JP2010536938A - 癌の画像化と処置 - Google Patents
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Abstract
Description
[(P1−S1j)p−L−(S2q−P2)r]t
(式中:
P1およびP2は、同じであっても異なっていてもよく、環状オリゴペプチド部分であり、P1とP2の少なくとも一方は該環状部分内にB−ArgまたはB−(Me)Argモチーフを有し、ここで、Bは、塩基性アミノ酸、その誘導体、またはフェニルアラニンもしくはその誘導体であり;
S1およびS2は、スペーサー基であり、同じであっても異なっていてもよく;
Lは、該環状オリゴペプチドまたはスペーサー基の結合のための少なくとも2つの官能基を含むリンカー部分であり;
jおよびqは、独立して0または1であり;
pおよびrは独立して、1以上の整数であり;そして
tは、1以上の整数であり、
ただし、t、pまたはrが1より大きいとき、該環状オリゴペプチド部分、スペーサー基および/またはjもしくはqの値は、多数の該(P1−S1j)部分または多数の該(S2q−P2)部分の間で同じであっても異なっていてもよいものとする)を含む化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくはエステルを提供する。
シクロ[D−Tyr/(Me)D−Tyr−B−Arg/(Me)Arg−Z−(Ala)n−X]
(式中:
Bは上記に規定のとおりであるが、ただし、Bが塩基性アミノ酸のNα−メチル誘導体であるとき、該モチーフはB−Argであるものとし;
Zは、側鎖内に芳香族基を含むアミノ酸であり;
nは1または0であるが、ただし、該環状部分の配列内の先の4つのアミノ酸がD−Tyr/(Me)D−Tyr−Arg−Arg−Nalであり、NalがL−3−(2−ナフチル)アラニンであるときのみ、nが1であるものとし;そして
Xは、Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(ジアミノプロピオン酸)、Dap(FP)((N−フルオロプロピオニル)−ジアミノプロピオン酸)、Dab(ジアミノ酪酸)、Dab(FP)((N−フルオロプロピオニル)−ジアミノ酪酸)、Dab(FB)((N−フルオロベンゾイル)−ジアミノ酪酸)およびDap(FB)((N−フルオロベンゾイル)−ジアミノプロピオン酸)から選択される)を有する環状オリゴペプチドから選択される。
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−(Me)Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−(Me)Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Cit−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Ala−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Ala−Ala]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−Nal−(Me)Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−(Me)Nal−Gly]
シクロ[(Me)D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Ala−Gly]
シクロ[(Me)D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FP)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ac)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Am)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Dap(FP)]
シクロ[D−Tyr−Orn(N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Bz)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Bz,FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ahx)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ahx3)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(TGAS)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(TGAS2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(TGAS3)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(Me,FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−His−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Phe−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Cit−Nal−Gly]
から選択される配列を有する。
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−(Me)Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Cit−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FP)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ac)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Am)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−His−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Arg−Nal−Gly]
から選択される配列を有するものであり得る。
シクロ[D−Tyr−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Arg−Nal−Gly]
から選択される配列を有する。
1.1 概要
1.1.1 材料および方法:
腫瘍の転移の可能性の早期評価方法は、治療の予測と管理のための有益なツールとなり得る。最近、転移における重要な役割がケモカイン受容体CXCR4に原因があるとされた。乳癌および前立腺癌などのさまざまな腫瘍において、CXCR4は、腫瘍細胞ホーミングの際に支配的な役割を果たしていることがわかり、原発性腫瘍と転移腫瘍の両方において発現されることが示された。この試験の目的は、SPECTおよびPET画像化による腫瘍および転移腫瘍上のCXCR4発現のインビボでの画像化のための新規な放射性標識プローブを開発することであった。
放射性標識CPCR4は、高い親和性(KD:0.4±0.1nM)および特異性(>90%)で、拮抗的様式で内因的にCXCR4を発現するジャーカット細胞および形質導入したCXCR4/GFP発現CMS5細胞に結合する。CMS5/CXCR4+−線維肉腫は、オートラジオグラフィ、免疫組織化学検査(IHC)およびGFP蛍光によって確認されるように、マウスの信頼のおけるCXCR4腫瘍モデルであることがわかった。i.v.注射された放射性標識CPCR4の体内分布試験では、注射1時間後、CMS5/CXCR4+腫瘍において5.5±1.5%ID/g(注射用量/g)、およびCMS5/CXCR4−対照において0.6±0.2%ID/gが示された。急速な血中クリアランスおよび低いバックグラウンド蓄積(<1.0%ID/g)の他、より高いトレーサーの取込みが、肝臓(19.5±2.8%ID/g)、腸(17.2±2.9%ID/g)および腎臓(12.2±2.3%ID/g)において見られた。マウスのCPCR4−SPECTおよび動物PET画像化を使用すると、CXCR4+腫瘍の明確な輪郭描写が可能となったが、同じ動物のCXCR4−対照では、活性蓄積が可視的ではなかった。
1.2.1 材料および方法
1.2.1.1 ペプチドの合成および放射性標識
ペプチドは、Fmocストラテジーに従う標準的な固相ペプチド合成プロトコルを使用することにより合成した。Fmocアミノ酸Fmoc−Arg(Pbf)、Fmoc−D−Tyr(tBu)およびFmoc−Glyは、Novabiochem(Bad Soden,Germany)から購入し、Fmoc−2−ナフチルアラニンはBachem(Bubendorf,Switzerland)から入手した。ペプチド合成は、TCP(塩化トリチルポリスチレン)樹脂上で手作業にて行なった。O−(1H−ベンゾトリアゾル−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート(TBTU)およびジフェニルホスホリルアジド(DPPA)は、それぞれ、AlexisおよびAldrich(Steinheim,Germany)から購入した。IodoGen(1,3,4,6−テトラクロロ−3R,6R−ジフェニルグリコールウリル)は、Pierce(Rockford,IL,USA)から入手し、ナトリウムのヨウ化物−125はHartmann−Analytic GmbH(Braunschweig,Germany)から購入し、ナトリウムのヨウ化物−123は、Amersham Health(Eindhoven,The Netherlands)から入手した。ナトリウムのヨウ化物−124は、W.Brandau教授(Essen,Germany)のご好意によって提供して頂いた。他の試薬はすべて、Merck(Darmstadt,Germany)またはSigma−Aldrich(Taufkirchen,Germany)から購入した。特に指定のない限り、溶媒は、さらに精製せずに使用した。
概要
市販の化学試薬はすべて、さらに精製せずに使用した。工業用溶媒は、使用前に蒸留した。
ペプチドの合成は、TCP樹脂(0.9mmol/g)を使用し、標準的なFmocストラテジーに従って行なった[13]。Fmoc−Xaa−OH(1.2当量)をTCP樹脂に、DIEA(ジイソプロピルエチルアミン)(2.5当量)含有無水DCM(0.8ml/g樹脂)を用いて室温で1時間結合させた。MeOHとDIEA(5:1;v:v)溶液の添加により、残りの塩化トリチル基を15分間キャップした。樹脂を濾過し、DCM(5回)とMeOH(3回)で徹底的に洗浄した。真空乾燥後の樹脂の重量によって負荷容量を測定すると、0.4〜0.9mmol/gの範囲であった。
樹脂結合Fmocペプチドを20%ピペリジン含有NMP(v/v)で10分間処理し、2回目は5分間処理した。樹脂をNMP(5回)で洗浄した。
Fmoc−Xaa−OH(2当量)、TBTU(2当量)、HOBt(ヒドロキシベンゾトリアゾール)(2当量)、DIEA(5.2当量)のNMP(1ml/g樹脂)の溶液を、樹脂結合遊離アミンペプチドに添加し、室温で60分間振とうし、NMP(5回)で洗浄した。
N−アルキル化は、最適化されたプロトコル[14]を用いて行なった。塩化o−ニトロベンゼン(benzenel)スルホニル(o−Ns−Cl)(5当量)とコリジン(10当量)のNMP(1ml/g樹脂)の溶液を、樹脂結合遊離アミンペプチドに添加し、室温で15分間振とうした。樹脂をNMP(3回)および乾燥THF(3回)で洗浄した。
トリフェニルホスフィン(5当量)、DIAD(ジイソプロピルアゾジカルボキシレート)(5当量)とアルコールROH(10当量)の乾燥THF(1ml/g樹脂)溶液を、樹脂結合o−Ns保護ペプチドに添加し、室温で10分間振とうした。樹脂を濾別し、乾燥THF(3回)とNMP(3回)で洗浄した。
o−Ns脱保護のため、樹脂結合o−Ns−ペプチドを、メルカプトエタノール(10当量)とDBU(5当量)のNMP(1ml/g樹脂)溶液で5分間処理した。脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をNMP(5回)で洗浄した。
Fmoc−Xaa−OH(2当量)、HATU(2当量)、HOAt(ヒドロキシアゾベンゾトリアゾール)(2当量)、DIEA(4当量)のNMP(1ml/g樹脂)の溶液を、樹脂結合ペプチドに添加し、室温で3時間振とうし、NMP(5回)で洗浄した。
Pd(PPh3)4(0.125当量)含有乾燥DCM(0.5ml/g樹脂)を樹脂結合Allocペプチドに添加した後、フェニルシラン含有乾燥DCM(0.5ml/g樹脂)を添加し、1時間振とうした。樹脂をDCMで5回洗浄した。
Dde基の脱保護のため、樹脂結合ペプチドを、2%ヒドラジンのNMP(1ml/g樹脂)溶液中で5分間振とうした。脱保護手順をもう一度繰り返し、樹脂をNMPで5回洗浄した。
Dde基の脱保護のため、樹脂結合ペプチドを6.5%ヒドラジンのNMP(1ml/g樹脂)溶液(200当量のアリル型アルコール含有)中で5分間振とうした。脱保護手順をもう一度10分間繰り返し、樹脂をNMPで5回洗浄した。
樹脂からの完全な切断のため、ペプチドをDCMとHFIP(4:1;v:v)の溶液で室温で0.5時間で3回処理し、溶媒を減圧下でエバポレートした。
ペプチドを含有するDMF(1mMペプチド濃度)とNaHCO3(5当量)の溶液にDPPA(3当量)を室温で添加し、一晩中または線状ペプチドがESI−MSで観察され得なくなるまで撹拌した。溶媒を小容量になるまで減圧下でエバポレートし、ペプチドを飽和NaCl溶液中で沈殿させ、HPLC等級水中で2回洗浄した。
完全に脱保護したペプチドを、HATU(1.1当量)およびDIEA(2.2当量)ならびに対応する酸(1当量)を含むDMF(10mMペプチド濃度)とともに室温で30分間撹拌した。この溶液をHPLC分離によって直接精製した。
完全に脱保護したペプチドを、対応するカルボニル(1当量)を含む水(pH1〜2;TFA;10mMペプチド濃度)中で室温で30分間撹拌した。この溶液をHPLC分離によって直接精製した。
環状ペプチドを2.5mlの20%ピペリジンを含むDMF(v/v)で30分間処理し、飽和NaCl溶液中で沈殿させ、HPLC等級水中で2回洗浄した。
o−Ns脱保護のため、環化ペプチドを、メルカプトエタノール(10当量)とDBU(5当量)の2.5mlのDMF溶液で30分間処理し、飽和NaCl溶液中で沈殿させ、HPLC等級水中で2回洗浄した。
Dde基の脱保護のため、ペプチドを2%ヒドラジンのDMF溶液中で15〜30分間撹拌し、飽和NaCl溶液中で沈殿させ、HPLC等級水中で2回洗浄した。
環化ペプチドをTFA、水およびTIPS(95:2.5:2.5)の溶液中、室温で1時間または保護されたペプチドがESI−MSで観察され得なくなるまで撹拌し、ジエチルエーテル中で沈殿させ、さらに2回洗浄した。
二量体ペプチドを含むカップリング溶液に、激しく撹拌しながら氷浴上で、同容量の濃HClを添加した。脱保護を室温で行い、完全に行なわれたかをESI−MSによって30分毎にモニターし、氷浴上で濃NH4OHで中和することにより終了させた。
DOTAリガンドを5M NH4Cl(0.5ml;pH4.5)に溶解させ、5M NH4Cl(0.05ml)に溶解させたInCl3(5当量)で処理した。室温で15分間撹拌後、溶液を、HPLC精製に供した。
Nα−Alloc−Nδ−Boc−L−オルニチンおよびNα−Alloc−Nδ−Boc−D−オルニチン
JACS,2008,130,794−795を適合。さらなる解析データは、これを見るとよい。
JACS,2008,130,794−795を適合。さらなる解析データは、これを見るとよい。
JACS,2008,130,794−795を適合。さらなる解析データは、これを見るとよい。
1H NMR (250 MHz,DMSO−d6):δ 12.2 (s,br,1H,),7.90 (d,2H),7.69 (dd,2H),7.42 (t,2H),7.33 (m,3H),4.27 (m,3H),3.59 (m,1H),2.41 (m,4H),1.38 (s,9H),13C NMR (75 MHz,DMSO−d6):172.49,170.24,144.35,141.19,128.07,127.51,125.63,120.56,80.39,65.80,60.20,47.17,45.81,28.13. Rt (10〜100%):23.5分. ESI (m+Na):448.1。
1H NMR (250 MHz,CDCl3):δ 7.76 (d,2H,),7.58 (d,2H),7.40 (t,2H),7.31 (m,2H),5.91 (m,1H),5.63 (d,1H),5.32 (m,1H),5.24 (d,1H),4.60 (d,2H),4.36 (m,3H),4.21 (m,1H),2.66 (m,4H),1.45 (s,9H),13C NMR (75 MHz,CDCl3):143.91,141.29,131.84,127.67,127.04,125.08,119.95,118.57,66.86,65.38,47.21,45.13,39.26,38.08,28.05. Rt (10〜100%):27.6分. ESI (m+Na):488.3。
1H NMR (250 MHz,CDCl3):δ 7.75 (d,2H,),7.68 (s,1H),7.57 (d,2H),7.40 (t,2H),7.31 (m,2H),5.89 (m,1H),5.66 (d,1H),5.28 (m,2H),4.60 (d,2H),4.38 (m,br,2H),4.22 (m,1H),2.62 (m,4H),13C NMR (75 MHz,CDCl3):143.69,141.33,131.60,127.77,127.10,125.00 120.01,118.87,67.25,65.65,47.13,44.47,37.87,37.64. Rt (10〜100%):22.0分. ESI (m+Na):432.2。
1H NMR (250 MHz,CDCl3):δ 7.74 (d,2H,),7.58 (m,2H),7.38 (t,2H),7.29 (t,2H),5.89 (m,1H),5.81 (d,1H),5.32 (d,1H),5.23 (d,1H),4.56 (m,3H),4.37 (m,3H),4.23 (m,1H),2.86 (m,2H),1.42 (s,9H),13C NMR (75 MHz,CDCl3):170.62,170.00,155.98,143.91,143.73,141.29,131.49,127.71,127.07,125.13,119.98,118.80,81.89,67.28,66.30,50.61,47.10,37.79,28.03. Rt (10〜100%):27.8分. ESI (m+Na):474.3。
1H NMR (250 MHz,DMSO):δ 7.90 (m,2H,),7.83 (m,1H),7.70 (d,2H),7.42 (m,2H),7.32 (m,2H),5.87 (m,1H),5.30 (d,1H),5.18 (m,1H),4.58 (d,2H),4.45 (m, 1H),4.26 (m,3H),2.70 (m,2H),13C NMR (75 MHz,CDCl3):171.85,171.29,144.22,141.20,132.72,128.11,127.540,125.66 120.59,118.03,66.24,65.52,51.02,47.07,36.32. Rt (10〜100%):22.0分. ESI (m+Na):418.1。
HPLC−MS:Rt=8.37分;m/z(m+H)=801.4
3tBuDOTA−Ahx−βAsp[10]
HPLC−MS:Rt=8,29分;m/z(m+H)=815.4
上記のDOTA誘導体をオリゴペプチド基に結合させるため、上記のアプローチ「溶液中アシル化」を使用した。
CPCR4を、Iodogen法を用いて123I−、124I−または125I−ヨウ化物で標識した[2]。0.2mgのペプチドを250μlのリン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH7.4)に溶解させた。この溶液を、150μgのIodogenをコートしたエッペンドルフカップに添加し、放射ヨウ化物溶液と合わせた。室温で15分後、この溶液を、固形の酸化試薬から除去した。勾配RP−HPLCを用いて精製を行なった。放射化学的純度は概ね>95%であった。動物実験のため、放射性標識ペプチドを含む画分を水で希釈し、Sep−Pak C18カラムに結合させた。その後、カラムを水で洗浄し、放射性標識ペプチドをメタノールで溶出した。メタノールを真空除去後、残渣をPBS(pH7.4)に溶解させて希釈した。4℃での保存のため、溶液を、0.1%トリフルオロ酢酸を含む20%エタノール含有H2Oで酸性化した。
脂肪親和性の測定のため、0.4〜2.7μCiの125I−CPCR4を含む500μlのPBS(pH7.4)を500μlのオクタノールと混合し、激しくボルテックスした。定量的相分離のための遠心分離後、各相から100μlを採取し、放射能をガンマカウンターで測定した。実験は3連で行ない、独立して2回繰り返した。
マウス線維肉腫細胞株CMS5[3]およびヒト293T細胞株[4](R.Willemsen(Department of Clinical and Tumour Immunology,Daniel den Hoed Cancer Center,Rotterdam,The Netherlands)によりご好意によって提供して頂いたもの)は、両方とも、10%(v/v)ウシ胎仔血清(PAA,Linz,Austria)および1%(v/v)L−グルタミンを補充したダルベッコ改変イーグル培地中で培養した。Tリンパ球ジャーカット細胞株(ATCC)を、10%(v/v)ウシ胎仔血清(FCS)および1%(v/v)L−グルタミンを補充したRPMI 1640培地中で維持した。培地および補充物は、特に記載のない限り、Biochrom(Berlin,Germany)から入手したものとした。
増強型蛍光タンパク質をコードするcDNAを、pEGFP(BD Biosciences Clontech,Germany)からNcoI StuI消化によって切り出し、クレノウ酵素を用いて平滑末端とし、pIRESneo3(BD Biosciences Clontech,Germany)の独特なSmaI部位内に挿入し、pIRESeGFPneo3を得た。次の工程では、IRES−eGFPを有するNotI断片をpBullet(Schaftら 2003)のNotI部位内にクローニングし、pBulletIRESeGFPを得た。ヒトケモカイン受容体4型(CXCR4)cDNAを有するpcDNA3CXCR4[5]の1292bpのHindIII XbaI断片(B.Moser(Bern)によりご好意によって提供して頂いたもの)を単離し、すべての部位をクレノウ酵素で平滑末端とした後、レトロウイルスベクター pBulletIRESeGFPのBamHI部位内にクローニングした。得られたベクターをpBulletCXCR4−IRES−eGFPと命名した。293T細胞の一過性トランスフェクションおよびCMS5細胞の形質導入によるレトロウイルス作製は、別途報告されている[6]。
トリプシン処理した細胞のEGFPおよびCXCR4発現を、蛍光励起細胞分取器(Becton Dickinson FACS Vantage,Heidelberg,Germany)により、488nmで励起エネルギー40mWのアルゴンレーザー光線(Spectra−Physics)およびCellQuestソフトウェアを用いて解析した。EGFP発現は、FL1(530/30nm)フィルターを用いて直接測定した。死細胞を、細胞へのヨウ化プロピジウムの添加によって測定し、蛍光を、FL2 585/42nmフィルターを用いて測定した。死細胞のパーセンテージは常に≦0.2%であった。CXCR4発現CMS5細胞の集団を、最小蛍光が20であるFL1についてCXCR4−EGFP共発現細胞を分取することにより富化した。
受容体結合アッセイのため、細胞をPBS/0.2%BSA中に再懸濁させた。400,000個のジャーカット細胞を含む懸濁液総量200μlを、25μlのトレーサー溶液(3.1kBq、ほぼ0.1nM含有)および25μlの希釈剤または種々の濃度の競合物質とともにインキュベートした。IC50値の測定のため、シクロ(D−Tyr1[125I]−Arg2−Arg3−Nal4−Gly5)をトレーサーとして使用した。非特異的結合を、1μMのコールドなシクロ(D−Tyr1[127I]−Arg2−Arg3−Nal4−Gly5)の存在下で調べた。室温で2時間振とう後、5分間の1300rpmでの遠心分離によってインキュベーションを終了させた。細胞ペレットを冷PBSで1回洗浄した後、第2の遠心分離工程を行なった。細胞結合放射能を、ガンマカウンターを使用することにより測定した。実験は、3連で2〜3回繰り返した。化合物のIC50値は、GraphPad Prism(GraphPad Prism 4.0 Software,Inc.,San Diego、CA,USA)を用いた非線形回帰によって計算した。各データ点は、3回の測定の平均である。
動物実験のため、CMS5親細胞および形質導入CMS5/CXCR4細胞を雌Swiss nu/nuマウス(Charles River,France)に皮下注射した。したがって、各マウスについて、製造業者のプロトコルに従い、1.5´106個のCMS5細胞および2´106個のCMS5/CXCR4細胞を、それぞれ75μlのPBS中に再懸濁させ、同じ容量のMatrigel−Matrix HC(BD Biosciences,Heidelberg,Germany)と混合した。続いて、細胞懸濁液を、それぞれの肩に接種した。14〜16日間の腫瘍成長後、マウスを画像化および体内分布の目的に使用した。動物実験はすべて、地方当局に承認されたものであり、当該当局のガイドラインを順守したものである。
370kBq(10μCi)の125I標識CPCR4を、腫瘍を有するマウスの尾静脈(vain)に静脈内注射した。動物を屠殺し、トレーサー注射の30、60および120分後に解剖した。対象の器官を取り出し、重量測定した組織試料中の放射能を、1480 Wizard3ガンマカウンター(Wallac(Turku、Finland)製)を用いて測定した。結果を組織重量1グラムあたりの注射用量に対するパーセント(%ID/g)として示す。各値は、4〜6匹の動物の平均を示す。
1.2.2.1 CPCR4合成および放射性標識
CXCR4受容体に対して高い親和性と選択性を示すCPCR4すなわち環状ペンタペプチドであるシクロ(D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Gly)の合成は、標準的なFmoc固相ペプチド合成プロトコルを使用することにより、酸不安定性トリチルクロリド樹脂において既報のとおりに行なった[1,2]。N−アルキル化でのさらなる修飾は、N−メチル化のために設計された変形プロトコルを使用し、フクヤマ−ミツノブ反応によって行なった[14]。ペプチド鎖の組立て後、側鎖保護ペプチドを樹脂から切断し、DPPA法を用いて環化した[2]。すべての保護基を除去した後、粗環状ペンタペプチドを、分取用HPLCによってさらに精製した。解析用HPLCおよびHPLC/ESI−MS解析により、ペプチドの均一性と正体が示された。
マウス線維肉腫細胞株CMS5を、CXCR4−IRES−eGFPでレトロウイルスにより形質導入した。該細胞プールにおいて、レトロウイルスによるCXCR4形質導入CMS5細胞の70〜80%がeGFP発現について陽性であり(FACS解析によって測定)、平均蛍光強度は130であった。増殖曲線および生存アッセイ(XTT)により、両細胞株とも、インビトロで類似した増殖反応速度論を有することが示された(データ示さず)。CMS5細胞とCMS5/CXCR4細胞をヒトCXCR4について染色すると、CMS5では2.2%のバックグラウンド染色が示され、一方、CMS5/CXCR4細胞の61.6%がヒトCXCR4について陽性に染色され、66の平均蛍光強度を示し、該細胞の57.9%がCXCR4とeGFPの両方について陽性であった(図1)。細胞株は、経時的に安定であった(反復FACS解析(データ示さず)によって表示)。
125I−CPCR4のCXCR4放射性リガンドとしての適性を、まず、CXCR4受容体を内因的に発現するジャーカット細胞において試験し[9,10]、続いて、CXCR4発現のためにレトロウイルスにより形質導入したCMS5/CXCR4細胞において試験した。両方の細胞株で、125I−SDF−1α(50−70%)および125I−CPCR4(>90%)を使用することにより、再現性のある高特異的結合が見られた。CMS5親細胞では、ジャーカット細胞および形質導入CMS5/CXCR4細胞の非特異的結合の範囲において、両方のトレーサーで示された結合はごくわずかであった。飽和結合曲線から、ナノモル以下の範囲(0.3〜0.4nM)において、ほぼ同一のKD値が両方の細胞株で得られ、CXCR4受容体に対する125I−CPCR4の高い親和性を示す(図2および関連する表A)。さらに、多数の125I−CPCR4結合部位(Bmax)を調べた。ジャーカット細胞では、Bmax値は、起源に対する依存性が高く、培養条件によって大きく異なるが、CMS5/CXCR4細胞上の結合部位(Bmax)の数は一定であり、再現性がより良好であった(23±6fmol受容体タンパク質)。
ヒトCXCR4がマウス細胞において機能性であるかどうかを調べるため、細胞をヒトSDF−1αとともにプレインキュベートし、表面CXCR4について染色し、続いてFACS解析を行なった。ヒトSDF−1αとのプレインキュベーション後、CMS5/CXCR4細胞の54.7%がCXCR4について陽性に染色されたのに比べて対照処理細胞では79.2%であり、これは、マウスCMS5細胞における該ヒト受容体の機能性を示す。CMS5細胞におけるCXCR4バックグラウンド染色は、SDF−1αの存在下で7.9から2.7%に減少した。ジャーカット細胞を陽性対照として供した。この細胞では、陽性細胞%の減少は示されなかったが、平均蛍光強度は385.4から155.4に低下した。CMS5/CXCR4細胞では、平均蛍光強度が、mock処理細胞の209.0からSFD−1α処理細胞の80.5に低下した。これは、ジャーカット細胞がCMS5/CXCR4細胞よりも多くのCXCR4受容体を含むことを示す。
125I−CPCR4の体内分布および腫瘍蓄積を注射の30、60および120分後に、CMS5およびCMS5/CXCR4腫瘍を有するヌードマウスにおいて調べた。CMS5/CXCR4腫瘍における125I−CPCR4の腫瘍蓄積は60分後に最高に達し、1グラムあたり注射用量に対して5.5(±1.5)パーセント(%ID/g)であったが、この時点で親CMS5腫瘍で観察されたのは、わずか0.6(±0.2)%ID/gであった。30分後、125I−CPCR4はCMS5/CXCR4腫瘍において4.7(±1.3)%ID/gの蓄積を示し、120分後では3.8(±1.4)%ID/gの蓄積を示している。すべての時間点で、高いトレーサー蓄積が観察されたのは、肝臓、腸および腎臓のみであった。他の器官では、非常に低いバックグラウンド蓄積が示されたにすぎなかった。肝臓では、125I−CPCR4の蓄積は、30分後の27.7(±4.9)%ID/gから120後では15.0(±1.8)%ID/gに時間とともに減少しているが、腸内のトレーサー蓄積は、30分後の16.0(±4.7)%ID/gから120分後では19.2(±4.5)%ID/gに若干増加しており、これらの器官における代謝過程を示す。腎臓内のトレーサー蓄積は、60分後に12.2(±2.3)%ID/gでピークを示しており、120分後では8.2(±1.1)%ID/gに減少している(図3および表)。
HIV−1感染、癌の転移、関節リウマチおよびB細胞性慢性リンパ球性白血病などのいくつかの疾患は、CXCR4ケモカイン受容体と、その天然リガンドである68アミノ酸含有タンパク質ストロマ細胞由来因子−1α(SDF−1α)との相互作用に関連している[11]。このような疾患の処置のためのストラテジーの一例は、小分子CXCR4アンタゴニストによりCXCR4とSDF−1α間の相互作用をブロックすることができたことである。さらに、適当な化合物を適切な放射性同位体で放射性標識することにより、PETによってインビボでCXCR4発現を画像化するための薬剤を提供することが可能となった。
腫瘍細胞の転移と器官特異的ホーミングにおける重要な役割は、ケモカイン受容体CXCR4とその内因性リガンドSDF−1αに因る。インビボでのCXCR4発現の標的化のため、本発明者らは、放射性標識環状ペプチドCPCR4を開発した。125I−CPCR4は、高親和性でCXCR4に結合し(KD=0.4nM)、インビボでCXCR4発現腫瘍内において高い蓄積を示し(注射1時間後5.5%ID/g)、CXCR4陽性腫瘍の明確な輪郭描写を可能にする最初のPET画像化用プローブである。
4.1. いくつかの環状オリゴペプチド二量体を、本明細書に記載のオリゴペプチド単量体を基にして作製した。かかる二量体(合成に使用されたスペーサーおよび/またはリンカー基を含む)は、本発明の範囲に含まれるあらゆる二量体、ならびにさらなる環状オリゴペプチドを組み込むことによって作製される高次多量体の合成の一般原理を例示するものである。
当業者なら、本発明による環状オリゴペプチド、適当なスペーサー部分(好ましくは、本明細書に記載のリンカー部分の1つ)、キレート化剤または放射性金属の錯体形成に適した他の部分の多量体からなる構築物または結合体を容易に作製することができよう。典型的には、近年の数多くの刊行物に記載されているように、例えばDOTAを、リンカーを有する完全に保護されたオリゴペプチドに、標準的な活性化手順を用いた三重保護(例えば、tert−ブチル三重保護)DOTAの使用、または予め活性化したDOTA種(例えば、DOTAのモノ−、ジ−、トリ−もしくはテトラN−スクシンイミジルエステルもしくは4−ニトロフェニルエステル)の使用のいずれかによってカップリングさせる。あるいはまた、この目的は、標準的なペプチドカップリング条件を用いて達成され得る。
Claims (64)
- 構造:
[(P1−S1j)p−L−(S2q−P2)r]t
を含む化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくはエステルであって、式中:
P1およびP2は、同じであっても異なっていてもよく、環状オリゴペプチド部分であり、P1とP2の少なくとも一方は該環状部分内にB−ArgまたはB−(Me)Argモチーフを有し、ここで、Bは、塩基性アミノ酸、その誘導体、またはフェニルアラニンもしくはその誘導体であり;
S1およびS2は、同じであっても異なっていてもよいスペーサー基であり;
Lは、該環状オリゴペプチドまたはスペーサー基の結合のための少なくとも2つの官能基を含むリンカー部分であり;
jおよびqは、独立して0または1であり;
pおよびrは独立して、1以上の整数であり;そして
tは、1以上の整数であり、
ただし、t、pまたはrが1より大きいとき、該環状オリゴペプチド部分、スペーサー基および/またはjもしくはqの値は、多数の該(P1−S1j)部分または多数の該(S2q−P2)部分間で同じであっても異なっていてもよいものとする、
化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくはエステル。 - 前記スペーサー基S1およびS2が1〜20個の炭素原子のアルキル鎖を含み、該アルキル鎖は、分枝鎖または非分枝鎖、置換または非置換であり得、1つ以上のヘテロ原子、環式基および/または複素環式基で分断されていてもよく、前記環状オリゴペプチドおよびリンカーLの結合に適した少なくとも2つの官能基を有するものであり得る、請求項1に記載の化合物。
- S1およびS2の前記アルキル鎖が1〜14個の炭素原子を含む、請求項2に記載の化合物。
- S1およびS2の前記アルキル鎖が4〜10個の炭素原子を含む、請求項3に記載の化合物。
- 前記環状部分内にB−ArgまたはB−(Me)Argモチーフを有するP1またはP2の少なくとも一方が、125I−CPCR4の存在下で、対応するP1またはP2単量体のIC50として測定したとき、CXCR4受容体に対して250nM以下の結合親和性を有する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の化合物。
- Bが塩基性アミノ酸のNα−メチル誘導体であるとき、前記モチーフはB−Argであるものとする、請求項1〜5のいずれか1項に記載の化合物。
- P1とP2の各々が前記環状部分内にB−ArgまたはB−(Me)Argモチーフを有する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物。
- P1とP2の少なくとも一方が、配列:
シクロ[D−Tyr/(Me)−D−Tyr−B−Arg/(Me)Arg−Z−(Ala)n−X]
を有する環状オリゴペプチドから選択され、式中:
Bは、請求項1に規定のとおりであるが、ただし、Bが塩基性アミノ酸のNα−メチル誘導体であるとき、前記モチーフはB−Argであるものとし;
Zは、側鎖内に芳香族基を含むアミノ酸であり;
nは1または0であるが、ただし、該環状部分の配列内の先の4つのアミノ酸がD−Tyr/(Me)−D−Tyr−Arg−Arg−Nalであり、NalがL−3−(2−ナフチル)アラニンであるときのみ、nが1であるものとし;そして
Xは、Gly、(Me)Gly、Ala、Dap(ジアミノプロピオン酸)、Dap(FP)((N−フルオロプロピオニル)−ジアミノプロピオン酸)、Dab(ジアミノ酪酸)、Dab(FP)((N−フルオロプロピオニル)−ジアミノ酪酸)、Dab(FB)((N−フルオロベンゾイル)−ジアミノ酪酸)およびDap(FB)((N−フルオロベンゾイル)−ジアミノプロピオン酸)から選択される、
請求項1〜7のいずれか1項に記載の化合物。 - Zが、Nal、Dap(FB)またはAMS(FB)(アミノオキシセリンと4−フルオロベンズアルデヒドのオキシム)から選択される、請求項8に記載の化合物。
- Bが、Arg、Orn、D−Orn、CitおよびHis、またはそのN−置換誘導体から選択される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の化合物。
- Bが、Me基でNα−置換されている、請求項1〜10のいずれか1項に記載の化合物。
- BがOrnまたはD−Ornであり、該オルニチン残基が、Nδにおいて、フルオロベンゾイル(FB)、フルオロプロピオニル(FP)、アセチル(Ac)、アミド(Am)、Me、1−ナフチルメチル(N1)、2−ナフチルメチル(N2)、ベンジル(Bz)およびアシルスペーサー部分から選択される1つまたは2つの基で置換されており、該アシルスペーサー部分は、1〜14個の炭素の鎖を含み、ヘテロ原子により任意選択で分断され、該オルニチンのNδに対して遠位の末端に求核性官能基を有するアシル基である、請求項8〜11のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記アシルスペーサー部分が、アミノヘキサノイル(Ahx)、トリエチレングリコールアミノアシル(TGAS)、(Ahx)2、(Ahx)3、(TGAS)2および(TGAS)3から選択される、請求項12に記載の化合物。
- Bが、NαにおいてMe基で置換されたD−Ornである、請求項12に記載の化合物。
- Bが、Nδにおいて、FB、FP、Ac、Am、N1、N2、MeとN1、MeとN2、Bz、BzとFB、BzとFP、MeとFB、MeとFP、またはMeで置換されたOrnである、請求項12に記載の化合物。
- Bが、Nδにおいて、FB、FP、MeとFB、またはMeとFPで置換され、任意選択でNαにおいてMe基で置換されたD−Ornである、請求項12に記載の化合物。
- 前記環状オリゴペプチド部分P1とP2の少なくとも一方が、配列:シクロ[D−Tyr−B−Arg−Z−X]を有し、式中、B、ZおよびXは、請求項8に規定のとおりであるが、ただし、Nα−メチル化され得るのは該配列内の残基の1つ以下であるものとする、請求項1〜11のいずれか1項に記載の化合物。
- BがArgである、請求項17に記載の化合物。
- 前記環状オリゴペプチド部分の少なくとも一方が、配列:シクロ[D−Tyr/(Me)D−Tyr−B−Arg/(Me)Arg−Z−X]を有し、式中、ZおよびXは、請求項8に規定のとおりであり、Bは、Arg、(Me)Arg、Orn、Cit、Orn(FB)、Orn(FP)、Orn(Ac)、Orn(Am)、Orn(N1)、Orn(N2)、Orn(Me,N1)、Orn(Me,N2)、Orn(Me)、Orn(Bz)、Orn(Bz,FB)、Orn(Ahx)、Orn(Ahx2)、Orn(Ahx3)、Orn(TGAS)、Orn(TGAS2)、Orn(TGAS3)、Orn(Me,FB)、D−Orn(FB)、(Me)D−Orn(FB)、(Me)D−Orn(Me,FB)、HisおよびPheから選択されるが、ただし、Nα−メチル化され得るのは該配列内の残基の1つ以下であるものとする、請求項1〜10のいずれか1項に記載の化合物。
- 最初の残基がD−Tyrである、請求項19に記載の化合物。
- 3番目の残基がArgである、請求項19または請求項20に記載の化合物。
- ZがNalである、請求項17〜21のいずれか1項に記載の化合物。
- XがGlyである、請求項17〜22のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記環状オリゴペプチド部分P1とP2の少なくとも一方が、
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−(Me)Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−(Me)Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Cit−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Ala−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Ala−Ala]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−Nal−(Me)Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−(Me)Nal−Gly]
シクロ[(Me)D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Ala−Gly]
シクロ[(Me)D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FP)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ac)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Am)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Dap(FP)]
シクロ[D−Tyr−Orn(N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Bz)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Bz,FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ahx)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ahx3)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(TGAS)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(TGAS2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(TGAS3)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(Me,FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−His−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Phe−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Cit−Nal−Gly]
から選択される配列を有する、請求項1〜23のいずれか1項に記載の化合物。 - 前記環状オリゴペプチド部分P1とP2の少なくとも一方が、
シクロ[D−Tyr−Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)Arg−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Arg−(Me)Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Cit−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FP)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Ac)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Am)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N1)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(Me,N2)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−His−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Arg−Nal−Gly]
から選択される配列を有する、請求項24に記載の化合物。 - 前記環状オリゴペプチド部分P1とP2の少なくとも一方が、
シクロ[D−Tyr−Orn−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn(FB)−Arg−Nal−Gly]
から選択される配列を有する、請求項25に記載の化合物。 - P1とP2が同じである、請求項1〜26のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記環状オリゴペプチド部分P1とP2の各々が、請求項24に列挙して示したものから選択される配列を有する、請求項24に記載の化合物。
- P1およびP2が、配列:シクロ[D−Tyr−Orn−Arg−Nal−Gly]を有する、請求項27または28に記載の化合物。
- P1およびP2が、配列:シクロ[D−Tyr−(Me)D−Orn−Arg−Nal−Gly]を有する、請求項27または28に記載の化合物。
- 前記リンカー部分Lが少なくとも3つの官能基を含み、そのうちの2つが前記環状オリゴペプチドまたはスペーサー部分の結合に適したものであり、そのうちの1つが検出可能な標識または細胞傷害性部分の結合に適したものである、請求項1〜30のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記リンカー部分Lが、ジカルボン酸、アミノ酸、線状オリゴペプチド、アルキン、ジオキシム、ポリ(アルキレングリコール)、カルボン酸−および/またはアミノ−置換ポリ(アルキレングリコール)、糖類、ポリアミンおよび官能性付与されたペプチドもしくは樹脂などのオリゴ−またはポリ−アミノオキシ−官能性付与された種から選択される基を含む、請求項1〜31のいずれか1項に記載の化合物。
- 検出可能な標識または細胞傷害性部分を含む、請求項1〜32のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記リンカー部分Lに直接または間接的に結合された検出可能な標識または細胞傷害性部分を含む、請求項31〜32のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記検出可能な標識または細胞傷害性部分がLに、スペーサー基S3を介して間接的に結合されている、請求項34に記載の化合物。
- S3が、請求項2のS1およびS2について規定されるとおりである、請求項35に記載の化合物。
- 検出可能な標識として放射性標識を含む、請求項33〜36のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記放射性標識が、放射性核種と有機錯化剤との錯体の形態である、請求項37に記載の化合物。
- 1つ以上のDap(FB)、Dap(FP)、FBまたはFP基を含み、該フッ素置換基の1つが18Fである、請求項1〜38のいずれか1項に記載の化合物。
- 18Fが、OrnまたはD−OrnのNδにおけるFBまたはFP置換基上に存在する、請求項39に記載の化合物。
- 18F、47Sc、51Cr、52Fe、52mMn、56Ni、57Ni、62Cu、64Cu、67Ga、68Ga、72As、75Br、76Br、77Br、82Br、89Zr、94mTc、97Ru、99mTc、111In、123I、124I、125I、131I、191Pt、197Hg、201Tl、203Pb、110mIn、120Iから選択される放射性標識を有する、請求項37に記載の化合物。
- 前記錯化剤が、前記環状オリゴペプチドまたはリンカー部分Lの一方にスペーサー基S3によって結合されている、請求項38に記載の化合物。
- 前記放射性標識が、32P、67Cu、77As、90Y、99Mo、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、114mIn、117mSn、121Sn、127Te、131I、140La、140Nd、142Pr、143Pr、149Tb、149Pm、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、166Ho、166Dy、169Er、169Yb、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、213Bi、225Acから選択される、請求項37に記載の化合物。
- 前記放射性標識が、90Y、188Reおよび131Iから選択される
、請求項43に記載の化合物。 - 1つ以上の親水性部分の結合によって修飾されたものである、請求項1〜44のいずれか1項に記載の化合物。
- 前記1つ以上の親水性部分が前記リンカー基Lに結合されている、請求項45に記載の化合物。
- 請求項1〜46のいずれか1項に記載の化合物を、1種類以上の薬学的に許容され得る賦形剤とともに含む医薬組成物。
- 注射に適した、請求項47に記載の組成物。
- 請求項1に記載の化合物の合成方法であって、環状オリゴペプチドP1およびP2、リンカーLならびに、任意選択でスペーサーS1および/またはS2を、該オリゴペプチドの官能基が、該リンカーLの官能基あるいは、存在する場合は該スペーサーS1および/またはS2の官能基と反応し、該スペーサーのその他の官能基が該リンカーLの官能基と反応するような条件下で合わせることを含む、方法。
- さらに、任意選択でスペーサー基S3を有する細胞傷害性部分または検出可能な標識を、該細胞傷害性部分もしくは該検出可能な標識上の官能基または存在する場合は該スペーサー基S3の官能基が、前記リンカーLあるいは前記環状オリゴペプチドP1および/またはP2上の官能基と反応するように導入することを含む、請求項49に記載の方法。
- 前記環状オリゴペプチドと前記リンカーLおよび/またはスペーサー基S1および/またはS2との反応に使用される条件が、前記細胞傷害性部分もしくは前記検出可能な標識または存在する場合はスペーサーS3と該リンカーLまたは該環状オリゴペプチドとの反応に使用される条件とは異なる、請求項50に記載の方法。
- 治療または診断における使用のための請求項1〜46のいずれか1項に記載の化合物。
- 新形成状態の処置のための医薬の調製における請求項1〜46のいずれか1項に記載の化合物の使用。
- 新形成状態の処置および/または診断における使用のための請求項1〜46のいずれか1項に記載の化合物。
- 新形成状態の診断的画像化のための医薬の調製における請求項33〜46のいずれか1項に記載の化合物の使用であって、該化合物が検出可能な標識を含む、使用。
- 前記新形成が転移の可能性を有するか、または有することが疑われる、請求項53または請求項54に記載の使用。
- 前記新形成状態が乳癌または前立腺癌である、請求項53〜55のいずれか1項に記載の使用。
- 新形成組織を画像化する方法であって、新形成を有するか、または有することが疑われる被験体に、請求項33〜46のいずれか1項に記載の化合物を投与する工程、およびインビボでの該化合物の分布後に該化合物を検出する工程を含み、該化合物が検出可能な標識を含む、方法。
- 前記検出する工程後、前記検出された化合物の画像を生成するさらなる工程を含む、請求項58に記載の方法。
- 新形成の細胞の転移の可能性を判定する方法であって、該方法は、該細胞を請求項1〜46のいずれか1項に記載の化合物に、該化合物が該細胞の表面上のCXCR4受容体に結合することが可能となるように曝露する工程、未結合化合物を該細胞の近傍から除去する工程、ならびに該細胞に結合された化合物の存在および/または量を測定する工程を含む、方法。
- 前記新形成から前記細胞を取り出し、インビトロで該化合物に曝露する、請求項60に記載の方法。
- 結合された化合物の画像化あるいはその存在および/または量の測定が、前記標識が放射性核種を含む場合PETまたはSPECTを用いて行われる、請求項58〜60のいずれか1項に記載の方法。
- 被験体の新形成状態の処置方法であって、該新形成が転移の可能性を有するか、または有することが疑われ、該方法は、該被験体に請求項1〜46のいずれか1項に記載の化合物を投与することを含む、方法。
- 前記新形成状態が乳癌または前立腺癌である、請求項58〜63のいずれか1項に記載の方法。
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