JP2010524883A - 水中油型エマルジョンインフルエンザワクチン - Google Patents
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Abstract
【選択図】 なし
Description
1)アジュバント無添加組成物と比較して改善され、それにより次のいずれか又は全てを可能にする免疫原性:i)免疫原性の低いインフルエンザ株に対する弱い免疫応答を改善して、アジュバント無添加製剤により得られるレベルより高いレベルにすること;ii)高齢者(50歳を超える、典型的には65歳を超える)などの特定の集団における弱い免疫応答(抗体及び/又はT細胞応答)を、若年者に見られるレベルに回復すること;
2)アジュバントの使用によって、ナイーブな集団における又は若年の幼児(6ヶ月〜4歳、特に1歳未満の小児)における抗原の潜在的な弱い免疫原性を克服し、初回感作及び防御を誘導できること;
3)本発明のアジュバント組成物は、古典的ワクチン(例えば、市販スプリットワクチン)と比較して、そのワクチン株に対して少なくとも同等の防御を与えるだけでなく、交差初回免疫感作計画の構築を可能にする交差防御プロファイルの改善、すなわち、交差反応性の増加、変種(ドリフト)インフルエンザ株に対する交差防御を達成することにより、ドリフト株に対するさらなる防御層を付与しうる;これは、前記組成物をプレパンデミックワクチンとして使用する場合、さらに(広まった)パンデミック株に対する防御を高めるのに1用量のパンデミックワクチンだけを必要とすることが可能になるので、特に重要であり;これはまた、このワクチンが他のパンデミック間期のA型H1N1株より速やかに現れがちであるH3N2ドリフトの問題に対処できるので、重要であること。
本発明に係るアジュバントは、エマルジョン、特に水中油型エマルジョンであり、任意に、他の免疫刺激剤を含んでもよい。特に、エマルジョン系の油相は代謝可能な油を含む。代謝可能とは、「代謝によって変換されうる」と定義することができる(Dorland's Illustrated Medical Dictionary, W.B. Sanders Company, 第25版(1974))。この油はレシピエントにとって毒性がなく、代謝によって変換されうる、任意の植物油、魚油、動物油、又は合成油であってよい。堅果、種子、及び穀粒が植物油の一般的供給源である。合成油も本発明の一部分であり、これには市販の油、例えば、NEOBEE(登録商標)などが含まれうる。特に好適な代謝可能な油はスクアレンである。スクアレン(2,6,10,15,19,23-ヘキサメチル-2,6,10,14,18,22-テトラコサヘキサエン)は、サメ肝油に大量に、またオリーブ油、コムギ胚芽油、コメ糠油、及び酵母に少量存在する不飽和油であり、本発明において使用する油である。スクアレンは、コレステロールの生合成における中間体であるという事実に基づき、代謝可能な油である(Merck index, 第10版, entry no.8619)。
本発明の特定の実施形態において、アジュバントは、代謝可能油(スクアレンなど)、トコール(αトコフェロールなど)及び界面活性剤(ポリソルベート80など)を上で定義した量で含む水中油型エマルジョンアジュバントであり、他のいずれの免疫刺激剤を含まない、特に非毒性リピドA誘導体(3D-MPLなど)又はサポニン(QS21など)を含まない。
OM174(2-デオキシ-6-o-[2-デオキシ-2-[(R)-3-ドデカノイルオキシテトラ-デカノイルアミノ]-4-o-ホスホノ-β-D-グルコピラノシル]-2-[(R)-3-ヒドロキシテトラデカノイルアミノ]-α-D-グルコピラノシルジヒドロゲンホスフェート) (WO 95/14026号)、
OM 294 DP (3S, 9 R)-3--[(R)-ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ]-4-オキソ-5-アザ-9(R)-[(R)-3-ヒドロキシテトラデカノイルアミノ]デカン-1,10-ジオール,1,10-ビス(ジヒドロゲンホスフェート) (WO99 /64301号及びWO 00/0462号)、
OM 197 MP-Ac DP (3S-, 9R)-3-[(R)-ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ]-4-オキソ-5-アザ-9-[(R)-3-ヒドロキシテトラデカノイルアミノ]デカン-1,10-ジオール,1-ジヒドロゲンホスフェート10-(6-アミノヘキサノエート) (WO 01/46127号)。
OLIGO 1 (配列番号1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)
OLIGO 2 (配列番号2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)
OLIGO 3 (配列番号3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG
OLIGO 4 (配列番号4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006)
OLIGO 5 (配列番号5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668)
OLIGO 6 (配列番号6): TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G (CpG 5456)。
前記インフルエンザウイルス又はその抗原調製物は、卵由来又は細胞培養物由来とすることができる。例えば、本発明に係るインフルエンザウイルス抗原又はその抗原調製物は、卵でインフルエンザウイルスを増殖させ、回収した尿膜腔液を精製することによる従来の発育鶏卵法に由来するものであってもよい。卵は、直ぐに数多く蓄積することができる。あるいは、上記ウイルス抗原又はその抗原調製物は、細胞若しくは組織培養物を使用してウイルスを増殖させるか又は組換えインフルエンザウイルス表面抗原を発現させる、新しい作製方法のいずれかに由来するものであってもよい。ウイルスを増殖させるための好適な細胞基質には、例えば、MDCK若しくはMDCKのクローン由来の細胞、又はMDCK様細胞などのイヌ腎細胞、Vero細胞を含むAGMK細胞などのサル腎細胞、好適なブタ細胞系、又はワクチン用インフルエンザウイルスを作製するのに好適ないずれかの他の哺乳動物細胞型が含まれる。好適な細胞基質には、ヒト細胞、例えば、MRC-5細胞又はPer.C6細胞も含まれる。好適な細胞基質は細胞系に限られることなく、例えば、ニワトリ胚線維芽細胞などの一次細胞、及びニワトリ又はアヒル細胞系などのトリの細胞系(例えばEBx細胞系、例としてニワトリ又はアヒル胚性幹細胞からそれぞれ誘導されたEB14又はEB24など)も含まれる。好適な昆虫細胞はSf9又はHi5である。
**変換係数は、各ワクチン株について、ワクチン接種後の血清HI幾何平均力価(GMT)の増加倍率として定義される。
***防御率は、ワクチン接種前に血清陰性であってワクチン接種後に≧1:40の(防御性)HI力価を有するか、又はワクチン接種前に血清陽性であってワクチン接種後に力価の有意な4倍増加を有する被験者の比率として定義される:これは通常、防御を示すものとして容認されている。
これらの基準は、真の値について95% CIの下限において満たす必要がある。
・成人集団(18〜60歳)において、及び/又は、好適には高齢者集団(>60歳)においても、>50%の、>60%の、>70%の、好適には>80%の、又は>90%の血清変換率;
・成人集団(18〜60歳)において、及び/又は、好適には高齢者集団(>60歳)においても、>75%、>80%、>85%、好適には、>90%の防御率;
・成人集団(18〜60歳)において、及び/又は、好適には高齢者集団(>60歳)においても、>4.0の、>5.0の、>6.0の、>7.0の、>8.0の、>9.0の、又は10の、又は10を超える変換係数。
本発明において、アジュバント添加免疫原性組成物は、アジュバント無添加の、すなわち、いかなる外来アジュバントも含有しない対応組成物(本明細書では「単味組成物」とも呼ぶ)によって得られるCD4+ T細胞免疫応答と比較して、成分抗原の少なくとも1つ又は抗原組成物に対して、改善されたCD4+ T細胞免疫応答を好適に誘導することができる。インフルエンザ免疫原性組成物が複数種のインフルエンザ菌株に由来するものであり、そのうち1株が第2のB型株、又は第3のパンデミック間期のA型株、又はパンデミック株である場合の具体的な実施形態において、前記改善されたCD4+ T細胞免疫応答はこれらの株の少なくとも1株に対するものである。別の実施形態において、以前に有用と考えられていたレベルよりも低いレベルであり、そして典型的には上で定義した通りであるアジュバント成分(複数でもよい)を含むアジュバント添加免疫原性組成物は、好適には、成分抗原の少なくとも1つ又は抗原組成物に対して、従来技術の一部のアジュバントでアジュバント添加した組成物で得られるものと少なくとも同等の、CD4+ T細胞免疫応答を誘導することが可能である。この特徴は、本明細書の以下において「同等のCD4+ T細胞免疫応答」と称する。
・少なくとも2種の異なるサイトカイン(CD40L、IL-2、IFNγ、TNFα)を産生する細胞
・少なくともCD40L及び他のサイトカイン(IL-2、TNFα、IFNγ)を産生する細胞
・少なくともIL-2及び他のサイトカイン(CD40L、TNFα、IFNγ)を産生する細胞
・少なくともIFNγ及び他のサイトカイン(IL-2、TNFα、CD40L)を産生する細胞
・少なくともTNFα及び他のサイトカイン(IL-2、CD40L、IFNγ)を産生する細胞。
古典的な三価インフルエンザワクチンの投与後(3週間)、ワクチン内に存在する抗原性株(H3N2:A/Panama/2007/99、H1N1:A/New Caledonia/20/99、B:B/Shangdong/7/97)と同種である抗原性株調製物(全ウイルス又はスプリット抗原)に応答する末梢血CD4 T細胞の頻度に実質的な増加が見られる(実施例III参照)。ドリフト株として分類されたインフルエンザ株(H3N2:A/Sydney/5/97、H1N1:A/Beijing/262/95、B:B/Yamanashi/166/98)を用いて末梢血CD4 T細胞を再刺激すれば、同程度の頻度の増加が認められる。対照的に、末梢血CD4 T細胞が、この分野の専門家によってシフト株として分類されるインフルエンザ株(H2N2:A/Singapore/1/57、H9N2:A/Hongkong/1073/99)により再刺激を受ければ、ワクチン接種後に観察可能な増加はない。
本発明の一態様において、第1のインフルエンザ株の変種であるインフルエンザ株により引き起こされるインフルエンザ感染に対する防御のための本明細書中で定義する免疫原性組成物の製造における
(a)第1のインフルエンザ株由来のインフルエンザウイルス又はその抗原調製物、及び
(b)本明細書中で定義する水中油型エマルジョンアジュバント
の使用を提供する。
この抗原ドリフトは、主にウイルス表面タンパク質赤血球凝集素(HA)及びノイラミニダーゼ(NA)のエピトープ領域に存在する。宿主免疫系の適応反応を避けるためにウイルスが用いる、異なるインフルエンザ株の間でのCD4及びB細胞エピトープの何らかの差が、インフルエンザワクチン接種で主要な役割を果たしうることが知られている。
本発明の組成物は、皮内、粘膜、例えば鼻腔内、経口、筋肉内又は皮下など、いずれかの適当な送達経路で投与することができる。他の送達経路は当技術分野において公知である。
ワクチン接種をする標的集団は、全集団、例えば、健康な成人(例えば、18〜50歳若しくは18〜60歳)、高齢者(典型的には60歳超)又は乳幼児/小児である。標的集団は、特に免疫低下した集団であってもよい。免疫低下したヒトは、一般に健康な成人と比較して、抗原、特にインフルエンザ抗原に対して良好に反応することができない。
疑問を回避するため、本明細書の用語「含んでいる」及び「含む」は、各事例において、場合により用語「からなっている」及び「からなる」でそれぞれ代替可能であるものとする。本明細書における本発明の「ワクチン組成物」に関する実施形態はまた、本発明の「免疫原性組成物」に関する実施形態にも適用可能であり、またその逆も可能である。数値全てにおける「約」(又は「ほぼ」)という用語は、5%の変動を許容する。すなわち、約1.25%という値は1.19%〜1.31%を意味するだろう。
I.1. マウス方法
I.1.1. 血球凝集阻害試験
試験原理(古典的手順)
3種の(季節性)インフルエンザウイルス株に対する抗血球凝集素抗体力価を、血球凝集阻害試験(HI)を用いて決定する。HI試験の原理は、インフルエンザウイルス血球凝集素(HA)による赤血球(RBC)の血球凝集を阻害する特定の抗インフルエンザ抗体の能力に基づく。熱不活化血清をKaolin及びRBCにより処理して、非特異的阻害因子を除去する。予備処理後、血清の2倍希釈液を、4血球凝集単位の各インフルエンザ株と共にインキュベートする。次いで、赤血球を添加し、凝集の阻害をスコア化する。血球凝集を完全に阻害した血清の最も高い希釈率の逆数として、力価を表す。血清の最初の希釈率が1:20である場合、検出不可能なレベルを10に等しい力価としてスコア化する。
抗HA抗体を決定するための古典的HIアッセイはH5N1株についてはよく機能しないと記録されているため、ウマRBCを用いて改変したプロトコルを用いた。ウマの赤血球を、H5N1パンデミック株のために用いた。0.5%BSA(ウシ血清アルブミン、最終濃度)を含むリン酸バッファー中の0.5%(最終濃度)のウマ赤血球細胞懸濁液。この懸濁液を、同じリン酸バッファーを用いた赤血球の洗浄工程、次いで遠心分離工程(10分、2000 rpm)により毎日調製する。この洗浄工程を、1回繰り返す必要がある。血清とウイルス懸濁液の反応混合物へのウマ赤血球の添加後、ウマ赤血球の低い沈降速度に起因して、室温(RT、20℃+/-2℃)で2時間、プレートをインキュベートする必要がある。
統計学的分析を、UNISTATを用いてワクチン接種後のHI力価に対して実施した。分散の分析のために適用したプロトコルを、以下のように簡単に説明することができる:
・データのLog変換、
・群分布の正規性を検証するための各集団(群)に対するShapiro-Wilk検定、
・異なる集団(群)間の分散の均一性を検証するためのCochran検定、
・選択されたデータに対する分散の分析、
・2方向ANOVAの相互作用に関する検定、
・複数比較のためのTukey-HSD検定。
この技術は、サイトカイン産生に基づいて抗原特異的Tリンパ球の定量化を可能にする:エフェクターT細胞及び/若しくはエフェクター記憶T細胞はIFN-γを産生し、並びに/又は中央記憶T細胞はIL-2を産生する。PBMCを、免疫の7日後に採集する。
抗H5N1 Ig、IgG1及びIgG2b抗体力価の定量を、コーティングとしてスプリットH5N1を用いるELISAにより実施した。ウイルス及び抗体溶液を、100μl/ウェルで用いた。スプリットウイルスH5N1を、PBS中、1μg/mlの最終濃度で希釈し、96穴マイクロタイタープレート(Maxisorb Immunoplate Nunc 439454)のウェルに4℃で一晩吸着させた。次いで、プレートを、200μl/ウェルの1%BSA及び0.1%Tween 20(飽和バッファー)を含むPBSと共に37℃で1時間インキュベートした。飽和バッファー中の血清の12個の2倍希釈液をH5N1被覆プレートに添加し、37℃で1時間30分インキュベートした。プレートをPBS 0.1%Tween 20で4回洗浄した。1/500に希釈されたビオチン化コンジュゲート化抗マウスIg (Prozan-E0413)若しくはビオチン化コンジュゲート化抗マウスIgG1 (Imtech 1070-08)、又はPBS 1%BSA 0.1%Tween 20中に1/4000に希釈されたビオチン化抗マウスIgG2b (Imtech 1090-08)を各ウェルに添加し、37℃で1時間30分インキュベートした。洗浄工程の後、PBS 1%BSA Tween 20中で1/10000に希釈されたストレプトアビジン-ビオチン-プレオキシダーゼコンジュゲート(Prozan P0397)と共に30分間インキュベートした。
I.2.1. 血球凝集阻害試験(HI)
試験手順
3種のインフルエンザウイルス株に対する抗血球凝集素抗体力価を、血球凝集阻害試験(HI)を用いて決定した。HI試験の原理は、インフルエンザウイルス血球凝集素(HA)によるニワトリ赤血球(RBC)の血球凝集を阻害する特定の抗インフルエンザ抗体の能力に基づく。最初に血清を25%ノイラミニダーゼ溶液(RDE)で処理し、熱不活化して、非特異的阻害因子を除去した。予備処理後、血清の2倍希釈液を、4血球凝集単位の各インフルエンザ株と共にインキュベートした。次いで、ニワトリ赤血球を添加し、凝集の阻害をスコア化した。血球凝集を完全に阻害した血清の最も高い希釈率の逆数として、力価を表した。血清の最初の希釈率が1:10である場合、検出不可能なレベルを5に等しい力価としてスコア化した。
統計学的分析を、UNISTATを用いてHI力価(41日目、チャレンジ前)に対して実施した。分散の分析のために適用したプロトコルを、以下のように簡単に説明することができる:
・データのLog変換、
・群分布の正規性を検証するための各集団(群)に対するShapiro-Wilk検定、
・異なる集団(群)間の分散の均一性を検証するためのCochran検定、
・1方向ANOVAの相互作用に関する検定、
・複数比較のためのTuckey-HSD検定。
個体の温度を、トランスミッターを用いて、及びテレメトリー記録によりチャレンジ期間の間にモニターした。全ての埋込み物を調べ、改造し、新しい補正をDSI(Data Sciences International, Centaurusweg 123, 5015 TC Tilburg, The Netherlands)により実施した後、腹腔中に入れた。全ての動物を、これらの測定の間に1個のケージ中で個々に飼育した。
覚醒した動物の両方の鼻孔に5 mlのPBSを投与することにより、鼻洗浄を行った。接種物をペトリ皿中に回収し、ドライアイス上のサンプル容器中に入れた。
全ての鼻サンプルを最初にSpin Xフィルター(Costar)を通して滅菌濾過して、任意の細菌夾雑物を除去した。鼻洗浄液の連続10倍希釈液50μlを、50μlの培地を含むマイクロタイタープレート(10ウェル/希釈液)に移した。100μlのMDCK細胞(2.4×105細胞/ml)を各ウェルに添加し、35℃で5〜7日間インキュベートした。
I.3.1. 血球凝集阻害試験(HI)
試験手順
3種のインフルエンザウイルス株に対する抗血球凝集素抗体力価を、血球凝集阻害試験(HI)を用いて決定した。HI試験の原理は、インフルエンザウイルス血球凝集素(HA)によるニワトリ赤血球(RBC)の血球凝集を阻害する特定の抗インフルエンザ抗体の能力に基づく。最初に血清を25%ノイラミニダーゼ溶液(RDE)で処理し、熱不活化して、非特異的阻害因子を除去した。予備処理後、血清の2倍希釈液を、4血球凝集単位の各インフルエンザ株と共にインキュベートした。次いで、ニワトリ赤血球を添加し、凝集の阻害をスコア化した。血球凝集を完全に阻害した血清の最も高い希釈率の逆数として、力価を表した。血清の最初の希釈率が1:10である場合、検出不可能なレベルを5に等しい力価としてスコア化した。
統計学的分析を、UNISTATを用いてHI力価(41日目、チャレンジ前)に対して実施した。分散の分析のために適用したプロトコルを、以下のように簡単に説明することができる:
・データのLog変換、
・群分布の正規性を検証するための各集団(群)に対するShapiro-Wilk検定、
・異なる集団(群)間の分散の均一性を検証するためのCochran検定、
・1方向ANOVAの相互作用に関する検定、
・複数比較のためのTuckey-HSD検定。
I.4.1. 血球凝集阻害アッセイ
免疫応答を、WHO Collaborating Centre for influenza, Centres for Disease Control, Atlanta, USA (1991)により記載された方法を用いてHI抗体を測定することにより決定した。
このアッセイをフェツイン被覆マイクロタイタープレート中で実施した。抗血清の2倍連続希釈液を調製し、標準化された量のインフルエンザA型H3N2、H1N1又はインフルエンザBウイルスと混合した。この試験は、フェツインからノイラミン酸を酵素的に放出するノイラミニダーゼの生物学的活性に基づくものであった。末端ノイラミン酸の切断後、β-D-ガラクトース-N-アセチル-ガラクトサミンを脱マスキングした。ガラクトース構造に特異的に結合する、西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP)標識ラッカセイ(Arachis hypogaea)由来ピーナッツ凝集素をウェルに添加した。結合した凝集素の量を検出し、テトラメチルベンズイジン(TMB)を用いた基質反応において定量することができる。ウイルスノイラミニダーゼ活性を依然として少なくとも50%阻害する最も高い抗体希釈率を示し、これがNI力価である。
中和抗体測定を、解凍された凍結血清サンプルに対して行った。血清中に含まれる抗体によるウイルス中和を、微小中和アッセイにおいて決定した。該アッセイにおけるさらなる処理を用いずに、血清を用いた。各血清を3回試験した。標準化された量のウイルスを、血清の連続希釈液と混合し、抗体とウイルスとの結合を可能にするためにインキュベートした。次いで、規定量のMDCK細胞を含む細胞懸濁液をウイルスと抗血清の混合物に添加し、33℃でインキュベートした。インキュベーション期間の後、ウイルスの複製を、ニワトリ赤血球の血球凝集により可視化した。血清の50%中和力価を、Reed及びMuenchの方法により算出した。
末梢血抗原特異的CD4及びCD8 T細胞をin vitroで再刺激して、その対応する抗原と共にインキュベートした場合、IL-2、CD40L、TNF-α及びIFNを産生することができる。結果として、抗原特異的CD4及びCD8 T細胞を、細胞表現型並びに細胞内サイトカイン産生の従来の免疫蛍光標識によるフローサイトメトリーにより数えることができる。本研究においては、インフルエンザワクチン抗原並びに特定のインフルエンザタンパク質から誘導されたペプチドを抗原として用いて、インフルエンザ特異的T細胞を再刺激した。結果を、CD4又はCD8 T細胞サブ集団内のサイトカイン陽性CD4又はCD8 T細胞の頻度として表した。
I.4.5.1. 主要評価項目
・ワクチン接種後の7日間の追跡期間(すなわち、ワクチン接種日及びその後の6日間)と全体の間の応答型局所及び全身兆候及び徴候の割合、強度及びワクチン接種との関係。
・ワクチン接種後の21日間の追跡期間(すなわち、ワクチン接種日及びその後の20日間)と全体の間の非応答型局所及び全身兆候及び徴候の割合、強度及びワクチン接種との関係。
・試験全体の間の重篤な有害事象の発生。
液性免疫応答について:
観察される変数:
・0日及び21日目:ワクチン中に示される3種のインフルエンザウイルス株(抗H1N1、抗H3N2及び抗B型抗体)の各々に対して別々に試験された、血清血球凝集阻害(HI)及びNI抗体力価。
・0日及び21日目:ワクチン中に示される3種のインフルエンザウイルス株の各々に対して別々に試験された、中和抗体力価。
・ワクチン接種の前後での95%信頼区間(95%CI)での血清HI抗体の幾何平均力価(GMT)
・21日目での血清変換率(95%CI)*
・21日目での変換係数(95%CI)**
・21日目での血清防御率(95%CI)***
・全ての時点での血清NI抗体GMT(95%信頼区間で)。
*各ワクチン株につき、0日目と比較した21日目での血清HI力価における少なくとも4倍の増加を有するワクチン被接種者の割合として定義された血清変換率。
**各ワクチン株につき、0日目と比較した21日目での血清HI GMTにおける増加倍率として定義された変換係数。
***通常は防御を示すと許容されるワクチン接種後(各ワクチン株につき)の血清HI力価=40であるワクチン被接種者の割合として定義された防御率。
観察される変数:
0日及び21日目:異なる試験における106個あたりのサイトカイン陽性CD4/CD8細胞の頻度。
各試験は以下のものに対するCD4/CD8 T細胞の応答を定量するものである:
・ペプチドインフルエンザ(pf)抗原(これらの抗原の正確な性質及び起源を示す/説明する必要がある)
・スプリットインフルエンザ(sf)抗原
・全インフルエンザ(wf)抗原。
・少なくとも2種の異なるサイトカイン(CD40L、IL-2、IFNγ、TNFα)を産生する細胞
・少なくともCD40L及び別のサイトカイン(IL-2、TNFα、IFNγ)を産生する細胞
・少なくともIL-2及び別のサイトカイン(CD40L、TNFα、IFNγ)を産生する細胞
・少なくともIFNγ及び別のサイトカイン(IL-2、TNFα、CD40L)を産生する細胞
・少なくともTNFα及び別のサイトカイン(IL-2、CD40L、IFNγ)を産生する細胞。
免疫原性分析は全ワクチン接種コホートに基づいていた。各処理群について、以下のパラメーター(95%信頼区間で)を算出した:
・0日及び21日目でのHI及びNI抗体の幾何平均力価(GMT)
・0日及び21日目での中和抗体力価の幾何平均力価(GMT)
・21日目での変換係数
・0日目と比較した21日目での血清HI力価における少なくとも4倍の増加を有するワクチン被接種者の割合として定義された21日目での血清変換率(SC)
・血清HI力価=1:40を有するワクチン被接種者の割合として定義された21日目の防御率
・各ワクチン接種群、各時点(0日目、21日目)及び各抗原(ペプチドインフルエンザ(pf)、スプリットインフルエンザ(sf)及び全インフルエンザ(wf))について、応答時のCD4/CD8 Tリンパ球分泌の頻度をまとめた(記述統計)
・それぞれ5つの異なる試験における各ワクチン接種群及び各抗原(pf、sf、及びwf)に関する時点(POST-PRE)間応答の個々の差異における記述統計
・ノンパラメトリック検定(Kruskall-Wallis検定)を用いて3群間の位置の差異を比較し、それぞれ5つの異なる試験において各抗原について統計学的p値を算出した。全ての有意差検定は両側検定であった。0.05以下のP値を、統計学的に有意であると考えた。
特に指摘しない限り、以後の実施例で用いられる油/水型エマルジョンは、2つの油(α-トコフェロール及びスクアレン)からなる有機相、並びに乳化剤としてTween 80TM又はポリソルベート80TMを含むPBSの水相から構成される。特に指摘しない限り、以下の水中油型エマルジョン成分(最終濃度で与えられる):2.5%スクアレン(v/v)、2.5%α-トコフェロール(v/v)、0.9%モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(v/v)(Tween 80)(WO 95/17210号を参照)を含む、以後の実施例で用いられる水中油型エマルジョンアジュバント製剤を作製した。以後の実施例においてはAS03と呼ばれるこのエマルジョンを、2倍濃縮物として以下のように調製した。
この方法を、臨床及び前臨床実施例の節で報告される試験において用いた。SB62エマルジョンの調製物を、疎水性成分(DL-α-トコフェロール及びスクアレン)から構成される油相並びに水溶性成分(陰イオン系界面活性剤Tween 80及びPBS mod(改変)、pH 6.8)を含有する水相の強力な攪拌下での混合により作製する。攪拌しながら、油相(1/10全量)を水相(9/10全量)に移し、混合物を室温で15分間攪拌する。次いで、得られる混合物を、マイクロフルイダイザー(15000 PSI-実施例IIIに報告される臨床試験において用いられるアジュバント中で8サイクル、又は3サイクル)の相互作用チャンバー中で剪断、衝撃及びキャビテーション力に供して、マイクロメートル以下の液滴(100〜200 nmの分布)を製造する。得られるpHは6.8±0.1である。次いで、SB62エマルジョンを0.22μmの膜を通す濾過により滅菌し、滅菌バルクエマルジョンを2〜8℃でCupac容器中で冷蔵して保存する。滅菌不活性ガス(窒素又はアルゴン)を、少なくとも15秒間、SB62エマルジョンの最終バルク容器のデッドボリューム中にフラッシュする。
Tween 80:1.8%(v/v) 19.4 mg/ml;スクアレン:5%(v/v) 42.8 mg/ml;α-トコフェロール:5%(v/v) 47.5 mg/ml;PBS-mod:NaCl 121 mM、KCl 2.38 mM、Na2HPO4 7.14 mM、KH2PO4 1.3 mM;pH 6.8±0.1。
III.1. はじめに
フェーズIIのランダム化比較単盲検を、2006年に18〜59歳の成人集団において行って、2つの用量のAS03アジュバントを含むGlaxoSmithKline Biologicalsの低用量インフルエンザ候補ワクチン(すなわち、株あたり5μgのHAを含む)の免疫原性、安全性及び反応原性を評価した。
3群の被験者には並行して以下のワクチンを筋肉内投与した:
・100人の被験者の1群は、AS03でアジュバント添加された5μgのHAを含む低用量のスプリットウイルスインフルエンザワクチン(FluLD1/1)の1回の注射を受ける
・100人の被験者の1群は、半用量のAS03(AD03 1/2)でアジュバント添加された5μgのHAを含む低用量のスプリットウイルスインフルエンザワクチン(FluLD1/2)の1回の注射を受ける
・100人の被験者の1群は、1用量のFluarixTM(Fluarix)を受ける。
III.3.1. 主要評価項目
・抗血球凝集素抗体力価に関して試験ワクチンにより誘導される液性免疫応答を評価すること:
0日及び21日目の観察される変数:血清血球凝集阻害抗体力価
誘導される変数(95%信頼区間で):
・0日及び21日目の血清抗体の幾何平均力価(GMT)
・21日目の血清変換率*
・21日目の血清変換係数**
・0日及び21日目の血清防御率***
*血球凝集素抗体応答の血清変換率を、ワクチン接種前の力価1:10未満かつワクチン接種後の力価1:40以上を有するか、又はワクチン接種前の力価1:10以上かつワクチン接種後の力価における少なくとも4倍の増加を有するワクチン被接種者の割合と定義する。
**0日目と比較してワクチン接種後の血清HI GMTにおける増加倍率として定義された血清変換係数;
***通常は防御を示すと許容されるワクチン接種後、40以上の血清HI力価を有するワクチン被接種者の割合として定義される血清防御率。
・応答型局所及び全身有害事象、非応答型有害事象及び重篤な有害事象に関して試験ワクチンの安全性及び反応原性を評価すること:
1. 各群における各ワクチン接種後の7日間の追跡期間(すなわち、ワクチン接種日及びその後の6日間)の間の応答型局所及び全身兆候及び徴候の発生、強度及びワクチン接種との関係、
2. 各群における各ワクチン接種後の30日間の追跡期間(すなわち、ワクチン接種日及びその後の29日間)の間の非応答型局所及び全身兆候及び徴候の発生、強度及びワクチン接種との関係、
3. 各群における全試験期間の間の重篤な有害事象の発生及び関係。
III.4.1. ワクチン調製物
アジュバント無添加インフルエンザワクチンは、3種の一価ウイルス抗原バルク(それぞれ、インフルエンザA/H1N1株、A/H3N2株及びB型株から調製)からなる三価スプリットビリオン不活化インフルエンザワクチンである。このワクチン中に存在する抗原は、1992年以来FluarixTM(α-Rix(登録商標))として市場で入手可能であるライセンス化されたFluarixTMワクチンと同じであり、用量あたり15μgのHA/株を含む。FluLD臨床ロットに含まれるインフルエンザ株は、2006/2007年の北半球のために選択された株である:
・A/New Caledonia/20/99(H1N1)様株:A/New Caledonia/20/99(H1N1)IVR-116
・A/Wisconsin/67/2005(H3N2)様株:A/Wisconsin/67/2005(H3N2)NYMCX-161
・B/Malaysia/2506/2004。
1用量のFluLD(AS03の全用量又は半用量)は0.5 mlに一致する。その組成を表3に提供する。用量あたりのHA含量は、両製剤について5μgであり、唯一の差異は最終的な容器中に存在するAS03の量である。
インフルエンザ抗原は、FluarixTM(インフルエンザウイルスワクチン)に含まれるものと同一である。一価バルクは、孵化鶏卵中に個々に増殖させた、インフルエンザウイルスの3種の株、すなわちA型(H1N1及びH3N2)並びにB型の種株から調製された精製不活化スプリットウイルスからなる。これらの種株は、年1回のWHO推奨後にWHO共同センターから受領した株に由来する。抗原参照物を調製するためのプロセスについては、例えば、WO 02/097072号に示されている。3種の一価バルクの容量は、製剤化の前の各一価バルク中で測定されたHA含量及び標的製造容量に基づく。
それぞれA型1価バルク(H1N1、H3N2)の20μgのHA
B型1価バルクの23.32μgのHA
の濃度に連続希釈する(5μg HAの各A型一価バルク及び5.83μg HAのB型/500μl三価最終バルク)。
アジュバント添加ワクチン:LD AS03 1/1(表4)
PBS mod 10倍濃縮液(1倍濃縮の場合、pH 7.4;137 mM NaCl、2.7 mM KCl、8.1 mM Na2HPO4、1.47 mM KH2PO4、pH 7.4)並びにTween 80、Triton X-100及びVESを含む混合物(株中に存在する界面活性剤を考慮に入れた量)を、注射用水に添加する。5〜30分間攪拌した後、1 mlの各株H1N1及びH3N2あたり20μgのHA並びに1 mlのB型株あたり23.32μgのHAを、各添加の間に10〜30分間攪拌しながら添加する。15〜30分間攪拌した後、少量のいわゆる「中間バルク」を分析のために廃棄し、+2〜+8℃で保存する。中間バルクはPBS mod中、1倍濃縮されたものである。標的の界面活性剤濃度は、1 mlあたり488μgのTween 80、1 mlあたり73.6μgのTriton X-100及び1 mlあたり66.6μgのVESである。
PBS modの10倍濃縮液(1倍濃縮の場合、pH 7.4-上記組成を参照)並びにTween 80、Triton X-100及びVESを含む混合物(株中に存在する界面活性剤を考慮に入れた量)を、注射用水に添加する。5〜30分間攪拌した後、1 mlの各株H1N1及びH3N2あたり20μgのHA並びに1 mlのB型株あたり23.32μgのHAを、各添加の間に10〜30分間攪拌しながら添加する。15〜30分間攪拌した後、少量のいわゆる「中間バルク」を分析のために廃棄し、+2〜+8℃で保存する。PBS modは中間バルク中、1倍濃縮されたものである。標的の界面活性剤濃度は、1 mlあたり488μgのTween 80、1 mlあたり73.6μgのTriton X-100及び1 mlあたり66.6μgのVESである。
ワクチンを、1.25 mlの滅菌I型(Ph. Eur.)ガラスシリンジ中に充填する。各シリンジを、0.57 mlの標的に充填する(範囲:0.54〜0.60 ml)。ワクチンを、利き腕と逆の腕の三角筋領域中に筋肉内投与した。全てのワクチンを、予め充填されたシリンジ(0.5 ml)として提供した。ワクチンの適切なIM注射を確保するために、少なくとも25G及び少なくとも長さ2.5 cmの針を用いた。
合計300人の被験者をこの試験に登録した:それぞれ3群の100人の被験者。ワクチン接種の時点での全ワクチン接種コホートの平均年齢は、13.67歳の標準偏差を有する36.7歳であった。3つのワクチン群全体における被験者の平均年齢及び性別分布は類似していた。
免疫原性の分析を、免疫原性に関するATPコホートに対して実施した(297人の被験者)。
AS03でアジュバント添加された低用量インフルエンザ候補ワクチンにより誘導された液性免疫応答を評価するために、以下のパラメーター(95%信頼区間で)を各処理群について算出した:
・0日及び21日目でのHI抗体力価の幾何平均力価(GMT);
・21日目での血清変換率(SC);
・21日目での変換係数;
・0日及び21日目での防御率。
95%CIでのHI抗体のGMTを表6及び図1に示す。群間で調整されたGMT比を表7に示す。
結果を、血清防御率については表8−図2、血清変換率については表9−図3に、及び変換係数については表10−図4に提供する。
Fluarix群と比較したアジュバント添加ワクチン群における応答型(局所/全身)及び非応答型徴候に関するより高い反応原性は、この試験において観察された全体的な傾向であった。アジュバント添加ワクチン中のAS03含量の低下は、全ての全身及び局所等級3徴候に対する有意な影響を有する。
III.8.1. 免疫原性結果
この試験の主要評価項目は、2つの異なる濃度のAS03アジュバントを含む低用量のインフルエンザワクチン、及びFluarixにより誘発される液性免疫応答(抗HI抗体力価)を評価することであった。
AS03でアジュバント添加された低用量インフルエンザ候補ワクチンの投与は安全であり、試験集団、すなわち、18〜59歳の年齢の成人において臨床的によく寛容された。半用量のアジュバント添加ワクチンは、全用量のアジュバント添加ワクチンと比較して、応答型局所及び全身徴候の発生の顕著な低下を示した。
IV.1. 実験設計及び評価項目
インフルエンザで初回刺激されたマウスにおける実験を実施して、この水中油型アジュバントを用いて製剤化されたインフルエンザワクチンにより誘導されたAS03による液性応答の増加を評価した。ヒトの状況により近づけるために(およそ2年毎に推移する菌株によって反復的に感染するために人は血清陽性となっている)、異種亜型株で初回刺激されたマウスを用いて実験を行った。異種亜型の初回刺激はまた、同種亜型株で初回刺激した場合と比較してよりストリンジェントなモデルであり、異なるアジュバントを区別するために良好なモデルである。
27匹の成体雌BALB/cマウスの群を、三価全ホルマリン不活化インフルエンザウイルス(各株につき5μgのHA)を用いて0日目に鼻内に(20μl容量)初回刺激した。初回刺激株は、ワクチン中に含まれるものよりも早いドリフト変異体(5μgのHA全不活化H1N1 A/Johannesburg/82/96、H3N2 A/Sydney/5/97、B/Harbin/7/94)からなっていた。28日後、合計容量50μlで筋肉内に単回用量のワクチン候補をマウスにワクチン接種した。スプリット抗原のみ(三価スプリット単味)を含む製剤又は2種の用量のAS03(全量若しくは1/5)でアジュバント添加されたスプリット抗原を含む製剤を用いて、マウスを免疫した。免疫に用いた株は、H1N1 A/New Caledonia/20/99、H3N2 A/Panama/2007/99、B/Shangdong/7/97ウイルス抗原(1.5μg/株、ヒト用量の1/10)を含んでいた。
Tween 80、Triton X-100及びコハク酸ビタミンE(VES)のプレミックスを調製して、750μg/mlのTween 80、110μg/mlのTriton X100及び100μg/mlのVESのワクチン中の最終濃度を達成する。プレミックス中で用いられる量を、株中に既に存在する界面活性剤及びVESの量を考慮に入れて算出する。
1回分の50μl用量の製剤を、以下の順番に従って即時調製する:注射用水+塩水バッファー(10倍濃縮PBS pH 7.4)+プレミックス、室温で5分間、磁気攪拌、+1.5μg HA H1N1株、室温で10分間、磁気攪拌、+1.5μg HA H3N2株、室温で10分間、磁気攪拌、+1.5μg HA B型株、室温で15分間、磁気攪拌。この製剤を、その調製の終わりの後1時間以内に注射する。
Tween 80、Triton X100及びコハク酸ビタミンE(VES)のプレミックスを調製して、750μg/mlのTween 80、110μg/mlのTriton X100及び100μg/mlのVESのワクチン中の最終濃度を達成する。プレミックス中で用いられる量を、株中に既に存在する界面活性剤及びVESの量を考慮に入れて算出する。
ワクチン接種に対する液性免疫応答を、免疫の前(28日目)及び免疫の14日後に測定した(27匹のマウス/群)。血清サンプルを、血球凝集阻害(HI)試験により試験した。
IV.2.1. 液性免疫
結果を図5に提供する。異種亜型初回刺激、次いで1回のワクチン接種のこのマウスモデルにおいては、AS03及びその希釈液は単味ワクチンと比較してより高いHI力価を誘導することが示された。全てのインフルエンザA型株について、HI力価の統計学的に有意な増加が観察された(p<0.05)。また、H1N1株については、HI力価の有意差がAS03とAS03 1/5の間で観察された(p<0.05)。少量のAS03は、単味ワクチンと比較してB型株についてHI力価を増加させることができなかった。B型株(B/Shangdong)に対しては、非常に低い応答が観察された。これは、初回刺激に用いられたB型株とワクチンとの間での有意な抗原ドリフトに起因するものである可能性がある。
結論においては、単味ワクチンと比較して、AS03アジュバント添加ワクチンを用いる場合、異種亜型株で初回刺激された動物において、HI力価の増加が観察された。全用量のAS03は、3種全部のインフルエンザワクチン株に対して強固なHI力価を得るのに最適であった。
V.1. 実験設計及び評価項目
インフルエンザで初回刺激されたマウスにおける実験を実施して、この水中油型アジュバントを用いて製剤化されたAS03誘導インフルエンザワクチンによる液性応答及び細胞性応答の増加を評価した。
25匹の成体雌C57Bl/6マウスの群を、三価全ホルマリン不活化インフルエンザウイルス(各株につき5μgのHA)を用いて0日目に鼻内(20μl容量)に初回刺激した。初回刺激株は、ワクチンに含まれるものよりも早いドリフト変異体(5μg HA全不活化H1N1 A/Beijing/262/95、H3N2 A/Panama/2007/99、B/Shangdong/7/97)からなっていた。28日後、合計容量100μlで筋肉内に単回用量のワクチン候補をマウスにワクチン接種した。スプリット抗原のみ(三価スプリット単味)を含む製剤又は3種の用量のAS03(全量、1/2若しくは1/5)でアジュバント添加されたスプリット抗原を含む製剤を用いて、マウスを免疫した。免疫に用いた株は、H1N1 A/New Caledonia/20/99、H3N2 A/New York/55/2004、B/Jiangsu/10/2003ウイルス抗原(1.5μg/株、ヒト用量の1/10)を含んでいた。
三価スプリット/単味
100μl用量の製剤を、以下の順番に従って即席に調製する:注射用水+塩水バッファー(実施例IVに教示されたように調製された10倍濃縮PBS pH 7.4)+Fluarix Lot DFLUA014(最終用量中に、株あたり1.5μg)。
100μl用量の製剤を、以下の順番に従って即席に調製する:注射用水+塩水バッファー(実施例IVに教示されたように調製された10倍濃縮PBS pH 7.4)+Fluarix Lot DFLUA014(最終用量中に、株あたり1.5μg)+全用量については25μlのSB62エマルジョン又は1/2用量については12.5μlのSB62エマルジョン又は1/5用量については5μlのSB62エマルジョン。この製剤を、調製の終わりの後1時間以内に注射する。
ワクチン接種に対する液性免疫応答を、免疫の21日後に測定し(10匹のマウス/群)、血清サンプルを、血球凝集阻害(HI)試験により試験した。細胞性免疫応答(15匹のマウス/群)を、細胞内サイトカイン染色(ICS)により免疫の7日後に試験した。
V.2.1. 液性免疫(10匹のマウス/群)
結果を図6に提供する。異種亜型初回刺激、次いで1回のワクチン接種のこのマウスモデルにおいては、AS03及びその希釈液(1/2及び1/5)は単味ワクチンと比較してより高いHI力価を誘導することが示された。3種全部の株について、全用量AS03又は低用量のAS03でアジュバント添加されたワクチンを受容するマウス間でHI力価の差異は観察されなかった。
結果を図7に提供する。AS03の希釈率に関わらず、三価スプリット単味で免疫されたマウスと比較して、AS03でアジュバント添加された三価スプリットワクチンで免疫されたマウスにおいて、より高いCD4+ T細胞応答が観察された。全用量AS03でアジュバント添加された三価スプリットで免疫されたマウスにおいて誘導された応答と比較して、マウスをより低用量のAS03でアジュバント添加された三価スプリットで免疫した場合、より少ない細胞性応答の傾向が観察された。
結論において、単味ワクチンと比較して、AS03アジュバント添加ワクチンを用いる場合、異種亜型株で初回刺激された動物において、液性及び細胞性応答の増加が観察された。全用量又は分割用量のAS03アジュバントで免疫されたマウス間で、類似する規模の液性応答が観察された。しかしながら、アジュバント用量の減少は、CD4+ T細胞応答の低下した規模に関する傾向と関連していた。
VI.1. 実験設計及び評価項目
インフルエンザで初回刺激されたマウスにおける実験を実施して、低用量の抗原(0.5μg/株、1/30ヒト用量)を含み、この水中油型アジュバントと共に製剤化されたインフルエンザワクチンにより誘導されるAS03による細胞性免疫応答の増加を評価した。ヒトの状況をシミュレートするために、異種亜型株で初回刺激されたマウスを用いて実験を行った。
15匹の成体雌C57Bl/6マウスの群を、三価全ホルマリン不活化インフルエンザウイルス(各株につき5μg HA)を用いて0日目に鼻内に(20μl容量)初回刺激した。初回刺激株は、ワクチンに含まれるものよりも早いドリフト変異体(5μg HA全不活化H1N1 A/Beijing/262/95、H3N2 A/Panama/2007/99、B/Shangdong/7/97)からなっていた。28日後、合計容量50μlで筋肉内に単回用量のワクチン候補をマウスにワクチン接種した。スプリット抗原のみ(三価スプリット単味)を含む製剤、又は3種の用量のAS03(全量、1/2若しくは1/5)でアジュバント添加されたスプリット抗原を含む製剤を用いて、マウスを免疫した。免疫に用いた株は、H1N1 A/New Caledonia/20/99、H3N2 A/New York/55/2004、B/Jiangsu/10/2003ウイルス抗原(1.5μg/株、ヒト用量の1/30)を含んでいた。
三価スプリット/単味
50μl用量の製剤を、以下の順番に従って即時調製する:注射用水+塩水バッファー(実施例IVに教示されたように調製された10倍濃縮PBS pH 7.4)+Fluarix Lot DFLUA014(最終用量中に、株あたり0.5μg)。
50μl用量の製剤を、以下の順番に従って即時調製する:注射用水+塩水バッファー(実施例IVに教示されたように調製された10倍濃縮PBS pH 7.4)+Fluarix Lot DFLUA014(最終用量中に、株あたり0.5μg)+全用量については25μlのSB62エマルジョン又は1/2用量については12.5μlのSB62エマルジョン又は1/5用量については5μlのSB62エマルジョン。この製剤を、調製の終わりの後1時間以内に注射する。
VI.2.1. 細胞性免疫
結果を図8に示す。三価スプリット単味で免疫したマウスと比較して、AS03(全用量若しくは1/2用量)でアジュバント添加された三価スプリットワクチンで免疫したマウスにおいて、わずかにより高いCD4+ T細胞応答が観察された。三価スプリット単味又は全用量若しくは半用量のAS03でアジュバント添加されたワクチンで免疫されたマウスにおいて誘導された応答と比較して、マウスを1/5用量のAS03でアジュバント添加された三価スプリットで免疫した場合、より高い細胞性応答が観察された。
結論においては、単味ワクチンと比較して、AS03でアジュバント添加されたワクチンを用いる場合、異種亜型初回刺激動物において、CD4+ T細胞応答の最小的な増加が観察された。この実験においては、アジュバント用量応答は観察されなかったが、実際に1/5のAS03用量により、より高いアジュバント用量を用いる場合に認められるものよりも高い頻度の抗原特異的CD4+ T細胞が誘導された。1株当たり0.5μgのHAを用いて得られたこれらのデータは、全体として、1株当たり1.5μgのHAを用いて得られる他の前臨床試験のデータとは類似しなかった。
VII.1. 実験設計及び評価項目
H5N1にナイーブなマウスにおける実験を実施して、この水中油型アジュバントと共に製剤化されたH5N1スプリットワクチンにより誘導されるAS03による液性及び細胞性免疫応答の増加を評価した。パンデミックの場合、世界全体の集団が新規に流行するパンデミックインフルエンザ株に対して免疫学的にナイーブであると予想される。このナイーブな状態に起因して、パンデミックワクチンは新しいインフルエンザ株により引き起こされる感染及び重篤な疾患から個人を防御するための2種のワクチン用量を必要とする可能性が高い。以前の曝露のこの欠如を表すために、ナイーブなマウスモデルを開発して、ワクチンの免疫原性を評価した。
15匹の成体雌ナイーブC57Bl/6マウスの群を、全量50μlで筋肉内にパンデミックH5N1ワクチン候補を用いて0日目及び28日目に免疫した。マウスを、スプリットH5N1抗原のみ(H5N1スプリット単味)を含む製剤又は様々な用量のAS03(2倍、全量、1/2若しくは1/5)でアジュバント添加されたスプリット抗原を含む製剤で免疫した。免疫に用いた株は、H5N1 A/ベトナム/1194/04ウイルス抗原(ヒト用量の1/10に対応する1.5又は0.38μg/株)を含んでいた。1回の50μlのH5N1スプリット/AS03全用量+1回の50μlのAS03用量の同時注射よりもむしろ、2倍のAS03用量を用いて製剤化を行わなかった。
1リットルの最終バルクバッファー(PBS pH 7.2±0.2)の調製:0.800 lの注射用水に、NaCl 7.699 g、KCl 0.200 g、MgCl2 x 6H2O 0.100 g、Na2HPO4 x 12 H2O 2.600 g、KH2PO4 0.373 gを添加する。溶解後、注射用水で1.0 Lに調整する。
50μl用量の調製:
チオメルサール(株中でのその濃度を考慮に入れた量)及びTriton X100を、最終バルクバッファーに添加する。Tween 80を内容物として添加せず、製剤中の標的を、株のTween濃度により達成する。最終濃度は、1.5μg製剤用量中、10μg/mlのチオメルサール、368μg/mlのTween 80及び35μg/mlのTriton X100である。それらは、0.38μgの製剤用量中では、チオメルサールについては10μg/ml、Tween 80については93μg/ml及びTriton X100については8.9μg/mlである。5〜30分間磁気攪拌した後、1.5又は0.38μgのHA (H5N1株)を添加する。製剤を30〜60分間攪拌する。pHを調べる。製剤化の終わりの後1時間以内に注射を行う。
50μl用量の調製:
チオメルサール(株中でのその濃度を考慮に入れた量)及びTriton X100を、最終バルクバッファーに添加する。Tween 80を内容物として添加せず、製剤中の標的を、株のTween濃度により達成する。最終濃度は、1.5μg製剤用量中、10μg/mlのチオメルサール、368μg/mlのTween 80及び35μg/mlのTriton X100である。それらは、0.38μgの製剤用量中では、チオメルサールについては10μg/ml、Tween 80については93μg/ml及びTriton X100については8.9μg/mlである。5〜30分間磁気攪拌した後、1.5又は0.38μgのHA (H5N1株)を添加する。30〜60分間攪拌した後、25又は12.5又は5μlのSB62エマルジョンを添加する。製剤を30〜60分間攪拌する。pHを調べる。製剤化の終わりの後1時間以内に注射を行う。
抗Ig、IgG1及びIgG2b抗体力価(図9A〜F)により、免疫の14日後(10匹のマウス/群)に液性免疫応答を測定した。また、抗H5N1血球凝集阻害アッセイにより、免疫の21日後(10匹のマウス/群)に液性免疫応答を測定した(図10A〜B)。
VII.2.1. 液性免疫応答:ELISA及びアイソタイプ
結果を図9及び表18Bに示す。
1.5μg HA用量/マウスの場合
各アジュバント用量で、AS03でアジュバント添加されたH5N1スプリットワクチンで免疫された全てのマウスは、アジュバント無添加H5N1スプリットワクチンで免疫されたマウスにおいて得られる応答と比較して、より高いHI力価を誘導した(図10A)。H5N1スプリットワクチンを一定用量範囲のAS03でアジュバント添加した場合、HI力価の統計学的有意差は観察されなかった(図10A)。
各アジュバント用量で、AS03でアジュバント添加されたH5N1スプリットワクチンで免疫された全てのマウスは、アジュバント無添加H5N1スプリットワクチンで免疫されたマウスにおいて得られる応答と比較して、より高いHI力価を誘導した(図10B)。
AS03/5でアジュバント添加された1.5μg HAスプリットH5N1で免疫されたマウスが2倍全用量のAS03でアジュバント添加された0.38μg HAスプリットH5N1で免疫されたマウスよりも有意に低い(p=0.01)HI力価を示したことを除いて、AS03、AS03/2又はAS03/5でアジュバント添加されたそれぞれのHA用量のH5N1スプリットワクチンで免疫されたマウス間で、HI力価の統計学的有意差は観察されなかった(図10)。
三価の季節性インフルエンザワクチンにより誘導される細胞性免疫応答を評価するため、1株あたり1μgのスプリット抗原のHAをCD4 T細胞の再刺激のために使用した。一価H5N1インフルエンザワクチンと同じ再刺激条件を維持するため、この実験では3μgの一価スプリット抗原のHAを使用した。この濃度はまた、種々のアジュバントを区別するために最適であることが示されている。結果を図11に提供する。
マウスにおける免疫原性試験により、アジュバント添加されたH5N1スプリットワクチンは、アジュバント無添加のH5N1スプリットワクチンにより誘導されるものよりも、有意により高い液性応答(抗H5N1 ELISA及びHI力価)並びに細胞性応答(CD4+ T細胞)を誘導することが示された。
VIII.1. 実験設計及び評価項目
インフルエンザで初回刺激されたブタにおける実験を実施して、この水中油型アジュバントと共に製剤化されたAS03により誘導されたインフルエンザワクチンによる液性応答の増加を評価した。
10匹の成体巨大白ブタの群を、全量200μlで鼻内に、三価全ホルマリン不活化インフルエンザウイルス(各株につき25μg HA)を用いて0日目に初回刺激した。初回刺激株は、ワクチン株と同種の株(25μg HA全不活化H1N1 A/New Caledonia/20/99、H3N2 A/Panama/2007/99及びB/Shangdong/7/97)からなっていた。28日後、全量500μlで筋肉内に、単回用量のワクチン候補をブタにワクチン接種した。ブタを、スプリット抗原のみ(三価スプリット単味)を含む製剤又は一定用量範囲のAS03(全量、1/2若しくは1/5)でアジュバント添加されたスプリット抗原を含む製剤で免疫した。免疫に用いた株は、H1N1 A/New Caledonia/20/99、H3N2 A/Panama/2007/99及びB/Shangdong/7/97ウイルス抗原(H1N1 A/New Caledonia/20/99、H3N2 A/Panama/2007/99株については15μg HA及び1回ヒト用量において17.5μgのB/Shangdong/7/97株)を含んでいた。
三価スプリット/単味
Tween 80、Triton X100及びコハク酸ビタミンE(VES)のプレミックスを、750μg/mlのTween 80、110μg/mlのTriton X100及び100μg/mlのVESのワクチン中の最終濃度を達成するために調製する。プレミックス中で用いられる量は、株中でのそれらの含量を考慮に入れる。
Tween 80、Triton X100及びコハク酸ビタミンE(VES)のプレミックスを、750μg/mlのTween 80、110μg/mlのTriton X100及び100μg/mlのVESのワクチン中の最終濃度を達成するために調製する。プレミックス中で用いられる量は、株中でのそれらの含量を考慮に入れる。
ワクチン接種に対する液性免疫応答を、鼻内初回刺激の前(0日目)、免疫の前(28日目)及び免疫の14日後に測定した(10匹のブタ/群)。血清サンプルを、血球凝集阻害(HI)試験により試験した。
VIII.2.1. 液性免疫
結果を図12に提供する。アジュバントの希釈率に関わらず、AS03でアジュバント添加された三価スプリット製剤は、同種初回刺激のこのモデルにおいて、単味三価製剤よりも、全ての株に対してより強力なHI応答を誘導したが、3種全部の株について、統計学的有意差は常に達成されるわけではなかった。アジュバント用量効果は、株間でわずかな差異と共に観察された。B/Shangdongなどの免疫原性の低い株については、全用量のAS03でアジュバント添加された三価スプリットワクチンのみが、単味ワクチンと有意に異なっていた。全用量のAS03でアジュバント添加された三価スプリットワクチンと対照的に、少量のAS03は、単味ワクチンについて認められたものと比較して上記の3種の全部の株についてHI力価を増加させることができなかった。
IX.1. 実験設計と目的
この水中油型エマルジョンアジュバント(AS03又はAS03半用量)を用いて製剤したインフルエンザスプリット三価又は四価(第2のB型株を含有する)ワクチンにより誘導される液性免疫応答の増加を評価する目的で、ナイーブかつ初回刺激したマウスにおける実験を実施した。最近の単離体であるインフルエンザBウイルスの系統学的分析は、この遺伝子が1980年代半ばからB/Victoria/2/87様及びB/Yamagata/16/88様ウイルスと表される2つの抗原的に異なる系統に進化したことを実証した。これらの実験は、四価インフルエンザワクチン(QIV)中の第2のB型株の存在が液性免疫応答に与える影響を、三価インフルエンザワクチン(TIV)により誘導される応答と比較して評価した。
これらの実験は、成熟雌性C57Bl/6のナイーブな10匹のマウス、又はワクチン株と比較して異種の株で初回刺激したマウスの群を用いて実施した。
TIV単味(アジュバント無添加)
100μl用量の調製:
10倍濃縮したPBSと、Tween 80、Triton X-100及びVESの前混合物(株中に存在する界面活性剤を考慮した量)とを注射用水に加える。製剤中の最終濃度は、Tween 80が354μg/ml、Triton X-100が52μg/ml、VESが47.37μg/mlである。5分間の磁石攪拌後、各株(H1N1、H3N2、B型株)の1.5μgを、それぞれの添加の間に10分間磁石攪拌して加える。次いで製剤を15分間攪拌する。pHをチェックする。注射は、製剤の終了後、その時間内に行う。
100μl用量の調製:
10倍濃縮したPBSと、Tween 80、Triton X-100及びVESの前混合物(株中に存在する界面活性剤を考慮した量)とを、注射用水に加える。製剤中の最終濃度は、Tween 80が354μg/ml、Triton X-100が52μg/ml、VESが47.37μg/mlである。5分間の磁石攪拌後、各株(H1N1、H3N2、B型株)の1.5μgを、それぞれの添加の間に10分間磁石攪拌して加える。15分間の磁石攪拌後、SB62エマルジョンの25μl又は12.5μlを加える。次いで製剤を15分間攪拌する。pHをチェックする。注射は、製剤の終了後、その時間内に行う。
100μl用量の調製:
10倍濃縮したPBSと、Tween 80、Triton X-100及びVESの前混合物(株中に存在する界面活性剤を考慮した量)とを、注射用水に加える。製剤中の最終濃度は、Tween 80が472μg/ml、Triton X-100が69.44μg/ml、VESが63.16μg/mlである。5分間の磁石攪拌後、各株(H1N1、H3N2、2種のB型株)の1.5μgを、それぞれの添加の間に10分間磁石攪拌して加える。次いで製剤を15分間攪拌する。pHをチェックする。注射は、製剤の終了後、その時間内に行う。
100μl用量の調製物:
10倍濃縮したPBSと、Tween 80、Triton X-100及びVESの前混合物(株中に存在する界面活性剤を考慮した量)とを、注射用水に加える。製剤中の最終濃度は、Tween 80が472μg/ml、Triton X-100が69.44μg/ml、VESが63.16μg/mlである。5分間の磁石攪拌後、各株(H1N1、H3N2、2種のB型株)の1.5μgを、それぞれの添加の間に10分間磁石攪拌して加える。15分間の磁石攪拌後、SB62エマルジョンの25μl又は12.5μlを加える。次いで製剤を15分間攪拌する。pHをチェックする。注射は、製剤の終了後、その時間内に行う。
ナイーブなマウスにおいては、最初の免疫感作後28日(D28 Post-I)及び第2の免疫感作後21日(D21 Post-II)の液性免疫応答を、1群当たり10匹のマウスについて、赤血球凝集阻害アッセイにより測定した(図13)。
IX.2.1. ナイーブなマウスにおける液性免疫応答:HI力価
アジュバント添加したインフルエンザスプリットワクチンで免疫感作したナイーブなマウスは、アジュバント無添加のインフルエンザスプリットワクチンで免疫感作したマウスにおいて得られた応答と比較して、より高いHI力価を誘導した(図13A及びB)。
B/Victoria様ウイルスで初回刺激しかつアジュバント添加したインフルエンザスプリットワクチンで免疫感作したマウスは、アジュバント無添加のインフルエンザスプリットワクチンで免疫感作したマウスで得られた応答と比較して、より高いHI力価を誘導した(図14A及びB)。
アジュバント添加した(AS03又はAS03/2)TIV又はQIVワクチンを用いて免疫感作した、ナイーブなマウス又はB/Victoria様ウイルスで初回刺激したマウスは、ワクチンに含まれるホモ型B/Victoria様ウイルス又は同じB/Victoria系統に属するヘテロ亜型ウイルスに対して交差反応性を示した。アジュバント添加した(AS03又はAS03/2)TIVワクチンを用いて免疫感作した、ナイーブなマウス又はB/Victoria様ウイルスで初回刺激したマウスは、他の系統に属する異種亜型ウイルス(この実施例ではB/Yamagata様ウイルス)に対して、ワクチンに含まれるB型ウイルスと比較して、何の交差反応性も示さなかった。
X.1. はじめに
AS03アジュバントの様々な用量と共に筋肉内投与したGlaxoSmithKline Biologicalsの低用量インフルエンザ候補ワクチン(すなわち、株当たり5μgのHAを含有する)の免疫原性、安全性及び反応原性を、対照として用いたFluarixTM(GlaxoSmithKline Biologicals)と比較して評価する目的で、フェーズIIのランダム化比較単純盲研を18〜64歳齢の成人集団について2007年に実施した。
5群の被験者(1群当たり200人)は次のワクチンの筋肉内投与を並行して受けた:
-FluLD1/1:AS03の1/1用量をアジュバント添加したインフルエンザワクチンの5μgHA/株
-FluLD1/2:AS03の1/2用量をアジュバント添加したインフルエンザワクチンの5μgHA/株
-FluLD1/4:AS03の1/4用量をアジュバント添加したインフルエンザワクチンの5μgHA/株
-FluLD1/8:AS03の1/8用量をアジュバント添加したインフルエンザワクチンの5μgHA/株
-FluarixTM15μgHA/株の1回全用量を受ける被験者200人の1群。
X.2.1. 主要な目的:免疫原性
ワクチン接種後21日に全被験者において、AS03(1/1、1/2、1/4、1/8用量のAS03)をアジュバント添加した低用量インフルエンザワクチンのFluarixに対する免疫学的非劣性(immunological non-inferiority)(GMT)を実証することである。
0日及び21日:全被験者における、3種のワクチン株のそれぞれに対する、血清赤血球凝集阻害(HI)抗体力価。
0日及び21日におけるHI抗体力価の幾何平均力価(GMT)。
・液性免疫応答を、AS03(1/1、1/2、1/4、1/8用量のAS03)をアジュバント添加した低用量インフルエンザワクチン及びFluarixにより誘導される抗赤血球凝集素(HI)抗体力価として、ワクチン接種後21日に全被験者において評価すること。
・AS03(1/1、1/2、1/4、1/8用量のAS03)をアジュバント添加した低用量インフルエンザワクチン及びFluarixにより誘導されるHI抗体の持続性を、ワクチン接種後180日に全被験者において評価すること。
・AS03(1/1、1/2、1/4、1/8用量のAS03)をアジュバント添加した低用量インフルエンザワクチン及びFluarixにより誘導される細胞媒介性免疫応答を、インフルエンザ特異的CD4/CD8 Tリンパ球の頻度として、0、21及び180日に被験者のサブセットにおいて評価すること。
・液性免疫応答を、AS03(1/1、1/2、1/4、1/8用量のAS03)をアジュバント添加した低用量インフルエンザワクチン及びFluarixにより誘導される中和抗体力価として、0、21及び180日に被験者のサブセットにおいて評価すること。
・AS03(1/1、1/2、1/4、1/8用量のAS03)をアジュバント添加した低用量インフルエンザワクチン及びFluarixの安全性と反応原性を、全研究期間中、全被験者において評価すること(7日間の応答型徴候のフォローアップ、21日間の非応答型徴候のフォローアップ、6カ月間の重篤な有害事象及び医療上有意な症状のフォローアップ)。
・0、21及び180日において:全被験者における、3種のワクチン株のそれぞれに対する血清赤血球凝集-阻害(HI)抗体力価。
・0、21及び180日において:被験者のサブセットにおける、ワクチンに表される3種のインフルエンザ株のそれぞれに対して別々に試験した中和抗体力価。
・0、21及び180日におけるHI抗体力価の幾何平均力価
・21日における血清変換率*
・21日における血清変換係数**
・0及び21日における血清防御率***
*血清変換率は、ワクチン接種前力価<1:10及びワクチン接種後力価≧1:40、又はワクチン接種前力価≧1:10及び少なくともワクチン接種後力価の4倍増加を有する、ワクチンレシピエントのパーセントとして定義される。
**血清変換係数は、0日と比較したワクチン接種後の血清HI GMTの増加倍率として定義される。
***血清防御率は、ワクチン接種後に通常、防御を示すと容認される血清HI力価≧1:40を有するワクチンレシピエントのパーセントとして定義される。
・0、21及び180日における:
−少なくとも2つの異なるシグナル分子(IL-2、IFN-γ、TFN-α及びCD40L)を産生する試験における、106細胞当たりのサイトカイン陽性CD4/CD8細胞の頻度。
−少なくともCD40Lと他のシグナル分子(IL-2、IFN-γ、TFN-α)を産生する試験における、106細胞当たりのサイトカイン陽性CD4/CD8細胞の頻度。
−少なくともIL-2と他のシグナル分子(CD40L、IFN-γ、TFN-α)を産生する試験における、106細胞当たりのサイトカイン陽性CD4/CD8細胞の頻度。
−少なくともTFN-αと他のシグナル分子(IL-2、IFN-γ、CD40L)を産生する試験における、106細胞当たりのサイトカイン陽性CD4/CD8細胞の頻度。
−少なくともIFN-γと他のシグナル分子(CD40L、IL-2、TFN-α)を産生する試験における、106細胞当たりのサイトカイン陽性CD4/CD8細胞の頻度。
各試験に対する、0、21、180日における、特異的インフルエンザCD4/CD8Tリンパ球の幾何平均(GM)。
・液性免疫応答を、ワクチン異種HI力価(ドリフト株に対する血清赤血球凝集阻害(HI)抗体力価)として、0、21及び180日に被験者のサブセットにおいて評価すること。
・液性免疫応答を、ワクチン異種中和抗体力価(交差反応性インフルエンザ特異的ウイルス株(ドリフト株))として、0、21及び180日に被験者のサブセットにおいて評価すること。
・CMI応答を、交差反応性インフルエンザ特異的CD4/CD8Tリンパ球(異種株)(ドリフト株又は保存されたインフルエンザエピトープ)の頻度として、0、21及び180日に被験者のサブセットにおいて評価すること。
X.3.1. ワクチン調製物
本研究で使用されるAS03アジュバント添加低用量インフルエンザワクチンは、AS03アジュバントを添加した3種の異なるスプリット不活化インフルエンザ抗原の等量(すなわち3×5μg HA)の液体混合物である。これは、0.5ml/用量の体積で予め満たしたガラス製(I型)シリンジに入った単回用量ワクチンとして提示される。AS03アジュバントを添加した低用量インフルエンザ候補製剤は次の株を含有した:
・A/Solomon Islands/3/2006(H1N1)様株:A/Solomon Islands/03/2006(IVR-145)、
・A/Wisconsin/67/2005(H3N2)様株: A/Wisconsin/67/2005(NYMCX)-161B、
・B/Malaysia/2506/2004様株:B/Malaysia/2506/2004。
FluLDの1用量(AS03の全、半用量、1/4用量又は1/8用量)は0.5mlに相当する。その組成を表23に示す。1用量当たりのHA含量は、全製剤について約5μgであり、唯一の相違は最終容器中に存在するAS03の量である。
抗原調製物(「中間体バルク」): Tween 80、Triton X-100及びVESを、中間体バルク中の最終濃度がそれぞれ952.5μg/mL、130.9μg/ml及び119.1μg/mLとなる量だけ、PBS mod Na/K(132.7mM NaCl、2.7mM KCl、1.1mM MgCl2、7.26mM Na2HPO4、2.72mM KH2PO4、pH 7.2)に加える。15〜45分間攪拌後、35.71μgのHA H1N1株/ml、36.90μgのHA H3N2株/mL及び39.29μgのHA B型株/mlをそれぞれ加える。
X.4.1 HI幾何平均力価(GMT)
HI抗体のGMT(95% CI)を表24と図15に示す。HI抗体に対するGMT(95% CI)/年齢群(18〜49歳及び50〜64歳)を表25に示す。
A/Solomon Island(H1N1)については、GMTは全研究群について同じ範囲であった。全てのアジュバント添加群は、全株及び全年齢カテゴリーについてFluarix群に劣らない。A/Wisconsin(H3N2)については、AS03濃度低下とともに免疫応答低下の傾向が示されたものの、統計的に有意差はなかった。B/MalaysiaについてもAS03濃度低下とともに免疫応答低下の傾向がみられたが、FluLD1/2とFluLD1/8で誘導されたGMTの間にだけ統計的有意差が示された(図15を参照)。
結果を、血清防御率については表26及び26−図16、血清変換率については表28及び29−図17A及び17B、並びに変換係数については表30及び31−図17に示す。
SCRは、全研究ワクチン及び全3株に対するCHMP(平均>40)及びFDA判定基準(95%CIのLL>40)に適合する。B/Malaysia(全結果が同じ範囲内にあることを示した)を除いて、AS03濃度低下とともに免疫応答低下の傾向が示された。A/Solomon Islandについては、FluLD1/1は、FluLD1/8と比較して、統計的に有意に高いSCRを誘導した。全群について、FluLD1/2とFluLD1/4により誘導されたSCRは同じ範囲内にあった。
全研究ワクチンについて、SCFは全3株に対するCHMP判定基準を遥かに超えた(>2)。SCFは全研究ワクチンについて、同じ範囲内にあった。
Fluarixと比較したアジュバント添加低用量ワクチンの非劣性(GMT)を、3種のウイルスについて、21日におけるGMT比として表32に示す。
FluLD 1/1、1/2、1/4は全3株が、Fluarixに対してGMT比として非劣性であることが示された。FluLD 1/8は、H1N1及びH3N2株についてはFluarixに対して非劣性であるが、B型株についてはそうでないことが示された。
X.5.1 安全性結論
本発明のアジュバント添加ワクチンについて、市販Fluarixワクチンで示されたのと比較して、より高い反応原性が示された。アジュバント添加ワクチンについて、ASO3の量の低下とともに、反応原性の低下する傾向が示された。全体として、FluDL1/4とFluDL1/8について、類似した反応原性プロファイルが得られた。非応答型徴候は全ワクチン群について同じであった。
この研究の主要な目的は、D21におけるFluarixに対するLDワクチン製剤の非劣性(GMT)を評価することであった。アジュバント添加ワクチンFluDL1/1、FluDL1/2、及び FluDL1/4の1用量によるワクチン接種後21日における全3株に対するGMT比は、Fluarixで得たものに対して非劣性であることが示された。この研究において、ワクチンFluDL1/8について得たGMT比は、H1N1及びH3N2株については非劣性であるが、B型株に対してはそうでないことが示された。アジュバント量の低下と共に示された免疫応答の低下傾向にも関らず、全ワクチンは、全株について、規制認可のための全3つのCHMP判定基準に適合することが示された。
XI.1. はじめに
高齢者におけるFluarixTMなどの古典的スプリットインフルエンザワクチンの効果は、成人又は若年者集団におけるよりも有意に低い。免疫系の老化(すなわち免疫老化)は、高齢者にみられる効果の相対的な欠如の原因であることが示唆され、従って、より強い免疫応答を刺激することによるワクチン改善の余地が残されている。そこで、フェーズIIのランダム化比較単盲検を、65歳以上の高齢者集団において2007年に実施し、筋肉内投与した8種の異なるアジュバント製剤によるインフルエンザ候補ワクチンの免疫原性、安全性及び反応原性を、対照として用いたFluarixTM(GlaxoSmithKline Biologicals)と比較して評価した。
10群の被験者(65歳以上で1群当たり200人、18〜40歳のFluarix YNG群を除く)に並行して次のインフルエンザワクチンを筋肉内に投与した:
・FluAS03 1/1:o/w型エマルジョンの全用量(AS03 1/1)を用いてアジュバント添加したワクチン
・FluAS03 1/2:o/w型エマルジョンの1/2用量(AS03 1/2)を用いてアジュバント添加したワクチン
・FluAS03 1/4:o/w型エマルジョンの1/4用量(AS03 1/4)を用いてアジュバント添加したワクチン
・FluAS25 1/1:25μg MPL+o/w型エマルジョンの全用量(AS25A)を用いてアジュバント添加したワクチン
・FluAS25 1/2:25μg MPL+o/w型エマルジョンの1/2用量(AS25B)を用いてアジュバント添加したワクチン
・FluAS25 1/4:25μg MPL+o/w型エマルジョンの1/4用量(AS25C)を用いてアジュバント添加したワクチン
・FluAS50 1/2:50μg MPL+o/w型エマルジョンの1/2用量(AS25E)を用いてアジュバント添加したワクチン
・FluAS50 1/4:50μg MPL+o/w型エマルジョンの1/4用量(AS25F)を用いてアジュバント添加したワクチン
・Fluarix ELD(≧65歳):FluarixTM
・Fluarix YNG(18〜40歳):FluarixTM。
主要な目的は、65歳以上の被験者に筋肉内に与えたアジュバント添加インフルエンザワクチンの最適な製剤(1回のo/w型エマルジョン投与量と1回のMPL投与量の組み合わせ)を、ワクチン接種後21日に3種のワクチン株に対する免疫原性(GMT)に基づいて、Fluarixと比較して同定することである。変数は実施例X.2.1の通りで、65歳以上の被験者に対する前記変数(21日におけるHI抗体力価及びHI抗体力価のGMT)である。
・インフルエンザワクチンでワクチン接種した全被験者における安全性及び反応原性。
・全被験者における、ワクチン接種後21日のインフルエンザワクチンの免疫原性(GMT、SCF、SCR及びSPR)。
・全被験者における、初回ワクチン接種後180日のHI抗体の持続性。
・(被験者のサブセットだけに対して)、0、21及び180日に少なくとも2種のサイトカイン(IFN-γ、IL-2、CD40L、又はTNF-α)を産生するインフルエンザ特異的CD4/CD8 Tリンパ球の頻度としての、インフルエンザワクチンにより誘導される細胞介在性免疫(CMI)応答。
アジュバント添加したインフルエンザワクチンは、1992年以後、GSK Bio.が販売した市販のFluarixワクチンに基づく。候補製剤は、三価スプリットビリオン、すなわち3種の一価ウイルスの抗原バルク(それぞれ2007/2008年、北半球に対して推奨されたインフルエンザA/H1N1株、A/H3N2株及びB型株から調製した;実施例Xを参照)から構成される不活化インフルエンザ抗原と、MPL及び/又は水中油(o/w)型エマルジョンに基づくアジュバント系との組み合わせから成る。
・アジュバント添加ワクチンのヒト1用量当たりエマルジョン量によりカテゴリー分類したASO3ファミリー(1/1 - 1/2 - ・・・);
・MPLを補充し、アジュバン添加ヒトワクチンのヒト1用量当たり各成分量によりカテゴリー分類した水中油型エマルジョンのAS25ファミリー(A、B、...)。
孵化した雌ニワトリの卵中で個々に増殖させた3種のインフルエンザウイルス株、A型(H1N1及びH3N2)及びB型の実験シード株(seed)から調製したスプリット不活化ビリオン抗原の3種のモノバルクの生産は、既に記載の通りである(実施例Xを参照)。臨床ロットは、1用量当たり各インフルエンザウイルス株の15μg赤血球凝集素(HA)を含有する。インフルエンザ抗原を、3-O-脱アシル-4'-モノホスホリルリピドA(MPL)及び/又は水中油(o/w)型エマルジョンAS03を用いてアジュバント添加した。ASの8通りの異なる製剤をスプリットビリオンインフルエンザ抗原と組み合わせることにした。アジュバントの調製方法はWO 2006/100111号の実施例IIに記載の方法から改変し、個々の成分の量は表31及び32に示す情報に従って適合させた。賦形剤は次の通りである:ポリソルベート80(Tween-80)、オクトキシノール10(Triton(登録商標)X-100)、α-トコフェリル水素コハク酸塩、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩化カリウム、及び注射用水。アジュバント添加インフルエンザワクチンの異なる製剤は保存剤を含まない製剤である。しかし、これらは生体への負荷を減ずるために加えられる医薬物質製造プロセスの初期段階からの痕跡量のチオメルサール(1用量当たり<1.25μgのHg)を含有する。
AS03製剤は、リン酸バッファー(Na/K 191.4 mM P04 3-、2.74 mM NaCl、54 mM KCL、pH 6.8、9.57 mM P04 3-に調節)を注射用水で希釈することにより調製する(15〜45分間、室温で均一になるまで攪拌する)。次いで、適当な量の水中油型エマルジョンバルクを加える。混合物を15〜45分間、室温で攪拌し、pHを測定する。次いで混合物を0.2μm膜を通して濾過により滅菌する。無菌の不活性ガス(窒素)を最小限1分間流し、充填した容器中に不活性ガスの頭部空間を作る。1.25mlの無菌I型(Ph.Eur.)ガラスシリンジ中に無菌充填するまで、無菌AS03アジュバントは+2〜8℃にて貯蔵する。各シリンジは60μlの体積超過(280μl+60μl過充填)を含有する。
AS03の全用量及びMPL(AS25_1_1)の25μgを用いてアジュバント添加したインフルエンザワクチンは、年齢≧65歳の被験者において、Fluarixと比較して、B/Malaysia 株に対し統計的に有意に優れたHI応答を誘導する。他の2種の株については、AS03の用量の1/8によるものを除く全てのアジュバント添加したワクチンは、本研究で、年齢≧65歳の被験者において、Fluarixに十分比較しうるものであった。
結果を、血清防御率は表36と図20(株当たり1枚のシート)に、血清変換率は表37と図21に、血清変換係数は表38と図22に表す。
AS03(水中油型エマルジョン)の明確な用量効果がHIデータに見られる。
プールしたワクチン株で再刺激した細胞について、0日及び21日における、少なくとも2種のサイトカイン(全て二重)を産生するインフルエンザ特異的CD4 T細胞の頻度を、表39及び図23に示した。
5種のアジュバント添加したワクチン(AS03_1_1、AS03_1_2、AS25_1_1、AS50_1_2及びAS50_1_4)は、年齢が65歳以上の被験者において、Fluarixと比較して、全てのサイトカイン組み合わせについて、個々の差(D21-D0)として、プールした株に対する有意に高いCMI応答を誘導した。これらのアジュバント添加ワクチンのうちの3種(AS03_1_1、AS03_1_2 及び AS25_1_1)はまた、若年の成人において、Fluarixと比較して、全てのサイトカイン組み合わせについて、個々の差(D21-D0)として、プールした株に対する有意に高いCMI応答を誘導した。
局所徴候
ワクチン接種後7日間に、応答型局所的徴候(いずれかのグレード/グレード3)を報じる被験者のパーセントを、定量化しうる徴候についてEMEA及びFDA等級付けを用いて評価した。
EMEA等級付け:熱(≧37.5℃)、等級3熱(>39.0℃)。FDA等級付け:熱(≧38℃)及び等級3熱(>40℃)。
少なくとも1つの全身的症候を報じる被験者のパーセントは、アジュバント添加インフルエンザワクチン群において、Flu_ELD群と比較して、統計的に有意に高かったが、Flu_YNG群(AS03_1_4を除いて)については同じ範囲であった。
少なくとも1つの3等級の全身的徴候を報じる被験者のパーセントは、全群について同じ範囲である。
少なくとも1つの局所的症候を報じる被験者のパーセントは、Flu_ELD群と比較してアジュバント添加インフルエンザワクチン群において、及びFlu_YNG群と比較してAS25_1_1群において、統計的に有意に高かった。
少なくとも1つの3等級の局所的徴候を報じる被験者のパーセントは、AS03_1_1、AS25_1_2、AS25_1_1及びAS50_1_2群において、Flu_ELD及びFlu_YNG群と比較して、統計的に有意に高かった。
これらのデータは、ヒト集団において免疫応答/有害効果の適当なバランスをとるために重要である。
HI免疫原性としての明確なアジュバント効果が実証され、特に、H1N1及びH3N2について、全てのアジュバント投与量で有意な増加が見られた。有意な増加は、B型株について、主にAS25 1/1で得られたが、AS03 1/1、AS03 1/2及びAS50 1/2でも得られた。用量-効果が、アジュバントの水中油型エマルジョン成分で、また、アジュバントのMPL成分についても示されたが、後者は前者ほど明確ではなかった。
細胞介在性免疫応答としてのアジュバント効果も実証され、高齢者において、プールした株に対して、AS03 1/1、AS03 1/2、AS25 1/1及びAS50 1/2について、Fluarixと比較して有意差(頻度、全尺度)があった。最高の応答はAS25 1/1、AS03 1/1及びAS03 1/2により得られた。
Claims (60)
- インフルエンザウイルス抗原又は抗原調製物と水中油型エマルジョンアジュバントとを組み合わせて含むヒトの使用に好適な用量体積のインフルエンザ免疫原性組成物であって、前記水中油型エマルジョンアジュバントが代謝可能な油及び乳化剤を含み、前記代謝可能な油が前記ヒト1用量当たり11mg未満のレベルで存在し、前記乳化剤が前記ヒト1用量中に5mg未満のレベルで存在する前記インフルエンザ免疫原性組成物。
- 前記代謝可能な油がスクアレンである、請求項1に記載の免疫原性組成物。
- 前記代謝可能な油がヒト1用量当たり、0.5〜10、0.5〜9、1〜10、2〜10、4〜8、1〜2、2〜3、4.5〜5.5、5〜6又は9〜10mgの量で存在する、請求項1又は請求項2に記載の免疫原性組成物。
- 前記乳化剤が非イオン系界面活性剤である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記乳化剤がモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン若しくはトリオレイン酸ソルビタン又は両方の混合物である、請求項4に記載の免疫原性組成物。
- 前記モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンがポリソルベート80又はTween(登録商標)80からなる群より選択され、トリオレイン酸ソルビタンがSpan85である、請求項5に記載の免疫原性組成物。
- 前記乳化剤がヒト1用量当たり0.1〜5、0.2〜5、0.3〜5、0.4〜5、0.4〜1.2、0.5〜4、1〜2、2〜3又は4〜5mgの量で存在する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記アジュバントがさらにトコール、ステロール、又は両方を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記トコールがα-トコフェロールである、請求項8に記載の免疫原性組成物。
- 前記トコールがヒト1用量当たり0.5〜12、1〜11、2〜10、4〜9、5〜6、5〜7、2.5〜3.5、1〜2、1〜3又は10〜11mgの量で存在する、請求項8又は請求項9に記載の免疫原性組成物。
- アジュバントが、(i)ヒト1用量当たり4.5〜5.5又は5〜6mgの代謝可能な油、2〜3mgの乳化剤、及び、存在する場合には5〜7mgのトコールを含むアジュバント;(ii)ヒト1用量当たり2〜3mgの代謝可能な油、1〜1.5mgの乳化剤、及び、存在する場合には2.5〜3.5mgのトコールを含むアジュバント;(iii)ヒト1用量当たり0.5〜1.5mgの代謝可能な油、0.25〜0.75mgの乳化剤、及び、存在する場合には0.5〜1.5mgのトコールを含むアジュバントからなる群より選択される、請求項1〜10に記載の免疫原性組成物。
- 前記ステロールがコレステロールである、請求項8〜11のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記ステロールがヒト1用量当たり0.025〜2.5、0.05〜1.5、0.075〜0.75、0.1〜0.3、又は0.125〜0.25mg(例えば0.2〜0.3、0.1〜0.15、0.25又は0.125mg)の量で存在する、請求項8〜12のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- アジュバントがさらに、TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-7、TLR-8、TLR-9又はそれらの組み合わせから選択されるTLRリガンドを含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記TLR-4リガンドが、リピドA誘導体、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体(AGP)、並びにER803022、ER803058、ER803732、ER804053、ER804057、ER804058、ER804059、ER804442、ER804680、及びER804764からなる群より選ばれる化合物、から選択される、請求項14に記載の免疫原性組成物。
- 前記リピドA誘導体が3D-MPL又はリピドAの合成誘導体である、請求項15に記載の免疫原性組成物。
- 前記TLR-4リガンドがヒト1用量当たり5〜60、40〜50、10〜50、20〜30、5〜15、10、20、30、40又は50μgの量で存在する、請求項15又は16に記載の免疫原性組成物。
- アジュバントがさらにサポニン又はその誘導体を含む、請求項1〜17のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記サポニン又はその誘導体がQS21である、請求項18に記載の免疫原性組成物。
- 前記サポニンがヒト1用量当たり5〜60、40〜50、10〜50、20〜30、5〜15、10、20、30、40又は50μgの量で存在する、請求項18又は19に記載の免疫原性組成物。
- 前記ウイルス抗原又は抗原調製物が、ヒト1用量当たり、インフルエンザ株当たり15μg又は15μg未満のHAである、請求項1〜20のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記ウイルス抗原又は抗原調製物が、ヒト1用量当たり、インフルエンザ株当たり10μg未満、8μg未満、4μg未満、2μg未満のHA、1μg未満のHA、0.5μg未満、0.1μg未満のHAである、請求項21に記載の免疫原性組成物。
- 前記ウイルス抗原又は抗原調製物が、ヒト1用量当たり、インフルエンザ株当たり2〜7.5μg、又は1〜5μgのHAである、請求項21又は22に記載の免疫原性組成物。
- 前記ウイルス抗原又は抗原調製物が、ヒト1用量当たり、インフルエンザ株当たり正確に5μgのHA若しくはそれ未満、又は正確に2.5μg若しくはそれ未満、又は正確に1μg若しくはそれ未満である、請求項21〜23のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記組成物が、パンデミック発生に関与しているか又はパンデミック発生に関与する可能性を有する少なくとも1種のインフルエンザ株由来のウイルス抗原又は抗原調製物を含む一価組成物である、請求項1〜24のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記組成物が、少なくとも2種、少なくとも3種、少なくとも4種、又は少なくとも5種のインフルエンザ株由来のウイルス抗原又は抗原調製物を含む多価組成物である、請求項1〜24のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記組成物が、少なくとも3種のインフルエンザ季節性(パンデミック間期の)株に由来するウイルス抗原又は抗原調製物、並びに、任意に、パンデミック発生に関与しているか又はパンデミック発生に関与する可能性を有する少なくとも1種のインフルエンザ株に由来するウイルス抗原又は抗原調製物を含む、請求項26に記載の免疫原性組成物。
- 前記多価組成物が、(i)H1N1及びH3N2からなる群より選ばれる2種のパンデミック間期のA型株、並びにB/yamagata及びB/Victoriaからなる群より選ばれる2種のB型株;(ii)H1N1及びH3N2からなる群より選ばれる3種のパンデミック間期のA型株、並びにB/yamagata及びB/Victoriaからなる群より選ばれる1種のB型株;(iii)H1N1及びH3N2からなる群より選ばれる2種のパンデミック間期のA型株、H5N1である1種のパンデミックA型株、並びにB/yamagata及びB/Victoriaからなる群より選ばれる1種のB型株、からなる群より選択されるウイルス抗原又は抗原調製物を含む、請求項26又は27に記載の免疫原性組成物。
- 前記パンデミックインフルエンザウイルス株がH5N1、H9N2、H5N8、H5N9、H7N4、H7N7、H2N2、H10N7、H5N2、H7N2、H7N1、及びH7N3からなる群より選択される、請求項25、27〜28のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記インフルエンザウイルス抗原又はその抗原調製物が卵で又は細胞培養物で増殖させたインフルエンザウイルス由来のものである、請求項1〜29のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記インフルエンザウイルス抗原又はその抗原調製物が全ウイルス、スプリットウイルス、ビロソーム、又はHA、NA、M1、M2から選ばれる1種以上の精製された抗原を含む、請求項1〜30のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記精製された抗原が哺乳動物、鳥類又は昆虫細胞で増殖させたインフルエンザウイルスから調製される、請求項31に記載の免疫原性組成物。
- 前記精製された抗原が遺伝子組換えで作製される、請求項31又は32に記載の免疫原性組成物。
- 前記ヒト用量が0.5ml又はそれ未満、0.5〜1.5ml、0.2〜1.2ml、0.2〜0.7ml、及び正確に0.25、0.5、0.7若しくは1ml又はそれら未満から選択される、請求項1〜33のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 水中油型エマルジョンの第1の体積とインフルエンザウイルス又はその抗原調製物を含む水性懸濁液の第2の体積とを混合するステップを含み、第1の体積が第2の体積より大きい、請求項1〜34のいずれか1項に記載のアジュバント添加インフルエンザワクチンを調製する方法。
- 実質的に等しい体積の水中油型エマルジョンとインフルエンザウイルス又はその抗原調製物を含む水性懸濁液とを混合するステップを含む、請求項1〜34のいずれか1項に記載のアジュバント添加インフルエンザワクチンを調製する方法。
- 水中油型エマルジョンの第1の体積とインフルエンザウイルス又はその抗原調製物を含む水性懸濁液の第2の体積とを混合するステップを含み、第2の体積が第2の体積より大きい、請求項1〜34のいずれか1項に記載のアジュバント添加インフルエンザワクチンを調製する方法。
- 水中油型エマルジョンを希釈した後、得られる希釈したエマルジョンを前記インフルエンザ水性懸濁液と混合するステップを含む、請求項35〜37のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項21〜34のいずれか一項に記載のインフルエンザウイルス抗原成分又はインフルエンザウイルス抗原調製物成分を含み、さらに同時又は逐次投与のための請求項1〜20のいずれか一項に記載のアジュバントを含むワクチンキット。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物及び製薬上許容される賦形剤を含むワクチン。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を製薬上許容される賦形剤と混合するステップを含む、請求項40に記載のワクチンを製造する方法。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は請求項40に記載のワクチンの免疫防御用量をヒト宿主に投与するステップを含む、インフルエンザ感染により引き起こされる疾患に対してヒト宿主を免疫感作する方法。
- ヒト宿主が18〜50歳の成人、18〜65歳の成人、65歳以上の高齢者又は0〜18歳の小児であり、疾患が季節性又はパンデミックインフルエンザ感染のいずれか又は両方である、請求項42に記載の方法。
- ヒト宿主が高齢者であり、疾患が季節性又はパンデミックインフルエンザ感染のいずれか又は両方である、請求項42又は43に記載の方法。
- 医薬における使用のための、請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は請求項40に記載のワクチン。
- インフルエンザ感染により引き起こされる疾患の治療又は予防における使用のための、請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は請求項40に記載のワクチン。
- インフルエンザ感染により引き起こされる疾患を治療又は予防するための免疫原性組成物の製造における、(a)インフルエンザウイルス抗原又はその抗原調製物、及び(b)請求項1〜20のいずれかに規定した水中油型エマルジョンの使用。
- 前記組成物が、ヒトにおいて、次の応答:(i)アジュバント無添加組成物により得られる応答と比較して、前記抗原又はその抗原調製物に対する改善されたCD4 T細胞免疫応答、(ii)アジュバント無添加組成物により得られる応答と比較して、前記抗原又はその抗原調製物に対する改善された液性免疫応答、(iii)アジュバント無添加組成物により得られる応答と比較して、前記抗原又はその抗原調製物に対する改善されたB記憶細胞応答、の少なくとも1つ、又は少なくとも2つ又は全てを誘導することができる、請求項47に記載の使用、又は請求項46に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、ヒトにおいて、次の応答:(i)アジュバント成分がより高い量で存在するアジュバント添加組成物により得られる応答と比較して、前記抗原又はその抗原調製物に対する同等のCD4 T細胞免疫応答、(ii)アジュバント成分がより高い量で存在するアジュバント添加組成物により得られる応答と比較して、前記抗原又はその抗原調製物に対する同等の液性免疫応答、(iii)アジュバント成分がより高い量で存在するアジュバント添加組成物により得られる応答と比較して、前記抗原又はその抗原調製物に対する同等のB記憶細胞応答、の少なくとも1つ、又は少なくとも2つ又は全てを誘導することができる、請求項47に記載の使用、又は請求項46に記載の使用のための組成物。
- 前記CD4 T細胞免疫応答が交差反応性CD4 Tヘルパー応答の誘導に関わる、請求項47〜49のいずれか一項に記載の使用又は使用のための組成物。
- 前記液性免疫応答が交差反応性液性免疫応答の誘導に関わる、請求項47〜49のいずれか一項に記載の使用又は使用のための組成物。
- 免疫原性組成物中の抗原が由来する病原菌の変種であるインフルエンザ病原菌により引き起こされる疾患の治療又は予防における使用のための、請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は請求項40に記載のワクチン。
- 免疫原性組成物中の抗原が由来する病原菌の変種であるインフルエンザ病原菌により引き起こされる疾患の治療又は予防のための免疫原性組成物の製造における、(a)インフルエンザウイルス抗原又はその抗原調製物、及び(b)請求項1〜20のいずれか一項に規定される水中油型エマルジョンの使用。
- 免疫原性組成物中の抗原の変種である抗原を含む病原菌により引き起こされる感染又は疾患に対する防御のための、請求項48〜49のいずれか一項に記載の使用又は使用のための組成物。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は請求項40に記載のワクチンで先にワクチン接種した個体にワクチン再接種するための、インフルエンザ免疫原性組成物。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又は請求項40に記載のワクチンで先にワクチン接種した個体にワクチン再接種するための、免疫原性組成物の製造における抗原の使用。
- ワクチン再接種用の組成物が先のワクチン接種に使用した組成物の抗原と共通のCD4 T細胞エピトープを有するインフルエンザ抗原を含む、請求項55〜56のいずれか一項に記載の使用又は使用のための組成物。
- ワクチン再接種用の抗原又は抗原性組成物がアジュバント添加されたものである、請求項55〜57のいずれか一項に記載の使用。
- ワクチン再接種組成物のための水中油型エマルジョンが請求項1〜20のいずれか一項に規定された通りである、請求項58に記載の使用。
- 疾患が、65歳以上の高齢者、18〜50歳若しくは18〜65歳の成人、0〜18歳の小児からなる群より選択されるヒト宿主又はヒト集団の季節性又はパンデミックインフルエンザ感染のいずれか若しくは両方である、請求項46〜59のいずれか一項に記載の使用。
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AR (1) | AR066405A1 (ja) |
AT (1) | ATE537841T1 (ja) |
AU (1) | AU2008240761B2 (ja) |
CA (1) | CA2683075C (ja) |
CO (1) | CO6251369A2 (ja) |
CR (1) | CR11122A (ja) |
DO (1) | DOP2009000239A (ja) |
EA (1) | EA024250B1 (ja) |
ES (1) | ES2377761T3 (ja) |
IL (1) | IL200859A (ja) |
MA (1) | MA31381B1 (ja) |
PE (1) | PE20090146A1 (ja) |
TW (1) | TW200908994A (ja) |
WO (1) | WO2008128939A1 (ja) |
ZA (1) | ZA200906753B (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014532620A (ja) * | 2011-10-20 | 2014-12-08 | ノバルティス アーゲー | 小児の初回免疫のためのアジュバント添加インフルエンザbウイルスワクチン |
WO2016104584A1 (ja) * | 2014-12-25 | 2016-06-30 | 第一三共株式会社 | 皮内投与インフルエンザワクチン組成物 |
Families Citing this family (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6207646B1 (en) * | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
CA2371994C (en) * | 1999-02-26 | 2010-09-28 | Guido Grandi | Enhancement of bactericidal activity of neisseria antigens with oligonucleotides containing cg motifs |
GB9923176D0 (en) * | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
US20100221284A1 (en) * | 2001-05-30 | 2010-09-02 | Saech-Sisches Serumwerk Dresden | Novel vaccine composition |
DE10144906B4 (de) | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
EP1861122A1 (en) * | 2005-03-23 | 2007-12-05 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Composition |
US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
EP2377552A3 (en) * | 2005-11-04 | 2013-05-15 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Influenza vaccines with reduced amount of emulsion adjuvant |
ES2420829T3 (es) | 2005-11-04 | 2013-08-27 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Vacunas adyuvantadas con antígeno de no virión preparadas a partir de virus de la gripe cultivados en cultivo celular |
KR101696727B1 (ko) | 2006-07-17 | 2017-01-16 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 인플루엔자 백신 |
CN101522218B (zh) | 2006-10-12 | 2012-09-26 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包含水包油乳液佐剂的疫苗 |
AR066405A1 (es) | 2007-04-20 | 2009-08-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna |
KR101580660B1 (ko) * | 2007-08-02 | 2015-12-28 | 바이오앤드백스 파마슈티칼즈, 리미티드. | 다중체 다중-에피토프 인플루엔자 백신 |
US8506966B2 (en) | 2008-02-22 | 2013-08-13 | Novartis Ag | Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use |
WO2009155489A2 (en) | 2008-06-19 | 2009-12-23 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
EP2331127A2 (en) | 2008-09-18 | 2011-06-15 | Novartis AG | Vaccine adjuvant combinations |
EP2396030B1 (en) * | 2009-02-10 | 2015-08-12 | Novartis AG | Influenza vaccine regimens for pandemic-associated strains |
DK2396032T3 (en) * | 2009-02-10 | 2016-12-19 | Seqirus Uk Ltd | Influenza vaccines with reduced amounts of squalene |
AU2015203072B2 (en) * | 2009-02-10 | 2017-05-25 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccine regimens for pandemic-associated strains |
JP2012525370A (ja) | 2009-04-27 | 2012-10-22 | ノバルティス アーゲー | インフルエンザに対して防御するためのアジュバント添加ワクチン |
US20110097418A1 (en) * | 2009-05-29 | 2011-04-28 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
US20120288850A1 (en) * | 2009-10-21 | 2012-11-15 | De Staat Der Nederlanden, Vert. Door De Minister Van Vws | Methods for diagnosis of immune responses against viruses |
GB0919117D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
EP2547357A1 (en) | 2010-03-18 | 2013-01-23 | Novartis AG | Adjuvanted vaccines for serogroup b meningococcus |
WO2011130652A2 (en) * | 2010-04-15 | 2011-10-20 | George Baer | Compositions and methods for vaccinating humans and animals against enveloped viruses |
CA2801149A1 (en) * | 2010-06-01 | 2011-12-08 | Novartis Ag | Concentration of vaccine antigens without lyophilization |
GB201009273D0 (en) * | 2010-06-03 | 2010-07-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel vaccine |
CA2803239A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Novartis Ag | Combinations of meningococcal factor h binding proteins |
EP2667852B1 (en) * | 2011-01-27 | 2016-11-09 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Adjuvant nanoemulsions with crystallisation inhibitors |
CA2828068C (en) * | 2011-02-22 | 2019-03-19 | Biondvax Pharmaceuticals Ltd. | Multimeric multiepitope polypeptides in improved seasonal and pandemic influenza vaccines |
US10183069B2 (en) | 2011-03-21 | 2019-01-22 | Altimmune Inc. | Rapid and prolonged immunologic-therapeutic |
CN104159608A (zh) * | 2012-03-06 | 2014-11-19 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 针对流感的改善的疫苗接种 |
GB201218195D0 (en) | 2012-10-10 | 2012-11-21 | Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie | Composition |
GB201405921D0 (en) * | 2014-04-02 | 2014-05-14 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel methods for inducing an immune response |
KR102632419B1 (ko) * | 2016-12-23 | 2024-01-31 | 인터벳 인터내셔널 비.브이. | 돼지용 조합 백신 |
WO2018144438A1 (en) | 2017-01-31 | 2018-08-09 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods for production of capsular polysaccharide protein conjugates from streptococcus pneumoniae serotype 19f |
MX2019009580A (es) * | 2017-02-13 | 2020-01-30 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Aplicador de liquidos para suministrar vacunas. |
EP3917567A1 (en) * | 2019-01-30 | 2021-12-08 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Oil/surfactant mixtures for self-emulsification |
CN114222817A (zh) * | 2019-04-06 | 2022-03-22 | 艾尔特免疫公司 | 广泛且持久的流感疫苗 |
RU2740751C1 (ru) * | 2019-08-28 | 2021-01-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Развитие БиоТехнологий" | Способ получения тетравалентной субъединичной противогриппозной вакцины |
CN113827715A (zh) * | 2020-06-23 | 2021-12-24 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种抗h7亚型和h5亚型禽流感病毒的疫苗组合物、及其制备方法和应用 |
KR20230135562A (ko) | 2020-10-29 | 2023-09-25 | 인더스트리얼 폴리머스 앤드 케미컬스, 인크. | 병원체 모니터링 및 불활성화를 갖는 공기 필터 |
WO2023059857A1 (en) * | 2021-10-08 | 2023-04-13 | Sanofi Pasteur Inc. | Multivalent influenza vaccines |
KR20240033309A (ko) * | 2022-09-05 | 2024-03-12 | 주식회사 차백신연구소 | 에멀전 제형의 면역증강제 조성물 및 이의 제조 방법 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006100110A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel composition |
Family Cites Families (94)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3238190A (en) | 1963-10-23 | 1966-03-01 | Madaus & Co K G Fa Dr | Aescin recovery |
US4235877A (en) | 1979-06-27 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit |
DD155875A1 (de) | 1980-12-31 | 1982-07-14 | Willy Nordheim | Verfahren zur herstellung eines ballaststoffarmen inaktivierten influenzaimpfstoffes |
US4454119A (en) | 1981-06-29 | 1984-06-12 | Mitsubishi Chemical Industries Limited | Therapeutic agents |
US4436727A (en) | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
US4866034A (en) | 1982-05-26 | 1989-09-12 | Ribi Immunochem Research Inc. | Refined detoxified endotoxin |
FI69639C (fi) | 1982-07-02 | 1986-03-10 | Orion Yhtymae Oy | Preparat foer anvaendning vid klamydia-diagnostik |
DD211444A3 (de) | 1982-08-19 | 1984-07-11 | Saechsisches Serumwerk | Verfahren zur herstellung von influenza-impfstoffen |
GB8300467D0 (en) | 1983-01-08 | 1983-02-09 | Wellcome Found | Equine influenza |
FI861417A0 (fi) | 1985-04-15 | 1986-04-01 | Endotronics Inc | Hepatitis b ytantigen framstaelld med rekombinant-dna-teknik, vaccin, diagnostiskt medel och cellinjer samt foerfaranden foer framstaellning daerav. |
DD300833A7 (de) | 1985-10-28 | 1992-08-13 | Saechsische Landesgewerbefoerd | Verfahren zur herstellung von inaktivierten influenza-vollvirusimpfstoffen |
US4877611A (en) | 1986-04-15 | 1989-10-31 | Ribi Immunochem Research Inc. | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants |
JP2851288B2 (ja) | 1987-06-05 | 1999-01-27 | アメリカ合衆国 | 癌診断および管理における自己分泌運動性因子 |
EP0304578B1 (en) | 1987-06-22 | 2001-10-24 | Medeva Holdings Bv | Peptide comprising hepatitis B surface antigen |
DE3734306A1 (de) | 1987-10-10 | 1989-04-27 | Pfeiffer Erich Gmbh & Co Kg | Austragvorrichtung fuer fliessfaehige medien |
US5376369A (en) | 1987-11-03 | 1994-12-27 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccine adjuvant |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
GB8819209D0 (en) | 1988-08-12 | 1988-09-14 | Research Corp Ltd | Polypeptide & dna encoding same |
GB8821049D0 (en) | 1988-09-08 | 1988-10-05 | Health Lab Service Board | Method & composition for treatment & prevention of viral infections |
US4999403A (en) | 1988-10-28 | 1991-03-12 | Exxon Chemical Patents Inc. | Graft polymers of functionalized ethylene-alpha-olefin copolymer with polypropylene, methods of preparation, and use in polypropylene compositions |
DK0382271T3 (da) | 1989-02-04 | 1995-05-01 | Akzo Nobel Nv | Tocoler som adjuvanser i vacciner |
HU212924B (en) * | 1989-05-25 | 1996-12-30 | Chiron Corp | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
ES2109921T3 (es) | 1989-07-25 | 1998-02-01 | Smithkline Beecham Biolog | Nuevos antigenos y procedimientos para su preparacion. |
DE4005528C2 (de) | 1990-02-22 | 1998-01-15 | Pfeiffer Erich Gmbh & Co Kg | Austragvorrichtung für Medien |
US5969109A (en) | 1990-02-28 | 1999-10-19 | Bona; Constantin | Chimeric antibodies comprising antigen binding sites and B and T cell epitopes |
US5149531A (en) | 1990-06-27 | 1992-09-22 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Method of using cold-adapted live influenza virus vaccine as an antiviral agent against influenza |
US5030115A (en) | 1990-07-23 | 1991-07-09 | Molex Incorporated | Tired socket assembly with integral ground shield |
EP0468520A3 (en) | 1990-07-27 | 1992-07-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences |
GB9105992D0 (en) | 1991-03-21 | 1991-05-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
WO1993010152A1 (en) | 1991-11-16 | 1993-05-27 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | HYBRID PROTEIN BETWEEN CS FROM PLASMODIUM AND HBsAG |
MA22842A1 (fr) | 1992-03-27 | 1993-10-01 | Smithkline Beecham Biolog | Procede de preparation de compositions de vaccin. |
WO1994019013A1 (en) | 1993-02-19 | 1994-09-01 | Smithkline Beecham Corporation | Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a |
CN1087176C (zh) | 1993-03-23 | 2002-07-10 | 史密斯克莱·比奇曼生物公司 | 含有3-o脱酰基单磷酰脂a的疫苗制剂 |
US5762939A (en) * | 1993-09-13 | 1998-06-09 | Mg-Pmc, Llc | Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus |
WO1995011700A1 (en) | 1993-10-29 | 1995-05-04 | Pharmos Corp. | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
HU219810B (hu) | 1993-11-17 | 2001-08-28 | Deutsche Om Arzneimittel Gmbh. | Glükózamin-diszacharidok, eljárás előállításukra és a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények, valamint alkalmazásuk |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
WO1995022989A1 (en) | 1994-02-24 | 1995-08-31 | Micro-Pak, Inc. | Vaccines containing paucilamellar lipid vesicles as immunological adjuvants |
WO1995026204A1 (en) | 1994-03-25 | 1995-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs |
PT772619E (pt) | 1994-07-15 | 2006-10-31 | Univ Iowa Res Found | Oligonucleotidos imunomoduladores |
US5629052A (en) | 1995-02-15 | 1997-05-13 | The Procter & Gamble Company | Method of applying a curable resin to a substrate for use in papermaking |
EP0812358A1 (en) | 1995-02-24 | 1997-12-17 | Cantab Pharmaceuticals Research Limited | Polypeptides useful as immunotherapeutic agents and methods of polypeptide preparation |
UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
US5666153A (en) | 1995-10-03 | 1997-09-09 | Virtual Shopping, Inc. | Retractable teleconferencing apparatus |
US20030133944A1 (en) | 2001-04-05 | 2003-07-17 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine composition against malaria |
US5856462A (en) | 1996-09-10 | 1999-01-05 | Hybridon Incorporated | Oligonucleotides having modified CpG dinucleosides |
TW570803B (en) | 1997-04-09 | 2004-01-11 | Duphar Int Res | Influenza vaccine |
WO1998050567A1 (en) | 1997-05-02 | 1998-11-12 | Abbott Laboratories | Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate |
US6764840B2 (en) | 1997-05-08 | 2004-07-20 | Corixa Corporation | Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6113918A (en) | 1997-05-08 | 2000-09-05 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
US6303347B1 (en) | 1997-05-08 | 2001-10-16 | Corixa Corporation | Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors |
GB9711990D0 (en) | 1997-06-11 | 1997-08-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
EP1279401B1 (en) | 1997-09-05 | 2008-01-09 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Oil in water emulsions containing saponins |
GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
US7459524B1 (en) | 1997-10-02 | 2008-12-02 | Emergent Product Development Gaithersburg Inc. | Chlamydia protein, sequence and uses thereof |
GB9727262D0 (en) | 1997-12-24 | 1998-02-25 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
ES2296390T3 (es) | 1998-05-07 | 2008-04-16 | Corixa Corporation | Composicion coadyuvante y procedimiento para su uso. |
WO1999064301A1 (fr) | 1998-06-08 | 1999-12-16 | Sca Emballage France | Emballage a remise a plat rapide |
AU761396B2 (en) | 1998-06-30 | 2003-06-05 | Om Pharma | Novel acyl pseudodipeptides, preparation method and pharmaceutical compositions containing same |
AT408615B (de) * | 1998-09-15 | 2002-01-25 | Immuno Ag | Neue influenzavirus-impfstoffzusammensetzung |
US20040006242A1 (en) | 1999-02-01 | 2004-01-08 | Hawkins Lynn D. | Immunomodulatory compounds and method of use thereof |
US6551600B2 (en) | 1999-02-01 | 2003-04-22 | Eisai Co., Ltd. | Immunological adjuvant compounds compositions and methods of use thereof |
AT407958B (de) | 1999-02-11 | 2001-07-25 | Immuno Ag | Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation |
DE60020677T2 (de) | 1999-02-26 | 2006-05-04 | Chiron Corp., Emeryville | Mikroemulsionen mit adsorbierten makromolekülen und mikropartikeln |
GB9923176D0 (en) * | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
US6494865B1 (en) | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
AU1581400A (en) | 1999-12-22 | 2001-07-03 | Om Pharma | Acyl pseudopeptides bearing a functionalised auxiliary spacer |
US20030158134A1 (en) | 2000-01-31 | 2003-08-21 | Gerald Voss | Vaccine for the prophylactic or therapeutic immunization against hiv |
GB0025577D0 (en) | 2000-10-18 | 2000-12-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
EP1201250A1 (en) | 2000-10-25 | 2002-05-02 | SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. | Immunogenic compositions comprising liver stage malarial antigens |
CA2438942A1 (en) | 2001-02-23 | 2002-09-26 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Influenza vaccine formulations for intradermal delivery |
ES2314042T3 (es) | 2001-04-17 | 2009-03-16 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Derivados nuevos de adenina. |
MY134424A (en) | 2001-05-30 | 2007-12-31 | Saechsisches Serumwerk | Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal |
PT1719511E (pt) | 2001-11-16 | 2009-03-06 | Coley Pharm Group Inc | N-[4-(4-amino-2-etil-1h-imidazo[4,5-c]quinolina-1- -il)-butil]-metano-sulfonamida, uma composição farmacêutica que a contém e sua utilização |
US6861410B1 (en) | 2002-03-21 | 2005-03-01 | Chiron Corporation | Immunological adjuvant compositions |
US20040074760A1 (en) * | 2002-10-17 | 2004-04-22 | Carnegie Mellon University | Production of biofuels |
WO2004075829A2 (en) | 2003-01-30 | 2004-09-10 | Chiron Corporation | Adjuvanted influenza vaccine |
US7375180B2 (en) | 2003-02-13 | 2008-05-20 | 3M Innovative Properties Company | Methods and compositions related to IRM compounds and Toll-like receptor 8 |
CN1522691A (zh) * | 2003-09-05 | 2004-08-25 | 韦怀新 | 核酸、蛋白多肽及疫苗乳剂的制备方法 |
EP1722815A1 (en) | 2004-03-09 | 2006-11-22 | Chiron Corporation | Influenza virus vaccines |
US20090028903A1 (en) * | 2005-03-23 | 2009-01-29 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel use |
AR054822A1 (es) | 2005-07-07 | 2007-07-18 | Sanofi Pasteur | Emulsion inmuno adyuvante |
ES2420829T3 (es) | 2005-11-04 | 2013-08-27 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Vacunas adyuvantadas con antígeno de no virión preparadas a partir de virus de la gripe cultivados en cultivo celular |
EP2377552A3 (en) | 2005-11-04 | 2013-05-15 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Influenza vaccines with reduced amount of emulsion adjuvant |
FR2896162B1 (fr) | 2006-01-13 | 2008-02-15 | Sanofi Pasteur Sa | Emulsion huile dans eau thermoreversible |
EP2422810B1 (en) * | 2006-07-17 | 2014-10-22 | GlaxoSmithKline Biologicals s.a. | Influenza vaccine |
KR101696727B1 (ko) | 2006-07-17 | 2017-01-16 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 인플루엔자 백신 |
US20080014217A1 (en) * | 2006-07-17 | 2008-01-17 | Emmanuel Jules Hanon | Influenza vaccine |
CN101522218B (zh) | 2006-10-12 | 2012-09-26 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包含水包油乳液佐剂的疫苗 |
AR066405A1 (es) | 2007-04-20 | 2009-08-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna |
EP2227251A1 (en) | 2007-12-06 | 2010-09-15 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Influenza composition |
SG175771A1 (en) * | 2009-04-21 | 2011-12-29 | Dow Technology Investments Llc | Improved method of achieving and maintaining a specified alkylene oxide production parameter with a high efficiency catalyst |
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2018
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006100110A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel composition |
WO2006100111A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Composition |
WO2006100109A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Use of an influenza virus an oil-in-water emulsion adjuvant to induce cd4 t-cell and/or improved b-memory cell response |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014532620A (ja) * | 2011-10-20 | 2014-12-08 | ノバルティス アーゲー | 小児の初回免疫のためのアジュバント添加インフルエンザbウイルスワクチン |
WO2016104584A1 (ja) * | 2014-12-25 | 2016-06-30 | 第一三共株式会社 | 皮内投与インフルエンザワクチン組成物 |
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AU2007202129B2 (en) | Influenza vaccine | |
BRPI0810015B1 (pt) | Composição, vacina, kit de vacina, métodos para preparar uma vacina contra influenza adjuvada, e para preparar uma vacina, e, uso de um antígeno do vírus da influenza ou preparação antigênica do mesmo e uma emulsão de óleo em água |
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