JP2010513529A - ヒトil−12を結合するヒト抗体及び製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2000年3月24日に出願された米国特許出願第09/534,717号(2005年7月5日に米国特許第6,914,128号として発行され、1999年3月25日に出願された米国仮特許出願第60/126,603号の優先権を主張する。)の一部継続出願である2006年12月22日に出願された米国特許出願第11/645,287号の優先権を主張する。先述の出願の内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
b)配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する。
b)配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する、
b)配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する、
b)配列番号404から配列番号469からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号534から配列番号579からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する、
b)配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−6M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号2のアミノ酸配列を含む軽い鎖CDR3、配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号10のアミノ酸配列を含む軽い鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置、接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置、接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置、接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置、接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置、接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
a)親抗体、その抗原結合部分を準備すること;
b)H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群から選択される好ましい選択的突然変異誘発位置を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の第一の群を作製するために、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)単一の選択的突然変異誘発位置の変異が所定の目標活性又は部分的目標活性を有する抗体又はその抗原結合部分を与えるかどうかを決定するために、変異された抗体又はその抗原結合部分の第一の群の活性を評価すること;
e)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された各変異を、段階的に、親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分が所定の目標活性又は部分的目標活性を有するかどうかを決定するために、組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること;
g)段階d)又はf)が所定の目標活性を有する抗体若しくはその抗原結合部分をもたらさず、部分活性を有するに過ぎない抗体をもたらした場合には、変異された抗体又はその抗原結合部分の第二の群を作製するために、H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、98、L30A及びL96からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ変異させること、
h)H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、98、L30A及びL96からなる群から選択される単一のアミノ酸残基の変異が所定の目標活性又は部分活性を有する抗体又はその抗原結合部分をもたらすかどうかを決定するために、変異された抗体又はその抗原結合部分の第二の群の活性を評価すること;
i)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された段階g)の各変異を、段階的に、親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;
j)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分が所定の目標活性又は部分的目標活性を有するかどうかを決定するために、組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること;
k)段階h)又はj)が所定の目標活性を有する抗体若しくはその抗原結合部分をもたらさず、部分活性を有するに過ぎない抗体をもたらした場合には、変異された抗体又はその抗原結合部分の第三の群を作製するために、H33B、H52B及びL31Aからなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ変異させること、
l)H33B、H52B及びL31Aからなる群から選択される単一のアミノ酸残基変異が所定の目標活性又は部分活性を有する抗体又はその抗原結合部分をもたらすかどうかを決定するために、変異された抗体又はその抗原結合部分の第三の群の活性を評価すること;
m)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された段階k)の各変異を、段階的に、親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;
n)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分が所定の目標活性又は部分的目標活性を有するかどうかを決定するために、組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価し、これにより、所定の目標活性を有する抗体又はその抗原結合部分を作製すること、
を含む、所定の目標活性を達成するために、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を特徴とする。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価すること;
e)少なくとも1つの他の接触又は高頻度変異位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された各変異を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善させる方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性がさらに改善されていない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価すること;
e)少なくとも1つの他の接触又は高頻度変異位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された各変異を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び適切な発現系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴(該特性又は特徴は、保持される必要がある特性又は特徴である。)に関して、親抗体又はその抗原結合部分に対して変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴(該特性又は特徴は保持される必要がある特性又は特徴である。)に関して、親抗体又はその抗原結合部分に対して変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
f)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、段階a)からe)を反復すること;
g)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴(該特性又は特徴は保持される必要がある特性又は特徴である。)に関して、親抗体又はその抗原結合部分に対して変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴(該特性又は特徴は保持される必要がある特性又は特徴である。)に関して、親抗体又はその抗原結合部分に対して変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
f)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、工程a)からe)を反復すること;
g)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性及び少なくとも1つの保持された他の特徴を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96の位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94の位置でもないCDR内の少なくとも1つの他の位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性及び他の特性又は特徴を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原部分に対して変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること;
f)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96の位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置に対して、段階b)からe)を反復すること;
g)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有し及び少なくとも1つの他の特性又は特徴に影響を与えないことが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性及び少なくとも1つの他の特徴又は特性の保持を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特徴又は特性の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の親和性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の位置の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること;
f)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96の位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置に対して、段階b)からe)を反復すること;
g)少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有するが、少なくとも1つの他の特性又は特徴には影響を与えないことが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性及び少なくとも1つの特性又は特徴の保持を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び保持された他の特徴又は特性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、他の特徴に影響を与えずに、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性及び少なくとも1つの他の特徴又は特性の保持を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)bの下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96の位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有し及び少なくとも1つの他の特徴又は特性に影響を与えないことが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの他の保持された特徴又は特性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性及び少なくとも1つの他の特徴又は特性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
別の実施形態において、治療剤は抗TNF抗体及びその抗体断片、TNFR−Ig構築物、TACE阻害剤、PDE4阻害剤、コルチコステロイド、ブデノシド、デキサメタゾン、スルファサラジン、5−アミノサリチル酸、オルサラジン、IL−1β変換酵素阻害剤、IL−1ra、チロシンキナーゼ阻害剤、6−メルカプトプリン及びIL−11からなる群から選択される。
{0>Various aspects of the invention are described in further detail in the following subsections.<}75{>≫ 本発明の様々な態様は、以下の項でさらに詳しく記載されている。
本発明は、ヒトIL−12に結合する単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。好ましくは、本発明のヒト抗体は、組み換え、中和ヒト抗hIL−12抗体である。ヒトIL−12へ結合する本発明の抗体は、実施例1に記載されているようなファージディスプレイ技術によるなど、例えば、1つ又はそれ以上のヒトVL及びVHcDNAライブラリーをhIL−12でスクリーニングすることによって選択することができる。ヒトVL及びVHcDNAライブラリーをスクリーニングによって、最初に、一連の抗IL−12抗体が同定され、さらなる開発のために、そのうちの1つの抗体(本明細書において、「Joe9」(又は「Joe野生型」と称される。)を選択した。Joe9は、比較的低親和性のヒトIL−12抗体(例えば、約0.1sec−1のKoff)であるが、hIL−12を特異的に結合及び検出するのに有用である。Joe9抗体の親和性は、重鎖及び軽鎖CDRの突然変異誘発を実施し、「混合され及びマッチされ」、さらに変異を受けた軽鎖及び重鎖可変領域の群を作製し、hIL−12に対して増加した親和性を有する多くのさらなる抗hIL−12抗体をもたらすことによって改善された(実施例1、表2(添付書類A参照)及び図1AからDの配列並置参照)。
b)配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する。
b)配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する、
b)配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する、
b)配列番号404から配列番号469からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号534から配列番号579からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する、
b)配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有する、及び
c)配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−6M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号2のアミノ酸配列を含む軽い鎖CDR3、配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いKoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置、接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置、接触位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いKoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
a)インビトロでのPHAアッセイにおいて、1×10−9M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害し、
b)配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1又は好ましい選択的突然変異誘発位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2及び配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いkoff速度を有する。)を含み、並びに
c)配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1又は選択的好ましい選択的突然変異誘発位置若しくは高頻度変異位置に1つ若しくはそれ以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体(前記変異体は、配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2及び配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より最大10倍高いKoff速度を有する。)を含む、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
本発明の組換えヒト抗体は、ヒトリンパ球由来のmRNAから調製されたヒトVL及びVHcDNAを用いて調製された組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー、好ましくはscFVファージディスプレイライブラリーのスクリーニングによって単離することができる。このようなライブラリーを調製し、スクリーニングする方法は、本分野において公知である。ファージディスプレイライブラリーを作製するための市販のキット(例えば、Pharmacia Recombinant Phage Antibody System、カタログ番号27−9400−01;及びStratagene SurfZAPTMファージディスプレイキット、カタログ番号240612)に加えて、抗体ディスプレイライブラリーを作製及びスクリーニングする際に使用するのに特に適した方法及び試薬の例は、例えば、Kang他のPCT国際公開WO92/18619;Winter他のPCT国際公開WO92/20791;Breitling他のPCT国際公開WO93/01288;McCafferty他のPCT国際公開WO92/01047;GarrardらPCT国際公開WO92/09690;Fuchs et al.(1991)Bio/Technology 9:1370−1372;Hay et al.(1992)Hum Antibod Hybridomas3:81−85;Huse et al.(1989)Science246:1275−1281;McCafferty et al.,Nature(1990)348:552−554;Griffiths et al.(1993)EMBOJ12:725−734;Hawkins et al.(1992)JMolBiol226:889−896;Clackson et al.(1991)Nature352:624−628;Gram et al.(1992)PNAS89:3576−3580;Garrad et al.(1991)Bio/Technology9:1373−1377;Hoogenboom at al.(1999)NucAcidRes19:4133−4137;及びBarbas et al.(1991)PNAS88:7978−7982に見出すことができる。
表2(添付書類A参照)は、ディスプレイされた抗体が、インビトロ親和性成熟の結果として生じた結合特異性/親和性を変化させたことを示している。
a)ヒトIL−12に結合し、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に0.1s−1又はそれ以下のKoff速度定数でヒトIL−12から解離し、又はインビトロでのフィトヘマグルチニン芽球増殖アッセイ(PHAアッセイ)において、1×10−6M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する。
b)VH3生殖系列ファミリーの一員から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(該重鎖可変領域は、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する。)を有する。
c)Vλ1生殖系列ファミリーの一員から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(該軽鎖可変領域は、好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する。)を有する。
従って、一態様において、本発明は、以下の特徴を有する単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を特徴とする。
a)配列番号595から667からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(該重鎖可変領域は、好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する。)を有する。
b)配列番号669から675からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(該軽鎖可変領域は、好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する。)を有する。
a)ヒトIL−12に結合し、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に0.1s−1若しくはそれ以下のKoff速度定数でヒトIL−12から解離し、又はインビトロでのフィトヘマグルチニン芽球増殖アッセイ(PHAアッセイ)において、1×10−6M若しくはそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する。
b)COS−3生殖系列アミノ酸配列を含む重鎖可変領域(該重鎖可変領域は、好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する。)を有する。
c)DPL8生殖系列アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(該軽鎖可変領域は、好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する。)を有する。
a)ヒトIL−12に結合し、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に0.1s−1又はそれ以下のKoff速度定数でヒトIL−12から解離し、又はインビトロでのフィトヘマグルチニン芽球増殖アッセイ(PHAアッセイ)において、1×10−6M又はそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球の増殖を阻害する。
b)VH3生殖系列ファミリーの一員から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(前記重鎖可変領域は、他のVH3生殖系列ファミリーの一員から得られるCDR2と構造的に類似するCDR2及び他のVH3生殖系列ファミリーの一員から得られるCDR1と構造的に類似するCDR1を含み、並びに前記重鎖可変領域は、好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基による変異を有する。)を有する。
c)Vλ1生殖系列ファミリーの一員から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(前記軽鎖可変領域は、他のVλ1生殖系列ファミリーの一員から得られるCDR2と構造的に類似するCDR2及び他のVλ1生殖系列ファミリーの一員から得られるCDR1と構造的に類似するCDR1を含み、並びに前記軽鎖可変領域は、好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する。)を有する。
典型的には、改善された親和性を有する抗体の選択は、上記第II節に記載されているように、ファージディスプレイ法を用いて実施することができる。これは、CDR残基の組み合わせを無作為に変異させること、及び異なる配列の抗体を含有する大規模なライブラリーを作製することによって達成することができる。しかしながら、これらの選択法が機能するために、抗体抗原反応は、長時間にわたって、抗原に対してより高い親和性の抗体の優先的結合を可能にするために平衡状態となる傾向がなければならない。親和性のある濃度(すなわち、抗体Y61の濃度)が達成された時点で、選択された抗IL−12抗体の親和性を改善するために、ファージディスプレイ法が使用された場合、(おそらく、抗原とファージ粒子間のさらなる非特異的相互作用のために)平衡状態を確立することができる選択条件を決定することはできない。従って、ファージディスプレイ法によって、さらに高い親和性を有する抗体を選択することはできない。従って、少なくともある種の抗体又は抗原に対しては、高度に改善された結合特異性/親和性を有する抗体を選択する能力において、ファージディスプレイ法には限界がある。従って、この限界を克服するために、抗体のファージディスプレイ親和性成熟を必要としない選択的突然変異誘発アプローチと名づけられた方法が確立され、本発明によって提供される。この選択的突然変異誘発アプローチは、ファージディスプレイ系を用いた限界を克服するために開発されたが、この方法は、ファージディスプレイ系とともに使用することもできることに注意すべきである。さらに選択的突然変異誘発アプローチは、あらゆる抗体の活性を改善するために使用することができる。
順位の順に、候補の好ましい選択的突然変異誘発位置、高頻度変異及び/又は接触位置を、他の全ての可能なアミノ酸残基へと個別に変異させ、活性増強アミノ酸残基を決定するために、抗体の活性に対して各変異が及ぼす影響を分析する段階、
必要であれば、各活性増強アミノ酸残基の段階的な組み合わせを作製し、及び抗体の活性に対する様々な組み合わせの効果を分析する段階、活性増強アミノ酸残基を有する変異抗体を選択し、アミノ酸置換の免疫原性の可能性に関して、アミノ酸置換の位置と種類に基づいて変異抗体を順位付けする段階を含む。生殖系列データベース中に記載されている可変領域配列とほぼ同じアミノ酸配列を含む変異抗体又は他のヒト抗体と同等のアミノ酸配列を有する変異抗体に対して最も高い順位が与えられる。生殖系列配列又は別のヒト抗体の配列の何れかにおいて稀に遭遇されるアミノ酸置換を含有する変異抗体には、より低い順位が与えられる。生殖系列配列又は別のヒト抗体の配列中で遭遇されないアミノ酸置換を有する変異抗体には、最も低い順位が与えられる。上述されているように、CDR3中に配置された少なくとも1つの活性増強アミノ酸残基を含む変異抗体は、CDR2中に配置されたものより好ましく、CDR2中に配置されたものは、CDR1中に配置されたものより好ましい。重鎖可変領域のCDRは、軽鎖可変領域のCDRより好ましい。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)相補性決定領域(CDR)内の、1)好ましい選択的突然変異誘発位置、2)接触位置又は3)高頻度変異位置を順に変異のために選択することにより、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価すること;
e)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、段階a)からd)を場合によって反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された各変異を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。好ましくは、選択された一又は複数の抗体は、上記親抗体の少なくとも1つの望ましい特徴又は特性を喪失せずに又は保持しながら、改善された活性を有する。望ましい特徴又は特性は、本分野で認知された技術を用いて、当業者によって測定又は観察され得る。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を変異のために選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、段階a)からd)を場合によって反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を変異のために選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、段階a)からd)を場合によって反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された3つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群から選択される好ましい選択的突然変異誘発位置を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の第一の群を作製するために、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)単一の選択的突然変異誘発位置の変異が所定の目標活性又は部分的目標活性を有する抗体又はその抗原結合部分を与えるかどうかを決定するために、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記第一の群の活性を評価すること;
e)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された各変異を、段階的に、親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分が所定の目標活性又は部分的目標活性を有するかどうかを決定するために、組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること;
g)段階d)又はf)が所定の目標活性を有する抗体若しくはその抗原結合部分をもたらさず、又は部分活性を有するに過ぎない抗体をもたらした場合には、変異された抗体又はその抗原結合部分の第二の群を作製するために、H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A及びL96からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ変異させること、
h)H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A及びL96からなる群から選択される単一のアミノ酸残基の変異が所定の目標活性又は部分活性を有する抗体又はその抗原結合部分をもたらすかどうかを決定するために、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記第二の群の活性を評価すること;
i)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された段階g)の各変異を、段階的に、親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;
j)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分が所定の目標活性又は部分的目標活性を有するかどうかを決定するために、組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること;
k)段階h)又はj)が所定の目標活性を有する抗体若しくはその抗原結合部分をもたらさず、又は部分活性を有するに過ぎない抗体をもたらした場合には、変異された抗体又はその抗原結合部分の第三の群を作製するために、H33B、H52B及びL31Aからなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ変異させること、
l)H33B、H52B及びL31Aからなる群から選択される単一のアミノ酸残基の変異が所定の目標活性又は部分活性を有する抗体又はその抗原結合部分をもたらすかどうかを決定するために、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記第三の群の活性を評価すること;
m)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された段階k)の各変異を、段階的に、親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;
n)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分が所定の目標活性を有するかどうかを決定するために、組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価し、これにより、所定の目標活性を有する抗体又はその抗原結合部分を与えること、
を含む、所定の目標活性を達成するために、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価すること;
e)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、段階b)からd)を場合によって反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された各変異を親抗体又はその抗原結合部分中に組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の親和性を改善する方法を提供する。
a)組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び適切な発現系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴に関して(前記特性又は特徴は、前記抗体中に保持される必要がある特性又は特徴である。)、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴(該特性又は特徴は保持される必要がある特性又は特徴である。)に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
f)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、段階a)からe)を場合によって反復すること;
g)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された他の特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、本発明は、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴(該特性又は特徴は保持される必要がある特性又は特徴である。)に関して、親抗体又はその抗原結合部分に対して変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために相補性決定領域(CDR)内の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を選択することにより、選択された接触又は高頻度変異位置を特定すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴(該特性又は特徴は保持される必要がある特性又は特徴である。)に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
f)少なくとも1つの他の好ましい選択的突然変異誘発位置、接触又は高頻度変異位置に対して、段階a)からe)を場合によって反復すること;
g)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性及び少なくとも1つの保持された他の特徴を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
h)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、改善された活性及び少なくとも1つの保持された特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
最終的には、ある抗体−抗原結合対中の全てのCDR残基は、何らかの手段によって、活性増強アミノ酸残基として必要とされることが同定され、及び/又は抗原への結合のために、及び/又は抗体の他の望ましい特性若しくは特徴を保持するために直接又は間接に必要とされることが同定される。このようなCDR残基は、「好ましい選択的突然変異誘発位置」と称される。特別な状況では、抗体及び抗原の同時結晶化並びに分子モデル化などの他の手段によっても、好ましい選択的突然変異誘発位置を同定することができることに注意すべきである。
a)親抗体又はその抗体結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又は変異された抗体の群又はこれらの抗原結合部分を作製するために、前記選択された位置を、例えば少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又は変異された抗体の群又はこれらの抗原結合部分の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分に対して変異された抗体又は変異された抗体の群又はこれらの抗原結合部分を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96の位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;並びに
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された接触又は高頻度変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で前記パネルを発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94の位置でもない少なくとも1つの他の位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
g)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有することが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
h)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性及び他の特性又は特徴を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び保持された他の特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、他の特徴に影響を与えずに、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異すること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)少なくとも1つの他の特徴又は特性の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること;
e)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96の位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置に対して、段階b)からe)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有し及び少なくとも1つの他の特性又は特徴に影響を与えないことが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの保持された他の特性又は特徴を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性及び少なくとも1つの他の特性又は特徴の保持を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性又は特徴の変化に関して、親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の親和性を改善する方法を提供する。
a)ファージディスプレイ系における選択によって取得されたが、前記ファージディスプレイ系中での突然変異誘発によって、その活性をさらに改善することができない組換え親抗体又はその抗原結合部分を準備すること;
b)変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96以外の相補性決定領域(CDR)内のアミノ酸残基を選択すること;
c)変異された抗体又はその抗原結合部分の群を作製するために、前記選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基へ個別に変異させ、及び非ファージディスプレイ系中で発現させること;
d)親抗体又はその抗原結合部分との比較において、変異された抗体又はその抗原結合部分の前記群の活性及び少なくとも1つの他の特性又は特徴の保持を評価することにより、活性増強アミノ酸残基を同定すること;
e)b)の下で選択された位置でなく、並びにH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94及びL96の位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置に対して、段階b)からd)を反復すること;
f)組み合わせ抗体又はその抗原結合部分を形成するために、改善された活性を有し及び少なくとも1つの他の特性又は特徴に影響を与えないことが示された少なくとも2つの各活性増強アミノ酸残基を親抗体又はその抗原結合部分中で組み合わせること;並びに
g)親抗体又はその抗原結合部分に対して改善された活性及び少なくとも1つの他の保持された特徴又は特性を有する抗体又はその抗原結合部分が得られるまで、親抗体又はその抗原結合部分に対して2つの活性増強アミノ酸残基を有する組み合わせ抗体又はその抗原結合部分の活性及び少なくとも1つの特性又は特徴の保持を評価すること、
を含む、抗体又はその抗原結合部分の活性を改善する方法を提供する。
本発明の抗体又は抗体部分は、宿主細胞中での、免疫グロブリン軽鎖及び重鎖遺伝子の組換え発現によって調製することが可能である。抗体を組換え的に発現させるために、軽鎖及び重鎖が宿主細胞中で発現されるように、及び好ましくは、宿主細胞がその中で培養されている培地(抗体は、この培地から回収することが可能である)中に分泌されるように、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖をコードするDNA断片を担持する1つ又はそれ以上の組換え発現ベクターで、宿主細胞が形質移入される。抗体重鎖及び軽鎖遺伝子を取得し、これらの遺伝子を組換え発現ベクター中に組み込み、ベクターを宿主細胞中に導入するために、「Sambrook,Fritsch and Maniatis(eds),Molecular Cloning;A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y.,(1989), Ausubel et at(eds.)Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates,(1989)及びBossらによる米国特許第4,816,397号」に記載されているものなどの標準的な組換えDNA法が使用される。
a)配列番号31のアミノ酸を含む可変領域を有する抗体重鎖及び
b)配列番号32のアミノ酸配列を含む可変領域を有する抗体軽鎖をコードする組換え発現ベクターを提供する。
本発明の抗体及び抗体部分は、ヒト対象に投与するのに適した医薬組成物中に取り込ませることが可能である。典型的には、医薬組成物は、本発明の抗体又は抗体部分と及び医薬として許容される担体とを含む。本明細書において使用される「医薬として許容される担体」には、生理的に適合性がある、全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤が含まれる。医薬として許容される担体の例には、水、生理的食塩水、リン酸緩衝化された生理的食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの1つ又はそれ以上及びこれらの組み合わせが含まれる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マニトール、ソルビトールなどの多価アルコール又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。医薬として許容される担体は、抗体又は抗体部分の保存寿命又は有効性を増大する、湿潤剤又は乳化剤、防腐剤又は緩衝剤などの補助物質の微量をさらに含み得る。
hIL−12に結合することができるので、本発明の抗IL−12抗体又はその一部は、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)、ラジオイムノアッセイ(RIA)又は組織免疫組織化学など慣用のイムノアッセイを用いて、(例えば、血清又は血漿などの生物学的試料中で)hIL−12を検出するために使用することが可能である。本発明は、本発明の抗体又は抗体部分を生物試料と接触させること、及びhIL−12に結合された抗体(又は抗体部分)又は結合していない抗体(又は抗体部分)を検出することにより、生物試料中のhIL−12を検出することを含む生物試料中のhIL−12を検出する方法を提供する。抗体は、結合した又は結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接又は間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質及び放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン/ビオチン及びアビジン/ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例には、ルミノールが含まれる。適切な放射性材料の例には、125I、131I、35S又は3Hが含まれる。
インターロイキン−12は、関節リウマチなどの炎症性疾患において役割を果たしていると推測されている。関節リウマチ患者から得られた滑液中に誘導性IL−12p40メッセージが検出されており、関節リウマチを有する患者から得られた滑液中にIL−12が存在することが示されている(例えば、Morita et al,(1998)Arthritis and Rheumatism41:306−314参照)。関節リウマチ滑膜の下内層中に、IL−12陽性細胞が存在することが見出されている。本発明のヒト抗体及び抗体部分は、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、ライム関節炎、リウマチ性脊椎炎、骨関節炎及び通風性関節炎を治療するために使用することができる。典型的には、抗体又は抗体部分は全身的に投与されるが、ある種の疾患に関しては、抗体又は抗体部分の局所投与が有益であり得る。本発明の抗体又は抗体部分は、自己免疫疾患の治療において有用な1つ又はそれ以上のさらなる治療剤とともに投与することもできる。
インターロイキンー12は、炎症性腸疾患であるクローン病においても役割を果たしている。IFN−γ及びIL−12の増加した発現が、クローン病を有する患者の腸粘膜中で起こる(例えば、Fais et al,(1994)J Interferon Res.14:235−238;Parronchi et al,(1997)Amer.J.Pathol.150:823−832;Monteleone et al,(1997)Gastroenterology112:1169−1178;Berrebi et al,(1998)Amer.J.Pathol.152:667−672参照)。抗IL−12抗体は、大腸炎のマウスモデル(例えば、TNBS誘導性大腸炎IL−2ノックアウトマウス及び最近では、IL−10ノックアウトマウス)において、疾病を抑制することが示された。従って、本発明の抗体及び抗体部分は、炎症性腸疾患の治療において使用することができる。
インターロイキン−12は、多発性硬化症の中心的媒介物質であると推測されている。誘導性IL−12p40メッセージ又はIL−12自体の発現が、多発性硬化症を有する患者の病変中に示され得る(Windhagen et al,(1995)J Exp.Med.182:1985−1996, Drulovic et al,(1997)J.Neurol.Sci.147:145−150)。多発性硬化症を有する慢性の進行性患者は、IL−12の上昇した循環濃度を有する。多発性硬化症を有する患者から得たT細胞及び抗原提示細胞(APC)を用いた研究によって、Th1型免疫応答をもたらす進行性多発性硬化症の基礎として、自己永続的な一連の免疫相互作用が明らかとなった。T細胞からのIFN−γの増加した分泌は、APCによる増加したIL−12産生をもたらし、増加したIL−12産生は、Th1型免疫活性化及び疾病の慢性状態に至るサイクルを永続化した(Balashov et al,(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.94:599−603)。多発性硬化症におけるIL−12の役割は、多発性硬化症のマウス及びラット実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)モデルを用いて調べられてきた。マウスでの多発性硬化症の再発性弛張性寛解型EAEモデルにおいて、抗IL−12mAbでの前処理は麻痺を遅延させ、臨床スコアを低下させた。麻痺のピーク時又はその後の寛解期の間における抗IL−12mAbでの処理は、臨床スコアを低下させた。従って、本発明の抗体又はその抗原結合部分は、ヒト中の多発性硬化症を伴う症候を緩和させる役割を果たし得る。
インターロイキン−12は、インシュリン依存性糖尿病(IDDM)の重要な媒介物質として推測されてきた。IL−12の投与によって、NODマウス中にIDDMが誘導され、抗IL−12抗体はIDDMの養子免疫伝達モデルにおいて保護的であった。初期発症IDDM患者は、幾つかの残存する膵島細胞機能が維持されている所謂「ハネムーン期間」をしばしば経験する。これらの残存する膵島細胞はインシュリンを産生し、投与されたインシュリンより良好に血中グルコース濃度を制御する。これらの初期発症患者の抗IL−12抗体での処理は、膵島細胞のさらなる破壊を抑制し、これにより、インシュリンの体内源を維持し得る。
インターロイキン−12は、乾癬における中心的媒介物質として推測されている。乾癬は、TH1型サイトカイン発現プロファイルを伴う急性及び慢性の皮膚病変を伴う。(Hamid et al.(1996)J.Allergy Clin.Immunol.1:225−231;Turka et al.(1995)Mol.Med.1:690−699)。罹病したヒトの皮膚試料中に、IL−12p35及びp40mRNAが検出された。従って、本発明の抗体又はその抗原結合部分は、乾癬などの慢性的皮膚疾患を緩和させる役割を果たし得る。
A.IL−12結合抗体のスクリーニング
ヒト扁桃(scFv1と称する)、扁桃及び末梢血リンパ球(PBL)(scFv2と称する)及び骨髄由来リンパ球(BMDLと称する)由来のmRNAから得られたヒトVL及びVHcDNAを用いて調製された3つの別個のscFvファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることによって、hIL−12に対する抗体を単離した。ライブラリーの構築及び選択法は、「Vaughan et al.(1996)Nature Biotech.14:309−314」に記載されている抗原ヒトIL−12p70サブユニット、ヒトIL−12p40サブユニット、キメラIL−12(マウスp40/ヒトp35)、マウスIL−12、ビオチン化されたヒトIL−12及びビオチン化されたキメラIL−12を用いて、ライブラリーをスクリーニングした。標準的な操作を用いて、イムノチューブ上に抗原を被覆することによって、IL−12特異的抗体を選択した(Marks et al.,(1991)J.Mol.Biol.222:581−597)。IL−12又はビオチン化されたIL−12を用いてscFvライブラリー2をスクリーニングし、多数のIL−12特異的結合物質を生成した。5つの異なるクローンタイプを選択し、BstN1酵素消化パターンによって決定し、DNA配列決定によって確認した。主要なクローンタイプは、VHDP58/VLDPL11、VHDP77/VLDPK31、VHDP47/VL及びVHDP77/VLDPK31であり、これら全てがIL−12のp40サブユニットを認識した。
B.IL−12に対して特異的な抗体系列(Joe9)の親和性成熟
IL−12受容体結合アッセイ(RBAと称される)において、IL−12の受容体へのIL−12の結合を阻害する能力に関して、及び実施例3に記載されているPHA刺激されたヒト芽球細胞(PHAアッセイ)のIL−12誘導性増殖を阻害する能力に関して、クローンを検査した。クローンJoe9がRBA及びPHAアッセイの両方で最も低いIC50を有しており、両アッセイにおいて、1×10−6MのIC50値を有していた。さらに、Joe9の重鎖可変領域(VH)は、VBASEデータベースから同定された最も近い生殖系列配列COS−3と比べて変化の数が最も少なかった。表1(添付書類A参照)は、生殖系列配列のVH3ファミリー(COS−3がそのメンバーである)及び生殖系列配列のVλ1ファミリーのメンバーを示している。従って、Joe9を親和性成熟のために選択した。Joe9野生型(Joe9wt)抗体のVH及びVLのアミノ酸配列が、図1Aから1Dに示されている。
最も優れた結合特性を示した変異体軽鎖及び重鎖クローンを、scFvsの組み合わせ及び組み立てのために使用した。上述されているように、PCR重複伸長並びに変異されたVH及びVLセグメントの貫通(pull−through)によって、改善された効力特性を有する変異体クローンを組み合わせた。軽鎖変異体(78−34、78−35及び79−1)との重鎖変異体(70−2、70−13及び70−1)の組み合わせから、表2に示されているクローン101−14から26−1(添付書類A参照)を作製した。これらのクローンに対して中和アッセイから得られたkoff速度及び/又はIC50値は、表2に示されている。
クローン101−11のさらなる親和性成熟は、スパイクが導入されたオリゴヌクレオチドプライマーを使用する、101−11の重鎖及び軽鎖CDR3の両方のPCR突然変異誘発の反復サイクルからなった。ビオチン化されたIL−12(bio−IL−12)の減少する濃度を用いて、クローンを選択した。BIAcore結合分析及びRBA、PHA中和アッセイによって、変異されたクローンの結合特性を評価した。クローン136−9から170−25に対するkoff速度及び/又はIC50値が、表2に示されている(添付書類A参照)。クローン103−14は、受容体結合アッセイ及びPHA芽球アッセイの両方において、改善されたIC50値を示した。クローン103−14も低いkoff速度を示し、従って、さらなる親和性成熟のために選択された。
以下に概説されている3つの異なるライブラリーを用いて、クローン103−14(QSYDRGFTGSMV(配列番号590))の軽鎖CDR3を3つのセグメント中へ系統的に無作為化した(Xは、配列NNSの無作為化されたコドンによってコードされ、Nはあらゆるヌクレオチドであり、Sはデオキシシトシン又はデオキシグアニジンの何れかである。)。
典型的には、改善された親和性を有する組換え抗体の選択は、ファージディスプレイ法を用いて実施することができる。これは、異なる配列の一本鎖抗体を含有する大規模なライブラリーを作製するために、CDR残基の組み合わせを無作為に変異させることによって達成される。典型的には、改善された親和性を有する抗体は、抗体抗原反応中で平衡状態に達する能力に基づいて選択される。しかしながら、Y61scFvをファージ表面上に発現し、IL−12とともに温置すると、系を正常な抗体抗原平衡状態へ到達させることができる選択条件を見出すことはできなかった。精製されたY61scFvは正常な解離速度論を示すので、おそらくは、非特異的相互作用のために、scFv−ファージはIL−12に結合し続けた。Y61に対するファージディスプレイ親和性成熟(すなわち、複数のCDR残基の突然変異誘発によるライブラリーの作製及び選択)という通常の方法を使用することができなかったので、各CDR位置が変異を受ける新たな戦略が開発された。
本発明のヒト抗ヒトIL−12抗体の機能的活性を調べるために、抗体がIL−12活性を阻害する能力を測定する幾つかのアッセイにおいて抗体を使用した。
「Current Protocols in Immunology,Unit 7.1」に記載されているように、1500rpmで45分間のFicoll−Hypaque勾配遠心によって、健康なドナーから集められたleukopacからヒト末梢血単核細胞を単離した。水性血液溶液及びリンパ球分離溶媒の界面のPBMCを集め、Ficoll−Paque粒子を除去するために、1500rpmで15分間の遠心によってリン酸緩衝化生理的食塩水(PBS)で3回洗浄した。
抗IL−12抗体がPHA芽球上のIL−12への放射性標識されたIL−12の結合を阻害する能力は、以下のようにして分析した。結合緩衝液(RPMI1640、5%FBS、25mMHepespH7.4)中、37℃で1時間、50から100pM125I−hIL−12(ヨウ素化されたhIL−12は、20から40mCi/mgの比活性になるように、Bolton−Hunter標識法を用いて、NEN−Dupontから調製した。)とともに、抗IL−12抗体の様々な濃度を予め温置した。上述のように、PHA芽球細胞を単離し、1回洗浄し、2×107細胞/mLの細胞密度になるように、結合緩衝液中に再懸濁した。抗体125I−hIL−12混合物にPHA芽球(1×106細胞)を添加し、室温で2時間温置した。室温で30秒間のアッセイ混合物の遠心、液体の吸引及び0.1mL結合緩衝液での洗浄、その後の10,000×gで4分間の4℃での遠心によって、細胞に結合された放射能を遊離の125I−hIL−12から分離した。γカウンターを用いて、細胞に結合された放射能に関して細胞沈降物を調べた。抗体の不存在下で総結合を測定し、25nM非標識IL−12をアッセイ中に含めることによって非特異的結合を測定した。温置は、二つ組みで行った。
PHA芽球増殖(その増殖は、IL−12によって刺激される。)を阻害する能力に関して、抗IL−12抗体を評価した。マイクロタイタープレート(U底、96ウェル、Costar,Cambridge,MA)中で、RPMI完全培地100mL中の230pg/mLhIL−12とともに、37℃、5%CO2で、抗IL−12抗体の系列希釈を予め1時間温置した。上述のように、PHA芽球細胞を単離し、1回洗浄し、3×105細胞/mLの細胞密度になるように、RPMI完全培地中に再懸濁した。抗体/hIL−12混合物に、PHA芽球(100mL、3×104細胞)を添加し、37℃、5%CO2で3日間温置し、0.5mCi/ウェル(3H)チミジン(Amersham,Arlington Heights,IL)で4から6時間標識した。細胞採取装置(Tomtec,Orange,CT)を用いて、ガラスファイバーフィルター上に培養内容物を採取し、液体シンチレーションカウンティングによって、細胞DNA中への(3H)チミジンの取り込みを測定した。全ての試料は、二つ組みでアッセイを行った。
抗IL−12抗体がPHA芽球によるIFNγの産生(その産生はIL−12によって刺激される。)を阻害する能力を、以下のようにして分析した。マイクロタイタープレート(U底、96ウェル、Costar)中で、RPMI完全培地100mL中の200から400pg/mLhIL−12とともに、37℃、5%CO2で、抗IL−12抗体の様々な濃度を予め1時間温置した。上述のように、PHA芽球細胞を単離し、1回洗浄し、1×107細胞/mLの細胞密度になるように、RPMI完全培地中に再懸濁した。
他の種から得られたIL−12とのヒト抗hIL−12抗体の交叉反応性を調べるために、非ヒトIL−12を以下のように産生した。カニクイザル、ヒヒ及びイヌPBMCに対してlymphoprep(Nycomed,Oslo,Norway)を、イヌPBMCに対してAccu−paque(Accurate Chemical & Sci.Corp.,Westbury,NY)を、ラットPBMCに対してLympholyte−rat(Accurate Chemical & Sci.Corp.,Westbury,NY)を使用して、上述のような密度勾配遠心によって、ヘパリン処理された新鮮な血液からPBMCを分離した。
マウスT細胞クローン2D6は、マウスIL−2、IL−4、IL−7及びIL−12に応答して増殖する(Maruo et al.,(1997)J.Leukocyte Biol.61,346−352)。ラットIL−12を含有するラットPBMC上清に応答して、有意な増殖も検出された。細胞は、イヌ、カニクイザル、ヒヒ又はヒトIL−12に応答しない。50mMベータ−メルカプトエタノール(βME)及び30ng/mLマウスIL−12が補充されたRPMI完全培地中で、マウス2D6細胞を増殖させた。アッセイの1日前に、マウスIL−12を洗浄除去し、βMEを加えたRPMI完全培地中において、細胞を一晩温置した。
幾つかの非ヒト種から単離されたPBMCを用いて、非ヒトIL−12とのJ695の種交叉反応性を分析した。マウス及び/又はヒトIL−12に対するウサギ及び/又はヒツジポリクローナル抗体を用いて誘導された非ヒトPBMC誘導性応答を遮断することによって、マウス2D6細胞増殖アッセイ、ヒトPHA芽球増殖アッセイ及びインターフェロンγ誘導アッセイなどの上記に記載されている幾つかのバイオアッセイを用いて、ラット、イヌ、カニクイザル及びヒヒPBMC上清中の非ヒトIL−12活性の存在を確認した。次いで、応答の50%の阻害が観察されるJ695抗体濃度を測定することによって、同じバイオアッセイにおいて、PBMC上清中の非ヒトIL−12又は精製されたマウス及びアカゲザルIL−12との、ヒト抗IL−12抗体Y61及びJ695の交叉反応性を評価した。種の交叉反応性の結果は、表5に要約されている。結果は、Y61及びJ695がそれぞれ、サル(例えば、Y61に関してはカニクイザル及びアカゲザルIL−12、及びJ695に関してはカニクイザル、アカゲザル及びヒヒ)から得たIL−12を認識できること、並びにJ695は、イヌIL−12に対して約35倍活性が少ないこと、Y61及びJ695は何れも、マウス又はラットIL−12と交叉反応しないことを示している。
固定化されたヒトIL−12への可溶性J695の結合を妨害する能力に関して、ヒトサイトカインの群が検査される競合ELISAにおいて、J695の特異性を検査した。ヒトサイトカインの群には、IL−1α及びIL−lβ(Genzyme、Boston、MA)、IL−2(Endogen)、IL−4、IL−10、IL−17、IFN−γ並びにTGF−β1(R&D、Minneapolis,MN)IL−8(Calbiochem)、PDGF、IGF−I及びIGF−II(Boehringer Mannheim Corp.,Indianapolis,IN)、TNFα及びリンホトキシン、IL−6、可溶性IL−6受容体、IL−11、IL−12p70、IL−12p40、M−CSF、及びLIFが含まれた。EBI−3(Bリンパ球中でエプシュタイン−バールウイルス感染によって誘導されるIL−12p40関連タンパク質(Devergne et al.,(1996)J.Virol.70,1143−1153))を、ヒトIgG−Fcキメラ(EBI−3/Fc)として発現させた。一本鎖サケ精子DNA(Sigma)も検査した。
p35サブユニットが新規p19分子によって置換されている別のIL−12ヘテロ二量体が記載されている。p19は、IL−6/IL−12ファミリーメンバーを探索する3D相同性を用いて同定され、活性化された樹状細胞によって合成される。P19はp40と結合して、p19/p40二量体(これは、IL−12様活性を有する。)を形成するが、IFNγ誘導において、p35/p40ヘテロ二量体ほど強力ではない。p40単独を認識するが、好ましくは、p70分子に関しても認識する抗体(例えば、J695及びY61、実施例3H参照)は、p35/p40分子及びp19/p40分子の両方を中和すると予測される。
カニクイザルでの末梢血液学に対するヒトIL−12の効果を研究するためにBree他によって使用されたモデルから改変されたモデルにおいて、IL−12によって誘導された応答に対するIL−12抗体のインビボでの効果を調べた(Bree et al,(1994)Biochem Biophys Res.Comm.204:1150−1157)。以前の研究では、5日間にわたる、1μg/kg/日のヒトIL−12の投与は、24時間後に、白血球数(WBC)の減少、特にリンパ球及び単球亜群の減少をもたらした。血小板数の減少が、72時間の時点で観察された。血漿ネオプテリン(IFN−γに応答した単球活性化のマーカー)の濃度は24時間の時点で上昇し始め、72時間の時点で最高であった。
BIAcore系(Biacore AB,Uppsala,Sweden)を用いて、表面プラズモン共鳴(SPR)によって、捕捉されたリガンド(バイオマトリックス上に捕捉されたヒト抗rhIL−12抗体J695)と分析物(溶液中のrhIL12)間でのリアルタイム結合相互作用を測定した。システムは、デキストランバイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出するために、SPRの光学的特性を使用する。タンパク質は、既知濃度でデキストランマトリックスに共有結合される。デキストランマトリックスを通じて抗体を注入し、注入された抗体と固定化されたリガンド間の特異的結合は、増加したマトリックスタンパク質濃度をもたらし、その結果、SPRシグナルの変化をもたらす。これらのSPRシグナルの変化は、共鳴単位(RU)として記録された、センサーグラムのy軸に沿って、時間に関して表示される。
BIAcoreプラズモン共鳴技術を用いて、J695抗体とヒトIL−12間の分子速度論的相互作用を定量的に分析し、見かけの速度論的速度定数を導出した。
マウスIL−12に対して特異的なモノクローナル抗体を用いた炎症及び自己免疫のマウスモデルにおけるIL−12治療研究の、ヒト疾病における類似のアプローチへの妥当性を評価するために、C17.15(ラット抗マウスIL−12モノクローナル抗体)のマウスIL−12との相互作用を調べた。C17.15−マウスIL−12結合相互作用の速度論を評価しながら、PHA芽球増殖アッセイ中でC17.15がマウスIL−12活性を中和する能力及び細胞表面受容体へのマウスIL−12結合を遮断する能力を評価した
ヒトPHA芽球増殖アッセイ(実施例3参照)において、C17.15又はラットIgG2a(対照抗体)の系列希釈を、230pg/mLマウスIL−12とともに、37℃で1時間予め温置した。PHAによって刺激された芽球細胞を抗体−IL−12混合物へ添加し、37℃で3日間温置した。続いて、1μCi/ウェル[3H]−チミジンで、細胞を6時間標識した。培養物を採取し、[3H]−チミジンの取り込みを測定した。添加されたマウスIL−12の不存在下で、バックグラウンド非特異的増殖を測定した。全ての試料は、二つ組みでアッセイを行った。同じ条件下で、組換えヒトIL−12に対して、J695に対して観察された5.8×10−12のIC50値と比べて、このアッセイにおける組換えマウスIL−12に対するC17.15のIC50(M)は1.4×10−11であることが明らかとなった(表11参照)。
A.αIL−12抗体C17.15によるマウス中のコラーゲン誘導性関節炎の抑制
IL−12濃度と関節リウマチ(RA)との相関が示されている。例えば、健康な対照と比べて、RA患者の滑液中にIL−12p70の上昇した濃度が検出されている(Morita et al(1998)Arthritis and Rheumatism.41:306−314)。従って、ラット抗マウスIL−12抗体であるC17.15が、マウス中のコラーゲン誘導性関節炎を抑制する能力を評価した。
IL−12は、腸炎の発達/病変においても役割を果たすことが示されている。例えば、抗IL−12抗体は、腸炎のマウスモデル(例えば、TNBSによって誘導された腸炎IL−2ノックアウトマウス)中で疾病を抑制することが示されている(Simpson et al.(1998)J.Exp.Med.187(8):1225−34)。同様に、抗IL−2抗体は、IL−10ノックアウトマウス中での腸炎の形成を抑制することが示されている。ラット抗マウスIL−12抗体であるC17.15がマウス中のTNBS腸炎を抑制する能力は、2つの研究で評価された(Davidson et al.(1998)J.Immunol.161(6):3143−9)。
IL−12は、多発性硬化症(MS)の発病に役割を果たしていると一般に考えられている。誘導性IL−12p40メッセージは、MS患者の急性プラーク中に発現されるが、炎症性脳梗塞病変中には発現されないことが示されている(Windhagen,A.et al.(1995)J.Exp.Med.182:1985−1996)。MS患者由来のT細胞は、制御されていないCD40L発現を通じて、抗原提示細胞からのIL−12産生を刺激する(但し、対照T細胞は刺激しない)(Balashov,K.E.et al.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:599− 603)。MS患者は増強されたIFN−γ分泌を有し、増強されたIFN−γ分泌は、α−IL−12抗体によって、インビトロで遮断され得る(Balashov,K.E.et al.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:599−603)。MS患者中では、血清IL−12の上昇した濃度が検出されるが、他の神経疾患では検出されない(Nicoletti,F.et al.(1996)J.Neuroimmunol.70:87−90)。増加したIL−12産生は、MS患者中の疾病活性と相関することが示されている(Cormabella,M.et al.(1998)J.Clin.Invest.102:671−678)。多発性硬化症、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)のマウスモデルの発病におけるIL−12の役割が研究されてきた(Leonard,J.P.et al.(1995)J.Exp.Med.181:281−386;Banerjee,S.et al.(1998)Arthritis Rheum.(1998)41:S33;and Segal,B.M.et al.(1998)J.Exp.Med.187:537−546)。このモデルにおけるこの疾患は、TH1サブセットのT細胞によって誘導されることが知られている。従って、急性EAEの発症を抑制するα−IL−12抗体の能力を評価した。
二重盲検クロスオーバー試験において、64人の健康な男性ヒト被験者に、J695又はプラセボの漸増用量を投与した。投薬前及び投薬の0.25時間後における補体断片C3aの測定は、補体系の活性化を示さなかった。同時感染の症候が観察された被験者中において、CRP及びフィブリノーゲン濃度のみが増加していた。
J695の組換え発現のために、リン酸カルシウム媒介性形質移入によって、dhfr−CHO細胞中に、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを導入する(Urlaub,G.and Chasin,L.A.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216−4220)。組換え発現ベクター内で、遺伝子の転写の高い濃度を誘導するために、抗体の重鎖及び軽鎖遺伝子はそれぞれ、(CMVエンハンサー/AdMLPプロモーター制御要素又はSV40エンハンサー/AdMLPプロモーター制御要素などの、SV40、CMV、アデノウイルスなどに由来する)エンハンサー/プロモーター制御要素へ作用可能に連結されている。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択/増幅を用いてベクターで形質移入されたCHO細胞の選択を可能にするDHFR遺伝子も担持する。
J695及び可溶性組換えヒトIL12に対する他の4つのモノクローナル抗体のエピトープ特異性パターンのマップを作成するために、表面プラズモン共鳴技術に基づくリアルタイム生物特異的相互作用分析(BIA)を使用した。この技術は、抗体又は抗原の何れかの標識を必要としない。別個の及び異なるエピトープに対して誘導された抗体は抗原へ同時に結合するのに対して、密接に関連したエピトープに対して誘導された抗体は多義の結合を妨害する。さらに、第二の抗体が結合できない場合には、2つの抗体によって規定されるエピトープは同一であり若しくは重複し得、又は第一の抗体の結合が標的分子中の立体構造の変化によって引き起こされたアロステリック阻害を通じた第二の抗体の結合を抑制し得る。
インターロイキン(例えば、IL−12又はIL−23)のp40サブユニットに結合し、その立体構造を変化させることができる抗体が、リアルタイム生物特異的相互作用分析(BIA)を使用することによって同定される。実験のプロトコールは、実質的に、実施例11に上述されているとおりである。
当業者は、定型的な実験操作のみを用いて、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識し、又は確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されるものとする。
Claims (20)
- IL−12のp40サブユニットに結合することができ、及びIL−12の前記p40サブユニットの立体構造を変化させることができる単離された抗体又はその抗原結合部分。
- 表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、1×10−10M若しくはそれ以下のKdで、又は1×10−3s−1若しくはそれ以下のkoff速度定数で、ヒトIL−12のp40サブユニットから解離する、請求項1に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
- 中和抗体である、請求項1に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
- インビトロPHAアッセイにおいて、1×10−9M若しくはそれ以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害し、又は1×10−10M若しくはそれ以下のIC50でヒトIFNγ産生を阻害する、請求項3に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
- ヒト抗体である、請求項1に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
- 請求項1に記載の抗体又はその抗原結合部分と及び医薬として許容される担体とを含む医薬組成物。
- IL−12のp40サブユニットが検出されるように、IL−12のp40サブユニットを請求項1に記載の抗体又はその抗原結合部分と接触させることと含む、インターロイキンのp40サブユニットを検出する方法。
- インターロイキンのp40サブユニットが検出されるように、インターロイキンのp40サブユニットを請求項1に記載の抗体又はその抗原結合部分と接触させることとを含む、インターロイキンのp40サブユニットを検出する方法。
- インターロイキンのp40サブユニットがインビトロで検出される、請求項7に記載の方法。
- インターロイキンのp40サブユニットが診断用の生物試料中において検出される、請求項7に記載の方法。
- p40サブユニットを含むインターロイキンの活性が阻害されるように、請求項1に記載の抗体又はその抗原結合部分と前記インターロイキンを接触させることを含む、前記活性を阻害する方法。
- ヒト対象中のp40サブユニットを含むインターロイキンの活性が阻害されるように、前記活性が有害である疾患に罹患しているヒト対象に請求項1に記載の抗体又はその抗原結合部分を投与することを含む、前記活性が有害である疾患に罹患しているヒト対象中のp40サブユニットを含むインターロイキンの活性を阻害する方法。
- 前記インターロイキンがIL−12である、請求項11に記載の方法。
- 前記インターロイキンがp40サブユニット及びp19サブユニットを含む、請求項11に記載の方法。
- 前記インターロイキンがIL−23である、請求項11に記載の方法。
- 疾患が、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症(dermatitisscleroderma)、甲状腺炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、結節性多発動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的脈管炎、慢性活動性肝炎、シェーグレン症候群、ぶどう膜炎、敗血症、敗血性ショック、敗血症症候群、成人呼吸促迫症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、重症筋無力症、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、線維性肺疾患、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全及び心筋梗塞からなる群から選択される、請求項12に記載の方法。
- 疾患が乾癬である、請求項12に記載の方法。
- 疾患が関節リウマチである、請求項12に記載の方法。
- IL−12のp40サブユニットの立体構造を変化させるのに有効な量の、前記サブユニットに結合することができ及び前記サブユニットの立体構造を変変化させることができる抗体又はその抗原結合断片を、前記サブユニットと接触させ、これにより、前記サブユニットの立体構造を変化させることを含む、IL−12のp40サブユニットの立体構造を変化させる方法。
- p40サブユニットを含むインターロイキンの立体構造を変化させるのに有効な量の、IL−12のp40サブユニットに結合することができ及び前記インターロイキンの立体構造を変化させることができる抗体又はその抗原結合断片を、前記インターロイキンと接触させ、これにより、前記インターロイキンの活性を阻害することを含む、p40サブユニットを含むインターロイキンの活性を阻害する方法。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2017221200A (ja) * | 2011-05-27 | 2017-12-21 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 二重標的化 |
Families Citing this family (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6706264B1 (en) * | 1994-03-14 | 2004-03-16 | Genetics Institute, Llc | Use of IL-12 antagonists in the treatment of conditions promoted by an increase in levels of IFN-y |
US6914128B1 (en) | 1999-03-25 | 2005-07-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing |
MY161866A (en) | 2006-09-13 | 2017-05-15 | Abbvie Inc | Cell culture improvements |
US8911964B2 (en) | 2006-09-13 | 2014-12-16 | Abbvie Inc. | Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody |
CN104524567A (zh) * | 2007-01-16 | 2015-04-22 | 阿布维公司 | 用于治疗银屑病的方法 |
MX2009010361A (es) | 2007-03-29 | 2009-10-16 | Abbott Lab | Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos. |
TW201513883A (zh) * | 2008-03-18 | 2015-04-16 | Abbvie Inc | 治療牛皮癬的方法 |
US20100172862A1 (en) * | 2008-11-28 | 2010-07-08 | Abbott Laboratories | Stable antibody compositions and methods of stabilizing same |
WO2011032119A1 (en) | 2009-09-14 | 2011-03-17 | The Regents Of The University Of Colorado | Modulation of yeast-based immunotherapy products and responses |
KR20140048229A (ko) * | 2009-09-14 | 2014-04-23 | 애브비 인코포레이티드 | 건선을 치료하는 방법 |
JO3244B1 (ar) | 2009-10-26 | 2018-03-08 | Amgen Inc | بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية |
US20130302343A1 (en) * | 2011-01-04 | 2013-11-14 | Charité Universitätsmedizin Berlin | Modulators of il-12 and/or il-23 for the prevention or treatment of alzheimer's disease |
JP2014506132A (ja) * | 2011-01-07 | 2014-03-13 | アッヴィ・インコーポレイテッド | 抗il−12/il−23抗体およびその使用 |
WO2012149197A2 (en) | 2011-04-27 | 2012-11-01 | Abbott Laboratories | Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins |
US9573996B2 (en) | 2011-12-16 | 2017-02-21 | Synthon Biopharmaceuticals B.V. | Monoclonal antibodies to human proinflammatory cytokines and methods for treating inflammatory diseases |
US9181572B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Methods to modulate lysine variant distribution |
US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
US9150645B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-10-06 | Abbvie, Inc. | Cell culture methods to reduce acidic species |
WO2013176754A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Abbvie Inc. | Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography |
US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
US9206390B2 (en) | 2012-09-02 | 2015-12-08 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
WO2014143205A1 (en) | 2013-03-12 | 2014-09-18 | Abbvie Inc. | Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same |
US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
WO2014151878A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides |
WO2014159579A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Abbvie Inc. | MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE |
EP3052640A2 (en) | 2013-10-04 | 2016-08-10 | AbbVie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
US8946395B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-02-03 | Abbvie Inc. | Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography |
WO2015073884A2 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
CN105980556B (zh) | 2013-12-26 | 2020-10-09 | 田边三菱制药株式会社 | 人抗il-33中和单克隆抗体 |
US11047859B2 (en) * | 2014-06-24 | 2021-06-29 | Cytiva Sweden Ab | Normalization of mass transport properties on optical sensor surfaces |
EP3677281A4 (en) | 2017-08-31 | 2021-05-12 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation | THERAPEUTIC AGENT CONTAINING AN IL-33 ANTAGONIST TO TREAT ENDOMETRIOSIS |
CN116396374A (zh) * | 2023-02-23 | 2023-07-07 | 重庆大学 | Il-12抗体和其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001527386A (ja) * | 1996-12-02 | 2001-12-25 | ジェンファーム インターナショナル | 異種抗体を産生し得るトランスジェニック非ヒト動物 |
JP2002542770A (ja) * | 1999-03-25 | 2002-12-17 | クノール・ゲー・エム・ベー・ハー | ヒトil−12に結合するヒト抗体およびその産生法 |
WO2005062967A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Tanox, Inc. | Novel anti-il 13 antibodies and uses thereof |
WO2006069036A2 (en) * | 2004-12-21 | 2006-06-29 | Centocor, Inc. | Anti-il-12 antibodies, epitopes, compositions, methods and uses |
JP2006522830A (ja) * | 2003-04-11 | 2006-10-05 | メディミューン,インコーポレーテッド | 組換えil−9抗体およびその使用 |
Family Cites Families (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8308235D0 (en) * | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US5811523A (en) * | 1988-11-10 | 1998-09-22 | Trinchieri; Giorgio | Antibodies to natural killer stimulatory factor |
US5530101A (en) * | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
KR0185192B1 (ko) * | 1989-10-05 | 1999-04-01 | 제임스 더블유. 데이비 | 신규의 유전자 및 폴리펩티드의 무세포 합성 및 분리 |
US5780597A (en) * | 1989-12-22 | 1998-07-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Monoclonal antibodies to cytotoxic lymphocyte maturation factor |
US6713610B1 (en) * | 1990-01-12 | 2004-03-30 | Raju Kucherlapati | Human antibodies derived from immunized xenomice |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
CA2109602C (en) | 1990-07-10 | 2002-10-01 | Gregory P. Winter | Methods for producing members of specific binding pairs |
EP0564531B1 (en) | 1990-12-03 | 1998-03-25 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins with altered binding properties |
WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
GB9122820D0 (en) * | 1991-10-28 | 1991-12-11 | Wellcome Found | Stabilised antibodies |
US5652138A (en) * | 1992-09-30 | 1997-07-29 | The Scripps Research Institute | Human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus |
CA2125763C (en) * | 1993-07-02 | 2007-08-28 | Maurice Kent Gately | P40 homodimer of interleukin-12 |
EP0638644A1 (en) | 1993-07-19 | 1995-02-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Receptors of interleukin-12 and antibodies |
EP0659766A1 (en) | 1993-11-23 | 1995-06-28 | Schering-Plough | Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies |
ZA95960B (en) | 1994-03-14 | 1995-10-10 | Genetics Inst | Use of interleukin-12 antagonists in the treatment of autoimmune diseases |
US5910486A (en) * | 1994-09-06 | 1999-06-08 | Uab Research Foundation | Methods for modulating protein function in cells using, intracellular antibody homologues |
US6685940B2 (en) * | 1995-07-27 | 2004-02-03 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
US5853697A (en) * | 1995-10-25 | 1998-12-29 | The United States Of America, As Represented By The Department Of Health & Human Services | Methods of treating established colitis using antibodies against IL-12 |
US6297395B1 (en) * | 1995-11-10 | 2001-10-02 | The Secretary Of State For Defence In Her Brittanic Majesty's Government Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern Ireland | Calixarenes and their use for sequestration of metals |
US6090382A (en) * | 1996-02-09 | 2000-07-18 | Basf Aktiengesellschaft | Human antibodies that bind human TNFα |
AU7257696A (en) | 1996-10-11 | 1998-05-11 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Methods for enhancing oral tolerance and treating autoimmune disease using inhibitors of interleukin-12 |
ATE256476T1 (de) | 1996-11-15 | 2004-01-15 | Kennedy Inst Of Rheumatology | Unterdrückung von tnfalpha und il-12 in der therapie |
ES2301183T3 (es) * | 1996-12-03 | 2008-06-16 | Amgen Fremont Inc. | Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr. |
BR9810409A (pt) | 1997-03-18 | 2000-08-22 | Basf Ag | Métodos e composições para a modulação de responsividade a corticosteróides |
EP0969867B1 (en) | 1997-10-31 | 2004-09-01 | Wyeth | Use of anti-il-12 antibodies in transplantation rejection |
TR200002145T2 (tr) | 1998-01-23 | 2000-11-21 | F.Hoffmann-La Roche Ag | İnsan IL-12'ye karşı antikorlar |
US20020161199A1 (en) * | 1998-04-08 | 2002-10-31 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
EP0953639A1 (en) | 1998-04-30 | 1999-11-03 | Boehringer Ingelheim International GmbH | FAPalpha-specific antibody with improved producibility |
AU1843200A (en) * | 1998-12-09 | 2000-06-26 | Protein Design Labs, Inc. | Animal model for psoriasis for the prevention and treatment of psoriasis in humans |
US6914128B1 (en) * | 1999-03-25 | 2005-07-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing |
US6902734B2 (en) * | 2000-08-07 | 2005-06-07 | Centocor, Inc. | Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof |
WO2002072636A2 (en) | 2000-12-28 | 2002-09-19 | Altus Biologics Inc. | Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them |
US20030157105A1 (en) * | 2001-05-30 | 2003-08-21 | Carton Jill M. | Anti-p40 immunglobulin derived proteins, compositions, methods and uses |
EP1391209A4 (en) * | 2001-05-30 | 2009-12-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | PROTEIN PREPARATION |
WO2004007520A2 (en) * | 2002-07-12 | 2004-01-22 | Medarex, Inc. | Methods and compositions for preventing oxidative degradation of proteins |
US7608260B2 (en) * | 2003-01-06 | 2009-10-27 | Medimmune, Llc | Stabilized immunoglobulins |
ES2562912T5 (es) * | 2003-10-01 | 2020-02-18 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Procedimiento de estabilización de un anticuerpo y preparación de anticuerpo de tipo disolución estabilizada |
US20050159364A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-07-21 | Cooper Garth J. | Copper antagonist compounds |
RU2390353C2 (ru) * | 2004-02-12 | 2010-05-27 | Мерк Патент Гмбх | Высококонцентрированные жидкие композиции анти-egfr антител |
AR049390A1 (es) | 2004-06-09 | 2006-07-26 | Wyeth Corp | Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos |
MX2007000891A (es) | 2004-07-23 | 2007-04-18 | Genentech Inc | Cristalizacion de anticuerpos o fragmentos de ellos. |
JP2009501006A (ja) * | 2005-06-30 | 2009-01-15 | セントカー・インコーポレーテツド | 抗il−23抗体、組成物、方法および用途 |
US20080071063A1 (en) * | 2006-02-03 | 2008-03-20 | Medimmune, Inc. | Protein Formulations |
-
2006
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2012
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2013
- 2013-10-29 ZA ZA2013/08087A patent/ZA201308087B/en unknown
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001527386A (ja) * | 1996-12-02 | 2001-12-25 | ジェンファーム インターナショナル | 異種抗体を産生し得るトランスジェニック非ヒト動物 |
JP2002542770A (ja) * | 1999-03-25 | 2002-12-17 | クノール・ゲー・エム・ベー・ハー | ヒトil−12に結合するヒト抗体およびその産生法 |
JP2006522830A (ja) * | 2003-04-11 | 2006-10-05 | メディミューン,インコーポレーテッド | 組換えil−9抗体およびその使用 |
WO2005062967A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Tanox, Inc. | Novel anti-il 13 antibodies and uses thereof |
WO2006069036A2 (en) * | 2004-12-21 | 2006-06-29 | Centocor, Inc. | Anti-il-12 antibodies, epitopes, compositions, methods and uses |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6013055977; J. Immunol. vol.177, no.7, 200610, pp.4917-4926 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017221200A (ja) * | 2011-05-27 | 2017-12-21 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 二重標的化 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SG177921A1 (en) | 2012-02-28 |
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KR20090114368A (ko) | 2009-11-03 |
RU2013152929A (ru) | 2015-06-10 |
EP2099414A4 (en) | 2010-08-11 |
US7883704B2 (en) | 2011-02-08 |
US20090311241A9 (en) | 2009-12-17 |
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US20080063634A1 (en) | 2008-03-13 |
BRPI0721125A2 (pt) | 2014-03-11 |
NZ577828A (en) | 2013-03-28 |
RU2009128215A (ru) | 2011-01-27 |
WO2008079359A3 (en) | 2008-09-12 |
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AU2013254916A1 (en) | Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing |
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