TW201609123A - 五層龍屬組成物、藉由其投藥之治療方法及其製備方法 - Google Patents

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Abstract

一種於本文中所描述的五層龍屬組成物，其明顯減低食慾、活化激素敏感脂酶及透過抑制HMG-CoA還原酶酵素管理健康脂質廓形。於本文中所描述的五層龍屬組成物係呈萃取物形式，其包括至少12%多酚類、2%芒果苷及1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物的重量計。該組成物係使用非水性食品級溶劑，藉由連續溶劑萃取獲得。於本文中的五層龍屬組成物當以有效量投藥至需要其的患者時，其減低食慾約例行飲食的18%。因此，伴隨著減少能量攝取、活化激素敏感脂酶及抑制是膽固醇代謝原由的HMG-CoA還原酶酵素之協同組合，有效管理健康脂質廓形係可能的。

Description

五層龍屬組成物、藉由其投藥之治療方法及其製備方法 發明領域
本發明描述出一種五層龍屬組成物、其製備方法、及藉由其使用之治療方法；及其明顯減低食慾、活化激素敏感脂酶及透過抑制HMG-CoA還原酶酵素來管理健康脂質廓形。於本文中所描述的五層龍屬組成物係呈萃取物形式，其包括至少12%多酚類、2%芒果苷(mangiferin)及1%的25,26-氧化木栓烷(oxidofriedelane)-1,3-二酮，以該組成物之重量計。該組成物係藉由使用非水性食品級溶劑來製備，及當將有效量投藥至需要其之個體時，其明顯減低食慾。該五層龍屬組成物藉由抑制HMG-CoA還原酶酵素及活化激素敏感脂酶來管理健康脂質廓形。於本文中的新穎五層龍屬組成物對人類食用來說係安全，其係藉由經濟的方法，使用習知的設備來製備，及其對藉由調節與脂質代謝有關聯的酵素來管理健康脂質廓形係有用的。
發明背景
於青少年中，在能量攝取與消耗間的不平衡造成 個體的體重過度增加，接著為異常脂血症及心血管疾病。能量攝取係與攝食量有直接的共相關及當所食用的食物比身體需求更大量時，能量利用的平衡被打亂。由於肥胖之高比例的罹病率及早期死亡率係已證明，且已廣泛地了解在已開發及開發中世界其係最大及最快成長的醫療及公共衞生問題。此病症在成年人中的流行程度於過去十年間已多於三倍，及其現在影響美國大約30-35%及英國25%的一般民眾。在肥胖與疾病風險間之關係在年輕時即開始，及調查指示出受肥胖之苦及打亂脂質廓形的個體亦與高血壓及在冠狀動脈中之脂肪沈積相關。因此，主要的共生病症包括型式2糖尿病、代謝性症候群、高血壓、血脂肪異常、心肌梗塞、中風、某些癌症、睡眠呼吸中止及骨關節炎。這些觀察可能反映出國家趨勢，及必定應得更加聚焦在對此個體的適時治療以防止進一步增加體重或減低體重及管理脂質廓形。
雖然透過訓練及改變致胖環境來預防係長期目標，對已經過胖的那些人士來說，其重量和脂質廓形管理需要治療。但是，驚人的是，治療選擇仍然相當受限制。改變本身的節食及/或運動形式之生活方式通常不產生顯著或能維持的重量及脂質廓形管理。此係為何使用呈合成藥物形式的藥來重量管理和脂質廓形管理會引起人們注意。現在可獲得用於脂質管理的選擇有司他汀類(statins)，其減少低密度脂蛋白膽固醇、總膽固醇及三酸甘油酯，及稍微增加高密度脂蛋白膽固醇。但是長時間投藥這些藥物會產 生腎毒性、肝毒性和肌痛，因此由於這些副作用造成阻礙患者的容量彈性。進一步用於重量管理的治療有安非他命衍生物、歐里斯泰(orlistat)、西部曲明(sibutramine)、利莫那班(rimonabant)及其它組合藥劑，其具有與心血管危險、肺動脈高血壓及濫用潛力相關的副作用，因此限制其長期使用。因此，對另一種較好的選擇有需求，諸如用於健康脂質廓形管理和關心食慾及維持體重之天然來源的藥劑。
五層龍屬係在西印度(Western India)及斯里蘭卡(Sri Lanka)的雨林中生長之大型木質藤本。網狀五層龍(Salacia reticulata)及長圓果五層龍(Salacia oblonga)係該植物已知用於健康效益的二種主要物種，然而存在有其它物種，諸如密毛五層龍(Salacia fimbrisepala)、曼巴五層龍(Salacia mamba)、米吉五層龍(Salacia miegei)、佩藤五層龍(Salacia petenensis)、中國五層龍(Salacia chinensis)。至到如今，已評估五層龍屬其用途，及已知其係使用來治療多種症狀諸如糖尿病、代謝失調、便秘、皮膚病痛、細菌感染、膽酸調節及作為營養補充品。
通常來說，五層龍屬萃取物係藉由使用水性、有機或組合溶劑系統從根及地上部分獲得，及其在糖尿病管理上係特別有用。一些專利及研究公告係關於此五層龍屬的萃取及健康應用之評估。專利及專利申請案諸如US 8241677、US 8337911、EP 2054070、EP 2397039、US 20120100248、US 20020004190、WO 2008136013描述出使用五層龍屬萃取物，其係藉由抑制α-葡萄糖苷酶酵素之機 制來治療糖尿病。
專利文獻WO 200172316、WO 2008142702、WO 2012024270、US 7553502、US 20140186466、US 20110236488、US 20090263505、US 20080102144係關於使用五層龍屬萃取物與其它植物萃取物組合，由於協同效應來治療糖尿病及其它代謝失調。
一些非專利文獻參考資料亦描述出使用五層龍屬來治療一些健康病痛。芒果苷係在五層龍屬物種中的主要組分之一(Li等人Life Sciences 75：1735-1746，2004)，已經報導其係有效力的α-葡萄糖苷酶抑制劑，已經顯示出其抑制血清葡萄糖位準增加(Yoshikawa等人Yakugaku Zasshi 123：871-880，2003)。投藥至正常老鼠的網狀五層龍(S.reticulata)莖之水性萃取物造成減低肥胖，因此潛在可能減低相關疾病包括型式II糖尿病的風險(Im等人2008)。但是，這些參考資料未教導五層龍屬非水性萃取物在肥胖管理中的食物攝取或食慾上之效應。
將從根皮所製備的網狀五層龍之水性萃取物口服投藥至由鏈佐黴素引發糖尿病的大鼠顯示出該網狀五層龍之血糖降低效應(Serasinghe等人Phytotherapy Research 4：205-2061990)。此天然藥物的傳統抗糖尿病性質可歸因於腸α-葡萄糖苷酶抑制活性(Matsuda等人Phytotherapy Research 4：205-206.2002)。Yoshikawa等人J Nutr.132：1819-1824，2002觀察到網狀五層龍根的水性萃取物可在母Zuker大鼠中抑制體重增加。這些參考資料全部係關於五層龍屬的水 性萃取物，及這些參考資料並沒有關於此萃取物在食慾上或在HMG-CoA還原酶之抑制上的效應。
美國專利8114445係關於一種膳食補充品，其包括五層龍屬的萃取物產物、大花紫薇(Lagerstroemea speciosa)的萃取物產物、法國海岸松樹皮的萃取物產物、吉維紫檀(Pterocarpus marsupium)的萃取物產物及肯氏蒲桃(Syzygium cumini)的萃取物產物，該組成物係以有效促進患者健康及重量減輕的量進行投藥。
美國專利8420131係關於一種用以治療患者的肥胖之醫藥組合物，其實質上由有效量的下列物質組成：(1)紅景天(Rhodiola rosea)萃取物、(2)香蕉葉萃取物及(3)選自於由下列所組成之群的萃取物：梔子(Gardenia fructus)萃取物、蘋果萃取物、網狀五層龍萃取物及其混合物。該參考資料揭示出具有多種植物與五層龍屬一起的組成物之協同效應。
US20100247501係關於一種包含五層龍屬植物的萃取物及類黃酮的食品，其進行肥胖、餐後血糖位準增加及脂肪之抑制。美國專利申請案20120276081提供一種體重增加抑制組成物，其包括α-葡萄糖苷酶活性抑制劑之組成物及脂質合成抑制劑組分。該α-葡萄糖苷酶活性抑制劑係源自於至少一種選自於五層龍屬植物的植物、豆豉(touchi)及桑椹，及該脂質合成抑制劑組分係選自於大豆胜肽、海洋動物胜肽及芝麻木質素。這些專利參考資料聚焦在使用五層龍屬作為α-葡萄糖苷酶的抑制劑，其係與其它 植物組分諸如類黃酮及大豆結合，其藉由抑制α葡萄糖苷酶及脂質合成酶來控制體重增加。但是，並無研究五層龍屬單獨在食慾或HMG-CoA還原酶抑制上的效應。
US 20080241292係關於一種營養組成物，其藉由共同及同步地在個體中抑制食慾、增加飽足感、減少碳水化合物的代謝損耗及減少碳水化合物吸收來促進重量減輕，其包含有效量的桑椹葉萃取物、松油酸(pinolenic acid)及提供長圓果五層龍之萃取物。
US 20080220098係關於從菜豆(Phaseolus vulgaris)製備的α-澱粉酶抑制劑與從長圓果五層龍及其它物種所獲得的α-葡萄糖苷酶抑制劑之組合。該α-澱粉酶抑制劑伴隨著一定量的凝集素，此減少源自於存在於飲食中的澱粉之葡萄糖量，及其在重覆投藥後相當大地減低食慾。與α-葡萄糖苷酶抑制劑諸如五層龍屬的萃取物或存在於其中的硫糖組合協同地作用進一步減低血糖，因此減低從碳水化合物合成脂肪。
US 20070037870係關於從五層龍屬製備的水性萃取物，其包括牛心果烷醇(reticulanol)及有效控制血糖位準，及由於此而在糖尿病患者中防止肥胖。
WO 2013016742係關於一種用以治療肥胖的組成物，其包括情緒增強劑、胰島素節省劑(insulin sparing agent)及末稍能量阻斷劑(peripheral energy blocker)，其中該情緒增強劑包括肌醇、紅景天、鎂及鋅；該胰島素節省劑包括小檗鹼、香蕉葉及肌醇；及該末稍能量阻斷劑包括脂 酶與葡萄糖苷酶抑制劑諸如五層龍屬之組合。已評估該組合對BMI減低及重量減輕之肥胖主張。
發明概要
五層龍屬之組成物已經從根及地上部分的水性、氫醇性及甲醇性萃取物製得，及其健康益處主要在減低糖尿病患者中的血糖方面。商業上可獲得許多產品以透過減低血糖有效管理糖尿病。該血糖降低性質的機制已經闡明，及已經發現五層龍屬萃取物的特定組分為藉由抑制酵素α葡萄糖苷酶來減低糖攝取。五層龍屬的協同效應亦已與其它天然產物結合用於多種應用，包括肥胖治療。這些萃取物某些係以溶劑諸如醚、氯仿、甲醇製得，其係非食品級及不有用作為膳食補充品。但是，上述參考資料並沒有關於五層龍屬在與脂肪合成或分解有關聯的酵素諸如HMG-CoA還原酶上之效應，或其在可明顯減低體重及防止增重之食慾上的效應。
至於在本文中所描述的五層龍屬組成物，申請人已進行大量實驗及驚人地發現，藉由使用非水性溶劑所製備的五層龍屬萃取物產生新的組成物，其包含某些重量百分比的多酚類、芒果苷及25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮之組合。此等組成物明顯減低食慾、活化激素敏感脂酶及抑制HMG-CoA還原酶酵素，因此管理健康脂質廓形。這些效應對有病痛諸如異常脂血症及三酸甘油脂沈積在血管中導致冠狀動脈疾病傾向之肥胖人士非常重要。於本文中所描述 的五層龍屬組成物對食用來說係安全，及明顯減慢體重增加、減少食物攝取、減少脂肪墊質量及增加糞便中脂肪排泄物，因此促成整體重量管理。於本文中所描述的五層龍屬組成物係藉由經濟的方法製備，及使用來萃取的溶劑對營養食品應用係安全的。此等組成物對防止及治療冠狀動脈心臟病及相關的心血管併發症係有用的。
在一個具體實例中，描述出五層龍屬組成物明顯減低食慾、活化激素敏感脂酶及藉由抑制HMG-CoA還原酶酵素管理健康脂質廓形。
在一個具體實例中，基本上呈萃取物形式的五層龍屬組成物係在該萃取物組成物中包含某些重量百分比之多酚類、芒果苷及25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮。
在一個具體實例中，該組成物係包含最少12%多酚、2%芒果苷及1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該萃取物的重量計。
在某些具體實例中，該組成物包含係或約12%多酚、2%芒果苷及1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該萃取物的重量計。
在一個具體實例中，該五層龍屬萃取物組成物係藉由特定的萃取技術，使用食品級非水性溶劑來製備。
在一個具體實例中，描述出一種治療方法，其包括將有效量的五層龍屬組成物投藥至需要其之個體。該需要其之個體可係罹患異常脂血症及具冠狀心臟病風險之肥胖或過重人士。
在一個具體實例中，描述出一種幫助維持健康脂質廓形的組成物，特別是藉由抑制HMG-CoA還原酶，一種關於膽固醇的生物合成之酵素。
在一個具體實例中，描述出一種五層龍屬組成物，其透過活化激素敏感脂酶而具有明顯解脂活性。更特別的是，在某些具體實例中，提供一種五層龍屬組成物，其藉由磷酸化激素敏感脂酶透過脂肪分解造成實質上重量減低。
在一個具體實例中，提供一種五層龍屬組成物，其明顯減慢體重增加、減少脂肪墊質量及增加糞便中脂肪排泄物，因此促成整體重量管理。
在一個具體實例中，提供一種五層龍屬的組成物，其明顯減低食慾及因此能量攝取，此導致防止在正常或高脂肪餐後之體重增加。
在一個具體實例中，提供一種用於重量控制及健康脂質廓形管理的五層龍屬組成物，其經濟地製造及係如膳食補充品般安全，及減低冠狀心臟病及相關的心血管併發症之風險。
一種五層龍屬組成物、其製備方法及藉由使用其來抑制HMG-CoA還原酶酵素之治療方法，其明顯減低食慾、活化激素敏感脂酶及管理健康脂質廓形。該組成物係呈萃取物形式，其係藉由成本有效率的萃取技術，使用食品級的溶劑系統來製備。該組成物係包含至少約12%多酚類、2%芒果苷及1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物 的重量計。該五層龍屬組成物於此及藉由投藥其具有例如明顯減低食慾的效應，當其係以有效量投藥時。該組成物透過活化激素敏感脂酶提高脂肪分解，及透過抑制HMG-CoA還原酶酵素管理健康脂質廓形。減低食慾及調節與脂質代謝有關聯的酵素之協同效應使得其有用地用於諸如在肥胖的個體中健康地管理脂質廓形及同步地重量管理。於本文中所描述的五層龍屬組成物對食用來說係安全的，及明顯減慢體重增加、減少食物攝取、減少脂肪墊質量及增加糞便中脂肪排泄物，因此促成降低冠狀動脈心臟病及相關的心血管併發症。
圖1顯示出來自實施例1的五層龍屬組成物之高性能薄層色層分析法(HPTLC)指紋圖譜影像。
圖2係一圖形，其顯示出五層龍屬組成物在胰脂酶上的效應。
圖3係一圖形，其顯示出五層龍屬組成物在α-葡萄糖苷酶酵素上的效應。
較佳實施例之詳細說明
於本文中描述出一種五層龍屬組成物、其製備方法及藉由投藥其之治療方法，其例如明顯減低食慾、活化激素敏感脂酶及諸如藉由抑制HMG-CoA還原酶酵素管理健康脂質廓形。
如於本文中所使用，用語”五層龍屬組成物”指為 藉由從五層龍屬，使用其地上、地面或地下植物部位萃取所獲得之產物。該萃取物係使用對人類食用係安全之食品級非水性溶劑來製備。該組成物係在該組成物中包含某些重量百分比之多酚類、芒果苷及25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮。在某些具體實例中，該組成物係呈萃取物形式，其中該多酚類、芒果苷及25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮係以某些重量百分比的量存在於該萃取物中。
如於本文中所使用，用語”約”指為一數值，其包括例如整數、分數及百分比，不論是否有詳盡地指示出。用語”約”通常指為一範圍的數值(例如，敘述值的+/-5-10%)，於此一般技藝人士將視為與敘述值同等(例如，具有相同功能或結果)。在某些例子中，用語”約”可包括四捨五入至最接近的有效數字之數值。
用語”減低食慾”指為當投藥有效量的五層龍屬組成物一段時期時，在個體中所觀察到的效應及其造成減少食物攝取，如與正常飲食比較。此效應在由於吃得過飽趨向於肥胖的個體中係有益的。減低食慾幫助減低能量攝取。
進一步用語”健康脂質廓形”指為個體的血液脂質位準，其係關於低密度脂蛋白類(LDL)、高密度脂蛋白類(HDL)、總膽固醇及三酸甘油脂的量。LDL已知為壞膽固醇及HDL係好膽固醇。LDL在冠狀動脈中成為沈積，因此導致動脈粥樣硬化及相關的冠狀心臟病。HDL避免脂肪沈積在血管中，因此對健康脂質廓形來說，想要較高的HDL量。 趨向於吃較多的個體遭遇到能量不平衡及趨向於肥胖，其亦發展出異常脂血症而呈LDL及三酸甘油脂位準增加形式。此症狀需要進行治療以減少食物攝取和管理健康脂質廓形。
當以有效量將如於本文中所描述的五層龍屬組成物投藥至需要其的個體時，觀察到呈明顯減少食物攝取、活化激素敏感脂酶及抑制HMG-CoA還原酶酵素形式的效應。亦發現該組成物抑制胰脂酶及α葡萄糖苷酶酵素。
如於本文中所使用，術語”有效量”意謂著五層龍屬組成物當投藥至需要其的個體一段特定時間時，產生想要的有益結果的量。需要其的患者/個體在此上下文中係罹患異常脂血症的人士，其過重或具有高體重指數(BMI)及具有肥胖趨勢。此具有被打亂的脂質廓形及較高重量的個體係具有高心肌梗塞、絕血性心臟病及心動停止風險。
I.五層龍屬組成物之製備
根據一個具體實例，該五層龍屬組成物係藉由使用五層龍屬的乾燥植物部位，藉由非水性溶劑萃取方法來製備。
根據一個具體實例，該用以製備新穎的五層龍屬組成物之方法係包括乾燥及研磨五層龍屬的地上、地面或地下植物部位，在室溫至高溫下攪拌該五層龍屬植物部位與食品級非水性極性溶劑，及過濾該非水性溶劑。在過濾後，殘餘之五層龍屬植物材料再次與食品級非水性溶劑攪拌至高溫，及再次從該系統過濾該非水性溶劑。結合及蒸 發濾出液以獲得呈萃取物形式的五層龍屬組成物。根據另一個具體實例，不同五層龍屬物種包括下列實施例，諸如網狀五層龍、長圓果五層龍、密毛五層龍、曼巴五層龍、米吉五層龍、佩藤五層龍、中國五層龍及其類似物。
在一個具體實例中，網狀五層龍及/或長圓果五層龍係用於萃取的較佳植物品種。在某些具體實例中，選擇網狀五層龍的乾燥根以獲得五層龍屬組成物。
在某些具體實例中，以食品級非水性極性溶劑來萃取網狀五層龍之經乾燥及粗糙研磨的植物部位以獲得一安全用於人類食用之組成物。
在某些具體實例中，以非水性食品級溶劑諸如乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮或其混合物來萃取網狀五層龍的根。在另一個具體實例中，該溶劑較佳為乙醇及其係以諸如係或約1：2至係或約1：30之五層龍屬對溶劑的重量對體積比率使用。至於一個實施例，在某些情況中，當該重量對體積比率係1：2時，該重量對體積比率可係100克質量的五層龍屬部分(例如，根)及200毫升溶劑(例如，乙醇)。
五層龍屬的乾燥根例如呈粉末化形式係與溶劑混合及在室溫至85℃之高溫範圍下攪拌2至16小時。然後，在真空下使用例如Buchner漏斗來過濾該溶劑。
在某些具體實例中，剩餘的五層龍屬根可以適當體積的乙醇藉由在室溫至高溫下攪拌再萃取。結合及加工經由此萃取方法所獲得的濾出液以獲得五層龍屬萃取物乾粉，產生一五層龍屬組成物。
II.五層龍屬組成物的特徵
在一個具體實例中，呈萃取物形式的五層龍屬組成物接受特徵標示以鑑別出形成該萃取物組成物的組分。使用合適的溶劑系統進行五層龍屬組成物的分餾。在一個具體實例中，可使用極性及非極性溶劑系統來分離該五層龍屬組成物的餾分。在用於五層龍屬萃取物之分餾的方法中所使用之溶劑可選自於下列之群，諸如但不限於丙酮、己烷、醋酸乙酯、異丙醇、乙醇、二氯甲烷、甲醇、水及其混合物；更佳為丙酮、乙醇、二氯甲烷、異丙醇；及更佳為二氯甲烷及異丙醇。
在較佳的具體實例中，可使用於五層龍屬萃取物之分餾的非極性溶劑包括但不限於石油醚(低沸點)、石油醚(高沸點)、己烷及其類似物或其混合物。在另一個較佳具體實例中，可使用於此方法的極性溶劑包括但是不限於異丙醇、丙酮、甲醇、乙醇、乙腈或其混合物。
可結合藉由適當的溶劑處理所獲得之餾分及藉由適當的技術純化以獲得富含化組分。這些組分可藉由不同分析技術鑑別，諸如使用矽凝膠的管柱層析法、薄層色層分析法(TLC)或高性能薄層色層分析法(HPTLC)。此鑑別導致了解五層龍屬的化學組成物。
III.五層龍屬組成物的試管內測試
於本文中的組成物可根據本揭示的方法使用，其包括將有效量的組成物口服給藥至需要重量控制及脂質管理的個體。
這些有益的效應可藉由活化及抑制某些與身體代謝有關聯的酵素達成。該組成物幫助明顯減低食慾、活化激素敏感脂酶及抑制HMG-CoA還原酶酵素，因此管理健康脂質廓形。
該方法在受高脂血症折磨的個體、受型式2糖尿病折磨的個體、過重或肥胖的個體、具有葡萄糖耐量異常的個體、有冠狀心臟病危險的個體或其它方面可從重量及血液脂質控制受惠的其它個體中特別有用。這些利益全部可藉由於本文中所描述的方法及組成物變可能。
根據於本文中所描述的方法，試管內研究五層龍屬組成物在與代謝脂肪有關聯的酵素上之效應。該研究係透過酵素試驗進行。考慮用於此測試的酵素可係HMG-CoA還原酶、激素敏感脂酶、胰脂酶及其類似物。
在一個具體實例中，可測試五層龍屬組成物以評估其在HMG-CoA(3-羥基-3-甲基-戊二基-輔酶-A)還原酶酵素上的活性。此係一甲羥戊酸鹽途徑的速率控制酵素，一種在身體中產生膽固醇及其它類異戊二烯類的代謝途徑。藉由抑制此酵素，可能防止製造出過量的膽固醇及因此幫助維持健康脂質廓形。
激素敏感脂酶係一種與在脂肪組織中的脂肪分解有關聯之酵素。活化係呈此酵素的磷酸化形式，此可導致脂肪分解增加，換句話說，造成明顯的脂肪分解。
可評估於本文中的五層龍屬組成物在這二種酵素上的活性，及已發現其以有效方式增加激素敏感脂酶之 活化及抑制HMG-CoA還原酶。亦可評估該組成物其藉由脂肪分解機制將三酸甘油脂分解成甘油及自由態脂肪酸的能力。該組成物藉由將酵素HMG-CoA還原酶抑制在IC50不少於400微克/毫升下維持健康脂質廓形。因此，可使用此組成物其重量及脂質管理效應。
亦可測試於此之五層龍屬組成物其在胰脂酶酵素上的活性以評估防止脂肪吸收的能力，及對著正對照比較以檢查其效應。
可評估於本文中的五層龍屬組成物在α葡萄糖苷酶酵素上之活性，其在防止碳水化合物吸收上的效應及與正對照比較。該活性可藉由使用適當的分析技術決定，以就IC50來檢驗抑制效應。
亦可試管內評估五層龍屬組成物其抗氧化及抗發炎活性，因為這些活性對因為異常脂血症及由於脂肪沈積在血管中的動脈粥樣硬化有危險的個體係有益的。可評估五層龍屬組成物直接與自由基反應及中止其的能力之抗氧化活性。自由基係擁有一或多個未成對電子的任何化學物種(其能各自獨立地存在)。自由基係從分子經由化學鍵斷裂形成，如此每個斷片藉由自由基分裂保持一個電子而提供另一個自由基，及最後經由氧化還原反應。”氧化壓力”之用語指出在反應性氧物種產生與抗氧化防禦之活性間的不平衡。氧化壓力在一些慢性及急性退行性病症的病原學中之含意建議抗氧化治療代表一條有希望用於治療的大道。該抗氧化治療的角色在干預及預防心血管疾病中非常明顯， 其中以合成型抗氧化劑、來自食用植物及藥用植物的膳食型抗氧化因子治療可潛在地防止或逆轉此疾病之促進或發展。
IV.五層龍屬組成物之活體內評估
可活體內評估於本文中所描述的五層龍屬組成物其在控制食慾及管理健康脂質廓形上之效應。在某些具體實例中，於本文中的組成物係包含萃取物，諸如乙醇的萃取物，及其在是身體代謝原由的酵素上可具有作用。將察知可使用其它溶劑諸如例如但不限於任何食品級溶劑例如食品級極性溶劑來獲得萃取物，及其可或可不包括乙醇。試管內實驗闡明HMG-CoA酵素係受如於本文中所描述的五層龍屬組成物抑制，因此證明其在管理想要的血液脂質廓形上之效應。這些有益的效應係進一步由在本文中的五層龍屬組成物所具有之抗氧化及抗發炎活性支撐，因此支撐其用於在肥胖個體中的心臟病痛之應用。
評估於本文中的五層龍屬組成物其在引發重量減輕或防止增重、食物攝取(飽足感)、食物效率及糞便中脂肪排泄物上的效應。該研究係在肥胖老鼠上藉由餵食有效量的五層龍屬組成物超過7.5週之時期進行，及與作為正對照之未治療的肥胖老鼠比較來觀察該效應。記錄高及低劑量五層龍屬組成物的結果。來自這些評估的觀察指示出明顯降低體重增加、減少食物攝取及增加糞便中脂肪排泄物，因此促成減少脂肪吸收。於本文中的五層龍屬組成物在減少飽足感上之效應對由於吃得過飽而受肥胖之苦，因此累 積額外的脂肪之個體係有益的，此係以增加體重和血脂異常之形式明瞭。此過多的脂肪及膽固醇在將血液供應至生命器官的血管中變成沈積，及導致發炎及動脈粥樣硬化的問題，增加心血管系統過多負擔。亦根據試管內效應活體內評估觀察。
於本文中的五層龍屬組成物對減低食慾及管理健康脂質廓形係有效及具食用安全。當將有效量投藥至需要其之個體超過7.5週的時期時，該組成物減少食物攝取約12至18%。如在活體內評估期間所觀察，該組成物未在身體細胞及器官上顯示出副作用。試管內評估於本文中的組成物在與代謝有關聯的酵素上之效應，及結果係以活體內評估形式進一步證實其在體重、食物攝取、食物效率及糞便中脂肪排泄物上的效應。
在一個具體實例中，於本文中的組成物係藉由萃取方法，使用非水性食品級溶劑，從五層龍屬植物部位來製備。在某些具體實例中，該組成物係呈乾粉形式及包含極性及中極性組分，其係藉由化學和層析方法標出特徵。
該組成物可以粉末形式或以合適的媒劑在投藥前再構成而投藥至需要其之個體，或可調配成方便於口服或非經腸式投藥的合適固體或液體劑形。根據本發明，經由試管內、活體內實驗評估此組成物以決定其對重量及脂質管理的利益。就HMG-CoA抑制和透過激素敏感脂酶活化之脂肪分解活化而論，結果係想要的，此在動物研究期間反映進減低體重、減少食物攝取及增加糞便中脂肪排泄物 中。
雖然已經描述出特定的闡明性具體實例，將由熟習該項技術者明瞭某些修改及同等物，及其係想要包含在本發明如於下列申請專利範圍中所提出的範圍內。於本文中所描述的組成物及方法之細節及優點係在下文中與非限制性範例性闡明相關更詳細地解釋。
實施例
實施例1：五層龍屬組成物之製備
乾燥、研磨網狀五層龍根及使用5倍體積乙醇，藉由在60-65℃下攪拌3小時進行萃取。然後，在真空下過濾該溶劑及保留濾出液。該材料係以3倍體積乙醇，藉由在60-65℃下攪拌1小時再萃取。過濾該溶劑及結合濾出液，然後在旋轉式蒸發器上於50℃下蒸發，以獲得經乾燥的紅棕色粉末萃取物。
於本文中的結果係以實施例1之所產生的組成物為基準，其代表五層龍屬組成物於本文中的一個具體實例。實施例1的組成物包含至少12%多酚類、至少2%芒果苷及至少1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物的重量計。
在某些具體實例中，以實施例1為基準的組成物包括係或約16%的總多酚類、係或約3%芒果苷、及係或約2.6%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物的重量計，例如，當以藉由下列相同方法所製備的多批次之平均來計算時。
將察知在某些具體實例中，於本文中的組成物可包括量高如約或最高39%之總多酚類、約或最高7.36%的芒果苷、及約或最高3.17%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物的重量計。
實施例2A：五層龍屬組成物之分離及特徵
藉由UV決定總多酚類含量(如為沒食子酸當量)
以想要的濃度將五層龍屬組成物分散在甲醇中，及將1.0毫升的每個樣品納入試管中，及與5毫升10倍稀釋的Folin-Ciocalteu試劑及4毫升7.5%碳酸鈉混合。以石蠟膜覆蓋試管及允許在室溫下靜置50分鐘。然後，對著作為標準的沒食子酸讀取在765奈米處光譜測量之吸收度。
芒果苷及其衍生物之決定：藉由HPLC進行來自五層龍屬組成物的芒果苷及其衍生物之估計。所使用的管柱係Merk LiChrospher 100 RP 18，250X4毫米，5微米。流速係每分鐘1.0毫升及偵測器波長係260奈米。梯度流動係使用0.05%正磷酸(OPA)作為動相A及MeOH：ACN(甲醇：乙腈)(3：2)作為動相B。對樣品製備來說，將大約25-30毫克萃取物溶解在25毫升甲醇中。使用0.45μ濾紙過濾該溶液。芒果苷的滯留時間係20分鐘。
25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮之分離及特徵
將實施例1之五層龍屬組成物進一步溶解在丙酮中，及讓該可溶部分接受TLC(薄層色層分析法)模式，及使用己烷：醋酸乙酯(95：5、90：10、85：15、80：20、75：25、70：30)作為沖提液在矽凝膠(100-200網目)上層析。結 合及濃縮該等餾分，及使用己烷：二氯甲烷混合物進一步純化，及使用己烷再結晶以獲得呈純形式的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮。25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮的含量係藉由高性能液相層析法(HPLC)決定，及以高性能薄層色層分析(HPTLC)指紋分析標出其進一步特徵。
用以估計25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮的方法：藉由HPLC進行來自五層龍屬組成物的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮之估計。所使用的管柱係Merk LiChrospher 100 RP 18，250X4毫米，5微米。流速係每分鐘1.0毫升及偵測器波長係260奈米。梯度流動係以0.1%蟻酸：甲醇：水(80：20)作為動相A及0.1%蟻酸在甲醇中作為動相B。對樣品製備來說，將大約25-30毫克萃取物溶解在25毫升甲醇中。使用0.45μ濾紙過濾該溶液。25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮的滯留時間係30分鐘。
含有25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮及芒果苷的五層龍屬組成物之HPTLC廓形
檢驗本發明的五層龍屬組成物之HPTLC廓形，及與使用非極性溶劑系統(動相-己烷：醋酸乙酯)的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮餾分及與使用極性溶劑系統(醋酸乙酯：丙酮：蟻酸：水[6：2：0.5：0.5])的芒果苷比較，及偵測帶係在波長254奈米處(參見圖1)。
實施例3：經由酵素試驗之五層龍屬組成物試管內評估
試管內評估五層龍屬組成物其在HMG-CoA還原酶酵素上的效應，以評估用於維持健康脂質廓形的應用。 亦進一步評估在酵素諸如激素敏感脂酶及胰脂酶上的效應。
a. HMG-CoA還原酶試驗
方法：HMG-CoA還原酶酵素係在膽固醇合成中的速率限制步驟。使用HMG-CoA還原酶分析套組(Sigma CS1090)來評估HMG-CoA還原酶的活性。其測量於基質：HMG-CoA存在下，NADPH(菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸鹽)藉由HMG還原酶的催化性次單位，在340奈米處的吸收度之氧化反應。
結果：諸如實施例1的五層龍屬組成物在濃度1毫克/毫升下抑制HMG-CoA，其具有IC50：401.3微克/毫升(表1)。
b.胰脂酶試驗
方法：此試驗的目標為評估五層龍屬組成物防止脂肪吸收的能力。使用豬胰脂酶及油酸4-甲基傘酮基(methylumbelliferyl)酯(MU油酸酯)作為基質來評估胰脂酶活性。使用歐里斯泰作為正對照。脂酶活性係使用螢光動力學分析來測量。
結果：五層龍屬組成物顯示出明顯的抗胰脂酶抑制效應，與歐里斯泰比較(表2)。
胰脂酶係三酸甘油酯類水解成單酸甘油酯類的關鍵酵素。試管內研究顯示出諸如實施例1的五層龍屬組成物擁有強胰脂酶抑制活性。參見圖2。五層龍屬組成物的IC50值係可與歐里斯泰比較，一種臨床批准作為脂酶抑制劑的藥物。於本文中的五層龍屬組成物經由胰脂酶抑制，藉由抑制膳食型脂肪吸收減低能量攝取。
c.脂肪分解試驗
方法：進行該試驗以評估該萃取物將三酸甘油脂分解成甘油及自由態脂肪酸的能力。以3T3L1細胞模型來篩選諸如實施例1的五層龍屬組成物之脂肪分解。3T3L1前脂肪細胞係在Dulbecco修改的Eagle’s媒質(DMEM)中，於37℃下，在5%CO2環境中培養一週直到100%群集，其係以10%新的牛血清、25mM葡萄糖、2mM麩醯胺酸、100U/毫升盤尼西林、100微克/毫升鏈黴素補充。
在群集後二天，開始3T3L1分化成脂肪細胞48小時(第0天-第2天)，其係使用以10%胎牛血清(FBS)、25mM葡萄糖、2mM麩醯胺酸、100U/毫升盤尼西林、100微克/ 毫升鏈黴素及分化誘導劑(0.5mM異丁基-甲基黃嘌呤(IBMX)、10微克/毫升胰島素及1μM地塞米松(dexamethasone))補充的(DMEM)。然後，以僅包含10微克/毫升胰島素的相同媒質培養該等細胞另外48小時(第2天至第4天)，然後僅以媒質(第4天至第6天)。將濃度100微克/毫升之諸如實施例1的五層龍屬組成物加入至該媒質24小時及評估脂肪分解。諸如實施例1的五層龍屬組成物之效應係與正對照異丙基腎上腺素(10μM)比較。
使用甘油試劑(Sigma)評估在24小時後於細胞媒質中所釋放之甘油及以相對於細胞蛋白質含量表示出。使用二辛可寧酸(BCA)PierceTM套組評估蛋白質含量。若該萃取物顯示出甘油/蛋白質比率高於1.40時，其視為該萃取物提高脂肪分解。
該蛋白質係從以五層龍屬組成物或異丙基腎上腺素處理24小時的3T3L1脂肪細胞之細胞溶成物收集。對蛋白質樣品進行點墨及探測總激素敏感脂酶(HSL)，及在絲胺酸563處之磷酸化的激素敏感脂酶。然後，在經處理與未經處理的樣品間比較磷酸化的HSL對總HSL之比率。
結果：諸如實施例1的五層龍屬組成物顯示出高於1.40的比率，此建議其提高在3T3L1細胞中的脂肪分解(表3)。
試管內研究亦顯示出五層龍屬組成物處理在3T3L1細胞中引發強脂肪分解。此在脂肪細胞上的解脂效應係等同於解脂活性已知的異丙基腎上腺素，一種β-腎上腺素受器促效劑之效應。
d.激素敏感脂酶試驗
諸如實施例1的五層龍屬組成物在激素敏感脂酶之磷酸化中引發明顯增加，幾乎與正對照異丙基腎上腺素相同程度，此證實該五層龍屬組成物的解脂效應，其係由甘油增加顯示出(表4)。
五層龍屬組成物處理提高將三酸甘油脂水解成非酯化的脂肪酸及甘油之激素敏感脂酶的磷酸化。在以諸如實施例1的五層龍屬組成物處理之脂肪細胞中增加的甘油位準係幾乎與正對照：異丙基腎上腺素相同的程度，此 證實以五層龍屬組成物急性治療提高脂肪分解。因此，該五層龍屬組成物的解脂效應係與激素敏感脂酶磷酸化明顯增加(2.43的因子)有相互相關。
e.葡萄糖苷酶試驗
方法：此試驗的目標為評估預防碳水化合物吸收。α-葡萄糖苷酶係一種將碳水化合物分解成可吸收的單醣類之酵素。使用從大鼠小腸丙酮製粉(Sigma)萃取的哺乳動物α-葡萄糖苷酶及對-硝基苯基L-D吡喃葡糖苷(PNPG)作為人造基質來評估α-葡萄糖苷酶的活性。使用阿卡布糖(acarbose)作為正對照。使用比色法動力學分析，藉由使用微板讀出器Synergy H1監視所釋放出的PNPG在400奈米處之吸收度來決定α-葡萄糖苷酶活性。
結果：諸如實施例1的五層龍屬組成物在α-葡萄糖苷酶上顯示出明顯的抑制效應。該五層龍屬組成物的IC50係3.47微克/毫升，與阿卡布糖(IC50：19微克/毫升)比較。(參見圖3)
試管內研究明確地顯示出諸如實施例1的五層龍屬組成物在α-葡萄糖苷酶活性上具有強抑制效應，及其可與已建立之市售的α-葡萄糖苷酶抑制劑阿卡布糖比較。α葡萄糖苷酶之抑制延遲葡萄糖吸收進血液中及抑制餐後高血糖症。這些研究結果建議五層龍屬組成物可經由抑制碳水化合物吸收而具有減肥效應。
實施例4：使用細胞株試管內評估五層龍屬組成物
a.藉由DPPH(2,2-二苯基-1-苦味基偕腙肼(picrylhydrazyl))試驗決定抗氧化活性
如早期描述般評估植物萃取物或餾分直接與自由基反應及中止其的能力(Cheng等人2006)。在乙醇中製備DPPH的原料溶液(200μM)。在96井板中進行該試驗。在37℃下培養該反應混合物30分鐘，其中該混合物包括100微升DPPH及100微升測試樣品。在515奈米處測量吸收度。使用沒食子酸作為正對照。如下計算DPPH自由基清除活性百分比。[參考資料：Cheng Z，Morre J，Yub L(2006)J Agric Food Chem，54：7429-7436]
自由基清除活性%=[1-(樣品-空白)/(對照-空白)]x100
沒食子酸在20μM下顯示出86%自由基清除活性。諸如實施例1的五層龍屬組成物顯示出84.3%自由基清除活性，其係相當明顯及可與正對照活性比較。
抗發炎活性之決定：以RAW264.7細胞決定NOS(氧化氮合成酶)活性之抑制。已發現五層龍屬組成物顯示出iNOS活性為IC50>50。
因此，試管內試驗指示出該五層龍屬組成物抑制HMG-CoA還原酶酵素，因此建議其應用於維持需要其之個體的健康脂質廓形。亦發現該組成物藉由活化激素敏感脂酶酵素提高脂肪分解及藉由抑制胰脂酶酵素抑制脂肪吸收。該五層龍屬組成物亦藉由抑制α-葡萄糖苷酶酵素減少吸收碳水化合物，因此促成減少能量攝取。該組成物亦闡明抗氧化及抗發炎活性。
諸如實施例1的五層龍屬組成物亦接受活體內研 究以調查其在肥胖大鼠模型中的角色。
實施例5：五層龍屬組成物的活體內研究
從Charles River購買五十六隻(56)年齡5週的公C57BL/6老鼠。將老鼠各別安置在具有12小時光及暗循環之溫度控制室的老鼠籠中，及自由取食正常齧齒目動物食物及水。在適應一週後，將老鼠劃分成7組且每組8隻老鼠。全部老鼠皆餵食高脂肪飲食(60%能量來自脂肪)以引發肥胖。六組各別灌食懸浮在0.5%羧甲基纖維素中之低(100毫克/公斤/天)及高(500毫克/公斤/天)劑量五層龍屬組成物7.5週(精確為52天)。
一組使用作為肥胖對照及灌食媒劑對照。每日稱取體重及每週記錄食物攝取三次。在第6及7週期間藉由將老鼠放在代謝籠中3天收集排泄物樣品。
在研究結束時，麻醉老鼠及藉由心臟穿刺將血液樣品收集進包含促凝劑(clot-activator)的血清管中，及將其放在冰上直到為了血清進行離心時。收集肝及附睪脂肪墊，以磷酸鹽緩衝的鹽液沖洗及稱重。收集肝、胃、肌肉及脂肪組織，立即在液態氮中冷凍及與血清一起貯存在-80℃下。
當該實驗進行一段7.5週(52天)時期時，報導體重及食物攝取最高7週。除了糞便中脂肪排泄物外，其它結果係在研究結束時(在治療52天後)獲得。
a.五層龍屬組成物在食物攝取(食慾)上的效應
資料係使用單向(ANOVA)，變異數分析，與重覆測量分析。在治療方法間之差異係藉由配對比較，使用最小二乘方均數(least squares means)測試來決定，其中p<0.05視為有效。結果係以值與其標準誤差顯現(n=7-8)。活體內研究顯示出五層龍屬組成物治療在高脂肪飲食老鼠中明顯減少食物攝取約20%。這些結果建議諸如實施例1的五層龍屬組成物可藉由減少卡路里攝取而推升重量減輕；其在能量攝取上的效應係類似於西部曲明。
如在實施例5中指示出，將二種不同劑量的五層龍屬組成物投藥至實驗動物，100毫克/公斤/天(低劑量)及500毫克/公斤/天(高劑量)，其中高劑量五層龍屬組成物產生統計顯著性結果，及其在某些情況中可視為有效量。將察知此結果亦可在其它劑量中或在高與低劑量間(或在高及低劑量外)之量觀察到，及其於此可有效達成適宜的結果， 如可係想要或統計顯著性結果。
b.五層龍屬組成物在體重上的效應
資料係使用單向ANOVA與重覆測量來分析。在治療方法間之差異係藉由配對比較，使用最小二乘方均數測試決定，其中p<0.05視為有效。結果係以值與其標準誤差顯現(n=7-8)。
c.五層龍屬組成物在食物效率上的效應
FE(食物效率)係以在食用100克飲食上的每克體重增加來計算。資料係使用單向ANOVA分析。結果係以值與其標準誤差顯現(n=7-8)。
資料係使用單向ANOVA分析。在治療方法間之差異係藉由配對比較，使用最小二乘方均數測試決定，其中p<0.05視為有效。結果係以值與其標準誤差顯現(n=7-8)。
d.排泄物粗脂肪之分析
粗脂肪係從在48小時內收集的排泄物，使用修改的Folch方法萃取。簡單地說，將排泄物樣品稱重進入玻璃培養管中及於甲醇存在下均質化。在搖晃的水槽中15分鐘後，將該等管冷卻至室溫及加入己烷：氯仿混合(4：1，v/v)。在搖晃10分鐘後，加入0.88%氯化鈉溶液。旋緊管子及離心。將上層液收集進乾淨的玻璃管中。重覆該萃取兩次及儲備上層液。然後，乾燥該上層液及使用總粗脂肪來計算脂肪排泄比例(透過飲食在48小時排泄物收集時期內消耗的總脂肪%)。
資料係使用單向ANOVA分析。在治療方法間之差異係藉由配對比較，使用最小二乘方均數測試來決定， 其中p<0.05視為有效。結果係以值與其標準誤差顯現(n=7-8)。
結果：諸如實施例1的五層龍屬組成物在7.5週治療時期內於4、5及7週時明顯減慢體重增加及減少食物攝取，及增加糞便中脂肪排泄物。以五層龍屬組成物治療的大鼠之平均體重係低於肥胖對照14%。
e.組織學測試
在研究結束時，於麻醉下收集血液後，立即採集在肥胖對照中及具有五層龍屬組成物(高劑量)的老鼠之腎、肝、脾、胸腺、心、肺、胃、小及大腸、骨骼肌及附睪脂肪，及將其固定在10%中性經緩衝的福馬林中多於48小時。將經適當修整(2-5毫米厚度)的組織加工、埋入石蠟，切出4-5微米切片及以蘇木精及伊紅染色進行染色。
在此研究中無觀察到治療相關的改變。當諸如實施例1的五層龍屬組成物係在7.5週的時期內投藥時，在腎、脾、胸腺、心、胃、小及大腸、骨骼肌及附睪脂肪的組織病理學檢驗之記錄期間無偵測到異常。
結果：實施例1的五層龍屬組成物在500毫克/公斤/天之劑量下明顯減慢體重增加、減少食物攝取及增加糞便中脂肪排泄物。這些活體內研究結果係根據試管內結果，其中該五層龍屬組成物在胰脂酶活性上具有強的抑制效應，與歐里斯泰比較(IC50各別為對五層龍屬組成物來說係10.12微克/毫升及對歐里斯泰來說係0.53微克/毫升)。以高劑量五層龍屬組成物慢性治療顯示出重量降低效應、防止 體重增加及減少脂肪墊質量。
該五層龍屬組成物可以劑量500毫克/公斤/天使用作為有潛力的生物活性化合物，其藉由減少食物攝取及抑制HMG-CoA還原酶酵素減慢體重增加，因此管理健康脂質廓形。因此，該五層龍屬組成物係一種具有多重標的酵素控制活性的新興天然產物，其具有作為肥胖治療的效力。

Claims (21)

  1. 一種五層龍屬組成物，其包含至少12%多酚類、至少2%芒果苷及至少1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物的重量計，其具有包括減低食慾、活化激素敏感脂酶及/或透過抑制HMG-CoA還原酶酵素維持健康脂質廓形的活性。
  2. 如請求項1之組成物，其中該組成物係呈萃取物形式。
  3. 如請求項2之組成物，其中該萃取物基本上由至少12%多酚類、至少2%芒果苷及至少1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮組成，以該萃取物的重量計。
  4. 如請求項2之組成物，其中該萃取物係藉由從五層龍屬的地上、地面、地下部位及/或其組合溶劑萃取獲得。
  5. 如請求項2之組成物，其中該萃取物係從網狀五層龍(Salacia reticulate)及/或長圓果五層龍(Salacia oblonga)的莖、葉子、根及其組合製備。
  6. 如請求項2之組成物，其中該萃取物係使用食品級非水性極性溶劑獲得。
  7. 如請求項6之組成物，其中該食品級極性非水性極性溶劑係選自於乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮或其混合物。
  8. 如請求項6之組成物，其中該食品級非水性極性溶劑係乙醇。
  9. 如請求項6之組成物，其中用以獲得該萃取物之五層龍屬植物對食品級非水性極性溶劑的重量對體積比率範 圍係1：2至1：30。
  10. 一種減低食慾、活化激素敏感脂酶及/或抑制HMG-CoA還原酶酵素的方法，其包括將一有效量的五層龍屬組成物投藥至需要其之個體，該組成物包含至少12%多酚類、至少2%芒果苷及至少1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物的重量計。
  11. 如請求項10之方法，其當投藥至需要其的個體時，該方法包括藉由抑制HMG-CoA還原酶酵素維持健康脂質廓形。
  12. 如請求項10之方法，其當投藥至需要其的個體時，該方法包括藉由將HMG-CoA還原酶酵素抑制在IC50不少於400微克/毫升下維持健康脂質廓形。
  13. 如請求項10之方法，其當投藥至需要其的個體時，該方法包括減少食物攝取。
  14. 如請求項10之方法，其當投藥至需要其的個體時，該方法包括增加糞便中脂肪排泄物。
  15. 一種用以製備新穎的五層龍屬組成物之方法，其中該組成物包含至少12%多酚類、至少2%芒果苷及至少1%的25,26-氧化木栓烷-1,3-二酮，以該組成物的重量計，其減低食慾、活化激素敏感脂酶及/或管理健康脂質廓形，該方法包括：i.乾燥及研磨五層龍屬的植物部位；ii.在高溫下攪拌步驟i的植物部位與食品級非水性極性溶劑； iii.從上述系統過濾出該食品級非水性極性溶劑；iv.在高溫下攪拌該植物部位與食品級非水性極性溶劑；v.過濾出該食品級非水性極性溶劑；vi.結合來自步驟iii及v的濾出液並蒸發，以獲得呈萃取物形式的五層龍屬組成物；及vii.藉由與食品級溶劑區分(partitioning)以進一步純化所產生的萃取物。
  16. 如請求項15之方法，其中該植物部位係選自於五層龍屬的地上、地面、地下植物部位及其組合。
  17. 如請求項15之方法，其中該植物部位係選自於網狀五層龍及/或長圓果五層龍的莖、葉子、根及其組合。
  18. 如請求項15之方法，其中該食品級非水性極性溶劑係選自於下列之群：乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮及其混合物。
  19. 如請求項15之方法，其中該植物部位對食品級非水性極性溶劑的重量對體積比率之範圍係1：2至1：30。
  20. 如請求項15之方法，其中該食品級非水性極性溶劑係乙醇。
  21. 如請求項15之方法，其中該植物部位係與該食品級非水性極性溶劑在室溫至約85℃之高溫下攪拌。
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