CN104159608A - 针对流感的改善的疫苗接种 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于针对流感接种疫苗的方法，该方法包括多次向一个受试者给予一种疫苗，该疫苗包括来自至少一种第一流感毒株的流感血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白质，其中将该第一流感毒株的HA和NA蛋白质在少于一年的时间内给予该受试者至少三次。这样的免疫方案诱导针对异源和异源亚型流感毒株的交叉保护。

Description

针对流感的改善的疫苗接种
本发明涉及健康护理领域。更具体地，它涉及针对流感建立广泛保护的改善的疫苗接种方案。
发明背景
流感病毒是主要的人类和动物病原体，引起一种呼吸疾病——流感，流感在严重性上可在从无症状性感染(sub-clinical infection)到可导致死亡的原发性病毒性肺炎范围内。该病毒每年在全世界感染高达10亿人。
许多人通过所谓季节性流感疫苗得到针对流感的疫苗接种，该疫苗优选地每年给予一次。该季节性流感疫苗的组成典型地每年变化。
流感病毒是基于它们的血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白质的抗原结构的差异分类的，它们的不同组合代表唯一的病毒亚型，这些病毒亚型进一步被归类为特定的流感病毒毒株。尽管所有已知的流感A亚型可在鸟类中发现，当前传播的人类流感A亚型是H1N1和H3N2。系统发育分析已经表明血球凝集素细分为两个主要类群：尤其是系统发生类群1中的H1、H2、H5和H9亚型以及尤其是系统发生类群2中的H3、H4和H7亚型(参见图1A)。此时一种季节性流感疫苗典型地包括来自流感A系统发生类群1(例如H1N1)和2(例如H3N2)的毒株和来自流感B的HA和NA流感蛋白质。
已知中和该流感病毒的抗体主要针对HA。HA是锚定病毒外壳的三聚糖蛋白并包括一个大的头部域和一个较小的主干域。
季节性流感疫苗必须每年更新的原因是该病毒的大的变异性。在该HA分子中，该变异特别显现在该头部域中，其中抗原漂移已导致大数目的不同变体。由于这也是免疫显性的区域，大部分中和抗体针对这个域。
头部域的免疫显性和大的变异的组合也解释了为什么感染一种具体的毒株不会导致对其他毒株的免疫：由第一次感染引发的抗体仅识别与该原发感染的病毒密切相关的有限数目的毒株。
当前的免疫实践依赖于对传播性流感病毒的早期识别，以允许及时生产一种有效的季节性流感疫苗。这种实践将该疫苗的生产和标准化时间窗限制到最大九个月，相当于每年重复出现的来自物流和生产角度的具有挑战性的任务。另外的一个劣势是所选择的疫苗可能不会涵盖所有传播性毒株，导致针对季节性流感毒株的保护是次最优的一种疫苗。除了预测将在下一季中占主导地位的毒株方面存在固有困难外，抗病毒抗性和免疫逃避也在当前疫苗对预防发病率和死亡率的失效中起作用。另外，由起源于动物储存宿主并重配以增加人与人传播的高强毒株引起的大流行的可能性造成对全球健康的一个重要的和现实的威胁。甚至每年标准使用季节性疫苗也不会提供针对潜在新出现的大流行毒株(例如H5N1毒株)的保护。
在一些研究中已观察到流感疫苗的保护幅度的增加，但需要强佐剂或粘膜(鼻内)给药，或在一些情况下佐剂和黏膜给药两者，或非常特异的高度免疫原性的流感毒株的整个病毒(特鲁姆佩(Tumpey)等人，2001，病毒学杂志(J.Virology)，75:5141-5150；一户(Ichinohe)等人，2007，传染病杂志(J.Inf.Disease)196:1313-1320；范毛瑞克(van Maurik)等人，2010，疫苗28:1778-1785；WO 2008/037033；塔穆拉(Tamura)等人，1989，疫苗7:314-320；隋志伟(Zhiwei Sui)等人，2010，病毒学档案(Archives ofVirol)155:535-544)。在这些情况中的大部分中，报导的交叉保护仍然不广泛。粘膜给药的一个劣势是对免疫记忆的不良诱导。在这些报道中使用的大部分或所有佐剂的劣势是归因于反应原性，这些不推荐人类使用。
因此在本领域中仍需要改善的流感疫苗接种。本发明目的在于提供针对流感的改善的疫苗接种，具体地是用以改善流感疫苗的保护幅度。
发明概述
与建立的流感疫苗的毒株特异性免疫诱导的教条相反，诸位发明人吃惊地发现用一种包括HA和NA蛋白质的流感疫苗进行免疫，如果该疫苗被给予三次(甚至不添加佐剂)，并且通过注射途径给予，则诱导针对异源和甚至异源亚型流感毒株的广泛保护(如与衍生该疫苗中流感蛋白质的毒株相比)。
因此在一方面，本发明提供一种用于针对流感接种疫苗的方法，该方法包括：包括向一个受试者多次给予包括来自至少一种第一流感毒株的流感血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白质的一种疫苗，其中该第一流感毒株的HA和NA蛋白质在少于一年的时间内被给予该受试者至少三次。
本发明还提供包括来自至少一种第一流感毒株的HA和NA蛋白质的一种疫苗，用于通过向一个受试者在少于一年的时间内给予该第一流感毒株的HA和NA蛋白质至少三次在针对流感接种疫苗中使用。
本发明还提供用于制备一种药剂的一种方法，该药剂用于通过在少于一年的时间内向一个受试者给予包括来自至少一种第一流感毒株的HA和NA蛋白质的一种疫苗至少三次而针对流感接种疫苗。
根据本发明使用的疫苗是一种季节性流感疫苗，包括来自至少三种流感病毒毒株的HA和NA，并且是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，不包括一种佐剂，并被肌内地、皮下地或皮内地给予。
因此，本发明提供一种用于针对流感接种疫苗的方法，该方法包括给予一种季节性流感疫苗，该疫苗包括来自至少三种流感毒株的流感血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白质，其中该疫苗是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，并且其中该疫苗不包括一种佐剂，并且在一年内被肌内地、皮下地或皮内地给予一个受试者至少三次。
在另一方面，本发明提供一种用于针对包括至少一种异源毒株的不同的流感毒株(如与一种第一流感毒株相比)诱导交叉保护的方法，包括：在一年内向一个受试者给予包括该第一流感毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次，而不给予来自该至少一种异源毒株的HA和NA。
本发明还提供在针对包括至少一种异源毒株的不同的流感毒株(如与一种第一流感毒株相比)诱导交叉保护中使用的一种疫苗，通过在一年内向一个受试者给予包括该第一流感毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次，而不给予来自该至少一种异源毒株的HA和NA。
本发明还提供用于制备一种药剂的一种方法，该药剂用于针对包括至少一种异源毒株的不同的流感毒株(如与一种第一流感毒株相比)诱导交叉保护，通过在一年内向一个受试者给予包括该第一流感毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次，而不给予来自该至少一种异源毒株的HA和NA。
在另一方面，本发明提供一种用于针对至少一种异源亚型流感毒株(如与在一种包括HA和NA的流感疫苗中存在来自其的抗原的流感毒株相比)诱导交叉保护的方法，该方法包括在一年内向一个受试者给予该流感疫苗至少三次。
本发明还提供一种包括HA和NA的流感疫苗，用于在针对至少一种异源亚型流感毒株(如与在该流感疫苗中存在来自其的抗原的流感毒株相比)诱导交叉保护中使用，通过在一年内向一个受试者给予该疫苗至少三次。
本发明还提供用于制备一种药剂的一种方法，该药剂用于针对至少一种异源亚型流感毒株(如与在一种包括HA和NA的流感疫苗中存在来自其的抗原的流感毒株相比)诱导交叉保护，通过在一年内向一个受试者给予该疫苗至少三次。
在另一方面，本发明提供一种用于针对一种H5N1流感毒株诱导交叉保护的方法，包括：在一年内向一个受试者给予包括来自流感的一种H1N1、一种H3N2和一种B毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次，其中没有来自H5N1流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
本发明进一步包括一种流感疫苗(包括来自流感的一种H1N1、一种H3N2和一种B毒株的HA和NA)，用于通过在一年内向一个受试者给予该流感疫苗至少三次而在诱导针对一种H5N1流感毒株的交叉保护中使用，其中没有来自该H5N1流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
本发明还提供用于制备一种药剂的一种方法，该药剂用于针对一种H5N1流感毒株诱导交叉保护，通过在一年内向一个受试者给予包括来自流感的一种H1N1、一种H3N2和一种B毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次，其中没有来自H5N1流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
在一个另外的方面，本发明提供一种用于针对一种大流行性或潜在大流行性流感毒株(例如一种H2N2、H5N1、H7N7或H9N2毒株)诱导交叉保护的方法，包括在一年内向一个受试者给予包括来自流感的一种H1N1、一种H3N2和一种B毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次，其中没有来自该大流行性流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
本发明还提供包括来自流感的一种H1N1、一种H3N2和一种B毒株的HA和NA的一种流感疫苗，用于在针对一种大流行性或潜在大流行性流感毒株的诱导交叉保护中使用，通过在一年内向一个受试者给予该流感疫苗至少三次，其中没有来自该大流行性流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
本发明还提供用于制备一种药剂的一种方法，该药剂用于针对一种大流行性或潜在大流行性流感毒株诱导交叉保护，通过在一年内向一个受试者给予包括来自流感的一种H1N1、一种H3N2和一种B毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次，其中没有来自该大流行性流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
在另一方面，本发明还提供一种用于针对一种第一流感毒株，并针对异源于该第一流感毒株的在相同亚型内的至少一种第二流感毒株，并针对异源亚型于该第一流感毒株的至少一种第三流感毒株为一个受试者提供保护的方法，该方法包括在一年内向该受试者三次给予该第一流感毒株的HA和NA，其中没有该第二或该第三流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
本发明还提供一种第一流感毒株的HA和NA，用于在针对一种第一流感毒株，并针对异源于该第一流感毒株的在相同亚型内的至少一种第二流感毒株，并针对异源亚型于该第一流感毒株的至少一种第三流感毒株为一个受试者提供保护中使用，通过在一年内向该受试者三次给予该第一流感毒株的HA和NA，其中没有该第二或该第三流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
本发明还提供用于制备一种药剂的一种方法，该药剂用于在针对一种第一流感毒株，并针对异源于该第一流感毒株的在相同亚型内的至少一种第二流感毒株，并针对异源亚型于该第一流感毒株的至少一种第三流感毒株为一个受试者提供保护，通过在一年内向该受试者三次给予该第一流感毒株的HA和NA，其中没有该第二或该第三流感毒株的HA和NA被给予该受试者。
在另一方面，本发明还提供至少包括一种第一流感毒株的HA和NA蛋白质的一种疫苗，用于诱导针对该第一流感毒株的保护和针对相同亚型内的至少一种异源流感毒株、以及还针对在该疫苗中不存在其HA和NA抗原的至少一种异源亚型流感毒株的交叉保护，通过在一年内向一个受试者给予该疫苗至少三次。
本发明还提供一种用于针对流感接种疫苗的方法，该方法包括在一年内向一个受试者至少三次肌内地、皮下地或皮内地给予一种病毒体的季节性流感疫苗，该疫苗包括来自至少三种流感毒株的流感血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白质。
本发明因此提供用于针对不同的流感毒株(如与一种第一流感毒株相比)诱导异源、并且优选地异源亚型的交叉保护的方法，包括在一年内向一个受试者给予包括该第一流感毒株的HA和NA的一种流感疫苗至少三次。
本发明还提供一种包括至少三种流感毒株的HA和NA蛋白质的季节性疫苗，用于诱导针对这三种流感毒株的保护和针对与这些该流感毒株中的至少一种相比相同的亚型内的至少一种异源流感毒株、以及还针对在该疫苗中不存在其HA和NA抗原的至少一种异源亚型流感毒株的交叉保护，并且其中该疫苗是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，并且其中该疫苗不包括一种佐剂，并在一年内被肌内地、皮下地或皮内地给予一个受试者至少三次。
本发明还提供一种用于用包括至少三种流感毒株的HA和NA蛋白质的季节性流感疫苗进行疫苗接种的方法，该方法用于诱导针对这三种流感毒株的保护和针对与这些该流感毒株中的至少一种相比相同的亚型内的至少一种异源流感毒株、以及还针对在该疫苗中不存在其HA和NA抗原的至少一种异源亚型流感毒株季节性疫苗的交叉保护，其中该疫苗是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，并且其中该疫苗不包括一种佐剂，并在一年内被肌内地、皮下地或皮内地给予一个受试者至少三次。
因此根据本发明使用的一种流感疫苗不包括来自所有它对其赋予保护的毒株的HA和NA。典型地它还基于在一年内给予该疫苗三次(即初打和两次加打)对至少一种异源亚型流感毒株(如与该疫苗中表现来自其的HA和NA的所有毒株相比)赋予保护。
在本发明中使用的流感疫苗是一种定期的和/或季节性流感疫苗。它可以是一种裂解型流感疫苗、一种亚单位流感疫苗、或一种病毒体的流感疫苗，并包括HA和NA蛋白质。在某些实施例中，它是一种病毒体的流感疫苗。
在某些实施例中，该流感疫苗包括来自三种流感毒株(三价的)的HA和NA。在其他实施例中，该流感疫苗包括来自四种流感毒株(四价的)的HA和NA。在又另外的实施例中，该流感疫苗包括来自至少五种流感毒株(五价的和更高的)的HA和NA。在某些实施例中，在该疫苗中的HA和NA包括来自一种流感A毒株的HA和NA。在某些实施例中，在该疫苗中的HA和NA包括来自一种流感H1N1毒株的HA和NA。在某些实施例中，在该疫苗中的HA和NA来自一种流感H1毒株、一种流感H3毒株和一种流感B毒株。在某些实施例中，在该疫苗中的HA和NA来自一种H1N1毒株、一种H3N2毒株和一种B毒株。
在某些实施例中，该疫苗包括来自一种第一流感H1毒株的HA和NA，并诱导针对所述第一毒株以及针对异源于所述第一毒株的至少一种第二流感H1毒株的保护。
在某些实施例中，该疫苗诱导针对相对于在该疫苗中表现的所有流感毒株是异源亚型的至少一种毒株的保护。
在某些实施例中，该疫苗包括来自一种第一流感H1毒株的HA和NA，并诱导针对所述第一毒株以及针对至少一种第二流感毒株(是一种流感H5毒株)的保护，其中该疫苗不包括来自一种流感H5毒株的HA和NA。
在某些实施例中，该疫苗在11、10、9、8、7、6、5、4、3个月或更少时间之内被给予该受试者至少三次。在某些实施例中，该疫苗的给予是以两次给予之间至少一周、两周、三周、或四周的间隔进行的。在某些实施例中，该疫苗的给予是以两次给予之间大约三至八周之间的间隔进行的。在某些实施例中，该疫苗是以两次给予之间不超过六个月、五个月、四个月、或三个月的间隔给予一个受试者。在某些实施例中，该疫苗的第二剂是在第一剂之后的1周和8周之间被给予该受试者，并且该疫苗的第三剂是在第二剂之后的3周和26周之间被给予该受试者。在某些实施例中，该疫苗是以第一次和第二次给予之间大约四周的间隔，以及第二次和第三次给予之间大约四周的间隔进行给予。
在某些实施例中，该受试者是人类受试者。在某些实施例中，该人类受试者是6个月和80岁之间的年龄，例如4岁和80岁之间的年龄。在某些实施例中，该受试者是对流感病毒并非原初免疫(immunologically)的一个受试者。
附图简要说明
图1.A.流感A的系统树。B.H1N1流感疫苗和所选择的毒株的系统树。在实例1中使用的疫苗毒株用实线圈出，并且在实例1中使用的攻击毒株用点线圈出。C.H3N2流感疫苗和所选择的毒株的系统树。在实例3A中使用的疫苗毒株用实线圈出，并且在实例3A中使用的攻击毒株用点线圈出。D.流感B疫苗和所选择的毒株的系统树。在实例4A中使用的疫苗毒株用实线圈出，并且在实例4A中使用的攻击毒株用点线圈出。
图2.实验结果，其中小鼠在3次疫苗接种(实线)、或用PBS进行的模拟疫苗接种(虚线)之后被异源H1N1流感病毒攻击：A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例1。
图3.实验结果，其中小鼠在3次疫苗接种(实线)、或用PBS进行的模拟疫苗接种(虚线)之后被异源亚型H5N1流感病毒攻击：A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例2。
图4.实验结果，其中小鼠在3次疫苗接种(实线)、或用PBS进行的模拟疫苗接种(虚线)之后被异源(H3N2)流感病毒攻击：A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例3A。
图5：试验结果，其中小鼠在1次(虚线)或3次疫苗接种(斑点线)或用PBS模拟疫苗接种(实线)之后被异源流感B/佛罗里达/04/06攻击。A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例3B。
图6.试验结果，其中小鼠在1次(虚线)或3次疫苗接种(斑点线)或用PBS模拟疫苗接种(实线)之后被异源亚型H5N1流感A/HK/156/97攻击。A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例3C。
图7.实验结果，其中小鼠在3次疫苗接种(实线)、或用PBS进行的模拟疫苗接种(虚线)之后被来自另一进化枝的异源流感B病毒攻击：A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例4A。
图8.试验结果，其中小鼠在1次(虚线)或3次疫苗接种(斑点线)或用PBS模拟疫苗接种(实线)之后被异源流感B/佛罗里达/04/06攻击。A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例4B。
图9.试验结果，其中小鼠在1次(虚线)或3次疫苗接种(斑点线)或用PBS模拟疫苗接种(实线)之后被异源亚型H5N1流感A/HK/156/97攻击。A.存活，B.平均相对体重，C.临床得分。关于详情，参见实例4C。
发明详细说明
一种流感毒株在此处被称为与一种第一参照毒株相比的‘异源’流感毒株，此时由该毒株引出的血清不再给出对该参照毒株的足够的交叉中和(即相对于同源的血清低四倍的HI效价；例如史密斯(Smith)等人，2004，科学(Science)305:371-376)。因此例如当更新疫苗毒株时，新的毒株按其定义与以前的毒株是异源的。
如此处使用的一种‘异源亚型’流感毒株是与一种第一参照毒株相比具有不同的HA亚型的一种流感毒株(例如H1N1相对于H5N1和H3N2是异源亚型的)。
一种‘季节性的’流感毒株是在某个时刻在人类群体中传播的一种流感毒株。这类毒株在该流感季节中传播并可以每年再发生，通常以因为抗原区域中突变(因为抗原漂移)而稍微改变的形式。季节性流感疫苗具有来自选择的季节性流感毒株(在那个季节中流行的)的抗原。此时的季节性流感毒株的典型实例是H1N1毒株、H3N2毒株、B毒株。
‘大流行性’流感毒株是一种新的传播性流感毒株，群体对其几乎不具有或不具有免疫力。非限制实例是H2N2、H5N1、H7N7和H9N2毒株。然而例如2009年的大流行性流感是在其他H1N1毒株传播时，由一种H1N1毒株引起的。
根据本发明，针对流感毒株的术语‘保护’(也在‘交叉保护’的意义上)未必意指针对被这些毒株像这样感染的保护，但至少包括当与未被接种疫苗的匹配对照组相比时，可能起因于这类流感毒株的感染的症状和/或并发症的频率、严重性和/或持续时间的减少。术语‘交叉保护’意指针对至少一种毒株的保护，该毒株与在该疫苗中表现其HA和NA抗原的毒株不同(至少异源和优选地异源亚型)。
在某些实施例中，该HA和NA来自一种流感A毒株。在其某些实施例中，该HA和NA来自一种来自系统发生类群1的流感A毒株，例如来自一种流感H1、H2、H5、H9等亚型(参见图1A关于系统发生类群中的亚型)。在其他实施例中，该HA和NA来自一种来自系统发生类群2的流感A毒株，例如来自一种流感H3、H4、H7等亚型。
在其他实施例中，该HA和NA来自一种流感B毒株。对于流感B，由原型病毒B/维多利亚/2/87(维多利亚谱系)和B/山形/16/88(山形谱系)表示的两个谱系一般是有区别的。B/山形是传播直至1980年代(当B/维多利亚谱系病毒出现时)的主要的谱系。从那以后，两种流感B谱系的漂移变体在全球共传播，两种谱系在近期的流感季节同时传播。在某些实施例中，本发明的疫苗包括来自一种流感B毒株的HA和NA，该流感B毒株可以例如来自山形样谱系或来自维多利亚样谱系，或该疫苗可包括来自于来自两个谱系的B毒株的HA和NA。
这些免疫原性的蛋白质HA和NA、或其免疫活性片段可被配制为例如裂解病毒配制品，纯化的亚单位配制品，分离的、纯化的或源自一种病毒以及病毒样粒子(VLP)的病毒蛋白。这些流感HA和NA蛋白质还可获得自其他来源而不是来自完整的流感病毒，例如它们可通过在适合的本领域的普通技术人员已知的表达系统中的重组体表达获得。该疫苗可以包括或可以不包括除HA和NA之外的其他流感抗原。
取决于具体的季节和该疫苗内包括的抗原的性质，该流感抗原可衍生自以下血球凝集素亚型中的一种或多种：流感A H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15或H16，或流感B；以及以下神经氨酸酶亚型中的一种或多种：流感A N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7、N8、或N9，或流感B。对于这些HA亚型H1-H7和H9-H12的大多数来说，已经观察到了与这9个NA亚型的所有组合。流感A的示例性的重要组合包括但不限于：H1N1、H2N2、H3N2、H3N1、H5N1、H5N2、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3和H10N7。典型地，一种季节性流感疫苗包括三种流感毒株的HA和NA，这三种流感毒株时下典型地包括一种H1N1、一种H3N2和至少一种B毒株。四价的季节性疫苗典型地包括来自一种另外的B毒株的抗原(典型地这样的疫苗包括来自一种山形和来自一种维多利亚谱系B毒株两者的抗原)。
该流感病毒还可以是一种重组毒株，并且已可以通过反向遗传学技术获得。因此，一种流感A病毒可包括来自一种A/PR/8/34病毒的一个或多个RNA区段(典型地6个来自A/PR/8/34的区段，其中这些HA和N区段来自一种疫苗毒株，即一种6:2重组株)。它还可以包括来自一种A/WSN/33病毒的一个或多个RNA区段，或来自任何其他用于疫苗制备的、对于产生重组病毒有用的病毒毒株。
在当前的灭活的流感疫苗中HA是主要的免疫原，并且疫苗剂量是通过参考HA水平进行标准化的，HA水平典型地是通过单向放射免疫扩散法(SRID)测量(J.M.伍德(Wood)等人，1977，生物标准化期刊(J.Biol.Stand.)5(1977)237-247)。现在的疫苗典型地包含约15μg HA/毒株，尽管例如对于幼儿、或在大流行性情况下、或当使用一种佐剂时，可使用更低的剂量。已经使用了分数剂量例如1/2(即7.5μg HA/毒株)、1/4和1/8，同样地已经使用更高的剂量(例如3x或9x剂量)。因此，疫苗可包括0.1和150μg之间的HA/流感毒株，优选地0.1和50μg之间，例如0.1-20μg等。具体的剂量包括例如约15、约10、约7.5、约5、约1.5等μg/毒株。可适当地将低剂量与皮内给药组合使用。
一剂中的NA量可以变化，例如从约0.1-50μg，例如约0.5-20μg之间。典型地，一种季节性疫苗可包含约0.5-5μg NA/15μg存在的HA，例如约2-4μg NA/15μg存在的HA。
本发明使用的HA和/或NA可以是一种如在病毒中发现的天然的、或可以是经修饰的HA或NA。
根据本发明的免疫接种方案在原则上适合于所有受试者。这些包括所有年龄的受试者，包括在给予第一剂的那刻对流感病毒是原初免疫的受试者以及不是原初免疫的受试者。根据本发明的一个受试者优选地是能够被流感感染的、或另外可从诱发针对流感的免疫反应中受益的哺乳动物，这样的受试者例如是一种啮齿动物，例如小鼠、或白鼬，或家畜或农畜例如猪、狗、马，或非人类灵长类动物，或人类。优选地，该受试者为一个人类受试者。
在某些实施例中，该受试者是具有约6个月和80岁之间，例如约4岁和80岁之间，例如约18岁至60岁或18岁至65岁之间(成年群体)的年龄的人类受试者。在其他实施例中，该受试者是老年人类受试者(50岁或更年长、60岁或更年长、65岁或更年长)。在其他实施例中，受试者是年轻人类受试者(例如≤5岁，例如6个月和4岁之间，即少儿受试者或幼儿)。在其他实施例中，受试者是住院患者、卫生保健工作者、武装服务和军事人员、孕妇(在这个实施例中，该疫苗给予提供对母亲的交叉保护但也可潜在地诱导对出生后的幼儿的交叉保护)、慢性病人(例如患有哮喘、糖尿病、神经性和神经肌肉紊乱(大脑性麻痹、癫痫、肌肉萎缩症等)的患者)、免疫缺陷患者、已经在接受该疫苗之前7天中服用抗病毒化合物(例如奥司他韦或扎那米韦化合物)的受试者等。根据本发明该疫苗可普遍地用在一个群体中。在某些实施例中，被给予该疫苗的受试者在给予第一剂的那刻对流感病毒抗原不是原初免疫的。通常，在一个群体中，10岁之前、例如至少4岁的人类受试者将已经遭遇了流感病毒抗原，无论是自然地或通过疫苗接种。在其他实施例中，被给予该疫苗的受试者在给予第一剂的那刻对流感抗原病毒是原初免疫的。
在某些实施例中，该受试者是人类少儿受试者，其典型地少于3岁、或少于2岁、或少于一岁。这些对流感病毒可以是原初免疫的，并且为了在这类受试者中获得足够的免疫反应，典型地已经向这类受试者两次给予了一种标准的季节性或大流行性流感疫苗，即以初打-加打方案。为了扩大该免疫反应来获得针对流感毒株的保护，本发明的方法包括给予该疫苗至少三次，该流感毒株与该疫苗中的HA和NA源自的毒株是异源的并且甚至是异源亚型的。通过肌内、皮内或皮下给药并且不存在佐剂，以扩大该免疫反应在以前未有报道，并且违反了由季节性疫苗接种来诱导的毒株特异性免疫力的教条。因此由诸位发明人在此处报道的以初打-加打-加打方案经三重给药扩大免疫反应的发现是非常令人吃惊的。
在某些实施例中，该受试者是至少3个月大、至少6个月大、至少一种岁，至少2、3、4、5、6、7、8、18、50、60、65岁的人类受试者。在某些实施例中，该受试者是不超过50、60、65、70、80岁的人类受试者。根据本发明，还可以对任何适宜于定期的季节性和/或大流行性疫苗接种的受试者进行疫苗接种。
对于老年或免疫妥协的受试者，希望的是在这些给药中的至少一次(例如第一次给药，例如所有给药)的疫苗组合物中包括一种佐剂。独立地或另外，将在向老年者给予的疫苗中包括更高剂量的这些抗原(例如如与定期的疫苗剂量相比的二到四倍高的抗原含量)可能是有益的。一种定期的流感疫苗剂量通常包含约15μg HA/毒株。
根据本发明待使用的疫苗(也被称作“免疫原性组合物”)优选地是一种药物组合物。它常常包括除了这些流感抗原之外的组分，例如它典型地包括一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。在该配制品中每个组分的最佳比率可通过本领域的普通技术人员熟知的技术确定。在本发明的上下文中，术语“药学上可接受的”意思指载体或赋形剂在所用剂量和浓度下不会在给予它们的受试者中造成不希望有的或有害的影响。这些医药学上可接受的载剂和赋形剂是本领域中众所周知的(参见例如雷明登：制药科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)(热纳罗(Gennaro)，2000；第20版，ISBN:0683306472)；肽和蛋白质的医药配制品发展(Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins)，S.弗罗加尔(Frokjaer)和L.霍夫高(Hovgaard)编，泰勒弗朗西斯(Taylor&Francis)[2000]；以及医药赋形剂手册(Handbook of PharmaceuticalExcipients)，第3版，A.凯博(Kibbe)编，医药出版社(PharmaceuticalPress)[2000])。这些疫苗优选地以无菌溶液形式配制和给予。无菌溶液是通过无菌过滤或通过本领域中自身已知的其他方法制备。这些溶液可接着被冻干或填充到药物剂量容器中。溶液的pH通常在pH 3.0到9.5、例如pH 5.0到7.5范围内。这些HA和NA蛋白或其免疫原性部分典型地在具有合适的药学上可接受的缓冲液的溶液中，并且该溶液还可包含盐。在某些实施例中，清洁剂是存在的。在某些实施例中，疫苗可被配制成可注射制剂。这些配制品包含有效量的这些抗原，为无菌液体溶液、液体悬浮液或冻干型，并且任选地含有稳定剂或赋形剂。组合物通常处于水性形式。
该组合物可包含一种生理学盐，例如来控制毒性。NaCl是优选的，例如1-20mg/ml之间，但也可存在其他盐，例如氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠二水合物、氯化镁、氯化钙等。在某些实施例中，也可存在卵磷脂。通常，重量摩尔渗透压浓度在200-400mOsm/kg之间。该组合物可包括一种或多种缓冲液，典型地是磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、或柠檬酸盐缓冲液。缓冲液典型地以5-20mM的范围包括。
该组合物优选地是非热原性的。该组合物可包括一种或多种防腐剂，例如硫柳汞或2-苯氧乙醇。优选地，该疫苗不含汞材料(例如硫柳汞)，更优选地不含防腐剂。
该组合物可任选地包括清洁剂，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯表面活性剂(称作‘吐温(Tween)’，例如吐温-20或吐温-80)、辛苯聚醇(例如辛苯聚醇-9(Triton X-100))、十六烷基三甲基溴化铵(‘CTAB’)、脱氧胆酸钠。该清洁剂可仅以痕量存在。
流感疫苗通常以约0.1至1.0ml、典型地约0.5ml的剂量体积给予。对于幼儿，给予的剂量通常是对于成人所使用的一半(即约0.25ml)。
流感疫苗通常在约2℃和8℃之间储存。
不同形式的流感病毒疫苗当前是可获得的，例如参见普罗金&奥仁斯坦(Plotkin&Orenstein)(疫苗，第4版，2004，ISBN:0-7216-9688-0)的第17&18章。根据本发明使用的疫苗是基于灭活的病毒。可使用的灭活的疫苗可基于‘裂解的’病毒粒子、或基于纯化的表面抗原(包括血球凝集素)。流感抗原还能以病毒体(无核酸病毒样脂质体粒子)的形式存在。还可使用从重组的宿主中(例如使用杆状病毒载体在昆虫细胞系中、或在哺乳动物细胞系中或在酵母细胞中)纯化的抗原。
根据本发明可使用的典型的流感疫苗是已经对于季节性接种疫苗进行注册的流感疫苗，例如在商标名V(库赛尔(Crucell))；或(赛诺菲巴斯德(Sanofi Pasteur))； 或(诺华(Novartis))；(GSK)；或(雅培(Abbott))；(CSL)；(巴克斯特(Baxter))；等下销售的那些。
根据本发明的一种疫苗可以是包括HA和NA蛋白质，处于一种裂解型病毒粒子疫苗、亚单位疫苗、或病毒体的疫苗的形式的任何疫苗。用于生产流感疫苗的一些手段对于技术人员来说是已知的和常规的。
该疫苗可以按一种亚病毒粒子形式，例如按一种裂解型病毒的形式(其中该病毒脂质包膜已被溶解或破裂)，或按一种或多种纯化的病毒蛋白的形式进行配制。裂解病毒(例如流感病毒)的方法在本领域内是众所周知的，例如参见WO02/28422、WO02/067983、WO02/074336、WO01/21151等。病毒的裂解是以一种裂解剂的破裂浓度，通过破裂或断裂整个病毒进行的，无论传染性的(野生型或减毒的)还是非传染性的(例如灭活的)。裂解剂通常包括能够打破和溶解脂质膜的试剂，典型地具有附接至亲水头部的疏水尾部，例如非离子的或离子的(例如阳离子的)表面活性剂，例如Triton、吐温、CTAB等。该破裂导致该病毒蛋白的完全或部分溶解，改变该病毒的完整性。
从病毒中纯化个体蛋白质的方法是众所周知的，并包括例如过滤、层析、离心步骤和中空纤维洗脱。在一个实施例中，这些蛋白质是通过离子交换层析进行纯化。
将流感病毒灭活或杀死以破坏它们感染哺乳动物细胞的能力的方法是本领域中已知的，并包括例如用福尔马林、BPL、紫外光等处理。
在某些优选实施例中，在本发明中使用的疫苗是一种流感病毒体疫苗，而不是常规的(即裂解的、亚单位的或整个的流感)疫苗。因此在一个优选实施例中，在本发明的方法中使用的流感疫苗是一种病毒体的疫苗，它是这样一种疫苗，其中大多数，即至少50％、优选地至少70％的大的脂质-蛋白复合结构处于病毒体的形式。这样的病毒体包括HA和NA蛋白质。在病毒体的疫苗中，该病毒体是在生产过程中仔细地生产的，例如通过使用清洁剂溶解流感粒子，去除不可溶物质，并随后去除所定义的清洁剂以重新构成该病毒体。在某些优选实施例中，该病毒体包括外源性脂质。病毒体是重新构成的、包含来自该病毒的抗原的脂质膜。病毒体例如可通过两个主要的途径产生，一个途径基于在重新构成该病毒体的过程中添加外源性脂质(阿尔梅达(Almeida)等人.，1975.柳叶刀(Lancet)2:899-901；图岱尔(Trudel)M.和F.纳顿(Nadon)，1981.加拿大微生物学杂志(Can J Microbiol.)27，958-62以及利平斯基(Lipinski)等人(1997)微囊法杂志(JMicroencapsul.)14:79-90以及利平斯基(Lipinski)等人(2001)克隆(Cloning)3:11-21；格卢克(Gluck)，R.和I.C.梅特卡夫(Metcalfe)，2002.疫苗20:B10-16；密歇勒(Mischler)，R.和I.C.梅特卡夫(Metcalfe)，2002.疫苗20:B17-23)，并且另一个基于在不存在对外源性脂质的添加的情况下的病毒体的形成(施特格曼(Stegmann)，T.等人.1987.EMBO J.6:2651-9；赫克里德(Huckriede)等人，2003.疫苗21:925-31)。因此，用于在本发明中使用的一种特别有利的疫苗是一种病毒体的流感疫苗，例如V(参见例如WO 92/19267；格鲁克(Glück)，R，1992，疫苗10:915-920；密歇勒(Mischler)，R.和I.C.梅特卡夫(Metcalfe)，2002.疫苗20:B17-23)。这些病毒体也被称为免疫增强性重建流感病毒体(IRIV)。它们主要由具有约100和300nm之间，例如大约150nm的直径的球形单膜泡组成，并且主要的成分是天然发生的磷脂(PL)和磷脂酰胆碱(PC)，后者形成约70％的该病毒体的结构，而余下的30％的膜组分是由起源于用于提供该HA和NA糖蛋白的流感病毒的包膜PL构成。它们可从流感病毒中以大规模进行生产，该流感病毒被辛乙烯二醇(OEG)溶解，在超速离心以后与卵磷脂混合。用于制备V的工艺详细描述于密歇勒(Mischler)，R.和I.C.梅特卡夫(Metcalfe)，2002.疫苗20:B17-23(通过引用结合在此)的正文和图1中。每剂(0.5ml)V疫苗典型地包含15μg作为活性组分的、由WHO季节性地推荐的流感病毒毒株中的每种的血细胞凝集素，并且另外每剂包含：117μg卵磷脂(磷脂)、3.8mg磷酸氢二钠脱水物、0.7mg磷酸二氢钾、2.4mg氯化钠和0.5ml用于注射的水。该V病毒体的流感疫苗是可从库赛尔(Crucell)商购的，并在不需要佐剂的情况下提供优异的免疫原性以及低反应原性。
用于该疫苗的HA和/或NA可衍生自流感病毒，该流感病毒已经在受精的母鸡的鸡蛋中方便地产生。这种众所周知的生产方法已经使用了数十年，并仍然是用于绝大多数的市场上的流感疫苗的标准程序。
可替代地，使用技术人员同样已知的和可供使用的手段和方法，该HA和NA可衍生自在适合的细胞系(例如哺乳动物、鸟或昆虫细胞系，优选地哺乳动物细胞系，例如MDCK、Vero、PER.C6、BHK等)中产生的流感病毒(例如描述于EP 1951296)。使用哺乳动物细胞意味着疫苗可以不含例如鸡DNA、卵蛋白(例如卵白蛋白和类卵黏蛋白)等物质，从而降低变应原性。WO97/37000、WO97/37001、EP1108787和EP2290053是其中描述了生产能够在悬浮液和无血清培养基中生长并且在流感病毒生产和复制中有用的动物细胞和细胞系的实例。其他细节在WO03/023021和WO03/023025中给出。细胞可以按不同方式生长，例如在悬浮液中，在粘附性培养基中，在微载体上。生产可优选地是在无血清悬浮培养基中进行。
一种亚单位疫苗的蛋白质还可以通过在适合的系统(例如真核生物的、优选地哺乳动物细胞)中常规的重组DNA表达产生。
病毒粒子可通过各种方法从包含病毒的流体中收获。例如纯化过程可包括使用一种包括清洁剂的线性蔗糖梯度溶液进行区带离心来破裂这些病毒粒子。然后在任选的稀释之后，通过渗滤可对抗原进行纯化。
纯化的表面抗原疫苗包括流感表面抗原血球凝集素，以及典型地还有神经氨酸酶。用于制备这些处于纯化形式的蛋白质的工艺在本领域中是众所周知的。
由本发明的方法凸显的免疫反应通常包括一种抗体反应，优选地一种保护性抗体反应。用于在流感疫苗接种之后评估抗体反应、中和能力和保护的方法在本领域中是众所周知的。人类研究已经显示针对HA的抗体效价与保护是相关联的(约30-40的血清样品红血球凝聚抑制(HAI)效价给出了大约50％的保护以免受一种同源病毒的感染)[例如波特&牛津(Potter&Oxford)(1979)英国医学公报(Br Med Bull)35:69-75]，尽管近期的研究对此提出了质疑或甚至表明在HAI和功效之间缺乏关联。
给予根据本发明的疫苗可使用肠胃外给药的标准路径，优选地通过注射(例如皮下、皮内、肌内)进行。在一个实施例中，该疫苗通过肌内注射被给予到例如手臂的三角肌或大腿的股外侧肌肉中。本领域的技术人员已知给予根据本发明的一种疫苗的各种可能性，以诱发对疫苗中的一种或多种抗原的一种免疫反应。
在初打-加打免疫方案中可使用多剂量。在一个典型实施例中，至少三剂的根据本发明的疫苗都是通过肌内注射给予。在本发明的方案中，一种疫苗组合物包括来自至少一种第一流感毒株的HA和NA吗，并且该第一流感毒株的HA和NA蛋白在少于一年的时间内被给予至少三次。因此该给药方案包括一次初打给药和至少两次加打给药。在该初打-加打方案中，优选地相同的疫苗被使用全部三次，但也可能在某些组分上变化。
前面已经说明向原初免疫的受试者给予两剂的一种流感疫苗，但前述的三剂的相同的疫苗不是典型地给予到相同的受试者，并且此处第一次对于经三次给予该流感疫苗后的改善的保护幅度是非常令人吃惊的。典型地，根据本发明，多个剂量是相距至少1周(例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周等)给予的。根据本发明，在第一次和第三次给药之间的总时间是一年或更少。优选地，在第一次和第三次给药之间的总时间是10、9、8、7、6、5或4个月或更少。一个月等于约4周，并且这些术语在此是互换地使用的。在某些实施例中，该第二剂是在该第一剂之后1和12周之间、优选地2和8周之间、优选地3和6周之间给予。在某些实施例中，该第三剂是在该第二剂之后4周和10个月之间、优选地4周和6个月之间给予。在某些实施例中，该第二剂是在该第一剂之后约4周给予，并且该第三剂是在该第二剂之后约4周和3个月之间、例如约4周给予。根据本发明这样的免疫方案具有确保相对快速地开始保护以及还有对异源和甚至异源亚型流感毒株(相对于在给予的该疫苗中的HA和NA抗原衍生自其的所有毒株毒株)诱导交叉保护的优势。
佐剂是本领域中已知进一步增加对一种已施加的抗原决定簇的免疫反应，并且包括流感抗原和适合的佐剂的药物组合物是本领域中众所周知的，例如流感疫苗(诺华(Novartis)包含一种佐剂(MF59，一种包括鲨烯的水包油乳液佐剂)。术语“佐剂”和“免疫刺激剂”在此可互换地使用，并且被定义为引起免疫系统刺激的一种或多种物质。在在此背景下，使用了一种佐剂来增强对这些流感抗原的免疫反应。根据本发明使用的流感疫苗不包括佐剂。令人吃惊地发现，如果向一个受试者给予一种季节性疫苗三次(甚至通过肠胃外注射)，则佐剂对于提供广泛的免疫反应是不必要的，由于一些现有技术文献表明粘膜给药或强佐剂或两者对扩大针对流感疫苗的免疫反应是必要的。在该疫苗中不包括佐剂的一些优势是增加的安全性、更低的反应原性、更简单的产物(因为需要制造和测试的组分更少)，以及这些疫苗在年轻受试者中的潜在用途。
给予根据本发明的药物组合物通常目的在于诱导免疫反应。免疫反应可包括细胞反应和/或体液反应。观察到的交叉保护可包括诱导抗体但未必针对保守的HA包膜。
根据本发明的方法给予疫苗诱导针对异源流感毒株和甚至异源亚型流感毒株的交叉保护。它可能不提供针对这类毒株的无菌保护，即可能不会针对感染自身进行保护，但至少目的在于降低来自此类毒株的流感感染的至少一个以及优选地多个或所有症状的频率、严重性和/或持续时间，例如肌痛、头痛、无力/疲劳、咳嗽病、口咽痛、体重减轻、发冷、发烧、肌肉疼痛、咳嗽、全身不适等。另外，经根据本发明的方法给予该疫苗，可发生于此类毒株的流感感染的、可能甚至需要住院并且在严重的情况下甚至可能导致死亡的并发症(包括例如直接病毒性肺炎或继发性细菌性肺炎)的频率、严重性和/或持续时间预期被降低。于是本发明的方法还可降低或甚至预防流感对经济的一些不利的影响，例如缺勤、访医、住院、需要(额外的)药物治疗等。因此，本发明的方法对卫生保健具有极大影响。另外，本发明的方法通过重复使用标准的季节性疫苗允许针对大流行性流感毒株感染的不良后果进行疫苗接种，这在大流行发作期间鉴于时机就可更早得到疫苗而言可以具有大的优势。
本发明在以下实例中进一步解释。这些实例不以任何方式限制本发明。它们仅仅用以阐明本发明。
实例
实例1.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行3个回合的疫苗接种之后对一种异源流感毒株的交叉保护。
将小鼠用三价的病毒体的季节性流感疫苗，2009/2010季的V(库赛尔)进行免疫。这种疫苗包含以下三种流感毒株中的每种的HA(30μg/ml)和NA(没有指定量，通常确定为约0.8和4μg NA/15μg HA之间)：处于病毒体的形式的(H1N1A/布里斯班/59/07、H3N2A/乌拉圭/716/2007、B/布里斯班/60/2008)。疫苗的人类剂量是15μg HA/毒株，即0.5ml。使用带有针头的一种标准注射器，将小鼠以3周的间隔用20％的人类剂量进行3次疫苗接种(50μl，两个后肢的四头肌肌内注射/免疫)。在最终免疫之后四周，将小鼠用25x LD50(LD50＝导致所暴露的动物的50％死亡的病毒的剂量)小鼠适合的H1N1流感毒株WSN33进行攻击，该毒株与该疫苗H1毒株在遗传学上是远缘的(并因此与其是异源的)(参见图1B)。将根据相同的给药方案接受了3x疫苗的小鼠与接受了稀释的注射剂(PBS，2×50μl肌内/注射)的小鼠进行比较。在攻击之后，每日监测体重和临床症状。临床得分指定如下：0＝无临床征象；1＝皮毛粗糙；2＝皮毛粗糙，更少反应性，触摸时被动；3＝皮毛粗糙，卷起，呼吸困难，触摸时被动；4＝皮毛粗糙，卷起，呼吸困难，无反应。将观察到具有4的临床得分的小鼠进行安乐死并打分为死亡。
图2A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔(Kaplan-Meier)存活曲线，并令人吃惊地显示相对于对照小鼠(10分之2，p<0.023，使用费舍尔精确检验)而显著地增加的存活(10分之8的用3x疫苗免疫的小鼠)。如预期的，1次注射疫苗在这一模型中不会赋予保护(未显示)。
图2B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示两组小鼠都损失了20％重量，在此之后免疫的小鼠大多恢复并且未免疫的小鼠大体上死于该感染。在死亡或安乐死之前最后记录的小鼠体重推进(carried forward)到该分析中。
图2C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示在感染中存活的被免疫的小鼠未遭受长时间的临床疾病。在死亡或安乐死之前最后记录的临床得分推进到该分析中。
季节性疫苗的组合物几乎每年被修饰，此时预期它们不再赋予针对遗传漂移的传播性毒株的保护。因此非常意外的是用一种2009/2010流感季节性疫苗进行的另外的加打(即三次给予这种相同的疫苗)赋予针对追溯到1933的一种遗传学上远源的流感毒株的保护。结论是三次给予该疫苗导致针对一种异源流感毒株的显著交叉保护。
实例2.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行3个回合的疫苗接种之后对一种异源亚型流感毒株的交叉保护。
实例1表明针对一种异源H1N1毒株的交叉保护。在该实例中，对这样的交叉保护是否会扩展到异源亚型毒株进行了测试。
根据相同的给予方案和与在实例1中相同的疫苗将小鼠进行免疫。在最终免疫之后四周，将小鼠用25x LD50小鼠适合的H5N1流感毒株HK/156/97(与该疫苗中存在的抗原的毒株是异源亚型的)进行攻击。在攻击之后，根据与对于实例1所述的相同的标准对疾病进行监测。
图3A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔存活曲线，并令人吃惊地显示相对于对照小鼠(8分之0，p<0.001，使用费舍尔精确检验)而显著地增加的存活(8分之7的用3x疫苗免疫的小鼠)。
图3B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示两组小鼠都损失了20％重量，在此之后免疫的小鼠大多恢复并且未免疫的小鼠快速地死于该感染。在死亡或安乐死之前最后记录的小鼠体重推进到该分析中。
图3C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示在感染中存活的被免疫的小鼠未遭受长时间的临床疾病。在死亡或安乐死之前最后记录的临床得分推进到该分析中。
季节性疫苗是由每年与传播性流感毒株相匹配的毒株组成，并且通常预计不会提供针对另外的流感亚型的保护(参见图1A的概述)。针对一些涉嫌造成大流行性威胁的流感亚型(例如H5N1)正在开发特异性的疫苗。因此非常意外的是用一种2009/2010流感季节性疫苗进行的另外的加打赋予针对异源亚型H5N1流感的保护。
结论是三次给予该疫苗导致不仅针对一种异源流感毒株，还针对一种异源亚型流感毒株的显著交叉保护。
实例3.在小鼠中通过多次给予V 2009/2010赋予的保护幅度。
在小鼠中，对给予季节性流感疫苗(H1N1 A/布里斯班/59/07，H3N2 A/乌拉圭/716/2007，B/布里斯班/60/2008：V，季节2009/2010)一次、或三次(给予之间间隔：3周)的影响进行了测试，在独立的试验中随后用以下各项对该小鼠进行攻击(最终免疫以后4周)：i)异源H1、H3和B毒株，ii)一种异源亚型H5毒株，以及iii)一种异源亚型H7毒株(如在实例1-3中的方法)。
所预期的是3次给予该季节性疫苗会针对在该疫苗中未表现的异源和异源亚型流感毒株(即这些毒株的抗原未被包括)进行显著地保护。
实例3A.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行三个回合的疫苗接种之后对一种异源H3流感毒株的交叉保护。
实例1表明针对一种异源H1N1毒株的交叉保护。在该实例中，对这样的交叉保护是否还会扩展到异源H3流感进行了测试。
根据相同的给予方案和与在实例1中相同的疫苗将小鼠进行免疫。在最终免疫之后四周，将小鼠用25x LD50小鼠适合的H3N2流感HK/1/68(与在疫苗中存在的H3N2毒株是强烈异源的)进行攻击(参见图1C)。在攻击之后，根据与对于实例1所述的相同的标准对疾病进行监测。
图4A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔存活曲线，并显示相对于对照小鼠(10分之0，p<0.05，使用费舍尔精确检验)而显著地增加的存活(10分之6的用3x疫苗免疫的小鼠)。
图4B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示两组小鼠都损失了20％重量，在此之后免疫的小鼠大多恢复并且未免疫的小鼠快速地死于该感染。在死亡或安乐死之前最后记录的小鼠体重推进到该分析中。
图4C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示在感染中存活的被免疫的小鼠未遭受长时间的严重的临床疾病。在死亡或安乐死之前最后记录的临床得分推进到该分析中。
季节性疫苗是由每年与传播性流感毒株相匹配的毒株组成，并且通常仅提供针对该疫苗中存在的毒株和密切相关的毒株的保护。在当前的实例中使用的攻击毒株是来自1968的原始的H3N2大流行性毒株，并且因此与当前的H3N2毒株是遗传学上远缘的。将疫苗组合物基于小得多的程度的遗传变异进行更新，其预期转变为减少的保护。因此在本发明之前，非常意外的是三次给予季节性流感疫苗赋予针对遗传学上远缘的H3N2流感的显著保护。这些结果证实三次给予季节性流感疫苗导致针对一种异源流感毒株的显著交叉保护，在这种情况下是对于一种H3毒株。
实例3B.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行一个或三个回合的疫苗接种之后对一种异源流感B毒株的交叉保护。
实例1表明针对一种异源H1N1毒株的交叉保护。在该实例中，对于季节性疫苗的2009/2010组合物，对这样的交叉保护是否还会扩展到异源流感B进行了测试。将小鼠以3周间隔用季节性疫苗进行免疫并在最终免疫之后，用25x LD50的流感B/佛罗里达/04/06攻击4周。同样在攻击之前，将接受一次季节性疫苗注射的一个对照组免疫4周。在攻击之后，根据与对于实例1所述的相同的标准对疾病进行监测。
图5A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔存活曲线，并显示相对于PBS对照(分别是存活80％，p＝0.01；100％，p＝0.001(双向费舍尔精确检验))，1x和3x疫苗赋予针对该攻击的显著保护。
图5B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示在攻击之后1x和3x疫苗两者都显著降低了体重损失(分别是p＝0.032和p<0.001，用邓尼特(Dunnett)事后检验进行的ANOVA)。特别是在接受了3x疫苗的组中在攻击后的体重损失几乎完全观察不到。
图5C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示相对于PBS对照，1x和3x疫苗两者都强烈降低了临床症状(在两种情况下攻击后从第3天显著)。在处理组中的疾病是非常轻微的，临床得分中值不超过1。
一些公司现在已经改变到在季节性流感疫苗的一种四价配制品中包括流感B的2个毒株，表现流感B的2个主要的分化枝(维多利亚/02/1987和山形/16/1988原型(图1D))，基于在这两个分化枝之间的交叉保护不被预期的基本原理。因此在本发明之前，非常意外的是三次用一种季节性流感疫苗免疫小鼠(其中仅表现流感B的一个分化枝)针对异源流感B攻击是完全受保护的。这些结果证实三次给予一种季节性流感疫苗导致针对一种异源流感毒株的显著交叉保护，在这种情况下是对于一种B毒株。而且，疫苗的2009组合物已经赋予了针对异源流感B的显著保护，而保护显现进一步被3x季节性疫苗改善。
实例3C.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行一个或三个回合的疫苗接种之后对异源亚型流感H5N1的交叉保护。
实例2表明针对一种异源亚型H5N1毒株的交叉保护。在当前的实例中，研究了针对异源亚型H5N1流感的保护是否受用疫苗(V，季节2009/10组合物)免疫的数目的影响。将小鼠以3周间隔用季节性疫苗进行免疫并在最终免疫之后，用25x LD50的流感A/HK/156/97攻击4周。同样在攻击之前，将接受一次季节性疫苗注射的一个对照组免疫4周。在攻击之后，根据与对于实例1所述的相同的标准对疾病进行监测。
图6A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔存活曲线，并显示1x和3x疫苗赋予针对该攻击的显著保护；分别是存活60％，p＝0.022；70％，p＝0.006(双向费舍尔精确检验)。
图6B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示3x疫苗显著降低了体重损失(p＝0.032，用邓尼特(Dunnett)事后检验进行的ANOVA)。基于体重，总结通过3x疫苗的保护是更强健的，而保护百分比在1x和3x疫苗之间是可比的。
图6C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示1x和3x疫苗两者免疫的组在攻击后大幅生病，然而两个组最后恢复，而对照死于该感染。
这些发现证实了实例2中的发现。另外，它们再次确定通过3x季节性疫苗的针对异源亚型H5N1攻击的保护显现比通过1x季节性疫苗的保护更强健。
实例4.在小鼠中通过多次给予V 2010/2011赋予的保护幅度。
在小鼠中，对给予季节性流感疫苗(H1N1 A/加利福尼亚/07/09，H3N2A/维多利亚/210/2009，B/布里斯班/60/2008：V，季节2010/2011)一次、或三次(给予之间间隔：3周)的影响进行了测试，随后用以下各项对该小鼠进行攻击(最终免疫以后4周)：i)同源H1、H3和B毒株，ii)异源H1、H3和B毒株。
所预期的是3次给予该季节性疫苗会针对在该疫苗中未表现的异源和异源亚型流感毒株进行显著地保护。
实例4A.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行三个回合的疫苗接种之后对一种异源流感B毒株的交叉保护。
在这个实例中，测试了与该疫苗中表现的毒株相比，用一种季节性流感疫苗(V，季节2010/2011组合物)进行3x免疫是否可赋予针对流感B(弗洛/4/2006)(属于流感B的其他分化枝)的保护(参见图1D)。
根据相同的给予方案和与在实例1中相同的疫苗将小鼠进行免疫。在最终免疫之后四周，将小鼠用25x LD50小鼠适合的流感B佛罗里达/4/2006(与该疫苗(布里斯班/60/2008)中存在的流感B毒株是强烈异源的)进行攻击(参见图1D)。在攻击之后，根据与对于实例1所述的相同的标准对疾病进行监测。
图7A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔存活曲线，并令人吃惊地显示相对于对照小鼠(10分之0，p<0.001，使用费舍尔精确检验)而显著地增加的存活(10分之10的用3x疫苗免疫的小鼠)。
图7B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示在死于该感染之前该对照组损失了超过25％的它们的初始体重，而该3x疫苗组损失了少于10％的它们的体重(从第3天开始显著不同)。在死亡或安乐死之前最后记录的小鼠体重推进到该分析中。
图7C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示在该感染中存活的3x疫苗免疫的小鼠没有遭遇严重的临床疾病，而该对照组快速地发展到严重的临床疾病(如通过临床得分>2定义的；从第3天起显著不同)。在死亡或安乐死之前最后记录的临床得分推进到该分析中。
季节性疫苗是由每年与传播性流感毒株相匹配的毒株组成，并且通常仅提供针对该疫苗中存在的毒株和密切相关的毒株的保护。一些公司现在已经改变到在季节性流感疫苗的一种四价配制品中包括流感B的2个毒株，表现流感B的2个主要的分化枝(维多利亚/02/1987和山形/16/1988原型(图1D))，基于在这两个分化枝之间的交叉保护不被预期的基本原理。因此在本发明之前，非常意外的是三次用一种季节性流感疫苗免疫小鼠(其中仅表现流感B的一个分化枝)针对异源流感B攻击是完全受保护的。这些结果证实三次给予一种季节性流感疫苗导致针对一种异源流感毒株的显著交叉保护，在这种情况下是对于一种B毒株。而且，这些结果表明通过3x疫苗的异源交叉保护不限于一种单独的流感疫苗组合物，由于已经对于Inflexal2009/2010和2010/11两种组合物观察到。
实例4B.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行一个或三个回合的疫苗接种之后对一种异源流感B毒株的交叉保护。
实例4A对于季节性疫苗的2010组合物表明的针对一种异源流感B的交叉保护。在当前的实例中，我们检查了针对异源流感B的保护是否受用疫苗免疫的数目的影响。将小鼠以3周间隔用季节性疫苗(V，季节2010/11)进行免疫并在最终免疫之后，用25x LD50的流感B/佛罗里达/04/06攻击4周。同样在攻击之前，将接受一次季节性疫苗注射的一个对照组免疫4周。在攻击之后，根据与对于实例1所述的相同的标准对疾病进行监测。
图8A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔存活曲线，并显示3x疫苗赋予针对该攻击的完全保护(100％，p＝0.001，双向费舍尔精确检验)。1x疫苗不会针对异源流感B攻击进行显著保护。
图8B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示在攻击后仅3x疫苗显著降低了体重损失(p＝0.018，用邓尼特(Dunnett)事后检验进行的ANOVA)。
图8C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示相对于PBS对照，3x疫苗强烈降低了临床症状(从攻击后第3天起显著)，而1x疫苗仅引起了较小的症状延迟。在3x疫苗组中的疾病是非常轻微的，临床得分中值不超过1.5。
当给予另一种季节性疫苗(阿博特卫生保健公司(AbbotHealthcare)的一种亚单位疫苗，季节2010/11的组合物(即与V中那个季节相同的毒株)三次时，获得了相似的结果。在一次给药之后就获得了显著的保护，而完全保护仅在3次给药之后观察到。
这些数据清楚显示3x免疫优于1x免疫的、对于针对异源流感B的保护的一个优势。
实例4C.在小鼠中在用一种季节性流感疫苗进行一个或三个回合的疫苗接种之后对异源亚型流感H5N1的交叉保护。
实例2和3C表明对于季节性流感疫苗的2009组合物针对一种异源亚型H5N1毒株的交叉保护。在当前的实例中，研究了用季节性疫苗的2010组合物的1次或3次免疫是否赋予了针对异源亚型H5N1流感的保护。将小鼠以3周间隔用季节性疫苗(V，组合物2010/11)进行免疫并在最终免疫之后，用25x LD50的流感A/HK/156/97攻击4周。同样在攻击之前，将接受一次季节性疫苗注射的一个对照组免疫4周。在攻击之后，根据与对于实例1所述的相同的标准对疾病进行监测。
图9A显示攻击后的小鼠的卡本-麦尔存活曲线，并显示仅3x疫苗赋予针对该攻击的显著保护(80％，p＝0.001，双向费舍尔精确检验)。
图9B显示攻击后的小鼠的平均相对体重，并显示3x疫苗显著降低了体重损失(p＝0.032，用邓尼特(Dunnett)事后检验进行的ANOVA)，而1x疫苗未显著降低体重损失。
图9C显示攻击后的小鼠的临床得分，并显示1x和3x疫苗两者免疫的组在攻击后大幅生病，然而仅接受了3x疫苗的小鼠转入恢复(相对于PBS的显著不同从第7天开始)。
这些发现显示该2010组合物的3x季节性疫苗也赋予了针对异源亚型H5N1攻击的显著保护，扩展了实例2和3c的发现。1x2009季节性疫苗已经赋予了针对H1N1攻击的部分保护，而对于2010疫苗并非如此。在这两种情况下，相对于1x免疫，在3x免疫之后的保护是清楚地更强健的。
实例5.在白鼬中通过多次给予流感疫苗赋予的保护幅度。
白鼬被认为是用于测试流感疫苗功效的一个验证模型。在白鼬中，对给予季节性流感疫苗(H1N1，H3N2，B：V，季节2011/2012或2012/2013)一次、两次或三次(给予之间间隔：3周)的影响进行了测试，随后(4周以后)用一种异源亚型H5毒株(H5N1印度/05/05)分别对这些白鼬进行攻击。通过每天培养咽喉拭子评估病毒复制，并且在感染后达5天监测存活。
所预期的是3次给予该季节性疫苗会针对异源亚型H5N1流感进行显著保护。
实例6.通过用替代疫苗进行另外的加打所赋予的保护幅度
在小鼠中，对给予替代流感疫苗(例如替代的经注册的疫苗、灭活的整个流感病毒、和/或重组HA+NA)一次、两次或三次(给予之间间隔：3周)的影响进行了测试，随后用以下各项对该小鼠进行攻击(最终免疫以后4周)：i)同源H1、H3和B毒株，ii)异源H1、H3、和B毒株，iii)异源亚型流感毒株。
所预期的是用这样的疫苗进行另外的加打也会赋予针对在该疫苗中未表现的异源和异源亚型流感毒株的交叉保护。
实例7.在人类受试者中用流感疫苗V进行另外的加打
对人类受试者进行临床试验来测试给予三次(给予之间的时间间隔：4周)的季节性流感疫苗(H1N1 A/布里斯班/59/07、H3N2 A/乌拉圭/716/2007、B/布里斯班/60/2008:V，季节2011/2012)的安全性和免疫原性。在开始每次免疫之前、最终免疫之后4周以及在初次免疫之后5个月采集血清和外周血单核细胞。在初次免疫之后12个月采集血清和外周血单核细胞。
通过所采集的血清的同源、异源和异源亚型中和、结合以及HAI测定对免疫原性进行监测。在一次免疫之后的免疫原性数据显示，对于所有三种毒株该疫苗满足EMA标准。通过血清的交叉保护是在接受了血清的腹腔内注射并随后(注射后1天)用i)同源H1、H3和B毒株，ii)异源H1、H3和B毒株，iii)异源亚型流感毒株进行攻击的小鼠中进行测试。

Claims (16)

1.一种用于针对流感接种疫苗的方法，该方法包括给予一种季节性流感疫苗，该疫苗包括来自至少三种流感毒株的流感血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白质，其中该疫苗是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，并且其中该疫苗不包括一种佐剂，并且在一年内被肌内地、皮下地或皮内地给予一个受试者至少三次。
2.一种用于诱导针对如与在一种季节性流感疫苗中存在来自其抗原的流感毒株相比的至少一种异源亚型流感毒株的交叉保护的方法，该方法包括给予包括HA和NA的该季节性流感疫苗，其中该疫苗是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，并且其中该疫苗不包括一种佐剂，并在一年内被肌内地、皮下地或皮内地给予一个受试者至少三次。
3.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该疫苗是以两次给予之间至少一周、优选地大约三周至八周之间的一个间隔给予的。
4.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该疫苗的第二剂是在第一剂之后的1周和8周之间被给予该受试者，并且该疫苗的第三剂是在第二剂之后的3周和26周之间被给予该受试者。
5.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中第二剂的疫苗是在第一剂之后的大约一个月被给予，并且第三剂的疫苗是在第二剂之后的大约一个月被给予。
6.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该疫苗包括来自三种或四种流感毒株的HA和NA。
7.根据权利要求6所述的一种方法，其中该疫苗包括来自一种H1毒株、一种H3毒株和一种B毒株的HA和NA。
8.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该疫苗包括来自一种流感H1N1毒株的HA和NA。
9.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该流感疫苗是一种病毒体的流感疫苗。
10.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该受试者是6个月和80岁之间的年龄的一个人类受试者。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的一种方法，其中该受试者是3个月和4岁之间的年龄的一个人类受试者。
12.一种用于诱导针对一种H5N1流感毒株的交叉保护的方法，该方法包括向一个受试者给予一种流感疫苗，该疫苗包括来自流感的一种H1N1、一种H3N2和一种B毒株的HA和NA，其中没有来自H5N1流感毒株的HA和NA被给予该受试者，并且其中该疫苗是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，并且其中该疫苗不包括一种佐剂，并在一年内被肌内地、皮下地或皮内地给予至少三次。
13.一种用于针对流感接种疫苗的方法，该方法包括在一年内向一个受试者至少三次肌内地、皮下地或皮内地给予一种病毒体的季节性流感疫苗，该疫苗包括来自至少三种流感毒株的流感血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白质。
14.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该疫苗包括来自至少一种流感H1N1流感毒株、一种H3N2毒株和一种B毒株的HA和NA。
15.根据以上权利要求中任一项所述的一种方法，其中该疫苗是被肌内地给予。
16.一种包括至少三种流感毒株的HA和NA蛋白质的季节性流感疫苗，用于诱导针对这三种流感毒株的保护和针对与这些该流感毒株中的至少一种相比相同的亚型内的至少一种异源流感毒株、以及还针对在该疫苗中不存在其HA和NA抗原的至少一种异源亚型流感毒株的交叉保护，并且其中该疫苗是一种病毒体的流感疫苗、一种裂解型流感疫苗、或一种亚单位流感疫苗，并且其中该疫苗不包括一种佐剂，并在一年内被肌内地、皮下地或皮内地给予一个受试者至少三次。
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RU (1) RU2599496C2 (zh)
WO (1) WO2013131898A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107469075A (zh) * 2017-08-23 2017-12-15 江苏金迪克生物技术有限公司 一种高剂量四价流感疫苗组合物

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201406569D0 (en) 2014-04-11 2014-05-28 Stabilitech Ltd Vaccine compositions
KR20180035807A (ko) 2015-06-26 2018-04-06 세퀴러스 유케이 리미티드 항원적으로 매치된 인플루엔자 백신
GB2562241B (en) * 2017-05-08 2022-04-06 Stabilitech Biopharma Ltd Vaccine compositions
WO2023081798A1 (en) * 2021-11-05 2023-05-11 Sanofi Pasteur Inc. Multivalent influenza vaccines comprising recombinant hemagglutinin and neuraminidase and methods of using the same

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69229703T2 (de) 1991-05-08 2000-04-27 Schweiz Serum & Impfinst Wiederhergestellte Influenza-Virosomen mit immunostimulierenden und immunoverstärkenden Eigenschaften und diese enthaltende Impfstoffe
ES2378409T3 (es) 1994-11-10 2012-04-12 Baxter Healthcare S.A. Método para producir sustancias biológicas en cultivo sin proteínas
DE19612967A1 (de) 1996-04-01 1997-10-02 Behringwerke Ag Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren in Zellkultur, sowie die durch das Verfahren erhältlichen Influenzaviren
DE19612966B4 (de) 1996-04-01 2009-12-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren
CA2383105C (en) 1999-09-24 2010-01-26 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Intranasal influenza virus vaccine
EP1103610A1 (en) 1999-11-26 2001-05-30 Introgene B.V. Production of vaccines from immortalised mammalian cell lines
WO2008037033A1 (en) 2006-09-29 2008-04-03 The Macfarlane Burnet Institute For Medical Research And Public Health Limited Flu vaccine admixture of mannan and flu antigen
GB0024089D0 (en) 2000-10-02 2000-11-15 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
JP2004536785A (ja) 2001-02-23 2004-12-09 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 新規なワクチン
PT1361890E (pt) 2001-02-23 2011-06-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Formulações vacinais de influenza para distribuição intradérmica
DE10144903A1 (de) 2001-09-12 2003-03-27 Chiron Behring Gmbh & Co Vermehrung von Viren in Zellkultur
DE10144906B4 (de) 2001-09-12 2013-11-28 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen
ATE494906T1 (de) 2005-11-01 2011-01-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Von zellen stammende virale impfstoffe mit geringen mengen an rest-zell-dna
PE20090146A1 (es) * 2007-04-20 2009-03-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica contra el virus influenza
EP2227251A1 (en) * 2007-12-06 2010-09-15 GlaxoSmithKline Biologicals SA Influenza composition
GB0905570D0 (en) * 2009-03-31 2009-05-13 Novartis Ag Combined vaccines
EA201171032A1 (ru) * 2009-02-10 2012-02-28 Новартис Аг Схемы лечения с помощью вакцины против гриппа, связанного с пандемическими штаммами
JP5762307B2 (ja) * 2009-03-31 2015-08-12 国立感染症研究所長 経鼻投与用ワクチンを用いるインフルエンザの予防方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107469075A (zh) * 2017-08-23 2017-12-15 江苏金迪克生物技术有限公司 一种高剂量四价流感疫苗组合物

Also Published As

Publication number Publication date
RU2599496C2 (ru) 2016-10-10
RU2014140168A (ru) 2016-04-27
EP2822585A1 (en) 2015-01-14
WO2013131898A1 (en) 2013-09-12
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