JP2010533129A - 部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体 - Google Patents

部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体 Download PDF

Info

Publication number
JP2010533129A
JP2010533129A JP2010511476A JP2010511476A JP2010533129A JP 2010533129 A JP2010533129 A JP 2010533129A JP 2010511476 A JP2010511476 A JP 2010511476A JP 2010511476 A JP2010511476 A JP 2010511476A JP 2010533129 A JP2010533129 A JP 2010533129A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
ala
cys
sct
site
salmon calcitonin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2010511476A
Other languages
English (en)
Other versions
JP5529014B2 (ja
Inventor
克良 ▲劉▼
建坤 ▲ちえ▼
志霞 ▲揚▼
▲遠▼▲軍▼ 梁
▲いん▼ 王
▲澤▼▲輝▼ ▲宮▼
▲華▼▲進▼ 董
Original Assignee
中国人民解放▲軍▼▲軍▼事医学科学院毒物▲薬▼物研究所
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 中国人民解放▲軍▼▲軍▼事医学科学院毒物▲薬▼物研究所 filed Critical 中国人民解放▲軍▼▲軍▼事医学科学院毒物▲薬▼物研究所
Publication of JP2010533129A publication Critical patent/JP2010533129A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP5529014B2 publication Critical patent/JP5529014B2/ja
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/585—Calcitonins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本発明は、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類、前記類似体又は前記塩類の調製方法、前記類似体又は前記塩類を含んだ医薬組成物、及び、例えば骨粗鬆症等の骨代謝と付随する疾患の治療又は予防に対する薬物の調製のための前記類似体又は前記塩類の使用に関する。

Description

本発明は、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体、該類似体の調製方法、該類似体を含んだ医薬組成物、並びに、例えば骨粗鬆症及び骨痛等の骨代謝と付随する疾患の治療に対する該類似体の使用に関する。
カルシトニンは、哺乳動物の甲状腺傍濾胞細胞（Ｃ細胞）によって、又は、魚類及び鳥類等の脊椎動物のさい後体によって分泌される。カルシトニンは、３２個のアミノ酸残基を含有する一本鎖ポリペプチド化合物の一種であり、ｉｎ ｖｉｖｏでのリン酸カルシウム代謝を維持する重要なホルモンの一つである。カルシトニンは、主に、骨吸収を阻止し、血中カルシウムのレベルを低くするといった行動をとる。異なる属から単離される天然カルシトニンは、アミノ酸残基の構成成分という点でいくらか異なるけれども、その全てが、以下の、１，７−位置のＮ末端のシステイン及びＣ末端のプロリンアミド基によって形成されるジチオ環構造という構造特徴を分子に含む。魚類等の脊椎動物によって分泌される天然カルシトニンは最も高い活性を示し、一方、哺乳動物によって分泌される天然カルシトニンは比較的低い活性を示し、例えば、サケカルシトニン（ｓＣＴ、一次配列は、Ｈ−シクロ−（Ｃｙｓ１−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ５−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ７）−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ１１−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ１６−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ２１−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ２６−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ３０−Ｔｈｒ３１−Ｐｒｏ−ＮＨ２））の活性は、ヒトカルシトニン（ｈＣＴ）の活性よりも３０倍高い。カルシトニンは骨粗鬆症を効果的に防ぐことができ、同時に、骨粗鬆症を被る患者の骨痛及びアネルギー等の症状を緩和することができる。現在、ｓＣＴ、ｈＣＴ、及び、ウナギカルシトニン（ｅＣＴ）の合成類似体が、老人及び閉経後の女性の骨粗鬆症、パジェット病、高カルシウム血症、並びに、骨粗鬆症又は骨腫瘍により生じる骨痛の治療のために診療所において主に使用される。
Ｓａｎｄｏｚ Ｃｏ．社によって開発されたｓＣＴは、閉経後の女性の骨粗鬆症等の治療のために主に使用され、エストロゲン禁忌を有する患者及び骨粗鬆症を被る男性患者にも適し、その注入は、Ｍｉａｃａｌｃｉｃという商品名で１日あたり１０〜２０μｇという通常用量で、１９８６年にはアメリカ合衆国においてすでに市場に出ていた。ｓＣＴは、アデニレートシクラーゼ（ｃＡＭＰ）を活性化することができた。ｃＡＭＰは、破骨細胞における１つの重要なセカンドメッセンジャーとして破骨細胞に対する阻害作用に関与することが研究によって実証された。ｓＣＴは、ヒト骨芽細胞に対しても作用し、骨芽細胞の増殖及び分化をシミュレートすることができた。血中カルシウム及びリンのレベルを下げるというｓＣＴの作用は、骨カルシウムの血中カルシウムへの形質転換を阻止することによって主に引き起こされた。同時に、ｓＣＴは、尿及び胆汁におけるカルシウム及びリンの排出を促進し、消化管におけるカルシウム及びリンイオンの吸収を阻止することもできた。さらに、ｓＣＴは、大脳及び視床下部におけるカルシトニン受容体と特異的に結合し、中枢性鎮痛効果を媒介することもできた。
しかし、天然ｓＣＴは、ｉｎ ｖｉｖｏでの酵素性分解によって容易に不活性化する恐れがあり、比較的短い作用時間を有しているため、非経口的に投与しなければならない。天然ｓＣＴは、酵素だけでなく溶液においても比較的乏しい安定性を有しており、これは、誰かが考えるように、そのジチオ環に関連している場合がある。従って、治療効果を得るために、診療所において天然ｓＣＴは、しばしば長い間注射によって投与されなければならず、その結果、治療に対する患者の服薬率が低くなり、治療の質が下がる。さらに、ジチオ環の存在のため、カルシトニンの合成は比較的困難でその費用は上がるため、得られる薬は高価すぎて患者に受け入れられない。
異なるカルシトニンの活性に関して、ジチオ環は異なる作用を持つことが実験によって証明された。ｓＣＴのジチオ環は、その活性に対して必要な基ではなく、直鎖状の類似体、すなわち、１，７−ジチオ環のないｓＣＴ類似体は、好ましい生理活性を保持したままでいることができた。直鎖状のサケカルシトニン類似体（以下にｓＣＴ（Ｌ）と呼ぶ）の合成は、より容易になり、その費用は削減された。さらに、ポリペプチド薬物は、ペグ化後に、優れた生理活性を保持したままでいることができ、生物において著しく長い半減期を有することができたということが研究によって実証された。現在、ｓＣＴのペグ化はすでに報告されている。３つの部位でペグ化された生成物の代謝半減期がｓＣＴの半減期（４．８分）よりもはるかに長い、すなわち、Ｎ末端にてペグ化された生成物の代謝半減期が１２５．５分であり、Ｌｙｓ１１にてペグ化された生成物の代謝半減期が１５７．３分であり、Ｌｙｓ１８にてペグ化された生成物の代謝半減期が２８１．５分でことが、腎臓ホモジネートにおける代謝を研究することによって発見された（ＫＣ Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１９９９，１６：８１３−８１８）。さらに、Ｌｙｓ１８のε−アミノでのｓＣＴの部位特異的なペグ化も報告された（ＹＳ Ｙｏｕｎ，ｅｔ ａｌ，Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，２００５，１０（３）：３８９−３９６；Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２００６，１１４（３）：３３４−３４２；２００７，１１７（３）：３７１−３７９）。
従って、ペプチド薬物の作用時間を長くする、生物学的利用率を上げる等の能力があるＰＥＧの特徴によって、反応特異的な化学修飾方法を使用した直鎖状のｓＣＴ類似体における正確な部位特異的なモノペグ化を行うことが可能である。従って、反応の特異性を上げるために、直鎖状のｓＣＴ類似体は、反応特異的な官能基を含んだアミノ酸残基を含むべき、または、再導入されるべきである。直鎖状のｓＣＴ類似体の調製は、当技術分野におけるいかなる従来の技術、好ましくは化学合成方法も使用することによって実行することができる。
本発明の目的は、例えば骨粗鬆症等の骨の疾患の治療に対する長時間作用性の薬剤及び製剤の開発を支持するペグ化されたｓＣＴ（Ｌ）類似体の一種を提供することである。
本発明における１つの目的は、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体を提供することであり、それは、アミノ基、カルボキシル基、又は、メルカプト基１つのみが側鎖上に残るよう直鎖状のサケカルシトニン類似体のアミノ酸配列における特定のアミノ酸残基を変え、前記アミノ基、カルボキシル基、又は、メルカプト基に対して部位特異的なペグ化を行うことによって得られる。本発明の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体は、以下に与えられ規定された化学式（１）、化学式（３）、又は、化学式（４）の構造を有している。
本発明の別の目的は、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体を調製する方法を提供することである。
本発明は、さらに、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体のうちの少なくとも一種、又は、その立体異性体若しくは薬剤的に容認できる塩類、及び、薬剤的に容認できる媒体又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。
本発明は、さらに、例えば骨粗鬆症及び骨痛等の、骨代謝に付随する疾患又は症状の治療及び予防に対する薬物を調製するための、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体の使用に関する。
本発明の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体は、以下の化学式（１）：
Figure 2010533129
の構造を有しており、
式中、
ＰＥＧは、ＲＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、ＲはＨ又はＣＨ３、ｎは２５〜２５００であり；
Ｍは、
Figure 2010533129
であり；
Ｃｙｓはシステインであり、直鎖状のサケカルシトニン類似体のいかなる部位にも位置することができ、前記部位は、Ｎ末端、Ｃ末端、及び、配列内のいかなる部位も含み；
ｓＣＴ（Ｌ）は、以下の構造特徴：
Ａａ１−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａａ２−Ａａ３−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａａ４−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａａ５−Ａａ６−Ａａ７−Ａａ８−Ｐｒｏ−Ａａ９−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａａ１０−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ２を有した、直鎖状のサケカルシトニンペプチド類似体であり、
式中、
Ａａ１は、Ｃｙｓ、ＡｃｍＣｙｓ、Ｎ−α−プロピノル−Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐから選択される非極性アミノ酸であり；
Ａａ２は、Ｃｙｓ、ＡｃｍＣｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐから選択される非極性アミノ酸であり、Ａａ１及びＡａ２が両方Ｃｙｓであるということはなく；
Ａａ３は、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａから選択される非極性アミノ酸であり；
Ａａ４は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎから選択されるアミノ酸であり；
Ａａ５は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｃｙｓ、Ｖａｌ、Ｇｌｙから選択されるアミノ酸であり；
Ａａ６は、Ｈｉｓ、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇから選択されるアミノ酸であり；
Ａａ７は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎから選択されるアミノ酸であり；
Ａａ８は、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−、−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｃｙｓから選択され；
Ａａ９は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｃｙｓから選択されるアミノ酸であり；
Ａａ１０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏから選択されるアミノ酸である。
特に明記されない限り、前記アミノ酸のうち全てがＬ−アミノ酸である。
本発明における１つの好ましい実施形態によると、化学式（１）中の前記ｓＣＴ（Ｌ）は、以下の構造特徴：
Ａａ１は、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌであり；
Ａａ２は、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａであり、Ａａ１及びＡａ２が両方Ｃｙｓであるということはなく；
Ａａ３は、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａであり；
Ａａ４は、Ｌｙｓ、Ａｒｇであり；
Ａａ５は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｃｙｓであり；
Ａａ６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇであり；
Ａａ７は、Ｌｙｓ、Ａｒｇであり；
Ａａ８は、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−であり；
Ａａ９は、Ａｒｇ、Ｈｉｓであり；
Ａａ１０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａである；
を有している。
特に明記されない限り、前記アミノ酸のうち全てがＬ−アミノ酸である。
本発明における１つのさらなる好ましい実施形態によると、化学式（１）中の前記ｓＣＴ（Ｌ）は、以下の構造特徴：
Ａａ１は、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌであり；
Ａａ２は、Ｃｙｓであり；
Ａａ３は、Ｖａｌ、Ｇｌｙであり；
Ａａ４は、Ｌｙｓであり；
Ａａ５は、Ｌｅｕ、Ａｌａであり；
Ａａ６は、Ｈｉｓであり；
Ａａ７は、Ｌｙｓであり；
Ａａ８は、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−であり；
Ａａ９は、Ａｒｇであり；
Ａａ１０は、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａである；
を有している。
特に明記されない限り、前記アミノ酸のうち全てがＬ−アミノ酸である。
本発明の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体は、以下の化学式（３）：
Figure 2010533129
の構造も有することができ、
式中、
ＰＥＧは、ＲＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、ＲはＨ又はＣＨ３、ｎは２５〜２５００であり；
ＸはＯ、ＮＨ、又はＮＨＣＯであり；
ｍは０〜６であり；
ｚは１であり；
Ｃｙｓはシステインであり、直鎖状のサケカルシトニン類似体のいかなる部位にも位置することができ、前記部位は、Ｎ末端、Ｃ末端、及び、配列内のいかなる部位も含み；
ｓＣＴ（Ｌ）は、直鎖状のサケカルシトニンペプチド類似体であり、その規定及び好ましい実施形態は化学式（１）で記述されたものと同じである。
化学式（３）の部位特異的なペグ化をされたｓＣＴ（Ｌ）直鎖状のサケカルシトニン類似体は、ｓＣＴ（Ｌ）に導入された末端アミノ基、リジンアミノ基、ヒスチジンアミノ基、又は、他のアミノ基とのカルボキシル活性基、アルデヒド基、イソシアノ基、イソチオチアノ基等を有するペグ化試薬の共有結合反応によって得られる。
本発明の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体は、以下の化学式（４）：
Figure 2010533129
の構造も有することができ、
式中、
ＰＥＧは、ＲＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、ＲはＨ又はＣＨ３、ｎは２５〜２５００であり；
ＸはＯ、ＮＨ、又はＮＨＣＯであり；
ｚは１であり；
Ｃｙｓはシステインであり、直鎖状のサケカルシトニン類似体のいかなる部位にも位置することができ、前記部位は、Ｎ末端、Ｃ末端、及び、配列内のいかなる部位も含み；
ｓＣＴ（Ｌ）は、直鎖状のサケカルシトニンペプチド類似体であり、その規定及び好ましい実施形態は化学式（１）で記述されたものと同じである。
化学式（４）の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体は、ｓＣＴ（Ｌ）に導入された末端カルボキシル基、アスパラギン酸カルボキシル基、グルタミン酸カルボキシル基、又は、他のカルボキシル基とのカルボキシル活性基、アミノ基等を有するペグ化試薬の共有結合反応によって得られる。
部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体は、直鎖状のアミノ酸配列内のいかなるアミノ酸残基もシステインと置換し、次に、ｍＰＥＧ−ＭＡＬ、ＰＥＧ−ＶＳ、又は、ＰＥＧ−ＩＯＤＯで修飾することによって得られた化合物をさらに含む。
本発明によると、以下の部位特異的なペグ化の能力がある直鎖状のサケカルシトニン類似体が好ましい。
Figure 2010533129
本発明によると、以下の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体が好ましい。
Figure 2010533129
本発明の化合物は、アミノ酸がＦｍｏｃ−／ｔＢｕ−又はＢｏｃ／Ｂｚｌ−によって保護され、連結モードが、配列内でＮ末端をＣ末端に連結すること、又は、第一に断片を合成して、次に、その断片を連結することを含む、固相ポリペプチド合成方法、液相ポリペプチド合成方法、及び、固相−液相ポリペプチド合成方法を含めた従来のポリペプチド合成方法を使用することによって調製される。固相合成方法では、アミド末端を形成する能力がある種々の樹脂（例えば、ＭＢＨＡ、ＰＡＬ、Ｒｉｎｋ、アミド樹脂等）が支持体として使用され、種々の一般的な縮合剤（例えば、ＤＣＣ／ＨＯＢＴ、ＢＯＰ／ＤＩＥＡ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ、ＴＢＴＵ等）が縮合反応を行うために使用され、次に、その反応の完了後、トリフルオロ酢酸又は無水ＨＦが樹脂から得られたポリペプチドを分離するために使用される。ペグ化試薬とのポリペプチドの連結は、反応液のｐＨを適切に調節し、ＲＰ−ＨＰＬＣによってペグ化された生成物をモニターしながら、水溶液又はリン酸緩衝液内で行われ、次に、最終的な生成物が分離及び精製され、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって決定される。
本発明による好ましい化合物の一部は、動物の血中カルシウムレベルを下げることに対して比較的効果があり、同時に、動物におけるｉｎ ｖｉｖｏでの予備活性調査において長時間作用性の能力を示す。
本発明は、さらに、活性成分として効果的な量の少なくとも１つのペグ化されたポリペプチド及び／又はその立体異性体若しくはその生理学的に非毒性の塩類、並びに、薬剤的に容認できる媒体又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。「薬剤的に容認できる媒体又は賦形剤」という用語は、本明細書において使用される場合、いかなる１つ又は全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤若しくは抗真菌剤、等張及び徐放剤、並びに、類似の生理学的に適合性のある製剤を含み、それらは、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、又は、他の非経口的な経路による投与に適していることが好ましい。投与経路に従い、活性化合物を被覆して、酸又は他の自然条件の影響下での不活性化から前記活性化合物を保護することができる。
「生理学的に非毒性の塩類」という用語は、本明細書において使用される場合、予想外の有毒な副作用は産生しないけれども期待された親化合物の生理活性を保持する能力がある塩類、又は、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、安息香酸塩、パモ酸塩、アルギン酸塩、メシル酸塩、ナプシル酸塩（ｎａｐｓｙｌａｔｅ）等、前記塩類を含んだ組成物を意味している。含有された陽イオンに従い、前記塩類は、カリウム塩、リチウム塩、亜鉛塩、銅塩、バリウム塩、ビスマス塩、カルシウム塩等の無機酸塩、及び、トリアルキルアンモニウム塩等の有機酸塩にも分けることができる。
本発明のペグ化されたポリペプチド化合物及びその立体異性体、又は、前記化合物を含んだ医薬組成物は、例えば、経口投与、筋肉内投与、皮下投与、経鼻投与等、いかなる既知の経路においても投与することができる。投与剤形には、錠剤、カプセル剤、バッカル錠剤、咀嚼剤、エリキシル剤、懸濁剤、経皮剤、マイクロカプセル剤、植込錠、シロップ等が含まれる。投与剤形は、一般的な製剤、徐放性製剤、放出制御製剤、及び、種々の微粒子送達システムであり得る。単位用量形態を錠剤に調製するために、当技術分野において周知の種々の生分解性又は生体適合性媒体を広く使用することができる。前記媒体の例には、生理食塩水及び種々の緩衝溶液、エタノール又は他のポリオール、リポソーム、ポリ乳酸、ビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリ（オルトエステル）等が挙げられる。
本発明のペグ化されたポリペプチド化合物の投与量は、予防又は治療されることになる疾患の性質及び重症度の程度；患者又は動物の性別、年齢、体重、感受性、及び、個々の反応；使用される特定の化合物；投与経路；投与頻度、並びに、得られると期待される治療効果等、種々の要因次第である。上記の用量は、単一用量という形、又は、例えば２、３、４回用量等、複数用量という形で投与することができる。
本発明に使用される略語は、以下の意味：

ｓＣＴ−サケカルシトニン
ＰＥＧ−ポリエチレングリコール
Ａｌａ−アラニン
Ａｒｇ−アルギニン
Ａｓｎ−アスパラギン
Ｃｙｓ−システイン
Ｇｌｎ−グルタミン
Ｇｌｕ−グルタミン酸
Ｇｌｙ−グリシン
Ｈｉｓ−ヒスチジン
Ｌｅｕ−ロイシン
Ｌｙｓ−リジン
Ｐｒｏ−プロリン
Ｓｅｒ−セリン
Ｔｈｒ−スレオニン
Ｔｙｒ−チロシン
Ｖａｌ−バリン
Ｆｍｏｃ−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＤＭＦ−ジメチルホルムアミド
ＤＣＣ−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＨＢＴＵ−２−（１Ｈ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）−１，１，３，３−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＴＦＡ−トリフルオロ酢酸
ＥＤＴ−メルカプトエタノール
ＲＰ−ＨＰＬＣ−逆相高速液体クロマトグラフィ
を持つ。
本発明をさらに例示するために、以下の実施例及び生物活性実験が使用されるが、いかなる方法においても本発明を限定するよう理解されるべきではない。
実施例において固相合成に対して支持体として使用されるＭＢＨＡ樹脂及びＰＡＭ樹脂は、Ｔｉａｎｊｉｎ Ｎａｎｋａｉ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．社によって製造され；ＤＣＣ、ＨＯＢＴ、ＢＯＰ、ＤＩＥＡ、及びＦｍｏｃにより保護された天然アミノ酸は、ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｌｔｄ．社及びＳｕｚｈｏｕ Ｔｉａｎｍａ Ｎｅｗ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．社によって製造される。
[Ｄ−Ａｌａ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄ−Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１２）の合成。
ステップ１：[Ｄ−Ａｌａ１、Ｃｙｓ７、Ｄ−Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１）の固相合成
２５０ｍｇのＭＢＨＡ樹脂（０．１２ｍｍｏｌ）を固相支持体として、Ｆ−ｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを原料として、さらに、ＤＣＣ−ＨＯＢｔを縮合剤として使用し、直鎖状のｓＣＴのアミノ酸配列に従いスタンダードなＦｍｏｃ固相ポリペプチド合成方法によってポリペプチド樹脂を合成した。そのポリペプチドを、分離溶液としての１０ｍｌの無水ＨＦと１時間０℃で反応させることによって樹脂から分離した。得られた粗ポリペプチドを水に溶解し凍結乾燥させて、４００ｍｇの白い乾燥粉末を得た。得られた粗ポリペプチドを、ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製し、Ｂｉｏ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙによって３４１５．５２という分子量及び１１．９分という保持時間を有していると決定された。
ステップ２：ペグ化試薬とのポリペプチドの反応
ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した[Ｄ−Ａｌａ１、Ｃｙｓ７、Ｄ−Ａｌａ３０]ｓＣＴを、水に溶解し、ｐＨが７〜８になるまでリン酸緩衝液で調整し、適切な量のｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬをそこに添加した。次に、反応過程及びＲＰ−ＨＰＬＣによって分離された生成物をモニターしながら、当該システムを室温にて反応させた。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されるように、その生成物は、８５５０というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．６５分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１３）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、３２８７．３８という分子量及び８．１３分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８４６５というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．１６分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１６（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１４）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、２８９６．１２という分子量及び７．８７分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８２９２というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．０１分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｇｌｎ１１，１８、Ｃｙｓ１６（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１５）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、２８９６．３０という分子量及び８．５６分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８２９５というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．２６分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１６）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、２９３７．３３という分子量及び８．８７分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、７９０７というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１１．８２分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１７）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、３３３０．８という分子量及び１０．６６分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８４７６というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．３８分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｇｌｎ１８、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１８）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド化合物は、２９３８．３０という分子量及び９．５４分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８０３３というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１１．１０分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｇｌｎ１１、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物１９）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、２９３８．２３という分子量及び８．９５分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、７８９９というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．４３分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｇｌｎ１１，１８、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物２０）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、２９３７．４４という分子量及び９．４７分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８３３６というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．６９分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１９（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−２０−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物２１）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、３００８．４８という分子量及び８．７７分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８０５５というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．３６分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１９（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−２０−２１、Ａｌａ３０]ｓＣＴ（化合物２２）の合成。
合成方法は、実施例１で記述されたものと同一であった。
得られたペプチド類似体は、３１７１．５２という分子量及び９．４６分という保持時間を有した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって分析されたように、得られたペグ化された生成物は、８２９６というＭｎ、４４という２つの隣接するピークの分子量における差、ポリエチレングリコールの典型的な構造特徴、及び、１３．５３分というＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を示した。
カルシウム低下活性に対する評価
ｓＣＴ（Ｌ）及びそのペグ化された類似体のカルシウム低下活性度を、文献に記載された方法（Ｑｉａｎ Ｄｅｍｉｎｇ，Ｓｈｅｎ Ｇｅｎｑｕａｎ，Ｋｅ Ｒｕｏｌｕｎ；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓａｙ ｏｆ Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｂｙ Ｂｌｏｏｄ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｒａｔｓ，ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＡＮＡＬＹＳＩＳ，１９９４，１４（３）：３０−３４を参照）に従い皮下注射を介してネズミの腹部にそれらを投与することによって決定した。
サケカルシトニンの参照活性度は４５００ＩＵ／ｍｇである一方、決定された活性結果を以下のように列挙した。
Figure 2010533129
表中の化合物１〜１１は、それぞれ、実施例１〜１１で合成したペグ化されていない直鎖状のサケカルシトニン類似体であった。
表３からわかるように、直鎖状のサケカルシトニン類似体及びそのペグ化された類似体は全て、効果的なカルシウム低下活性を示した。
ペグ化されたｓＣＴ（Ｌ）類似体の長時間作用性の能力に対する調査。
表３の化合物１２を例とした。
体重が２５０〜２８０ｇで１６週齢の雌のウィスターラット６０匹を、６つの群：擬似去勢した（ｐｓｅｕｄｏ−ｃａｓｔｒａｔｅｄ）対照群（１０匹のネズミ）；去勢した対照群（１０匹のネズミ）；カルシトニン群（１０匹のネズミ、週２回、１回あたり１ｋｇの体重につき０．０３６μｇ）；化合物１２の低用量群（１０匹のネズミ、週２回、１回あたり１ｋｇの体重につき０．２１６μｇ）；化合物の高用量群（１０匹のネズミ、週２回、１回あたり１ｋｇの体重につき１．０８μｇ）；及び、化合物の高用量群（１０匹のネズミ、週１回、１回あたり１ｋｇの体重につき１．０８μｇ）；に無作為に分けた。前記群のそれぞれにおいて皮下投与を与えた。実験中、前記群のそれぞれにおけるネズミは、自由に、スタンダードな固体の飼料を餌にし、水を飲んだ。週１回投与された化合物１２の高用量群を除いて、投与６週目に血液試料を他の群におけるネズミの眼縁部からそれぞれ採取し、オステオカルシン、血清カルシウム、及び、アルカリホスファターゼの決定を受けさせた（表４）。投与１２週目の終わりには、オステオカルシン、血清カルシウム、及び、アルカリホスファターゼ（表５）に加えて、前記群のそれぞれにおけるネズミの腰椎、脛骨、及び、大腿骨の骨密度を決定した（表６）。
Figure 2010533129
Figure 2010533129
Figure 2010533129
表４、５、及び６からわかるように、投与６及び１２週目には、化合物１２の高用量群は、ネズミの骨代謝に対する影響に関連する実験における正の対照ｓＣＴ群に実質的に同等であった。１２週間続いた骨密度に対する影響に関連する実験中、化合物１２の高用量群及び正の対照ｓＣＴ群は、どちらもネズミの腰椎の骨密度を上げ；さらに、（週１回投与した）ペグ化された化合物の高用量群は、腰椎の骨密度に対して、（週２回投与した）カルシトニン（ｓＣＴ）群と比較して実質的に同等の影響を発揮した。結果は、ペグ化されたｓＣＴ（Ｌ）の長時間作用性の能力を示している。

Claims (20)

  1. Ｎ末端、Ｃ末端、及び、配列内のいかなる部位も含めた直鎖状のサケカルシトニン[ｓＣＴ（Ｌ）]のいかなる部位においてもペグ化が生じ得る、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  2. 前記ペグ化がモノペグ化である、請求項１に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  3. 前記ＰＥＧが、２，０００から１００，０００に及ぶ分子量を有する、請求項１又は２に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  4. 前記ＰＥＧが、５，０００から６０，０００に及ぶ分子量を有する、請求項３に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  5. 請求項１又は２に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類であって、以下の化学式（５）：
    Figure 2010533129
    の構造を有し、
    式中、
    ＰＥＧは、ＲＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、ＲはＨ又はＣＨ３、ｎは２５〜２５００であり；
    Ｍは、
    Figure 2010533129
    であり；
    Ｃｙｓはシステインであり、前記直鎖状のサケカルシトニン類似体のいかなる部位にも位置することができ、前記部位は、Ｎ末端、Ｃ末端、及び、配列内のいかなる部位も含み；
    ｓＣＴ（Ｌ）は、直鎖状のサケカルシトニンペプチド類似体である；
    部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  6. 請求項５に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類であって、化学式（５）における前記ｓＣＴ（Ｌ）が、以下の構造特徴：
    Ａａ１−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａａ２−Ａａ３−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａａ４−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａａ５−Ａａ６−Ａａ７−Ａａ８−Ｐｒｏ−Ａａ９−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａａ１０−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ２を有し、
    式中、
    Ａａ１は、Ｃｙｓ、ＡｃｍＣｙｓ、Ｎ−α−プロピノル−Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐから選択される非極性アミノ酸であり；
    Ａａ２は、Ｃｙｓ、ＡｃｍＣｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐから選択される非極性アミノ酸であり、Ａａ１及びＡａ２が両方Ｃｙｓであるということはなく；
    Ａａ３は、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａから選択される非極性アミノ酸であり；
    Ａａ４は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎから選択されるアミノ酸であり；
    Ａａ５は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｃｙｓ、Ｖａｌ、Ｇｌｙから選択されるアミノ酸であり；
    Ａａ６は、Ｈｉｓ、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇから選択されるアミノ酸であり；
    Ａａ７は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎから選択されるアミノ酸であり；
    Ａａ８は、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−、−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｃｙｓから選択され；
    Ａａ９は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｃｙｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ａａ１０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏから選択されるアミノ酸であり；
    特に明記されない限り、前記アミノ酸のうち全てがＬ−アミノ酸である、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  7. 請求項６に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類であって、
    Ａａ１は、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌであり；
    Ａａ２は、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａであり、Ａａ１及びＡａ２が両方Ｃｙｓであるということはなく；
    Ａａ３は、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａであり；
    Ａａ４は、Ｌｙｓ、Ａｒｇであり；
    Ａａ５は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｃｙｓであり；
    Ａａ６は、Ｈｉｓ、Ａｒｇであり；
    Ａａ７は、Ｌｙｓ、Ａｒｇであり；
    Ａａ８は、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−、−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−であり；
    Ａａ９は、Ａｒｇ、Ｈｉｓであり；
    Ａａ１０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａであり；
    特に明記されない限り、前記アミノ酸のうち全てがＬ−アミノ酸である、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  8. 請求項７に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類であって、
    Ａａ１は、Ｄ−Ａｌａ、Ｖａｌであり；
    Ａａ２は、Ｃｙｓであり；
    Ａａ３は、Ｖａｌ、Ｇｌｙであり；
    Ａａ４は、Ｌｙｓであり；
    Ａａ５は、Ｌｅｕ、Ａｌａであり；
    Ａａ６は、Ｈｉｓであり；
    Ａａ７は、Ｌｙｓであり；
    Ａａ８は、−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−であり；
    Ａａ９は、Ａｒｇであり；
    Ａａ１０は、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａであり；
    特に明記されない限り、前記アミノ酸のうち全てがＬ−アミノ酸である、部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  9. （１）[Ｄ−Ａｌａ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄ−Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （２）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （３）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１６（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （４）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｇｌｎ１１，１８、Ｃｙｓ１６（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （５）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （６）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−１９、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （７）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｇｌｎ１８、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （８）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｇｌｎ１１、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （９）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｇｌｎ１１，１８、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （１０）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１９（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−２０−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；及び
    （１１）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１９（ｍＰＥＧ５０００−ＭＡＬ）、Ｄｅｓ−２０−２１、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    から選択される、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  10. 部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類であって、以下の化学式（７）：
    Figure 2010533129
    の構造を有し、
    式中、
    ＰＥＧは、ＲＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、ＲはＨ又はＣＨ３、ｎは２５〜２５００であり；
    ＸはＯ、ＮＨ、又はＮＨＣＯであり；
    ｍは０〜６であり；
    ｚは１であり；
    Ｃｙｓはシステインであり、直鎖状のサケカルシトニン類似体のいかなる部位にも位置することができ、前記部位は、Ｎ末端、Ｃ末端、及び、配列内のいかなる部位も含み；
    ｓＣＴ（Ｌ）は、直鎖状のサケカルシトニンペプチド類似体である；
    部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  11. 部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類であって、以下の化学式（８）：
    Figure 2010533129
    の構造を有し、
    式中、
    ＰＥＧは、ＲＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、ＲはＨ又はＣＨ３、ｎは２５〜２５００であり；
    ＸはＯ、ＮＨ、又はＮＨＣＯであり；
    ｚは１であり；
    Ｃｙｓはシステインであり、直鎖状のサケカルシトニン類似体のいかなる部位にも位置することができ、前記部位は、Ｎ末端、Ｃ末端、及び、配列内のいかなる部位も含み；
    ｓＣＴ（Ｌ）は、直鎖状のサケカルシトニンペプチド類似体である；
    部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  12. 前記ｓＣＴ（Ｌ）が、請求項６乃至８のいずれか一項に記載のｓＣＴ（Ｌ）である、請求項１０又は１１に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  13. （１）[Ｄ−Ａｌａ１、Ｃｙｓ７、Ｄ−Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （２）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７、Ｄｅｓ−１９、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （３）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１６、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−１９−２２]ｓＣＴ；
    （４）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｇｌｎ１１，１８、Ｃｙｓ１６、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−１９−２２]ｓＣＴ；
    （５）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７、Ｄｅｓ−１９−２２、Ａｌａ３０]ｓＣＴ；
    （６）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−１９]ｓＣＴ；
    （７）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７、Ｇｌｎ１８、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−１９−２２]ｓＣＴ；
    （８）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７、Ｇｌｎ１１、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−１９−２２]ｓＣＴ；
    （９）[Ｖａｌ１、Ｃｙｓ７、Ｇｌｎ１１，１８、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−１９−２２]ｓＣＴ；
    （１０）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１９、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−２０−２２]ｓＣＴ；及び
    （１１）[Ｖａｌ１、Ａｌａ７、Ｃｙｓ１９、Ａｌａ３０、Ｄｅｓ−２０−２１]ｓＣＴ；
    から選択される、直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類。
  14. 前記直鎖状のサケカルシトニン類似体における部分的なアミノ酸が非存在であり得る、請求項１乃至１３のいずれか一項に記載の直鎖状のサケカルシトニン類似体、又は、その部位特異的なペグ化をされた類似体若しくはその薬剤的に容認できる塩類。
  15. 前記直鎖状のアミノ酸配列におけるいかなるアミノ酸残基もシステインと置換することができる、請求項１乃至１３のいずれか一項に記載の直鎖状のサケカルシトニン類似体、又は、その部位特異的なペグ化をされた類似体若しくはその薬剤的に容認できる塩類。
  16. 請求項１乃至１５のいずれか一項に記載の直鎖状のサケカルシトニン類似体、又は、その部位特異的なペグ化をされた類似体若しくはその薬剤的に容認できる塩類、及び、薬剤的に容認できる媒体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
  17. 骨代謝に付随する疾患及び症状の治療又は予防に対する薬物を調製するための、請求項１乃至１５のいずれか一項に記載の部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類の使用。
  18. 前記骨代謝に付随する疾患が、老人及び閉経後の女性の骨粗鬆症、パジェット病、高カルシウム血症、又は、骨粗鬆症若しくは骨腫瘍により生じる骨痛である、請求項１７に記載の使用。
  19. 骨代謝に付随する疾患及び症状の治療又は予防に対する薬物を調製するための、請求項１３乃至１５のいずれか一項に記載の直鎖状のサケカルシトニン類似体又はその薬剤的に容認できる塩類の使用。
  20. 前記骨代謝に付随する疾患が、老人及び閉経後の女性の骨粗鬆症、パジェット病、高カルシウム血症、又は、骨粗鬆症若しくは骨腫瘍により生じる骨痛である、請求項１９に記載の使用。
JP2010511476A 2007-06-12 2008-06-04 部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体 Expired - Fee Related JP5529014B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200710110970.7 2007-06-12
CN200710110970 2007-06-12
PCT/CN2008/001093 WO2008151512A1 (en) 2007-06-12 2008-06-04 Site-specific pegylated linear salmon calcitonin derivatives

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2010533129A true JP2010533129A (ja) 2010-10-21
JP5529014B2 JP5529014B2 (ja) 2014-06-25

Family

ID=40129224

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2010511476A Expired - Fee Related JP5529014B2 (ja) 2007-06-12 2008-06-04 部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体

Country Status (4)

Country Link
US (1) US9464128B2 (ja)
EP (1) EP2168602A4 (ja)
JP (1) JP5529014B2 (ja)
WO (1) WO2008151512A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2168602A4 (en) * 2007-06-12 2014-10-29 Inst Pharm & Toxicology Amms LINEAR, PEGYLATED, SITE-SPECIFIC SALMON CALCITONIN DERIVATIVES
CN102911266B (zh) * 2011-08-04 2016-08-24 中肽生化有限公司 新型鲑鱼降钙素类似物及其制备方法和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1167114A (zh) * 1997-04-30 1997-12-10 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 不含二硫键的鲑鱼和鳗鱼降钙素类似物及其制备方法
JP2003507344A (ja) * 1999-08-17 2003-02-25 パク，ミュング−オク 生体適合性ポリマーと接合されたペプチドの経鼻粘膜デリバリー
WO2007054030A1 (fr) * 2005-11-10 2007-05-18 Institute Of Pharmacology And Toxicology Academy Of Military Medical Sciences P.L.A. China Modifications polyethylene glycole de thymosine alpha-1

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3519361A1 (de) * 1985-05-30 1986-12-04 Boehringer Ingelheim International GmbH, 6507 Ingelheim (gamma)-ifn als wirkstoff zur hemmung (verhinderung) von abbauprozessen im knochen
US5364840A (en) * 1989-12-05 1994-11-15 Vical, Inc. Synthetic calcitonin peptides
US7056882B2 (en) * 1991-03-11 2006-06-06 Curis, Inc. Treatment to prevent loss of and/or increase bone mass in metabolic bone diseases
FR2675807B1 (fr) * 1991-04-23 1994-07-01 Medgenix Group Sa Conjugue de calcitonine et de polyethylene glycol.
TW432073B (en) * 1995-12-28 2001-05-01 Pfizer Pyrazolopyridine compounds
EP1001970B1 (en) * 1997-06-25 2007-03-07 Pfizer Inc. Dipeptide derivatives as growth hormone secretagogues
WO2004065412A1 (en) * 2003-01-18 2004-08-05 Pegsphere Co., Ltd. Peptides having protected amines of untargeted sites, methods for production thereof and of specifically conjugated peg peptides using the same
CN1532206A (zh) * 2003-03-21 2004-09-29 中国人民解放军军事医学科学院毒物药 胸腺素α1的活性片段及其聚乙二醇化衍生物
CN100372870C (zh) * 2003-03-21 2008-03-05 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 胸腺素α1的聚乙二醇化衍生物
CN102174084B (zh) * 2004-12-01 2015-11-18 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 胸腺素α1活性片段环肽类似物及其聚乙二醇化衍生物
EP2168602A4 (en) * 2007-06-12 2014-10-29 Inst Pharm & Toxicology Amms LINEAR, PEGYLATED, SITE-SPECIFIC SALMON CALCITONIN DERIVATIVES

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1167114A (zh) * 1997-04-30 1997-12-10 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 不含二硫键的鲑鱼和鳗鱼降钙素类似物及其制备方法
JP2003507344A (ja) * 1999-08-17 2003-02-25 パク，ミュング−オク 生体適合性ポリマーと接合されたペプチドの経鼻粘膜デリバリー
WO2007054030A1 (fr) * 2005-11-10 2007-05-18 Institute Of Pharmacology And Toxicology Academy Of Military Medical Sciences P.L.A. China Modifications polyethylene glycole de thymosine alpha-1

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6013031792; Ｃｈｅｍ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ． ｖｏｌ．５２，　ｎｏ．８, 2004, ｐｐ．９５７-９６０ *
JPN6013031793; Ｊ．　Ｃｏｎｔｒｏｌ．　Ｒｅｌｅａｓｅ ｖｏｌ．１１７，　ｎｏ．３, 200702, ｐｐ．３７１-３７９ *
JPN6013031795; Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ ｖｏｌ．３３，　ｎｏ．８, 1998, ｐｐ．６１０-６１５ *
JPN6013031798; Ｃｈｉｎ．　Ｃｈｅｍ．　Ｌｅｔｔ． ｖｏｌ．１０，　ｎｏ．７, 1999, ｐｐ．５５５-５５８ *
JPN6013057388; Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｖｏｌ．２２，　ｎｏ．５, 2001, ｐｐ．４０５-４１７ *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2168602A1 (en) 2010-03-31
WO2008151512A1 (en) 2008-12-18
EP2168602A4 (en) 2014-10-29
JP5529014B2 (ja) 2014-06-25
US20100227815A1 (en) 2010-09-09
US9464128B2 (en) 2016-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2557654C2 (ru) Терапевтические агенты для снижения уровней паратиреоидного гормона
CA2603630C (en) Modified exendins and uses thereof
AU2008257448B9 (en) Unacylated ghrelin as therapeutic agent in the treatment of metabolic disorders
JP4541899B2 (ja) ラクタム架橋を有する、コンホメーションが制限された副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）アナログ
CZ20023496A3 (cs) Modulátory receptorů pro hormon příštítných tělísek a protein příbuzný s hormonem příštítných tělísek
BG103957A (bg) Паратиреоиден хормон
JP2013537879A (ja) 部位特異的ｐｅｇ修飾エキセンディン−４アナログ及びその使用
AU2004298424A1 (en) Novel GLP-1 compounds
WO1996028475A1 (fr) Facteur de croissance des hepatocytes modifie a l'aide de polyethylene glycol
TW201305219A (zh) 胜肽衍生物
WO2021068550A1 (en) Active polypeptide compound
US5783558A (en) Parathormone fragments, their preparation and medicaments containing these
JP2015503512A (ja) 強力なアゴニスト作用を有する新規なｇｈ−ｒｈ類似体
CA2511966A1 (en) Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein
BG65137B1 (bg) Антагонистични аналози на gh-rh инхибиращи igf-i и -ii
WO1997038014A1 (en) Fibulin pharmaceutical compositions and related methods
CA3174635A1 (en) Peptides as selective gip receptor agonists
JP5529014B2 (ja) 部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体
JP2009545320A (ja) 副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）のポリペプチド誘導体
AU2007313001B2 (en) Pegylated PTH as PTH receptor modulators and uses thereof
CA3230915A1 (en) New peptides as potent and selective gip receptor agonists
TWI344964B (en) Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor
TW200817439A (en) PTH receptor modulators and uses thereof
CN1657540A (zh) 人甲状旁腺素（1－34）的聚乙二醇化衍生物，含有它们的药物组合物及用途
JP2000159795A (ja) ペプチド誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20110530

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20130702

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20131001

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20131126

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20140224

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20140401

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20140416

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 5529014

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees