JP2010533671A - プロテアーゼに対して安定しているペグ化インスリンアナログ - Google Patents
プロテアーゼに対して安定しているペグ化インスリンアナログ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010533671A JP2010533671A JP2010516460A JP2010516460A JP2010533671A JP 2010533671 A JP2010533671 A JP 2010533671A JP 2010516460 A JP2010516460 A JP 2010516460A JP 2010516460 A JP2010516460 A JP 2010516460A JP 2010533671 A JP2010533671 A JP 2010533671A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- insulin
- pegylated
- xaa
- human insulin
- desb30 human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
経口経路は、薬剤投与で最も幅広く使用されている経路であり、特に長期治療を受けている患者に、一般的には非常によく受け入れられている。しかしながら、治療用ペプチド又はタンパク質の投与は、胃腸(GI)管及び腸管粘膜における酵素的分解、薬剤排出ポンプ、腸粘膜からの不十分かつ可変吸収、並びに肝臓での初回通過代謝等のいくつかの障壁のために、多くの場合、好ましい経口投与よりも、非経口投与に限定されている。
この発明の他の態様は、肺投与された場合に、血糖値を満足に制御可能なインスリンアナログを提供することに関する。
この発明の他の態様は、肺投与された場合に、比較的ゆっくりと作用発現し、程度の差はあるが長時間作用しつつ、血糖値を満足に制御可能なインスリンアナログを提供することに関する。
この発明の目的は、従来技術の少なくとも一の不具合を克服又は改善し、又は有用な代替物を提供することにある。
ここで、アミノ酸残基なる用語は、水素原子がアミノ基から除去された、及び/又はヒドロキシ基がカルボキシ基から除去された、及び/又は水素原子がメルカプト基から除去されたアミノ酸をカバーする。おおよそ、アミノ酸残基はアミノ酸を指している。
ここで、親水性アミノ酸は、上述した疎水性アミノ酸ではない天然のアミノ酸であると理解される。一実施態様において、本発明の親水性の酸は:グルタミン酸(Glu、E)、アスパラギン酸(Asp、D)、ヒスチジン(His、H)、グルタミン(Gln、Q)、アスパラギン(Asn、N)、セリン(Ser、S)、スレオニン(Thr、T)、プロリン(Pro、P)、グリシン(Gly、G)、リジン(Lys、K)及びアルギニン(Arg、R)からなる群から選択される。さらなる実施態様において、本発明の親水性アミノ酸は:グルタミン酸(Glu、E)、アスパラギン酸(Asp、D)、ヒスチジン(His、H)、グルタミン(Gln、Q)、アスパラギン(Asn、N)、リジン(Lys、K)及びアルギニン(Arg、R)からなる群から選択される。
ここで、親インスリンなる用語は、付加されたPEG部分を有さず、プロテアーゼに対する分解に対する安定性を改善するための変異がなされていないインスリンを意味する。前記親インスリンは、場合によってはヒトインスリンに対して変異している。よって、親インスリンは、上述したインスリンアナログでもある。
ここで、変異なる用語は、アミノ酸配列における任意の変化をカバーする(コード性アミノ酸の挿入及び置換、並びに欠失)。
ここで、ヒトインスリンのA鎖のアナログ及びB鎖のアナログなる用語は、それぞれ、ヒトインスリンのA及びB鎖に対し、A及びBアミノ酸鎖の一又は複数の置換、欠失及び/又は伸長(付加)を有する、ヒトインスリンのA及びB鎖をカバーする。
ここで、A(0)又はB(0)なる用語は、それぞれA又はB鎖において、A1又はB1位のN末端よりに隣接した位置を示す。A(−1)又はB(−1)なる用語は、それぞれA(0)又はB(0)に対してN末端よりの第1のアミノ酸の位置を示す。よって、A(−2)及びB(−2)は、それぞれA(−1)及びB(−1)に対してN末端よりの位置を示し、A(−3)及びB(−3)は、それぞれA(−2)及びB(−2)に対してN末端寄りの位置を示す。
ここで、desB29及びdesB30等の用語は、それぞれB29又はB30アミノ酸残基を欠く、インスリンアナログを示す。
長時間作用するインスリンとは、通常の又は定型的なヒトインスリンよりも作用の持続期間が長いインスリンを意味する。
インスリンアナログ、インスリン、及びA及びB鎖における位置の番号付けは、親化合物がそのために使用される番号を有するヒトインスリンであるようになされる。
ここで使用される場合、基礎インスリンなる用語は、8時間を超え、特に少なくとも9時間の作用時間を有するインスリンペプチドを意味する。好ましくは、基礎インスリンは少なくとも10時間の作用時間を有する。基礎インスリンはよって約8〜24時間の範囲、好ましくは約9〜約15時間の範囲の作用時間を有しうる。
ここで使用される場合、「PEG」又はポリエチレングリコールとは、任意の水溶性ポリ(エチレンオキシド)を意味する。PEGなる表現は構造-(CH2CH2O)n-を含み、ここでnは2〜約1000の整数である。一般的に使用されるPEGは末端キャップされたPEGであり、PEG末端の一端は比較的不活性な基、例えばアルコキシで末端キャップされ、他端はリンカー部分でさらに修飾されていてもよいヒドロキシル基である。多くの場合に使用されるキャップ基はメトキシであり、対応する末端キャップされたPEGは、多くの場合にmPEGと示される。ここで、mPEGはCH3O(CH2CH2O)n-であり、nは、PEG部分全体に対して示される平均分子量が十分、例えばmPEGがMw2000になるように、2〜約1000の整数であり、nは約44(バッチ間変動を受けた数)である。概念としてのPEGは、多くの場合、mPEGの代わりに使用される。
他の特定のPEG形態は、同様に分枝状、直鎖状、フォーク状、又はダンベル状の形状とすることができる単分散系である。単分散系とは、PEGポリマーの長さ(又は分子量)が特に定められており、種々の長さ(又は分子量)の混合物ではないことを意味する。ここで、概念としてのmdPEGは、mPEG分子が単分散系であることを示すために使用され、「discrete」の「d」が使用される。mdPEGの後の下付き数字、例えばmdPEG12で、このケースでは12は、多分散ポリマー(オリゴマー)内のエチレングリコールモノマーの数を示す。
インスリン活性を有するペグ化されたインスリンとは、ラット、ウサギ、又はブタモデルであってよい、適切な動物モデルにおいて測定して、例えば静脈内又は皮下投与によって適切に投与した後、哺乳動物の血糖を低下させる能力、又はインスリンレセプター結合親和性を有する、ペグ化されたインスリンを意味する。
ここで、アルコキシなる用語は、基「アルキル-O-」をカバーし、ここでアルキルは上述したものである。代表例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ(例えば、1-プロポキシ及び2-プロポキシ)、ブトキシ(例えば、1-ブトキシ、2-ブトキシ、及び2-メチル-2-プロポキシ)、ペントキシ(1-ペントキシ及び2-ペントキシ)、ヘキソキシ(1-ヘキソキシ及び3-ヘキソキシ)等である。
ここで、アルキレンなる用語は、1〜12の炭素原子、好ましくは1〜6の炭素原子、より好ましくは1〜4の炭素原子を有する、飽和した、分枝状及び直鎖状の二価の炭化水素基をカバーする。代表例には、限定されるものではないが、メチレン、1,2-エチレン、1,3-プロピレン、1,2-プロピレン、1,3-ブチレン、1,4-ブチレン、1,4-ペンチレン、1,5-ペンチレン、1,5-ヘキシレン、1,6-ヘキシレン等が含まれる。
インスリンレセプター及びIGF-1レセプター親和性を有するポリペプチドは、適当な結合アッセイにおいてインスリンレセプター及びIGF-1レセプターと相互作用可能なポリペプチドである。このようなレセプターアッセイは、当該分野でよく知られており、実施例にさらに記載する。本ペグ化されたインスリンは、IGF-1レセプターに結合しないか、又は該レセプターに対し、低親和性しか有さない。より厳密には、この発明のペグ化インスリンは、ヒトインスリンと実質的同程度又はそれ以下のIGF-1レセプターに対する親和性を有しているであろう。
ここで使用される場合、病気の処置なる用語は、病気、病状又は疾患を発症した患者の管理及びケアを意味する。処置の目的は、病気、病状又は疾患に抗することである。処置には、病気、病状又は疾患の除去又は制御、並びに病気、病状又は疾患に関連する症候群又は合併症を緩和するために、活性化合物を投与することを含む。
ここで使用される場合、病気の予防なる用語は、病気の臨床的発症の前に、病気を発症する危険性を、個々に管理及びケアすることと定義される。予防の目的は、病気、病状又は疾患の発症に抗することであり、症候群又は合併症の発症を予防又は遅延化、及び関連する病気、病状又は疾患の発症を予防又は遅延化させるために、活性化合物を投与することを含む。
POTは、分裂酵母トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子であり、TPI1は出芽酵母トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子である。
リーダーとは、プレ-ペプチド(シグナルペプチド)及びプロ-ペプチドからなるアミノ酸配列を意味する。
次の略語が、明細書及び実施例において使用される:Daはダルトン(分子量)であり、kDaはキロダルトン(=1000Da)であり、mPEG-SBAはmPEG-CH2CH2CH2-CO-OSu(mPEG-ブタン酸のN-ヒドロキシスクシンイミジルエステル)であり、mPEG-SMBはmPEG-CH2CH2CH(CH3)-CO-OSu( mPEG-α-メチルブタン酸のN-ヒドロキシスクシンイミジルエステル)であり、mPEG-SPAはmPEG-CH2CH2-CO-OSu(mPEG-プロピオン酸のN-ヒドロキシスクシンイミジルエステル)であり、Mwは分子量であり、OSuは1-スクシンイミジルオキシ=2,5-ジオキソピロリジン-1-イルオキシであり、Rは室温であり、SAはシナピン酸であり、Suは1-スクシンイミジル=2,5-ジオキソピロリジン-1-イルである。
タンパク質分解に対して安定している上述のインスリンは、ここでは娘インスリンと称される。
娘インスリン分子は、明細書の詳細な部分に説明されているように、ヒトインスリンに対して、限定された数の自然に生じるアミノ酸残基が、他のアミノ酸残基で置換されたものである。
さらなる態様において、この発明は、哺乳動物の血糖値を低減する、特に糖尿病を処置する製薬用調製物を調製するための、ペグ化されたインスリンの使用に関する。
さらなる実施態様において、本発明は、このような処置を必要とする患者に、この発明のペグ化されたインスリンを治療的活性用量投与することにより、哺乳動物の血糖値を低減する方法に関する。
この発明のさらなる態様では、ペグ化されたインスリンは、任意の適切な比で一又は複数種のさらなる活性物質と併用されて投与される。かかるさらなる活性剤は、ヒトインスリン、速効型インスリンアナログ、抗糖尿病剤、抗脂質異常症剤、抗肥満剤、抗高血圧剤、糖尿病から生じるか糖尿病に関連する合併症の治療剤から選択されうる。
一実施態様において、2つの活性成分は、混合製薬用調製物として投与される。他の実施態様において、2つの成分は、同時に又は逐次、別個に投与される。
この発明のペグ化されたインスリンは、抗糖尿病剤と共に、併用処置に使用されてもよい。
さらに、この発明のペグ化されたインスリンは、一又は複数の抗肥満剤又は食欲調節剤と併用されて投与されてもよい
一実施態様において、この発明は、この発明のペグ化されたインスリン、及び適切なアジュバント及び添加剤、例えば安定化、防腐又は等張化に適した一又は複数の薬剤、特に亜鉛イオン、フェノール、クレゾール、パラベン、塩化ナトリウム、グリセロール、プロピレングリコール又はマンニトールを含有する肺用の製薬用調製物に関する。
食事制限及び/又は運動、一又は複数の上述の化合物、場合によっては一又は複数の他の活性物質と、ペグ化されたインスリンとの任意の適切な組合せがこの発明の範囲内であると考えられると理解されるべきである。
インスリンの安定性及び溶解性は、現在のインスリン療法にとって、根本にある重要な側面である。この発明は、安定した、ペグ化されたインスリンアナログを提供することにより、これらの問題点に取り組むものであり、ここでペグ化より、分子の可動性が低減し、附随してフィブリル化傾向が低下し、pH降下域が制限又は変更される。
この発明のペグ化されたインスリンは、例えばヒトインスリン及びペグ化されたヒトインスリンと比較して、相対的に高い生物学的利用能であるために、特に肺又は経口投与を意図している。さらに、ペグ化されたインスリンは、持続性インスリン活性を有しているであろう。
前記娘インスリンは、ここでは親インスリンと称されるインスリン化合物から誘導される。
・A12位のアミノ酸がGlu又はAspであり、及び/又はA13位のアミノ酸がHis、Asn、Glu又はAspであり、及び/又はA14位のアミノ酸がAsn、Gln、Glu、Arg、Asp、Gly又はHisであり、及び/又はA15位のアミノ酸がGlu又はAspであり;及び
・B24位のアミノ酸がHisであり、及び/又はB25位のアミノ酸がHisであり、及び/又はB26位のアミノ酸がHis、Gly、Asp又はThrであり、及び/又はB27位のアミノ酸がHis、Glu、Lys、Gly又はArgであり、及び/又はB28位のアミノ酸がHis、Gly又はAspであり;
場合によっては、一又は複数の付加的な変異をさらに含む、インスリンアナログである。
式(1)(配列番号:1)
のA鎖アミノ酸配列、及び次の式2:
式(2)(配列番号:2)
のB鎖アミノ酸配列を含むインスリンアナログであり、該式において、
XaaA(−2)は存在しないか又はGlyであり;
XaaA(−1)は存在しないか又はProであり;
XaaA0は存在しないか又はProであり;
XaaA8は独立して、Thr及びHisから選択され;
XaaA12は独立して、Ser、Asp及びGluから選択され;
XaaA13は独立して、Leu、Thr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg、Pro、Ser及びGluから選択され;
XaaA14は独立して、Tyr、Thr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg、Pro、Ser及びGluから選択され;
XaaA15は独立して、Gln、Asp及びGluから選択され;
XaaA18は独立して、Asn、Lys及びGlnから選択され;
XaaA21は独立して、Asn及びGlnから選択され;
XaaA22は存在しないか又はLysであり;
XaaB(−2)は存在しないか又はGlyであり;
XaaB(−1)は存在しないか又はProであり;
XaaB0は存在しないか又はProであり;
XaaB1は存在しないか、又は独立してPhe及びGluから選択され;
XaaB2は存在しないか又はValであり;
XaaB3は存在しないか、又は独立してAsn及びGlnから選択され;
XaaB4は独立して、Gln及びGluから選択され;
XaaB10は独立して、His、Asp、Pro及びGluから選択され;
XaaB16は独立して、Tyr、Asp、Gln、His、Arg及びGluから選択され;
XaaB24は独立して、Phe及びHisから選択され;
XaaB25は独立して、Phe及びHisから選択され;
XaaB26は存在しないか、又は独立してTyr、His、Thr、Gly及びAspから選択され;
XaaB27は存在しないか、又は独立してThr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg、Pro、Ser及びGluから選択され;
XaaB28は存在しないか、又は独立してPro、His、Gly及びAspから選択され;
XaaB29は存在しないか、又は独立してLys及びGlnから選択され;
XaaB30は存在しないか又はThrであり;
XaaB31は存在しないか又はLeuであり;
XaaB32は存在しないか又はGluであり;
場合によってはC末端がアミドとして誘導体化されていてもよく;
ここで、A鎖アミノ酸配列及びB鎖アミノ酸配列は、A鎖の7位にあるシステインとB鎖の7位にあるシステインとの間、及びA鎖の20位にあるシステインとB鎖の19位にあるシステインとの間でジスルフィド架橋により結合しており、A鎖の6及び11位にあるシステインはジスルフィド架橋により結合しており;
場合によってはA鎖アミノ酸配列のN末端は、3-7のアミノ酸を含有するアミノ酸配列により、B鎖アミノ酸配列のC末端に結合して、単鎖インスリン分子を形成してよく、場合によってはB鎖のN末端は1-10のアミノ酸で伸長しており;
XaaA8がThrであり、XaaA12がSerであり、XaaA13がLeuであり、XaaA14がTyrであるならば、XaaA15はGlu又はAspであり;及び
XaaB24がPheであり、XaaB25がPheであり、XaaB26がTyrであり、XaaB27がThrであり、XaaB28がProであるならば、XaaB29はGlnである。
式(3)(配列番号:3)
のA鎖アミノ酸配列、及び次の式(4):
式(4)(配列番号:4)
のB鎖アミノ酸配列を含むインスリンアナログであり、該式において、
XaaA8は独立して、Thr及びHisから選択され;
XaaA12は独立して、Ser、Asp及びGluから選択され;
XaaA13は独立して、Leu、Thr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg、Pro、Ser及びGluから選択され;
XaaA14は独立して、Thr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg、Pro、Ser及びGluから選択され;
XaaA15は独立して、Gln、Asp及びGluから選択され;
XaaA18は独立して、Asn、Lys及びGlnから選択され;
XaaA21は独立して、Asn及びGlnから選択され;
XaaB1は独立して、Phe及びGluから選択され;
XaaB3は独立して、Asn及びGlnから選択され;
XaaB4は独立して、Gln及びGluから選択され;
XaaB10は独立して、His、Asp、Pro及びGluから選択され;
XaaB16は独立して、Tyr、Asp、Gln、His、Arg及びGluから選択され;
XaaB24は独立して、Phe及びHisから選択され;
XaaB26は存在しないか、又は独立してTyr、His、Thr、Gly及びAspから選択され;
XaaB27は存在しないか、又は独立してThr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg、Pro、Ser及びGluから選択され;
XaaB28は存在しないか、又は独立してPro、His、Gly及びAspから選択され;
XaaB29は存在しないか、又は独立してLys及びGlnから選択され;
XaaB30は存在しないか又はThrであり;
場合によってはC末端はアミドとして誘導体化されていてもよく;
ここで、A鎖アミノ酸配列及びB鎖アミノ酸配列は、A鎖の7位にあるシステインとB鎖の7位にあるシステインとの間、及びA鎖の20位にあるシステインとB鎖の19位にあるシステインとの間でジスルフィド架橋により結合しており、A鎖の6及び11位にあるシステインはジスルフィド架橋により結合している。
XaaA8は独立して、Thr及びHisから選択され;
XaaA12は独立して、Ser及びGluから選択され;
XaaA13は独立して、Leu、Thr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg、Pro、Ser及びGluから選択され;
XaaA14は独立して、Asp、His及びGluから選択され;
XaaA15は独立して、Gln及びGluから選択され;
XaaA18は独立して、Asn、Lys及びGlnから選択され;
XaaA21は独立して、Asn及びGlnから選択され;
XaaB1は独立して、Phe及びGluから選択され;
XaaB3は独立して、Asn及びGlnから選択され;
XaaB4は独立して、Gln及びGluから選択され;
XaaB10は独立して、His、Asp、Pro及びGluから選択され;
XaaB16は独立して、Tyr、Asp、Gln、His、Arg及びGluから選択され;
XaaB24は独立して、Phe及びHisから選択され;
XaaB26は独立して、Tyr、Thr、Gly及びAspから選択され;
XaaB27は独立して、Thr、Asn、Asp、Gln、His、Lys、Gly、Arg及びGluから選択され;
XaaB28は独立して、Pro、Gly及びAspから選択され;
XaaB29は独立して、Lys及びGlnから選択され;
XaaB30は存在しないか又はThrであり;
場合によってはC末端はアミドとして誘導体化されていてもよく;
ここで、A鎖アミノ酸配列及びB鎖アミノ酸配列は、A鎖の7位にあるシステインとB鎖の7位にあるシステインとの間、及びA鎖の20位にあるシステインとB鎖の19位にあるシステインとの間でジスルフィド架橋により結合しており、A鎖の6及び11位にあるシステインはジスルフィド架橋により結合している。
娘インスリンの他の実施態様を以下に記載する。
一実施態様において、娘インスリンは、pH2-4で、ヒトインスリンよりも増加した溶解度を有する。
一実施態様において、娘インスリンは、pH2-4で、親インスリンよりも増加した溶解度を有する。
一実施態様においては、溶液を30000gで20分、遠心分離にかけ、ついで上清のインスリン濃度をRP-HPLCにより測定してもよい。この濃度が、組成物を作製するときに通常使用されるインスリン濃度に等しいか、実験誤差の範囲内であるならば、インスリンは本発明の組成物に十分溶解している。他の実施態様において、本発明の組成物におけるインスリンの溶解度は、簡単には、組成物を収容する容器を、眼で観察することにより測定することができる。溶液が、目で見て透明であり、粒子状物質が懸濁していないか、又は容器の側面/底に沈殿していないならば、インスリンは溶解している。
インスリンの有効性又は生物学的利用能を測定するための標準的なアッセイは、当業者に公知であり、とりわけ(1)インスリンの相対的有効性が、ラットの肝臓細胞膜分画等、細胞膜に存在するインスリンレセプターに特異的に結合する125I-インスリンの50%が置き換えられるのに必要なインスリンアナログに対するインスリンの比率として定義される、インスリンラジオレセプターアッセイ;(2)インスリンの相対的有効性が、有機抽出可能物(例えば脂質)への[3-3H]グルコースの最大転換率の50%に達するのに必要なインスリンアナログに対するインスリンの比率として定義される、ラットの脂肪細胞などを用いて実施される、脂質生成アッセイ;(3)インスリンアナログの相対的有効性が、グルコース-1-[14C]の[14CO2]への最大転換率の50%に達するためのインスリンアナログに対するインスリンの比率として定義される、単離された脂肪細胞におけるグルコース酸化アッセイ;(4)特定の抗インスリン抗体への結合において、インスリン又はインスリンアナログが125I-インスリンと競合することにより有効性を測定する、インスリンアナログの免疫原性を測定可能なインスリンラジオイムノアッセイ;及び(5)特定のインスリン抗体を有するELISAアッセイ等、動物の血漿サンプルにおける、抗体へのインスリン又はインスリンアナログの結合性を測定する他のアッセイが含まれる。
上式中、Niは、ポリマー混合物において分子量Miを有する分子のモル分率(又は数-分率)である。Mnに対するMwの比率は多分散指標(PDI)として公知であり、分布幅の目安を提供するものである。PDIは、非常に狭いMW分布を有する特定のポリマーにとっては1.0(下限)に近づく。
この発明で使用されるPEG基は、付与された分子量のために、典型的には、様々なエチレングリコール(又はエチレンオキシド)モノマーからなる。例えば、分子量2000ダルトンのPEG基は、典型的には43±10のモノマーからなり、平均は約43-44モノマー、又は35-50モノマーである。
この出願において、ペグ化されたインスリンは、大部分は実際のリンカーと関係なく、リンカー部分がプロピオン酸リンカーであるように命名される。実際、タンパク質のペグ化文献において、リンカー基が使用されることは、めったに特定されない。生物学的特性に関して重要な変数は:サイズ(ダルトン)、及びPEG部分の形状、及びタンパク質内におけるPEG付着の位置である。
組換え発現ベクターは酵母中で複製可能である。ベクターを酵母中で複製させることができる配列の例は酵母プラスミド2μm複製遺伝子REP1−3及び複製起点である。
細菌宿主細胞における転写を指向するのに適切なプロモーターの例は、大腸菌lacオペロン、ストレプトマイセス・セリカラーアガラーゼ(agarase)遺伝子(dagA)、枯草菌レバンスクラーゼ(levansucrase)遺伝子(sacB)、バチルス・リケニホルミスアルファ-アミラーゼ遺伝子(amyL)、バチルス・ステアロサーモフィルスマルトゲンアミラーゼ遺伝子(amyM)、バチルス・アミロリケファシエンスアルファ-アミラーゼ遺伝子(amyQ)、バチルス・リケニホルミスペニシリナーゼ遺伝子(penP)から得られるプロモーターである。糸状菌宿主細胞における転写を指向するのに適切なプロモーターの例は、コウジカビTAKAアミラーゼ、リゾムコール・ミエヘイ(miehei)アスパラギン酸プロテイナーゼ、クロコウジカビ中性アルファ-アミラーゼ、及びクロコウジカビ酸安定性アルファ-アミラーゼから得られるプロモーターである。酵母宿主では、有用なプロモーターは、出芽酵母Ma1、TPI、ADH又はPGKプロモーターである。
娘インスリンをコードするポリヌクレオチド配列は、典型的には適切なターミネーターに作用可能に連結しているであろう。酵母において、適切なターミネーターはTPIターミネーター(Alber等 (1982) J. Mol. Appl. Genet. 1:419-434)である。
投与経路は、この発明の化合物が、体の所望する又は適切な部位に効果的に輸送される任意の経路、例えば非経口、特に皮下、筋肉内又は静脈内であってよい。またこの発明の化合物は、経口、肺又は鼻に投与することもできる。
非経口投与用として、この発明の化合物は、公知のインスリンの処方と同じようにして処方される。さらに、非経口投与用として、この発明の化合物は、公知のインスリンの投与と同じように投与され、医者であるならば、この手順に精通している。
非経口投与は、シリンジ、場合によってはペン様シリンジにより実施することができる。また、非経口投与は注入ポンプにより実施することもできる。
この発明のインスリン調製物は、公知のインスリン調製物と同じように使用される。
この発明のペグ化されたインスリンは、皮下、鼻、経口又は肺に投与されてよい。
皮下投与用として、この発明のペグ化されたインスリンは、公知のインスリンの製剤と同じように処方される。さらに、皮下投与用として、この発明のペグ化されたインスリンは、公知のインスリンの投与と同じように投与され、医者はこの手順に通じている。
この発明のペグ化されたインスリンは、循環インスリンレベルを増加させ、及び/又は循環グルコースレベルを低下させるのに効果的な用量で、吸入により投与されてよい。このような投与は、糖尿病又は高血糖症等の疾患を処置するのに効果的である。インスリンの効果的な投与を達成するには、この発明のペグ化されたインスリンを、約0.5μg/kg〜約50μg/kg以上の吸入量で投与することが必要である。治療的有効量は、インスリンレベル、血糖値、患者の身体コンディション、患者の肺の状態等を含む要因を考慮し、博識な実施者により決定することができる。
この発明のペグ化されたインスリンは、吸入による治療剤の投与について、当該技術で公知の任意の様々な吸入装置により送達され得る。これらの装置には、定量噴霧式吸入器、ネブライザー、乾燥パウダー発生器、、スプレー等が含まれる。好ましくは、このペグ化されたインスリンは、乾燥パウダー吸入器又はスプレーにより送達される。この発明のペグ化されたインスリンを投与するための吸入装置には、いくつかの所望される特徴がある。例えば、吸入装置による送達には、有利には信頼性、再現性及び正確性がある。良好な呼吸性のためには、吸入装置は、小粒子又はエアゾール、例えば約10μm、例えば約1-5μm未満のものを送達すべきである。この発明の実施に適した商業的に入手可能な吸入装置のいくつかの特定の例は、TurbohalerTM(Astra)、Rotahaler(登録商標)(Glaxo)、Diskus(登録商標)(Glaxo)、SpirosTM吸入器(Dura)、吸入治療用に市販されている装置、AERxTM(Aradigm)、Ultravent(登録商標)ネブライザー(Mallinckrodt)、Acorn II(登録商標)ネブライザー(Marquest Medical Products)、Ventolin(登録商標)定量噴霧式吸入器(Glaxo)、Spinhaler(登録商標)パウダー吸入器(Fisons)等である。
適切なバッファーの例は、酢酸ナトリウム、グリシルグリシン、HEPES(4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸)及びリン酸ナトリウムである。
この発明の特徴は以下の通りである:
1.ペグ化されたインスリンアナログであって、娘インスリンにおいて、少なくとも2の疎水性アミノ酸が、親インスリンに対して、親水性アミノ酸で置換されており、置換が、親インスリンの2又はそれ以上のプロテアーゼ切断部位の内部又は近接近して存在しており、このような娘インスリンが一又は複数の付加的な変異をさらに有していてもよく、PEG部分が、リンカーを介して、該娘インスリンのB29位にあるリジン残基のεアミノ基に結合しているペグ化されたインスリンアナログ。
2.娘インスリンが、親インスリンに対して増加した溶解度を有している、第1項のペグ化されたインスリンアナログ。
4.インスリンアナログが、第1の修飾されたインスリンアナログのプロテアーゼ部位に、少なくとも一のアミノ酸置換をさらに有し、該少なくとも一のアミノ酸置換が、少なくとも一の疎水性アミノ酸が少なくとも一の親水性アミノ酸で置換されているものである、上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
7.A14位のアミノ酸がGlu、Asp又はHisであり、B25位のアミノ酸がHisであり、B30位のアミノ酸が欠失している、上述した項のいずれかのペグ化されたインスリンアナログ。
8.A14位のアミノ酸がGlu、Asp又はHisであり、B25位のアミノ酸がHisである、上述した項のいずれかのペグ化されたインスリンアナログ。
10.付加的な変異がdesB30である、可能な限り上述した項のいずれかのペグ化されたインスリンアナログ。
11.A14がGluである、可能な限り上述した項のいずれかのペグ化されたインスリンアナログ。
13.親タンパク質に対して、2又はそれ以上のプロテアーゼ酵素への増加した安定性を示す、可能な限り上述した項のいずれかのペグ化されたインスリンアナログ。
16.一又は複数の付加的な変異が、A18Gln、A21Gln、A21Gly及びB3Glnからなる群から選択される、可能な限り上述した項のいずれかのペグ化されたインスリンアナログ。
21.娘インスリンがA14E変異を有する、上述した項のペグ化されたインスリンアナログ。
22.娘インスリンにおいて、B25位の変異とは別に、上述した項に記載のA14位のみに変異が存在する、可能な限り上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
23.娘インスリンがA14H変異を含む、第21項のペグ化されたインスリンアナログ。
24.娘インスリンアナログがdesB30変異を含む、可能な限り上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
26.A14位及びB25位における変異とは別に、娘インスリンが、上述した項に記載の唯一の変異を有する、可能な限り上述した項のペグ化されたインスリンアナログ。
27.A14位及びB25位における変異とは別に、娘インスリンが、一つを除き(すなわち第25項に記載)、上述した項に記載の正確には2つの変異を有する、最後の一つ以外(すなわち、第27項を除く)の、可能な限り上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
28.A14位及びB25位における変異とは別に、娘インスリンが、2つを除き(すなわち第25項に記載)、上述した項に記載の正確には3つの変異を有する、最後の2つ以外(すなわち、第26項及び第27項を除く)の、可能な限り上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
29.A14位及びB25位における変異とは別に、唯一の付加的な変異がdesB30である、最後の2つ以外(すなわち、第27項及び第28項を除く)の、上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
31.ポリエチレングリコール部分が、約200〜約40000、好ましくは約200〜約30000、好ましくは約200〜約20000、好ましくは約200〜約10000、好ましくは約200〜約5000、好ましくは約200〜約2000、好ましくは約200〜約1000、及び好ましくは約200〜約750の範囲の名目上の分子量を有する、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
32.ポリエチレングリコール部分が単分散である、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
こでnは、少なくとも約6、好ましくは少なくとも約10、及び約110を越えず、好ましくは約75を越えない整数であり、さらに好ましくは、nは約6〜約30の範囲、好ましくは約10〜約48の範囲にある、上述した可能な項のペグ化されたインスリンアナログ。
34.ポリエチレングリコール部分が多分散である、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
36.一般式-Q1-(OCH2CH2)n-R1の基を有し、Q1が、娘インスリンにおいて、アミノ酸のε-NH-基に、好ましくはアミド又はカルバマート結合を介して、ポリエチレングリコール部分を連結させるリンカーであり、nは2〜約1000の範囲の整数であり、R1はアルコキシ又はヒドロキシル、好ましくはメトキシである、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
37.nが、2〜約500、好ましくは2〜約500、好ましくは2〜約250、好ましくは2〜約125、好ましくは2〜約50、及び好ましくは2〜約25の範囲の整数である、上述した項のペグ化されたインスリンアナログ。
39.Q1がエチレンカルボニル(-(CH2)2-CO-)であり、カルボニル基を介して-NH-残基に連結している、上述した項のペグ化されたインスリンアナログ。
40.Q1が-アルキレン-NHCO-アルキレン-CO-であり、カルボニル基を介してインスリンの-NH-残基に連結している、最後の2つを除く、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
41.Q1が-CO-アルキレン-CO-である、最後の3つを除く、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
42.Q1が-CO-である、最後の4つを除く、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
44.Q1が、-CH2CO-、-CH2CH2CO-、-CH2CH2CH2CO-、-CH2CH(CH3)CO-、-CH2CH2CH2CH2CO-、-CH2CH2CH(CH3)CO-、-CH2CH2CH2CH2CH2CO-、-CH2CH2NH-COCH2CH2CO-、-CH2CH2NH-COCH2CH2CH2CO-、-CH2CH2CH2NH-COCH2CH2CO-、-CH2CH2CH2NH-COCH2CH2CH2CO-、-COCH2CH2CO-、-COCH2CH2CH2CO-、-CO-、(-CH2CH2NHCOCH2CH2OCH2)3CNH-COCH2CH2(OCH2CH2)4NHCOCH2CH2CO-又は(-CH2CH2NHCOCH2CH2OCH2)3CNH-COCH2CH2(OCH2CH2)4NHCOCH2CH2CH2CO-である、上述した可能な項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログ。
46.R1がメトキシである、上述した項のペグ化されたインスリンアナログ。
48.糖尿病を処置する製薬用組成物の調製のための、上述した生成物の項のいずれか一つの化合物の使用。
49.糖尿病を処置するために肺投与可能な製薬用組成物の調製のための、上述した生成物の項のいずれか一つの化合物の使用。
50.糖尿病を処置するために肺投与可能で、長時間の作用効果を付与する製薬用組成物の調製のための、上述した生成物の項のいずれか一つの化合物の使用。
51.糖尿病を処置するために肺投与可能なパウダー状製薬用組成物の調製のための、上述した生成物の項のいずれか一つの化合物の使用。
52.糖尿病を処置するために肺投与可能な液状製薬用組成物の調製のための、上述した生成物の項のいずれか一つの化合物の使用。
53.糖尿病を処置するために経口投与可能な製薬用組成物の調製のための、上述した生成物の項のいずれか一つの化合物の使用。
54.上述した生成物の項のいずれか一つの化合物を治療的有効量、それを必要とする被験者に投与することを含む、糖尿病の処置方法。
56.インスリンアスパルト、並びに上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログを含有する組成物。
57.インスリンリスプロ、並びに上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログを含有する組成物。
58.インスリングルリシン、並びに上述した項のいずれか一つのペグ化されたインスリンアナログを含有する組成物。
59.製薬的に許容可能な担体と、インスリンアナログに関連する上述した項のいずれか一つのインスリンアナログを生物活性量含有する製薬用組成物。
61.高血糖症、2型糖尿病、耐糖能障害、1型糖尿病、肥満、X症候群、又は脂質代謝異常を処置又は予防する製薬用製剤を調製するための、インスリンアナログに関連する上述した項のいずれか一つのインスリンアナログの治療的有効量の使用。
62.糖尿病の処置方法であって、該方法が、上述した生成物の項のいずれか一つのペグ化されたインスリンを治療的有効量、それを必要とする被験者に投与することを含む方法。
ここに引用された刊行物、特許出願及び特許を含む全ての文献は、各文献が、出典明示により個々にかつ特に援用され、その全内容がここに記載されているかの如く、その全体が出典明示によりその全内容がここに援用される(法律により許容される最大範囲)。
全ての表題及び副題は、ここでは便宜的に使用され、決してこの発明を限定するものと解してはならない。
ここに提供される任意かつ全ての例、又は例示的言語(例えば「等」)の使用は、単にこの発明をより明らかに例証することを意図しており、特に請求項に記載がない限り、この発明の範囲に限定をもたらすものではない。明細書中の如何なる語句も請求項に記載していない要素がこの発明の実施に必須であることを示しているものと解してはならない。
ここでの特許文献の引用及び援用は単に便宜上なされているもので、そのような特許文献の有効性、特許性、及び/又は権利行使性についての見解を反映させるものではない。文献のここでの記載は、それらが従来技術を構成することを承認するものではない。
ここで、「含有する」なる単語は、広義には「含む」、「有する」又は「包含する」を意味すると解釈される(EPOガイドラインC4.13)。
この発明は、適用される法律に容認される場合、ここに付加される請求項に列挙された主題事項の全ての修正点及び等価物を含む。
mPEG-COCH2CH2CO-OSu、
mPEG-COCH2CH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH2CH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH2CH2CH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH(CH3)CO-OSu、
mPEG-CH2CH2CH(CH3)CO-OSu、
mPEG-CH2CH2NH-COCH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH2CH2NH-COCH2CH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH2CH2NH-COCH2CH2CO-OSu、
mPEG-CH2CH2NH-COCH2CH2CH2CO-OSu、
mPEG-CO-(4-ニトロフェノキシ)、
(mdPEG12-CH2CH2NHCOCH2CH2OCH2)3CNHCOCH2CH2(OCH2CH2)4NHCOCH2CH2CO-OSu(又は、短くは:(mdPEG12)3-dPEG4-OSu)、
(mdPEG12-CH2CH2NHCOCH2CH2OCH2)3CNHCOCH2CH2(OCH2CH2)4NHCOCH2CH2CH2CO-OSu(又は、短くは:(mdPEG12)3-dPEG4-OSu)、
mdPEGx-COCH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-COCH2CH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2CH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2CH2CH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH(CH3)CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2CH(CH3)CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2NH-COCH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2CH2NH-COCH2CH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2CH2NH-COCH2CH2CO-OSu、
mdPEGx-CH2CH2NH-COCH2CH2CH2CO-OSu、又は
mdPEGx-CO-(4-ニトロフェノキシ)、
上式中、xは約6〜約48の範囲の整数、例えば12又は24である。
この方法論により、さらに大きな単分散(及び多分散)の仕立てサイズのペグ化試薬の構築が可能となる。
mPEG750(ここで、「750」は、Daでの平均分子量を示す)、
mPEG2000、
mPEG5000、
mPEG10000、
mPEG20000、
mPEG30000、
mPEG40000、
mdPEG12(ここで、下付き文字「12」は、ここで定義されるように、PEGモノマーの数を示し、例えばQuanta BioDesign Ltd)、
mdPEG24、
mdPEG3x12(ここで、下付き文字「3x12」は、ここで定義されるように、PEGが分枝状で、それぞれ12のPEGモノマーからなる3つのアームからなることを示し、(mdPEG12)3-dPEG4-OSu)、例えばQuanta BioDesign Ltd)、
mdPEG4x4(ここで、下付き文字「4x4」は、ここで定義されるように、PEGが分枝状で、それぞれ4のPEGモノマーからなる4つのアームからなることを示し(以下、「好ましいインスリン」)、例えばIRIS Biotech GMBH)、
mdPEG12-dPEG12(ここで、mdPEG12-dPEG12は、上述し、以下に例証するように、PEG残基が、mdPEG12残基とアミノ-dPEG12-酸残基とから組立られていることを示す)、
mdPEG12-dPEG24、
mdPEG24-dPEG12、
mdPEG24-dPEG24、
mdPEG24-dPEG24-dPEG24、
mdPEG3x12-dPEG12、
mdPEG3x12-dPEG24-dPEG24、
mdPEG4x4-dPEG12、又は
mdPEG4x4-dPEG24。
本発明の親プロテアーゼ安定化インスリンは、次のA14E,B25Hヒトインスリン;A14E,B25H,desB30ヒトインスリン;A14H,B25H,ヒトインスリン、及びA14H,B25H,desB30ヒトインスリンを含む。
この発明のペグ化されたプロテアーゼ安定化インスリンを調製するための一般的手順(A)
一般的手順(A)を、第1の実施例において例証する。
実施例1,一般的手順(A):
A14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG24-プロピオニル),desB30ヒトインスリン
A14E,B25H desB30ヒトインスリン(1.5g)を、0.1MのNa2CO3(34ml)に溶解させ、1NのNaOHを用い、pHを10に調節した。MeCN(16.8ml)に溶解させたmdPEG24-SPA(0.45g、Quanta BioDesign Ltd.)を添加し、混合物を1時間、ゆっくりと攪拌した。水(25ml)を添加し、1NのHClを用いて、pHを5.5に調節し、混合物を凍結乾燥した。調製用HPLC精製により、表題の化合物を得た。カラム:C18.3cm。A-バッファー:MiliQ水に0.1%のTFAが入ったもの。B-バッファー:アセトニトリルに0.1%のTFAが入ったもの。45分以上、10-55%Bの勾配。収率:650mg。
MALDI-MS(マトリックス:HCCA);m/z:6762、算出値:6762。
この化合物は、実質的に持続的な肺への有効性を有する。
A14E,B25H,B29K(Nε-3-mPEG2000-プロピオニル),desB30ヒトインスリン
MALDI-MS(マトリックス:シナピン酸);m/z:7850(広域)。
A14E,B25H,B29K(Nε3-{mPEG750}プロピオニルカルバモイル),desB30ヒトインスリン
MALDI-MS(マトリックス:シナピン酸);m/z:6570(広域)。
A14E,B25H,B29K(Nε-3-{2-[2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロピオニル),desB30ヒトインスリン
tert-ブチル-3-{2-[2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロピオナート:
トリエチレングリコールモノメチルエーテル(1.0g、6.1mmol)とtert-ブチルアクリラート(390mg、3.05mmol)を、無水THFに溶解させ、ナトリウム金属(0.7mg、0.03mmol)を室温で添加した。混合物を4時間攪拌し、1MのHClを添加して、反応をクエンチした。ジクロロメタンを用い、混合物を2回抽出物し、有機相をMgSO4上で乾燥させ、真空にて濃縮したところ、油を得、溶出液として酢酸エチルを使用するシリカクロマトグラフィーにより精製した。生成物は油、773mg(44%)であった。
LCMS m=237.1(M-tBu)。
tert-ブチル-3-{2-[2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロピオナート(131mg、0.45mmol)を、トリフルオロ酢酸に溶解させ、室温で1時間放置した。真空で溶媒を除去し、残留したトリフルオロ酢酸を、ジオキサンから蒸発させることによって除去した。脱保護された中間体をジクロロメタンに溶解させ、N-ヒドロキシスクシンイミド(57mg、0.49mmol)及びエチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドヒドロクロリド(86mg、0.45mmol)で処理し、室温で一晩攪拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、水で2回洗浄した。有機相をMgSO4上で乾燥させ、真空で濃縮し、122mg(82%)を得た。
A14E,B25H desB30インスリン(500mg、0.08mmol)を、室温で、0.1Mの炭酸ナトリウム(6ml)に溶解させた、pH10.5。3-{2-[2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロピオン酸スクシンイミジル(35mg、0.11mmol)をアセトニトリルに溶解させ、インスリン溶液に添加した。pHは10.3であった。30分後、0.1Mのメチルアミン(0.6mL)を用い、反応混合物をクエンチした。インスリン生成物を、C4カラム、A-バッファー:水に0.1%のトリフルオロ酢酸が入ったもの、B-バッファー:アセトニトリルに0.1%のTFAが入ったものによるRP-HPLCにて精製し、227mg(44%)を得た。
ES-MS;m/z:5879.6。(逆重畳(deconvoluted))
この発明のインスリン誘導体のインスリンレセプター結合性
ヒトインスリンレセプターについての、この発明のインスリン誘導体の親和性は、SPAアッセイ(シンチレーション近接アッセイ)マイクロタイタープレート抗体捕捉アッセイにより測定される。SPA-PVT抗体-結合ビーズ、抗-マウス試薬(Amersham Biosciences、カタログ番号 PRNQ0017)を、25mlの結合バッファー(100mMのHEPES、pH7.8;100mMの塩化ナトリウム、10mMのMgSO4、0.025%のトゥイーン(Tween)-20)と混合する。単一のPackard Optiplate(Packard No.6005190)用の試薬混合物は、2.4μlの1:15000に希釈された精製組換えヒトインスリンレセプター(エクソン11を有する又は有さない)、100μlの試薬混合物当たり5000cpmに相当するA14Tyr[125I]-ヒトインスリンの所定量の保存溶液、12μlの1:1000に希釈されたF12抗体、3mlのSPA-ビーズ、全体を12mlにする結合バッファーからなる。ついで、全体で100μlの試薬混合物を、Packard Optiplateの各ウェルに添加し、インスリン誘導体の希釈シリーズを、適切なサンプルからOptiplateにおいて作製する。ついで、ゆっくりと振揺させつつ、サンプルを16時間インキュベートする。ついで、1分間遠心分離することにより相分離させ、プレートをトップカウンターで計測する。GraphPad Prism 2.01(GraphPad Software, San Diego、CA)における非線状回帰アルゴリズムを使用し、結合データを適合させた。
実施例番号: インスリンレセプター結合性
Aイソ型(エクソン11なし)
ヒトインスリンに対する
1 2.2%
2 1.4%
3 3.4%
4 17%
5 10%
キモトリプシンに対する、インスリンアナログ及びヒトインスリンのタンパク質分解安定性(半減期)の比較
キモトリプシン(0.34又は3.4μg、0.1又は1μg/μLの3.4μl)に対するヒトインスリン及びインスリンアナログ(0.6mM、10μL)のタンパク質分解安定性を、100mMのNH4HCO3、pH8.1又は5mMのNaP、140mMのNaCl、70ppmのトゥイーン20、pH7.4において、37℃、最終容量100μLでインキュベートした後に測定した。種々の時間(0、5、15、30及び60分)、サンプルを、同量の0.2%TFAでクエンチし、5℃に移した。ヒトインスリン及びアナログをRP-HPLCにより、214nmで直ちに分析し、無傷タンパク質に相当するピーク下の面積を測定した。曲線から半減期(T1/2)を得、ヒトインスリンに対する増加/減少倍数を算出した(安定性の相対倍数)。
実施例番号: キモトリプシン消化に対する安定性
(ヒトインスリンに対する倍数)
1 14×
2 16×
4 11×
この発明のインスリン誘導体のラットにおける静脈内ボーラス注射後の血糖低下効果
ハイプノルム-ドルミカム(Hypnorm-Dormicum)皮下注射(1.25mg/mlのドルミカム、2.5mg/mlのフルアニソン、0.079mg/mlのクエン酸フェンタニル)を、プライミング用量(試験物質の投与前〜30分の時点)として2ml/kg、及び付加的に20分毎に1ml/kgを使用し、18時間絶食させたオスのウィスターラット、200〜300gに麻酔をかける。
動物に、1ml/kgの対照体及び試験用化合物(通常の用量範囲:0.125-20nmol/kg)を、静脈注射(尾静脈)を用いて投与する。全血糖濃度を決定するための血液サンプルを、−20分及び0分(投与前)、投与後10、20、30、40、60、80、120及び180分の時点で、尾端の毛細管の刺し傷より、ヘパリン処理された10μlのガラスチューブにて収集する。EBIO Plus自動分析器(Eppendorf, Germany)を使用する、固定化グルコースオキシダーゼ法により、分析バッファーにおいて希釈した後、血糖濃度を測定する。平均血漿グルコース濃度経過(平均±SEM)を、各用量及び各化合物について作製する。
ヒトインスリンに対するこの発明のインスリン誘導体の作用強度
実験日に238-383gのオスのスプラーグドーリーラットを、クランプ実験に使用する。制御された周囲条件下、ラットは餌に自由に接近し、クランプ実験の前には一晩(3pmから)絶食させる。
外科的処置の少なくとも1週間前に、ラットを動物施設に順化させる。クリンプ実験の約1週間前、ハロタン麻酔下で、頸静脈(注入のため)及び頸動脈(血液のサンプリングのため)にタイゴンカテーテルを挿入し、露出させ、頸部の後ろに固定する。外科手術後、ラットをStreptocilin vet.(Boehringer Ingelheim;0.15ml/ラット、筋肉内)に付与し、回復期間中、動物ケアユニット(25℃)におく。無痛覚とするために、麻酔中にアノルフィン(Anorphin)(0.06mg/ラット、皮下)を投与し、麻酔から十分に回復した後(2-3時間)、再度2日間、毎日1回、リマダイル(Rimadyl)(1.5mg/kg、皮下)を投与する。
実験日の7amに一晩(前日の3pmから)絶食させたラットを計量し、サンプリング用シリンジ及び注入システム(Harvard 22 Basic pumps, Harvard, 及びPerfectum Hypodermic glass syringe, Aldrich)につなぎ、ついで個々のクランプ用ゲージを配し、実験開始前の約45分、ラットをそこで休ませる。全実験中、それらの通常の床上を、ラットは自由に動くことができ、水を飲むために、自由に接近することもできる。血漿グルコースレベルを10分間隔で測定する、30分の基本期間後、試験されるインスリン誘導体及びヒトインスリン(ラット当たり1回の投与レベル、投与レベル当たりn=6-7)を、300分、一定の速度で注入する(静脈内)。10分の間隔で、血漿グルコースレベルを測定し、正常血糖値が維持されるように、20%水性グルコースの注入を調節する。再懸濁させた赤血球のサンプルを、各ラットからプールし、頸動脈カテーテルを介して、約1/2ml容量を戻す。
各実験日において、試験される個々のインスリン誘導体溶液及びヒトインスリン溶液のサンプルを、クリンプ実験の前及び終了時に取り出し、ペプチド濃度をHPLCにより確認する。ラットインスリン及びC-ペプチド、並びに試験されるインスリン誘導体及びヒトインスリンの血漿濃度を、研究の前及び終了の時点で測定する。ペントバルビタール過剰投与を使用し、実験の終了時にラットを殺す。
ラットへのインスリン誘導体の肺送達
試験物質は、滴下法により、肺に投与されるであろう。簡単に述べると、オスのウィスターラット(約250g)を、6.6ml/kgの皮下プライミング用量として与えた、約60mlのフェンタニル/デヒドロデンズペリドール/-ドルミカムで麻酔し、10、20、50及び95分の時点で、30分間隔での3.3ml/kgの保持用量の皮下投与を3回行う。麻酔誘導の10分後、基本サンプルを尾静脈(t=−20分)から得、続いて試験物質の投与直前(t=0)、基本サンプルを得る。t=0において、試験物質を一方の肺に、気管内部的に投与する。丸くなった端部を有する特定のカニューレを、200μlの空気と試験物質(1mg/kg)を含有するシリンジに搭載する。開口部を介して、カニューレを気管に導入し、-二分枝部を丁度通過するように、主気管支の一方に送る。挿入中、頸部を外側から触診し、気管内部の位置を確認する。シリンジの内容物を注射し、2秒中断する。その後、カニューレをゆっくりと引き抜く。試験中(4又は8時間までの血液サンプル)、ラットは麻酔がかかったままであり、実験後、安楽死させる。
スプラーグ-ドーリーラットの回腸に注射される、本発明のインスリンアナログの血糖低下効果
ハイプノルム-ドルミカム皮下注射(0.079mg/mlのクエン酸フェンタニル、2.5mg/mlのフルアニソン、及び1.25mg/mlのミダゾラム)を、プライミング用量(試験物質の投与前〜60分の時点)として2ml/kg、20分後に1ml/kg、その後40分毎に1ml/kg使用し、18時間絶食させた250-350gのオスのスプラーグ-ドーリー(SPRD)ラットに麻酔をかける。
麻酔がかけられたラットを、37℃で安定した恒温ブランケットに配する。20cmのポリエチレンカテーテルにインスリン溶液を満たし、盲腸から3-4cmの回腸に挿入する。標的セグメントの管腔内部約2cmに、カテーテル先端部が配される。0時、カテーテルを介して、0.4ml/kgの試験用又は対照化合物(通常の用量範囲は240-1440nmol/kg)を、ラットに投与する。全血糖濃度の測定のための血液サンプルを、−30及び0分(投与前)、及び10、20、30、60、100、120、180及び240分に、尾部先端の毛細血管を穿刺することにより、ヘパリン処理された10μlのキャピラリーチューブに収集する。EBIO Plus自動分析器(Eppendorf, Germany)を使用する、グルコースオキシダーゼ法により、分析バッファーにおいて希釈した後、血糖濃度を測定する。平均血糖濃度経過(平均±SEM)を、各化合物について作製する。
他の好ましいプロテアーゼ安定化された、本発明のペグ化されたインスリンは、同様に、また以下に記載するように調製されてよい。
実施例に記載されたペグ化されたプロテアーゼ安定化インスリンと同様にして調製され得る、本発明の好ましいペグ化されたプロテアーゼ安定化インスリンには、A14E,B25H,B29K(NεmdPEG12-dPEG24-プロピオニル),desB30ヒトインスリンが含まれる。
オメガ-(メトキシ-PEG11-プロパノイルアミノ)-PEG24-プロパン酸(mdPEG12-dPEG24酸)の調製
mdPEG12NHSエステル(0.457mmol、Quanta BioDesign Ltd. 製品番号10262)及びアミノ-dPEG24 tert-ブチルエステル(0.416mmol、Quanta BioDesign、製品番号10311)を、アセトニトリル(各10mL)に別々に溶解させ、ついで、2つの溶液を混合し、DIPEAを用いて、pHを8に調節した(pHの測定は湿った指標ストリップを使用して実施した)。得られた混合物を室温で一晩攪拌し、続いて、所定の乾燥度になるまで蒸発させ、その後、室温で1時間、10mLのTFA/DCM(1/1)で処理した。ついで、混合物を所定の乾燥度になるまで蒸発させ、DCMで2回取り除いた。溶離液として、アセトニトリル(AcCN)/0.1%のTFA及び水/0.1%のTFAを使用し、HPLC(2cm、C18カラム)により、残留物を精製した。勾配:5-20分は10-80%のAcCN/TFA。所望の化合物を含有するフラクションを収集し、組合せ、所定の乾燥度になるまで蒸発させたところ、油として、オメガ-(メトキシ-PEG11-プロパノイルアミノ)PEG23-プロパン酸(249mg、35%)が得られた。
LCMS:m/z:1718(M+1)+。
オメガ-(メトキシ-PEG11-プロパノイルアミノ)PEG24-プロパン酸(249mg、0.145mmol)を、アセトニトリル(10mL)に溶解させ、DIPEAを添加することにより、pHを8に調節した(pHの測定は湿った指標ストリップを使用して実施した)。アセトニトリル(10mL)にTSTU(48mg、0.16mmol)が入ったものを添加し、混合物を室温で1.5時間攪拌し、所定の乾燥度になるまで蒸発させた。残留物をDCMに溶解させ、塩酸(0.01M)で洗浄し、有機相を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、濾液を所定の乾燥度になるまで蒸発させた。得られたオメガ-(メトキシ-PEG11-プロパノイルアミノ)PEG24 プロパン酸-N−ヒドロキシスクシンイミドエステルを、さらなる精製をすることなく、インスリンへのカップリングに使用した。
LCMS:m/z 1813.8(M+1)+。
同様に、次の好ましいインスリン用の他のペグ化試薬は、同じようにして調製されてよい。
A14E,B25H,B29K(Nε(mdPEG24−イル-dPEG24-イル),desB30ヒトインスリン:
A14E,B25H,B29K(Nε(mdPEG12)3-dPEG4-イル),desB30ヒトインスリン:
A14E,B25H,B29K(Nε(mdPEG12)3-dPEG4-イル-dPEG12-イル),desB30ヒトインスリン:
A14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG4x4-プロピオニル),desB30ヒトインスリン:
A14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG4x4-dPEG12-プロピオニル),desB30ヒトインスリン:
A14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG4x4-dPEG24-プロピオニル),desB30ヒトインスリン:
配列番号:5は、実施例1-4及び12-19に関連するA鎖である。配列番号:6は実施例1-5及び12-19に関連するB1-B28鎖である。配列番号:7は実施例5に関連するA鎖である。
Claims (14)
- ペグ化されたインスリンアナログであって、娘インスリンにおいて、少なくとも2の疎水性アミノ酸が、親インスリンに対して、親水性アミノ酸で置換されており、置換が、親インスリンの2又はそれ以上のプロテアーゼ切断部位の内部又は近接近して存在しており、このような娘インスリンが一又は複数の付加的な変異をさらに有していてもよく、PEG部分が、リンカーを介して、該娘インスリンのB29位にあるリジン残基のεアミノ基に結合しているペグ化されたインスリンアナログ。
- 娘インスリンにおいて、A14位のアミノ酸がGlu又はHis(すなわち、1文字コードではE及びH)であり、B25位のアミノ酸がHisであり、場合によっては、一又は複数の付加的な変異をさらに含み、PEG部分が、リンカーを介して、B29位にあるリジン残基のεアミノ酸に結合している、ペグ化されたインスリンアナログ。
- 娘インスリンがA14E変異を有する、請求項1又は2に記載のペグ化されたインスリンアナログ。
- 娘インスリンアナログがdesB30変異を含む、請求項1ないし3のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリンアナログ。
- nが2〜約1000、好ましくは2〜約500、好ましくは2〜約250、好ましくは2〜約125、好ましくは2〜約50、好ましくは2〜約25、及び好ましくは2〜約12の範囲の整数である、部分-(OCH2CH2)n-を有する、請求項1ないし4のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリンアナログ。
- ポリエチレングリコール部分が、約200〜約40000、好ましくは約200〜約30000、好ましくは約200〜約20000、好ましくは約200〜約10000、好ましくは約200〜約5000、好ましくは約200〜約2000、好ましくは約200〜約1000、及び好ましくは約200〜約750の範囲の名目上の分子量を有する、請求項1ないし5のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリンアナログ。
- ポリエチレングリコール部分が単分散である、請求項1ないし6のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリンアナログ。
- A14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG24-プロピオニル),desB30ヒトインスリン;A14E,B25H,B29K(Nε-3-mPEG2000-プロピオニル),desB30ヒトインスリン;A14E,B25H,B29K(Nε3-{mPEG750}-プロピオニルカルバモイル),desB30ヒトインスリン;A14E,B25H,B29K(Nε-3-{2-[2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロピオニル),desB30ヒトインスリン;B25H,B29K(Nε-3-(mdPEG12)-プロピオニル)ヒトインスリン;A14E,B25H,B29K(NεmdPEG12-dPEG24-プロピオニル),desB30ヒトインスリン;A14E,B25H,B29K(Nε(mdPEG24−イル-dPEG24-イル),desB30ヒトインスリン:A14E,B25H,B29K(Nε(mdPEG12)3-dPEG4-イル),desB30ヒトインスリン:A14E,B25H,B29K(Nε(mdPEG12)3-dPEG4-イル-dPEG12-イル),desB30ヒトインスリン:A14E,B25H,B29K(Nε(mdPEG12)3-dPEG4-イル-dPEG24-イル),desB30ヒトインスリン:A14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG4x4-プロピオニル),desB30ヒトインスリン:A14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG4x4-dPEG12-プロピオニル),desB30ヒトインスリン、又はA14E,B25H,B29K(Nε-3-mdPEG4x4-dPEG24-プロピオニル),desB30ヒトインスリンである、請求項1ないし7のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリンアナログ。
- 医薬として使用される、又は製薬用調製物に使用される、請求項1ないし8のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリン。
- 糖尿病を処置するための請求項1ないし9のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリン、又は糖尿病を処置する医薬を調製するための、請求項1ないし9のいずれか1項に記載のペグ化されたインスリンの使用。
- 糖尿病を処置するために肺投与可能で、長時間の作用効果を付与する製薬用組成物を調製するための、請求項1ないし10のいずれか1項に記載の化合物の使用。
- 糖尿病を処置するために経口投与可能な製薬用組成物を調製するための、請求項1ないし10のいずれか1項に記載の化合物の使用。
- インスリンアナログに関連する請求項1ないし10のいずれか1項に記載のインスリンアナログ、又は請求項1ないし10のいずれか1項に記載の製薬用組成物を被験者に投与することを含む、被験者の高血糖症、2型糖尿病、耐糖能障害、1型糖尿病、肥満、X症候群、又は脂質代謝異常を処置、予防又は緩和する方法。
- 高血糖症、2型糖尿病、耐糖能障害、1型糖尿病、肥満、X症候群、又は脂質代謝異常を処置又は予防する製薬用製剤を調製するための、インスリンアナログに関連する請求項1ないし10のいずれか1項に記載のインスリンアナログの治療的有効量の使用。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP07112505.8 | 2007-07-16 | ||
EP07112505A EP2017288A1 (en) | 2007-07-16 | 2007-07-16 | Protease stabilized, pegylated insulin analogues |
EPPCT/EP2007/059990 | 2007-09-20 | ||
PCT/EP2007/059990 WO2008034881A1 (en) | 2006-09-22 | 2007-09-20 | Protease resistant insulin analogues |
EP08100819.5 | 2008-01-23 | ||
EP08100819 | 2008-01-23 | ||
PCT/EP2008/058881 WO2009010428A1 (en) | 2007-07-16 | 2008-07-09 | Protease stabilized, pegylated insulin analogues |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010533671A true JP2010533671A (ja) | 2010-10-28 |
JP5688969B2 JP5688969B2 (ja) | 2015-03-25 |
Family
ID=39791363
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010516460A Expired - Fee Related JP5688969B2 (ja) | 2007-07-16 | 2008-07-09 | プロテアーゼに対して安定しているペグ化インスリンアナログ |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20100216691A1 (ja) |
EP (1) | EP2170945A1 (ja) |
JP (1) | JP5688969B2 (ja) |
CN (1) | CN101743252A (ja) |
WO (1) | WO2009010428A1 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017505141A (ja) * | 2014-01-20 | 2017-02-16 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 長時間作用型インスリンおよびその使用 |
JP2017518298A (ja) * | 2014-05-30 | 2017-07-06 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | インスリン及びglp−1/グルカゴン二重アゴニストを含む糖尿病治療用組成物 |
JP2017521377A (ja) * | 2014-05-29 | 2017-08-03 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 持続型インスリンアナログ結合体及び持続型インスリン分泌ペプチド結合体を含む糖尿病治療用組成物 |
US10647753B2 (en) | 2015-08-28 | 2020-05-12 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analogs and use thereof |
US11396534B2 (en) | 2016-09-23 | 2022-07-26 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analogs with reduced affinity to insulin receptor and use thereof |
US11752216B2 (en) | 2017-03-23 | 2023-09-12 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101541830A (zh) | 2006-09-22 | 2009-09-23 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 蛋白酶抗性的胰岛素类似物 |
ES2563038T3 (es) | 2007-04-30 | 2016-03-10 | Novo Nordisk A/S | Método para secar una composición proteica, una composición proteica seca y una composición farmacéutica que comprende la proteína seca |
ES2618073T3 (es) | 2008-03-14 | 2017-06-20 | Novo Nordisk A/S | Análogos de insulina estabilizados frente a proteasas |
EP2910571B1 (en) | 2008-03-18 | 2016-10-05 | Novo Nordisk A/S | Protease stabilized, acylated insulin analogues |
ES2561208T3 (es) * | 2008-09-12 | 2016-02-25 | Novo Nordisk A/S | Método de acilación de un péptido o una proteína |
UA108475C2 (uk) | 2009-07-31 | 2015-05-12 | Санофі-Авентіс Дойчланд Гмбх | Композиція інсуліну тривалої дії |
JP5738291B2 (ja) * | 2009-07-31 | 2015-06-24 | サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | インスリンリンカー複合体を含むプロドラッグ |
EP2438930A1 (en) | 2010-09-17 | 2012-04-11 | Sanofi-Aventis Deutschland GmbH | Prodrugs comprising an exendin linker conjugate |
CN102675452B (zh) * | 2011-03-17 | 2015-09-16 | 重庆富进生物医药有限公司 | 具持续降血糖和受体高结合的人胰岛素及类似物的偶联物 |
CN102293748B (zh) * | 2011-07-25 | 2013-02-13 | 华南理工大学 | 一种口服聚乙二醇化胰岛素pH敏感纳米粒及其制备方法 |
CN102504022A (zh) * | 2011-11-30 | 2012-06-20 | 苏州元基生物技术有限公司 | 含有保护赖氨酸的胰岛素原及使用其制备胰岛素的方法 |
CA2870313A1 (en) | 2012-04-11 | 2013-10-17 | Novo Nordisk A/S | Insulin formulations |
PT2963056T (pt) * | 2013-02-26 | 2020-02-19 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Análogo de insulina e utilização do mesmo |
WO2015052088A1 (en) | 2013-10-07 | 2015-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel derivative of an insulin analogue |
EP2896400A1 (en) | 2014-01-17 | 2015-07-22 | Université Catholique De Louvain | Method for increasing the bioavailability of inhaled compounds |
MX2019006463A (es) | 2016-12-16 | 2019-08-14 | Novo Nordisk As | Composiciones farmaceuticas que contienen insulina. |
CA3122637A1 (en) | 2018-12-11 | 2020-06-18 | Sanofi | Peptide binder |
CN118420744A (zh) | 2019-12-30 | 2024-08-02 | 甘李药业股份有限公司 | 胰岛素衍生物 |
CN115867308A (zh) * | 2020-05-15 | 2023-03-28 | 伊莱利利公司 | 延时作用的酰化胰岛素化合物 |
WO2022268208A1 (zh) | 2021-06-25 | 2022-12-29 | 甘李药业股份有限公司 | 含酰化胰岛素的药物组合物 |
CN118574842A (zh) | 2022-01-28 | 2024-08-30 | 甘李药业股份有限公司 | 酰化胰岛素 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03506023A (ja) * | 1988-07-20 | 1991-12-26 | ノボ ノルデイスク アクツイエセルスカプ | ポリペプチド |
JP2003104913A (ja) * | 2001-06-04 | 2003-04-09 | Nobex Corp | ポリアルキレングリコールを含む薬物−オリゴマー結合体の混合物、その使用及びその製造方法 |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US487000A (en) | 1892-11-29 | Shirt | ||
US4546082A (en) | 1982-06-17 | 1985-10-08 | Regents Of The Univ. Of California | E. coli/Saccharomyces cerevisiae plasmid cloning vector containing the alpha-factor gene for secretion and processing of hybrid proteins |
US4870008A (en) | 1983-08-12 | 1989-09-26 | Chiron Corporation | Secretory expression in eukaryotes |
NZ222907A (en) | 1986-12-16 | 1990-08-28 | Novo Industri As | Preparation for intranasal administration containing a phospholipid absorption enhancing system |
DK463887D0 (da) | 1987-09-07 | 1987-09-07 | Novo Industri As | Gaerleader |
DK105489D0 (da) | 1989-03-03 | 1989-03-03 | Novo Nordisk As | Polypeptid |
US5424286A (en) | 1993-05-24 | 1995-06-13 | Eng; John | Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same |
DK82893D0 (da) | 1993-07-08 | 1993-07-08 | Novo Nordisk As | Peptid |
US5639642A (en) | 1994-06-16 | 1997-06-17 | Novo Nordisk A/S | Synthetic leader peptide sequences |
ZA954983B (en) | 1994-06-17 | 1996-02-14 | Novo Nordisk As | N-terminally extended proteins expressed in yeast |
US6500645B1 (en) | 1994-06-17 | 2002-12-31 | Novo Nordisk A/S | N-terminally extended proteins expressed in yeast |
JP3149958B2 (ja) | 1996-08-30 | 2001-03-26 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | Glp―1誘導体 |
AU5549998A (en) | 1997-01-24 | 1998-08-18 | Novo Nordisk A/S | Synthetic leader peptide sequences |
US6310038B1 (en) * | 1997-03-20 | 2001-10-30 | Novo Nordisk A/S | Pulmonary insulin crystals |
ATE466027T1 (de) | 1998-02-27 | 2010-05-15 | Novo Nordisk As | Abkömmlinge von glp-1 analogen |
DE69941510D1 (de) | 1998-08-10 | 2009-11-19 | Us Gov Nat Inst Health | Differenzierung von nicht-insulin in insulin-produzierende zellen durch glp-1 und exendin-4 und dessen verwendung |
US7030083B2 (en) * | 1998-09-09 | 2006-04-18 | University Of Washington | Treatment of eclampsia and preeclampsia |
US6867183B2 (en) * | 2001-02-15 | 2005-03-15 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
US6770625B2 (en) * | 2001-09-07 | 2004-08-03 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of calcitonin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith |
US7030082B2 (en) | 2001-09-07 | 2006-04-18 | Nobex Corporation | Pharmaceutical compositions of drug-oligomer conjugates and methods of treating disease therewith |
UA103758C2 (ru) * | 2004-07-19 | 2013-11-25 | Биокон Лимитед | Конъюгаты олигомеров инсулина, их композиции и применение |
WO2006079641A2 (en) * | 2005-01-27 | 2006-08-03 | Novo Nordisk A/S | Insulin derivatives conjugated with structurally well defined branched polymers |
WO2006082205A1 (en) * | 2005-02-02 | 2006-08-10 | Novo Nordisk A/S | Insulin derivatives |
-
2008
- 2008-07-09 EP EP08785992A patent/EP2170945A1/en not_active Ceased
- 2008-07-09 JP JP2010516460A patent/JP5688969B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-07-09 CN CN200880024805A patent/CN101743252A/zh not_active Withdrawn
- 2008-07-09 US US12/669,189 patent/US20100216691A1/en not_active Abandoned
- 2008-07-09 WO PCT/EP2008/058881 patent/WO2009010428A1/en active Application Filing
-
2011
- 2011-11-29 US US13/306,411 patent/US8987197B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03506023A (ja) * | 1988-07-20 | 1991-12-26 | ノボ ノルデイスク アクツイエセルスカプ | ポリペプチド |
JP2003104913A (ja) * | 2001-06-04 | 2003-04-09 | Nobex Corp | ポリアルキレングリコールを含む薬物−オリゴマー結合体の混合物、その使用及びその製造方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN5010011742; JOURNAL OF PROTEIN CHEMISTRY Vol.11, No.5, 199210, p.571-577 * |
JPN5010011743; ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS Vol.54, No.4, 20020617, p.505-530 * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017505141A (ja) * | 2014-01-20 | 2017-02-16 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 長時間作用型インスリンおよびその使用 |
JP2017521377A (ja) * | 2014-05-29 | 2017-08-03 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 持続型インスリンアナログ結合体及び持続型インスリン分泌ペプチド結合体を含む糖尿病治療用組成物 |
JP2020143155A (ja) * | 2014-05-29 | 2020-09-10 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 持続型インスリンアナログ結合体及び持続型インスリン分泌ペプチド結合体を含む糖尿病治療用組成物 |
JP7014515B2 (ja) | 2014-05-29 | 2022-02-01 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 持続型インスリンアナログ結合体及び持続型インスリン分泌ペプチド結合体を含む糖尿病治療用組成物 |
JP2017518298A (ja) * | 2014-05-30 | 2017-07-06 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | インスリン及びglp−1/グルカゴン二重アゴニストを含む糖尿病治療用組成物 |
JP2020164534A (ja) * | 2014-05-30 | 2020-10-08 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | インスリン及びglp−1/グルカゴン二重アゴニストを含む糖尿病治療用組成物 |
US10647753B2 (en) | 2015-08-28 | 2020-05-12 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analogs and use thereof |
US11396534B2 (en) | 2016-09-23 | 2022-07-26 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analogs with reduced affinity to insulin receptor and use thereof |
US11752216B2 (en) | 2017-03-23 | 2023-09-12 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5688969B2 (ja) | 2015-03-25 |
US20120071402A1 (en) | 2012-03-22 |
EP2170945A1 (en) | 2010-04-07 |
US8987197B2 (en) | 2015-03-24 |
CN101743252A (zh) | 2010-06-16 |
US20100216691A1 (en) | 2010-08-26 |
WO2009010428A1 (en) | 2009-01-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5688969B2 (ja) | プロテアーゼに対して安定しているペグ化インスリンアナログ | |
JP5550338B2 (ja) | ペグ化持続型インスリン | |
US9035020B1 (en) | Insulins with an acyl moiety comprising repeating units of alkylene glycol containing amino acids | |
US11167035B2 (en) | Insulin compositions and method of making a composition | |
US9242011B2 (en) | Insulin albumin conjugates | |
EP2256129B1 (en) | Insulin derivatives | |
US9150633B2 (en) | Insulin analogues with an acyl and alkylene glycol moiety | |
JP5749155B2 (ja) | プロテアーゼ安定化アシル化インスリンアナログ | |
US20100216690A1 (en) | Pegylated Single-Chain Insulin | |
EP2017288A1 (en) | Protease stabilized, pegylated insulin analogues | |
WO2008084051A1 (en) | Mixtures of pegylated insulin and fast acting insulin for pulmonary administration |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110704 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130618 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130911 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130919 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131007 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131015 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131218 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140715 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141117 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20141126 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150106 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150127 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5688969 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |