JP2010532766A - バイオフィルムに対する免疫学的治療 - Google Patents
バイオフィルムに対する免疫学的治療 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010532766A JP2010532766A JP2010515320A JP2010515320A JP2010532766A JP 2010532766 A JP2010532766 A JP 2010532766A JP 2010515320 A JP2010515320 A JP 2010515320A JP 2010515320 A JP2010515320 A JP 2010515320A JP 2010532766 A JP2010532766 A JP 2010532766A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- composition
- polypeptide
- porphyromonas gingivalis
- biofilm
- subject
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
【選択図】なし
Description
本発明は、歯周病の予防的治療を含む、被験体を治療する方法を提供する。歯周病は、単一の歯肉の炎症から、歯を支持する軟組織及び骨に大きな損傷を引き起こす重度の疾患までに及ぶ。歯周病は、歯肉炎(gingivitis)及び歯周炎(periodontitis)を含む。歯肉の周縁における口腔細菌の蓄積は、「歯肉炎」と呼ばれる歯肉の炎症を引き起こす。歯肉炎では、歯肉が赤くなり、膨潤し、容易に出血することがある。歯肉炎を治療しないと、「歯周炎」(「歯の周囲の炎症」を意味する)に進行することがある。歯周炎では、歯肉が歯から離れ、感染の対象となる「ポケット」を形成する。歯周炎は、病因となる主要な作用因子とみなされるポルフィロモナス・ジンジバリスによる特定の細菌性病因を有する。歯垢が歯肉線の下に広がり成長するにつれて、身体の免疫系は細菌と戦う。治療しないと、歯を支持する骨、歯肉及び結合組織が破壊される。歯は最終的に緩くなり、抜かなければならない場合がある。
Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Met;
Asp、Glu、Ser;
Asn、Gln;
Ser、Thr;
Lys、Arg、His;
Phe、Tyr、Trp、His;及び
Pro、Nα−アルキル(alkal)アミノ酸。
ポルフィロモナス・ジンジバリスW50(ATCC53978)を、400mLの作業容積を有するmodel C−30 BioFlo chemostat(New Brunswick Scientific)を使用する連続培養で増殖させた。培養容器及び培地貯蔵槽の両方を、10%CO2及び90%N2で連続的に通気した。増殖温度は37℃であり、脳心臓点滴増殖培地(Oxoid)をpH7.5に維持した。全増殖を通じて、酸化還元電位は−300mVに維持した。希釈率は0.1h−1であり、6.9hの平均世代時間(MGT)をもたらした。滅菌システイン−HCl(0.5g/L)及びヘミン(5mg/L)を添加した。培養は接種後約10日で定常状態に到達し、バイオフィルムの厚層が容器の垂直面上に発達するまでさらに30日間維持した。
ヘム制限及びヘム過剰の研究のためのポルフィロモナス・ジンジバリスの増殖及び回収
400mLの作業容積を有するBioflo 110 fermenter/bioreactor(New Brunswick Scientific)を使用して、ポルフィロモナス・ジンジバリスW50を連続培養で増殖させた。増殖培地は、5mg/mLの濾過滅菌した塩酸システイン、5.0μg/mLのヘミン(ヘム過剰)又は0.1μg/mLのヘミン(ヘム制限)を添加した37g/Lの脳心臓点滴培地(Oxoid)であった。同一培地(ヘム過剰)中で増殖させたポルフィロモナス・ジンジバリスの24時間バッチ培養液(100mL)を培養容器に接種することにより増殖を開始した。24時間のバッチ培養増殖後、培地貯蔵槽ポンプを作動させて、培地流を調整して、0.1h−1の希釈率(6.9時間の平均世代時間(MGT))をもたらした。容器の温度を37℃に維持し、pHを7.4±0.1に維持した。95%N2中の5%CO2で、培養液を連続的に通気した。定常状態増殖時に細胞を回収し、5000gで30分間、洗浄緩衝液(50mM トリス−HCl(pH8.0)、150mM NaCl、5mM MgCl2)で3回洗浄し、138MPaでFrench Pressure Cell(SLM、AMINCO)を3回通過させることにより破砕した。次に溶解した細胞を2000gで30分間遠心分離して、破壊されていない細胞を除去し、その後100000gで超遠心分離して、可溶性(上清)画分及び膜画分を生成した。全ての分画を氷上で実施した。
18Oタンパク質分解標識化バイオフィルム細胞及び浮遊細胞の外被画分の調製及び分析
細胞外被画分を、最初に、2%SDSを含有する氷冷した洗浄緩衝液1mL中に再懸濁し、その後ペレットの再懸濁を促すために超音波処理及びボルテックス処理を実施した。再懸濁における最終工程は、粒子の破砕を助けるための29ゲージのインスリンニードルの使用を含んでいた。混合物をその後40000gで遠心分離して不溶性粒子を除去し、上清のタンパク質濃度を製造業者の取扱説明書に従ってBCA reagent(Pierce)を使用して決定した。
ICAT標識化ヘム制限細胞及び過剰細胞の調整及び分析
タンパク質の標識化及び分離は、cleavable ICAT reagent(Applied Biosystems)を使用するgeLC−MS/MSアプローチ(Li et al., 2003)を基礎にした。別のプロテオームアプローチは、国際出願PCT/AU2007/000890号明細書(参照により本明細書中で援用される)において行われている。TCA(16%)を使用してタンパク質を先ず沈殿させて、6M 尿素、5mM EDTA、0.05% SDS、及び50mM トリス−HCl(pH8.3)を使用して可溶化した。BCAタンパク質試薬を使用してタンパク質濃度を決定し、1mg/mlに調整した。各増殖条件由来のタンパク質100μgを、個々に、50mMのトリス(2−カルボキシ−エチル)ホスフィン塩酸塩2μLを使用して、37℃で1時間、還元した。次にヘム制限増殖条件由来の還元タンパク質をICATheavy試薬で、ヘム過剰増殖条件由来のタンパク質をICATlight試薬でアルキル化した。次に2つの試料を組み合わせ、プレキャストNovex 10%NUPAGEゲル(Invitrogen)上におけるSDS−PAGEに供した。ゲルを、SimplyBlue(商標)SafeStain(Invitrogen)を使用して5分間染色し、その後、水で脱染した。次に、ゲルレーンを、ゲルの上部から色素の前面まで、切除して20個の切片とした。
トランスクリプトーム解析のための核酸の抽出
RNAを、ケモスタットから直接回収したポルフィロモナス・ジンジバリス細胞の5mLの試料から抽出した。各試料に0.2倍量のRNA安定化試薬(無水エタノール中の5%v/vフェノール)を添加した。細胞を、遠心分離(9000g、5分間、25℃)によりペレットにし、直ぐに液体窒素中で凍結し、後の処理のために−70℃で保存した。凍結した細胞を、細胞数1×1010個当たり1mLのTRIzol reagent(Invitrogen)中に懸濁し、その後Lysing Matrix B glass beads(MP Biomedicals)及びPrecellys 24 homogeniser(Bertin Technologies、France)を使用して破砕した。ガラスビーズを遠心分離により除去し、RNA沈殿段階でイソプロパノールではなくエタノールを(最終濃度35%で)添加した以外はTRIzolの製造業者(Invitrogen)のプロトコルに従ってRNA画分を精製し、その後Illustra RNAspin Mini RNA Isolation kit(GE Healthcare)から入手したスピンカラムに試料を移した。任意の残りのDNAを除去するためのオンカラムDNAse処理を含む前方への結合工程から、製造業者の取扱説明書に従ってRNAを精製した。RNAの完全性を、Experion自動化電気泳動ステーション(Bio-Rad)を使用して決定した。
マイクロアレイの設計、ハイブリダイゼーション及び解析
マイクロアレイスライドは、オーストラリアゲノム研究所(Australian Genome Research Facility)によりプリントされ、ロスアラモス国立研究所Oralgenプロジェクト(Los Alamos National Laboratory Oralgen project)により予測された付加的なタンパク質コード領域を含むポルフィロモナス・ジンジバリスW83ゲノムの予測タンパク質コード領域に関する1977個の特注設計の60−merオリゴヌクレオチドプローブから成るものであった。強度依存性の正規化の助けとするために、マイクロアレイ試料プール(MSP)対照プローブを含むものとした。Corning UltraGAPSコーティングスライド上へ、マイクロアレイスライド1枚当たり3回、総数のプローブをプリントした。
DNAマイクロアレイ解析を使用して決定した、ヘム制限に対するポルフィロモナス・ジンジバリスの応答
ポルフィロモナス・ジンジバリスの全体的な遺伝子発現に及ぼすヘム制限増殖の影響のDNAマイクロアレイ解析を、プロテオーム解析のために採用した同一の増殖条件下で実施した。3つの生物学的反復測定からのデータ解析により、ヘム過剰とヘム制限との間において統計的に有意な差示的な調節を示す総数160種類の遺伝子が同定され、これらの遺伝子の大部分はヘム制限の条件下で発現レベルの増大を示し、下向き調節されたのは8種類の遺伝子のみであった。上向き調節された遺伝子の多くはオペロン中に存在すると予測され、これらの大部分は転写レベルで同様の変化を示した(表3及び表5)。ヘム制限に対する差示的な調節が観察された場合には、トランスクリプトームデータとプロテオームデータとの間に広範な一致が存在し、2つのデータ組の間に有意な相関が存在した[Spearmanの相関 0.6364、p<0.05]。しかしプロテオーム解析からの存在量の差異を示す幾つかのタンパク質に関しては、対応する遺伝子のトランスクリプトーム解析は、mRNAの存在量においては統計的に有意な差異を全く検出しなかった。マイクロアレイ解析は、プロテオーム解析により決定されたような存在量の大きな変化を有するタンパク質をコードするこれらの遺伝子のみを同定する傾向があった(表3及び表5)。タンパク質と同じ遺伝子からの転写産物とがヘム制限により有意に調節されることが見出された場合には、その大部分は同じ調節方向を示した。例外は、PG0026(CTDファミリー推定細胞表面プロテイナーゼ)及びPG2132(フィンブリリン(FimA))という2種類の遺伝子産物であった。これらのタンパク質は、ヘム制限下でプロテオーム解析では存在量が減少したが、トランスクリプトーム解析により上向き調節されることが予測された。これらのタンパク質の両方が細胞表面に位置し、細胞表面から放出されるか、又は翻訳後に修飾され、それがプロテオーム解析において上向き調節されたと同定されることを妨げた可能性が非常に高い。
連続培養及びバイオフィルム形成
ポルフィロモナス・ジンジバリスW50を40日の期間にわたる連続培養で培養し、その間該培養液の細胞密度は、最初の10日目の後は一定のままであり、生物学的反復測定1及び2について、OD650はそれぞれ2.69±0.21及び2.80±0.52であった。これは1mL当たり〜3mgの細胞乾燥重量の細胞密度に等しい。この期間中、ポルフィロモナス・ジンジバリス細胞のバイオフィルムが、発酵槽容器の垂直ガラス壁上に発達した。このバイオフィルムは、回収の時点で〜2mmの厚さであった。
BSAを使用する16O/18O定量法のバリデーション
16O/18Oの定量法の正確度及び再現性を決定するために、既知量のBSAを隣接ゲルレーンにロードし、その比を1:1、1:2、1:5及び10:1とした。(図1B)。H2 16O又はH2 18Oの存在下でバンドをゲル内トリプシン消化に供し、混合し、その後LC MALDI−MS/MSにより分析した。単一のBSAトリプシンペプチドに関するスペクトルの典型的な組は、4つの比を通じて2つの18O原子の選択的組込みを示し、そのことは10:1のBSA比において+4Daピークが優勢であることにより最も明らかに見られ、1:1スペクトルにおけるほぼ対象的な二重ピーク(doublet)により、定量及び同定の両方を単純化する(図1A)。単一の18O原子の平均的組込みは、1:1標識化を基準として7%未満であると評価された(補足表)。全ての同定されたBSAペプチドに関して算出された平均比は、1:1(三連)、2:1(及び1:2)、1:5及び10:1の比に関してそれぞれ0.98±0.12、2.22±0.26、4.90±0.75及び10.74±2.04であり、良好なダイナミックレンジと、±2%〜11%の高い正確度と、11.75%〜18.95%の範囲の低いCVを示した(表1)。1:1混合物(三連で行った)の再現的正確度(reproducible accuracy)は、標識化の偏りが非常に低かったことを示唆する。このことを、両方の実験で同定したペプチドのみを使用して、2:1の比での通常の及び逆の標識化BSAを比較することによりさらに確認した。通常の比は2.11±0.33と決定されたのに対して、逆の比は2.30±0.20と決定された(表1)。
バイオフィルム試料及び浮遊試料の定量的分析のための実験デザイン
本研究のデザインは、2つの独立した連続培養であり、各々の培養液を容器の壁から得たバイオフィルム試料と容器の流体内容物から得た浮遊試料とに分割する、2つの生物学的反復測定結果の使用を含むものとした。各生物学的反復測定に関して2つの技術的反復測定を行い、本発明者らはBSAでは顕著な標識化の偏りが存在しないことを示したが、複雑な生物学的試料に対しては16O/18O標識化の確認研究は行われていないので、本発明者らは逆標識化戦略を利用することを選択した(30)。したがって全部で4つの実験があり、各々が、2×10個のゲル切片から生じる10回のLC−MALDI MS/MSの運転から成っていた。
浮遊及び成熟バイオフィルムポルフィロモナス・ジンジバリス細胞の細胞外被プロテオーム
本発明者らは、実験手順の節で説明した選択基準に基づき、1582種類のペプチドから116種類のタンパク質の相対存在量を同定及び決定した。同定したタンパク質のうち、73.3%は3種類以上の特有のペプチドにより同定され、12.9%は1種類の特有のペプチドからではあるが両方の生物学的反復測定において同定され、13.8%は50超のMascotペプチドイオンスコアを有する1種類の特有のペプチドによってのみ同定された(図5)。CELLO(36)は、これらのタンパク質の77.6%が細胞外被由来であることを予測し、それによりこの細胞外被集積方法の有効性を示した。TIGR(www.tigr.org)及びORALGEN口腔病原体配列データベース(www.oralgen.lanl.gov)によるバイオインフォマティクス分類は、同定したタンパク質の大部分が輸送に関与すること、タンパク質分解活性を有すること、又は細胞代謝機能を有することを予測した。興味深いことに、同定した全タンパク質の55%は、機能が未知のものであった。
協調した調節を示す代謝経路の酵素
グルタミン酸/アスパラギン酸の異化に関与する20種類のタンパク質を、ICAT標識化戦略を使用するヘム制限対ヘム過剰の研究において同定した(表3)。これらのうち、グルタミン酸の酪酸への異化に直接関与する8つの工程のうちの6つを触媒する酵素が同定され、ヘム制限下で1.8倍〜4倍増大したことが見出された(表3)。他の2種類の触媒酵素(PG0690(4−ヒドロキシ酪酸CoA−トランスフェラーゼ)及びPG1066(酪酸−アセト酢酸CoA−トランスフェラーゼ))はICATを使用して検出されなかったが、それらは別々の定量的研究において、表3で報告したこれらのタンパク質に匹敵する高いイオン強度で存在し(示していない)、上向き調節されることが示されたオペロンに属することが見出された。一方、アスパラギン酸異化経路の酵素の存在量に及ぼすヘム制限の影響は混合的であり、酸化的分解経路においてアスパラギン酸のオキサロ酢酸への分解を触媒する酵素は変化せず、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する酵素は2倍〜4.4倍の増大を示した。
有機酸最終生成物の分析
ヘム制限下で増殖したポルフィロモナス・ジンジバリスの使用済みの培養培地中の酢酸、酪酸及びプロピオン酸の量は、それぞれ、細胞乾燥重量1g当たり13.09ミリモル±1.82ミリモル、7.77ミリモル±0.40ミリモル及び0.71ミリモル±0.05ミリモルであった。ヘム過剰下で増殖したポルフィロモナス・ジンジバリスの使用済みの培養培地中の酢酸、酪酸及びプロピオン酸のレベルは、それぞれ、細胞乾燥重量1g当たり6.00ミリモル±0.36ミリモル、6.51ミリモル±0.04ミリモル及び0.66ミリモル±0.07ミリモルであった。
ポルフィロモナス・ジンジバリスの連続培養
本研究ではポルフィロモナス・ジンジバリスW50を、より伝統的な方法論であるバッチ培養とは対照的に、連続培養で培養した。バッチ培養は、バッチ間の変数(例えば、接種菌液の大きさ及び生存度、細菌の回収時の厳密な増殖段階、培地中における利用可能な栄養素のレベル、並びに培地の酸化還元電位等の因子)のために、細菌分析に広い範囲及び程度の変化を導入する。連続培養では細菌は、増殖速度、細胞密度、栄養素濃度、温度、pH及び酸化還元電位を含む厳密に制御された条件下で、多世代にわたり増殖する(44、47、48)。過去の研究は、様々な研究室においてケモスタット中で連続培養したサッカロミセス・セレビシエのトランスクリプトーム解析の高レベルの再現性を実証した(49)。さらに本発明者らの研究では、バイオフィルム細胞及び浮遊細胞の両方の増殖が単一の発酵容器中で実施され、分離培養と比較して変動(variability)が低減した。本研究で見られた同定したタンパク質(1及び2に順位付けされた)の86.4%の生物学的反復測定の間におけるポルフィロモナス・ジンジバリス細胞外被タンパク質存在量の一貫した変化は、ポルフィロモナス・ジンジバリスのプロテオームに及ぼすバイオフィルム増殖の影響の解析に対する、連続培養システムと、16O/18Oタンパク質分解標識化戦略との利用可能性を例示する。
18O標識化の効率
本研究で採用した基礎的なプロテオミクスの方法は、SDS−PAGE法がもたらす膜タンパク質の高い分解能及び溶解性のために、geLC MS法であった(46、50)。この方法は、他者が説明した(26〜29)手順と同様のゲル内消化手順時に、単一の18O標識化反応と組み合わされた。効率的な標識化は、各ペプチドのC末端への2個の18O原子の組込みをもたらすものであり、16Oとの再交換(back-exchange)に抵抗性を有するものと考える。これは、単一の18O原子の組込みのレベルが7%未満であると評価され、様々なBSA実験に関して得られた平均比が16Oを有意に選好しないことが見出された(表1)、本発明者らのBSAでの研究におけるケースであることが見出され、通常の水との再交換は問題ではないことが示唆された。同様の結果が、生物学的試料に関しても得られた。効率的な18O標識化のための重要なステップには、「一回消化(single-digestion)」法を採用するトリプシン消化の前の、天然のH2 16Oの完全な除去と、その後のH2 18O中でのタンパク質の再可溶化とが必要であった。多数の研究が「二回消化(double digestion)」法を使用している(51、52)が、二回消化法ではトリプシンペプチドの中には初回の消化後に18O原子の代わりにそのC末端の16O原子のいずれかを交換することができないものがあったので、一回消化法は、より高い18O標識化の効率をもたらすという利点を有する(53)。本発明者らは、任意の標準的なゲル内消化プロトコルのように、有機溶媒を使用する初期脱水工程時にゲルマトリクス中にタンパク質を保持するゲル内消化法をさらに利用した。任意の微量天然H2 16Oの完全な除去は、初期凍結乾燥工程時のさらなる吸着ロスを防止するためにタンパク質がまだゲルマトリクス内に存在する状態で、真空下での遠心分離による凍結乾燥を介して達成した。またH2 18O中で再構成した大過剰のトリプシンを含有するH2 18O中で再水和及びゲル内消化を実施した。消化手順時に、第1の18O原子の組込み後にゲルから遊離したトリプシンペプチドは、過剰のトリプシンにより媒介される第2のカルボニル酸素交換プロセスの対象となり得る。遊離したペプチドは、タンパク質よりも高い溶解性を有することにより、より高いレベルの二重に18O標識化したトリプシンペプチドをもたらすので、これは第2のカルボニル酸素の置換を促進するはずである(図1及び図2;(54))。通常の水との再交換を防止するために、効果的であることが以前に示されている(51、54)煮沸を行うことにより、トリプシンを非活性化した。加えて、乾燥した、非活性化した混合物はnanoLC上への注入の直前に、再懸濁及び混合のみを行い、自発的な交換を最小化したが、この自発的交換は低いことが分かっている(15、40)。
逆標識化
安定な同位体の標識化とMSを使用する定量との場合には、誤差が、標識化及びイオン化のプロセス時に導入される可能性がある。これらの誤差は、標識の親和性の潜在的な差異と、MALDIプロセス時の重又は軽標識化ペプチドの考え得る抑制効果とを含む(13、55)。同じ標識化を繰り返すことを含む伝統的な技術的反復測定は、特定の標識に対する未補正の偏り、又はピークを汚染することによる特定のペプチドの無作為誤差の増大をもたらし得る。本発明者らの通常の及び逆の標識化技術的反復測定は、生物学的反復測定1及び2に関してそれぞれ0.97(R2=0.92)及び0.93(R2=0.82)の散布図の勾配(標識化しない場合の偏りに関する期待される比は1.0に近い)を有する、高度の相関を実証した(図3)。これらの勾配は、その方法が、タンパク質の評価と、ゲルのロードと、ゲルの切り出しと、ゲル内消化とに関して再現性を有していたことも示す。偏りが無いことは、マイクロアレイ実験で日常的に使用されるダイスワップ法又はLOWESSデータ正規化等の正規化ルーティン(35)が不必要であり得ることを示唆する。しかし、本研究で使用した細菌細胞外被よりも大幅に複雑な試料は、微量汚染ペプチドが18O/16O比の算出に及ぼす影響と、極端な変化を有するペプチドを確認する必要性とを考えると、逆標識化の確認をさらに必要とし得る。MS/MS取得法は断片に対する各重/軽対における最も強力なペプチドのみを選択したので、系統誤差を補正する評価及び手段を提供することに加えて、逆標識の設計は、重及び軽標識化ペプチドの両方を容易に同定することを可能にするというさらなる利点を有するものであった。このように、誤った割り当ての可能性は低減する。本発明者らの知識に対しては、これは、17種類のチトクロムP450タンパク質の最近の定量以外では複雑な生物学的試料における逆16O/18O標識化の最初の報告である(26、30)。
バイオフィルム対浮遊培養
本発明者らは、生物学的反復測定の間の強力な正の相関(r=0.701、p<0.0001)を実証し、バイオフィルムの形成及び発達に再現性があることを示した。このことは、81種類の定量化可能なタンパク質のうち70種類が、両方の生物学的反復測定において同様の比を示すことが観察されるという知見によっても見られた(表2、1又は2に順位付けされる)。本研究で同定されたポルフィロモナス・ジンジバリスタンパク質の4分の3超が、3種類以上の特有のペプチドにより同定され、この標識化手順の同定及び定量の信頼性がさらに増大した。両方の生物学的反復測定から一貫して同定された81種類のタンパク質のうち、47種類は浮遊状態からバイオフィルム状態まで存在量が有意に変化した。特に細胞外被において、検出されたプロテオームの存在量の百分率の変化は、検出されたプロテオームの50%超が浮遊と成熟バイオフィルムとの増殖期の間に存在量の顕著な変化を示すことが示された、シュードモナス・エルギノーサ等のバイオフィルム形成細菌についての他の研究(12)と一致する。本発明者らは、バイオフィルムとしての増殖に対するポルフィロモナス・ジンジバリスの細胞外被プロテオームにおける広範な応答をさらに観察した。バイオフィルム培養に対する応答下で存在量が変化することが以前に実証された多数のタンパク質は、本発明者らの研究において、存在量が変化することも見出された。注目すべきことに、幾つかのタンパク質では最大5倍存在量が変化することが観察され(表2)、バイオフィルム培養に応答したプロテオームの幾つかの主要なシフトが示唆された。
C末端ドメインファミリー
ポルフィロモナス・ジンジバリスは、約80残基の保存C末端ドメイン(CTD)とは別に、顕著な配列類似性を有しない最大34種類の細胞表面に位置する外膜タンパク質の、新規ファミリーを有することが最近示された(31、56)。タンパク質のポルフィロモナス・ジンジバリスCTDファミリーは、ジンジパイン(RgpA[PG2024]、RgpB[PG0506]、Kgp[PG1844]);分泌及び処理され細胞表面上で非共有複合体を形成し、この細菌の主要な病原性因子であると考えられる、Lys及びArg特異的プロテイナーゼ並びにアドヘシンを含む(57〜61)。宿主の構造タンパク質及び防御タンパク質を分解するその能力と、マウス歯周モデルにおいて歯槽骨の喪失を引き起こす機能的Kgp又はRgpBを欠く突然変異体の無能力とのために、ジンジパインは疾患の発病と直接関連づけられている(62)。これらのCTDファミリータンパク質は様々な機能を有するが、CTDファミリータンパク質の既知及び推定の機能は、接着活性及びタンパク質分解活性に対して強く集中しており、CPG70カルボキシペプチダーゼ(63)、PrtTチオールプロテイナーゼ、HagAヘマグルチニン、ストレプトコッカス・ゴルドニ(S. gordonii)結合タンパク質(PG0350、(64))、推定ヘマグルチニン、推定チオールレダクターゼ、推定フィブロネクチン結合タンパク質、推定Lys特異的プロテイナーゼ(PG0553)及び推定フォンビルブランド因子ドメインタンパク質等も含む。これらのタンパク質の大部分は、細胞外タンパク質分解活性、凝集、ヘム/鉄の捕捉及び貯蔵、バイオフィルムの形成及び維持、病原性並びに酸化的ストレスへの抵抗性に関与するので、細菌の病原性において重要な役割を果たす可能性がある。CTDは、おそらく糖鎖付加を介した、外膜を通じたタンパク質の分泌と、細胞表面への付着とにおいて役割を果たすことが提唱されている(56、65、66)。この研究において本発明者らは、両方の反復測定(表2)において一貫して調節された9種類のCTDファミリータンパク質を定量することができ、PG2216及びPG1844(Kgp)を除き全てが、バイオフィルム状態時に存在量が増大した。したがってこの群のタンパク質の多くの存在量の顕著な増大は、これらがバイオフィルム状態時に重要な機能的役割を果たすことを示唆する。
輸送タンパク質
2つの推定TonB依存性受容体ファミリータンパク質(PG1414及びPG2008)と推定ヘム受容体タンパク質(PG1626)とは、また、存在量が有意な増大を示す。これらのタンパク質の厳密な機能は未知であるが、NCBI COGデータベースに対するCOG検索は、主にFe輸送に関与する外膜受容体タンパク質のP機能クラスに対するヒットをもたらした(77)。興味深いことに、本発明者らは、細胞内鉄貯蔵タンパク質フェリチン(PG1286)の存在量の増大も観察した。これらの鉄/ヘムの輸送及び貯蔵タンパク質の存在量の一貫した増大は、フェリチンはポルフィロモナス・ジンジバリスが鉄枯渇条件下で生存するために重要であるので、特にバイオフィルムの深層内における、ヘム/鉄の制限の兆候であり得た(78)。
バイオフィルム形成
ユニバーサルストレスタンパク質(UspA)は、バイオフィルム細胞と比較して浮遊細胞において顕著に高い存在量で存在していた。様々な細菌中でのUspの産生は、定常期に入ること、或る特定の栄養素の欠乏、酸化剤、及び他の刺激等の多様な条件により刺激されることが見出された(110、111)。浮遊期の細胞における存在量の増大は、ポルフィロモナス・ジンジバリスがバイオフィルムの一部分として進展して増殖するという事実、及び浮遊期がよりストレスが多いと思われるという事実と一致する。UspAの不活性化は浮遊細胞による初期バイオフィルム形成の減少をもたらしたので、ポルフィロモナス・ジンジバリスにおけるUspAの発現は、バイオフィルム形成と関連すると考えられる(112)。本研究ではバイオフィルムは確立され成熟に到達しているので、自由に浮いている浮遊細胞と比較してUspAに対する必要性はより低いようである。
機能が未知のタンパク質
本研究で同定した最大のタンパク質群は、本研究で最初に同定した4種類のタンパク質を含む機能が未知の41種類のタンパク質であった(表2)。同定した41種類のタンパク質のうち37種類は細胞外被由来であると予測され、この群内で17種類のタンパク質はバイオフィルム細胞と浮遊細胞との間において有意な変化を示す。これらのタンパク質の大部分は、名称は定義されているが機能は十分に定義されていないGenBankのタンパク質と相同性を有する。バイオフィルム状態において存在量が実質的に増大することが一貫して見出された複数のタンパク質、すなわちPG0181、PG0613、PG1304、PG2167及びPG2168に特に関心がもたれる。
Claims (11)
- 被験体におけるポルフィロモナス・ジンジバリスに対する免疫応答を生じさせる際に使用する組成物であって、免疫応答を生じさせるための有効量の、AAQ65462、AAQ65742、AAQ66991、AAQ65561、AAQ66831、AAQ66797、AAQ66469、AAQ66587、AAQ66654、AAQ66977、AAQ65797、AAQ65867、AAQ65868、AAQ65416、AAQ65449、AAQ66051、AAQ66377、AAQ66444、AAQ66538、AAQ67117及びAAQ67118から成る群から選択されるアクセッション番号に対応するポリペプチドの、少なくとも1つの抗原性部分又は免疫原性部分を含む、組成物。
- 前記部分が、前記ポリペプチドの1つの少なくとも50個のアミノ酸と実質的に同一であるアミノ酸配列を有する、請求項1に記載の組成物。
- 前記ポリペプチドが、AAQ65462、AAQ66991、AAQ65561及びAAQ66831から成る群から選択されるアクセッション番号に対応する、請求項1又は2に記載の組成物。
- 前記ポリペプチドがアクセッション番号AAQ65742に対応する、請求項1又は2に記載の組成物。
- 被験体におけるポルフィロモナス・ジンジバリスに対する免疫応答を生じさせる際に使用する組成物であって、免疫応答を生じさせるための有効量の、ポルフィロモナス・ジンジバリスにより発現され、且つCELLOプログラムにより細胞外にあることが予測されるポリペプチドの少なくとも50個のアミノ酸と実質的に同一であるアミノ酸配列を有する少なくとも1つのポリペプチドを含む、組成物。
- 被験体におけるポルフィロモナス・ジンジバリスに対する免疫応答を生じさせる際に使用する組成物であって、免疫応答を生じさせるための有効量の、マウス又はウサギにおいて免疫応答を引き起こすポリペプチドの少なくとも50個のアミノ酸と実質的に同一である選択されたアミノ酸配列を有する少なくとも1つのポリペプチドを含む、組成物。
- 被験体を歯周病に関して防止、抑制又は治療する方法であって、有効量の、請求項1〜6のいずれか一項に記載の組成物を該被験体に投与することを含む、方法。
- 被験体をポルフィロモナス・ジンジバリス感染症に関して防止又は治療する方法であって、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組成物を該被験体に投与することを含む、方法。
- アクセッション番号AAQ65462、AAQ65742、AAQ66991、AAQ65561、AAQ66831、AAQ66797、AAQ66469、AAQ66587、AAQ66654、AAQ66977、AAQ65797、AAQ65867、AAQ65868、AAQ65416、AAQ65449、AAQ66051、AAQ66377、AAQ66444、AAQ66538、AAQ67117及びAAQ67118に対応するポリペプチドの1つの少なくとも50個のアミノ酸と実質的に同一であるアミノ酸配列を有する、該ポリペプチドの抗原性領域に対して産生される抗体。
- 前記ポリペプチドが、AAQ65462、AAQ66991、AAQ65561及びAAQ66831から成る群から選択されるアクセッション番号に対応する、請求項9に記載の抗体。
- 前記ポリペプチドがAAQ65742から成る群から選択されるアクセッション番号に対応する、請求項9に記載の抗体。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AU2007903787A AU2007903787A0 (en) | 2007-07-12 | Immunology treatment for biofilms | |
PCT/AU2008/001018 WO2009006700A1 (en) | 2007-07-12 | 2008-07-11 | Immunology treatment for biofilms |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013238416A Division JP2014058541A (ja) | 2007-07-12 | 2013-11-19 | バイオフィルムに対する免疫学的治療 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010532766A true JP2010532766A (ja) | 2010-10-14 |
JP2010532766A5 JP2010532766A5 (ja) | 2011-08-25 |
Family
ID=40228121
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010515320A Pending JP2010532766A (ja) | 2007-07-12 | 2008-07-11 | バイオフィルムに対する免疫学的治療 |
JP2013238416A Pending JP2014058541A (ja) | 2007-07-12 | 2013-11-19 | バイオフィルムに対する免疫学的治療 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013238416A Pending JP2014058541A (ja) | 2007-07-12 | 2013-11-19 | バイオフィルムに対する免疫学的治療 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20100297179A1 (ja) |
EP (2) | EP2176413A4 (ja) |
JP (2) | JP2010532766A (ja) |
KR (1) | KR20100071964A (ja) |
CN (2) | CN101842486A (ja) |
AU (1) | AU2008274907B2 (ja) |
CA (1) | CA2693717A1 (ja) |
NZ (3) | NZ595378A (ja) |
SG (1) | SG182988A1 (ja) |
WO (1) | WO2009006700A1 (ja) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AUPO652897A0 (en) | 1997-04-30 | 1997-05-29 | University Of Melbourne, The | Synthetic peptide constructs for the diagnosis and treatment of periodontitis |
US8129500B2 (en) * | 1997-12-10 | 2012-03-06 | Csl Limited | Porphyromonas gingivalis polypeptides and nucleotides |
CA2652957A1 (en) | 2006-06-27 | 2008-01-03 | Oral Health Australia Pty Ltd. | Porphyromonas gingivalis polypeptides useful in the prevention of periodontal disease |
NZ582474A (en) * | 2007-07-12 | 2012-03-30 | Oral Health Australia Pty Ltd | Use of oxantel, morantel or thiabendazole for preventing, inhibiting or reducing a p. gingivalis biofilm |
MY178905A (en) | 2008-08-29 | 2020-10-22 | Oral Health Australia Pty Ltd | Prevention, treatment and diagnosis of p.gingivalis infection |
MX2012001495A (es) * | 2009-08-02 | 2012-08-03 | Sanofi Pasteur Ltd | Polipeptidos de porphyromonas gingivalis. |
US8140041B2 (en) * | 2009-08-27 | 2012-03-20 | Mediatek Inc. | Tunable capacitive device with linearization technique employed therein |
CN105418758A (zh) * | 2015-12-03 | 2016-03-23 | 沈阳惠民生物技术有限公司 | 一种抗牙周病抗体的制备方法及其应用 |
US11541105B2 (en) | 2018-06-01 | 2023-01-03 | The Research Foundation For The State University Of New York | Compositions and methods for disrupting biofilm formation and maintenance |
CN113005069B (zh) * | 2021-01-28 | 2023-09-26 | 广东海洋大学 | 一种减毒鰤鱼诺卡氏菌及其制备方法和应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001526035A (ja) * | 1997-12-10 | 2001-12-18 | シーエスエル、リミテッド | Porphorymonasgingivalisポリペプチドおよびヌクレオチド |
Family Cites Families (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4735801A (en) | 1982-09-07 | 1988-04-05 | Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University | Novel non-reverting salmonella live vaccines |
US4837151A (en) * | 1980-05-19 | 1989-06-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University, Stanford University | Live vaccines comprising two mutations and foreign antigen |
US5210035A (en) | 1980-05-19 | 1993-05-11 | Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University | Non-reventing live vaccines |
US4603112A (en) | 1981-12-24 | 1986-07-29 | Health Research, Incorporated | Modified vaccinia virus |
US5830710A (en) | 1988-09-08 | 1998-11-03 | University Of Florida | Cloned porphyromonas gingivalis genes and probes for the detection of periodontal disease |
WO1994027606A1 (en) | 1993-05-28 | 1994-12-08 | Unisearch Limited | Method of treating helicobacter pylori infection |
WO1995000110A1 (fr) * | 1993-06-28 | 1995-01-05 | Lion Corporation | Composition pour la cavite buccale |
US5475097A (en) * | 1993-10-21 | 1995-12-12 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Lysine-specific Porphyromonas gingivalis proteinase |
EP0717747B1 (en) | 1993-09-10 | 2003-06-04 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Porphyromonas gingivalis arginine-specific proteinase coding sequences |
US6017532A (en) * | 1993-09-10 | 2000-01-25 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Porphyromonas gingivalis arginine-specific proteinase |
US5523390A (en) * | 1993-09-10 | 1996-06-04 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Porphyromonas gingivalis arginine-specific proteinase |
JPH0797395A (ja) | 1993-09-28 | 1995-04-11 | Kyowa Medex Co Ltd | ポルフイロモナス・ジンジバリス線毛蛋白質の配列を含有するペプチド類及びその用途 |
DE69527514T2 (de) | 1994-03-29 | 2003-04-03 | Meito Sangyo Kk | Gen eines zelloberflächenpolypeptids |
AUPN627595A0 (en) * | 1995-10-30 | 1995-11-23 | University Of Melbourne, The | Diagnostics and treatments of periodontal disease |
US6129917A (en) * | 1996-03-22 | 2000-10-10 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Immunogenic compositions comprising porphyromonas gingivalis proteins and/or peptides and methods |
AUPN901296A0 (en) * | 1996-03-29 | 1996-04-26 | University Of Melbourne, The | Porphyromonas gingivalis antigens for the diagnosis and treatment of periodontitis |
US7341727B1 (en) * | 1996-05-03 | 2008-03-11 | Emergent Product Development Gaithersburg Inc. | M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same |
AUPO652897A0 (en) * | 1997-04-30 | 1997-05-29 | University Of Melbourne, The | Synthetic peptide constructs for the diagnosis and treatment of periodontitis |
US8129500B2 (en) * | 1997-12-10 | 2012-03-06 | Csl Limited | Porphyromonas gingivalis polypeptides and nucleotides |
AUPP083997A0 (en) * | 1997-12-10 | 1998-01-08 | Csl Limited | Porphyromonas gingivalis nucleotides |
US6444799B1 (en) * | 1997-12-31 | 2002-09-03 | Csl Limited | P. gingivalis polynucleotides and uses thereof |
AUPP893999A0 (en) * | 1999-03-01 | 1999-03-25 | Csl Limited | Synthetic peptides containing protective epitopes for the treatment and prevention of periodontitis associated with porphyromonas gingivalis |
US7090973B1 (en) * | 1999-04-09 | 2006-08-15 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics |
GB9913437D0 (en) | 1999-06-09 | 1999-08-11 | Medical Res Council | Fusion proteins |
AUPQ485999A0 (en) * | 1999-12-24 | 2000-02-03 | Csl Limited | P. gingivalis antigenic composition |
AUPQ718200A0 (en) * | 2000-04-28 | 2000-05-25 | Csl Limited | Porphyromonas gingivalis recombinant proteins and truncations |
US6576226B1 (en) * | 2000-11-17 | 2003-06-10 | Gary R. Jernberg | Local delivery of agents for disruption and inhibition of bacterial biofilm for treatment of periodontal disease |
US20030083287A1 (en) | 2000-11-30 | 2003-05-01 | Burgess Nicola A. | ginS |
GB2381449A (en) | 2001-10-31 | 2003-05-07 | Smithkline Beecham Plc | Oral hygiene compositions comprising an electron acceptor |
JP2003192616A (ja) | 2001-12-27 | 2003-07-09 | Univ Nihon | 歯周病用dnaワクチン |
JP2003286191A (ja) | 2002-03-27 | 2003-10-07 | Univ Nihon | 歯周病用粘膜免疫ワクチン |
JPWO2004083425A1 (ja) | 2003-03-17 | 2006-06-22 | 麒麟麦酒株式会社 | 歯周病治療剤 |
JP2007529195A (ja) * | 2003-08-15 | 2007-10-25 | ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション,インク. | 歯周病の診断,治療,およびモニタリングのためのPorphyromonasgingivalis毒性ポリヌクレオチドの同定 |
JP2007520718A (ja) * | 2004-02-06 | 2007-07-26 | カウンシル オブ サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ | 治療可能性のあるアドヘシンおよびアドヘシン様タンパク質を同定するためのコンピュータを利用した方法 |
NZ554331A (en) * | 2004-09-23 | 2009-04-30 | Univ Melbourne | Antigenic complex for the diagnosis and treatment of porphyromonas gingivalis infection |
WO2008016385A2 (en) * | 2006-01-20 | 2008-02-07 | The University Of Washington | Deacylase polypeptides, deacylase polynucleotides, and methods of use thereof |
CA2652957A1 (en) * | 2006-06-27 | 2008-01-03 | Oral Health Australia Pty Ltd. | Porphyromonas gingivalis polypeptides useful in the prevention of periodontal disease |
WO2008124646A2 (en) | 2007-04-06 | 2008-10-16 | The Government Of The U.S.A, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Use of amyloid proteins as vaccine scaffolds |
NZ582474A (en) * | 2007-07-12 | 2012-03-30 | Oral Health Australia Pty Ltd | Use of oxantel, morantel or thiabendazole for preventing, inhibiting or reducing a p. gingivalis biofilm |
EP2443143A4 (en) * | 2009-06-19 | 2013-09-11 | Oral Health Australia Pty Ltd | CASEIN-DERIVED PROTEASE-INHIBITING FIBERS |
-
2008
- 2008-07-11 KR KR1020107003307A patent/KR20100071964A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-07-11 NZ NZ595378A patent/NZ595378A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-07-11 NZ NZ582438A patent/NZ582438A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-07-11 US US12/668,407 patent/US20100297179A1/en not_active Abandoned
- 2008-07-11 CN CN200880104633A patent/CN101842486A/zh active Pending
- 2008-07-11 SG SG2012048872A patent/SG182988A1/en unknown
- 2008-07-11 AU AU2008274907A patent/AU2008274907B2/en not_active Ceased
- 2008-07-11 CA CA2693717A patent/CA2693717A1/en not_active Abandoned
- 2008-07-11 NZ NZ605037A patent/NZ605037A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-07-11 EP EP08772644A patent/EP2176413A4/en not_active Withdrawn
- 2008-07-11 WO PCT/AU2008/001018 patent/WO2009006700A1/en active Application Filing
- 2008-07-11 JP JP2010515320A patent/JP2010532766A/ja active Pending
- 2008-07-11 CN CN2012101357337A patent/CN102652831A/zh active Pending
- 2008-07-11 EP EP13152880.4A patent/EP2604692A1/en not_active Withdrawn
-
2012
- 2012-09-20 US US13/623,442 patent/US8911745B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-11-19 JP JP2013238416A patent/JP2014058541A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001526035A (ja) * | 1997-12-10 | 2001-12-18 | シーエスエル、リミテッド | Porphorymonasgingivalisポリペプチドおよびヌクレオチド |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6013023773; NELSON,KE et al, Journal of Bacteriology, 2003, vol.185, no.18, p.5591-601 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NZ605037A (en) | 2014-05-30 |
AU2008274907B2 (en) | 2014-11-13 |
NZ582438A (en) | 2012-03-30 |
WO2009006700A1 (en) | 2009-01-15 |
CN101842486A (zh) | 2010-09-22 |
KR20100071964A (ko) | 2010-06-29 |
CN102652831A (zh) | 2012-09-05 |
AU2008274907A1 (en) | 2009-01-15 |
SG182988A1 (en) | 2012-08-30 |
EP2604692A1 (en) | 2013-06-19 |
CA2693717A1 (en) | 2009-01-15 |
NZ595378A (en) | 2013-04-26 |
US20130202641A1 (en) | 2013-08-08 |
US20100297179A1 (en) | 2010-11-25 |
US8911745B2 (en) | 2014-12-16 |
JP2014058541A (ja) | 2014-04-03 |
EP2176413A1 (en) | 2010-04-21 |
EP2176413A4 (en) | 2012-08-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2014058541A (ja) | バイオフィルムに対する免疫学的治療 | |
US8916166B2 (en) | Porphyromonas gingivalis polypeptides useful in the prevention of periodontal disease | |
JP5476297B2 (ja) | バイオフィルム治療 | |
Wu et al. | Comparative proteome analysis of secreted proteins of Streptococcus suis serotype 9 isolates from diseased and healthy pigs | |
TW201439322A (zh) | 製造經蛋白分解處理之多肽之方法 | |
Soriani et al. | Relevance of pili in pathogenic streptococci pathogenesis and vaccine development | |
Jiang et al. | Vibrio parahaemolyticus enolase is an adhesion-related factor that binds plasminogen and functions as a protective antigen | |
Ang et al. | Application of 16O/18O reverse proteolytic labeling to determine the effect of biofilm culture on the cell envelope proteome of Porphyromonas gingivalis W50 | |
JP2014529396A (ja) | パスツレラワクチン | |
EP2547361B1 (en) | Bacterial vaccine components from staphylococcus aureus and uses thereof | |
KR20100063706A (ko) | 면역원성 스트렙토코커스 단백질 | |
Zhu et al. | Evaluation of the protective efficacy of four newly identified surface proteins of Erysipelothrix rhusiopathiae | |
KR20230005127A (ko) | 프로피오니박테리움 아크네스 예방적 및 치료적 면역 처치 | |
JP2015519305A (ja) | ヒストフィルス・ソムニの外膜タンパク質とその方法 | |
AU2011209988A1 (en) | Recombinant proteins for use in vaccine, antibodies against said proteins, and diagnostic and therapeutic methods including the same | |
CN114423448A (zh) | 疫苗组合物和选择抗原的方法 | |
AU2013203250B2 (en) | Immunology treatment for biofilms | |
AU2016263534A1 (en) | Treatment and detection of trypanosomes | |
KR20190082229A (ko) | 스타필로코커스 감염에 대한 백신 구성체 및 이의 용도 | |
WO2019056044A1 (en) | MYCOPLASM SURFACE ENDOPROTEASE AND USES THEREOF | |
OA18773A (en) | Treatment and detection of Trypanosomes. | |
JP2003517833A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウス必須遺伝子とそれにコードされるタンパク質に関連する組成物と方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110707 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110707 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130521 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130813 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130820 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140225 |