California)で検出した。
Immunostaining of cultured cells cytosections
培養細胞を4%パラホルムアルデヒドで固定し、100倍希釈した抗Smad1抗体(Santa Cruz Biotechnology)、100倍希釈した抗pSmad-1抗体(Calbiochem)を使用した。適量のフルオロセインイソチオシアネートを結合二次抗体をレーザー顕微鏡と蛍光顕微鏡(Olympus, Tokyo, Japan)で観察した。
Smad1 morpholino antisense oligonucleotide
Smad1に対する25塩基の長さのアンチセンスオリゴを合成した(Genetools LLC, Philomath, Oregon)。配列は5’-CAAGCTGGTCACATTCATAGCGGCT-3’ (配列番号13)である。対照として合成オリゴ5’-CAtGCTcGTCACATTCAaAGCcGCT-3’ (配列番号18)を使用し、既報(S7)の通りin vitro RNA transcriptionを行なった。
Histology
病理組織学的検討をヒト組織を用いて行なった。本実験はヘルシンキ宣言にもとづき倫理委員会の承認を得て行なった。患者様からは組織提供および研究に使用するための承諾を書面により得ている。5例の糖尿病性腎症の腎生検試料の提供を得た。対照とした正常組織は腎の悪性腫瘍により腎摘出手術を受けた患者様の腎の正常な皮質を腫瘍の反対側よりサンプリングした。腎組織は凍結し5μm厚の切片を切り出しアセトンで5分間固定した。内因性のペルオキシダーゼの影響を消すために1%過酸化水素メタノール中に入れ暗中で20分間インキュベートした。さらに、非特異的な染色を防ぐため、適量の免疫前の血清を用いて室温で20分間インキュベートした。抗Smad1抗体(Santa Cruz Biotechnology)および抗ALK1抗体(R&D, Mickinley Place, Nebraska)を一次抗体として免疫染色を行なった。
マイクロアレイによる発現量の解析
AGEs存在下にて培養したメサンギウム細胞及びBSA存在下で培養したメサンギウム細胞のぞれぞれにおける各mRNAの発現量をAgilent Technologies Mouse cDNA Microarray Kitを用いて測定した。
Signal transducer and activation(STAT)タンパクはたくさんのサイトカインと増殖因子のシグナル伝達に関与している。STAT3の活性化はPDGFが誘導する分裂促進の鍵となる制御因子である(A13)。Nakashimaらはアストロサイトの分化において、転写のコアクチベーターであるp300がSTAT3およびSmad1と物理的に相互作用し、続いて標的遺伝子の転写の活性化が起きる事を報告した(A14)。以上の知見から、PDGFがメサンギウム細胞の増殖においてSTAT3-Smad1シグナル伝達経路を活性化し、この過程がメサンギウム細胞の増殖から糸球体硬化に進展するのに重要であるという仮説を立てた。
本研究において、本発明者らはラットの糸球体腎炎において、PDGF-B鎖による活性化を阻害する抗PDGF-β受容体抗体の投与の効果を示し、糸球体の細胞増殖、糸球体硬化の両方を調節するシグナル伝達経路についてin vivo、in vitroで検討した。
Animals
本研究には体重180〜200gのオスのウィスターラット(日本クレア、日本)が使用された。ラットは特定病原体除去環境下で飼育された。本研究は徳島大学の倫理審査委員会の承認を受け、すべての動物実験は学内のガイドラインに沿って行なわれた。
Induction of Thy1 glomerulogephritis
実験的なメサンギウム増殖性糸球体腎炎(Thy1 GN)は抗ラットThy-1.1モノクローナル抗体(セダーレーンラボラトリーズ社、オンタリオ、カナダ)の1回投与(1mg/kg)により、既報の通り(A15)誘発された。これらのラットは抗Thy-1.1抗体投与後1、2、4、6、12日後(n=6/群)に屠殺された。6匹の齢数を合わせたラットに溶媒のみ投与して各群のコントロールとして屠殺した。
Protocol of treatment with anti-PDGFβ-R antibody in Thy1 GN
ラットモノクローナル抗PDGFβ受容体抗体(APB5)と、そのPDGFβ受容体シグナル伝達系における拮抗効果はin vivo、in vitroで以前に報告されている(A16、A17)。ラットにAPB5(理化学研究所・西川伸一教授のご厚意により提供頂いた)またはAPB5と同じアイソタイプのIgG(理化学研究所・西川伸一教授のご厚意により提供頂いた)を400μgづつ、抗Thy-1.1の投与(0日)より毎日腹腔内投与し、1、2、4、6、12日後(n=6/群)に屠殺した。
Histological examination
Light microscopy
腎臓を摘出後、組織片は光学顕微鏡による研究のためにカルノア液(メタノール:氷酢酸=3:1)で固定しパラフィン包埋した。切片(2μm)をヘマトキシリン・エオシン(HE)、過ヨウ素酸シッフ試薬(PAS)、過ヨウ素酸メセナミン銀試薬(PAM)で染色した。
Immunohistochemistry
腎切片を通常の方法で免疫組織染色した。増殖細胞核抗原(PCNA)、Col4、Smad1について調べるために、カルノア液で固定しパラフィン包埋した組織片を使用した。腎切片は再水和し、0.3%の過酸化水素加メタノールで30分間、内因性ペルオキシダーゼ失活処理した。非特異的な染色を除くために、切片を適量の免疫前血清中で室温で20分間インキュベーションし、アビジンDブロッキング液とビオチンブロッキング液(ベクター、カリフォルニア、USA)でそれぞれ15分間づつ処理した。切片を抗PCNA抗体(1:200希釈)、抗Col4抗体(1:200希釈)、抗Smad1抗体(1:100希釈)(サンタクルスバイオテクノロジー社、カリフォルニア、USA)で室温で60分間インキュベートし、適量のビオチン化二次抗体、続いてアビジン・ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体(ベクタスタチン ABCシステム、ベクター社)とインキュベートし、ジアミノベンチジン四酢酸塩(DAB)を用いて発色させた。リン酸化Smad1(pSmad1)とリン酸化STAT3(pSTAT3)について調べるために、切片を凍結切片用包埋剤OCTコンパウンド(マイルズ社、インディアナ、USA)に包埋し冷却したアセトンに入れ瞬間凍結した。4μm厚の切片を作成し、アセトンで5分間固定し、さらに0.3%過酸化水素加メタノールで30分間、内因性ペルオキシダーゼ失活処理した。切片はPCNAと同様の方法で抗pSmad1抗体(1:100希釈)(カルビオケム、カリフォルニア、USA)、抗pSTAT3抗体(1:100希釈)(サンタクルスバイオテクノロジー)を一次抗体として免疫染色を行なった。核数を調べるために切片をヘマトキシリン液で対比染色した。
Quantitation of light microscopy
PAM染色した組織を用いて糸球体の形態計測を行なった。糸球体面積に対する糸球体表面およびPAM陽性の面積(%)を、画像解析システム付顕微鏡(IPAP、住友化学工業社、大阪、日本)を用いて既報(A18−A20)の通り測定した。ラット1匹につき50の糸球体を解析した。
Quantitation of immunohistochemistry
PCNA:増殖している細胞(PCNA陽性細胞)を定量するために、1標本につき50の糸球体について観察者に試料の情報をつけないで計数してもらい、1糸球体あたりの平均値を算出した。pSmad1:pSmad1の発現を定量するために、糸球体細胞数に対するpSmad1陽性細胞数を計数し、pSmad1陽性細胞の割合を算出した。Col4、Smad1、pSTAT3について、切片上の糸球体間質全体に対して、免疫ペルオキシダーゼ染色で茶色く染色された部分をカラーレンジで選択し、その面積が全体の面積に占める割合をIPAPを用いて定量した。ラット1匹につき50の糸球体を解析した。
Cell culture experiment
正常な4週齢のマウス(C57BL/6JxSJL/J)より摘出した糸球体より、既報の方法(A21)の通りメサンギウム細胞を分離し、糸球体メサンギウム細胞の細胞株を樹立した。メサンギウム細胞は微量元素、1mMグルタミン、100単位/mlのペニシリン、100mg/mlのストレプトマイシン、20%ウシ胎児血清(FCS)を添加したB培地(最小栄養培地とF12培地=3:1混合培地)中で培養した。培養細胞は、一般的に受け入れられている糸球体メサンギウム細胞としての要件にあてはまった(A22)。培養メサンギウム細胞は20%FCSを添加したB培地で100mm径の培養皿に蒔かれた。24時間後に、0.1%BSAを添加したB培地に交換し2日間飢餓状態に置き、その後2%FCSを添加したB培地に5ng/mlのPDGF-B(カルビオケム)を加え、さらに100ng/mlのAPB5またはコントロールとしてラットIgGを加えて24時間培養した。
Cell proliferation test by BrdU ELISA
メサンギウム細胞の増殖は、細胞増殖を定量するための、DNA合成の際のBrdU取り込みの定量を原理とする比色イムノアッセイ(アマシャムファルマシアバイオテク、ニュージャージー、USA)によっても評価した。BrdU ELISAはキット製造元のマニュアルの通り使用した。メサンギウム細胞は、96穴の平底マイクロタイタープレートに10%FCS添加したB培地で低密度に蒔き、オーバーナイトでプレートに接着させた。準集密度的な0.1%BSAを添加したB培地に交換し2日間飢餓状態に置き、その後、2%FCS、5ng/mlのPDGF-B、10mMBrdUを添加したB培地と交換し、100ng/mlのAPB5を添加した。6時間培養後、プレートを遠心し細胞を固定液で固定し1:100希釈したペルオキシダーゼ標識抗BrdUモノクローナル抗体と30分間インキュベーとした。標識抗体を洗浄した後、基質液を加えて15分間置き、1M硫酸で反応を停止させた。5分以内に450nmの吸光度を690nmを対象波長としてELISAプレートリーダーで測定した(モデル550、バイオラッドラボラトリーズ、カリフォルニア、USA)。ブランクは100μLのBrdUを添加しない培地とした。
Western blot analysis
培養されたメサンギウム細胞は0.1%BSA添加B培地で24時間飢餓状態とした。100 ng/mlのAPB5またはコントロールIgGを添加した5ng/mlのPDGF-BBで、培養細胞を120分間刺激した。細胞を溶解バッファーに懸濁し、SDSポリアクリルアミド電気泳動により分離し、ニトロセルロース膜にトランスファーし、1:1000希釈抗pSTAT3抗体、1:1000希釈抗pSmad1抗体、1:2000希釈抗Col4抗体を用いてウェスタンブロッティングを行った。ケミルミネッセンス検出システム(アマシャムファルマシア)を用いて検出した。
Cell Transfection
発現ベクターに組み入れた野生型のSTAT3とドミナントネガティブなSTAT3が入ったプラスミドはJackie.Bromberg(ロックフェラー大学)の厚意により提供された(A23)。メサンギウム細胞(60mm培養皿)に野生型またはドミナントネガティブなSTAT3(8mg)を組み入れた発現ベクターを、リポフェクタミン2000(インビトロジェン)を用い元のマニュアルの通りに導入した。6時間後、培地を増殖培地(60% DMEM 、20% F12、20% ウシ胎児血清)に交換した。48時間後、細胞を溶解バッファーに懸濁し、先に述べた通りウェスタンブロット解析を行なった。
Statistical analysis
全ての値は平均値±SEで表し、Mann-Whitneyノンパラメトリック解析、またはt検定を用いて片側の分散解析を行なった。P<0.05を有意差ありとした。
細胞増殖試験と培養メサンギウム細胞におけるSmad1 mRNA発現データの統計解析にはt検定を用いた。免疫組織染色の定量化と糸球体のSmad1 mRNA発現は片側ANOVAを行った後、多重比較した。P<0.05を有意差ありとした。データはすべて平均値±SDで表した。
Morphological changes in Thy1 GN
Thy 1GNでは、メサンギウム細胞の増殖が注射後2日目から始まり6日目で最大となり、12日目で鎮静化した。図9に各群の6日目の代表的な光学顕微鏡像を示す。Thy1 GN群は糸球体間質が増加し、それは6日目にピークを迎えた(図9B)。糸球体細胞の増殖はPCNAの免疫染色で評価した。PCNA陽性細胞はThy1 GN群で顕著に増加し、6日目に最大値となった(図9E)。
Col4は糸球体硬化においてECMの主要な構成成分の1つである。Col4は、正常対照群では、糸球体基底膜に沿って弱く染色されたが糸球体の部分ではほとんど陽性を示さなかった(図9G)。一方、Thy1 GN群では拡張したメサンギウム部分に強いCol4陽性を示した(図9H)。
Thy1 GNでは、糸球体でPDGF-B、BDGFβ受容体も有意に陽性を示した(図10)。これらの知見はメサンギウム細胞の過剰な増殖、糸球体の肥大、糸球体硬化病変が、抗Thy1抗体により誘発される糸球体腎炎において同時発生的に起きる事を示している。
Anti-PDGFβ-receptor antibody inhibits both glomerular cell prolification and glomerulosclerosis in vivo
APB5は既報にも述べられているようにPDGFβ受容体が仲介するシグナル伝達系を阻害する。Thy1 GNにおいて、APB5処理は処理後のどの時点においても糸球体細胞数とPCNA陽性細胞数の両方を減少させた(図9C、9F、11A、11B)。PDGF-B鎖の過剰発現とPDGFβ受容体はAPB5処理後で有意に減少した(図10C、10F)。APB5処理はThy1 GNにおけるメサンギウム間質増大も有意に減少させた。これは糸球体全体に占めるPAM陽性の面積の割合で評価したものである(図11C)。また、Thy1 GNにおけるメサンギウム細胞のCol4発現はAPB5処理によって減少した(図11D)。これらのデータはThy1 GNにおいて、APB5処理ががメサンギウム細胞の増殖とメサンギウム間質の増大の両方を減少させる事を示している。
Time course of expression of Smad1, phosphor-Smad1(pSmad1) and phosphor-STAT3(pSTAT3) in Thy1 GN
本発明者らはThy1 GNラット腎におけるSmad1の発現を免疫染色で検討した。Smad1は正常対照の糸球体ではほとんど検出されなかったが(図12A)、6日目のThy1 GN群の糸球体は典型的なメサンギウム肥大像を示しSmad1が強く発現していた(図12B)。Smad1の発現を定量するためにIPAP画像解析システムを使用した。糸球体のSmad1発現は6日目に最大となり(図13A)、メサンギウム細胞の増殖のピークと一致した。図12Cに示した通り、糸球体のSmad1発現は6日目以降には急速に減少した。
本発明者らは次に、Thy1 GNにおいてSmad1の転写とSmad1のリン酸化が起きているかどうかについて検討した。免疫組織染色の結果、pSmad1は正常対照群ではほとんど認められなかった(図14A)。しかし、Thy1 GN群では、pSmad1は核の部分に強い陽性を示した(図14B)。pSmad1の発現を定量するために、糸球体あたりのpSmad1陽性細胞を計測した(図13B)。糸球体のpSmad1の発現はThy1 GNの1日目で上昇しており、細胞増殖の初期である4日目にピークを迎えた。
PDGF-BとPDGFβRがThy1 GNで増加している事と、APB5がその過剰発現を抑制する事から、本発明者らはPDGFシグナル伝達系の転写因子であるリン酸化STAT3の免疫染色を行った(A24)。Thy1 GNにおいてpSTAT3の発現は広範に増加しており(図15A、15B、15C)、6日目に最大となった(図13C)。
APB5処理群ではThy1 GNにおける糸球体でのSmad1およびpSmad1タンパクの発現が有意に減少していた(図12D、12E、14D、14E、16A、16B)。pSTAT3の過剰発現もまたAPB5投与後のどの調査点においても有意に減少していた(図15D、15E、16C)。
Effect of anti-PDGFβ-R antibody in vitro
APB5がメサンギウム細胞の増殖を阻害するかどうかを確認するために、本発明者らはAPB5
存在下、あるいは非存在下でのメサンギウム細胞の増殖をBrdU ELIZAを用いて検討した。図17Aに示した通り、APB5の添加はPDGFによって糸球体で起きるDNA合成を抑制した。
APB5がPDGF-Bで刺激されたメサンギウム細胞のpSTAT3 、pSmad1、Col4の発現を抑制するかどうかをウェスタンブロット法を用いて検討した。APB5はSTAT3とSmad1のリン酸化およびCol4の発現を減少させた(図17B)。
Interaction between STAT3 and Smad1
STAT3とCol4発現を増加させるSmad1の相互作用を明らかにするために、ドミナントネガティブなSTAT3を組み込んだベクターを培養メサンギウム細胞に導入した。
ドミナントネガティブなSTAT3の導入は、野生型のSTAT3を導入した時と比較して明らかにpSmad1とCol4の発現を減少させた(図18)。
多くの糸球体障害はメサンギウム細胞の増殖と糸球体硬化を特徴としているが、この重要な病理所見2つに共通な機序については今まで解明されていない。本研究では、まず、STAT3とSmad1の活性化が進行性の糸球体障害時の2つの現象、細胞増殖と糸球体硬化の相互作用を調節する鍵となるパスウェイにある事を示した。これらの結果は21世紀に世界中で主要な問題となっている慢性糸球体腎炎と糖尿病性腎症の病因研究と治療の新たな方向性がある事を支持するものである。
糸球体硬化は、慢性糸球体腎炎、IgA腎症、糖尿病性腎症を含む進行性の糸球体障害の病理学的特徴である。多くの糸球体疾患の初期に糸球体細胞の増殖が起こり、続いて糸球体硬化の進展が起き、だんだんと糸球体障害の終期に進む(A1、A2)。この過程の例はIgA腎症、膜増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、ヒトとThy1 GN、ラットの腎切除モデルなどのような全身性軽鎖病に見られる(A25、A26)。糸球体細胞の増殖を抗PDGF抗体(A7)、抗凝血剤のヘパリン(A27)、ビタミンD類縁体(A19)により阻害すると、続いて進展する進行性の糸球体硬化が起きなくなる事が示されているが、その機序は不明である。本研究で本発明者らはこれらの病理学的過程である、メサンギウム細胞の増殖と糸球体硬化の相互作用を調節する可能性があるメカニズムを提示した。
マウスとヒトメサンギウム細胞のPDGF受容体は同定されている(A28)。PDGFはメサンギウム細胞の強力な、鍵となる分裂促進因子であり、in vitroのメサンギウム細胞で自己分泌型の細胞増殖因子として恒常的に合成されている(A28、A29)。PDGFは、in vivoでもin vitroでも糸球体腎炎、糖尿病性腎症、進行性糸球体硬化などの病理学的状態の進行に重要な役割を果たしている(A3、A4)。PDGF受容体チロシンキナーゼが活性化されると、STAT3タンパクがチロシンリン酸化される事は既報である(A30、A31)。この活性化は増殖の調節と分化を調節している(A32、A33)。発明者等は、リン酸化されたSTAT3の過剰発現が、PDGFとPDGFβ受容体両方の過剰発現に伴って確認された事をin vivoとin vitroで示し、APB5がPDGF、PDGFβ受容体、STAT3の発現量を減らし糸球体腎炎を回復させる事をin vivoとin vitroで示した。
糸球体硬化は主としてメサンギウムのECM量の増加によって特徴づけられる。糸球体硬化の主要な構成要素の1つがCol4である(A34)。本発明者らは、Smad1が糖尿病性腎症においてin vivoでもin vitroでも鍵となる転写因子である事を最近報告した(A8)。リン酸化されたSmad1がCol4の発現上昇および糸球体ECMの増量と並行して強く発現する事を示した。これらの知見はSmad1が糖尿病性腎症における糸球体硬化だけではなく糸球体腎炎においても決定的な役割を果たしている事を明らかにしている。本研究では、in vivoでもin vitroでもPDGFが糸球体のリン酸化されたSmad1の発現を誘導する事もまた示している。
本発明者らは、STAT3とSmad1の相互作用が糸球体硬化に重要な遺伝子の調節をする事を確認した。ドミナントネガティブなSTAT3を導入する事によって、培養メサンギウム細胞でCol4の発現が有意に減少した。STAT3とSmad1の活性化はそれぞれ独立しているようであるが、どちらもPDGFにより活性化された。さらに、ドミナントネガティブなSTAT3を導入するとSmad1のリン酸化が部分的に減少する事から、Smad1の活性化はSTAT3活性化機序の一部であると考えられた。これらの知見は、糸球体腎炎の実験モデルでは、PDGFによるSTAT3活性化はSmad1発現と相互作用し、続いてCol4の活性化が起きる事を示唆している。2つのシグナル伝達経路を理解する事は、進行性の糸球体障害の病理学的なプロセスを明らかにする上で重要である。
様々な臓器で起きる硬化に対する治療は、それらの臓器の機能が失われるのを減速するという補助的なものに限定されている。本発明者らの知見は、硬化を来たす他の増殖性の疾患の本質にも洞察を与えるものである。Smad1とSTAT3は正常な糸球体ではほぼ認められないため、Smad1および/またはSTAT3シグナルを阻害する事は、病的に活性化した細胞増殖およびECM産生を抑制するという機序により、硬化を来たす様々な腎疾患の進展を抑制するのに有用であると考えられる。
糖尿病性腎症である入院患者の治療開始前の尿検体、その後治療開始後1週間毎に尿検体を採取し、抗ALK-1抗体を一次抗体として同様にウェスタンブロット法を行なった。
Smad-1およびALK-3は糖尿病性腎症および腎に硬化が認められた患者尿において検出されたが、正常者および硬化を伴わない腎炎患者の尿では検出されなかった(図17、図19)。また、ALK-1は糖尿病性腎症の治療と共に、尿中への排泄量が経時的に減少した(図18)。
1. The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. N. Engl. J. Med. 329, 977-986
(1993).
2. UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group. Lancet 352, 837-853 (1998)
3. H. Vlassara, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 11704-11708 (1994).
4. M. Brownlee, A. Cerami, H. Vlassara, N. Engl. J. Med. 318, 1315-1321 (1988).
5. T. Doi, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 89, 2873-2877 (1992).
6. H. Vlassara, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 89, 12043-12047 (1992).
7. M. S. Huijberts, et al., J. Clin. Invest. 92, 1407-1411 (1993).
8. S. L. Park, et al., Nature Med. 9, 1025-1031 (1998)
9. L. A. Bruggeman, P. D. Burbelo, Y. Yamada, P. E. Klotman, Oncogene 7, 1497-1502 (1992).
10. N. Iehara, H. Takeoka, Y. Yamada, T. Kita, T. Doi, Kidney Int. 50, 1166-1172 (1996).
11. C. H. Heldin, K. Miyazono, P. ten Dijke, Nature 390, 465-471 (1997).
12. J. Massague, D Wotton, EMBO J. 19, 1745-1754 (2000).
13. B. A. Roelen, M. A. van Rooijen, C. L. Mummery, Dev. Dyn. 209, 418-430 (1997).
14. L. Attisano, et al., Cell 75, 671-680 (1993)
15. L. D. Urness, L. K. Sorensen, D. Y. Li, Nature Genet. 26, 328-331 (2000).
16. J. Larsson, et al., EMBO J. 20, 1663-1673 (2001).
17. D. W. Johnson, et al.. Nature Genet. 13, 189-195 (1996)
18. S. P. Oh, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 97, 2626-2631 (2000).
19. Y. G. Chen, J. Massague, J. Biol. Chem. 274, 3672-3677 (1999).
20. K. D. Tremblay, N. R. Dunn, E. J. Robertson, Development 128, 3609-3621 (2001)
21. A. Dick, W. Risau, H. Drexler, Dev. Dyn. 211,293-305 (1998)
22. S. Huang, K. C. Flanders, A. B. Roberts, Gene, 258, 43-53 (2000)
23. H. Vlassara, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 91, 11704-11708 (1994).
24. Z. Makita, et al., N. Engl. J. Med. 325, 836-842 (1991).
25. O. Chappey, C. Dosquet, M. P. Wautier, J. L. Wautier, Eur. J. Clin. Invest. 27, 97-108 (1997)
26. Vasan, et al., Nature 382, 275-278 (1996)
27. M. Brownlee, H. Vlassara, A. Kooney, P. Ulrich, A. Cerami, Science 27, 1629-1632 (1986).
28. We thank K. Miyazono for providing a plasmid encoding Smad1, and Y. Takishita for his
assistance with histological analysis. We also thank the members of our laboratory for discussion.
Supproted by Grant-in Aid from the Ministry of Education, Science, Sports and Culture of Japan.
S1. C. W. Yang, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 91, 9436-9440 (1994).
S2. M. Davies, The mesangial cell: a tissue culture view. Kidney Int. 45, 320-327 (1994).
S3. N. Iehara, H. Takeoka, Y. Yamada, T. Kita, T. Doi, Kidney Int. 50, 1166-1172 (1996).
S4. P. D. Burbelo, A. Utani, Z. Q. Pan, Y. Yamada, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 90, 11543-11547
(1993).
S5. R. X. Luo, A. A. Postigo, D. C. Dean, Cell 92, 463-473 (1998).
S6. H. Abe, N. Iehara, K. Utsunomiya, T. Kita, T. Doi, J. Biol. Chem. 274, 20874-20878 (1999).
S7. D. G. Ahn, M. J. Kourakis, L. A. Rohde, L. M. Silver, R. K. Ho, Nature 417, 754-758 (2002).
A1. Fogo A, Ichikawa I. Evidence for the central role of glomerular growth promoters in the development of sclerosis. Semin Nephrol. 1989 Dec;9(4):329-42.
A2. Striker LJ, Doi T, Elliot S, Striker GE. The contribution of glomerular mesangial cells to progressive glomerulosclerosis. Semin Nephrol. 1989 Dec;9(4):318-28. Review.
A3. Floege J, Johnson RJ: Multiple roles for platelet-derived growth factor in renal disease. Miner Electrolyte Metab 21: 271-282, 1995
A4. Doi T, Vlassara H, Kirstein M, Yamada Y, Striker GE, Striker LJ: Receptor-specific increase in extracellular matrix production by mesangial cells by advanced glycosylation end products is mediated via platelet-derived growth factor. Proc Natl Acad Sci USA 89: 2873-2877, 1992
A5. Barnes JL, Hevey KA. Glomerular mesangial cell migration in response to platelet-derived growth factor. Lab Invest. 1990 Mar;62(3):379-82.
A6. Floege, J., Burns, M. W., Alpers, C. E., Yoshimura, A., Pritzl, P., Gordon, K., Seifert, R. A., Bowen-Pope, D. F., Couser, W. G., and Johnson, R. J.: Glomerular cell proliferation and PDGF expression precede glomerulosclerosis in the remnant kidney model. Kidney Int. 41: 297-309, 1992
A7. Johnson, R. J., Raines, E. W., Floege, J, et al: Inhibition of mesangial cell proliferation and matrix expansion in glomerulonephritis in the rat by antibody to platelet-derived growth factor. J Exp Med 175: 1413-1416, 1992
A8. Abe, H., Matsubara, T., Iehara, N., Nagai, K., Takahashi, T., Arai, H., Kita, T., and Doi, T. Type IV collagen is transcriptionally regulated by Smad1 under advanced glycation end-products (AGEs) stimulation. (2004) J. Biol. Chem. 2004
A9. Yang X, Ji X, Shi X, Cao X. Smad1 domains interacting with Hoxc-8 induce osteoblast differentiation. J Biol Chem. 2000 Jan 14; 275(2): 1065-72.
A10. Katagiri T, Imada M, Yanai T, Suda T, Takahashi N, Kamijo R. Identification of a BMP-responsive element in Id1, the gene for inhibition of myogenesis. Genes Cells. 2002 Sep;7(9):949-60.
A11. Liu Z, Shi W, Ji X, Sun C, Jee WS, Wu Y, Mao Z, Nagy TR, Li Q, Cao X. Molecules mimicking Smad1 interacting with Hox stimulate bone formation. J Biol Chem. 2004 Mar 19;279(12):11313-9.
A12. Dick A, Risau W, Drexler H. Expression of Smad1 and Smad2 during embryogenesis suggests a role in organ development. Dev Dyn. 1998 Apr;211(4):293-305.
A13. Vignais ML, Sadowski HB, Watling D, Rogers NC, Gilman M. Platelet-derived growth factor induces phosphorylation of multiple JAK family kinases and STAT proteins. Mol Cell Biol. 1996 Apr;16(4):1759-69.
A14. Nakashima K, Yanagisawa M, Arakawa H, Kimura N, Hisatsune T, Kawabata M, Miyazono K, Taga T. Synergistic signaling in fetal brain by STAT3-Smad1 complex bridged by p300. Science. 1999 Apr 16;284(5413):479-82.
A15. Bokemeyer D, Ostendorf T, Kunter U, Lindemann M, Kramer HJ, Floege J: Differentioal activation of mitogen-activated protein kinases in experimental mesangioproliferative glomerulonephritis. J Am Soc Nephrol 11: 232-240, 2000
A16. Sano H, Sudo T, Yokode M, Murayama T, Kataoka H, Takakura N, Nishikawa S, Nishikawa SI, Kita T: Function blockade of platelet-derived growth factor receptor-beta but not of receptor-alpha prevent vascular smooth muscle cell accumulation in fibrous cap lesions inapolipoprotein E-deficient mice. Circulation 2001, 103: 2955-2960
A17. Sano H, Ueda Y, Takakura N, Takemura G, Doi T, Kataoka H, Murayama T, Xu Y, Sudo T, Nishikawa S, Nishikawa S, Fujiwara H, Kita T, Yokode M: Blockade of platelet-derived growth factor receptor-beta pathway induces apoptosis of vascular endothelial cells and disrupts glomerular capillary formation in neonatal mice. Am J Pathol 2002, 161:135-143.
A18. Yamamoto Y, Kato I, Doi T, Yonekura H, Ohashi S, Takeuchi M, Watanabe T, Yamagishi S, Sakurai S, Takasawa S, Okamoto H, Yamamoto H. Development and prevention of advanced diabetic nephropathy in RAGE-overexpressing mice. J Clin Invest. 2001 Jul;108(2):261-8.
A19. Makibayashi K, Tatematsu M, Hirata M, Fukushima N, Kusano K, Ohashi S, Abe H, Kuze K, Fukatsu A, Kita T, Doi T. A vitamin D analog ameliorates glomerular injury on rat glomerulonephritis. Am J Pathol. 2001 May;158(5):1733-41.
Makibayashi, K., Tatematsu, M., Hirata, M., Fukushima, N., Kusano, K., Ohashi, S., Abe, H., Kuze, K., Fukatsu, A., Kita, T., and Doi, T. (2001) Am J Pathol. 158, 1733-1741
A20. Nagai K, Arai H, Yanagita M, Matsubara T, Kanamori H, Nakano T, Iehara N, Fukatsu A, Kita T, Doi T: Growth arrest-specific gene 6 is involved in glomerular hypertrophy in the early stage of diabetic nephropathy. J Biol Chem 278: 18229-18234: 2003
A21. Davies M. The mesangial cell: a tissue culture view. Kidney Int. 1994 Feb;45(2):320-7.
A22. Striker G E, Striker L. J: Glomerular cell culture. Lab Invest, 1985 53: 122- 131
A23. Bromberg JF, Horvath CM, Besser D, Lathem WW, Darnell JE Jr. Stat3 activation is required for cellular transformation by v-src. Mol Cell Biol. 1998 May;18(5):2553-8.
A24. Schindler C, Darnell JE Jr. Transcriptional responses to polypeptide ligands: the JAK-STAT pathway. Annu Rev Biochem. 1995;64:621-51.
A25. Klahr S, Schreiner G, Ichikawa I. The progression of renal disease. N Engl J Med. 1988 Jun 23;318(25):1657-66.
A26. Striker LJ, Doi T, Elliot S, Striker GE. The contribution of glomerular mesangial cells to progressive glomerulosclerosis.Semin Nephrol. 1989 Dec;9(4):318-28.
A27. Olson JL. Role of heparin as a protective agent following reduction of renal mass. Kidney Int. 1984 Feb;25(2):376-82.
A28. Shultz PJ, DiCorleto PE, Silver BJ, Abboud HE. Mesangial cells express PDGF mRNAs and proliferate in response to PDGF. Am J Physiol. 1988 Oct;255(4 Pt 2):F674-84.
A29. Abboud HE, Poptic E, DiCorleto P. Production of platelet-derived growth factorlike protein by rat mesangial cells in culture. J Clin Invest. 1987 Sep;80(3):675-83.
A30. Choudhury GG, Marra F, Kiyomoto H, Abboud HE. PDGF stimulates tyrosine phosphorylation of JAK 1 protein tyrosine kinase in human mesangial cells. Kidney Int. 1996 Jan;49(1):19-25.
A31. Vignais ML, Sadowski HB, Watling D, Rogers NC, Gilman M. Platelet-derived growth factor induces phosphorylation of multiple JAK family kinases and STAT proteins. Mol Cell Biol. 1996 Apr;16(4):1759-69.
A32. Meloche S, Pelletier S, Servant MJ. Functional cross-talk between the cyclic AMP and Jak/STAT signaling pathways in vascular smooth muscle cells. Mol Cell Biochem. 2000 Sep;212(1-2):99-109.
A33. Yanagita M, Arai H, Nakano T, Ohashi K, Mizuno K, Fukatsu A, Doi T, Kita T. Gas6 induces mesangial cell proliferation via latent transcription factor STAT3. J Biol Chem. 2001 Nov 9;276(45):42364-9.
A34. Floege J, Johnson RJ, Gordon K, Iida H, Pritzl P, Yoshimura A, Campbell C, Alpers CE, Couser WG. Increased synthesis of extracellular matrix in mesangial proliferative nephritis. Kidney Int. 1991 Sep;40(3):477-88.
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
また、本発明により、STAT3とSmad1の活性化が進行性の糸球体障害時の2つの現象、細胞増殖と糸球体硬化の相互作用を調節する鍵となるパスウェイにある事が示された。これにより、硬化をもたらす増殖性疾患の検出が可能となり、さらに、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療剤、細胞外マトリックスの増殖を阻害する薬剤、α1IV型コラーゲンの発現を抑制する薬剤が提供された。また、本発明により、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定する方法及びキット、細胞外マトリックスの増殖阻害に有効な物質を同定する方法及びキット、ならびにα1IV型コラーゲンの発現抑制に有効な物質を同定する方法及びキットが提供された。
配列番号1は、ヒト由来のSmad1のmRNAの塩基配列を示す。
<配列番号2>
配列番号2は、ヒト由来のALK1のmRNAの塩基配列を示す。
<配列番号3>
配列番号3は、ヒト由来のBMP2のmRNAの塩基配列を示す。
<配列番号4>
配列番号4は、ヒト由来のBMP4のmRNAの塩基配列を示す。
<配列番号5>
配列番号5は、Smad1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号6>
配列番号6は、Smad1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるリバースプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号7>
配列番号7は、ALK1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号8>
配列番号8は、ALK1のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるリバースプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号9>
配列番号9は、BMP2のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号10>
配列番号10は、BMP2のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるリバースプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号11>
配列番号11は、BMP4のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号12>
配列番号12は、BMP4のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるリバースプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号13>
配列番号13は、Smad1に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの塩基配列を示す。
<配列番号14>
配列番号14は、マウス由来Col4遺伝子の27bpのタンデムリピート配列を示す。
<配列番号15>
配列番号15は、ChIP assayに使用した5’側のプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号16>
配列番号16は、ChIP assayに使用した3’側のプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号17>
配列番号17は、RNase protection assayに使用したプローブの塩基配列を示す。
<配列番号18>
配列番号18は、合成オリゴヌクレオチドの塩基配列を示す。
<配列番号19>
配列番号19は、ヒト由来のSTAT3のmRNAの塩基配列を示す。
<配列番号20>
配列番号20は、ヒト由来のALK3のmRNAの塩基配列を示す。
<配列番号21>
配列番号21は、ヒト由来のSTAT3のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号22>
配列番号22は、ヒト由来のSTAT3のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるリバースプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号23>
配列番号23は、ヒト由来のALK3のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるフォワードプライマーの塩基配列を示す。
<配列番号24>
配列番号24は、ヒト由来のALK3のmRNAを特異的に増幅するRT-PCRに用いるリバースプライマーの塩基配列を示す。
Claims (4)
- 生体試料における、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定することを含む、糖尿病性腎症の検出方法。
- 生体試料における、アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定することを含む、糖尿病性腎症の進行度及び/又は治療の有効性を評価する方法。
- アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定するための試薬を含む、糖尿病性腎症を検出するためのキット。
- アクチビン受容体様キナーゼ1、アクチビン受容体様キナーゼ3及び骨形成タンパクからなる群より選択される少なくとも1種類の物質の発現を測定するための試薬を含む、糖尿病性腎症の進行度及び/又は治療の有効性を評価するためのキット。
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JPWO2008016171A1 (ja) * | 2006-08-04 | 2009-12-24 | 味の素株式会社 | 腎機能障害予防・治療剤 |
KR20120061081A (ko) | 2009-04-10 | 2012-06-12 | 하이얀 치 | 새로운 노화 방지 물질 및 그 확인 방법 |
US20130078660A1 (en) * | 2010-03-23 | 2013-03-28 | Salk Institute For Biological Studies | Methods and compositions for detecting protein modifications |
JP5346360B2 (ja) * | 2010-08-31 | 2013-11-20 | 株式会社マルハニチロ食品 | 塩分の吸収阻害作用をもつ血管保護剤 |
US9719129B2 (en) | 2011-06-10 | 2017-08-01 | Hitachi Chemical Co., Ltd. | Methods for isolating vesicles from biological fluids |
JP6106277B2 (ja) | 2012-10-05 | 2017-03-29 | 日立化成株式会社 | 尿中エキソソームmRNAおよびそれを用いて糖尿病性腎症を検出する方法 |
JP6297676B2 (ja) | 2013-05-06 | 2018-03-20 | 日立化成株式会社 | 標的分子を捕捉するためのデバイス及び方法 |
US10266895B2 (en) | 2014-11-05 | 2019-04-23 | Hitachi Chemical Company Ltd. | Exosomes and microvesicles in intestinal luminal fluids and stool and use of same for the assessment of inflammatory bowel disease |
JP6631852B2 (ja) | 2014-11-12 | 2020-01-15 | 日立化成株式会社 | 臓器障害を診断するための方法および装置 |
CN107249579A (zh) * | 2014-12-03 | 2017-10-13 | 韦恩州立大学 | 涉及增生性疾病的组合物和方法 |
JP6329501B2 (ja) * | 2015-03-11 | 2018-05-23 | アース環境サービス株式会社 | 昆虫の混入時期判定方法 |
JP6841609B2 (ja) | 2015-07-10 | 2021-03-10 | 3スキャン インコーポレイテッド | 組織学的染色の空間的多重化 |
WO2017040520A1 (en) | 2015-08-31 | 2017-03-09 | Hitachi Chemical Co., Ltd. | Molecular methods for assessing urothelial disease |
WO2018066409A1 (ja) * | 2016-10-03 | 2018-04-12 | ヒュービットジェノミクス株式会社 | 糖尿病性腎症の早期病態の特異的な診断を可能とする検査方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4664815B2 (ja) * | 2003-09-11 | 2011-04-06 | ヒュービットジェノミクス株式会社 | 硬化をもたらす増殖性疾患の検出方法及びキット、硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療剤、ならびに硬化をもたらす増殖性疾患の予防及び/又は治療に有効な物質を同定する方法及びキット |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5194596A (en) * | 1989-07-27 | 1993-03-16 | California Biotechnology Inc. | Production of vascular endothelial cell growth factor |
US5350836A (en) * | 1989-10-12 | 1994-09-27 | Ohio University | Growth hormone antagonists |
US6780603B1 (en) * | 1995-07-21 | 2004-08-24 | Regents Of The University Of Minnesota | Analysis of alpha integrins for the diagnosis of diabetic nephropathy |
US5908925A (en) * | 1996-06-27 | 1999-06-01 | Exocell, Inc. | Genetically engineered immunoglobulins with specificity for glycated albumin |
JP2003525862A (ja) * | 1999-01-27 | 2003-09-02 | ザ ユニヴァーシティー オブ サウス フロリダ | ヒト癌の治療のためのstat3シグナル伝達の阻害 |
US6013522A (en) * | 1999-02-23 | 2000-01-11 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense inhibition of human Smad1 expression |
US7098192B2 (en) | 1999-04-08 | 2006-08-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of STAT3 expression |
CA2376675A1 (en) * | 1999-06-11 | 2000-12-21 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antagonists of bmp and tgf.beta. signalling pathways |
US6159697A (en) * | 2000-01-19 | 2000-12-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of Smad7 expression |
AU2001251612A1 (en) | 2000-04-14 | 2001-10-30 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Roles of jak/stat family members in tolerance induction |
GB0127430D0 (en) | 2001-11-15 | 2002-01-09 | Smithkline Beecham Corp | Compounds |
JP4267864B2 (ja) | 2002-04-18 | 2009-05-27 | 古河電気工業株式会社 | フラットワイヤハーネスの長さ調節治具 |
JP2006516020A (ja) * | 2002-08-28 | 2006-06-15 | キュリス インコーポレイテッド | 慢性腎不全の治療におけるモルフォゲン及びace阻害薬の共投与 |
US8090542B2 (en) * | 2002-11-14 | 2012-01-03 | Dharmacon Inc. | Functional and hyperfunctional siRNA |
WO2005002416A2 (en) * | 2003-06-04 | 2005-01-13 | Joslin Diabetes Center, Inc. | Predictors of renal disease |
EP2574625B1 (en) * | 2006-07-21 | 2015-02-25 | HuBit genomix, Inc. | Remedy for renal disease |
US8926710B2 (en) * | 2010-10-25 | 2015-01-06 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Osteoinductive bone graft injectable cement |
-
2004
- 2004-09-09 JP JP2005513889A patent/JP4664815B2/ja active Active
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JPN6010020162; Journal of cellular biochemistry. 2001, Vol.81, No.1, p.102-113 * |
JPN6010020165; Journal of the American Society of Nephrology. 2001, Vol.12, No.11, p.2392-2399 * |
JPN6010020168; Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1994, Vol.91, No.20 * |
JPN6010020172; European journal of biochemistry. 2000, Vol.267, No.24, p.6954-6967 * |
JPN6010020175; The Journal of biological chemistry. 2004 Apr(Epub 2004 Jan), Vol.279, No.14, p.14201-14206 * |
JPN6010020177; The EMBO journal. 2000, Vol.19, No.8, p.1745-1754 * |
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