JP2011020954A - ウコギ属植物(Eleutherococcusspp.)の抽出物、並びにその調製方法及び使用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ウコギ属植物抽出物を調製する工程の提供。当該抽出物の提供。当該抽出物を含んでなる組成物の提供。被験者の、少なくとも1つのメタボリックシンドロームの症状を予防若しくは治療する方法であって、それを必要とする被験者に本発明の組成物を投与することを含んでなる方法の提供。被験者のアディポネクチンに関連する疾患の予防若しくは治療方法であって、それを必要とする被験者に本発明の組成物を投与することを含んでなる方法の提供。被験者のPPARγに関連する疾患の予防若しくは治療方法であって、それを必要とする被験者に本発明の組成物を投与することを含んでなる方法の提供。被験者の酸化ストレスを減少させる方法であって、それを必要とする被験者に本発明の組成物を投与することを含んでなる方法の提供。メタボリックシンドロームの少なくとも1つの症状の予防若しくは治療用薬剤の製造への、本発明の当該抽出物の使用の提供。アディポネクチンに関連する疾患の予防若しくは治療用薬剤の製造への、本発明の当該抽出物の使用の提供。PPARγに関連する疾患の予防若しくは治療用薬剤の製造への、本発明の当該抽出物の使用の提供。酸化ストレスを減少させるための薬剤の製造への、本発明の当該抽出物の使用の提供。
【選択図】なし
Description
被験者への投与に用いるウコギ属植物(Eleutherococcus sp.)抽出物を調製する工程は、以下のステップを含んでなる:
a)Eleutherococcus sp.をアルコール溶液で抽出するステップと、
b)ステップa)から得られる抽出物から固体分を除去し、それによりウコギ属植物(Eleutherococcus sp.)抽出物を得るステップ。
本発明は、治療上有効量の、本発明のウコギ属植物(Eleutherococcus sp.)抽出物を含んでなる組成物の提供に関する。本発明の組成物は、食品成分又は医薬組成物として用いることができる。
本発明の組成物は、少なくとも1つ、好ましくは2つ以上のメタボリックシンドロームの症状の予防若しくは治療のために用いることができる。メタボリックシンドロームの主な症状としては、肥満、中心性肥満症(腹部肥満)、異脂肪血症、耐糖能異常、心血管疾患、インスリン耐性及び2型糖尿病(Life Sci.2003,73:2395−2411)などが挙げられるが、これらに限定されない。
各ウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)(エゾウコギ(Eleutherococcus senticosus(Ruper.et Maxim.)Maxim.)、E.giraldii及びE.trifoliatusを含む)の茎を、機械も用いて粉砕(grind)し、次に溶媒(例えば50%又は70%のメタノール又はエタノール)で、約1/20の重量/体積比で、24時間にわたり、4枚の層のチーズクロスで濾過して抽出し、次に減圧濃縮した。
上記で調製した濃縮MeOH抽出物及びEtOH抽出物を、等量の酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を5%の重炭酸ナトリウムで処理して脂肪酸を除去し、次に濃縮し、MeOH又はEtOH−EtOAc抽出物を得た。
ACCを、ラット肝臓から単離、精製し、実施例1から得られた抽出物によるACC活性の阻害を、Tanabeら(1981.Methods in Enzymology,71(Pt C):5−16)に記載の方法に従いアッセイした。表1に示すように、すべての抽出物が、ACC活性に対する阻害効果を示した。
Wakiその他(2007.Cell Metab.5:357−370)の方法に従い、3T3−L1細胞を、10%のウシ胎仔血清、2mMのグルタミン、100単位/mlのペニシリン、100μg/mlのストレプトマイシン及び110μg/mlのピルビン酸ナトリウムを添加したDMEM(4,500mg/Lのグルコース入り)で、37℃で、5%のCO2インキュベータで培養した。3T3−L1細胞の脂肪細胞への分化を、培地への10μg/mLインスリン(0日目)の添加により開始させた。インスリン含有培地での7日間(2日目及び4日目で培地交換した)の培養の後、細胞を更に、2日間、インスリンを含有しない培地でインキュベートした。また、E.giraldiiの抽出物を、0日目の培地及び交換した際の培地にも添加した。試験に供した細胞中のトリグリセリド(TG)及びアディポネクチンの量、並びに細胞のPPARγの結合活性を、市販のアッセイキット(それぞれR&D Systems社製のQuantikine Mouse Adiponectin immunoassay、Audit Diagnostics社製のTriglycerol Assay Kits、及びBD(商標)Transfactor Family Colorimetric Kits−PPARαβγ(BD Biosciences社製)又はTranscription Factor PPARγ ELISA Kit(Panomics社製))を用いてアッセイし、PPARγの発現を、ウエスタンブロットにより測定した。表2に示すように、E.giraldiiの抽出物は、用量依存的に3T3−L1前脂肪細胞の分化を刺激しうるのみならず、分泌型のアディポネクチン及び細胞内のアディポネクチンの産生をも刺激しうる。図1は、周知のPPARγアゴニスト(トログリタゾン)と異なり、E.giraldiiの抽出物が、PPARγ活性を活性化しうるのみならず、3T3−L1細胞中でのPPARγの産生をも増加させうることを示す。
動物実験を実施し、メタボリックシンドロームの予防及び治療に対する、E.giraldii抽出物の効果を評価した。200gのオスのSDラット(BioLASCO Taiwan社から購入)を、一定の12時間/12時間の光/暗サイクルで、23±2℃の温度に制御された部屋におけるマイクロアイソレータのケージ1つにつき2匹を飼育した。動物に、水及び食餌を自由に摂取させた。
HepG2細胞を、DMEM−LG(5.5mMのグルコースを含む)中に播き(2.5×105細胞/ウェル)、37℃の温度、95%の湿度で、24時間にわたり、5%のCO2雰囲気のチャンバ内でインキュベートした。ウェル中の培地を、新鮮なDMEM−LG、DMEM−HG(50mMのグルコースを含む)又はDMEM−HG−抽出物(50mMのグルコース及び異なるウコギ属植物(Eleutherococcus ssp.)の抽出物を含む)と交換し、細胞を更に120時間インキュベートした。細胞を、D−PBSで二回洗浄し、溶解バッファ(50mMのHepes、1%のトリトンX−100、150mMのNaCl、2mMのNaVO4及び1mMのPMSF)で処理した。トリグリセリド(TG)及びタンパク質の濃度を、市販のキット(それぞれ、トリグリセリドGPO−PAPキット(E.Merck社製、ダルムシュタット、ドイツ)及びBioRad プロテインアッセイキット(BioRad社製、ヘラクレス、CA、米国))で測定した。表4に示すように、E.trifoliatus及びE.giraldiiの70% エタノール抽出物は、高グルコース条件でインキュベートしたHepG2細胞におけるTGの蓄積を減少させ、またその阻害の程度は、酢酸エチル抽出によって更に強化された。
*阻害%=(TG 抽出液−TG 高グルコース)/(TG 低グルコース−TG 高グルコース)×100
in vitroでの全抗酸化活性を、活性酸素吸収能力(ORAC)法を用いて測定した(Ouら、2001,J.Agric.Food Chem.,49:4619−4626、及びHuangら、2002,J.Agric.Food Chem.,50:4437−4444)。20μLのブランク(75mMのリン酸バッファ)測定後、0〜200μMのtrolox(6−ヒドロキシ−2,5,7,8−テトラメチルクロマン−2−カルボン酸(Aldrich社製、WI、米国)又はウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)の異なる抽出物を含有する試験サンプルを、96ウェルの黒いプレート中にそれぞれ添加し、96nMのフルオレセイン2ナトリウム(Aldrich社製)を150μL、ウェルに添加した。プレートを、Infinite M200蛍光マイクロプレートリーダー(TECAN)に置き、混合した。320mMのAAPH(2,2’−アゾビス(2−アミジノプロパン)ジヒドロクロライド、Aldrich社製)を30μL添加し、プレートを元の位置に戻し、490nmで励起し、530nmでの放出を測定した。ウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)の全てのエタノール抽出物は、相対的な抗酸化活性を示した(表5)。ウコギ属植物(E.trifoliatus)抽出物の場合を除き、エタノール抽出による抗酸化活性は、それぞれの酢酸エチル抽出による場合と比較し、高かった。
Claims (17)
- ウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物を調製する工程であって、
a)ウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)をアルコール溶液で抽出するステップと、
b)ステップa)で得られた抽出物から、固体成分を除去して、それによりウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物を得るステップと、を含んでなる工程。 - ウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)が、Eleutherococcus senticosus(Ruper. et Maxim.)Maxim.、E.giraldii又はE.trifoliatusである、請求項1記載の工程。
- 前記アルコール溶液に対するウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)の重量比率が、約1/5〜約1/50である、請求項1記載の工程。
- 前記アルコール溶液が、エタノール、メタノール又はイソプロパノール溶液である、請求項1記載の工程。
- 前記アルコールの濃度が、約30〜100%(v/v)である、請求項1記載の工程。
- 前記ウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物を濃縮するステップc)を更に含んでなる、請求項1から5のいずれか1項記載の工程。
- 前記濃縮されたウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物を、中極性〜高極性の溶媒で抽出/分画して、第2のウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物を得るステップd)を更に含んでなる、請求項6記載の工程。
- 前記中極性〜高極性の溶媒が、イソブチルアルコール、nブタノール、n−酢酸ブチル、クロロホルム、酢酸エチル又はその混合物から選択される、請求項7記載の工程。
- 前記中極性〜高極性の溶媒が、酢酸エチルである、請求項8記載の工程。
- 請求項1から9のいずれか1項記載の工程により調製される、ウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物。
- 治療上有効量の請求項10記載のウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物と、任意に、薬理学的に許容できる担体、希釈剤若しくは賦形剤を含んでなる組成物。
- 食品成分又は医薬組成物である、請求項11記載の組成物。
- 少なくとも1つのメタボリックシンドロームの症状を予防若しくは治療するための薬剤の製造への、請求項10記載のウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物の使用。
- 前記症状が、中心性肥満症(腹部肥満)、脂質異常症、心血管疾患、耐糖能異常又はインスリン耐性である、請求項13記載の使用。
- アセチルCoAカルボキシラーゼの活性を阻害するための薬剤の製造への、請求項10記載のウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物の使用。
- アディポネクチンに関連する疾患を予防若しくは治療するための薬剤の製造への、請求項10記載のウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物の使用。
- ペルオキシゾーム増殖因子活性化受容体γを活性化するための薬剤の製造への、請求項10記載のウコギ属植物(Eleutherococcus spp.)抽出物の使用。
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