PT1590317E - Áçido (4s, 8s) - e (4r, 8r) -4-p-nitrobenzil-8-metil-3, 6, 9, triaza-sp 3/sp n, sp 6/sp n, sp 9/sp n-tricarboximetil-1, 11-undecanóico enantiomericamente puro e seus derivados, processo para a sua preparação e utilização para a preparação de agentes - Google Patents

Áçido (4s, 8s) - e (4r, 8r) -4-p-nitrobenzil-8-metil-3, 6, 9, triaza-sp 3/sp n, sp 6/sp n, sp 9/sp n-tricarboximetil-1, 11-undecanóico enantiomericamente puro e seus derivados, processo para a sua preparação e utilização para a preparação de agentes Download PDF

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Description

DESCRIÇÃO "ÁCIDO (4S,8S)- E (4R,8R)-4-P-NITROBENZIL-8-METIL-3,6,9,TRIAZA-SP 3/SP N, SP 6/SP N, SP 9/SP N-TRICARBOXIMETIL-1,ll-UNDECANÓICO ΕΝΑΝΤΙOMERICAMENTE PURO E SEUS DERIVADOS, PROCESSO PARA A SUA PREPARAÇÃO E UTILIZAÇÃO PARA A PREPARAÇÃO DE AGENTES FARMACÊUTICOS" A invenção refere-se aos objectos caracterizados nas reivindicações, isto é, ácido (4S,8S)- e (4R,8R)-4-p-nitrobenzil-8-metil-3,6,9-triaza-3N, 6N, 9N-tricarboximetl-l,11-undecanóico e seus derivados, processo para a sua preparação e sua utilização para a preparação de agentes farmacêuticos para o radiodiagnóstico, radioterapia ou diagnóstico por RMN.
A aplicação de radiofármacos para fins de diagnóstico e terapêuticos é conhecida já há muito tempo na área da investigação biológica e médica. Em particular, os radiofármacos são usados para representar determinadas estruturas, tal como, por exemplo, o esqueleto, órgãos ou tecidos. A aplicação de diagnóstico pressupõe a utilização de agentes radioactivos deste tipo que, após aplicação, se concentram especificamente nas estruturas, no doente, que devem ser analisadas. Estes agentes radioactivos que se concentram localmente podem ser depois detectados, gravados ou submetidos a cintilografia por meio de detectores adequados, tal como, por exemplo, câmaras de cintilação ou outros processos de gravação adequados. A distribuição e intensidade relativa do agente radioactivo detectado caracteriza o local de uma estrutura, no qual o agente 1 radioactivo se encontra, e pode representar a presença de anomalias em estruturas e funções, alterações patológicas etc..
De modo semelhante, podem ser ministrados, ao doente, radiofármacos como agentes terapêuticos para irradiar determinados tecidos ou regiões doentes. O tratamento deste tipo exige a preparação de agentes terapêuticos radioactivos que se concentram em determinadas estruturas, órgãos ou tecidos. 0 Zevalin® representa um radiofármaco desenvolvido pela firma IDEC Pharmaceuticals Corp., para a terapia do linfoma não-Hodkin (ver p. ex. Câncer (2002) Feb 15; 94, (4 Suppl): 1349-57) . O ião irradiante é, neste caso, o 90Y emissor em β, o qual está ligado através de um quelante (derivado substituido com metilo do ácido dietileno-triamino-penta-acético (MX-DTPA)) a um anticorpo especifico para tumores. A ressonância magnética nuclear (RMN) é hoje um método do diagnóstico médico vastamente empregue, aproveitado para a reprodução de imagem in vivo, com o qual podem ser visualizados vasos corporais e tecidos corporais (inclusivamente tumores), através da medição das propriedades magnéticas dos protões na água corporal. São empregues para este efeito, p. ex., agentes de contraste que, por influência de determinados parâmetros de RMN dos protões corporais (p. ex. dos tempos de relaxação T1 e T2), provocam uma intensificação de contraste nas imagens resultantes ou só deste modo tornam estas imagens legíveis. São empregues sobretudo complexos de iões paramagnéticos, tal como, p. ex., complexos contendo gadolínio (p. ex. Magnevist®) , devido ao efeito dos iões paramagnéticos sobre o encurtamento dos tempos de relaxação. 2
Tanto iões paramagnéticos, tal como, p. ex. : Gd3+, Mn2+,
Cr3+, Fe3+ e Cu2+, como também muitos radionuclideos metálicos não podem ser ministrados na forma livre como soluções, dado que são altamente tóxicos. Para tornar estes iões adequados para uma aplicação in vivo, estes são, em regra, complexados. Por exemplo, no documento EP-A-0071564 é descrito, entre outros, o sal de meglumina do complexo de gadolinio (III) do ácido dietilenotriaminopenta-acético (DTPA) como agente de contraste para a tomografia por RMN. Um preparado que contém este complexo, foi aprovado mundialmente como primeiro agente de contraste de RMN, sob o nome de Magnevist®. Este agente de contraste distribui-se extracelularmente, após aplicação intravenosa, e é excretado renalmente através de secreção glomerular. Uma passagem de membranas celulares intactas não é praticamente observada. 0 Magnevist® é particularmente bem adequado para a visualização de áreas patológicas (p. ex., inflamações, tumores).
Os agentes de radioterapêutica e agentes de contraste conhecidos não podem ser, contudo, empregues de forma satisfatória em todos os casos de aplicação. Assim, muitos destes agentes distribuem-se no espaço extracelular completo do corpo. Para aumentar a eficiência destes agentes no diagnóstico in vivo e na terapia, procura-se aumentar a sua especificidade e selectividade, por exemplo, para células-alvo ou áreas e estruturas do corpo desejadas. Um melhoramento destas propriedades pode ser alcançado, por exemplo, por acoplamento dos complexos metálicos a biomoléculas, segundo o principio de "Drug-Targeting". Como biomoléculas servem proteínas do plasma, anticorpos, seus fragmentos, hormonas, factores de crescimento e substratos de receptores e enzimas (p. ex. documento WO 97/12850, Institut fur Diagnostikforschung an der FU Berlin). 3
Até à data, contudo, a especificidade tumoral (concentração tumoral), p. ex., ainda não é, em muitos casos, suficientemente elevada, o que é um objectivo importante, em particular no caso da radioimunoterapia. É ainda desejável, disponibilizar agentes para o diagnóstico e terapia que, a par de uma especificidade para o alvo tão alta quanto possível, possuam uma grande estabilidade in vivo para os iões metais complexados geralmente tóxicos.
Um objectivo da invenção foi, por conseguinte, disponibilizar novos agentes para o radiodiagnóstico e diagnóstico por RMN, bem como para a radioterapia, que não apresentam as desvantagens mencionadas e apresentam, em particular, uma elevada estabilidade in vivo, boa compatibilidade e sobretudo propriedades organoespecíficas. Por um lado, a retenção nos tecidos tumorais ou órgãos a analisar deve ser suficiente para, numa dosagem reduzida, alcançar a qualidade necessária de imagens, ou suficiente irradiação, para um diagnóstico ou terapia eficientes. Por outro lado, deve estar subsequentemente garantida uma excreção, tão rápida e extensa quanto possível, dos metais a partir do corpo. Os agentes de contraste de RMN devem mostrar ainda uma relaxividade dos protões elevada e permitir, deste modo, uma redução da dose no caso de um aumento da intensidade de sinal.
Foram efectuados diferentes ensaios para melhorar as propriedades de derivados de DTPA que podem ser bioacoplados através da introdução de substituintes.
Brechbiel et al. descrevem, p. ex., uma síntese detalhada de derivados de DTPA substituídos com metilo, que podem ser 4 acoplados, por exemplo, a anticorpos ("A Convenient Synthesis of Bifunctional Chelating Agents Based on Diethylenetriaminepentaacetic Acid and Their Coordination Chemistry with Yttrium", Bionconjugate Chemistry, (1991), 180-186. "Synthesis of (1-(p-isothiocyanatobenzyl) derivatives of DTPA and EDTA. Antibody Labeling and Tumor-Imaging Studies.", Inorg. Chem. (1986), 25, 2772-2781.). No pedido de patente WO 88/01618 de Gansow et al. é revelado DTPA que está provido de um substituinte metilo na posição 8 e um substituinte benzilo para-funcionalizado na posição 4.
O composto I foi denominado MX-DTPA, mx-DTPA ou também 1B4M-H2DTPA. O pedido de patente WO 01/41743 da firma IDEC Pharmaceuticals Corporation descreve uma síntese regiosselectiva do composto I, que parte de (S) -p-nitrofenilalanina protegida com Boc e uma diamina monoprotegida. O centro estereogénico na posição 4 deste composto é descrito como tendo a configuração (S); o centro estereogénico na posição 8 não é definido.
Como já mencionado acima, o MX-DTPA é componente do preparado ZEVALIN® para o tratamento do linfoma não-Hodkin. 5
Também aqui é empregue a mistura de (4S,8R) e (4S,8S)-MX-DTPA como ligante quelatizante.
McMurry et ai. (J. Med. Chem., (1998), _4jL, 3546-3549) puderam mostrar que DTPA substituídos com ciclo-hexilo, que estão substituídos com nitrobenzilo, possuem uma configuração preferida devido à estrutura rígida e volumosa do anel de ciclo-hexano. Assim, o composto II apresenta uma estabilidade mais elevada in vivo do que N°2
II III o composto III.
Apesar de o MX-DTPA (I) ter mostrado propriedades bem analisadas e aceitáveis - p. ex., estabilidade em complexo aumentada comparada com o DTPA não substituído - mantém-se contudo ainda desejável, aumentar ainda mais a estabilidade em complexo metálico in vivo e disponibilizar agentes para o diagnóstico e para a terapia, que apresentem uma segurança tão elevada quanto possível.
Verificou-se agora que os derivados de MX-DTPA, nos quais o substituinte metilo (posição 8), comparativamente pequeno, foi introduzido de modo enantiosselectivo, apresenta surpreendentemente, no caso de configuração adequada, uma 6 estabilidade termodinâmica in vitro nitidamente mais elevada do que a mistura de diastereómeros (IV) (ver abaixo).
Via VI b 7 é necessário,
Neste caso, configuração do substituinte como (4s,8S) (ver composto para obter o efeito positivo ou (4R,8S) (ver composto VI uma estabilidade em complexo como foi descoberto, que a metilo e benzilo esteja presente Va) ou (4R,8R) (ver composto Vb) , descrito. As configurações (4S,8R) a ou b) conduzem pelo contrário a diminuída.
Uma experiência impressionante exemplificativa pôde mostrar que numa mistura de, respectivamente, um equivalente de Va (R = -NO2) , Via (R = -NO2) e sal de Gd(III) se forma quase exclusivamente o complexo de Gd do composto Va. Além disso, pôde ser determinada a constante de estabilidade termodinâmica para o composto Va com logKy = 24,7 ± 0,7, que está deste modo nitidamente aumentada face à constante de estabilidade da mistura de diastereómeros IV (logKy = 22,5 (J. Med. Chem. (1998), 41, 3546-3549)). Verificou-se ainda que a radiotoxicidade do complexo metálico do composto Va in vivo está reduzida face ao composto Via.
Este resultado é inesperado e surpreendente dado que, no caso do substituinte metilo na posição 8, não se trata de qualquer estrutura rígida, "organizada no espaço" ou exigente em termos de estereometria, como é o caso no substituinte ciclo-hexilo dos compostos II e III. Assim, seria de esperar que todos os quatro estereoisómeros apresentariam propriedades de complexação quase iguais. Mas, como já descrito, mostrou-se que, em comparação, os compostos de acordo com a invenção, Va e Vb, possuem propriedades de complexação nitidamente melhores do que os compostos Via e VIb. A invenção refere-se, deste modo, a compostos da fórmula geral Vila e Vllb 8
onde Z representa um átomo de hidrogénio ou um equivalente de iões metálicos de um elemento do número de ordem 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ou 83, A representa um grupo -COO-, R representa um grupo nitro, um grupo amino, ou um outro grupo funcional, que pode ser unido com uma biomolécula, ou um residuo alquilo-Ci-C25 de cadeia linear ou ramificado, saturado ou insaturado e eventualmente interrompido por um até seis átomos de 0-, ou fenileno, grupos -NHCO-, -CONH-,
Η H e/ou -NH-(C=S)-NH-, que está eventualmente substituído, num qualquer local, com um até seis grupos carboxilo, grupos hidroxilo, grupos amino ou outros grupos funcionais, bem como seus sais com bases orgânicas ou inorgânicas com as condições de que o resíduo alquilo contenha pelo menos um grupo funcional que 9 possa ser unido com uma biomolécula, e de pelo menos dois Z representarem um equivalente de iões metálicos. 0 resíduo R pode representar um resíduo alquilo com 1-25 átomos de carbono (em que este contém pelo menos um grupo funcional) . Este resíduo alquilo pode ser de cadeia linear ou ramificado, saturado ou insaturado (p. ex. :
V
T, e está provido num qualquer local com um até seis grupos carboxilo, hidroxilo e/ou amino (p. ex.:
,COOH COOH
COOH
COOH
ou pelo menos um outro grupo funcional ligante, que pode ser unido com uma biomolécula - tal como, p. ex. carboxilo, 10 carboxilo activado, amino, nitro, isocianato, isotiocianato, hidrazina, semicarbazida, tio-semibarbazida, cloroacetamida, bromoacetamida, iodacetamida, acrilo, acilamino, anidridos misturados, azida, cloreto de ácido, hidróxido, cloreto de sulfonilo, vinilsulfona, carbodiiimida, maleimida, dioxo ou um outro grupo funcional ligante (p. ex.:
s
)· 0 residuo alquilo C1-C25 pode estar eventualmente interrompido por um até seis átomos de 0, grupos fenileno,
-NHCO-, -CONH-, -0-(C0)-NH- e/ou -NH-(C=S)-NH- (p. ex.:
11
COOH
HO.
H
H
Na
O )· R também pode, ele próprio, representar um grupo funcional, tal como, p. ex., carboxilo, carboxilo activado, amino, nitro, isocianato, isotiocianato, hidrazina, semicarbazida, tio-semibarbazida, cloroacetamida, bromoacetamida, iodoacetamida, acrilo, acilamino, anidridos mistos, azida, cloreto de ácido, brometo de ácido, hidróxido, cloreto de sulfonilo, vinilsulfona, carbodiimida, maleimida ou diazo (p. ex.: &
O
Cl $ Hal ) 12 ou um outro grupo funcional ligante.
Uma multiplicidade dos substituintes R possíveis acima mencionados permite uma transformação selectiva com grupos funcionais, das biomoléculas, na gama de pH óptima, por exemplo, a adição a grupos -SH (cisteina na biomolécula) , e designadamente, exclusivamente de grupos -SH, p. ex., a maleimidas (compostos (2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-ilo) , ver acima) ou bromoacetamidas, quando o acoplamento se realiza na gama de pH fracamente acidica.
Por grupo carboxilo activado entende-se, anteriormente, os grupos carboxilo que estão de tal modo derivatizados, que facilitam a reacção com uma biomolécula. Quais os grupos que podem ser utilizados para a activação, é conhecido e pode remeter-se, por exemplo, para M. e A. Bodanszky, "The Practice of Peptide Synthesis," Springerverlag 1984. Exemplos são aductos do ácido carboxilico com carbodiimidas ou ésteres activados tal como, p. ex., ésteres de hidroxibenzotriazole. 0 grupo carboxilo activado para X é seleccionado, de um modo preferido, a partir de
Os ésteres activados dos compostos descritos anteriormente são preparados do modo conhecido pelo especialista. Para o caso 13 dos isotiocianatos ou α-halogenoacetatos, os percursores amino terminais correspondentes são transformados, segundo métodos conhecidos da literatura, com tiofosgénio ou halogenetos do ácido 2-halo-acético. A transformação com ésteres de N-hidroxissucinimida correspondentemente derivatizados, tal como, por exemplo:
também é possivel (Hal = halogéneo).
Em geral, podem ser utilizados para este fim, todos os métodos de activação habituais para ácidos carboxilicos, que são conhecidos do estado da técnica. Se o substituinte R contém um grupo amida, então este é preparado, por exemplo, transformando um ácido carboxilico activado com uma amina. A activação do ácido carboxilico realiza-se segundo os métodos habituais. Exemplos para reagentes de activação adequados são diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), cloridrato de l-etil-3- (3- dimetilaminopropil)-carbodiimida (EDC), hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris(dimetilamino)-fosfónio (BOP) e hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-l-il)-1,1,3,3- tetrametilurónio (HBTU), de um modo preferido DCC. A adição de catalisadores 0-nucleofilicos tal como, p. ex., N-hidroxisuccinimida (NHS) ou N-hidroxibenzotriazole também é possivel.
Tratando-se, no caso do substituinte, de uma função de ácido carboxilico, então esta pode ser empregue na forma 14 protegida (p. ex. na forma do éster benzílico), a dissociação do grupo protector pode realizar-se depois por hidrogenólise.
Para unir esta função de ácido carboxilico a um grupo funcional adequado de uma biomolécula adequada (para a descrição de biomoléculas: ver abaixo), este deverá ser, em regra, activado primeiro. Para este efeito, de um modo preferido, são gerados intermediariamente ésteres activos, os quais são depois atacados por um grupo nucleofilico da biomolécula. Deste modo origina-se uma união covalente entre a biomolécula e o composto da fórmula I. Ésteres activados preferidos são os ésteres da N-hidroxissuccinimida, os ésteres do paranitrofenol ou os ésteres do pentafluorofenol. Se o grupo funcional deve ser unido à biomolécula na forma de um isotiocianato, utiliza-se então, de um modo preferido, em primeiro lugar, uma amina terminal, a qual, quando necessário, pode estar provida de um grupo de protecção adequado. Grupos de protecção adequados são conhecidos da quimica de péptidos. Após dissociação do grupo de protecção, o isotiocianto pode ser produzido por transformação da amina terminal primária com tiofosgénio. A este podem ser adicionados grupos nucleofilicos da biomolécula. A síntese dos conjugados realiza-se, em regra, de tal modo, que seja produzido, em primeiro lugar, um ligando derivatizado e funcionalizado ou um complexo quelato, o qual é depois unido à biomolécula. É também possível, contudo, que, no caso da utilização de biomoléculas preparadas sinteticamente, o ligando ou complexo quelato, de acordo com a invenção, seja incorporado nesta durante a síntese da biomolécula. Isto pode realizar-se, por exemplo, durante a síntese sequencial de oligopéptidos no robot de síntese. Caso seja necessário, os grupos de protecção habituais na síntese da biomolécula correspondente podem ser 15 introduzidos, para este efeito, no composto de acordo com a invenção. Estes são depois novamente dissociados no decurso dos algoritmos de sintese habituais no sintetizador.
Os compostos de acordo com a invenção contêm pelo menos dois centros quirais (posição 4 e 8) . 0 R também pode conter um ou vários centros quirais adicionais, em que nas descrições e nas reivindicações não se diferencia entre os diferentes enantiómeros, todavia, os compostos mencionados abrangem sempre ambos os enantiómeros e, na presença de vários centros de estereoisomeria, também todos os diastereómeros possíveis, bem como as suas misturas.
Por "biomolécula" entende-se, no caso presente, toda a molécula que ocorre naturalmente, por exemplo no corpo, ou foi preparada sinteticamente com estrutura análoga. Para além disso, entre estas, entendem-se as moléculas que podem interagir com uma molécula biológica ocorrente, por exemplo, no corpo ou uma estrutura ali ocorrente, de modo que, por exemplo, os conjugados se concentram em determinados locais desejados do corpo. Por "corpo" entende-se, no presente caso, qualquer corpo vegetal ou animal, em que são preferidos corpos animais e em particular, humanos.
As biomoléculas são, em particular, as moléculas ocorrentes em seres vivos que, como produtos de uma selecção evolutiva por interacção ordenada e complexa, cumprem funções especificas para o organismo e constituem a base das suas funções vitais (metabolismo e alterações morfológicas, reprodução, balanço energético). Nas biomoléculas, as moléculas maiores (proteínas, ácidos nucleicos, polissacáridos, lípidos, etc.) são geralmente constituídas por unidades simples (aminoácidos, bases 16 nucleotídicas, monossacáridos, ácidos gordos etc.). As macromoléculas correspondentes são também designadas por biopolimeros.
De um modo vantajoso, a biomolécula também pode apresentar, por exemplo, um esqueleto polipeptídico, a partir de aminoácidos com cadeias laterais, que podem participar numa reacção com o grupo reactivo dos compostos de acordo com a invenção. Cadeias laterais deste tipo incluem, por exemplo, os grupos carboxilo de residuos de ácido asparaginico e ácido glutaminico, os grupos amino de residuos de lisina, os grupos aromáticos de residuos de tirosina ou histidina e os grupos sulfidrilo de residuos de cisteina.
Uma resenha sobre biomoléculas com numerosos exemplos encontra-se na publicação "Chemie der Biomolekiile" da TU-Graz (H. Berthold et al., Institut fíir Organische Chemie, TU-Graz, 2001), que também pode ser consultada através da internet em www.orgc.tu-graz.ac.at. O conteúdo deste documento é integrado por referência na presente descrição.
Para a formação dos conjugados de acordo com a invenção são particularmente adequadas as seguintes biomoléculas: biopolimeros, proteínas, tal como proteínas que têm uma função biológica, HSA, BSA, etc., proteínas e péptidos que se concentram em determinados locais no organismo (p. ex. em receptores, membranas celulares, canais etc.), péptidos dissociáveis por proteases, péptidos com locais de quebra predeterminados sintéticos (p. ex., ésteres lábeis, amidas etc.), péptidos que são dissociados por metaloproteases, péptidos com ligantes fotodissociáveis, péptidos com grupos dissociáveis com agentes oxidantes (oxidases), péptidos com 17 aminoácidos naturais e sintéticos, glicoproteinas (glicopéptidos), proteínas de sinal, proteínas antivirais e de apoptose, biopolímeros modificados sinteticamente, tal como biopolímeros derivatizados com ligantes, metaloproteases modificadas e oxidase derivatizada etc., hidratos de carbono (mono até polissacáridos), tal como açúcares derivatizados, açúcares dissociáveis no organismo, ciclodextrinas e seus derivados, aminoaçúcar, quitosana, polissulfatos e derivados do ácido acetilneuramínico, anticorpos, tal como anticorpos monoclonais, fragmentos de anticorpos, anticorpos policlonais, minibodies, Single Chains (também os que estão unidas por ligantes a vários fragmentos), glóbulos vermelhos e outros componentes sanguíneos, marcadores cancerígenos (p. ex. CAA) e substâncias de adesão celular (p. ex. derivados de Lewis X e Anti-Lewis X) , fragmentos de ADN e ARN, tal como ADN e RNA derivatizados (p. ex., os que foram encontrados através do processo de SELEX), ARN e ADN sintético (também com bases sintéticas), PNA (Hoechst) e antisentido, β-aminoácidos (Seebach), aminas vectores para a transferência para a célula, aminas biogénicas, farmacêuticos, preparados oncológicos, polímeros sintéticos, que estão direccionados para um alvo biológico (p. ex. receptor), esteróides (naturais e modificados) , prostaglandinas, taxol e seus derivados, endotelinas, alcaloides, ácido fólico e seus derivados, lípidos bioactivos, gorduras, ésteres de ácidos gordos, mono, di e triglicéridos modificados sinteticamente, lipossomas, que estão derivatizados à superfície, micélios de ácidos gordos naturais ou de compostos de perfluoroalquilo, porfirinas, texafirinas, porfirinas expandidas, citocromos, inibidores, neuramidases, neuropéptidos, imunomoduladores, tal como FK 506, CAPE e gliotoxina, endoglicosidases, substratos que são activados por enzimas tal como calmodolina quinase, caseína quinase II, 18 glutatião-S-transferase, heparinase, metaloproteases de matriz, β-insulina-receptor quinase, UDP-galactose 4-epimerase, fucosidases, proteínas G, galactosidases, glicosidases, glicosil transferases e xilosidase, antibióticos, vitamina e análogos de vitaminas, hormonas, agentes intercalantes de ADN, nucleósidos, nucleótidos, lectinas, vitamina B12, Lewis-X e substâncias relacionadas, psoraleno, antibióticos de dientrieno, carbaciclinas, VEGF (vascular endothelial growth factor) , somatostatina e seus derivados, derivados de biotina, anti-hormonas, proteínas específicas de tumores e agentes sintéticos, polímeros que se concentram em regiões ácidas ou básicas do corpo (distribuição controlada pelo pH) , mioglobinas, apomioglobinas etc., péptidos neurotransmissores, factores de necroses de tumores, péptidos que se concentram em tecido inflamado, reagentes de pool sanguínea, proteínas transportadoras de aniões e catiões, poliésteres (p. ex. do ácido láctico), poliamidas e polifosfatos. A maioria das biomoléculas mencionadas anteriormente pode ser obtidas comercialmente, por exemplo, na Merck, Alderich, Sigma, Calibochem ou Bachem.
Além disso, podem ser empregues como biomoléculas todos os "grupos de ligação a proteínas de plasma" ou "grupo de ligação alvo" reveladas no documento WO 96/23526 e no documento WO 01/08712. O conteúdo destas duas publicações é por conseguinte integrado por referência na presente descrição. O número de compostos da fórmula VII a ou VII b, de acordo com a invenção, por cada biomolécula é em princípio qualquer, preferida é, contudo, uma relação molecular de 0,3:1 até 11:1, em particular de 0,5:1 até 7:1. 19
Os compostos da fórmula VII a e b adequam-se ainda para a conjugação a todas aquelas moléculas, as quais são transformadas, no estado da técnica, com corantes fluorescentes, para, por exemplo, determinar a sua localização através de microscopia de epifluorescência no interior da célula. Os compostos também podem ser conjugados com, em principio, quaisquer medicamentos para depois, após administração do medicamento, se seguir o transporte no interior do organismo pela técnica de RMN ou cintilografia. É ainda possivel que os conjugados a partir dos compostos da fórmula VII a e b e das biomoléculas contenham outras moléculas adicionais, que tenham sido conjugadas às biomoléculas. Com o termo "biomolécula" estão portanto abrangidas, no entendimento da invenção, todas as moléculas que ocorrem nos sistemas biológicos e todas as moléculas que são biocompatíveis (definição de biomoléculas, ver também acima). A relaxividade dos complexos paramagnéticos de acordo com a invenção é tão alta, que estes se adequam particularmente bem para o diagnóstico por RMN.
Os compostos de acordo com a invenção ligam-se a proteínas. Esta propriedade permite-lhes permanecer mais tempo na corrente sanguínea, ligados a proteínas do plasma, e possibilitar assim uma visualização do espaço vascular. Para além disso, torna-se também possível uma visualização de locais de permeabilidade aumentada, como esta pode ser encontrada, por exemplo, em tumores. Esta permeabilidade vascular aumentada está, além disso, na base da terapia tumoral com complexos metálicos radioactivos. 0 fármaco deixa o vaso no interior do tumor, mantém-se no tecido e expõe-o à sua radiação terapêutica eficaz. 20 A ligação a proteínas do plasma possibilita também um diagnóstico de visualização para a localização de enfartes e necroses em consequência da concentração das substâncias, de acordo com a invenção, no enfarte e na necrose. A detecção, localização e monitorização de necroses ou enfartes é uma área importante da medicina. Assim, o enfarte do miocárdio não resulta imediatamente num tecido disfuncional irreparável, mas inicia um processo dinâmico que se estende ao longo de um período de tempo mais longo (semanas até meses) . A doença decorre em aproximadamente três fases que não estão distintamente separadas entre si, pelo contrário, sobrepõem-se. A primeira fase, o desenvolvimento do enfarte do miocárdio, abrange as 24 horas após o enfarte, nas quais a destruição progride do subendocárdio para o miocárdio como uma onda de choque (fenómeno da frente de onda). A segunda fase, o enfarte já existente, abrange a estabilização da região, na qual se realiza a formação de fibra (fibrose) como processo de cicatrização. A terceira fase, o enfarte cicatrizado, tem início após todo o tecido destruído estar substituído por tecido fibroso de cicatriz. Durante este período ocorre uma extensa reestruturação.
Para a avaliação de um enfarte do miocárdio é de importância decisiva saber quão grande é a fracção do tecido perdido definitivamente no enfarte e em que local ocorreu a perda, pois o tipo de terapia depende deste conhecimento.
Os enfartes ocorrem não só no miocárdio, mas também em outros tecidos, tal como no cérebro ou no rim. 21
Enquanto que o enfarte é curável em certa extensão, no caso de uma necrose, a morto do tecido limitada localmente, apenas podem ser evitadas ou pelo menos atenuadas as sequelas para o restante organismo. As necroses podem formar-se de múltiplas maneiras: por ferimentos, quimicos, défice de oxigénio ou por radiação. Tal como no caso do enfarte, o conhecimento da extensão e tipo de uma necrose é importante para o procedimento médico subsequente. A preparação dos compostos das fórmulas gerais Vila e b de acordo com a invenção realiza-se dissociando, de modo em si conhecido, os grupos protectores Z' , nos compostos da fórmula geral VII'a e VII'b
vir a vir b onde Z' significa um grupo de protecção carboxilo e transformando os ácidos assim obtidos, de modo em si conhecido, com pelo menos um óxido metálico ou sal metálico de um elemento dos números de ordem 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ou 83 e convertendo subsequentemente, caso desejado, átomos de hidrogénio acidicos existentes, com aminoácidos inorgânicos e/ou orgânicos, em sais fisiologicamente aceitáveis. 22
Como grupos de protecção carboxilo Z' consideram-se grupos alguilo, arilo e aralguilo inferiores, por exemplo, o grupo metilo, etilo, propilo, butilo, fenilo, benzilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, bis(4-nitrofenil)metilo, bem como grupos trialguilsililo. A dissociação dos grupos de protecção Z' realiza-se de modo em si conhecido, por exemplo, por hidrólise, saponificação alcalina dos ésteres, de um modo preferido com álcali em solução aquoso-alcoólica a temperaturas de 0 °C até 50 °C ou, no caso de ésteres benzilicos, por hidrogenação catalítica e, no caso de ésteres t-butílicos, por hidrólise ácida, por exemplo, com ácido clorídrico ou trifluoroacético (Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition, T. W. Greene and P. G. M. Wutz, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991). A preparação dos compostos da fórmula VII a e VII b de acordo com a invenção é elucidada em seguida no exemplo do composto 1 seleccionado, no qual Z' é t-butilo.
Por saponificação alcalina e tratamento de permutação iónica subsequente, o composto 1 pode ser convertido no composto VII' a com ácidos carboxílicos livres. 23 0 composto 1 forma-se a aprtir de triamina 2 por uma reacção de alquilação com éster terc-butílico do ácido bromoacético em mistura de acetonitrilo/água com carbonato de potássio como base.
0 composto 2 é acessível por redução da amida 3 com complexo de borano - tetra-hidrofurano. Seguem-se neste caso as condições como estão descritas,
por exemplo, em J. Amer. Chem. Soc., (1990), 9608. A amida 3 é preparada a partir da diamina 4 duplamente protegida com Boc, por transformação com ácido trifluoroacético e diclorometano.
24 A formação da amida 4 realiza-se, neste caso, segundo os métodos bem conhecidos do especialista, por exemplo a activação ácida por - Cloreto de oxalilo: J. Org. Chem., 29: 843 (1964) - Cloreto de tionilo: Helv., 42: 1653 (1959) - Carbodiimida: Helv. 46: 1550 (1963) - Carbodiimida/hidroxisuccinimida: J. Am. Chem. Soc. 86: 1839 (1964) bem como J. Org. Chem. 53: 3583 (1988); Synthesis 453 (1972) Método do anidrido: 2-etoxi-l-etoxicarbonil-l,2-di- hidroquinolina: J. Am. Chem. Soc. 90: 1651 (1986); Int. J. Pept.
Prot. Res., 26: 493 (1985); Am. Soc. 73: 3547 (1951) - Método da imidazolida: Am. Soc. 91: 2691 (1969) J. Med. Chem. 1996, 392596; Tetrahedron Letters 1994, 35, 5981; Bioorg. Med.
Letters 1996,6, 55; J. Chem. Soc. Commun. 1994,201, a partir do ácido 5 obtenivel comercialmente e da amina 6 monossubstituída.
o 5 6 O composto 6 resulta da redução da azida 7 com hidrogénio e Pd/C em éster acético. 25 Ν
7 Ο composto 7 provém da reacção de substituição de mesilato 8 com azida de sódio.
8 0 mesilato 8 pode ser obtido por transformação com álcool 9 e cloreto de ácido metanossulfónico.
9 0 álcool 9 é o produto de uma transformação de (S)-2-amino- 1-propanol (10) obtenivel comercialmente butildicarbonato [(Boc)20] em tetra-hidrofurano. e di-terc-
0 grupo nitro contido no composto 1 serve, após a sua conversão no grupo amino, imediatamente como local de ligação para biomoléculas, por exemplo, através de uma formação de amida com auxilio de ésteres activados ou aminação redutiva com grupos carbonilo ou após conversão em grupos que reagem selectivamente. Estas reacções de conversão são bem conhecidas do especialista. 26
Assim, Gansow (documento EP 484984) e Meares (documento US 4622420) descrevem a preparação de halogenoacetamidas de agentes complexantes acíclicos, que podem ser utilizados para o acoplamento com grupos -SH ou grupos -NH2. O grupo isotiocianato possibilita um acoplamento selectivo com grupos amino. A sua preparação e a transformação com aminas para formar tioureias correspondentes foram descritas, por exemplo, na patente US 4680338 da Immunomedics. A transformação com hidrazidas para formar tio-semicarbazidas é ilustrada no pedido WO 95/15335 da Neorx Corp..
As maleimidas possibilitam uma transformação selectiva com grupos -SH. A sua preparação e transformação são descritas, por exemplo, nas patentes US 5273743 e EP 446071 da Hybritech ou no documento EP 345723 da Nihon-Medi Physics. A introdução dos iões metálicos de complexos desejados para a preparação de agentes de diagnóstico por RMN pode realizar-se do modo como esta foi revelada nas publicações de patente EP 71564, EP 130934 e DE-OS 34 01 052. Para este efeito, o óxido metálico ou um sal metálico (por exemplo, um cloreto, nitrato, acetato, carbonato ou sulfato) do elemento desejado é dissolvido, ou suspendido, em água e/ou num álcool inferior (tal como, metanol, etanol ou isopropanol) e transformado com a solução, ou suspensão, da quantidade equivalente do agente complexante, de acordo com a invenção. A neutralização de grupos carboxilo livres ainda eventualmente existentes realiza-se com auxilio de bases inorgânicas (p. ex., hidróxidos, carbonatos ou bicarbonatos) de, p. ex., sódio, potássio, litio, magnésio ou cálcio e/ou bases 27 orgânicas, tal como, entres outros, aminas primárias, secundárias e terciárias, tal como, p. ex., etanolamina, morfolina, glucamina, N-metilglucamina e N,N-dimetilglucamina, bem como aminoácidos básicos, tal como, p. ex., lisina, arginina e ornitina ou de amidas de aminoácidos originalmente neutros ou ácidos.
Para a preparação dos compostos complexos neutros pode-se adicionar, por exemplo, em sais complexos ácidos em solução aquosa ou suspensão, tanto da base desejada para que seja alcançado o ponto de neutralidade. A solução obtida pode ser subsequentemente concentrada em vácuo até à secura.
Frequentemente é vantajoso precipitar os sais neutros formados por adição de solventes misciveis com água, tal como, p. ex., álcoois inferiores (metanol, etanol, isopropanol e outros), cetonas inferiores (acetona e outras), éteres polares (tetra-hidrofurano, dioxano, 1,2-dimetoxietano e outros) e obter assim cristalizados fáceis de isolar e bons para purificar. Adicionar a base desejada logo durante a formação de complexo da mistura de reacção, e poupar por este meio um passo processual, provou ser particularmente vantajoso.
Caso os agentes complexantes devam ser utilizados para a preparação de agentes de radiodiagnóstico ou agentes terapêuticos, a preparação dos complexos a partir dos agentes complexantes pode realizar-se segundo os métodos descritos em "Radiotracers for Medicai Applications", Vol. I, CRC Press, Boca Raton, Florida (1983) .
Pode ser desejável preparar o complexo apenas pouco tempo antes da sua utilização, em particular, quando este deva ser empregue como radiofármaco. A invenção também abrange, por 28 conseguinte, um kit para a preparação de radiofármacos, abrangendo um composto da fórmula Vila ou Vllb, onde Z representa um radioisótopo.
Objecto da invenção são ainda agentes farmacêuticos que contêm pelo menos um composto da fórmula geral Vila ou Vllb fisiologicamente aceitável, eventualmente com os aditivos habituais na galénica. A preparação dos agentes farmacêuticos de acordo com a invenção realiza-se de modo em si conhecido, suspendendo ou dissolvendo os compostos complexos de acordo com a invenção -eventualmente sob adição dos aditivos habituais na galénica - em meio aquoso e esterilizando subsequentemente a suspensão ou solução. Aditivos adequados são, por exemplo, tampões fisiologicamente inócuos (tal como, p. ex., trometamina), aditivos de agentes complexantes ou complexos fracos (tal como, p. ex., ácido dietilenotriaminopenta-acético ou os complexos de Ca correspondentes aos complexos metálicos de acordo com a invenção) ou - caso necessário - electrólitos, tal como, p. ex., cloreto de sódio ou - caso necessário - antioxidantes, tal como, p. ex., ácido ascórbico.
Se, para a administração entérica ou outros fins, forem desejadas suspensões ou soluções dos agentes de acordo com a invenção em água ou solução salina fisiológica, estas são misturadas com uma ou várias substâncias auxiliares habituais na galénica [p. ex., metilcelulose, lactose, manitol] e/ou agente (s) tensioactivo (s) [p. ex., lecitina, Tween®, Myrj®] e/ou aromatizante (s) para a correcção de sabor [p. ex., óleos etéreos]. 29
Em princípio, também é possível preparar os agentes farmacêuticos, de acordo com a invenção, sem isolamento dos sais complexos. Em qualquer caso deve ser tomada particular precaução para que a formação de quelato seja efectuada de tal modo que os sais e soluções salinas, de acordo com invenção, estejam praticamente livres de iões metálicos não complexados de efeito tóxico.
Isto pode ser garantido, por exemplo, com auxílio de indicadores de cor, tal como laranja xileno, por titulações de controlo, durante o processo de preparação. A invenção refere-se por conseguinte também, a processos para a preparação dos compostos complexos e seus sais. Como última segurança permanece uma purificação do sal complexo isolado.
Os agentes farmacêuticos de acordo com a invenção contêm, de um modo preferido, 1 fmole 1-1,3 mole/L do sal complexo e são doseados em regra em quantidades de 0. 5 pmole/kg - 5 mmole/kg. Estão destinados para a aplicação entérica e parentérica. Os compostos complexos de acordo com a invenção são utilizados: 1. para o diagnóstico por RMN, na forma dos seus complexos com os iões paramagnéticos dos elementos com os números de ordem 21-29, 42, 44 e 58-70. Iões adequados são, por exemplo, o ião cromo(III), ferro (II), cobalto (II), níquel (II), cobre (II), praseodímio(II), neodímio (III), samário(III) e itérbio (III) . Devido ao seu forte momento magnético são particularmente preferidos para o diagnóstico por RMN o ião gadolínio (III), térbio(III), diprósio (III), hólmio(III), érbio(III), manganês (II) e ferro (III). 30 2. para o radiodiagnóstico e radioterapia, na forma dos seus complexos com os radioisótopos dos elementos com os números de ordem 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 47, 49, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82 e 83.
Os agentes de acordo com a invenção preenchem as múltiplas condições para a aptidão como agente de contraste para a tomografia por ressonância magnética nuclear. Assim, após administração oral ou parentérica, estes são excelentemente adequados para melhorar, por aumento da intensidade de sinal, a imagem obtida com auxilio do tomógrafo de ressonância magnética nuclear, quanto à sua capacidade conclusiva. Mostram ainda a elevada eficácia que é necessária para carregar o corpo com quantidades de substâncias estranhas tão pequenas quanto possível, e a boa compatibilidade que é necessária para manter o carácter não invasivo das análises. A boa hidrossolubilidade e reduzida osmolalidade dos agentes de acordo com a invenção permite a preparação de soluções altamente concentradas, manter deste modo a carga volumétrica da circulação entre limites razoáveis e compensar a diluição através do líquido corporal, isto é, os agentes de diagnóstico por RMN têm de ser 100 até 1000 vezes mais hidrossolúveis do que para a espectrometria de RMN. Os agentes de acordo com a invenção apresentam, além disso, não só uma elevada estabilidade in vitro, mas também uma estabilidade surpreendentemente elevada in vivo, de modo que uma libertação ou uma troca dos iões - em si venenosos - não ligados covalentemente nos complexos, durante o tempo no qual os novos agentes de contraste são novamente completamente excretados, ocorre apenas de forma extremamente lenta. 31
De um modo geral, os agentes de acordo com a invenção são doseados, para a aplicação como agentes de diagnóstico por RMN, em quantidades de 0,0001-5 mmole/kg, de um modo preferido 0,005-0,5 mmole/kg. Detalhes da aplicação são discutidos, p. ex., em H.-J. Weinmann et al., Am. J. of Roentgenology 142, 619 (1984) .
Dosagens baixas (abaixo de 1 mg/kg de peso corporal) de agentes de diagnóstico por RMN organoespecificos podem ser empregues, por exemplo, para a detecção de tumores e de enfarte cardíaco. Dosagens particularmente baixas dos complexos de acordo com a invenção são adequadas para a aplicação na radioterapia e radiodiagnóstico. Assim, são aplicadas tanto para fins terapêuticos, como também de diagnóstico, dosagens de 0,5 pM/kg - 5 μΜ/kg, de um modo preferido 50 pM/kg - 500 nmole/kg. Habitualmente são utilizados, relativamente ao ião metálico radioactivo, concentrações cerca de 100 - 100000 vezes mais reduzidas, do que é o caso nos agentes quelantes ou agente quelante-bioconjugados, de modo que os agentes quelantes ou agente quelante-bioconjugados estão presentes em excesso.
Os compostos complexos de acordo com a invenção ainda podem ser utilizados vantajosamente como reagentes de susceptibilidade e como reagentes de shift para a espectroscopia de RMN in vivo.
Os agentes de acordo com a invenção são também adequados como agentes de radiodiagnóstico ou radioterapêuticos devido às suas propriedades radioactivas favoráveis e à boa estabilidade dos compostos complexos contidos nestes. Detalhes da sua aplicação e dosagem são descritos, p. ex., em "Radiotracers for Medicai Applications," CRC-Press, Boca Raton, Florida 1983, bem 32 como em Eur. J. Nucl. Med. Γ7 (1990) 346-364 e Chem. Rev. 93 (1993) 1137-1156.
Adequados para a SPECT são os complexos com os isótopos i:L1In e 99mTc.
Um outro método de visualização com radioisótopos é a tomografia por emissão de positrões, que utiliza isótopos emissores de positrões, tal como, p. ex., 43Sc, 44Sc, 52Fe, 55 Co, 68Ga, 64Cu, 86Y e 94mTc (Heiss, W. D./ Phelps, Μ. E. ; Positron
Emission Tomography of Brain, Springer Verlag Berlin,
Heidelberg, New York 1983).
Os compostos de acordo com invenção são também surpreendentemente adequados para a diferenciação entre tumores malignos e benignos em regiões sem barreira sangue-cérebro.
Estes distinguem-se também por serem completamente eliminados do corpo e deste modo bem toleráveis.
Dado que as substâncias de acordo com invenção se concentram em tumores malignos (nenhuma difusão em tecido saudável, mas elevada permeabilidade pelos vasos tumorais), estes também podem auxiliar a terapia de radiação de tumores malignos. Esta diferencia-se do correspondente diagnóstico apenas pela quantidade e tipo de isótopo utilizado. Objectivo, neste caso, é a destruição de células tumorais através de radiação fortemente energética de onda curta com um alcance tão reduzido quanto possível. Para este efeito são aproveitadas interacções dos metais (tal como, p. ex., ferro e gadolínio) contidos nos complexos com radiações ionizantes (p. ex. raio-X) ou com raios de neutrões. Através deste efeito, a dose de 33 radiação aumenta significativamente no local onde se encontra o complexo metálico (p. ex. em tumores). Para obter a mesma dose de radiação no tecido maligno pode-se reduzir a carga de radiação em tecido saudável, e deste modo evitar os efeitos secundários comprometedores para o doente, quando se utiliza complexos metálicos deste tipo. Os conjugados de complexos metálicos de acordo com a invenção, também se adequam, deste modo, como substância radiossensibilizadora na terapia de radiação de tumores malignos (p. ex., aproveitamento de efeitos de Mõssbauer ou na terapia de captação de neutrões). Iões emissores em β adequados são, p. ex., 46Sc, 47Sc, 48Sc, 72,-, _ 73,-. _ 90 v 67,-, 109r,j 111,„ 14 9πτν, 153Crv, 166,. 177τ,, 186π^ Λ
Ga, Ga, Y, Cu, Pd, Ag, Pm, Sm, Ho, Lu, Re e 188Re, em que são preferidos 90Y, 177Lu, 72Ga, 153Sm e 67Cu. Iões emissores em α adequados que apresentam tempos de semi-vida curtos são, p. ex., 211At, 211Bi, 212Bi, 213Bi e 214Bi, em que é preferido o 212Bi. Um ião emissor de protões e electrões adequado é 158Gd, que pode ser obtido a partir de 157Gd por captação de neutrões
Se o agente de acordo com a invenção estiver destinado para ser aplicado na variante da terapia de radiação proposta por R. L. Mills et al. [Nature Vol. 336, (1998), pág. 787], então o ião central tem de ser derivado de um isótopo de Μοβ03οε^ tal como p.ex., 57Fe ou 151Eu.
Na aplicação in vivo dos agentes terapêuticos de acordo com a invenção, estes podem ser ministrados em conjunto com um suporte adequado tal como, p. ex., soro ou solução salina fisiológica e em conjunto com uma outra proteina tal como, p. ex., albumina de soro humano. A dosagem é neste caso dependente 34 do tipo do distúrbio celular, do ião metálico utilizado e do tipo do método de visualização.
Os agentes terapêuticos de acordo com a invenção são aplicados, de um modo preferido por via parentérica, de um modo preferido por via i. v..
Detalhes das aplicações de radioterapêuticos são discutidos p. ex., em R. W. Kozak et al. TIBTEC, Outubro 1986, 262 (ver também Bioconjugate Chem. 1_2 (2001) 7-34).
Em suma, foi possível sintetizar novos agentes complexantes, complexos metálicos e sais de complexos metálicos que tornam acessíveis possibilidades melhoradas na medicina de diagnóstico e terapêutica.
Os exemplos seguintes servem para a explicação mais detalhada do objecto da invenção:
Os exemplos 10, 12-15, 18, 19, 20, 21, 28-31 descrevem conjugados com anticorpos. Conjugados com outras biomoléculas podem ser preparados segundo as seguintes instruções gerais de trabalho:
Neste caso "AAV" representa instrução geral de trabalho, "RP-18" designa uma fase de cromatografia estacionária de fase reversa. O número de complexos por cada biomolécula foi determinado por meio de cintilografia ou ICP (inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy) . 35
Instrução geral de trabalho (AAV) I: Conjugados de albumina - ami da
Dissolvem-se 3 mmole do ácido em 15 mL de DMF, misturam-se sob arrefecimento com gelo com 380 mg (3,3 mmole) de N-hidroxisuccinimida e 681 mg de diciclo-hexilcarbodiimida e activa-se, previamente, 1 hora em gelo. Junta-se, gota a gota, a mistura de éster activado ao longo de 30 minutos numa solução de 16,75 g (0,25 mmole) de albumina de soro bovino (BSA) em 150 mL de tampão fosfato (pH 7,4) e agita-se 2 horas à temperatura ambiente. Filtra-se a solução da mistura, ultrafiltra-se o filtrado sobre uma AMICON® YM30 (cut off 30.000 Da), cromatografa-se o retentato sobre uma coluna Sephadex® G50 e liofilizam-se as fracções de produto.
Instrução geral de trabalho (AAV) II: Conjugados de albumina-maleimida
Adicionam-se 0,0438 mmole da maleimida em 1 mL de DMF a 0,84 (0,0125 mmole) de albumina de soro bovino (BSA), dissolvida em 15 mL de tampão fosfato (pH 7,4), e agita-se uma hora à temperatura ambiente. Filtra-se a solução da mistura, ultrafiltra-se o filtrado sobre uma AMICON® YM30 (cut off 30.000 Da), cromatografa-se o retentato sobre uma coluna Sephadex® G50 e liofilizam-se as fracções de produto. 36
Instrução geral de trabalho (AAV) III : Preparação de conjugados de amida
Dissolvem-se 3 mmole do ácido em 15 mL de DMF, misturam-se, sob arrefecimento com gelo, com 380 mg (3,3 mmole) de N-hidroxisuccinimida e 681 mg de diciclo-hexilcarbodiimida e activa-se, previamente, 1 hora em gelo. Junta-se, gota a gota, a mistura de éster activo numa solução de 2,5 mmole de componente amino em 15-150 mL de DMF e agita-se durante a noite à temperatura ambiente. Filtra-se a solução da mistura e cromatografa-se em sílica gel.
Instrução geral de trabalho (AAV) IV: Preparação de conjugados de malelmldo-SH
Juntam-se, gota a gota, 3 mmole da maleimida em 15 mL de DMF a 2,5 mmole do componente SH em 15-150 mL de DMF e agita-se uma hora à temperatura ambiente. Filtra-se a solução da mistura, ultrafiltra-se o filtrado sobre uma AMICON® YM30 (cut off 30.000 Da), cromatografa-se o retentato sobre uma coluna Sephadex® G50 e liofilizam-se as fracções de produto.
Instrução geral de trabalho (AAV) V: Preparação de
conjugados de halogenoacetamida-SH
Juntam-se, gota a gota, 3 mmole da halogenoacetamida em 15 mL de DMF a 2,5 mmole de componente SH em 15-150 mL de DMF e agita-se oito horas à temperatura ambiente. Filtra-se a solução da mistura, ultrafiltra-se o filtrado sobre uma AMICON® YM30 (cut 37 off 30.000 Da), cromatografa-se o retentato sobre uma coluna Sephadex® G50 e liofilizam-se as fracções de produto.
Exemplo 1 a) Éster terc-butilico do ácido (S)-(2-hidroxi-l-metil-etil)-carbâmico
Dissolveram-se 10,50 g (140 mmole) de (S) -( + )-2-amino-l-propanol em 110 mL de THF e arrefeceu-se a 0 °C. A esta solução agitada, adicionou-se, gota a gota, uma solução de 30,2 (139 mmole) de dicarbonato de di-terc-butilo em 45 mL de THF. Agitou-se a mistura reaccional durante 90 minutos a 25 °C e concentrou-se no evaporador rotativo. Recolheu-se o resíduo em 300 mL de éter dietílico e lavou-se subsequentemente com 90 mL de solução HC1 0,01 M. Secou-se a fase orgânica por meio de sulfato de sódio e concentrou-se no evaporador rotativo e na bomba de óleo. Empregou-se o produto bruto (20,4 g) , sem purificação adicional, para a reacção seguinte. b) Éster 2-terc-butoxicarbonilamino-propilico do ácido (S)-metanossulfónico
Dissolveram-se 20,3 g (116 mmole) de la em 125 mL de diclorometano e misturaram-se com 17,7 g (175 mmole) de trietilamina. A 0 °C, adicionou-se, gota a gota, uma solução de 14,7 g (128 mmole) de cloreto do ácido metanossulfónico em 30 mL de diclorometano. Agitou-se a solução reaccional a 0 °C, durante 2 h e misturou-se subsequentemente com 300 mL de água. Separou-se a fase orgânica. Extraiu-se a fase aquosa duas vezes 38 com 150 mL de diclorometano. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas uma vez com 150 mL de solução de HC1 0,1 M, duas vezes com, respectivamente, 150 mL de solução de hidrogenocarbonato de sódio a 5% e para finalizar com 50 mL de solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio. Concentrou-se a solução e cristalizou-se no frigorifico. Lavaram-se os cristais com hexano frio.
Resultaram 25,4 g (100 mmole) do produto desejado. MS-FAB: 254(M+ + 1, 13) c) Éster terc-butilico do ácido (S) -(2-azido-l-metil-etil)-carbâmico
Misturou-se uma solução de 20,3 g (100 mmole) de lb em 155 mL de DMSO com 7,8 g (120 mmole) de azida sódica e agitou-se durante 24 h a 45 °C. Acrescentaram-se 250 mL de água gelada. Extraiu-se a mistura, várias vezes, com 200 mL de diclorometano. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas, duas vezes, com 50 mL de solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Concentrou-se a fase orgânica. Resultaram 11,4 g de produto bruto. Empregou-se o produto bruto, sem purificação adicional, para a reacção seguinte. MS-FAB: 201(M+ + 1, 23) d) Éster terc-butilico do ácido (S)-(2-amino-l-metil-etil)-carbâmico
Misturou-se uma solução agitada de 11,4 g (57 mmole) de lc em 165 mL de éster etilico de ácido acético com 1,8 g de Pd/C (10%) e expôs-se durante 15 h a uma atmosfera de hidrogénio de 39 4 bar. Separou-se o catalisador por filtração (o denominado filtro de sucção G4) . Concentrou-se o filtrado no evaporador rotativo e purificou-se por cromatografia em coluna (SiCb-diclorometano -► diclorometano: metanol 1:1). 0 produto desejado resultou num rendimento de 73% (7,25 g; 42 mmole). MS-FAB: 175 (M+ +1, 29) e) Éster terc-butilico do ácido (S,S)-{2-[2-terc-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propionilamino]-1-metil-etil}-carbâmico
Misturou-se uma solução agitada de 7,2 g (41 mmole) de ld, 245 mL de água e 245 mL de diclorometano com 12,9 g (42 mmole) de ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propiónico obtenível comercialmente (Bachem) e 6,4 g (42 mmole) de l-hidroxibenzotriazol-tbO (HOBT) . Arrefeceu-se a solução até aos 0 °C e misturou-se com 8,8 g (46 mmole) de 1-(dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCI). Agitou-se a solução reaccional sete horas a 0 °C, 12 horas à temperatura ambiente e 24 horas a 60 °C. Arrefeceu-se a solução até à temperatura ambiente. Separou-se a fase aquosa e extraiu-se, várias vezes, com diclorometano. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com solução de hidrogenocarbonato de sódio a 5% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se no evaporador rotativo. Misturou-se o residuo com hexano, triturou-se, filtrou-se por sucção e lavou-se novamente com hexano frio. Secou-se a substância sólida em vácuo a 30 °C. O produto le desejado resultou com um rendimento de 77% (14,9 g ; 32 mmole). MS-FAB: 467(M+ +1, 38) 40 f) (S,S)-N-(2-Amino-propil)-3-(4-nitro-fenil)-propano-1,2- diamina
Suspenderam-se 14,9 g (32 mmole) de le em 180 mL de diclorometano. Acrescentaram-se subsequentemente, gota a gota, 54,2 g (475 mmole) de ácido trifluoroacético. Agitou-se a solução durante uma hora e concentrou-se no evaporador rotativo. Acrescentou-se diclorometano e concentrou-se novamente. Acrescentou-se éter dietilico. Separou-se a substância sólida precipitada e lavou-se com éter dietilico frio. Secou-se a substância sólida em vácuo a 35 °C. A uma solução agitada desta substância sólida (17,7 g) em 225 mL de THF abs., adicionaram-se, gota a gota, 225 mL de (1 M) complexo borano - tetra-hidrofurano. Aqueceu-se a solução reaccional durante 6 h sob refluxo e agitou-se subsequentemente durante a noite à temperatura ambiente. Acrescentaram-se cuidadosamente, gota a gota, 60 mL de metanol e agitou-se durante mais 2 h. Concentrou-se a solução no evaporador rotativo e misturou-se com 150 mL de etanol. Introduziu-se gás de HC1, de modo que precipitou uma substância sólida. Concentrou-se e misturou-se com éter dietilico seco. Separou-se a substância sólida, lavou-se com éter dietilico frio e secou-se em vácuo a 40 °C. Resultaram 9,61 g (-26,6 mmole) do produto lf desejado na forma de tricloridrato. MS-FAB: 253 (M+ +1, 28) 41 g) Éster terc-butilico do ácido (S,S)-{[2-{[2-(bis-terc-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]-terc-butoxicarbonilmetil-amino}-l-(4-nitro-benzil)-etil]-terc-butoxicarbonilmetil-amino-acético A uma solução agitada de 9,6 g (27 mmole) de lf em 290 mL de acetonitrilo e 60 mL de água acrescentaram-se 43,8 g (317 mmole) de carbonato de potássio e 39 g (200 mmole) de éster terc-butílico do ácido bromoacético. Aqueceu-se a solução durante ~7h até aos 70 °C. Acrescentaram-se outros 13,1 g (94 mmole) de carbonato de potássio e 8,8 mL (60 mmole) de éster terc-butílico do ácido bromoacético. Agitou-se a solução durante ~7h a 70 °C. Acrescentaram-se 4,3 g (26 mmole) de iodeto de potássio. Agitou-se a solução durante ~7h a 70 °C. Concentrou-se a solução reaccional no evaporador rotativo, misturou-se com água e extraiu-se, três vezes, com éster acético. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secaram-se com sulfato de sódio e concentraram-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (SiCb-diclorometano -► diclorometano : metanol 98 : 2) . O produto lg desejado resultou com um rendimento de 54% (23,2 g; 42 mmole). MS-FAB: 824(M+ +1, 58) h) Ácido (S,S)){[2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-(4-nitro-benzil)-etil]-carboximetil-amino)-acético A uma solução agitada de 14,8 g (130 mmole) de ácido trifluoroacético, 25,5 g (300 mmole) de diclorometano e 2,9 g (25 mmole) de trietilsiliano acrescentaram-se 1,65 g (2 mmole) de 1 g. Agitou-se a mistura reaccional durante lhe 42 concentrou-se no evaporador rotativo e na bomba de óleo.
Misturou-se o residuo com éter dietilico. Separou-se a substância sólida por filtração e lavou-se com éter dietilico. 0 produto 1 h desejado resultou com um rendimento de 99% (1,0 g; 1,99 mmole). MS-FAB: 543(M+ +1, 59)
Exemplo 2 Éster fcerc-butílico do ácido (S,S))-{[2-(4-amino-fenil)-1-({[2-(bis-terc-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]-terc-butoxicarbonilmetil-amino}-metil)-etil]-terc-butoxicarbonilmetil-amino} -acético A uma solução de 0,5 g (0,6 mmole) de lg em 10 mL de isso-propanol acrescentaram-se 0,2 g de Pd/C (10%). A atmosfera sobre a solução de reacção foi provida de hidrogénio. Agitou-se a solução durante 5 h, filtrou-se e concentrou-se. O produto 2 desejado resultou em 81% (397 mg; 0,5 mmole). MS-FAB: 795(M+ +1, 63)
Exemplo 3 Ácido (S,S)-[(1-(4-amino-benzil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino)-etil)-carboximetil-amino]-acético Método A: A uma solução de 0,5 g (0,9 mmole) de lh em 10 mL de isopropanol acrescentaram-se 0,2 g de Pd/C (10%). A atmosfera sobre a solução reaccional foi provida de hidrogénio. Agitou-se 43 a solução durante 5 h, filtrou-se e concentrou-se. 0 produto 3 desejado resultou em 87% (410 mg; 0,78 mmole). MS-FAB: 513 (M+ +1, 43) Método B: A uma solução agitada de 3,64 g (32 mmole) de ácido trifluoroacético, 6,38 g (75 mmole) de diclorometano e 0,7 g (6 mmole) de trietilsiliano acrescentaram-se 397 mg (0,5 mmole) de 2. Agitou-se a mistura reaccional durante lhe concentrou-se no evaporador rotativo e na bomba de óleo. Misturou-se o resíduo com éter dietílico. Separou-se a substância sólida por filtração e lavou-se com éter dietílico. O produto desejado 3 resultou com um rendimento de 99% (253 mg; 0,5 mmole) . MS-FAB: 513 (M+ +1, 48)
Exemplo 4 Ácido (S,S)-[(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-l-{4-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-benzil}-etil)-carboximetil-amino]-acético A uma solução agitada de 1,02 g (2 mmole) de 3 e 774 mg (6 mmole) de diisopropiletilamina em 20 mL de DMF acrescentram-se, a 0 °C, 800 mg (3 mmole) de éster 2,5-dioxo-pirrolidin-l-ílico do ácido 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propiónico (Aldrich). Agitou-se a solução reaccional durante 4 horas à temperatura ambiente. Deitou-se a solução, gota a gota, sobre 120 mL de éter dietílico fortemente agitado. Agitou-se a suspensão durante 30 minutos e filtrou-se. Secou-se o resíduo na bomba de óleo. Purificou-se uma parte do resíduo por RP-HPLC semipreparativa. MS-FAB: 664(M+ +1, 24) 44
Exemplo 5 Ácido (S,S)-[(1-(4-isotiocianato-benzil)-2-{[2-(bis- carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetil-amino]-acético A um sistema de duas fases fortemente agitado a partir de 0,51 g (1 mmole) de 3, 3 mL de água, 605 mg (6 mmole) de trietilamina e 3 mL de clorofórmio acrescentaram-se, gota a gota, a 0 °C, 114 mg (1 mmole) de tiofosgénio em pouco clorofórmio. Agitou-se a solução durante 3 horas. Separou-se a fase orgânica. Extraiu-se a fase orgânica, duas vezes, com água. As fases aquosas reunidas foram lavadas com diclorometano, diluidas com água e liofilizadas. Testou-se a substâncias quanto à pureza por meio de HPLC: HyPurity C18 (5 ym, 150 x 3,0 mm) com gradiente de acetonitrilo : água : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 -► 99,9 : 0 : 0,1). O produto 5 desejado resultou com um rendimento de 91% (505 mg, 910 mmole). MS-FAB: 555(M+ +1, 39)
Exemplo 6 Ácido (S,S)-({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-1-[4-[2-bromo-acetilamino)-benzil]-etil}-carboximetil-amino)-acético A uma solução de 0,51 g (1 mmole) de 3 e 606 mg (6 mmole) de trietilamina em 10 mL de DMF acrescentaram-se, a -20 °C, 202 mg (1,1 mmole) de brometo de ácido bromoacético. Agitou-se a solução reaccional durante uma hora à temperatura ambiente. Verteu-se a solução sobre éter dietilico fortemente agitado. 45
Separou-se o precipitado por filtração, recolheu-se em água e liofilizou-se imediatamente. Testou-se a substância quanto à pureza por meio de HPLC: HyPurity C18 (5 ym, 150 x 3,0 mm) com gradiente de acetonitrilo : água : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 -► 99,9 : 0 : 0,1). O produto 6 desejado resultou com um rendimento de 82% (520 mg, 820 ymole). MS-FAB: 634(M+ +1, 46)
Exemplo 7 Ácido (S,S)-({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-1-[4-(2-iodo-acetilamino)-benzil]-etil}-carboximetil-amino)-acético A uma solução de 0,51 g (1 mmole) de 3 e 606 mg (6 mmole) de trietilamina em 10 mL de DMF acrescentaram-se, a -20 °C, 274 mg (1,1 mmole) de brometo de ácido iodoacético. Agitou-se a solução reaccional durante uma hora à temperatura ambiente.
Verteu-se a solução sobre éter dietilico fortemente agitado. Separou-se o precipitado por filtração, recolheu-se em água e liofilizou-se imediatamente. Testou-se a substância quanto à pureza por meio de HPLC: HyPurity C18 (5 ym, 150 x 3,0 mm) com gradiente de acetonitrilo : água : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 ->· 99,9 : 0 : 0,1). O produto 7 desejado resultou com um rendimento de 88% (600 mg, 880 ymole). MS-FAB: 681 (M+ +1, 32) 46
Exemplo 8 Ácido (S,S)-({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-1-[4-(2-iodo-acetilamino)-benzil]-etil}-carboximetil-amino)-acético A uma solução de 0,51 g (1 mmole) de 3 e 606 mg (6 mmole) de trietilamina em 10 mL de DMF acrescentaram-se, a -20 °C, 125 mg (1,1 mmole) de cloreto de ácido cloroacético. Agitou-se a solução reaccional durante uma hora à temperatura ambiente. Verteu-se a solução sobre éter dietilico fortemente agitado. Separou-se o precipitado por filtração, recolheu-se em água e liofilizou-se imediatamente. Testou-se a substância quanto à pureza por meio de HPLC: HyPurity C18 (5 ym, 150 x 3,0 mm) com gradiente de acetonitrilo : água : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 ->· 99,9 : 0 : 0,1). O produto 8 desejado resultou com um rendimento de 82% (520 mg, 820 ymol). MS-FAB: 590(M+ +1, 31)
Exemplo 9 Ácido (S,S)-({2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-1-[4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-benzil]-etil)-carboximetil-amino)-acético
Com apoio em Tetrahedron Lett.; 38/ 46; 1997/ 8089-8092: Aqueceu-se uma mistura a partir cerca de 1 g de sílica gel seco, 100 mg (1,0 mmole) de anidrido de ácido maleico, 512 mg (1,0 mmole) de 3 e 35,6 mg (0,1 mmole) de cloreto de tântalo-(V) no micro-ondas (300W) durante 5 min.. Eluiu-se o resíduo através de um filtro por sucção com metanol. Concentrou-se o filtrado. 47
Recolheu-se o resíduo em água. Liofilizou-se a solução. Purificou-se uma parte do resíduo por RP-HPLC semipreparativa. Mistura de acetonitrilo-água (20:80). Testou-se a substância quanto à pureza por meio de HPLC: HyPurity C18 (5 ym, 150 x 3,0 mm) com gradiente de acetonitrilo : água : ácido trifluoroacético (3 : 96,9 : 0,1 ^ 99,9 : 0 : 0,1). O produto 9 desejado resultou em 94 mg (0,16 mmole) com uma pureza de 96%. MS-FAB: 593(M+ +1, 42)
Exemplo 10
Conjugado de anticorpo do exemplo 4, nomeadamente ácido (S,S)-[(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-1-[4-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-benzil}-etil)-carboximetil-amino]-acético
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. _40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 159 yg (240 nmol) de produto do exemplo 4 dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS) . 48
Exemplo 11 Ácido (S,S)-{[2- {[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-1-(4-{3-[2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-etil]-tioureido}-benzil)-etil]-carboximetil-amino}-acético A uma solução agitada de 555 mg (1 mmole) de 5 em 5 mL de DMF acrescentou-se, gota a gota, uma solução de 154 mg (1,1 mmole) de 1-(2-amino-etil)-pirrol-2,5-diona em 2 mL de dioxano. Agitou-se a solução reaccional durante a noite e adicionou-se, gota a gota, a 80 mL de éter dietilico fortemente agitado. Separou-se o precipitado por filtração e recolheu-se em água. Liofilizou-se a solução. Purificou-se uma parte do resíduo por RP-HPLC semipreparativa. Mistura de acetonitrilo-água (20:80). Testou-se a substância quanto à pureza por meio de HPLC: HyPurity C18 (5 ym, 150 x 3,0 mm) com gradiente de acetonitrilo : água : ácido trif luoroacético (3 : 96,9 : 0,1 -► 99,9 : 0 : 0,1). O produto 11 desejado resultou em 0,104 g (0,15 mmole) com elevada pureza. MS-FAB: 696 (M+ +1, 33)
Exemplo 12
Complexo de índio do conjugado de anticorpo do exemplo 4, nomeadamente ácido (S,S)-[(2-{[2-(bis-carboximetil-amino)- propil]-carboximetil-amino}-l-{4[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-benzil}-etil)-carboximetil-amino]-acético
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. 49
McDevitt, J. Nuc. Med. _40_, 1999, 1722/ obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 159 pg (240 nmol) de produto do exemplo 11, dissolvido em 50 pL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0). Para finalizar colocou-se, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6). Misturou-se a solução com 80 pL (0,05 M de HC1) [111In] InCl3 (27,88 MBq) e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 13
Complexo de itrio do conjugado de anticorpo do ácido (1'R,2R,5S)-5-({[2-({l-carboxi-5[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino)-etil]-carboximetil-amino}-metil)-l-carboximetil-pirrolidino-2-carboxilico
Diluíram-se 200 pg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente 50 acessíveis, estes podem ser gerados utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 159 yg (240 nmol) de produto do exemplo 11, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima ) , e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou- se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0) . Para finalizar colocou-se, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6) . Misturou-se a solução com 50 MBq [90Y]YCl3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 14
Complexo de escândlo do conjugado de anticorpo do ácido (1'R,2R,5S)-5-({[2-({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino)-etil]-carboximetil-amino}-metil)-l-carboximetil-pirrolidino-2-carboxilico
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 159 yg 51 (240 nmol) de produto do exemplo 11, dissolvido em 50 pL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no
Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0) . Para finalizar colocou-se, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6). Misturou-se a solução com 50 MBq [47Sc]SCCI3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 15
Complexo de lutécio do conjugado de anticorpo do ácido (l'R,2R,5S)-5-({[2-({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentil}-carboximetil-amino)-etil]-carboximetil-amino}-metil)-l-carboximetil-pirrolidino-2-carboxilico
Diluiram-se 200 pg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 159 pg (240 nmol) de produto do exemplo 11, dissolvido em 50 pL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a 52 solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0). Para finalizar colocou-se, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6). Misturou-se a solução com 50 MBq [77Lu]LuCl3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 16 a) Éster benzilico do ácido (S)-6-benziloxicarbonilamino-2-(2-terc-butoxicarbonilamino-acetilamino)-hexanóico A uma solução agitada de 2,15 g (12,28 mmole) de Boc-Gly-OH e 4,08 mL (29,5 mmole) de trietilamina em 50 mL de diclorometano acrescentaram-se 1,55 g (13,5 mmole) de N-hidroxisuccinimida. Após 20 min., acrescentaram-se 5 g (12,3 mmole) de cloridrato de H-Lys-(Z)-OBzl, o qual havia sido dissolvido num pouco de diclorometano, e 2,78 g (13,5 mmole) de diciclo- hexilcarbodiimida num pouco de diclorometano. Agitou-se a solução durante três dias e verteu-se sobre 250 mL de água gelada. Separou-se a fase orgânica. Extraiu-se, várias vezes, a fase aquosa com diclorometano. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secaram-se com sulfato de sódio e concentraram-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (SÍO2 hexano : éster acético 4 : 1 -► hexano : éster acético 1 : 1) . O produto 16a desejado resultou com um rendimento de 96% (6,2 g; 11,7 mmole). MS-FAB: 528(M+ +1, 75) 53 b) Éster benzilico do ácido (S)-6-benziloxicarbonilamino-2-(2-{2-[2-(2-terc-butoxicarbonilamino-acetilamino)-acetilamino]-acetilamino}-acetilamino)-hexanóico A uma solução de 6,2 g (11,7 mmole) de 16a em 30 mL de diclorometano acrescentaram-se, gota a gota, a 0 °C, 30 mL de ácido trifluoroacético. Agitou-se a solução durante 2 h à temperatura ambiente e concentrou-se no evaporador rotativo. Adicionaram-se 50 mL de água e 50 mL de tolueno e removeram-se novamente no evaporador rotativo. Repetiu-se três vezes o último passo de trabalho. Concentrou-se para finalizar na bomba de óleo.
Acrescentou-se, a 0 °C, uma solução agitada do resíduo em 90 mL de diclorometano com 2,37 g (18,3 mmole) de diisopropiletildiamina, 3,02 g (14,7 mmole) de diciclo- hexilcarbodiimida, dissolvida em pouco diclorometano, 1,69 g (14,7 mmole) de N-hidroxisuccinimida e 3,4 g (14,7 mmole) de Boc-Gly-Gly-OH. Agitou-se a suspensão, três dias, à temperatura ambiente, e misturou-se com 150 mL de água gelada. Separou-se a fase orgânica. Extraiu-se a fase aguosa, várias vezes, com éster acético. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com solução aguosa saturada de cloreto de sódio, secaram-se com sulfato de sódio e concentraram-se. Purificou-se o resíduo por cromatograf ia em coluna (SÍO2 éster acético -► metanol : éster acético 15 : 85). O produto 16b desejado resultou com um rendimento de 53% (4,18 g; 6,5 mmole). MS-FAB: 643(M+ +1, 56) 54 Ácido c) (S)-2-{2-[2-(2-terc-butoxicarbonilamino-acetilamino)-acetilamino]-acetilamino}-6-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-hexanóico A uma solução de 4,18 g (6,5 mmole) de 16b em 4 0 mL de isopropanol acrescentou-se 1 g de Pd/C (10%). Saturou-se a atmosfera sobre a solução agitada com hidrogénio. Agitou-se a solução reaccional durante 90 min., filtrou-se e concentrou-se.
Misturou-se o resíduo, a 0 °C, com 20 mL de DMF, 1,5 g (12 mmole) de diisopropiletilamina e 2,4 mg (9 mmole) de éster 2,5-dioxo-pirrolidin-l-ílico do ácido 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propiónico (Aldrich). Agitou-se a solução reaccional durante 4 horas à temperatura ambiente. Juntou-se a solução a uma solução de HC1 (pH 4) e extraiu-se, várias vezes, com éster acético.
Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secaram-se com sulfato de sódio e concentraram-se. Purificou-se o residuo por cromatografia em coluna (SÍO2 éster acético -► metanol : éster acético 20 : 80) . O produto 16c desejado resultou com um rendimento de 67% (2,5 g; 4,4 mmole) . MS-FAB: 570(M+ +1, 31) 55
d) (IS,1'S,4S)-1-[4-{3-[({[ ({l-Carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentilcarbamoil}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoil)-metil]-tioureido)]-benzil-4-metil-DTPA A uma solução agitada de 570 mg (1 mmole) de 16c em 5 mL de diclorometano acrescentaram-se, gota a gota, a 0 °C, 5 mL de ácido trifluoroacético. Agitou-se a solução durante 2 h à temperatura ambiente e concentrou-se no evaporador rotativo. Removeu-se o resíduo por agitação com éster dietílico. Concentrou-se para finalizar na bomba de óleo.
Recolheu-se o resíduo em DMF, misturou-se com ~200 mg (~2 mmole) de trietilamina e 505 mg (0,9 mmole) de 5. Agitou-se a solução durante 3 horas a 40 °C e juntou-se, gota a gota, a éter dietílico fortemente agitado. Separou-se o precipitado por filtração e purificou-se por cromatografia em coluna RP. MS-FAB: 1016 (M+ +1, 31)
Exemplo 17
Complexo de gadolínio de ácido (S,S)-[(1-4-amino-benzil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetil-amino]-acético
Suspenderam-se 128,1 mg (0,25 mmole) de 3 em 4 mL de água destilada, aqueceu-se até aos 80 °C e dissolveu-se. Misturou-se, em porções, com 45,3 mg (0,125 mmole) de Gd203 . Aqueceu-se a suspensão até aos 80 °C e agitou-se durante uma hora. Arrefeceu-se a solução até à temperatura ambiente e ajustou-se a pH = 7 com solução de hidróxido de sódio (1 M) . Removeu-se a água através de liofilização. O produto desejado resultou em 166,6 mg (0,25 mmole, 99,8%). MS-FAB (M+ +1, 21): 668 56
Exemplo 18
Conjugado de anticorpo de (IS, l'S, 4S)-1-[4 — {3— [ ({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoil]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-benzil-4-metil-DTPA
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. _40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 243 yg (240 nmol) de produto do exemplo 16d, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 19
Complexo de itrio do conjugado de anticorpo de (1S,1'S, 4S)-1-[4-{3-[({[({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il) -propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-benzil-4-metil-DTPA
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. _40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o 57 anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessiveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 243 yg (240 nmol) de produto do exemplo 16d, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0) . Colocou-se para finalizar, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6) . Misturou-se a solução com 50 MBq [9°Y]YCi3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 20
Complexo de escândio do conjugado de anticorpo (1S,1'S, 4S)-l-[4-{3-[({[({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-benzil-4-metil-DTPA
Diluiram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. _40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 243 yg 58 (240 nmol) de produto do exemplo 16d, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0). Colocou-se para finalizar, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6). Misturou-se a solução com 50 MBq [47Sc] SCCI3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 21
Complexo de lutécio do conjugado de anticorpo de (1S,1'S, 4S)-1-[4-{3-[({[({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-1-il)-propionilamino]-pentilcarbamoí1}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoíl)-metil]-tioureido}]-benzil-4-metil-DTPA
Diluiram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. _40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 243 yg (240 nmol) de produto do exemplo 16d, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no 59
Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0). Colocou-se para finalizar, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6) . Misturou-se a solução com 50 MBq [177Lu]LuCl3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Exemplo 22 Ácido (R,R)[2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-1-(4-nitro-benzil)-etil]-carboximetil-amino}-acético A sintese do exemplo 22 efectua-se analogamente ao exemplo 1, com a diferença de não ter sido empregue (S)-2-amino-l-propanol, mas sim (R)-2-amino-l-propanol, e também não ter sido utilizado ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propiónico, mas sim ácido (R)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(4-nitro-fenil)-propiónico como componente. O produto 22 desejado resultou em elevada pureza (> 96%, RP-HPLC) MS-FAB: 513(M+ +1, 42) 60
Exemplo 23 Ácido (R,R))-[(1-(4-amino-benzil)-2-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetil-amino]-acético A síntese do exemplo 23 efectua-se analogamente ao exemplo 3, método A, com a diferença de ter sido empregue 22 como educto e não lh. 0 produto 23 desejado resultou com um rendimento de 96%. MS-FAB: 513(M+ +1, 42)
Exemplo 24 Éster terc-butílico do ácido (R,R))-{[2-(4-amino-fenil)-1-({[2-(bis-terc-butoxicarbonilmetil-amino)-propil]-terc-butoxicarbonilmetil-amino}-metil)-etil]-terc-butoxi carbonilmeti1-amino}-acético A síntese do exemplo 24 efectua-se analogamente ao exemplo 2, com a diferença de ter sido empregue 22 como educto e não lg. 0 produto 24 desejado resultou com um rendimento de 86%. MS-FAB: 794 (M+ +1, 53) 61
Exemplo 25 Ácido (R,R)-[(1-(4-isotiocianato-benzil)-2-{[2-(bis- carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-etil)-carboximetil-amino]-acético A síntese do exemplo 25 efectua-se analogamente ao exemplo 5, com a diferença de ter sido empregue 23 como educto e não 3. 0 produto 25 desejado resultou com um rendimento de 74%. MS-FAB: 555(M+ +1, 33)
Exemplo 26 Ácido (R,R)-({2—{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]- carboximetil-amino}-1-[4-(2-bromo-acetilamino)-benzil]-etil}-carboximetil-amino)-acético A síntese do exemplo 26 efectua-se analogamente ao exemplo 6, com a diferença de ter sido empregue 23 como educto e não 3. 0 produto 26 desejado resultou com um rendimento de 71%. MS-FAB: 590(M+ +1, 48)
Exemplo 27 a) Ácido N-[4-(2-(bis-carboximetil-amino)-3-{[2-(bis-carboximetil-amino)-propil]-carboximetil-amino}-propil)-fenil]-succinamínico A uma solução de 793 mg (1 mmole) de 24 e 0,28 mL (~2 mmole) de disopropiletilamina em 20 mL de THF acrescentaram-se 62 200 mg (2 mmole) de anidrido de ácido succínico. Agitou-se a solução durante 2 h à temperatura ambiente. Concentrou-se a solução a um terço do volume e diluiu-se com diclorometano e juntou-se a uma solução aquosa (pH = 4,5) . Separou-se a fase aquosa e extraiu-se, várias vezes, com diclorometano. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com solução de cloreto de sódio. Secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se no evaporador rotativo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (CH2Cl2_MeOH). O produto 27a desejado resultou com um rendimento de 85% (0,85 mmole). MS-FAB: 613(M+ +1, 58)
b) (IR,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({l-Carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2, 5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentilcarbamoil}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoil)-metil]-carbamoil}-propionil)]-benzil-4-metil-DTPA A uma solução agitada de 570 mg (1 mmole) de 16c em 5 mL de diclorometano acrescentaram-se, gota a gota, a 0 °C, 5 mL de ácido trifluoroacético. Agitou-se a solução durante 2 h à temperatura ambiente e concentrou-se no evaporador rotativo. Removeu-se o resíduo por agitação com éter dietílico. Concentrou-se, para finalizar, na bomba de óleo. Suspendeu-se o resíduo em diclorometano, misturou-se com 0,25 g (~2 mmole) de base de Híinig, 304 mg (2 mmole) de 1-hidroxibenzotriazole - H2O (HOBT) e 122 mg (2 mmole) de 27a. Arrefeceu-se a solução até aos 0 °C e misturou-se com 419 mg (21 mmole) de 1-(dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCI). Agitou-se a solução durante 12 horas e verteu-se sobre água gelada. Separou-se a fase aquosa e extraiu-se, várias vezes, com diclorometano. Lavaram-se as fases orgânicas reunidas com solução de cloreto de sódio. Secou-se com sulfato de sódio e concentrou-se no 63 evaporador rotativo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (CH2Cl2-acetonitrilo). O produto desejado resultou com um rendimento de 85% (0,85 mmole) , o qual foi depois recolhido em 5 mL de diclorometano e 3 mL de anisol e misturado, a 0 °C, com 5 mL de ácido trifluoroacético. Agitou-se a solução durante 8 horas, concentrou-se e removeu-se por agitação com éter dietílico. O produto 27b desejado resultou com um rendimento de 90% (813,9 mg). MS-FAB: 1064 (M+ +1, 38)
Exemplo 28
Conjugado de anticorpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({1-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-il)-propionilamino]-pentilcarbamoil}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoil)-metil]-carbamoíl}-propionil)]-benzil-4-metil-DTPA
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. _40_, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 255 yg (240 nmol) de produto do exemplo 27b, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C.
Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS). 64
Exemplo 29
Complexo de itrio do conjugado de anticorpo de (1R,1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentilcarbamoil}-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoil)-metil]-carbamoíl}-propionil)]-benzil-4-metil-DTPA
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 4_0, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 255 yg (240 nmol) de produto do exemplo 27b, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0). Para finalizar colocou-se, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6) . Misturou-se a solução com 50 MBq [90Y]YCl3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS). 65
Exemplo 30
Complexo de lutécio do conjugado de anticorpo de (1R,1'S, 4R)—1—[4—(3—{[({[({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl}-metil)-carbamoil]-metil}-carbamoíl)-metil]-carbamoil}-propionil)]-benzil-4-metil-DTPA
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 40, 1999, 1722/ obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 255 yg (240 nmol) de produto do exemplo 27b, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0). Colocou-se para finalizar, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6). Misturou-se a solução com 50 MBq [177Lu]LuCl3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS). 66
Exemplo 31
Complexo de escândlo do conjugado de anticorpo de (IR, 1'S,4R)-1-[4-(3-{[({[({l-carboxi-5-[3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-pirrol-l-il)-propionilamino]-pentilcarbamoíl-metil)-carbamoíl]-metil}-carbamoil)-metil]-carbamoíl}-propionil)]-benzil-4-metil-DTPA
Diluíram-se 200 yg de um anticorpo com grupos tiol livremente acessíveis (p. ex. HuM195 (comparar Michael R. McDevitt, J. Nuc. Med. 4_0, 1999, 1722; obtenível comercialmente na Protein Design Labs Inc., Mountainview, CA, USA)) - se o anticorpo não possuir quaisquer grupos tiol livremente acessíveis, estes podem ser obtidos utilizando-se 2-iminotiolano HC1 (p. ex., documento EP 0607222 Bl) - em 1,2 mL de tampão borato (50 mM, pH 8,5), misturou-se com 255 yg (240 nmol) de produto do exemplo 27b, dissolvido em 50 yL de tampão borato (ver acima), e agitou-se 3 horas a 37 °C. Trocou-se a solução tampão de borato por um tampão acetato em que a solução da amostra foi colocada, três vezes, durante 1 h no Slide-A-Lyzer 10000, Pierce, MWCO (processo de diálise) contra, respectivamente, 200 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6,0). Colocou-se, para finalizar, durante a noite, contra 400 mL de tampão NaOAc 0,1 M (pH 6) . Misturou-se a solução com 50 MBq [47Sc] SCCI3 e agitou-se durante 30 min. à temperatura ambiente. Purificou-se sobre uma coluna NAP-5 (Amersham Pharmacia Biotech AB, Sephadex G-25, fase móvel: PBS).
Lisboa, 8 de Fevereiro de 2007 67

Claims (15)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Compostos da fórmula geral Vila e Vllb
    onde Z representa um átomo de hidrogénio ou um equivalente de iões metálicos de um elemento do número de ordem 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ou 83, A representa um grupo -COO-, R representa um grupo nitro, um grupo amino, ou um outro grupo funcional, que pode ser unido com uma biomolécula, ou um residuo alquilo-Ci-C25 de cadeia linear ou ramificado, saturado ou insaturado e eventualmente interrompido por um até seis átomos de 0-, ou fenileno, grupos -NHCO-, -CONH-,
    e/ou -NH-(C=S)-NH-, que está eventualmente substituído, num qualquer local, com um até seis grupos carboxilo, grupos 1 hidroxilo, grupos amino ou outros grupos funcionais, bem como seus sais com bases orgânicas ou inorgânicas com as condições de gue o resrduo algurlo contenha pelo menos um grupo funcional gue possa ser unrdo com uma bromolecula, e de pelo menos dois Z representarem um equivalente de iões metálicos.
  2. 2. Compostos de acordo com a reivindicação 1, onde pelo menos dois dos resíduos Z representam um equivalente de iões metálicos de um elemento paramagnético dos números de ordem 21-29, 42, 44 e 58-70.
  3. 3. Compostos de acordo com a reivindicação 1, onde pelo menos dois dos resíduos Z representam um equivalente de iões metálicos de um elemento radioactivo dos números de ordem 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 47, 49, 61, 62, 64, 70 71, 75, 77, 82 e 83.
  4. 4. Compostos de acordo com a reivindicação 1, onde R representa um resíduo
    \^COOH
    COOH OH
    2 nh2 OH OH NH2
  5. 5. Compostos de acordo com a reivindicação 1, representa um residuo
    COOH
    3
  6. 6. Compostos de acordo com a reivindicação 1, onde R representa um grupo funcional carboxilo, carboxilo activado, amino, nitro, isocianato, isotiocianato, hidrazina, semicarbazida, tio-semibarbazida, cloroacetamida, bromoacetamida, iodacetamida, acrilo, acilamino, anidridos misturados, azida, cloreto de ácido, brometo de ácido, hidróxido, cloreto de sulfonilo, vinilsulfona, carbodiiimida, maleimida ou diazo.
  7. 7. Compostos de acordo com a reivindicação 6, onde o grupo carboxilo activado é seleccionado a partir de
  8. 8. Utilização de compostos da fórmula geral Vila ou Vllb de acordo com a reivindicação 1, para a preparaçõa de conjugados com uma biomolécula. 4
  9. 9. Utilização de acordo com a reivindicação 8, onde a biomolécula é seleccionada a partir do grupo constituído por: biopolimeros, proteínas, tal como proteínas que têm uma função biológica, HSA, BSA, etc., proteínas e péptidos que se concentram em determinados locais no organismo (p. ex. em receptores, membranas celulares, canais etc.), péptidos dissociáveis por proteases, péptidos com locais de quebra predeterminados sintéticos (p. ex., ésteres lábeis, amidas etc.), péptidos que são dissociados por metaloproteases, péptidos com ligantes fotodissociáveis, péptidos com grupos dissociáveis com agentes oxidantes (oxidases), péptidos com aminoácidos naturais e sintéticos, glicoproteínas (glicopéptidos) , proteínas de sinal, proteínas antivirais e de apoptose, biopolimeros modificados sinteticamente, tal como biopolimeros derivatizados com ligantes, metaloproteases modificadas e oxidase derivatizada etc., hidratos de carbono (mono até polissacáridos) , tal como açúcares derivatizados, açúcares dissociáveis no organismo, ciclodextrinas e seus derivados, aminoaçúcar, quitosana, polissulfatos e derivados do ácido acetilneuramínico, anticorpos, tal como anticorpos monoclonais, fragmentos de anticorpos, anticorpos policlonais, minibodies, Single Chains (também os que estão unidas por ligantes a vários fragmentos), glóbulos vermelhos e outros componentes sanguíneos, marcadores cancerígenos (p. ex. CAA) e substâncias de adesão celular (p. ex. derivados de Lewis X e Anti-Lewis X) , fragmentos de ADN e ARN, tal como ADN e RNA derivatizados (p. ex., os que foram encontrados através do processo de SELEX) , ARN e ADN sintético (também com bases sintéticas), PNA (Hoechst) e antisentido, β-aminoácidos (Seebach), aminas vectores para a 5 transferência para a célula, aminas biogénicas, farmacêuticos, preparados oncológicos, polímeros sintéticos, que estão direccionados para um alvo biológico (p. ex. receptor), esteróides (naturais e modificados), prostaglandinas, taxol e seus derivados, endotelinas, alcaloides, ácido fólico e seus derivados, lipidos bioactivos, gorduras, ésteres de ácidos gordos, mono, di e triglicéridos modificados sinteticamente, lipossomas que estão derivatizados à superfície, micélios de ácidos gordos naturais ou de compostos de perfluoroalquilo, porfirinas, texafirinas, porfirinas expandidas, citocromos, inibidores, neuramidases, neuropéptidos, imunomoduladores, tal como FK 506, CAPE e gliotoxina, endoglicosidases, substratos que são activados por enzimas, tal como calmodolina quinase, caseina quinase II, glutatião-S-transferase, heparinase, metaloproteases de matriz, β-insulina-receptor quinase, UDP-galactose 4-epimerase, fucosidases, proteínas G, galactosidases, glicosidases, glicosil transferases e xilosidase, antibióticos, vitaminas e análogos de vitamina, hormonas, agentes intercalantes de ADN, nucleósidos, nucleótidos, lectinas, vitamina B12, Lewis-X e substâncias relacionadas, psoraleno, antibióticos de dientrieno, carbaciclinas, VEGF (vascular endothelial growth factor), somatostatina e seus derivados, derivados de biotina, anti-hormonas, proteínas especificas de tumores e agentes sintéticos, polímeros que se concentram em regiões ácidas ou básicas do corpo (distribuição controlada pelo pH), mioglobinas, apomioglobinas etc., péptidos neurotransmissores, factores de necroses de tumores, péptidos que se concentram em tecido inflamado, reagentes de pool sanguínea, proteínas transportadoras de aniões e 6 catiões, poliésteres (p. ex. do ácido láctico), poliamidas e polifosfatos.
  10. 10. Processo para a preparação de compostos da fórmula Vila e Vllb de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se dissociar, de modo em si conhecido, os grupos protectores Z', em compostos da fórmula geral VII'a e VII'b
    vir b Vir a onde Z' significa um grupo de protecção carboxilo e transformar os ácidos assim obtidos, de modo em si conhecido, com pelo menos um óxido metálico ou sal metálico de um elemento dos números de ordem 21-29, 31, 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71, 75, 77, 82 ou 83 e converter subsequentemente, caso desejado, átomos de hidrogénio acidicos existentes, com aminoácidos inorgânicos e/ou orgânicos, em sais fisiologicamente aceitáveis.
  11. 11. Agentes farmacêuticos contendo pelo menos um composto fisiologicamente aceitável de acordo com a reivindicação 2.
  12. 12. Agentes farmacêuticos contendo pelo menos um composto fisiologicamente aceitável de acordo com a reivindicação 3. 7
  13. 13. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 2 para a preparação de agentes para o diagnóstico por RMN.
  14. 14. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 3 para a preparação de agentes para o radiodiagnóstico ou radioterapia.
  15. 15. Kit para a preparação de radiofármacos, abrangendo um composto de acordo com a reivindicação 1, onde Z é um átomo de hidrogénio, e um composto de um elemento radioactivo dos números de ordem 26, 27, 29, 31, 32, 37-39, 43, 46, 61, 62, 64, 67, 70, 71, 75, 77, 82 e 83. Lisboa, 8 de Fevereiro de 2007 8
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP6410339B2 (ja) * 2013-03-25 2018-10-24 国立大学法人千葉大学 放射性核種標識オクトレオチド誘導体
US20180104349A9 (en) * 2013-04-28 2018-04-19 Gang Qin Novel linker, preparation method, and application thereof
AU2019309242A1 (en) * 2018-07-23 2021-03-11 Ladrx Corporation Imaging agents for radiolabeling exogenous and endogenous albumin
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Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4831175A (en) * 1986-09-05 1989-05-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
US6207858B1 (en) * 1999-03-03 2001-03-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Regioselective synthesis of DTPA derivatives
SE9904507D0 (sv) * 1999-12-09 1999-12-09 Astra Ab New compounds
IL157359A0 (en) * 2001-02-26 2004-02-19 Bristol Myers Squibb Pharma Co A radiopharmaceutical composition containing an ascorbic acid analog

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