JPH0952841A - トリグリセリド生合成阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 血中のトリグリセリド濃度を低下させる作用
を有する薬剤を提供する。 【解決手段】 （１）抗生物質ＰＤ１２４，９６６を有
効成分として含有するトリグリセリド生合成阻害剤。 （２）抗生物質ＰＤ１２４，９６６を有効成分として含
有するアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤。 （３）抗生物質ＰＤ１２４，９６６を有効成分として含
有する血中トリグリセリド低下剤。ＰＤ１２４，９６６

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗生物質ＰＤ１２
４，９６６を有効成分として含有するトリグリセリド生
合成阻害剤、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤、
および血中トリグリセリド低下剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】一般に、血液中のコレステロールやトリ
グリセリド（中性脂肪）は、それ自体では血液に溶けな
いため、アポリポタンパクと結合することによりリポタ
ンパクとして存在している。トリグリセリドは、体内で
は主として肝臓において、糖などを原料に生成されたア
セチルＣｏＡを出発物質として、６種の酵素と１種の酵
素群（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、脂肪酸合成酵
素群、脂肪酸アシルＣｏＡ合成酵素、グリセロリン酸ア
シルトランスフェラーゼ、リソホスファチジン酸アシル
トランスフェラーゼ、ホスファチジン酸ホスファター
ゼ、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ）
によって生合成され、リポタンパクとして肝臓から血中
に分泌される。

【０００３】血液中のコレステロールおよび／またはト
リグリセリドが標準値より高い状態を高脂血症と呼ぶ。
高脂血症と呼ばれる病態は、fredrickson 分類（ＷＨＯ
分類）によると、血液中リポタンパクにより６種に分類
される。このうち、Ｉ、IV、Ｖ型はトリグリセリドのみ
が、IIａ型はコレステロールが、IIｂ、III 型は両方が
増加している（総合臨床、４３，８７１（１９９
４））。このことから、現存する高脂血症薬（コレステ
ロールのみ低下させるものや、コレステロールとトリグ
リセリドの両方を低下させるもの）では必ずしもすべて
の高脂血症に適切に対応できない。特に、IV型は、男性
高脂血症患者の４０〜５０％を占めている（臨床と研
究、６９，３１８（１９９２））。また、糖尿病などに
伴って二次的に発症する場合、その多くはIV型である
（総合臨床、４３，８７８（１９９４））。

【０００４】いわゆる高トリグリセリド血症は、血液中
のトリグリセリド量が増加している病態であるが、ここ
数年来、動脈硬化症、虚血性心疾患のリスクファクター
として臨床医、製薬メーカーの間で注目されるようにな
ってきた。

【０００５】高トリグリセリド血症を含む高脂血症の分
野では、これまで動脈硬化症に直接関連があると考えら
れるコレステロールばかりが注目されてきたため、トリ
グリセリド低下を目的とした薬剤は未だに少なく、高ト
リグリセリド血症の治療には、抗脂血剤として存在する
クロフィブラート系抗脂血剤やニコチン酸製剤が利用さ
れているに過ぎない。また、利用される際にも高用量で
あり、従っていくつかの副作用（J.Lipid ，５，６４〜
７２（１９９４））も懸念される。さらに、これらの薬
剤の確固たる作用機作も明らかにはなっていない。これ
らのことから、低用量でトリグリセリド低下作用があ
り、副作用がなく、かつ作用機作が明らかである新しい
タイプの薬剤が待ち望まれている。高トリグリセリド血
症は、遺伝的背景がある場合や、前述したように糖尿病
などから二次的に発症する場合などさまざまな原因で起
きるが（総合臨床、４３，８７８（１９９４））、さら
に突き詰めると、 Ａ．肝におけるトリグリセリド合成（分泌）亢進 Ｂ．合成されたトリグリセリド（リポタンパクとして血
中に存在）のリポタンパクリパーゼ（ＬＰＬ）による分
解遅延（臨床と研究、６９，３４０（１９９２）） であると考えられる。特に、糖尿病に伴う高トリグリセ
リド血症においては、インシュリン非依存性糖尿病（Ｎ
ＩＤＤＭ）の場合にはＡ．が、インシュリン依存性糖尿
病（ＩＤＤＭ）の場合にはＢ．が原因であるといわれて
いる（臨床と研究、６９，３７９（１９９２））。従っ
て、高トリグリセリド血症の治療薬の作用機作として
は、肝におけるトリグリセリド合成（分泌）を阻害する
こと、および／または合成されたトリグリセリド（リポ
タンパクとして血中に存在）のリポタンパクリパーゼ
（ＬＰＬ）による分解を促進することが考えられる。

【０００６】ところで、ＰＤ１２４，９６６は既知の抗
生物質であるが、これがトリグリセリド合成阻害作用、
アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害作用、あるいは血
中トリグリセリド低下作用を有することはこれまで知ら
れていない。

【０００７】また、トリグリセリド生合成酵素を阻害
し、トリグリセリド合成阻害作用が期待できる抗生物質
としては、脂肪酸合成酵素群を阻害するセルレニン（Ba
cteriol. Rev.,４０，６８１〜６９７（１９７６））の
存在が知られているのみである。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、トリグリセリド生合成を阻害する薬剤、ア
セチルＣｏＡカルボキシラーゼを阻害する薬剤、さらに
は血中のトリグリセリドを低下させる作用を有する薬剤
を得ることである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前述した
高トリグリセリド血症の治療薬の作用機作のうち、肝に
おけるトリグリセリド合成を阻害することに焦点をあ
て、上記課題を解決すべく鋭意研究したところ、目的と
する活性を有する物質を見いだした。

【００１０】すなわち、本発明は、下記式

【００１１】

【化１】

【００１２】で表される抗生物質ＰＤ１２４，９６６を
有効成分として含有するトリグリセリド生合成阻害剤で
ある。本発明はまた、上記式で表される抗生物質ＰＤ１
２４，９６６を有効成分として含有するアセチルＣｏＡ
カルボキシラーゼ阻害剤である。本発明はさらに、上記
式で表される抗生物質ＰＤ１２４，９６６を有効成分と
して含有する血中トリグリセリド低下剤である。

【００１３】本発明のトリグリセリド生合成阻害剤、ア
セチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤、および血中トリ
グリセリド低下剤は、血中のトリグリセリドが標準値よ
り高い病態、すなわち、高ＴＧ血症の治療剤として、さ
らには動脈硬化の予防剤として有用である。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明薬剤は、上記目的のため
に、経口的に、あるいは直腸内、皮下、筋肉内、静脈
内、経皮などの非経口的に投与されるが、経口投与ある
いは静脈内投与が好ましい。

【００１５】経口投与のためには、固形製剤あるいは液
体製剤とすることができる。固形製剤としては、例えば
錠剤、丸剤、散剤あるいは顆粒剤がある。このような固
形製剤においては活性物質が薬学的に許容しうる担体、
例えば重炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、バレイショ
でんぷん、ショ糖、マンニトール、カルボキシメチルセ
ルロースなどと混合される。製剤操作は、常法によって
行われるが、上記担体以外の製剤化のための添加剤、例
えば、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシ
ウムのような潤滑剤を含有してもよい。また、例えば上
記のような固形製剤に、例えばセルロースアセテートフ
タレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレ
ート、ポリビニルアルコールフタレート、スチレン無水
マレイン酸共重合体、あるいはメタクリル酸、メタクリ
ル酸メチル共重合体のような腸溶性物質の有機溶媒によ
る溶液、あるいは水溶液を噴霧することにより腸溶性被
覆を施して腸溶性製剤とすることもできる。散剤、顆粒
剤などの固形製剤は、腸溶性カプセルで包むこともでき
る。

【００１６】経口投与のための液体製剤は、例えば、乳
濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤あるいはエリキシル
剤を含む。これらの製剤は一般的に用いられる薬学的に
許容される担体、例えば水あるいは流動パラフィンを含
む、ココナッツ油、分画ココナッツ油、大豆油、とうも
ろこし油などの油性基剤を担体として用いることができ
る。薬学的に許容される担体には、その他必要に応じて
通常用いられる補助剤、芳香剤、安定化剤、あるいは防
腐剤を含む。また、液体製剤は、ゼラチンのような吸収
される物質で作られたカプセルにいれて投与してもよ
い。直腸内投与のための固形製剤としては、活性成分を
含む通常の方法により製造される座薬が含まれる。

【００１７】非経口投与の製剤は、無菌の水性あるいは
非水性液剤、懸濁液または乳濁剤として投与される。非
水性の溶液または懸濁剤は、例えばプロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール、オリーブ油または大豆油
のような植物油、オレイン酸エチルのような注射しうる
有機エステルを薬学的に許容しうる担体とする。このよ
うな製剤はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安
定化剤のような補助剤を含むことができる。これらの溶
液剤、懸濁剤および乳濁剤は、例えばバクテリア保留フ
ィルターを通す濾過、加熱、殺菌剤の配合あるいは紫外
線照射などの処理を適宜行うことによって、無菌化でき
る。また、無菌の固形製剤を製造し、使用直前に無菌水
または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもでき
る。また、大豆油などの植物油とレシチンなどのリン脂
質、有効成分の均一溶液に水を加え、例えば、加圧噴射
ホモジナイザー、超音波ホモジナイザーなどのホモジナ
イザーにより均質化を行った脂肪乳剤なども注射剤とし
て使用できる。

【００１８】経皮投与の剤型としては、例えば軟膏剤、
クリーム剤などが挙げられる。これらは、通常の方法に
より製造される。

【００１９】本発明で示される有効成分を高ＴＧ血症の
治療剤、さらには、動脈硬化の予防剤として用いる場
合、患者の病状の程度、年令、性別、体重、投与経路な
どにより異なるが、通常成人１日あたり１μｇ〜１ｍｇ
程度投与することができる。かかる投与量は１日に１回
ないし数回、例えば２〜６回に分けて投与することもで
きる。

【００２０】

【実施例】

［実施例１］細胞の調製 ２４穴プレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｎｏ．３５２４）にＨ
ｅｐＧ２細胞を１×１０⁵ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種
し、１ｍｌの培地（１０％牛血清を含むｅＲＤＦ培地
（極東化学））を用いて３７℃、５％ＣＯ₂ 下で５日間
培養した。上清の培地を吸引した後、新たに１ｍｌのＰ
ＢＳ（−）緩衝液（宝酒造）で細胞を洗浄し、吸引し
た。この操作を２回繰り返した後、新たに１ｍｌの培地
（ｅＲＤＦ培地）を加え、培地交換した。

【００２１】サンプルの調製 ＰＤ１２４，９６６（ｍ．ｗ．７７６．９）は、ジメチ
ルスルホキシド（以下ＤＭＳＯとする）に溶解し２×１
０^-2Ｍのサンプル原液を作成した。希釈液はＤＭＳＯで
サンプル溶液を希釈することにより得た。

【００２２】ＴＧの産生 先に作成した細胞に、１ｗｅｌｌ当たりこれらのサンプ
ル原液またはその希釈液を５μｌおよび¹⁴Ｃ―酢酸溶液
（アマシャムＣｏｄｅ Ｎｏ．ＣＦＡ１３をＰＢＳ
（−）緩衝液で４．３倍希釈したもの）を１０μｌ添加
し、３７℃、５％ＣＯ₂ 下で１日間培養した。

【００２３】ＴＧの定量 培養終了後、培養液を除き、１ｍｌの抽出液（ｎ―ヘキ
サンとイソプロピルアルコールを２：１で混合した）を
加え、室温で１時間放置し、細胞中の脂質成分を抽出処
理した。処理後、得た脂質成分を含む抽出液を風乾し
た。さらに、得た残留物質を２０μｌのｎ―ヘキサンと
酢酸エチルを９：１で混合した展開液に再溶解し、薄層
クロマトグラフィー用プレート（東京化成Ｓ３１９）に
プロットし、先に示した展開液中で薄層クロマトグラフ
ィーを実施した。風乾後、ヨウ素蒸気中で脂質成分を発
色させ、ＴＧに相当する部分を切り取り、生合成された
ＴＧ量を液体シンチレーションカウンターで測定した。
結果を表１に示す。これにより、抗生物質ＰＤ１２４，
９６６にはトリグリセリド生合成阻害活性があることが
わかる。

【００２４】

【表１】

【００２５】［実施例２］ヒト肝ガン細胞ＨｅｐＧ２か
らのアセチルＣｏＡカルボキシラーゼの調製 セメンコヴィッチ（CF.Semenkovich）らの報告［J. Bio
l. Chem., ２６８，６９６１（１９９３）］により、ヒ
ト肝ガン細胞ＨｅｐＧ２からアセチルＣｏＡカルボキシ
ラーゼの粗酵素液を調製した。１０ｃｍデイッシュにＨ
ｅｐＧ２細胞４×１０⁵ ｃｅｌｌｓを播種し、１０％の
牛血清を含むｅＲＤＦ培地を培地として３７℃、５％Ｃ
Ｏ₂ 条件下で６日間培養した。細胞を集めて３ｍｌの緩
衝液Ａ（１００ｍＭ Ｋ₃ ＰＯ₄ （ｐＨ７．０）、１ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ８）、２５０ｍＭショ糖、５ｍＭ
２―メルカプトエタノールに懸濁し、超音波破砕機によ
って破砕し、遠心分離により粗酵素液を上清として取得
した。

【００２６】サンプルの調製 ＰＤ１２４，９６６をＤＭＳＯに溶解し、２×１０^-3Ｍ
の原液を調製した。希釈液はＤＭＳＯで希釈することに
より得た。

【００２７】アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ活性の測
定 タナベ（T.Tanabe）らの報告［Methods In Enzymology,
７１，５（１９８１）］によりアセチルＣｏＡカルボキ
シラーゼ活性の測定を行った。反応液（５０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭクエン酸カリウ
ム、１０ｍＭ塩化マグネシウム、０．７５ｍｇ／ｍｌ牛
血清アルブミン、０．５ｍＭホスホエノールピルビン酸
カリウム、３．７５ｍＭグルタチオン、０．１２５ｍＭ
アセチルＣｏＡ、６μｇ／ｍｌラクテートデヒドロゲナ
ーゼ、ピルペートキナーゼ１５μｇ／ｍｌ）７３５μｌ
に１０ｍＭアセチルＣｏＡ（和光純薬）１０μｌ、１０
ｍＭ ＮＡＤＰＨ（オリエンタル酵母）１０μｌ、Ｈｅ
ｐＧ２細胞粗酵素液１００μｌとサンプル１０μｌを添
加した。３７℃で１０分インキュベート後、１５０ｍＭ
ＡＴＰを２０μｌ添加して室温で２分間放置し、１Ｍ
炭酸水素カリウムを２０μｌ添加して反応を開始した。
３４０ｎｍの吸光度変化量を測定した。１ユニットは１
μｍｏｌのＮＡＤＰＨが１分間に酸化される量とした。
結果を表２に示す。これにより、抗生物質ＰＤ１２４，
９６６にはヒトアセチルＣｏＡカルボキシラーゼを阻害
する活性があることがわかる。

【００２８】

【表２】

【００２９】［実施例３］ラット肝ホモジネートの調製 タナベ（T.Tanabe）らの報告［Methods In Enzymology,
７１，５（１９８１）］により、ラット肝ホモジネート
を調製した。Ｗｉｓｔａｒ系ラット雄、９週齢をネンブ
タール麻酔し、脱血後、肝臓を摘出した。重量の２倍量
の緩衝液Ｂ（１００ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．
４）、４ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ２―メルカプトエ
タノール、０．２ｍＭ ＰＭＳＦ、２５０ｍＭショ糖）
を添加し、ホモジナイザー（ポリトロン）で破砕した。
超遠心（１００，０００×ｇ）により上清を取得し、固
形硫酸アンモニウムを添加することにより３０％飽和と
し、遠心により沈殿物を回収した。得られた沈殿物を
０．１倍量の上記緩衝液Ｂに懸濁し、粗酵素液とした。

【００３０】アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ活性の測
定 タナベ（T.Tanabe）らの報告［Methods In Enzymology,
７１，５（１９８１）］によりアセチルＣｏＡカルボキ
シラーゼ活性の測定を行った。反応液５０ｍＭＴｒｉｓ
・ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭクエン酸カリウム、
１０ｍＭ塩化マグネシウム、０．７５ｍｇ／ｍｌ牛血清
アルブミン、０．５ｍＭホスホエノールピルビン酸カリ
ウム、３．７５ｍＭグルタチオン、０．１２５ｍＭアセ
チルＣｏＡ、６μｇ／ｍｌラクテートデヒドロゲナー
ゼ、ピルベートキナーゼ１５μｇ／ｍｌ）７３５μｌに
１０ｍＭアセチルＣｏＡ（和光純薬）１０μｌ、１０ｍ
ＭＮＡＤＰＨ（オリエンタル酵母）１０μｌ、ラット肝
粗酵素液５０μｌとサンプル１０μｌを添加した。３７
℃で１０分インキュベート後、１５０ｍＭ ＡＴＰ２０
μｌを添加して室温で２分間放置し、１Ｍ炭酸水素カリ
ウム２０μｌを添加して反応を開始した。３４０ｎｍの
吸光度変化量を測定した。１ユニットは１μｍｏｌのＮ
ＡＤＰＨが１分間に酸化される量とした。その結果を表
３に示す。これにより抗生物質ＰＤ１２４，９６６には
ラットアセチルＣｏＡカルボキシラーゼを阻害する活性
があることがわかる。

【００３１】

【表３】

【００３２】［実施例４］１錠が次の組成よりなる錠剤
を製造した。 活性成分 ２００μｇ 乳糖 １８０ｍｇ バレイショデンプン ５０ｍｇ ポリビニルピロリドン １０ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ５ｍｇ 活性成分、乳糖、およびバレイショデンプンを混合し、
これをポリビニルピロリドンの２０％エタノール溶液で
均等に湿潤させた。これを２０ｍｍメッシュのふるいに
通し、４５℃にて乾燥させ、再び１５ｍｍのメッシュを
通した。こうして得た顆粒をステアリン酸マグネシウム
と混和し、錠剤に圧縮した。

【００３３】［実施例５］１カプセルが次の組成を含有
する硬質ゼラチンカプセルを製造した。 活性成分 １００μｇ 微晶セルロース １９５ｍｇ 無定形珪酸 ５ｍｇ 活性成分、微晶セルロース、および未プレスの無定形珪
酸を十分に混和し、硬質ゼラチンカプセルに詰めた。

【００３４】［実施例６］活性成分を分画ココナッツ油
に溶解した。また下記処方による剤皮成分に加温溶解
し、１カプセル中に活性成分を１００μｇ含有するよう
に軟カプセル製造機を用いて、常法により軟カプセル剤
を製造した。 剤皮処方 ゼラチン １０重量部 グリセリン ５重量部 ソルビン酸 ０．０８重量部 精製水 １４重量部

【００３５】

【発明の効果】本発明の薬剤は、血中のトリグリセリド
を低下させる効果を有し、高トリグリセリド血症の治療
剤、さらには動脈硬化症の予防剤として用いることがで
きる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 北井 一男 東京都日野市旭が丘４丁目３番２号 帝人 株式会社東京研究センター内 (72)発明者 杉本 圭則 東京都日野市旭が丘４丁目３番２号 帝人 株式会社東京研究センター内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 抗生物質ＰＤ１２４，９６６を有効成分
   として含有するトリグリセリド生合成阻害剤。
2. 【請求項２】 抗生物質ＰＤ１２４，９６６を有効成分
   として含有するアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害
   剤。
3. 【請求項３】 抗生物質ＰＤ１２４，９６６を有効成分
   として含有する血中トリグリセリド低下剤。