CN101616653A - 结合人il-12的人抗体和制备方法 - Google Patents

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Abstract

公开了特异性结合人白介素－12(hIL－12)的人抗体，优选重组人抗体。优选的抗体对hIL－12有高亲和力，并在体外和体内中和hIL－12活性。本发明的抗体可以是全长抗体或其抗原结合部分。本发明的抗体或抗体部分用于检测hIL－12，并抑制例如患其中hIL－12活性是有害的疾病的人类受试者的hIL－12活性。表达本发明所述重组人抗体的核酸、载体和宿主细胞，以及合成所述重组人抗体的方法也包含在本发明中。

Description

结合人IL-12的人抗体和制备方法
相关申请
本申请要求2006年12月22日提交的美国专利申请No.11/645,287的优先权，美国专利申请No.11/645,287是2000年3月24日提交的美国专利申请序号09/534,717的部分继续申请，美国专利申请序号09/534,717以美国专利No.6,914,128于2005年7月5号授权。此申请还要求1999年3月25日提交的美国临时申请序号60/126,603的优先权。每个前述申请的全部内容在此引作参考。
发明背景
人白介素12(IL-12)最近已鉴定为具有独特结构和多效的细胞因子(Kobayashi，et al.(1989)J.Exp Med.170：827-845；Seder，et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.90：10188-10192；Ling，et al.(1995)J.Exp Med.154：116-127；Podlaski，et al.(1992)Arch.Biochem.Biophys.294：230-237)。IL-12在与几种涉及免疫和炎症反应的疾病有关的病理学中起关键作用。IL-12、其生物活性及其在疾病中作用的综述可见Gately etal.(1998)Ann.Rev.Immunol.16：495-521。
结构上，IL-12是包含通过二硫键连接在一起的35kDa亚基(p35)和40kDa亚基(p40)两者的异源二聚体蛋白(称为“p70亚基”)。该异源二聚体蛋白主要由抗原呈递细胞，例如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞产生。这些细胞类型还分泌相对于p70亚基超量的p40亚基。所述p40和p35亚基基因上是无关的，二者中没有一个曾报道有生物活性，尽管该p40同型二聚体可能作为IL-12拮抗剂起作用。
功能上，IL-12在调节抗原特异性T辅助因子类型1(Th1)和类型2(Th2)淋巴细胞中起主要作用。Th1和Th2细胞控制自身免疫疾病的引发和进展，IL-12在Th1-淋巴细胞分化和成熟的调节中是关键的。该T1细胞释放的细胞因子是炎性的，包括干扰素γ(IFNγ)、IL-2和淋巴毒素(LT)。Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13，促进体液免疫、过敏反应和免疫抑制。
与自身免疫性疾病中Th1反应的优势以及IFNγ的促炎症反应活性一致，IL-12可能在与许多自身免疫性和炎症性疾病，如类风湿关节炎(RA)、多发性硬化症(MS)以及克罗恩病相关的病理学中起主要作用。
如通过急性MS斑块中p40 mRNA水平证明的，人MS患者已表现出IL-12表达增加(Windhagen et al，(1995)J.Exp.Med.182：1985-1996)。此外，用MS患者的表达CD40L的T细胞先体外后体内刺激抗原呈递细胞，结果与对照T细胞相比，生成的IL-12增加，与观察到的CD40/CD40L相互作用是有效的IL-12诱导物相一致。
与健康对照相比，已在RA患者的滑液中发现高水平的IL-12p70(Morita et al(1998)Arthritis and Rheumatism.41：306-314)。RA滑液中细胞因子信使核糖核酸(mRNA)表达谱主要识别Th1细胞因子(Bucht et al，(1996)Clin.Exp.Immunol.103：347-367)。IL-12似乎还在克罗恩病(CD)相关病理学中发挥关键作用。在患有此疾病患者的肠粘膜中已观察到INFγ和IL-12表达增加(Fais et al.(1994)J.Interferon Res.14：235-238；Parronchi et al，(1997)Am.J.Path.150：823-832；Monteleoneet al，(1997)Gastroenterology.112：1169-1178，and Berrebi et al，(1998)Am.J.Path 152：667-672)。CD患者固有层T细胞细胞因子分泌谱的特点主要是ThI反应，包括大大提高的干扰素γ水平(Fuss，et al.，(1996)J.Immunol.157：1261-1270)。此外，CD患者的结肠组织切片显示大量表达IL-12的巨噬细胞和表达IFNγ的T细胞(Parronchi et al(1997)Am.J.Path.150：823-832)。
由于人IL-12在不同的人类疾病中的作用，已经设计了抑制或对抗IL-12活性的治疗策略。尤其是已经寻找结合并中和IL-12的抗体作为抑制IL-12活性的手段。一些最早的抗体是由用IL-12免疫的小鼠淋巴细胞制备的杂交瘤细胞分泌的鼠单克隆抗体(mAbs)(见例如WorldPatent Application Publication No.WO 97/15327 by Strober et al；Neurathet al(1995)J.Exp.Med.182：1281-1290；Duchmann et al.(1996)JImmunol.26：934-938)。由于与将小鼠抗体施用于人的有关问题，如血清半衰期短、无法引发某些人效应物功能，以及引发不需要的人抗小鼠抗体免疫反应(“人抗小鼠抗体”(HAMA)反应)，这些鼠IL-12抗体其体内使用受到限制。
一般情况下，克服在人中使用全鼠抗体有关问题的尝试已涉及通过基因工程使抗体更“类似于人”。例如，已制备了其中抗体链可变区是鼠源的，并且抗体链恒定区是人源的嵌合抗体(Junghans，et al(1990)Cancer Res.50：1495-1502；Brown et al.(1991)Proc.Natl.Acad.ScL88：2663-2667；Kettleborough et al.(1991)Protein Engineering.4：773-783)。然而，由于这些嵌合和人源化抗体仍然保留一些鼠序列，它们仍可能会引起不必要的免疫反应人抗嵌合抗体(HACA)反应，尤其是持续给药时。
优选的鼠抗体或其衍生物的IL-12抑制药物(例如嵌合抗体或人源化抗体)将是完全人源抗IL-12抗体，因为即使持续使用，这样的药物仍不应引起HAMA反应。但是本领域还未描述这样的抗体，因此仍需要这样的抗体。
发明概述
本发明提供结合人IL-12的人抗体。本发明还涉及使用本发明的人抗IL-12抗体治疗或预防其病理学涉及IL-12的急性或慢性疾病。
一方面，本发明提供结合人IL-12的分离的人抗体，或其抗原结合部分。
在一个实施方案中，本发明提供选择性突变的人IL-12抗体，其包括：
人抗体或其抗原结合部分，用增强活性的氨基酸残基，在优选的选择性诱变位置、接触或超突变位置选择性突变，从而使其结合到人IL-12。
在优选实施方案中，本发明提供选择性突变的人IL-12抗体，其包括：
人抗体或其抗原结合部分，用增强活性的氨基酸残基，在优选的选择性诱变位置选择性突变，使其结合到人IL-12。
在另一优选实施方案中，选择性突变的人IL-12抗体或其抗原结合部分，是用增强活性的氨基酸残基，在超过一个优选选择性诱变位置、接触或超突变位置选择性突变。在另一优选实施方案中，选择性突变的人IL-12抗体或其抗原结合部分，在不超过三个优选选择性诱变位置、接触或超突变位置选择性突变。在另一优选实施方案中，选择性突变的人IL-12抗体或其抗原结合部分，在不超过两个优选选择性诱变位置、接触或超突变位置选择性突变。在又一优选实施方案中，选择性突变的人IL-12抗体或其抗原结合部分选择性突变，从而达到靶特异性亲和力水平，当使用噬菌体展示技术针对相同抗原筛选抗体时，比起所述可达到的水平，所述靶水平提高。在另一优选实施方案中，选择性突变的人IL-12抗体进一步保留至少一种所需性质或特性，例如保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，保留抗原表位识别，生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体或其抗原结合部分，据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的Koff速率常数为0.1S-1或更少，或在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中其抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6M或更少。更优选地，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-2S-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-7M或更少。更优选地，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-3S-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-8M或更少。更优选地，所述分离的人抗体或其抗原结合部分从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-4S-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9M或更少。更优选地，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-5S-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-10M或更少。甚至更优选地，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-5s-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-11M或更少。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体或其抗原结合部分，其具有以下特点：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10- 6M或更低；
b)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：1的重链CDR3；以及
c)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：2的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：3的重链CDR2；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：4的轻链CDR2。在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：5的重链CDR1；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：6的轻链CDR1。在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ IDNO：7的重链可变区；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：8的轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特点：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10-9M或更低；
b)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：9的重链CDR3；以及
c)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：10的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：11的重链CDR2；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：12的轻链CDR2。在优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：13的重链CDR1；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：14的轻链CDR1。在优选实施方案中，所述分离的人抗体，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：15的重链可变区；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：16的轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10-9M或更低；
b)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：17的重链CDR3；以及
c)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：18的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：19的重链CDR2；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：20的轻链CDR2。在优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：21的重链CDR1；以及有包括氨基酸序列SEQ ID NO：22的轻链CDR1。在优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，有包括氨基酸序列SEQ ID NO：23的重链可变区；以及包括氨基酸序列SEQ ID NO：24的轻链可变区。在优选实施方案中，如Kabat et al.所讨论的，所述分离的人抗体包括选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA和IgE恒定区的重链恒定区或其任何等位基因变异(Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services，NIH Publication No.91-3242)，在此引作参考。在更优选实施方案中，所述抗体重链恒定区是IgG1。在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体是Fab片段，或F(ab′)2片段或单链Fv片段。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10- 9M或更低；
b)有包括选自SEQ ID NO：404-SEQ ID NO：469的氨基酸序列的重链CDR3；以及
c)有包括选自SEQ ID NO：534-SEQ ID NO：579的氨基酸序列的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分有包含选自SEQ ID NO：335-SEQ ID NO：403的氨基酸序列的重链CDR2，以及包括选自SEQ ID NO：506-SEQ ID NO：533的氨基酸序列的轻链CDR2。在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分有包含选自SEQ ID NO：288-SEQ ID NO：334的氨基酸序列的重链CDR1，以及包括选自SEQ ID NO：470-SEQ ID NO：505的氨基酸序列的轻链CDR1。在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，其包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：23的重链可变区，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：24的轻链可变区。在优选实施方案中，如上所述所述分离的人抗体包含重链恒定区，或Fab片段或F(ab′)2片段或单链Fv片段。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10- 9M或更低；
b)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3；以及
c)有包括氨基酸序列SEQ ID NO：26的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，有包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的重链CDR2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：28的轻链CDR2。在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，有包含氨基酸序列SEQ ID NO：29的重链CDR1，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：30的轻链CDR1。在优选实施方案中，所述分离的人抗体或其抗原结合部分，其有包含氨基酸序列SEQID NO：31的重链可变区，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：32的轻链可变区。在优选实施方案中，如上所述所述分离的人抗体包含重链恒定区，或Fab片段或F(ab′)2片段或单链Fv片段。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10- 6M或更低；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：3的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：5的重链CDR1，或其在接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：3的重链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：5的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：2的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：4的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：6的轻链CDR1，或其在接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：2的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：4的轻链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：6的轻链CDR1的抗体的10倍。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10- 9M或更低；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：9的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：11的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：13的重链CDR1，或其在接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：9的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：11的重链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：13的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：10的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：12的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：14的轻链CDR1，或其在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：10的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：12的轻链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：14的轻链CDR1的抗体的10倍。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10- 9M或更低；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：17的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：19的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：21的重链CDR1，或其在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：17的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：19的重链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：21的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：18的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：20的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：22的轻链CDR1，或其在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：18的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：20的轻链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：22的轻链CDR1的抗体的10倍。
本发明还提供编码本发明的抗体，或其抗原结合部分的核酸分子。优选的分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：17的重链CDR3。所述分离的核酸编码抗体重链可变区。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码所述抗体重链可变区的CDR2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：19。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码所述抗体重链可变区的CDR1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：21。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：23的抗体重链可变区。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：18的轻链可变区CDR3。所述分离的核酸编码抗体轻链可变区。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：20的抗体轻链可变区CDR2。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：22的所述抗体轻链可变区的CDR1。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：24的抗体轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖，IC50为1x10- 9M或更低；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的重链CDR2，以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：29的重链CDR1，或其在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的重链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：29的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：26的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：28的轻链CDR2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：30的轻链CDR1，或其在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置有一个或多个氨基酸取代的突变体，其中所述突变体的koff速率不高于包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：26的轻链CDR3，包含氨基酸序列SEQ ID NO：28的轻链CDR 2，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：30的轻链CDR1的抗体的10倍。
优选的分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3。所述分离的核酸编码抗体重链可变区。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的所述抗体重链可变区的CDR2。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：29的所述抗体重链可变区的CDR1。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：31的所述抗体重链可变区。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：26的所述轻链CDR3。所述分离的核酸编码抗体轻链可变区。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：28的所述抗体轻链可变区CDR2。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：30的所述抗体轻链可变区CDR1。在另一实施方案中，所述分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：32的抗体轻链可变区。
另一方面，本发明提供了分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特点：
a)据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的koff速率常数为0.1s-1或更少，或其在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6M或更少。
b)具有包含选自VH3种系家族成员的氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
c)具有包含选自VH3种系家族成员的氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特点：
a)据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的koff速率常数为0.1s-1或更少，或其在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6M或更少。
b)具有包含选自SEQ ID NOs：595-667的氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
c)有包含选自SEQ ID NOs：669-675的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述轻链可变区在优选的选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特点：
a)据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的koff速率常数为0.1s-1或更少，或其在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6M或更少。
b)具有包含COS-3种系氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
c)有包含DPL8种系氨基酸序列轻链可变区，其中所述轻链可变区在优选的选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
在另一实施方案中，本发明提供了分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特点：
a)据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的koff速率常数为0.1s-1或更少，或其在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6M或更少。
b)具有包含选自VH3种系家族成员的氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区包含与其他VH3种系家族成员CDR2结构类似的CDR2，以及与其他VH3种系家族成员CDR1结构类似的CDR1，并且其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变；
c)具有包含选自Vλ1种系家族成员的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含与其他Vλ1种系家族成员CDR2结构类似的CDR2，以及与其他Vλ1种系家族成员CDR1结构类似的CDR1，并且其中所述轻链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，在重链CDR3有突变。在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，在轻链CDR3有突变。在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，在重链CDR2有突变。在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，在轻链CDR2有突变。在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，在重链CDR1有突变。在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体，或其抗原结合部分，在轻链CDR1有突变。
另一方面，本发明提供了携带本发明的编码抗体的核酸的重组表达载体，其中已经引入这样的载体的宿主细胞也包括在本发明中，通过培养本发明的宿主细胞制备本发明的抗体的方法也包括在本发明中。
另一方面，本发明提供中和人IL-12活性的分离的人抗体，或其抗原结合部分，以及至少一种选自狒狒的IL-12、绒猴IL-12、黑猩猩IL-12、食蟹猴IL-12和恒河猴IL-12的灵长类动物IL-12，但其不中和小鼠IL-12的活性。
另一方面，本发明提供包含本发明的所述抗体或其抗原结合部分，以及药学上可接受的载体的药物组合物。
另一方面，本发明提供包含所述抗体或其抗原结合部分，以及另外的物质，例如治疗药物的组合物。
另一方面，本发明提供了抑制人IL-12活性的方法，其包含将人IL-12与本发明的抗体例如J695接触，这样人IL-12活性受抑制。
另一方面，本发明提供抑制患其中IL-12活性有害的疾病的人患者的人IL-12活性的方法，其包含将本发明的所述抗体，例如J695施用于人受试者，这样所述人患者的人IL-12活性受抑制。所述疾病可以是，例如克罗恩病、多发性硬化病或类风湿关节炎。
另一方面，本发明特征为提高抗体或其抗原结合部分的活性，以获得预定靶活性的方法，其包含
a)提供母抗体及其抗原结合部分；
b)筛选选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置；
c)将选定的优选选择性突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成第一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价第一组突变抗体，或其抗原结合部分的活性，以确定单个选择性突变位置的突变是否产生具有预定靶活性或部分靶活性的抗体或其抗原结合部分；
e)以逐步的方式在母抗体，或其抗原结合部分组合经证明具有改善的活性的个别突变，形成组合抗体，或其抗原结合片段。
f)评价所述组合抗体或其抗原结合部分的活性，以确定所述组合抗体或其抗原结合部分是否有预定的靶活性或部分靶活性。
g)如果步骤d)或f)没有产生具有预定靶活性的抗体或其抗原结合部分，或产生具有仅部分活性的抗体，则选自H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A和L96的另外的氨基酸残基突变为至少两种其他氨基酸残基，从而产生第二组突变抗体或其抗原结合部分；
h)评价第二组突变抗体或其抗原结合部分的活性，确定选自H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A和L96的单个氨基酸残基的突变是否产生具有预定靶活性或部分活性的抗体或其抗原结合部分；
i)以逐步的方式在母抗体，或其抗原结合部分中组合经证明具有改善的活性的步骤g)的个别突变，形成组合抗体或其抗原结合片段；
j)评价所述组合抗体或其抗原结合部分的活性，以确定所述组合抗体或其抗原结合部分是否有预定的靶活性或部分靶活性。
k)如果步骤h)或j)没有产生具有预定靶活性的抗体或其抗原结合部分，或产生具有仅部分活性的抗体，则选自H33B、H52B和L31A的另外的氨基酸残基突变为至少两种其他氨基酸残基，从而产生第三组突变抗体或其抗原结合部分；
l)评价第三组突变抗体或其抗原结合部分的活性，确定选自H33B、H52B和L31A的单个氨基酸残基的突变是否产生具有预定靶活性或部分活性的抗体或其抗原结合部分；
m)以逐步的方式在母抗体，或其抗原结合部分中组合经证明具有改善的活性的步骤k)的个别突变，形成组合抗体，或其抗原结合片段。
n)评价所述组合抗体或其抗原结合部分的活性，以确定所述组合抗体或其抗原结合部分是否有预定的靶活性或部分靶活性，从而生成具有具有预定靶活性的抗体或其抗原结合部分。
另一方面，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包括
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性；
e)在至少一个其他接触或高突变位置重复步骤b)至d)；
f)在所述母抗体或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善活性的个别突变，形成组合抗体或其抗原结合片段；以及
g)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分活性改善的抗体或其抗原结合部分。
在一个实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包括：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变没有进一步提高；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性；
e)在至少一个其他接触或高突变位置重复步骤b)至d)；
f)在所述母抗体或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性的个别突变，形成组合抗体或其抗原结合片段：以及
g)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分活性改善的抗体，或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H1 O1、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96。在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93。在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置。在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94。
在一个实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包括：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在合适的表达系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特征，其中所述性质或特征是所述抗体中需要被保留的性质或特征；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有活性改善且至少一种性质或特征保留的抗体，或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，其他特性选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应；2)保留表位识别，即优选在p70p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自来自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置，其他特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应；2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，所述其他特性选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留抗原表位识别，即优选在p70p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在本发明的另一实施方案中，提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包括：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特性，其中所述性质或特性是需要保留的性质或特性，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有活性改善以及至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
f)在至少一个其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置重复步骤a)至e)；
g)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，并有至少一种保留的性质或活性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
h)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，活性改善并有至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自来自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)筛选互补决定区(CDR)内接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的接触或高突变位置；
c)将所述选定的接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特性，其中所述性质或特性是需要保留的性质或特性；直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，活性改善并有至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在另一优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)筛选互补决定区(CDR)内的优选选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特性，其中所述性质或特性是需要保留的性质或特性，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有改善的活性，以及至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
f)在至少一个其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置重复步骤a)至e)。
g)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，并有至少一种保留的其他性质的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合部分；以及
h)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性并有至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自来自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置，所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供母抗体，或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96外，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的变化；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供母抗体，或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)在至少一个其他CDR位置重复步骤b)至d)，该CDR位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置。
f)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善活性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成组合抗体，或其抗原结合片段。
g)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分具有改善的活性的母抗体或其抗原结合部分。
在另一实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变没有进一步提高；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的变化；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)在CDR内中至少一个其他位置重复步骤b)至d)，该位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94的位置；
f)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
g)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性或其他性质或特性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的改变；
f)在至少一个其他CDR位置重复步骤b)至e)，该位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置；
g)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，且不影响至少一种其他性质或特性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
h)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性或保留的至少一种其他特性或性质，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性，且至少一种保留性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分亲和力的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分在至少一种其他特性或性质上的改变，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分活性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分在至少一种其他性质或特性的改变；
f)在至少一个其他CDR位置重复步骤b)至e)，该位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置。
g)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，且不影响至少一种其他性质或特性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成具有至少一种保留的性质或特性的结合抗体，或其抗原结合片段；以及
h)评价具有两种活性增强氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性和至少一种其他特性或性质的保留，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有活性改善且至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性，而不影响其他特性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分至少一种其他性质或特性的变化，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性，且保留其他特性或性质的抗体或其抗原结合部分。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分活性的方法，其包含：
a)提供通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善的母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统表达；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，以及保留至少一种其他特性或性质，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)在至少一个其他CDR位置重复步骤b)至d)，该位置既非b)下选择的位置，也非除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置；
f)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，且不影响至少一种其他特性或性质的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
g)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性或保留的至少一种其他特性或性质，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性，且至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在又一方面，本发明提供能结合到IL-12的p40亚基(例如人IL-12的p40亚基)，并能改变IL-12所述p40亚基的构象结构的分离的抗体(如人抗体)或其抗原结合部分。
在相关方面，本发明提供能结合到IL-12的p40亚基(例如人IL-12的p40亚基)，并能改变白细胞介素，例如白细胞介素的所述p40亚基的构象结构的分离的抗体(如人抗体)或其抗原结合部分。在一个实施方案中，所述白细胞介素是IL-12。在另一实施方案中所述白细胞介素包含p40亚基和p19亚基，例如所述白细胞介素是IL-23。在又一实施方案中，所述白细胞介素是人白细胞介素，例如人IL-12或人IL-23。
在一个实施方案中，所述抗体是Y61或J695。在另一实施方案中，所述抗体是Y61或J695。
在另一实施方案中，所述分离的抗体，或其抗原结合部分，改变所述白细胞介素例如IL-12或IL-23的构象结构，从而调节所述白细胞介素例如IL-12或IL-23与白细胞介素相互作用分子结合。
在又一实施方案中，所述白细胞介素相互作用分子是白细胞介素受体，例如IL-12或IL-23受体。
在再一实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分改变所述白细胞介素例如IL-12或IL-23的构象结构，从而抑制第二抗体结合到所述白细胞介素例如IL-12或IL-23。
在一个实施方案中，所述白细胞介素是IL-12，所述第二抗体结合到选自1D4.7、C8.6.2和C340的抗体结合的IL-12的p40亚基的表位。
在另一实施方案中，所述白细胞介素是IL-12，所述第二抗体选自1D4.7、C8.6.2和C340。
另一方面，本发明提供结合到选自1D4.7、C8.6.2、C340和7G3的抗体不结合的IL-12 p40亚基的表位的分离的抗体，例如人抗体，或其抗原结合部分。
在一个实施方案中，所述抗体是Y61或J695。在另一实施方案中，所述抗体不是Y61或J695。
在另一实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分结合到选自Y61和J695的抗体结合的IL-12的p40亚基的表位。
在一个实施方案中，所述抗体不是Y61或J695。
在另一实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分抑制第二抗体结合到IL-12。
在又一实施方案中，所述第二抗体结合到选自1D4.7、C8.6.2、C340的抗体结合的IL-12的表位。
在一个实施方案中，所述第二抗体选自1D4.7、C8.6.2和C340。
在一个实施方案中，据表面等离振子共振测定，所述分离的抗体或其抗原结合部分从人IL-12 p40亚基解离的kd为1x10-10M或更低，或koff速率常数为1x10-3s-1或更低。
在另一实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分是中和抗体。
在另一实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9M，或其抑制人IFNγ生成的IC50为1x10-10M或更少。
在一个实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分是人抗体。
另一方面，本发明提供了包含本发明的抗体、或其抗原结合部分，以及药学上可接受的载体的药物组合物。该药物组合物可进一步包含另外的治疗药物，例如选自布地奈德(budenoside)，表皮生长因子，皮质类固醇，环孢菌素，柳氮磺胺吡啶，氨基水杨酸，6-巯基嘌呤，硫唑嘌呤，甲硝唑，脂氧合酶抑制剂，5-氨基水杨酸，奥沙拉嗪，巴柳氮，抗氧化剂，凝血烷抑制剂，IL-I受体拮抗剂，抗IL-1β单克隆抗体，抗IL-6单克隆抗体，生长因子，弹性蛋白酶抑制剂，吡啶-咪唑类化合物，TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF的抗体或激动剂，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90的抗体或其配体，甲氨蝶呤，环孢菌素，FK506，雷帕霉素，霉酚酸吗乙基酯，来氟米特，NSAID，布洛芬，皮质类固醇，脱氢皮质醇，磷酸二酯酶抑制剂，腺苷激动剂，抗血栓药物，补体抑制剂，肾上腺素能药物，IRAK，NIK，IKK，p38，MAP激酶抑制剂，IL-1β转化酶抑制剂，TNFα转换酶抑制剂，T细胞信号传导抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，柳氮磺胺吡啶，硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤，血管紧张素转换酶抑制剂，可溶性细胞因子受体，可溶性p55 TNF受体，可溶性p75 TNF受体，sIL-1 RI，sIL-1 RII，sIL-6R，抗炎细胞因子，IL-4，IL-10，IL-11，IL-13和TGFβ的治疗药物。
在另一实施方案中，所述治疗药物选自抗TNF抗体及其抗体片段、TNFR-Ig构建物、TACE抑制剂、PDE4抑制剂、皮质类固醇、地塞米松、柳氮磺胺吡啶、5-氨基水杨酸、奥沙拉秦、IL-1β转化酶抑制剂、IL-1ra、酪氨酸激酶抑制剂、6-巯基嘌呤和IL-11。
在又一实施方案中，所述治疗药物选自皮质类固醇、脱氢皮质醇、类固醇、强的松龙、硫唑嘌呤，环磷酰胺，环孢霉素，甲氨蝶呤，4-氨基吡啶，替扎尼定，干扰素-β1a，干扰素-β1b，共聚物1，高压氧，静脉注射免疫球蛋白，克拉屈滨(clabribine)，TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF、PDGF的抗体或激动剂，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90的抗体或其配体，甲氨蝶呤、环孢霉素，FK506，雷帕霉素，霉酚酸吗乙基酯，来氟米特，NSAID，布洛芬，皮质类固醇，强的松龙，磷酸二酯酶抑制剂，腺苷激动剂，抗血栓药物，补体抑制剂，肾上腺素能药物，IRAK，NIK，IKK，p38或MAP激酶抑制剂，IL-1β转化酶抑制剂，TACE抑制剂，T细胞信号传导抑制剂，激酶抑制剂，金属蛋白酶抑制剂，柳氮磺胺吡啶，硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤，血管紧张素转换酶抑制剂，可溶性细胞因子受体，可溶性p55TNF受体，可溶性p75TNF受体，sIL-1RI，sIL-1RII，sIL-6R，sIL-13R，抗P7s，p-选择素糖蛋白配体(PSGL)，抗炎细胞因子，IL-4，IL-10，IL-13和TGFβ。
另一方面，本发明提供包含抗体(例如人抗体)或其抗原结合部分的组合物，该抗体或其抗原结合部分能以有效改变所述白介素构象结构的量结合到IL-12的p40亚基，并能改变包含p40亚基的白介素如IL-12或IL-23的构象结构。在一个实施方案中，所述白介素是IL-12。在另一实施方案中，所述白介素包含p40亚基和p19亚基，例如所述白介素是IL-23。
在一个实施方案中，有效改变白介素如IL-12的p40亚基构象结构的所述抗体的量为约0.1至2500μg/ml，优选约1.0至250μg/ml，更优选约2.0至125μg/ml，更优选约4.0至65μg/ml，甚至更优选约6.0至50μg/ml，优选约8.0至40μg/ml，最优选约10至25μg/ml。在各实施方案中，有效改变白介素如IL-12的p40亚基构象结构的抗体的量为约1、2、3、4、5、6、7、8、9.10.11.12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40.45、50、55、60μg/ml或更多。以上列举的数量的中间范围例如约5.0至55μg/ml、约9.0至35μg/ml、约15至20μg/ml也是本发明的一部分。例如，包括使用任何以上列举值的组合为上和/或下限的值的范围。此外，任何以上列举的数量中间的离散数量，例如10.5、11.5和12.5，也是本发明的一部分。
另一方面，本发明提供包含抗体(如人抗体)或其抗原结合部分的组合物，其结合到IL-12的p40亚基，并能改变用适用于改变所述p40亚基构象结构的规程包装或启动的所述p40亚基的构象结构。
在相关方面，本发明提供包含抗体(例如人抗体)或其抗原结合部分的组合物，其能结合IL-12的p40亚基，并能改变用适用于改变所述白介素IL-12或IL-23构象结构的规程包装或启动的包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23的构象结构。
在一个实施方案中，所述组合物进一步包含确定所述白介素例如IL-12或IL-23的构象结构是否已经被改变的方法。
在一个实施方案中，所述白介素是IL-12，所述抗体或其抗原结合部分结合到选自1D4.7、C8.6.2、C340和7G3的抗体不结合的IL-12的p40亚基的表位。
在另一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分结合选自Y61和J695的抗体结合的表位。
在又一实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分不是Y61或J695。
在另一实施方案中，据表面等离振子共振测定，所述抗体或其抗原结合部分从人IL-12 p40亚基解离的Kd为1x10-10M或更少，或koff常数为1x10-3S-1或更少。
在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分是中和抗体。
在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分是人抗体。
但又一方面，本发明提供包含了众多抗体或其抗原结合部分的组合物，其中所述众多抗体的每种抗体结合到IL-12 p40亚基的不同表位。
在一个实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分结合到选自Y61和J695的抗体结合的IL-12 p40亚基的表位。
在另一实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分结合到选自1D4.7、C8.6.2、C340和7G3的抗体不结合的IL-12 p40亚基的表位。
在一个实施方案中，据表面等离振子共振测定，至少一种抗体，或其抗原结合部分从人IL-12 p40亚基解离的Kd为1x10-10M或更少，或koff常数为1x10-3S-1或更少。
在另一实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分是中和抗体。
在又一实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9M或更少，或其抑制人IFNγ生成的IC50为1x10-10M或更少。
在另一实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分是人抗体。
在一个实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分有包含氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3，以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：26的轻链CDR3。
在另一实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分还有包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的重链CDR2，以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：28的轻链CDR2。
在又一实施方案中，至少一种抗体或其抗原结合部分还具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：29的重链CDR1，以及包含氨基酸序列SEQID NO：30的轻链CDR1。
一方面，本发明提供检测白介素例如IL-12或IL-23的p40亚基的方法，其包含将IL-12的p40亚基与本发明的抗体或其抗原结合部分接触，从而检测所述p40亚基。
在相关方面，本发明提供了检测白介素例如IL-12或IL-23的p40亚基的方法，其包含将所述白介素如IL-12或IL-23的p40亚基与本发明的抗体或其抗原结合部分接触，从而检测所述白介素例如IL-12或IL-23的p40亚基。
在一个实施方案中，体外检测所述白介素例如IL-12或IL-23的p40亚基。在另一实施方案中，为诊断目的检测生物样品中所述白介素例如IL-12或IL-23的p40亚基。
另一方面，本发明提供了抑制包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23的活性的方法，其包含将所述白介素例如IL-12或IL-23与本发明的抗体或其抗原结合部分接触，从而抑制活性。
在相关方面，本发明提供了抑制患其中所述活性是有害的疾病的人受试者中包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23活性的方法，其包含将本发明的抗体或其抗原结合部分施用于人受试者，从而抑制人受试者所述白介素例如IL-12或IL-23的活性。
在一个实施方案中，所述白细胞介素是IL-12。在另一实施方案中，所述白细胞介素包含p40亚基和p19亚基，例如所述白细胞介素是IL-23。
在一个实施方案中，所述疾病选自类风湿关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎、莱姆关节炎、银屑病性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎症性肠病、多发性硬化症、胰岛素依赖型糖尿病、甲状腺炎、哮喘、过敏病、牛皮癣、硬化性皮炎、甲状腺炎、移植物抗宿主病、器官移植排斥反应、器官移植相关急性或慢性免疫疾病、结节病、动脉粥样硬化、弥漫性血管内凝血、川崎氏病、格雷夫病、肾病综合征、慢性疲劳综合征、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、过敏性紫癜、肾脏的显微镜下血管炎、慢性活动性肝炎、干燥综合征、葡萄膜炎、败血症、感染性休克、脓毒症综合征、成人呼吸窘迫综合征、恶病质、传染病、寄生虫病、获得性免疫缺陷综合症、急性横贯性脊髓炎、重症肌无力症、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏症、阿尔茨海默氏症、中风、原发性胆汁性肝硬化、肝纤维化肺疾病、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰竭和心肌梗死。
在一个实施方案中，所述疾病是类风湿性关节炎。
在一个实施方案中，所述疾病是克罗恩病。
在一个实施方案中，所述疾病是多发性硬化症。
在一个实施方案中，所述疾病是银屑病。
在又一实施方案中，本发明提供了改变IL-12 p40亚基构象结构的方法，该方法包含将所述亚基与能以有效改变所述亚基构象结构的量结合所述亚基，并改变所述亚基的构象结构的抗体或其抗原结合部分接触，从而改变所述亚基的构象结构。
在相关方面，本发明提供改变包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23的构象结构的方法，其包含将所述白介素例如IL-12或IL-23与能以有效改变所述白介素例如IL-12或23构象结构的量结合IL-12 p40亚基，并改变所述白介素例如IL-12或IL-23构象结构的抗体或其抗原结合部分接触，从而改变所述白介素例如IL-12或IL-23的构象结构。
另一方面，本发明提供抑制包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23的活性的方法，该方法包含将所述白介素例如IL-12或IL-23与能以有效改变所述亚基构象结构的量结合到IL-12 p40亚基，并改变所述亚基构象结构的抗体或其抗原结合部分接触，从而抑制所述白介素例如IL-12或IL-23的活性。
在相关方面，本发明提供抑制包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23活性的方法，该方法包含将所述白介素例如IL-12或IL-23与能以有效改变所述白介素例如IL-12或IL-23构象结构的量与IL-12 p40亚基结合，并改变所述白介素例如IL-12或IL-23的构象结构的抗体或其抗原结合部分接触，从而抑制所述白介素例如IL-12或IL-23的活性。
另一方面，本发明提供抑制患其中所述白介素例如IL-12或IL-23活性有害的疾病的人受试者中包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23活性的方法，该方法包含将能以有效改变所述亚基构象结构的量结合到IL-12的p40亚基，并改变所述亚基构象结构的抗体或其抗原结合部分施用于人受试者，从而抑制人患者中所述白介素例如IL-12或IL-23的活性。
在相关方面，本发明提供抑制患其中所述白介素例如IL-12或IL-23活性有害的疾病的人受试者中包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23活性的方法，该方法包含将能以有效改变所述白介素例如IL-12或IL-23构象结构的量结合到IL-12 p40亚基，并能改变所述白介素例如IL-12或IL-23构象结构的抗体或其抗原结合部分施用于人受试者，从而抑制人受试者中所述白介素例如IL-12或IL-23的活性。
在一个实施方案中，所述白介素是IL-12。在另一实施方案中，所述白介素包含p40亚基和p19亚基，例如所述白介素是IL-23。
在一个实施方案中，所述疾病选自类风湿关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎、莱姆关节炎、银屑病性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎症性肠病、多发性硬化症、胰岛素依赖型糖尿病、甲状腺炎、哮喘、过敏病、牛皮癣、硬化性皮炎、甲状腺炎、移植物抗宿主病、器官移植排斥反应、器官移植相关急性或慢性免疫疾病、结节病、动脉粥样硬化、弥漫性血管内凝血、川崎氏病、格雷夫病、肾病综合征、慢性疲劳综合征、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、过敏性紫癜、肾脏的显微镜下血管炎、慢性活动性肝炎、干燥综合征、葡萄膜炎、败血症、感染性休克、脓毒症综合征、成人呼吸窘迫综合征、恶病质、传染病、寄生虫病、获得性免疫缺陷综合症、急性横贯性脊髓炎、重症肌无力症、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏症、阿尔茨海默氏症、中风、原发性胆汁性肝硬化、肝纤维化肺疾病、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰竭和心肌梗死。
在一个实施方案中，所述疾病是类风湿性关节炎。
在一个实施方案中，所述疾病是克罗恩病。
在一个实施方案中，所述疾病是多发性硬化症。
在一个实施方案中，所述疾病是银屑病。
在一个实施方案中，所述抗体不是Y61或J695。
在另一实施方案中，有效改变白介素例如IL-12 p40亚基构象结构的抗体量为约0.1至2500μg/ml。优选约1.0至250μg/ml，更优选约2.0至125μg/ml。更优选约4.0至65μg/ml。甚至更优选约6.0至50μg/ml，优选约8.0至40μg/ml，最优选约10至25μg/ml。在各种实施方案中，有效改变白介素例如IL-12的p40亚基构象结构的抗体量为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28；29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60μg/m或更多。以上列举量的中间范围，例如约5.0至55μg/ml，约9.0至35μg/ml，以及约15至20μg/ml，也是本发明一部分。例如也包括使用任意以上列举值的组合为上和/或下限的值的范围。另外，任何以上列举量中间的离散量，例如10.5、11.5和12.5μg/ml也是本发明的一部分。
在一个实施方案中，白介素例如IL-12的p40亚基与抗体或其抗原结合片段接触一段时间，约10秒、30秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟、13分钟、14分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、1小时、2小时、5小时或更长。在优选实施方案中，白介素的所述p40亚基与抗体或其抗原结合部分接触一段时间，约5至10分钟，例如5、6、7、8、9、10分钟。以上列举时间的中间时间也是本发明的一部分。
另一方面，本发明提供鉴别适合抑制包含p40亚基的白介素，例如IL-12或IL-23的活性的抗体或其抗原结合部分的方法，该方法包含将白介素例如IL-12或IL-23的p40亚基或其部分与抗体或其抗原结合部分接触，并确定抗体或其抗原结合部分是否改变所述p40亚基的构象结构，从而鉴别适合抑制包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23活性的抗体或其抗原结合部分。
在相关方面，本发明提供鉴别适合抑制包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23活性的抗体或其抗原结合部分的方法，该方法包含将白介素例如IL-12或IL-23的p40亚基或其部分与抗体或其抗原结合部分接触，并测定所述抗体或其抗原结合部分是否改变所述白介素例如IL-12或IL-23的构象结构，从而鉴别适合抑制包含p40亚基的白介素例如IL-12或IL-23活性的抗体或其抗原结合部分。
在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分适合抑制患有其中所述白介素例如IL-12或IL-23的活性有害的疾病的人受试者中白介素例如IL-12或IL-23的活性。
在另一实施方案中，所述方法进一步包含测定所述白介素例如IL-12或IL-23结合到白介素相互作用分子是否被调节。
在一个实施方案中，与所述白介素例如IL-12或IL-23相互作用的所述分子是白介素受体，例如IL-12受体或IL-23受体。
在一个实施方案中，所述方法还包含测定第二抗体结合到所述白介素例如IL-12或IL-23是否被抑制。
在一个实施方案中，所述白介素是IL-12，第二抗体结合到选自1D4.7、C8.6.2和C340的抗体结合的IL-12的p40亚基的表位。
在一个实施方案中，所述第二抗体选自1D4.7、C8.6.2和C340。
附图简述
图1A-1B为与种系序列Cos-3/JH3和Dpl 18 Lv 1042相比，一系列结合人IL-12的人抗体的重链可变区氨基酸序列比对。Kabat编号用于鉴别氨基酸位置。对于Joe 9野生型，显示全序列。对于其他抗体，显示仅与Joe 9野生型不同的那些氨基酸位置。
图1C-1D为一系列结合人IL-12的人抗体的轻链可变区氨基酸序列比对。Kabat编号用于鉴别氨基酸位置。对于Joe 9野生型，显示全序列。对于其他抗体，显示仅与Joe 9野生型不同的那些氨基酸位置。
图2A-2E显示定点诱变突变的Y61抗体重链中CDR位置以及每个位置的相应氨基酸取代。图右侧显示与未突变Y61(空白柱)相比，取代的抗体(黑色柱)的脱附速率。
图2F-2H显示定点诱变突变的Y61抗体轻链中CDR位置以及每个位置的相应氨基酸取代。图右侧显示与未突变Y61(空白柱)相比，取代的抗体(黑色柱)的脱附速率。
图3证明人抗IL-12抗体J695对食蟹猴血浆新蝶呤水平的体内疗效。
图4显示平均关节炎得分对用胶原免疫小鼠后天数的图，表明与用大鼠IgG处理相比，用C 17.15处理显著降低关节炎相关症状。
发明详述
为了可以更容易地理解本发明，首先定义某些术语。
术语“增强活性的氨基酸残基”包括改善所述抗体活性的氨基酸残基。应理解所述增强活性的氨基酸残基可在接触、高突变或优选的选择性突变位置取代氨基酸残基，另外在一个或多个CDRs内可出现超过一个增强活性的氨基酸残基。增强活性的氨基酸残基包括改善抗体，例如结合到人IL-12的抗人IL-12抗体的结合特异性/亲和力的氨基酸残基。增强活性的氨基酸残基还意在包括改善抗体，例如抑制人IL-12的人IL-12抗体的中和效价的氨基酸残基。
术语“抗体”包括由四条多肽链，即通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链组成的免疫球蛋白分子。每条重链由重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。所述重链恒定区由三个域CH1、CH2和CH3组成。每个轻链由轻链可变区(缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个域CL组成。所述VH和VL区可进一步分成称作互补决定区(CDRs)的高变区，散布着更保守的称为框架区(FR)的区。每个VH和VL由三个CDR和四个FRs组成，以下列顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
术语抗体的“抗原结合部分”(或“抗体部分”)包括保留特异性结合到抗原(如IL-12)的能力的抗体片段。已经证实，抗体的抗原结合功能可通过全长抗体片段实现。结合片段的例子包含在术语抗体的“结合部分”中，包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含由铰链区二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，由VH和CH1域组成；(iv)由抗体单臂的VL和VH域组成的Fv片段；(v)由VH域组成的dAb片段(Ward et al.，(1989)Nature 341：544-546)，以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个域VL和VH由独立的基因编码，但使用重组的方法，通过能使其制成其中VL和VH域配对形成单价分子(称为单链抗体)的单个蛋白链的合成接头可将该两个域连接(参见例如Birdet al.(1988)Science 242：423-426；and Huston et al.(1988)Proc.Natl.Acad.ScL USA 85：5879-5883)。这样的单链抗体也意在包括于术语抗体的“抗原结合部分”中。也包括其他形式的单链抗体如双链抗体。双链抗体是二价的双特异性抗体，其中VH和VL域在单个多肽链上表达，但使用的接头太短无法使相同链上所述两个域间配对，从而迫使所述域与另一条链的互补域配对，形成两个抗原结合位点(参见例如Holliger，P.，et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448；Poljak，R.J.，et al.(1994)Structure 2：1121-1123)。更进一步地，抗体或其抗原结合部分可能是更大的免疫黏附分子的一部分，由所述抗体或抗体部分与一个或多个其他蛋白或肽共价或非共价结合形成。这样的免疫黏附分子的例子包括用链霉亲和素核心区形成四聚体scFv分子(Kipriyanov，S.M.，et al.(1995)Human Antibodies and Hybridomas 6：93-101)，以及用半胱氨酸残基，标记肽和C-末端多组氨酸标签制备二价和生物素化scFv的分子(Kipriyanov，S.M.，et al(1994)MoI.Immunol.31：1047-1058)。抗体部分如Fab和F(ab′)2片段可以使用常规技术，例如分别用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化整个抗体，从整个抗体制备。此外，如本文所述抗体、抗体部分和免疫黏附分子可使用标准重组DNA技术获得。优选抗原结合部分是完整的域或成对的完整域。
术语“回复突变”指其中人抗体的一些或全部体细胞突变的氨基酸被同源种系抗体序列的相应种系残基取代的过程。本发明人抗体的重和轻链序列独立地与VBASE数据库中种系序列比对，以鉴别具有最高同源性的序列。本发明人抗体中的差异通过突变编码这样不同氨基酸的确定核苷酸位置，回复成所述种系序列。因此应考察这种方式鉴别为回复突变候选物的每种氨基酸在抗原结合中的直接或间接作用，突变后发现影响人抗体任何所需特性的任何氨基酸不应包括在最终的人抗体中；作为实施例，通过选择性突变方法鉴别的增强活性的氨基酸不进行回复突变。如果第二种系序列与本发明的人抗体序列在所讨论氨基酸两侧上相同并共线性至少10个，优选12个氨基酸，则为使进行回复突变的氨基酸数量最小化，发现与最接近种系序列不同但与第二种系序列中相应氨基酸一致的那些氨基酸位置可以保留。回复突变可在抗体优化的任何阶段发生；优选地，回复突变直接在选择性突变方法之前或之后发生。更优选地，回复突变直接在选择性突变方法之前发生。
本文使用的短语“人白介素12”(本文缩写为hIL-12或IL-12)包括主要由巨噬细胞和树突细胞分泌的人细胞因子。该术语包括包含通过二硫键连接在一起的35kD亚基(p35)和40kD亚基(p40)两者的异源二聚体蛋白。该异源二聚体蛋白被称为“p70亚基”。人IL-12的结构在例如Kobayashi，et al.(1989)J.Exp Med.170：827-845；Seder，et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.90：10188-10192；Ling，et al.(1995)J.Exp Med.154：116-127；Podlaski，et al.(1992)Arch.Biochem.Biophys.294：230-237中进一步描述。术语人IL-12旨在包括可通过标准重组表达方法制备的重组人IL-12(rh IL-12)。
短语“包含p40亚基的白介素”包括包含p40亚基的任何白介素，例如任何人白介素。这样的白介素在本领域是众所周知的，包括IL-12，例如人IL-12和IL-23，例如人IL-23。
术语“Kabat编号”、“Kabat定义”、“Kabat标记”本文可相互替换使用。为本领域所知的这些术语指为比抗体或其抗原结合部分的重链和轻链可变区中其他氨基酸残基更易变(高变)的氨基酸残基编号的体系(Kabat et al.(1971)Ann.NY Acad，Sci.190：382-391 and，Kabat，E.A.，etal.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services，NIH Publication No.91-3242)。对于重链可变区，CDR1高可变区的范围是氨基酸位置31至35，CDR2是氨基酸位置50至65，CDR3是氨基酸位置95至102。对于轻链可变区，CDR1高可变区的范围是氨基酸位置24至34，CDR2是氨基酸位置50至56，CDR3是氨基酸位置89至97。
本文使用Kabat编号表明本发明的抗体中进行的氨基酸修饰的位置。例如Y61抗IL-12抗体可从重链CDR1位置31的丝氨酸(S)突变为谷氨酸(E)(H31S→E)，或轻链CDR3位置94的甘氨酸(G)可突变为酪氨酸(Y)(L94G→Y)。
如Kabat et al.所述，术语“人抗体”包括具有对应于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体(参见Kabat，et al.(1991)Sequences ofProteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department ofHealth and Human Services，NIH Publication No.91-3242)。本发明的人抗体可包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或位点专一性突变或体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，尤其在CDR3中。突变优选使用本文所述的“选择性突变方法”引入。人抗体可有至少一个位置被氨基酸残基，例如不是由人种系免疫球蛋白序列编码的增强活性的氨基酸残基取代。人抗体可有最高达二十个位置被不是人种系免疫球蛋白序列的一部分的氨基酸残基取代。在其他实施方案中，最高达10、最高达5、最高达3或最高达2个位置被取代。如下详述，在优选实施方案中这些取代在CDR区。但是本文所用的术语“人抗体”无意于包括其中来自其他哺乳动物种，例如小鼠的种系CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。
短语“重组人抗体”包括通过重组方法制备、表达、创建或分离的人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(在第II部分进一步描述)，从重组的、组合人抗体文库分离的抗体(在第II部分进一步描述)，从转有人免疫球蛋白基因的动物(如小鼠)分离的抗体(参见例如Taylor，L.D.，et al.(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)，或通过任何其他涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的方式制备、表达、创建或分离的抗体。这样的重组人抗体有来自人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区(参见Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，FifthEdition，U.S.Department of Health and Human Services，NIH PublicationNo.91-3242)。但是在某些实施方案中，这样的重组人抗体进行体外突变(或当使用转有人Ig序列基因的动物时，体内体细胞突变)，因此重组抗体VH和VL区的氨基酸序列是当来自并与人种系VH和VL序列相关时，在体内人抗体种系所有组成成分中不可能天然存在的序列。但在某些实施方案中，这样的重组抗体是选择性突变方法或回复突变或二者的结果。
“分离的抗体”包括基本上没有其他具有不同抗原特异性的抗体的抗体(例如特异性结合hIL-12的分离抗体基本上没有特异性结合不是hIL-12的抗原的抗体)。特异性结合hIL-12的分离抗体可结合其他种的IL-12分子(下文进一步详细讨论)。此外，分离的抗体可能基本上没有其他细胞材料和/或化学品。
“中和抗体”(或“中和IL-12活性的抗体”)包括其结合到hIL-12从而抑制hIL-12生物活性的抗体。hIL-12生物活性的此抑制可通过测量hIL-12生物活性的一个或更多指示物来评价，例如在植物凝集素母细胞增殖分析(PHA)中抑制人植物凝集素母细胞增殖，或在人IL-12受体结合分析中抑制受体结合(参见实施例3-干扰素-γ诱导检测)。hIL-12生物活性的这些指示物可通过本领域已知的一种或多种标准体外或体内分析来评价(参见实施例3)。
术语“活性”包括例如抗体对抗原的结合特异性/亲和力的活性，例如结合到IL-12抗原和/或中和抗体效价的抗hIL-12抗体的活性，例如结合到hIL-12抑制hIL-12生物活性的抗hIL-12抗体，例如抑制PHA母细胞增殖或在人IL-12受体结合分析中抑制受体结合的活性(参见实施例3)。
短语“表面等离振子共振”包括使得能够通过检测生物传感器基质内蛋白浓度变化，例如使用BIAcore系统分析实时生物特异性相互作用的光学现象(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden and Piscataway，NJ)。进一步描述见实施例5和，U.，et al.(1993)Ann.Biol.Clin.51：19-26；
Figure A20078005173600512
，U.，et al.(1991)Biotechniques 11：620-627；Johnsson，B.，et al.(1995)J.Mol.Recognit.8：125-131；and Johnnson，B.，et al.(1991)Anal.Biochem。198：268-277。
本文所用的术语“Koff”意指抗体从抗体/抗原复合物解离的脱附速率常数。
本文所用的术语“Kd”意指特定抗体抗原相互作用的解离常数。
短语“核酸分子”包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，但优选双链DNA。
正如本文所用的关于编码结合hIL-12的抗体或抗体部分(例如VH、VL、CDR3)，包括“分离的抗体”的核酸，短语“分离的核酸分子”包括核酸分子，其中编码抗体或抗体部分的核苷酸序列没有编码结合除hIL-12外的抗原的抗体或抗体部分的其他核苷酸序列，其他序列可能天然位于人基因组DNA中核酸的侧面。因此例如编码抗IL-12抗体VH区的本发明分离的核酸不含有编码其他结合除IL-12外抗原的VH区的其他序列。短语“分离的核酸分子”还旨在包括编码二价、双特异性抗体的序列，如其中VH和VL区不含有除双链抗体序列外的其他序列的双链抗体。
术语“载体”包括能转运已与其连接的另一核酸分子的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，指环状双链DNA环，其中可以连接另外的DNA片段。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外的DNA片段可以连接到病毒基因组中。某些载体能在其被引入的宿主细胞中自动复制(例如有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其他载体(如非游离型哺乳动物载体)可以通过引入宿主细胞，整合到宿主细胞基因组中，从而与宿主基因组一起被复制。此外，某些载体能指导其可操作地连接到的基因的表达。这样的载体本文指“重组表达载体”(或简单地说是“表达载体”)。一般情况下，用于重组DNA技术中的表达载体常常是质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明旨在包括这样其他形式的表达载体，如病毒载体(例如复制缺陷逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，它们发挥相当的功能。
短语“重组宿主细胞”(或仅“宿主细胞”)包括其中重组表达载体已被引入的细胞。应当理解，这样的术语目的不仅指特定受试者细胞，而且指这样细胞的子代。因为某些修饰由于突变或环境影响可能出现在子代中，这样的子代可能实际上与母细胞不相同，但仍包括在本文所用的术语”宿主细胞“的范围中。
本文中所用的术语“修饰”意指改变抗体或其抗原结合部分中一个或多个氨基酸。该改变可以通过增加，取代或删除一个或多个位置上的氨基酸实现。该改变可使用已知的技术，如PCR突变进行。
短语“接触位置”包括被接触二十六种已知抗体抗原结构之一中的抗原的氨基酸占据的抗体重链可变区或轻链可变区CDR1、CDR2或CDR3中的氨基酸位置。如果任一抗体抗原复合物的26种已知解析结构中的CDR氨基酸接触所述抗原，那么该氨基酸可视为占据接触位置。接触位置比起非接触位置有更高的概率被接触抗原的氨基酸占据。优选地，接触位置是含有接触超过26种结构中3种(＞11.5％)抗原的氨基酸的CDR位置。最优选地，接触位置是含有接触25种结构中8种(＞32％)抗原的氨基酸的CDR位置。
术语“高突变位置”包括占据被认为在抗体体内亲和力成熟过程中有高频率或概率的体细胞高突变的抗体重链可变区或轻链可变区CDR1、CDR2或CDR3区中位置的氨基酸残基。“体细胞高突变的高频率或概率”包括抗体体内亲和力成熟过程中，残基将进行体细胞高突变的5至约40％可能性的频率或概率。应当理解，此声明范围内所有范围也是本发明的一部分，例如5至约30％，例如5至约15％，例如15至约30％。
术语“优选选择性突变位置”包括占据重链可变区或轻链可变区CDR1、CDR2或CDR3区中，可以认为是既接触又高突变位置的位置的氨基酸残基。
短语“选择性突变方法”包括通过选择并单独突变至少一个优选选择性突变位置、高突变和/或接触位置的CDR氨基酸，改善抗体活性的方法。“选择性突变”人抗体是含有使用选择性突变方法选择的位置上的突变的抗体。在另一实施方案中，所述选择性突变方法目的是提供优选地突变抗体重链可变区CDR1、CDR2或CDR3中选择的个别氨基酸残基(下文分别为H1、H2和H3)，或轻链可变区CDR1、CDR2或CDR3中选择的个别氨基酸残基(以下分别称为L1、L2和L3)的方法。氨基酸残基可从优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置选择。个别氨基酸是基于其在轻链或重链可变区中的位置选择的。应该理解，高突变位置也可以是接触位置。在实施方案中，选择性诱变的方法是“靶向的方法。术语“靶向的方法”旨在包括以靶向方式，例如“分组靶向法”(Group-wise targeted approach)或“CDR-方式(wise)靶向法”，优选突变抗体重链可变区CDR1、CDR2或CDR3中或轻链可变区CDR1、CDR2或CDR3中选定的个别氨基酸残基的方法。在“分组靶向法”中，靶向特定组中的个别氨基酸残基进行选择性突变，包括组I(包括L3和H3)、II(包括H2和L1)以及III(包括L2和H1)，所述组以靶向的优先次序列出。在“CDR-方式靶向方法”中，靶向特定CDR中个别氨基酸残基进行选择性突变，靶向的优先顺序如下：H3、L3、H2、L1、H1和L2。将选定的氨基酸残基突变，例如突变为至少两个其他氨基酸残基，并测定突变对抗体活性的影响。以抗体结合特异性/亲和力，和/或抗体中和效价的变化测量活性。应理解所述选择性突变方法可用于优化任何来源包括噬菌体展示衍生的任何抗体、带有人IgG种系基因的转基因动物、从人B细胞分离的人抗体。优选地，所述选择性突变方法用于使用噬菌体展示技术不能进一步优化的抗体。应理解，来自任何来源包括噬菌体展示的抗体、带有人IgG种系基因的转基因动物、从人B细胞分离的人抗体可在选择性突变方法之前或之后进行回复突变。
术语“增强活性的氨基酸残基”包括提高所述抗体活性的氨基酸残基。应当认识到，增强活性的氨基酸残基可取代优选的选择性突变位置、接触位置或高突变位置的氨基酸残基，而且超过一个增强活性的氨基酸残基可出现在一个或多个CDR中。增强活性的氨基酸残基包括提高抗体，例如结合到人IL-12的抗人IL-12抗体结合特异性/亲和力的氨基酸残基。增强活性的氨基酸残基还旨在包括提高抗体，例如抑制人IL-12的人IL-12抗体中和效价的氨基酸残基。
本发明的各方面在以下小节中进一步详述。
I.结合人IL-12的人抗体
本发明提供了结合到人IL-12的分离的人抗体或其抗原结合部分。优选地，本发明的人抗体是重组中和人抗hIL-12抗体。结合到人IL-12的本发明抗体可以例如通过筛选有hIL-12的一个或多个人VL和VH cDNA文库，例如通过实施例1所述的噬菌体展示技术进行筛选。筛选人VL和VH cDNA文库初步确定了一系列抗IL-12抗体，其中一种本文称为“Joe 9″(或″Joe 9野生型″)的抗体被选定进一步开发。Joe 9是相对低亲和力的人IL-12抗体(例如Koff约为0.1秒-1)，但是适用于特异性结合并检测hIL-12。Joe 9抗体的亲和力通过进行重链和轻链CDR的诱变得以提高，生成一组“混合和匹配”的一组轻和重链可变区并进一步突变，得到大量额外的对hIL-12亲和力增加的抗hIL-12抗体(见实施例1，表2(见附录A)和图1A-D的序列比对)。
这些抗体中，本文称作Y61的所述人抗hIL-12抗体表现出结合亲和力显着改善(如Koff约2x10-4秒-1)。该Y61抗hIL-12抗体被选定通过个别突变重链和轻链CDR中特定氨基酸残基进一步亲和力成熟。基于占据优选选择性突变位置、接触和/或高突变位置的氨基酸残基，Y61的氨基酸残基被选择进行定点突变(选择性突变方法)。重和轻链CDR中选定位置取代的概述见图2A-2H。本文称作J695的本发明优选重组中和抗体，由Y61轻链CDR2位置50上将Gly取代为Tyr，以及Y61轻链CDR3位置94上将Gly取代为Tyr而产生。
本发明的一组Joe9野生型至J695的谱系上的抗IL-12抗体的重和轻链可变区的氨基酸序列比对，见图1A-1D。这些序列比对允许鉴别Joe9野生型至J695的谱系上结合hIL-12的本发明抗体的优选重链和轻链可变区的共有序列，以及CDR3、CDR2和CDR1的共有序列。此外，Y61突变分析总结于图2A-2H，允许鉴别Y61至J695谱系上的结合hIL-12的重链和轻链可变区的共有序列，以及结合hIL-12的CDR3、CDR2和CDR1的共有序列，这些序列涵盖带有来自Y61但保留良好hIL-12结合特异性的修饰的序列。所附序列表中序列标识符标识的本发明优选的CDR、VH和VL序列(包括共有序列)总结如下。
  SEQIDNO：  抗体链   区   序列
  1  共有序列Joe 9至J695   CDR H3   (H/S)-G-S-(H/Y)-D-(N/T/Y)
  2  共有序列Joe 9至J695   CDR L3   Q-(S/T)-Y-(D/E)-(S/R/K)-(S/G/Y)-(L/F/T/S)-(R/S/T/W/H)-(G/P)-(S/T/A/L)-(R/S/M/T/L)-(V/I/T/M/L)
  3  共有序列Joe 9至J695   CDR H2   F-I-R-Y-D-G-S-N-K-Y-Y-A-D-S-V-K-G
  4  共有序列Joe 9至J695   CDR L2   (G/Y)-N-(D/S)-(Q/N)-R-P-S
  5  共有序列Joe 9至J695   CDR H1   F-T-F-S-(S/E)-Y-G-M-H
  6  共有序列Joe 9至J695   CDR L1   (S/T)-G-(G/S)-(R/S)-S-N-I-(G/V)-(S/A)-(N/G/Y)-(T/D)-V-(K/H)
  7  共有序列Joe 9至J695   VH   (全VH序列；见序列表)
  8  共有序列Joe 9至J695   VL   (全VL序列；见序列表)
  9  共有序列Y61至J695   CDR H3   H-(G/V/C/H)-(S/T)-(H/T/V/R/I)-(D/S)-(M/K/A/T/S/F/W/H)
  10  共有序列Y61至J695   CDR L3   Q-S-Y-(D/S)-(Xaa)-(G/D/Q/L/F/R/H/N/Y)-T-H-P-A-L-L
  11  共有序列Y61至J695   CDR H2   (F/T/Y)-I-(R/A)-Y-(D/S/E/A)-(G/R)-S-(Xaa)-K-(Y/E)-Y-A-D-S-V-K-G
  12  共有序列Y61至J695   CDR L2   (G/Y/S/T/N/Q)-N-D-Q-R-P-S
  13  共有序列Y61至J695   CDR H1   F-T-F-(Xaa)-(Xaa)-(Y/H)-(G/M/A/N/S)-M-H
  14  共有序列Y61至J695   CDR L1   S-G-G-R-S-N-I-G-(S/C/R/N/D/T)-(N/M/I)-(T/Y/D/H/K/P)-V-K
  15  共有序列Y61至J695   VH   (全VH序列；见序列表)
  16  共有序列Y61至J695   VL   (全VH序列；见序列表)
  17  Y61   CDR H3   H-G-S-H-D-N
  18  Y61   CDR L3   Q-S-Y-D-R-G-T-H-P-A-L-L
  19  Y61   CDR H2   F-I-R-Y-D-G-S-N-K-Y-Y-A-D-S-V-K-G
  20  Y61   CDR L2   G-N-D-Q-R-P-S
  21   Y61   CDR H1   F-T-F-S-S-Y-G-M-H
  22   Y61   CDR L1   S-G-G-R-S-N-I-G-S-N-T-V-K
  23   Y61   VH   (全VH序列；见序列表)
  24   Y61   VL   (全VH序列；见序列表)
  25   J695   CDR H3   H-G-S-H-D-N
  26   J695   CDR L3   Q-S-Y-D-R-Y-T-H-P-A-L-L
  27   J695   CDR H2   F-I-R-Y-D-G-S-N-K-Y-Y-A-D-S-V-K-G
  28   J695   CDR L2   Y-N-D-Q-R-P-S
  29   J695   CDR H1   F-T-F-S-S-Y-G-M-H
  30   J695   CDR L1   S-G-S-R-S-N-I-G-S-N-T-V-K
  31   J695   VH   (全VH序列；见序列表)
  32   J695   VL   (全VH序列；见序列表)
Joe 9野生型亲和力成熟得到的抗体通过表面等离振子共振确定Kd和Koff速率进行功能表征。生成的一系列抗体Koff速率范围为约0.1s-1至1x10-5s-1，更优选Koff约1x10-4s-1至1x10-5s-1或更低。如实施例3所述，表征了抗体体外抑制植物凝集素(PHA)母细胞增殖能力。生成的一系列的抗体IC50值范围为约1x10-6M至1x10- 11M，更优选1x10-10M至1x10-11M或更低。
因此，一方面，本发明提供分离的人抗体或其抗原结合部分，表面等离振子共振确定其结合人IL-12并从人IL-12解离的Koff速率常数为0.1s-1或更少，或其在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6M或更少。在优选实施方案中，所述分离的人IL-12抗体，或其抗原结合部分从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-2s-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-7M或更少。在更优选实施方案中，所述分离的人IL-12抗体，或其抗原结合部分从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-3s-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-8M或更少。在更优选实施方案中，所述分离的人IL-12抗体，或其抗原结合部分从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-4s-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9M或更少。在更优选实施方案中，所述分离的人IL-12抗体，或其抗原结合部分从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-5s-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-10M或更少。在甚至更优选的实施方案中，所述分离的人IL-12抗体，或其抗原结合部分从人IL-12解离的Koff速率常数为1x10-5s-1或更少，或在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-11M或更少。
IL-12抗体的解离速率常数(Koff)可通过表面等离振子共振确定(见实施例5)。一般来说，表面等离振子共振分析使用BIAcore系统(Pharmacia Biosensor，Piscataway，NJ)，通过表面等离振子共振(SPR)测量配体(生物传感器基质上固定化的重组人IL-12)与分析物(溶液中抗体)之间的实时结合相互作用。表面等离振子分析也可以通过固定化分析物(生物传感器基质上的抗体)，并呈递配体(溶液中的重组IL-12)进行。IL-12抗体或其抗原结合部分的中和活性可使用一些合适的体外分析中的一种或多种来评价(见实施例3)。
本领域熟知，抗体重和轻链CDR在抗体对抗原的结合特异性/亲和力中发挥了重要作用。因此，本发明包括具有Joe 9轻、重链CDR的人抗体，以及其他具有已经修饰以提高所述抗体结合特异性/亲和力的CDR的抗体。如实施例1中所示，轻和重链CDR的一系列修饰使人抗hIL-12抗体亲和力成熟。图1A至1D显示一系列范围从Joe 9野生型到J695的结合人IL-12的人抗体的重和轻链可变区的氨基酸序列比对。所述抗体CDR共有序列基序可从序列比对确定(概述如上表)。例如，谱系从Joe 9至J695的VH CDR3的共有基序包括氨基酸序列：(H/S)-G-S-(H/Y)-D-(N/T/Y)(SEQ ID NO：1)，其包括SEQ IDNO：7中所示共有序列HCVR位置95至102的氨基酸。VL CDR3的共有基序包括氨基酸序列：Q-(S/T)-Y-(D/E)-(S/R/K)-(S/G/Y)-(L/F/T/S)-(R/S/T/W/H)-(G/P)-(S/T/A/L)-(R/S/M/T/L-V/I/T/M/L)(SEQ ID NO：2)，其包括SEQ ID NO：8中所示共有序列LCVR位置89至97的氨基酸。
因此，另一方面，本发明提供分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特征：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6或更少；
b)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的重链CDR3；以及
c)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：2的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述抗体进一步包含包含氨基酸序列F-I-R-Y-D-G-S-N-K-Y-Y-A-D-S-V-K-G(SEQ ID NO：3)的VH CDR2(其包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：7的共有序列HCVR位置50至65的氨基酸)，并进一步包含包含氨基酸序列(G/Y)-N-(D/S)-(Q/N)-R-P-S(SEQID NO：4)的VH CDR2(其包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：8的共有序列HCVR位置50至65的氨基酸)。
在另一优选实施方案中，所述抗体进一步包含包含氨基酸序列F-T-F-S-(S/E)-Y-G-M-H(SEQ ID NO：5)的VH CDR1(其包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：7的共有序列HCVR位置27至35的氨基酸)，并进一步包含包含氨基酸序列(S/T)-G-(G/S)-(R/S)-S-N-I-(G/V)-(S/A)-(N/G/Y)-(T/D)-V-(K/H)(SEQ ID NO：6)的VH CDR1(其包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：8的共有序列LCVR位置24至34的氨基酸)。
在又一优选实施方案中，本发明的所述抗体包含包含氨基酸序列SEO ID NO：7的HCVR，并包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：8的LCVR。
另外的共有基序可基于在产生J695抗体的Y61上进行的突变分析确定(总结于图2A-2H)。图2A-2H中所示的图显示，Y61的重和轻链CDR的某些残基能被取代，而不显著削弱所述抗体的hIL-12结合特性。例如，具有十二个不同氨基酸残基的CDR H1中位置30的个别取代没有显着降低抗体的Koff速率，表明那是能用多种不同氨基酸残基取代的位置。因此，基于突变分析(即能被其他氨基酸残基取代的Y61中的位置)确定共有基序。重和轻链CDR3的共有基序分别见SEQ ID NOs：9和10，重和轻链CDR2的共有基序分别见SEQ ID NOs：11和12，重和轻链CDR1的共有基序分别见SEQ ID NOs：13和14。VH和VL区的共有基序分别见SEQ ID NOs：15和16。
因此一方面，本发明特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特征：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9或更少；
b)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：9的重链CDR3；以及
c)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：10的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述抗体进一步包含包含氨基酸序列SEQ IDNO：11的VH CDR2，并进一步包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：12的VL CDR2。
在另一优选实施方案中，所述抗体进一步包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：13的VH CDR1，并进一步包含包含氨基酸序列SEQ IDNO：14的VL CDR1。
在又一优选实施方案中，本发明的所述抗体进一步包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：15的HCVR，并进一步包含包含氨基酸序列SEQID NO：16的LCVR。
本发明优选的抗体，人抗hIL-12抗体Y61经PCR突变所述CDR3，使Joe 9野生型亲和力成熟而制备(如实施例1所述)。通过表面等离振子共振和体外中和分析，Y61具有改善的特异性/结合亲和力。Y61的重和轻链CDR3分别见SEQ ID NOs：17和18，Y61的重和轻链CDR2分别见SEQ ID NOs：19和20，Y61的重和轻链CDR1分别见SEQ ID NOs：21和22。Y61的VH具有氨基酸序列SEQ ID NO：23，Y61的VL具有氨基酸序列SEQ ID NO：24(这些序列见图1A-1D，与Joe9比对)。
因此，另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9或更少；
b)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：17的重链CDR3；以及
c)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：18的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：19的重链CDR2，以及包含氨基酸序列SEQID NO：20的轻链CDR2。
在另一优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：21的重链CDR1，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：22的轻链CDR1。
在又一优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：23的重链可变区，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：24的轻链可变区。
在某些实施方案中，全长抗体包括重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA和IgE恒定区，以及任何同种异型变体，如Kabat(Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health andHuman Services，NIH Publication No.91-3242)中所述。优选地，所述抗体重链恒定区是IgG1重链恒定区。或者，所述抗体部分是IgG1重链可变区。或者所述抗体部分可以是Fab片段、F(ab’2)片段或单链Fv片段。
Y61单个残基的修饰生成图2A-2H所示的一组抗体。每种抗体的特异性/结合亲和力通过表面等离振子共振或体外中和分析确定。
因此另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9或更少；
b)具有包含选自SEQ ID NO：404-SEQ ID NO：469的氨基酸序列的重链CDR3；以及
c)具有包含选自SEQ ID NO：534-SEQ ID NO：579的氨基酸序列的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分具有包含选自SEQ ID NO：335-SEQ ID NO：403的氨基酸序列的重链CDR2，以及包含选自SEQ ID NO：506-SEQ ID NO：533的氨基酸序列的轻链CDR2。
在另一优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分具有包含选自SEQ ID NO：288-SEQ ID NO：334的氨基酸序列的重链CDR1，以及包含选自SEQ ID NO：470-SEQ ID NO：505的氨基酸序列的轻链CDR1。
在又一优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：23的重链可变区，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：24的轻链可变区。
在某些实施方案中，全长抗体包括重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA和IgE恒定区，以及本文的任何同种异型变体，如Kabat(Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health andHuman Services，NIH Publication No.91-3242)中所述。优选地，所述抗体重链恒定区是IgG1重链恒定区。或者，所述抗体部分是IgG1重链恒定区。或者所述抗体部分可以是Fab片段、F(ab’2)片段或单链Fv片段。
本发明尤其优选的重组中和抗体J695经抗体Y61的接触和高突变氨基酸残基的定点诱变制备(见以下实施例2和第III部分)。J695与Y61的不同为Y61中轻链CDR2位置50的Gly被Tyr取代，以及轻链CDR3位置94的Gly被Tyr取代。J695的重和轻链CDR3分别见SEQID NOs：25和26，J695的重和轻链CDR1分别见SEQ ID NOs：29和30。J695的VH具有氨基酸序列SEQ ID NO：31，J695的VL具有氨基酸序列SEQ ID NO：32(这些序列见图1A-1D，与Joe9比对)。
因此另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9或更少；
b)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3；以及
c)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：26的轻链CDR3。
在优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的重链CDR2，以及包含氨基酸序列SEQID NO：28的轻链CDR2。
在另一优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：29的重链CDR1，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：30的轻链CDR1。
在另一优选实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合部分具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：31的重链可变区，以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：32的轻链可变区。
在某些实施方案中，全长抗体包括重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA和IgE恒定区，以及本文的任何同种异型变体，如Kabat(Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health andHuman Services，NIH Publication No.91-3242)中所述。优选地，所述抗体重链恒定区是IgG1重链恒定区。或者所述抗体部分可以是Fab片段、F(ab’2)片段或单链Fv片段。
可以进行谱系从Joe 9至J695，或从Y61至J695上抗体的CDR3、CDR2和CDR1优选共有序列中另外的突变，以提供本发明的另外的抗IL-12抗体。如本文所述，这样修饰的方法可使用标准分子生物学技术，例如PCR突变进行，靶向轻链和/或重链CDR中个别接触或高突变氨基酸残基，然后进行修饰抗体的动力学和功能性分析(例如实施例3中所述的中和分析，以及实施例5中所述的BIAcore分析)。
因此另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-6或更少；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：3的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：5的重链CDR1；或在优选的选择性突变位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：1的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQID NO：3的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：5的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：2的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：4的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：6的轻链CDR1；或在优选的选择性突变位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：2的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQID NO：4的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：6的轻链CDR1的抗体的10倍。
另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9或更少；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：9的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：11的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：13的重链CDR1；或在优选的选择性突变位置、接触位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：9的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：11的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：13的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：10的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：12的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：14的轻链CDR1；或在优选的选择性突变位置、接触位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：10的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：12的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：14的轻链CDR1的抗体的10倍。
本领域普通技术人员应理解，可进行本发明抗体CDR区例如Y61或J695中另外的突变，以提供本发明另外抗IL-12抗体。如上所述，这样的修饰方法可使用标准分子生物学生物技术进行。所述修饰的抗体的功能性和动力学分析分别如实施例3和实施例5中所述的进行。鉴别J695的Y61个别残基的修饰见图2A-2H，并在实施例2中有描述。
因此另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9或更少；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：17的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：19的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：21的重链CDR1；或在优选的选择性突变位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：17的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：19的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：21的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：18的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：20的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：22的轻链CDR1；或在优选的选择性突变位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：18的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：20的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：22的轻链CDR1的抗体的10倍。
因此另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其：
a)在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1x10-9或更少；
b)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：29的重链CDR1；或在优选的选择性突变位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：25的重链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的重链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：29的重链CDR1的抗体的10倍；以及
c)包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：26的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：28的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ IDNO：30的轻链CDR1；或在优选的选择性突变位置、接触位置或高突变位置具有一个或多个氨基酸取代的其突变体，其中所述突变体的koff速率不超过包含包含氨基酸序列SEQ ID NO：26的轻链CDR3；包含氨基酸序列SEQ ID NO：28的轻链CDR2；以及包含氨基酸序列SEQ ID NO：30的轻链CDR1的抗体的10倍。
在又一实施方案中，本发明提供中和人IL-12活性的分离的人抗体或其抗原结合部分，以及至少一种选自狒狒IL-12、狨猴IL-2、黑猩猩IL-12、食蟹猴IL-12和恒河猴IL-12的另外的但不中和小鼠IL-12活性的灵长类动物IL-12。
II重组人抗体的筛选
本发明的重组人抗体可以通过筛选重组组合抗体库，优选用人淋巴细胞mRNA制备的人VL和VH cDNA制备的scFv噬菌体展示库分离。制备和筛选这样的库的方法为本领域所知。除了商业可用的生成噬菌体展示文库的试剂盒外(例如Pharmacia Recombinant PhageAntibody System，目录号27-9400-01；以及Stratagene SurfZAPTM噬菌体展示试剂盒，目录号240612)，尤其易用于生成并筛选噬菌体展示库的方法和反应物的例子可见例如，Kang et al.PCT公开号WO92/18619；Winter et al.PCT公开号WO 92/20791；Breitling et al.PCT公开号WO 93/01288；McCafferty et al.PCT公开号WO 92/01047；Garrardet al.PCT公开号WO 92/09690；Fuchs et al.(1991)Bio/Technology9：1370-1372；Hay et al.(1992)Hum Antibod Hybridomas 3：81-85；Huse etal.(1989)Science 246：1275-1281；McCafferty et al.，Nature(1990)348：552-554；Griffiths et al.(1993)EMBO J 12：725-734；Hawkins et al.(1992)J Mol Biol 226：889-896；Clackson et al.(1991)Nature 352：624-628；Gram et al.(1992)PNAS 89：3576-3580；Garrad et al.(1991)Bio/Technology 9：1373-1377；Hoogenboom et al.(1991)Nuc Acid Res19：4133-4137；以及Barbas et al.(1991)PNAS 88：7978-7982.
此方法中使用的抗体库优选从人VL和VH cDNA制备的scFv库。scFv抗体库优选使用重组人IL-12作为抗原筛选，选择具有IL12结合活性的人重和轻链序列。为筛选IL-12的p35亚基或p70异源二聚体特异性的抗体，在过量游离p40亚基存在下进行筛选分析。亚基优选可例如通过实施例1所述的微Friguet滴定确定。
一旦选定初始人VL和VH片段，进行其中筛选结合IL-12的不同的成对选定VL和VH片段的“混合和匹配”(mix and match)试验，以选择优选的VL/VH成对组合(见实施例1)。此外，为进一步提高与hIL-12结合的亲和力和/或降低脱附速率常数，优选VL/VH对的VL和VH片段可在类似于天然免疫应答中抗体亲和力成熟的体内体细胞突变过程的过程中随机变异，优选在VH和/或VL的CDR3区。此体外亲和力成熟可以通过分别使用与VH CDR3或VL CDR3互补的PCR引物，扩增VH和VL区实现，所述引物在某些位置已“掺加(spiked)”有四种核苷酸碱基的随机混合物，这样得到的PCR产物编码其中随机突变已引入VH和/或VL CDR3区的VH和VL片段。可以再选择和再筛选与hIL-12结合的这些随机突变VH和VL片段，可选择表现出对IL-12高亲和力和低脱附速率的序列。表2(见附录A)显示作为体外亲和力成熟的结果产生的，表现出改变的结合特异性/亲和力的抗体。
从重组免疫球蛋白展示文库选择、分离和筛选本发明的抗hIL-12抗体后，编码选定抗体的核酸可从噬菌体颗粒(例如从噬菌体基因组)回收，并通过标准重组DNA技术亚克隆到其他表达载体中。如果需要，可进一步操作所述核酸，创建本发明其他抗体形式(例如连接到编码另外免疫球蛋白域的核酸，如另外的恒定区)。为表达由筛选重组文库分离的重组人抗体，编码所述抗体的DNA克隆到重组表达载体，并引入哺乳动物宿主细胞，详见下文第四部分。
通过噬菌体展示技术选择人IL-12结合抗体的方法，以及通过随机或定点诱变CDR区使选定的抗体亲和力成熟的方法在实施例1中进一步详述。
正如实施例1中描述的，筛选人VL和VH cDNA文库确定了一系列抗IL-12抗体，其中选择Joe 9抗体进一步开发。Joe 9重链可变区与选自VBASE数据库的重链种系序列比较，表明Joe 9与COS-3种系序列类似。COS-3属于种系序列的VH3家族。
VH3家族是基于核苷酸序列同源性分为7个家族VH1-VH7的人VH种系所有组成成分的一部分(Tomlinson et al.(1992)J.Mol.Biol.，227，776-798 and Cook et al.(1995)Immunology Today，16，237-242)。VH3家族包含最多数量的成员，对种系所有组成成分的贡献最大。对于任何给定的人VH3-种系抗体序列，整个VH3家族中氨基酸序列一致性高(见例如Tomlinson et al.(1992)J.Mol.Biol.，227，776-798andCook et al.(1995)Immunology Today，16，237-242)。VH3家族任意两种种系VH序列间氨基酸序列一致性的范围为约100个VH残基中的69-98个残基(即任意两种种系VH序列间69-98％的氨基酸序列同源性)。对于大多数成对种系序列，至少有80个或更多相同的氨基酸残基(即至少80％的氨基酸序列同源性)。VH3家族成员间高度的氨基酸序列同源性使某些氨基酸残基出现在VH链的CDR和框架区中的关键位点。这些氨基酸残基赋予CDR结构特征。
抗体结构研究已经表明，CDR构象可基于占据CDR和框架区某些位置的关键氨基酸残基，分为规范CDR结构家族。因此，具有相同的关键氨基酸残基的规范结构的不同抗体中，有类似的局部CDR构象(Chothia et al.(1987)J.Mol.Biol.，196，901-917and Chothia et al.(1989)Nature，342，877-883)。在VH3家族中，CDR1和CDR2规范结构的关键位点上，有保守的氨基酸序列一致性(Chothia et al.(1992)J.Mol.Biol.，227，799-817)。
COS-3种系VH基因是VH3家族的成员，是3-30(DP-49)种系VH等位基因的变体。COS-3不同于Joe9VH氨基酸序列之处仅5个位置。Joe9VH和COS-3，以及Joe9VH和其他VH3家族成员间的高度氨基酸序列同源性也赋予高度CDR结构同源性(Chothia et al.(1992)J.Mol.Biol.，227，799-817；Chothia et al.(1987)J.Mol.Biol.，196，901-917and Chothia et al.(1989)Nature，342，877-883)。
熟练技术人员应理解，基于与Joe 9的高氨基酸序列和规范结构一致性，其他VH3家族成员也可用于生成结合于人IL-12的抗体。这可以例如通过链改组技术(Winter et al.(1994)Annual Rev.Immunol.，12，433-55)选择适当的VL，或通过将啮齿动物或其他人抗体CDR包括本发明抗体的CDR，移植到VH3家族框架上进行。
人Vλ种系所有组成成分基于核苷酸序列同源性分为10个家族(Williams et al.(1996)J.Mol.Biol.，264，220-232)。Joe 9轻链可变区与选自VBASE数据库的轻链种系序列比较显示，Joe 9与DPL8λ种系类似。Joe9VL与DPL8序列的不同仅4个框架位置，并与其他Vλ家族成员的框架序列高度同源。基于高氨基酸序列同源性以及与Joe 9类似的规则结构，其他Vλ家族成员也可用来产生结合于人IL-12的抗体。这可以例如通过链改组技术(Winter et al.Supra，)，或将啮齿动物或其他人抗体CDR，包括本发明抗体的CDR，移植到Vλ家族框架上进行。
本发明的方法旨在包括结合到hIL-12的重组抗体，其包含来自种系序列VH3家族成员的重链可变区，和来自种系序列Vλ1家族成员的轻链可变区。此外，熟练技术人员应理解VH3家族重链序列的任意成员可与Vλ1家族轻链序列组合。
本领域熟练技术人员也将认识到，导致种系氨基酸序列变化的DNA序列多态性可存在于种群中(如人的种群)。这种种系序列中的遗传多态性由于自然等位基因变异，可能存在种群的个体中。这种自然等位基因差异通常可导致基因核苷酸序列1-5％的差异。任何以及所有这样核苷酸变化和由此产生的自然等位基因变异导致的种系序列中氨基酸序列多态性在本发明的范围内。
因此一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特征：
a)据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的koff速率常数为0.1S-1或更少，或在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中其抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为IC50为1x10-6M或更少。
b)具有包含选自VH3种系家族成员的氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区在接触或高突变位置具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
c)具有包含选自Vλ1种系家族成员的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述轻链可变区在优选选择性突变位置、接触或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或结合抗原有重链CDR3中的突变。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或结合抗原有轻链CDR3中的突变。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或结合抗原有重链CDR2中的突变。
在优选实施方案中，所述分离的人抗体或结合抗原有轻链CDR2中的突变。
在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体或结合抗原有重链CDR1中的突变。
在另一优选实施方案中，所述分离的人抗体或结合抗原有轻链CDR1中的突变。
普通技术人员通常会明白，基于VH3种系家族成员间或轻链Vλ1种系家族成员间高氨基酸序列的类似性，对种系序列进行突变可提供另外的结合于人IL-12的抗体。表1(见附录A)显示VH3家族成员的种系序列，表明了家族成员内的重要序列同源性。表1还显示了Vλ1家族的种系序列。提供Joe 9的重和轻链序列做比较。可例如在与本发明抗体中进行的那些相同的氨基酸位置，对VH3或Vλ1家族的种系序列(例如Joe 9中的突变)进行突变。所述修饰可使用标准分子生物学技术，例如通过PCR诱变进行，靶向种系序列中的个别氨基酸残基，随后如本文所述对修饰的抗体进行动力和功能分析(如实施例3中所述的中和分析，以及实施例5所述的BIAcore分析)。
因此一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特征：
a)具有包含选自SEQ ID NOs：595-667的氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
b)具有包含选自SEQ ID NOs：669-675的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述轻链可变区在优选选择性突变位置、接触或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
普通技术人员会明白，基于Joe 9和COS-3重链种系序列间，以及Joe 9和DPL8λ种系序列间的高氨基酸序列相似性，对这些种系序列的CDR区进行的其他突变可提供另外的结合于人IL-12的抗体。这样的修饰方法可使用如上所述的标准分子生物学技术进行。
因此一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特征：
a)据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的koff速率常数为0.1S-1或更少，或在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中其抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为IC50为1x10-6M或更少。
b)具有包含COS-3种系氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
c)具有包含DPL8种系氨基酸序列的轻链可变区，其中所述轻链可变区在优选选择性突变位置、接触或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
由于占据轻和重链可变区中CDR和框架区中关键位点的某些氨基酸残基，使这些区具有结构特征。尤其是，对CDR2和CDR1区进行规范结构分类。由于家族成员间的高度氨基酸序列同源性，这些规范特征出现在家族成员间。熟练技术人员会理解，赋予这些规范结构的氨基酸残基处的修饰，将生成结合于IL-12的另外抗体。所述修饰可如上所述使用标准分子生物学技术进行。
因此另一方面，本发明的特征为分离的人抗体，或其抗原结合部分，其具有以下特征：
a)据表面等离振子共振测定，其结合到人IL-12并且从人IL-12解离的koff速率常数为0.1S-1或更少，或在体外植物凝集素母细胞增殖分析(PHA分析)中其抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为IC50为1x10-6M或更少。
b)具有包含选自VH3种系家族成员的氨基酸序列的重链可变区，其中所述重链可变区包含与其他VH3种系家族成员的CDR2结构类似的CDR2，以及与其他VH3种系家族成员的CDR1结构类似的CDR1，并且其中所述重链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变；
c)具有包含选自Vλ1种系家族成员的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含与其他Vλ1种系家族成员的CDR2结构类似的CDR2，以及与其他Vλ1种系家族成员的CDR1结构类似的CDR1，并且其中所述轻链可变区在优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置，具有用增强活性的氨基酸残基进行的突变。
本发明的重组人抗体有与选自VBASE数据库的人种系免疫球蛋白序列同源的可变和恒定区。对重组人抗体进行的突变(例如通过随机突变或PCR突变)产生不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸。此外，由于B细胞生长过程中出现体细胞突变的正常过程，来自人供体的重组抗体库会含有与其相应种系序列不同的抗体序列。应指出的是，如果PCR扩增得到的“种系”序列编码真正种系构型框架区中氨基酸差异(即与真正种系序列相比，扩增序列中的差异)，那么可能理想的是改变这些氨基酸差异，回复到真正的种系序列(即框架残基“回复突变”为种系构型)。因此，本发明可以任选包括回复突变步骤。要做到这一点，所述种系编码的重和轻链的氨基酸序列(如VBASE数据库中发现的例子)首先与突变的免疫球蛋白重和轻链框架氨基酸序列对比，以鉴别与最接近种系序列不同的突变免疫球蛋白框架序列中的氨基酸残基。然后使用遗传密码确定哪些核苷酸应改变，突变的免疫球蛋白的适当核苷酸序列突变回对应于种系序列。突变的免疫球蛋白框架序列的突变通过标准方法进行，例如PCR介导的突变(其中所述突变的核苷酸纳入PCR引物中，这样PCR产物包含该突变)或定点突变。应研究确定为回复突变候选物的每个氨基酸在抗原结合中的直接或间接作用，突变后发现的影响人抗体任何所需特性的任何氨基酸不应包括在最终的人抗体中；作为例子，通过选择性突变方法确定的增强活性的氨基酸不会进行回复突变。确定突变得到的抗体的特性的检测可包括ELISA、竞争性ELISA、体外和体内中和分析和/或(见例如实施例3)各种来源(包括人、灵长目动物和/或其他物种)组织切片的免疫组织化学。
倘若第二种系序列与本发明的人抗体序列在所讨论氨基酸的两侧相同并同线性至少10个，优选12个氨基酸，则为最小化受到回复突变的氨基酸的数量，那些发现与最接近种系序列不同的但与第二种系序列中相应氨基酸一致的氨基酸位置可以保留。这将保证，通过用本发明人抗体处理的受试者中专职抗原呈递细胞呈递到免疫系统的任何肽表位不会与自身抗原，即第二种系序列编码的免疫球蛋白异源，而是一致。回复突变可能发生在抗体优化的任何阶段；优选地，回复突变在选择性突变方法之前或之后直接发生。更优选地，回复突变在选择性突变方法之前直接发生。
III.优选选择性突变位置、接触和/或高突变位置的修饰
通常情况下，具有改善亲和力的抗体的选择可使用如以上第II部分所述的噬菌体展示方法进行。这可以通过随机突变CDR残基的组合实现，并生成含有不同序列抗体的大文库。然而，对于起作用的这些选择方法，所述抗体抗原反应必须趋于平衡，允许随着时间的推移，更高亲和力的抗体优选结合到抗原上。通过获得一定水平的已实现的亲和力(即抗体Y61的亲和力)，当用噬菌体展示技术提高选定的抗IL-12抗体的亲和力时，不能确定允许平衡建立的选择条件(大概是由于抗原和噬菌体颗粒间额外的非特异性相互作用)。因此，具有甚至更高亲和力的抗体不能通过噬菌体展示方法选择。因此对于至少某些抗体或抗原，噬菌体展示方法限于其选择具有高度改善的结合特异性/亲和力的抗体的能力。因此，建立无需抗体的噬菌体展示亲和力成熟的称为选择性突变方法的方法，以克服此限制，本发明提供此方法。虽然开发此选择性突变方法以克服使用噬菌体展示体系的局限，但应指出这种方法也可以与噬菌体展示系统一起使用。此外，选择性诱变方法可用于提高任何抗体的活性。
为提高抗体活性(例如亲和力或中和活性)，理想的是重和轻链中每个CDR位置突变成每种其他可能的氨基酸残基。然而，由于抗体内平均有70个CDR位置，这样的方法将是非常耗时和耗力的。因此，本发明的方法允许通过突变重和/或轻链CDR中仅某些选定的残基来提高抗体活性。此外，本发明的该方法可以提高抗体的活性，而不影响抗体的其他可取的性质。
确定抗体可变区的哪些氨基酸残基与抗原接触，不能基于可变区内的主要序列或其位置准确预测。但是，Kabat et al.进行的具有不同特异性的抗体的序列比对已经确认所述CDR作为抗体中显著不同的可变区内的局部区(Kabat et al.(1971)Ann.NY Acad，Sci.190：382-393，，Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services，NIHPublication No.91-3242)。结构研究已显示，抗原结合表面是通过存在于CDR中的氨基酸残基形成的。CDR外的其他氨基酸残基也已知起结构作用或直接参与抗原结合。因此对于每个抗原抗体对，CDR内或外的氨基酸残基可能是重要的。
Tomlison et al进行的序列比对研究确定了重和轻链CDR1和CDR2中，以及作为体细胞突变频繁位点的一部分kappa链CDR3中的一些位置(Tomlison et al(1996)J.Mol.Biol.256：813-817)。尤其地，位置H31、H31B、H33、H33B、H52B、H56、H58、L30、L31、L31A、L50、L53、L91、L92、L93和L94被确定为体细胞突变的频繁位点。然而，此分析不考虑重要的重链CDR3区，以及已知存在于抗体结合位点中心，并可能提供与抗原重要相互作用的轻链CDR3的部分。此外，Tomlison et al.建议仅体细胞多样性不一定预测特定氨基酸在抗原结合中的作用，并提议接触抗原的保守的氨基酸残基，以及不接触抗原的多样的氨基酸残基。此结论得到体细胞突变对抗体亲和力作用的突变研究的进一步支持(Sharon，(1990)，PNAS，87：4814-7)。高亲和力抗-对-偶氮苯基砷酸盐(azophenylarsonate)(Ars)抗体同时被其相应种系残基取代，生成活性损失两百倍的种系形式的抗Ars抗体。抗Ars抗体的全部亲和力可通过恢复19个体细胞突变中的仅3个进行恢复，这表明可能允许不有助于抗原结合活性的许多体细胞突变。
该结果可部分由抗体多样性本身的性质解释。未成熟B细胞可以产生最初低亲和力的识别一些自身或非自身抗原的抗体。此外，抗体可能会经历可能导致自身反应性的亲和力成熟序列变异的过程。这种低亲和力抗体的高突变可消除自身反应性(“阴性选择”)，并增加对外源抗原的亲和力。因此，对大量抗体主要和结构数据的分析不提供预测以下两者的方法：(1)亲和力成熟过程中与降低亲和力过程中体细胞高突变对不必要抗原的作用，或(2)某一氨基酸怎样有助于特定抗原抗体对的性质。
通过分析抗原抗体复合物一些晶体结构，做了确定特定氨基酸残基在抗原识别中的作用的其他尝试(MacCallum et al.(1996)J.Mol.Biol.262：732-745)。指出位于CDR内部和外部位置的可能作用。CDR中位置涉及26个分析结构中超过10个的抗原结合，包括重链中的H31、H33、H50、H52、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98和H100，和轻链中的L30A、L32、L91、L92、L93、L94、L96。但是作者指出，使用这些和其他结构数据预测抗原接触可能过高或过低预测接触位置，导致不同方法可能不得不用于不同抗原的推断。
Pini et al.描述大噬菌体展示文库中抗体CDR序列中随机选择多个残基，以迅速增加抗体亲和力(Pini et al.(1998)J.Biol Chem.273：21769-21776)。但是，Pini et al.讨论的高亲和力抗体有总共8个位置的突变，由于对于所需最小数量的氨基酸，要检测大量可能组合，所以简化分析哪种变化对提高抗体亲和力是绝对必要的就变得不切实际。
此外，随机化选择多个残基不一定保持抗体其他所需的性质。抗体可取的性质或特征是本领域所知的，包括例如保留如与其他蛋白质或人组织的非交叉反应性，保留接近人种系免疫球蛋白序列的抗体序列，并提高中和效价。其他可取的性质或特性包括保留种交叉反应性的能力，保留表位特异性的能力，以及保留哺乳动物细胞中高表达水平蛋白的能力。所需性质或特性可以使用本领域所知的技术观察或测量，包括但不限于ELISA、竞争ELISA、体外和体内中和分析(见例如实施例3)，不同来源包括人、灵长类动物或其他可能需要来源的组织切片免疫组织化学，以及使用瞬时表达或稳定表达对哺乳动物细胞中的表达的研究。
另外，Pini et al的方法可引入比提高亲和力实际所需的最小数量更多的变化，并可能导致引发人受试者中抗人抗体(HAMA)形成的抗体。进一步地，如其他地方讨论的，由于另外的相互作用包括与其他噬菌体或核糖体组分和抗原的相互作用，这里显示的噬菌体展示，或包括核糖体展示的其他相关方法通过达到一定的抗体和抗原间亲和力可能无法正常起作用，所需达到平衡的条件在合理时间框架内可能不能建立。
普通技术人员可从上文讨论的参考文献的教导中搜集关于抗体多样性来源的有趣科学信息。但是本发明提供了保留抗体其他相关特征或所需特性的同时，增加特定抗原抗体对的抗体亲和力的方法。当考虑将多种不同特性包括结合抗原赋予特定抗体的需求时，这一点尤其重要。
如果起始抗体具有需要保留的所需性质或特性，当提高所述抗体活性时，选择性突变方法可以是维持这些所需性质的最好策略。例如，在Y61诱变中，保留所需性质的同时，目的是增加对hIL-12的亲和力，并且提高所述抗体的中和效价。Y61的所需性质包括(1)保留与其他蛋白或人组织的非交叉反应性，(2)保留良好的表位特异性，即优选在p70(p40/p35)异源二聚体的环境中识别p40表位，从而防止与游离、可溶p40的结合干扰；和(3)生成具有尽可能接近其各自种系免疫球蛋白序列的重和轻链氨基酸序列的抗体。
在一个实施方案中，当提高亲和力和/或中和效价时，本发明的方法提供了选择性突变方法作为保留抗体所需性质或特性的策略。术语“选择性突变方法”如上所定义，并包括个别突变选定的氨基酸残基的方法。待突变的氨基酸残基可以首先从优选的选择性突变位置，然后从接触位置，随后从高突变位置选择。单个选定的位置可突变为至少两种其他氨基酸残基，突变对抗体所需性质，并测定提高抗体活性的作用。
选择性突变方法包括步骤：
以以下顺序选择候选物1)优选选择性突变位置；2)接触位置；3)高突变位置，并基于抗体重和轻链可变区内位置的定位排列所述位置(CDR3优于CDR2，CDR2优于CDR1)；
以排列顺序将候选物优选选择性突变位置、高突变和/或接触位置个别突变为一切可能的其他氨基酸残基，并按顺序分析个别突变对抗体活性的影响，以确定增强活性的氨基酸残基；
如有必要，逐步组合单个活性增强的氨基酸残基，并分析各种组合对抗体活性的影响；基于与其产生免疫的可能性相关的氨基酸取代的位置和特性，选择带有增强活性的氨基酸残基的突变体抗体，并对突变体抗体位置评定排列等级。最高排列等级给予包含几乎与种系数据库中描述的可变区序列相同的氨基酸序列，或具有与其他人抗体相当的氨基酸序列的突变体抗体。较低排列等级给予含有在种系序列或其他人抗体序列中很少遇到的氨基酸取代的突变体抗体。最低排列等级给予具有种系序列或另一人抗体序列中没有遇到的氨基酸取代的突变体抗体。如上文所列，包含至少一种位于CDR3中增强活性氨基酸残基的突变体抗体优于包含至少一种位于CDR2中增强活性氨基酸残基的突变体抗体，后者优于包含至少一种位于CDR1中增强活性氨基酸残基的突变体抗体。重链可变区的CDR优于轻链可变区的那些。
还可以研究例如当与其相应母抗体比较时突变体抗体活性的提高。突变体抗体活性的提高可以例如通过中和分析，或表面等离振子共振分析结合特异性/亲和力(见例如实施例3)确定。优选地，活性提高可以比母抗体高至少2-20倍。活性提高可以比母抗体至少高″x1″至″x2″倍，其中″x1″和″x2″为2至20间的整数，并包括2至20，包括所述范围内的范围，例如2-15，例如5-10。
还可以研究具有增强活性的氨基酸残基的突变体抗体，以确定突变后是否至少一种其他所需性质已被保留。例如检测抗hIL-12抗体(1)保留与其他蛋白或人组织的非交叉反应性，(2)保留表位识别，即优选在p70(p40/p35)异源二聚体的环境中识别p40表位，从而防止与游离、可溶p40的结合干扰；和(3)生成有尽可能接近其各自种系免疫球蛋白序列的重和轻链的氨基酸序列的抗体，并基于与种系序列的差异的数量，确定哪些抗体最不可能引发人免疫应答。对具有超过一个增强活性的氨基酸残基，例如至少两个或至少三个增强活性的氨基酸残基的抗体进行同样的观察，以确定是否已保留所需性质或特性。
“选择性突变方法”在Y61突变中的用途的例子如下所述。个别突变H31S→E、L50→Y或L94G→Y每个都改善抗体中和活性。但是，当检测组合克隆时，组合克隆H31S→E+L50→Y+L94G→Y的活性不好于L50→Y+L94G→Y(J695)。因此，将CDR1位置31的种系氨基酸残基Ser改变为Glu对于J695活性比Y61有所提高不是必须的。因此所述选择性突变方法，确认有助于最终活性的最小数量的改变，从而降低最终抗体产生免疫反应的可能性，并保留抗体的其他所需性质。
如第IV部分所述，编码选择性突变方法制备的VH和VL的分离DNA可转变为全长抗体链基因，Fab片段基因或scFV基因。对于选择性突变方法制备的VH和VL区的表达，如第IV部分详述的，编码重和轻链的表达载体可转染到各种宿主细胞中。优选的宿主细胞包括或者原核宿主细胞，例如E coli，或真核宿主细胞，例如酵母细胞，例如酿酒酵母。如第IV部分详述，最优选的真核宿主细胞为哺乳动物细胞。
选择性突变方法提供制备具有提高活性，但之前没有用其他方式进行抗体亲和力成熟的抗体。所述选择性突变方法提供制备具有提高的亲和力，已经受回复突变的抗体的方法。所述选择性突变方法还提供提高亲和力成熟抗体活性的方法。
熟练技术人员会认识到，选择性突变方法可用于本领域已知的标准抗体操作技术。实例包括但不限于CDR移植抗体、嵌合抗体、scFV片段、全长抗体和其他来源如转基因小鼠的人抗体的Fab片段。
抗体的快速大范围突变分析包括使用核糖体展示技术进行体外转录和翻译(见例如Hanes et al.，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.94：4937-4942；Dall Acqua et al.，(1998)Curr.Opin.Struc.Biol.8：443450；He etal.，(1997)Nucleic Acid Res.25：5132-5134)，以及授权给Kawasaki的美国专利号5,643,768和5,658,754。选择性突变方法还提供制备具有提高的活性，可用核糖体展示技术选择的抗体的方法。
在本发明的方法中，抗体或其抗原结合部分通过改变HCVR和/或LCVR的CDR中个别位置进一步修饰。虽然这些修饰可在噬菌体展示的抗体中进行，但由于可使用在其他类型宿主系统，例如细菌、酵母或哺乳动物细胞表达系统中表达的抗体进行，所以所述方法是有利的。选择进行修饰的CDR中个别位置是基于作为接触和/或高突变位置的位置。
本文所定义的优选接触位置和高突变位置见表3(见附录A)，其与本发明的方法一致的修饰在实施例2中详述。优选接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96。优选的高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93。更优选的氨基酸残基(称作“优选的选择性突变位置”)是既接触又高突变位置，选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94。尤其地，优选接触位置选自L50和L94。
优选的增强活性的氨基酸残基取代位于选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置的氨基酸残基。更优选的增强活性的氨基酸残基取代位于选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的位置的氨基酸残基。尤其地，优选的增强活性的氨基酸残基取代位于选自L50和L94的位置的氨基酸残基。
一般来说，本发明的方法涉及选择感兴趣的母抗体或其抗原结合部分的重或轻链CDR中特定优选的选择性突变位置、接触和/或高突变位置，随机突变单个位置(例如通过基因方法使用诱变寡核苷酸，生成修饰抗体的“微型文库”)，或突变位置为特定的所需氨基酸以鉴别增强活性的氨基酸表达，并纯化所述修饰的抗体(例如在非噬菌体展示宿主体系中)，测量抗原的所述修饰抗体的活性(例如通过BIAcore分析，测量koff速率)，必要时对于其他CDR位置重复这些步骤，并组合经证明具有改善的活性的个别突变，并检测是否所述组合生成比母抗体或其抗原结合部分具有更高活性(例如亲和力或中和效价)的抗体。
因此，在一个实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分活性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)以以下顺序选择互补决定区(CDR)内的1)优选选择性突变位置、2)接触位置，或3)高突变位置进行突变，从而鉴别选定的优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而创建一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性；
e)任选地，对于至少一种其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置，重复步骤a)至d)；
f)在母抗体或其抗原结合部分中组合经证明具有改善的活性的个别突变，形成组合抗体，或其抗原结合部分；以及
g)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。优选地，所述选定的抗体具有改善的活性，而未损失或保留如上所述母抗体的至少一种所需的特性或性质。所需的特性或性质可由本领域普通技术人员使用本领域已知技术测量或观察。
优选的接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96。优选的高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93。更优选的优选选择性突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93和L94。尤其优选的接触位置选自L50和L94。
因此，在另一实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分活性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)选择互补决定区(CDR)内的优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置进行突变；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而创建一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)任选地，对于至少一种其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置，重复步骤a)至d)；
f)在母抗体或其抗原结合部分中组合经证明具有改善的活性的两种单个增强活性的氨基酸残基，以形成组合抗体，或其抗原结合部分；以及
g)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
优选的接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96。优选的高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93。更优选的优选选择性突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93和L94。尤其优选的接触位置选自L50和L94。
因此，在另一实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分活性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)选择互补决定区(CDR)内的优选选择性突变位置、接触位置，或高突变位置进行突变；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触位置或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而创建一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)任选地，对于至少一种其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置，重复步骤a)至d)；
f)在母抗体或其抗原结合部分，组合三种单个经证明具有改善的活性的增强活性的氨基酸残基，形成组合抗体或其抗原结合部分；以及
g)评价带有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述增强活性的氨基酸残基取代位于选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96位置的氨基酸残基。
突变个别选定位置后，突变的克隆可测序，以鉴定哪种氨基酸残基已经被引入每个克隆的选定位置。可选择少量克隆(例如约24个)测序，统计上应生成10-15个独有的抗体，而可测序更大量的克隆(如超过60个)，以确保鉴别选定位置有每个可能取代的抗体。
在一个实施方案中，首先选择重和/或轻链CDR3区内接触和/或高突变位置进行突变。但是对于已经通过噬菌体展示筛选，随机突变CDR3区而体外亲和力成熟的抗体，可能优选首先选择重和/或轻链CDR1或CDR2内的接触和/或高突变位置。
在更优选的实施方案中，首先选择重和/或轻链的CDR3区中优选的选择性突变位置进行突变。但是，对于已经通过噬菌体展示筛选，随机突变CDR3区而体外亲和力成熟的抗体而言，可优选首先选择重和/或轻链CDR1或CDR2中优选的选择性突变位置。
在另一优选实施方案中，通过选择性突变方法优化选定抗体如下顺序进行：选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置每个首先突变为至少两种其他氨基酸(优选5-14种其他氨基酸)，鉴定所得抗体的增加的亲和力、中和效价(以及可能还有其他地方讨论的至少一种其他保留的特性或性质)的特征。如果单个优选选择性突变位置的突变根本没有增加亲和力或中和效价或增加得不够，并且如果甚至取代优选选择性突变位置氨基酸的多个增强活性的氨基酸的组合没有产生满足靶活性(包括亲和力和/或目标中和效价)的组合抗体，则会从H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A和L96选择另外的氨基酸残基进行选择性突变，并且每个突变为至少两种其他氨基酸残基(优选5-14种其他氨基酸)，鉴定所得抗体的增加的亲和力、中和效价(以及还可能在其他地方讨论的至少一种其他保留的特性或性质)的特征。
如果选自H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A和L96的单个氨基酸残基的突变根本没有增加增加活性(包括亲和力和/或中和效价)或增加得不够，并且如果甚至取代那些位置氨基酸的多个增强活性的氨基酸的组合没有产生满足靶活性(包括亲和力和/或目标中和效价)的抗体，则会从H33B、H52B、L31A选择另外的氨基酸残基进行选择性突变，突变为至少两种其他氨基酸残基(优选5-14个氨基酸)，鉴定所得抗体的增加的亲和力、中和效价(以及还可能在其他地方讨论的至少一种保留的特性或性质)的特征。
应理解，具有所需活性(包括亲和力和中和效价)的抗体一旦被鉴别，顺序选择性突变方法就可在以上概述的任何步骤终止。如果预选位置的突变已经鉴别增强活性的氨基酸残基，但组合抗体仍未满足设定的活性靶标(包括亲和力和中和效价)和/或如果鉴别的增强活性的氨基酸残基还影响其他所需特性并因此不可接受，则剩下的CDR残基可进行突变(见第IV部分)。
本发明的方法可用于提高抗体或其抗原结合部分的活性，以达到预定靶活性(例如预定亲和力和/或中和效价，和/或所需性质或特性)。
因此，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分活性的方法，以获得预定靶活性，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)选择选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而创建第一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价第一组突变抗体，或其抗原结合部分的活性，以确定单个选择性突变位置的突变是否产生具有预定靶活性或部分靶活性的抗体或其抗原结合部分；
e)以逐步的方式在母抗体，或其抗原结合部分组合经证明具有改善的活性的个别突变，形成组合抗体，或其抗原结合片段。
f)评价所述组合抗体或其抗原结合部分的活性，以确定所述组合抗体或其抗原结合部分是否有预定的靶活性或部分靶活性。
g)如果步骤d)或f)没有产生具有预定目标活性的抗体或其抗原结合部分，或产生具有仅部分活性的抗体，则选自H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A和L96的另外的氨基酸残基突变为至少两种其他氨基酸残基，从而产生第二组突变抗体或其抗原结合部分；
h)评价第二组突变抗体或其抗原结合部分的活性，确定选自H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A和L96的单个氨基酸残基的突变是否产生具有预定靶活性或部分活性的抗体或其抗原结合部分；
i)以逐步的方式在母抗体，或其抗原结合部分中组合经证明具有改善活性的步骤g)的个别突变，形成组合抗体，或其抗原结合片段；
j)评价所述组合抗体或其抗原结合部分的活性，以确定所述组合抗体或其抗原结合部分是否有预定的靶活性或部分靶活性；
k)如果步骤h)或j)没有产生具有预定靶活性的抗体或其抗原结合部分，或产生具有仅部分活性的抗体，则选自H33B、H52B和L31A的另外的氨基酸残基突变为至少两种其他氨基酸残基，从而产生第三组突变抗体或其抗原结合部分；
l)评价第三组突变抗体或其抗原结合部分的活性，确定选自H33B、H52B和L31A的单个氨基酸残基的突变是否产生具有预定靶活性或部分活性的抗体或其抗原结合部分；
m)以逐步的方式在母抗体，或其抗原结合部分中组合经证明具有改善活性的步骤k)的个别突变，形成组合抗体，或其抗原结合片段。
n)评价所述组合抗体或其抗原结合部分的活性，以确定所述组合抗体或其抗原结合部分是否有预定的靶活性，从而生成具有具有预定靶活性的抗体或其抗原结合部分。
可使用一些突变方法，包括PCR装配，Kunkel(dut-ung-)和硫代磷酸盐(Amersham Sculptor试剂盒)寡核苷酸定点诱变。
各种各样宿主表达体系可用于表达突变的抗体，包括细菌、酵母、杆状病毒和哺乳动物表达体系(以及噬菌体展示表达体系)。合适的细菌表达载体的例子为pUC119(Sfi)。其他抗体表达体系本领域已知，和/或在以下第IV部分描述。
本发明的方法生成的修饰抗体或其抗原结合部分可不依赖于噬菌体展示方法筛选鉴别。因此本发明的方法对于提高通过噬菌体展示体系选择得到，但其活性通过噬菌体展示体系突变不能进一步提高的重组母抗体或其抗原活性尤其有利。
因此，在另一实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分亲和力的方法，其包含
a)提供通过噬菌体展示体系选择得到，但其活性通过所述噬菌体展示体系中的突变不能进一步提高的重组母抗体或其抗原结合部分；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示体系中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性；
e)在至少一个其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置重复步骤b)至d)；
f)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善活性的个别突变，形成组合抗体，或其抗原结合片段；以及
g)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分活性改善的抗体或其抗原结合部分。
优选的接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96。优选的高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93。更优选的优选选择性突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93和L94。尤其优选的接触位置选自L50和L94。
如上所述，当保留抗体其他性质或特性时，以现有方法不可能或很难得具有增加的结合亲和力和中和效价的抗体。但是本发明的方法可容易地鉴别这样的抗体。经本发明方法的抗体可来自任何来源。
因此，在另一实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分活性的方法，其包含：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在合适的表达系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特征，其中所述性质或特征是所述抗体中需要被保留的性质或特征；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有活性改善且至少一种保留的性质或特征的抗体或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，并且所述其他特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，其他特性选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自来自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置，其他特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，所述其他特性选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留抗原表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
如果因此，抗体对特定抗原的亲和力应提高，但噬菌体展示(或包括核糖体展示的相关体系)方法不再适用，且其他所需性质或特性应保留，那么可使用本发明的方法。因此，在本发明的另一实施方案中，提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特性，其中所述性质或特性需要保留，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，活性改善并有至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
f)任选地，在至少一个其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置重复步骤a)至e)；
g)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，并有至少一种保留的性质或活性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
h)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，活性改善并有至少一种保留的其他性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自来自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选的选择性突变位置，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包括：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特性，其中所述性质或特性需要保留，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，活性改善并有至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自来自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一实施方案中，提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供重组母抗体或其抗原结合部分；这是通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善；
b)筛选互补决定区(CDR)内优选的选择性突变位置、接触或高突变位置进行突变，从而鉴别选定的接触或高突变位置；
c)将所述选定的优选选择性突变位置、接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的至少一种其他性质或特性，其中所述性质或特性需要保留，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，活性改善并有至少一种保留的特性的抗体或其抗原结合部分。
f)任选地，在至少一个其他优选选择性突变位置、接触或高突变位置重复步骤a)至e)；
g)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，并有至少一种保留的其他特性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
h)评价所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，活性改善并有至少一种保留的性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
在优选实施方案中，所述接触位置选自H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在另一优选实施方案中，所述高突变位置选自H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53和L93，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述选择性突变的残基选自来自H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94的优选选择性突变位置，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
在更优选实施方案中，所述接触位置选自L50和L94，并且所述其他的特征选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
IV.其他CDR残基的修饰
归根结底，通过任何方式鉴别的特定抗体抗原对中的所有CDR残基作为增强活性的氨基酸残基被需要，和/或对结合于抗原和/或保留抗体其他任何所需性质或特性所直接或间接需要。这样的CDR残基被称作“优选的选择性突变位置”。应注意，在特定环境中优选的选择性突变残基还可以通过其他方式鉴别，包括抗体抗原共结晶和分子建模。
如果鉴别重点在上述优选的选择性突变位置、接触或高突变位置的增强活性的氨基酸的优选尝试已穷尽，或者如果需要进一步改进，则剩下的CDR残基可如下所述修饰。应当认识到，根据以上讨论的实施方案，抗体可能已经在任何一个或多个接触或高突变位置被修饰，但可能还需要进一步改善。因此，在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供母抗体，或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内的氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的位置个别突变例如为至少两种其他氨基酸残基，从而生成突变抗体或一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该突变抗体或该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价该突变抗体或该组突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的变化；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
如果单个残基的突变不够，则可包括其他残基；因此，在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供母抗体，或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)在至少一个其他CDR位置重复步骤b)至d)，该CDR位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置；
f)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善活性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成组合抗体，或其抗原结合片段；以及
g)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性，直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分活性改善的母抗体或其抗原结合部分。
如果鉴别重点在上述接触或高突变位置的增强活性的氨基酸的优选尝试已穷尽，或者如果需要进一步改进，且所讨论的抗体不能通过诱变和噬菌体展示(或相关核糖体展示)方法进一步优化，则剩下的CDR残基可如下所述修饰。应当认识到，根据以上讨论的实施方式，抗体可能已经在任何一个或多个选择性突变位置、接触或高突变位置被修饰，但可能还需要进一步改善。
因此，在另一实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步提高的重组母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的接触或高突变位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达所述组；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的变化；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有改善的活性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
如果个别突变不足以增加抗体亲和力，则突变中可包括其他残基。因此，在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善的母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)在至少一个其他位置重复步骤b)至d)，该位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94的位置；
g)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
h)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性或其他性质或特性，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，活性改善的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
如果鉴别重点在所述优选选择性突变位置、接触或高突变位置的增强活性的氨基酸的优选尝试已穷尽，或者需要进一步改进，则保留抗体的其他性质或特性是重要的。
因此，在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性，而不影响其他特性的方法，其包含：
a)提供母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的变化；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，具有改善的活性，且保留其他性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应，2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
如果单个残基的诱变不够，则可包括其他残基；因此在另一实施方案中，本发明提供提高抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包括：
a)提供母抗体，其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变；
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e.)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的改变；
e)在至少一个其他CDR位置重复步骤b)至e)，该位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置；
f)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，且不影响至少一种其他性质或特性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
g)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分，相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性或至少一种其他特性或性质的保留，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有活性改善，且至少一种保留的其他性质或特性的抗体或其抗原结合部分。
优选选择性突变位置、接触和高突变残基的突变可能不能充分增加抗体的亲和力，突变和噬菌体展示方法(或相关核糖体展示方法)可能不再有用，应保留抗体的至少一种其他特性或性质。
因此，在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分亲和力的方法，其包含：
a)提供通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善的母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)评价所述组的突变抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，在至少一种其他性质或特性上的变化；直至得到相对于所述母抗体，或其抗原结合部分，活性改善的抗体或其抗原结合部分。
优选地，所述其他的特性或性质选自1)保留与其他蛋白或人组织无交叉反应；2)保留表位识别，即优选在p70 p40/p35异源二聚体的环境中识别p40表位，防止与游离、可溶p40的结合干扰，和/或3)生成具有接近种系免疫球蛋白序列的抗体。
如果单个残基的突变不够，则可包括其他残基；因此，在另一实施方案中，本发明提供改善抗体或其抗原结合部分的活性的方法，其包含：
a)提供通过噬菌体展示系统筛选得到的，但其活性在所述噬菌体展示系统中通过突变不能进一步改善的母抗体或其抗原结合部分；
b)除了H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96，选择互补决定区(CDR)内氨基酸残基进行突变。
c)将所述选定的位置个别突变为至少两种其他氨基酸残基，从而生成一组突变抗体，或其抗原结合部分，并在非噬菌体展示系统中表达；
d)评价该组突变抗体，或其抗原结合部分相对于所述母抗体或其抗原结合部分的活性以及至少一种其他性质或特性的保留，从而鉴别增强活性的氨基酸残基；
e)在至少一个其他CDR位置重复步骤b)至d)，该位置既非b)下选择的位置，也非H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94和L96的位置；
f)在所述母抗体，或其抗原结合部分中，组合经证明具有改善的活性，且不影响至少一种其他性质或特性的至少两种单个增强活性的氨基酸残基，形成结合抗体，或其抗原结合片段；以及
g)评价具有两种增强活性的氨基酸残基的所述组合抗体或其抗原结合部分相对于所述母抗体，或其抗原结合部分的活性以及至少一种性质或特性的保留，直至得到相对于所述母抗体或其抗原结合部分，具有改善的活性且至少一种其他保留的特性或性质的抗体或其抗原结合部分。
V.抗体的表达
本发明的抗体或其抗体部分可通过宿主细胞中免疫球蛋白轻和重链基因的重组表达制备。为重组表达抗体，宿主细胞用一种或多种携带有编码抗体免疫球蛋白轻和重链DNA片段的重组表达载体转染，这样所述轻和重链在宿主细胞中表达，优选地分泌到其中培养宿主细胞的培养基中，抗体可从该培养基中回收。标准重组DNA方法学用于获得抗体重和轻链基因，使这些基因合并入重组表达载体中，并将所述载体引入宿主细胞，例如Sambrook，Fritsch and Maniatis(eds)，Molecular Cloning；A Laboratory Manual，Second Edition，Cold SpringHarbor，N.Y.，(1989)，Ausubel，F.M.et al.(eds.)Current Protocols inMolecular Biology，Greene Publishing Associates，(1989)以及Boss et al.的美国专利号4,816,397中所述的那些。
如第II部分所述，为得到编码Joe 9wt或Joe 9wt相关抗体重链可变区的DNA片段，从人文库中筛选对人IL-12特异性的抗体，并突变。一旦获得编码Joe 9wt或Joe 9wt相关VH和VL片段的DNA片段，则通过标准方法例如PCR定点突变(PCR介导的诱变，其中突变的核苷酸包括在PCR引物中，这样PCR产物含有所述突变体)或其他定点诱变方法，诱变这些序列。表现出所需活性和结合特异性/亲和力水平的人IL-12抗体，例如J695，通过标准重组DNA技术进一步操作，例如将可变区基因转化为全长抗体基因链、Fab片段基因或scFv基因。这些操作中，编码VL或VH的DNA片段可操作地连接到另一编码另一蛋白的DNA片段，例如抗体恒定区或柔性接头上。此上下文中所用的术语“可操作地连接”指两个DNA片段连接在一起，这样这两个DNA片段编码的氨基酸序列保持在框内。
编码VH区的分离DNA通过可操作地将编码VH的DNA链接到另一编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的DNA分子，可转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列在本领域是已知的(见例如Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services，NIHPublication No.91-3242)，包括这些序列的DNA片段可通过标准PCR扩增得到。如Kabat(，Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health andHuman Services，NIH Publication No.91-3242)中所述，重链可变区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区和任何同种异型变体，但最优选的是IgG1或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，编码VH的DNA可操作地连接到另一编码仅重链CH1恒定区的DNA分子。
通过将编码VL的DNA连接到另一编码轻链恒定区CL的DNA分子，编码VL区的分离的DNA可转化成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列为本领域所知(见例如Kabat，E.A.，et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，FofthEdition，U.S.Department of Health and Human Services，NIH PublicationNo.91-3242)，包括这些区的DNA片段可通过标准PCR扩增得到。轻链恒定区可以是k或λ恒定区，但最优选λ恒定区。
为创建scFv基因，编码VH和VL的DNA片段可操作地连接到另一编码柔性接头，例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的片段上，这样VH和VL可作为带有通过柔性接头连接的VL和VH区的邻接单链蛋白表达(见例如Bird et al.(1988)Science 242：423-426；Huston et al.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883；McCafferty et al.，Nature(1990)348：552-554)。
为表达本发明的所述抗体或抗体部分，如上所述得到的编码部分或全长轻和重链的DNA插入表达载体中，这样所述基因可操作地连接到转录和翻译控制序列。在此上下文中，术语“可操作地连接”指抗体基因连接到载体中，这样载体中的转录和翻译控制序列起到其预期的调控抗体基因转录和翻译的功能。选择表达载体和表达控制序列与使用的表达宿主细胞相容。抗体轻链基因和抗体重链基因可插入分离的载体中，或更通常地，两种基因都插入到相同表达载体中。抗体基因通过标准方法(例如连接抗体基因片段和载体上的互补限制性位点和载体，或者如果没有限制位点则平端连接)插入到表达载体中。插入J695或J695相关轻或重链序列之前，表达载体可能已经携带抗体恒定区序列。例如，将J695或J695相关VH或VL序列转化为全长抗体基因的一种方法是将其分别插入已编码重链恒定和轻链恒定区的表达载体中，这样VH片段可操作连接到载体内CH片段上，VL片段可操作连接到载体内CL片段上。另外或或者，所述重组表达载体可编码利于抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。抗体链基因可克隆到载体中，这样信号肽可框内连接到抗体链基因的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自非免疫球蛋白蛋白的信号肽)。
除了抗体链基因，本发明的重组表达载体可携带控制宿主细胞内抗体链基因表达的调控序列。术语“调控序列”意在包括控制抗体链基因转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如多腺苷酸化信号)。这样的调控序列例如在Goeddel；Gene ExpressionTechnology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)中描述。本领域技术人员应理解，表达载体的设计，包括调控序列的选择可能取决于如待转化宿主细胞的选择、所需蛋白的表达水平等这样的因素。哺乳动物宿主细胞表达的优选调控序列包括指导哺乳动物细胞内高水平蛋白表达的病毒元件，例如来自以下的启动子和/或增强子：巨细胞病毒(CMV)(例如CMV启动子/增强子)、猿猴病毒40(SV40)(例如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒。病毒调控元件及其序列的进一步描述见例如Stinski的美国专利No.5,168,062，Bell et al.的美国专利No.4,510,245和Schaffner et al.的美国专利No.4,968,615，Bujard et al.的美国专利No.5,464,758和Bujard et al.的美国专利No.5,654,168。
除了抗体链基因和调控基因，本发明的重组表达载体可携带另外的序列，例如调控宿主细胞内载体复制的序列(例如复制起点)和选择性标记序列。选择性标记基因有利于其中已引入载体的宿主细胞的筛选(见例如Axel et al.的美国专利No.4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，一般选择性标记基因赋予其中已经引入载体的宿主细胞对例如G418、潮霉素或甲氨蝶呤的药物抗性。优选的选择性标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于使用甲氨蝶呤筛选/扩增的dhfr-宿主细胞)以及neo基因(用于G418筛选)。
对于轻和重链的表达，编码重和轻链的表达载体通过标准技术转染到宿主细胞中。术语“转染”的各种形式意在包括各种各样普遍用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等等。虽然理论上在原核或真核宿主细胞表达本发明的抗体都是可能的，但在真核细胞，最优选哺乳动物宿主细胞中表达抗体是最优选的，因为这样的真核细胞，尤其是哺乳动物细胞比原核细胞更有可能组装和分泌适当折叠并有免疫学活性的抗体。表达本发明重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中华仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括Urlaub and Chasin，(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220中所述的dhfr-CHO细胞，使用例如R.J.Kaufmanand P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.159：601-621中所述的DHFR选择性标记)、NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞时，所述抗体通过将宿主细胞培养足够长的一段时间，以允许抗体在宿主细胞中表达，或更优选地将抗体分泌到其中生长宿主细胞的培养基中制备。抗体可使用标准蛋白纯化方法从培养基中回收。
宿主细胞还可用于制备完整抗体的部分，例如Fab片段或scFv分子。应理解上述过程的变化在本发明的范围内。例如可能理想的是用编码本发明抗体的或者轻链或者重链(但非二者)的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术还可用于除去一些或全部编码对于结合到hIL-12非必须的轻或重链或两者的DNA。这样的截短的DNA分子表达的分子也包括在本发明的抗体中。此外，可制备双功能抗体，其中一条重和一条轻链是本发明的抗体，通过标准化学交联方法将本发明的抗体交联到第二抗体使其他重和轻链对除hIL-12外的抗原是特异性的。
在本发明的抗体或其抗原结合部分重组表达的优选体系中，编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体通过磷酸钙介导的转染引入dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体中，抗体重和轻链基因每个都可操作连接到增强子/启动子调控元件上(例如来自SV40、CMV、腺病毒等等，例如CMV增强子/AdML启动子调控元件或SV40增强子/AdMLP启动子调控元件)，以推动高水平的基因转录。重组表达载体还携带DHFR基因，其允许筛选使用甲氨蝶呤选择/扩增的载体转染的CHO细胞。培养选定的转化体宿主细胞，使其表达抗体重和轻链，完整抗体从培养基回收。标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、筛选转化体、培养宿主细胞并从培养基回收抗体。本发明的抗体或其抗原结合部分可在转有人免疫球蛋白基因的动物(例如小鼠)中表达(见例如Taylor，L.D.et al.(1992)Nucl.AcidsRes.20：6287-6295)。还可修饰植物细胞，生成表达本发明抗体或其抗原结合部分的转基因植物。
鉴于以上情况，本发明另一方面涉及可用于本发明的抗体和抗体部分重组表达的核酸、载体和宿主细胞组合物。优选地，本发明的特征为编码J695的CDR，或J695的完整重和/或轻链可变区的分离的核酸。因此，在一个实施方案中，本发明的特征为编码抗体重链可变区的分离的核酸，该核酸编码包括氨基酸序列SEQ ID NO：25的J695重链CDR3。优选地，编码抗体重链可变区的核酸进一步编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：27的J695重链CDR2。更优选地，编码抗体重链可变区的核酸进一步编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：29的J695重链CDR1。甚至更优选地，分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：31的抗体重链可变区(J695的完整VH区)。
在其他实施方案中，本发明的特征为编码抗体轻链可变区的分离的核酸，其编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：26的J695轻链CDR3。优选地，编码抗体轻链可变区的核酸进一步编码包括氨基酸序列SEQID NO：28的J695轻链CDR2。更优选地，编码抗体轻链可变区的核酸进一步编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：30的J695轻链CDR1。甚至更优选地，分离的核酸编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：32的抗体轻链可变区(J695的完整VL区)。
本发明还提供编码抗体重链和抗体轻链的重组表达载体。例如，在一个实施方案中，本发明提供重组表达载体，其编码：
a)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：31的可变区的抗体重链；以及
b)具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：32的可变区的抗体轻链。
本发明还提供其中一个或多个本发明的重组表达载体已被引入的宿主细胞。优选地，宿主细胞是哺乳动物细胞，更优选地，所述宿主细胞是CHO细胞、NS0细胞或COS细胞。更进一步地，本发明提供通过在适合的培养基中培养本发明宿主细胞，直至合成出本发明重组人抗体的合成本发明重组人抗体的方法。本方法可进一步包括从培养基中分离重组人抗体。
VI.药物组合物和药物给药
本发明的抗体和抗体部分可包括在适合施用于受试者的药物组合物中。通常所述药物组合物包括本发明的抗体和药学上可接受的载体。本文所用的“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌药物、等渗和延迟吸收物质等等。药学上可接受的载体的例子包括一种或多种水、盐水、磷酸盐缓冲液、葡萄糖、甘油、乙醇等，以及其组合。在许多情况下，优选包括等渗剂，例如糖、多元醇，例如组合物中的甘露醇、山梨醇或氯化钠。药学上可接受的载体可进一步包括少量提高抗体或抗原部分半衰期或有效性的辅助物质，如润湿或乳化剂、防腐剂或缓冲剂。
本发明的抗体和抗体部分可纳入适合胃肠外给药的药物组合物中。优选地，抗体或抗体部分将制备成含0.1-250mg/ml抗体的注射液。注射液可由白色或琥珀色小瓶、安瓿或预装的注射器中的液体或冻干剂型组成。缓冲剂可以是L-组氨酸(1-50mM)，最佳5-10mM，pH值5.0至7.0(最佳pH值为6.0)。其他合适的缓冲剂包括但不限于琥珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠或磷酸钾。浓度0-300mM的氯化钠可以用来减轻溶液毒性(液体制剂形式最佳为150mM)。冻干剂型可以包括冷冻保护剂，主要是0-10％蔗糖(最佳0.5-1.0％)。其他合适的冷冻保护剂包括海藻糖和乳糖。冻干剂型可包括填充剂，主要是1-10％甘露醇(最好2-4％)。稳定剂可用于液体和冻干剂型，主要是1-50mM L-蛋氨酸(最好5-10mM)。其他适合的填充剂包括甘氨酸、精氨酸，可以以0-0.05％聚山梨醇酯-80(最佳0.005-0.01％)包括于其中。另外的表面活性剂包括但不限于：聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性剂。
在优选实施方案中，药物组合物包括剂量约0.01mg/kg-10mg/kg的抗体。抗体更优选的剂型包括每隔一周给药1mg/kg，或每周给药0.3mg/kg。
本发明的组合物可以是各种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，如溶液(例如注射和不溶性溶液)、分散剂或悬浮剂、片剂、丸剂、粉末剂、脂质体和栓剂。优选的形式取决于给药模式和治疗应用。典型优选的组合物为注射或不溶性溶液形式，如类似那些用于以其他抗体被动免疫人的组合物。优选的给药形式为胃肠道(例如静脉注射、皮下、腹腔、肌肉注射)。在优选实施方案中，抗体通过静脉输注或注射给药。在另一优选实施方案中，该抗体是由肌肉注射或皮下注射给药。
通常药物组合物必须在制备和储存条件下无菌并稳定。组合物可以以溶液、微乳、分散剂、脂质体，或其他适合高药物浓度的有序结构配制。无菌注注射液可将所需量的活性组合物(即抗体或抗体部分)与上面列举的一种或组合成分合并到适当溶剂中，按需随后过滤消毒。一般分散剂是通过将活性化合物混合在含基本分散介质和以上列举的那些中所需其他成分的无菌溶剂中而制备的。无菌情况下，制备无菌注射溶液的冻干粉、制备的优选方法为从先前其无菌过滤的溶液得到活性成分和其他所需成分粉末的真空干燥和喷雾干燥。例如可通过使用包衣例如卵磷脂，在分散剂的情况下通过保持所需例子大小，以及通过使用表面活性剂，维持溶液适当的流动性。注射成分的延长吸收可通过使组合物中含有延迟吸收的物质，例如单硬脂酸盐和明胶实现。
本发明的抗体和抗体部分可通过本领域已知的各种方法给药，虽然对许多治疗应用而言，优选的给药途径/方式是皮下注射、静脉注射或输注。熟练技术人员应理解，给药途径和/或方式取决于所希望的结果而变化。在某些实施方式中，活性化合物用保护化合物抗快速释放的载体制备，例如控释制剂，包括植入剂、透皮贴剂和微囊输送系统。可使用生物降解、生物相容性的聚合物，如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这样的制剂的许多方法是授予专利的或本领域技术人员通常已知的。见例如Sustained andControlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson，ed.，MarcelDekker，Inc.，New York，1978。
在某些实施方案中，本发明的抗体或抗体部分可以例如与惰性稀释剂或可吸收食用的载体一起口服给药。该化合物(如果需要，则和其他成分)也可封装在硬的或软壳明胶胶囊中，压缩成片，或直接掺入受试者的饮食中。对于口服治疗给药，化合物可能与赋形剂一起，以摄取片、含片、片剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、薄片剂等的形式使用。将本发明的化合物以除了胃肠道给药外给药，可能必须用防止其失活的化合物包衣或共同给药。
附加的活性化合物也可包括在所述化合物中。在某些实施方案中，本发明的抗体或抗体部分与和/或一种或多种另外的用于治疗其中IL-12活性是有害的疾病的治疗药物共同配制和/或共同给药。例如，本发明的抗IL-12抗体或抗体部分可与一种或多种结合其他靶标的另外的抗体(例如结合其他细胞因子或结合细胞表面分子的抗体)一起配制和/或联用给药。另外，本发明的一种或多种抗体可与两种或多种前述治疗药物联用。这样的联合治疗可有利地利用更低剂量的施用的治疗药物，因此避免与各种单一疗法有关的可能毒性或并发症。熟练专业人员应理解，当本发明的抗体用作联合治疗的一部分时，更低剂量的抗体比仅将所述抗体施用于受试者更理想(例如，协同治疗作用可通过使用联合疗法实现，这反过来又允许使用更低剂量的抗体，从而实现理想的治疗作用)。
白介素12在与各种涉及免疫和炎性因素的疾病的相关病理中起关键作用。这些疾病包括，但不仅限于类风湿关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎、莱姆关节炎、银屑病性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎症性肠病、胰岛素依赖型糖尿病、甲状腺炎、哮喘、过敏性疾病、银屑病、皮炎硬皮病、特应性皮炎，移植物抗宿主病，器官移植排斥反应，器官移植相关的急性或慢性免疫疾病、结节病、动脉粥样硬化、弥漫性血管内凝血、川崎氏病、格雷夫病、肾病综合征、慢性疲劳综合征、韦格纳肉芽肿病，过敏性紫癜、肾脏显微血管炎、慢性活动性肝炎、葡萄膜炎、感染性休克、中毒性休克综合征、脓毒症综合征、恶病质、传染病、寄生虫病、获得性免疫缺陷综合症、急性横贯性脊髓炎、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏症、阿尔茨海默氏症、中风、原发性胆汁性肝硬化、溶血性贫血、恶性肿瘤、心脏衰竭、心肌梗死、Addison′s病、散发性多腺缺陷I型和散发性多腺缺陷II型、施密特氏综合征、成人(急性)呼吸窘迫综合征、脱发、斑秃，阴性反应阴性关节病、关节病、Reiter病、银屑病性关节病、溃疡性结肠炎性关节病、肠源性脊椎炎、衣原体、耶尔森氏菌和沙门氏菌相关关节病、脊椎关节炎、动脉粥样硬化疾病/动脉硬化、特异反应性过敏、自身免疫性水疱病、寻常性天疱疮、落叶性天疱疮、类天疱疮、线性IgA病、自身免疫性溶血性贫血、Coombs试验阳性溶血性贫血、后天性恶性贫血、少年恶性贫血，肌痛性脑脊髓炎/皇家自由病、慢性皮肤粘膜念珠菌感染、巨细胞动脉炎、原发性硬化性肝炎、隐原性自身免疫性肝炎、获得性免疫缺陷病综合征、获得性免疫缺陷相关疾病、丙型肝炎、常见的各种免疫缺陷(普通易变型免疫缺陷)、扩张型心肌病、女性不孕、卵巢早衰、肺纤维化疾病、隐原性致纤维化性肺泡炎，发炎后间质性肺病、间质性肺炎、结缔组织病伴间质性肺病、混合性结缔组织病相关性肺病、系统性硬化病伴间质性肺病、类风湿关节炎相关性间质性肺疾病、系统性红斑狼疮相关性肺病、皮肌炎/多发性肌炎相关性肺病、干燥疾病相关性肺病、强直性脊柱炎相关性肺病、脉管炎弥漫性肺病、含铁血黄素沉着病相关性肺病、药物诱导的间质性肺疾病、辐射纤维化、闭塞性细支气管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴细胞浸润性肺病、感染后间质性肺疾病、痛风性关节炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎(经典型自身免疫性或狼疮性肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗体肝炎)、自身免疫性介导的低血糖、B型胰岛素抵抗伴黑棘皮病、甲状旁腺功能低下症、急性免疫疾病相关的器官移植，慢性免疫疾病相关的器官移植、骨关节病、原发性硬化性胆管炎、特发性白细胞减少症、自身免疫性中性粒细胞减少症，肾病NOS、血管球性肾炎、微观肾脉管炎、莱姆病、盘状红斑狼疮、特发性男性不育症或NOS、精子自身免疫、多发性硬化症(所有亚类)、胰岛素依赖型糖尿病、交感性眼炎、肺动脉高压继发性结缔组织病、Goodpasture氏综合征，结节性多动脉炎的肺表现、急性风湿热、类风湿脊椎炎、Still病、系统性硬化症、Takayasu′s病/动脉炎、自身免疫性血小板减少症、特发性血小板减少症、自身免疫性甲状腺疾病、甲状腺功能亢进症，自身免疫性甲状腺功能低下症(桥本病)、萎缩性自身免疫性甲状腺功能减退症，原发性黏液水肿、晶状体源性葡萄膜炎、原发性血管炎和白癜风。本发明的人抗体和抗体部分可用于治疗自身免疫性疾病，特别是与炎症有关的那些，包括类风湿脊椎炎、过敏、自身免疫性糖尿病、自身免疫性葡萄膜炎。
优选地，如第VII部分详细描述的，本发明的抗体或其抗原结合部分用于治疗类风湿性关节、克罗恩病、多发性硬化症、胰岛素依赖性糖尿病和银屑病
本发明的人抗体或抗体部分还可以与一种或多种另外的用于治疗自身免疫和炎性疾病的治疗药物一起给药。
本发明的抗体或其抗体部分可单独使用或联用，以治疗这样的疾病。应该理解，本发明的抗体或其抗原部分可单独使用或与另外的物质例如治疗药物合用，所述另外的物质由本领域技术人员为其目的而筛选。例如，所述另外的物质可以是本领域已知用于治疗用本发明抗体治疗的疾病。另外的物质还可以是赋予治疗组合物有益属性的物质，例如影响组合物黏度的物质。
应进一步理解，包括在本发明中的组合是用于其目的那些组合。以下所述的物质是说明性目的，而非限制。为本发明一部分的组合可以是本发明的抗体，以及至少一种选自下表的另外的物质。如果所述组合是这样，则形成的组合物可起到其预期的功能，则所述组合还可以包括超过一种的另外物质，例如两种或三种另外的物质。
优选的组合是也称作NSAIDS的包括如布洛芬的药物的非甾体抗炎药。其他优选的组合为包括脱氢皮质醇的皮质类固醇；当与本发明的抗IL-12抗体合用治疗受试者时，通过降低所需甾类的剂量，降低甚至消除所使用甾类的熟知副作用。本发明的抗体或抗体部分与之合用治疗类风湿性关节炎的药物的非限制性例子包括以下：抑制细胞因子抗炎药(CSAID)；其他人细胞因子或生长因子例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF的抗体或拮抗剂。本发明的抗体或其抗体结合部分可与细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90，或其配体包括CD154(gp39或CD40L)的抗体合用。
治疗药物优选的组合可在不同的点干扰自身免疫和随后的炎性级联效应；优选的例子包括TNF拮抗剂如嵌合人源化抗体或人TNF抗体D2E7，(1996年2月9日提交的美国申请序号08/599,226)、cA2(RemicadeTM)、CDP 571、抗TNF抗体片段(例如CDP870)，以及可溶性p55或p75 TNF受体、其衍生物、(p75TNFR1gG(EnbrelTM)或p55TNFR1gG(Lenercept)、可溶性IL-13受体(sIL-13)，还有TNFα转化酶(TACE)抑制剂；就相同原因而言，类似地IL-1抑制剂(例如白介素-1转化酶抑制剂，如Vx740或IL-1RA)是有效的。其他优选组合包括白介素11、抗P7s和p-选凝素糖蛋白配体(PSGL)。在又一优选组合是自身免疫应答中的其他关键角色，其可能与IL-12功能起相似作用、取决于IL-12功能或与IL-12功能一致；尤其优选的是包括IL-18抗体或可溶性IL-18受体，或IL-18结合蛋白的IL-18拮抗剂。已经证实，IL-12和IL-18具有部分一致但不同的功能，两者拮抗剂的组合可能是最有效的。在又一优选组合是非消耗性抗CD4抑制剂。但是其他优选组合包括共刺激途径CD80(B7.1)或CD86(B7.2)的拮抗剂，包括抗体、可溶性受体或拮抗性配体。
本发明的抗体或其抗原结合部分也可与药物联用，如甲氨蝶呤、6-MP、硫唑嘌呤、柳氮磺吡啶、美沙拉嗪、奥沙拉秦、氯喹/羟氯喹、青霉胺、金硫苹果酸根(肌内和口服)、硫唑嘌呤、秋水仙碱、皮质类固醇(口服、吸入和局部注射)、β-2肾上腺素受体激动剂(沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗)、黄嘌呤(茶碱、氨茶碱)、色氨酸盐、奈多罗米、酮替芬、异丙托铵和氧托溴铵、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸吗乙基酯、来氟米特、如布洛芬的NSAID、皮质类固醇如强的松龙，磷酸二酯酶抑制剂、腺苷酸激动剂、抗血栓药物、补体抑制剂、肾上腺素药物、干扰促炎细胞因子信号传导的药物，如TNFα或IL-1(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)、IL-I转化酶抑制剂(如Vx740)、抗P7s、P-选择素糖蛋白配体(PSGL)、TNFα转化酶(TACE)抑制剂、T细胞信号传导抑制剂如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体及其衍生物(如可溶性p55或p75TNF受体，及衍生物p75TNFRIgG(EnbrelTM)和p55TNFRIgG(Lenercept)、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、可溶性IL-13受体(sIL-13))和抗炎性细胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ)。优选组合包括甲氨蝶呤或来氟米特，中度或重度类风湿关节炎的情况下为环孢霉素。
本发明抗体或抗体部分可与之合用的炎性肠病治疗药物的非限制性例子包括以下：布地奈德；表皮生长因子；皮质类固醇；环孢菌素，柳氮磺胺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤；甲硝唑；脂氧合酶抑制剂；美沙拉嗪；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1β单克隆抗体；抗IL-6单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶咪唑化合物；其他人细胞因子或生长因子如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF的抗体或拮抗剂。本发明的抗体或其抗原结合部分可与细胞表面因子如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90的抗体或其配体合用。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以与药物合用，例如甲氨蝶呤、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸吗乙基酯、来氟米特、NSAID如布洛芬，皮质类固醇如强的松龙、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗血栓药物、补体抑制剂、肾上腺素能药物、干扰炎性细胞因子信号传导的药物，如TNFα或IL-1(如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)、IL-1β转换酶抑制剂(例如Vx740)、抗P7s、p-选择素糖蛋白配体(PSGL)、TNFα转换酶抑制剂、T细胞信号传导抑制剂如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂，可溶性细胞因子受体及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受体和sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、可溶性IL-13受体(sIL-13))和抗炎细胞因子(如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ)。
其中抗体或抗原结合部分可与之合用的克罗恩病治疗药物的优选例子包括以下：TNF拮抗剂，例如抗TNF抗体，D2E7(1996年2月9号提交的美国申请序号08/599,226)、cA2(RemicadeTM)、CDP 571、抗TNF抗体片段(例如CDP870)、TNFR-Ig构建物(p75TNFRIgG(EnbrelTM)和p55TNFRIgG(Lenercept))、抗P7s、P-选择素糖蛋白配体(PSGL)、可溶性IL-13受体(sIL-13)和PDE4抑制剂。本发明的抗体或其抗原结合部分可与皮质类固醇，例如布地奈德和地塞米松合用。本发明的抗体或其抗原结合部分也可与药物合用，例如柳氮磺胺吡啶、5-氨基水杨酸和奥沙拉嗪，以及干扰炎性细胞因子如IL-1合成或起作用的药物，例如IL-1β转换酶抑制剂(如Vx740)和IL-1ra。本发明的抗体或其抗原结合部分还可与T细胞信号传导抑制剂，例如酪氨酸激酶抑制剂6-巯基嘌呤合用。本发明的抗体或其抗原结合部分可与IL-11合用。
本发明的抗体或抗体部分可与之合用的治疗多发性硬化症的治疗药物的非限制性例子包括以下：皮质类固醇；强的松龙；甲基强的松龙；硫唑嘌呤；环磷酰胺；环孢菌素；甲氨蝶呤；4-氨基吡啶；替扎尼定；干扰素-β1a(Avonex；Biogen)；干扰素-β1b(Betaseron；Chiron/Berlex)；共聚物1(Cop-1；Copaxone；Teva PharmaceuticalIndustries，Inc.)；高压氧；静脉注射免疫球蛋白；克拉屈滨；其他人细胞因子或生长因子，例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF的抗体或拮抗剂。本发明的抗体或其抗原结合部分可与细胞表面分子如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90或其配体的抗体合用。本发明的抗体或其抗原结合部分可与药物合用，如甲氨蝶呤、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸吗乙基酯、来氟米特、NSAID如布洛芬、皮质类固醇如强的松龙、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷酸激动剂、抗血栓药物、补体抑制剂、肾上腺素能药物、干扰促炎性细胞因子信号传导的药物，
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或IL-1(如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂)、IL-1β转换酶抑制剂(例如Vx740)、抗P7s、P-选择素糖蛋白配体(PSGL)、TACE抑制剂、T细胞传导抑制剂如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂，可溶性细胞因子受体及其衍生物(如可溶性p55或p75 TNF受体、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、可溶性IL-13受体(sIL-13))和抗炎细胞因子(如IL-4、IL-10、IL-13和TGFβ)。
其中抗体或其抗原结合部分能与之结合的治疗多发性硬化症的优选例子包括干扰素β，例如IFNβ1a和IFNβ1b；copaxone、皮质类固醇、IL-1抑制剂、TNF抑制剂和CD40配体和CD80的抗体。
本发明的药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明抗体或抗体部分。“治疗有效量”指为实现所需治疗结果，必须的剂量和一段时间的有效量。抗体或抗体部分的治疗有效量可根据例如疾病状态、年龄、性别和个体体重，以及抗体或抗体部分引发个体所需应答的能力等因素而变化。治疗有效量还是其中治疗有益效果超过抗体或抗体部分任何毒性或有害作用的量。“预防有效量”指为实现所需预防结果，必须的剂量和一段时间的有效量。一般由于预防剂量在疾病之前或更早阶段用于受试者，所以所述预防有效量会少于治疗有效量。
可以调整剂量方案，以提供最佳的理想反应(例如治疗或预防反应)。例如可单剂量给药，可一些分剂量随时间推移给药，或如紧急治疗情况所示，剂量可成比例降低或增加。尤其有利的是配制剂量单位形式的胃肠外组合物，以便于给药和剂量均匀。本文使用的剂量单位形式指适合作为待治疗哺乳动物受试者单一剂量的物理离散单位；每个单位含有预定量的经计算与所需药物载体一起产生所需治疗效果的活性化合物。本发明剂量单位形式的说明由以下规定并直接取决于(a)活性化合物的特有性质以及希望实现的特定治疗或预防效果，(b)所述化合物固有的限制，这样的活性化合物用于对治疗敏感的个体。
本发明抗体或抗体部分的治疗或预防有效量的典型非限制范围为0.01-20mg/kg，更优选1-10mg/kg，甚至更优选0.3-1mg/kg。但必须指出的是，剂量可能会随待减轻的疾病类型和严重程度而变化。有待进一步理解的是，对任何特定受试者，特定剂量方案应随时间，根据个体需要以及对人给药或监督组合物给药的人的专业判断而调整，并且本文所列剂量范围仅是典型，不是为了限制所述组合物的范围或施用。
VII.本发明抗体的用途
鉴于其结合到hIL-12的能力，本发明的抗hIL-12抗体或其部分，可使用常规免疫分析，如酶联免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)或组织免疫组织化学，用于检测hIL-12(例如生物样品，如血清或血浆中)。本发明提供检测生物样品中hIL-12的方法，其包含使生物样品与本发明的抗体或抗体部分接触，并检测结合hIL-12的抗体(或抗体部分)或未结合抗体(或抗体部分)，从而检测生物样品中的hIL-12。抗体直接或间接地用可检测物质标记，以利于检测结合或未结合的抗体。合适的检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料。合适酶的例子包括：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶，或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的例子包括链霉素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合适的荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基氨基荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；合适的放射性物质的例子包括125I、131I、35S或3H。
除了标记抗体，hIL-12可利用可检测物质标记的rhIL-12标准和未标记的抗hIL-12抗体，通过竞争免疫分析法，在生物液体中检测。在此分析中，生物样品、标记rhIL-12标准和抗hIL-12抗体合并，检测结合到未标记抗体的标记rhIL-12标准的量。生物样品中hIL-12的量与结合到抗hIL-12抗体的标记rhIL-12标准的量成反比。
本发明的Y61和J695抗体还可用于检测来自人以外的种中IL-12，尤其是来自灵长类动物中的IL-12。例如，Y61可用于检测食蟹猴、恒河猴中的IL-12。J695可用于检测食蟹猴、恒河猴和狒狒中的IL-12。但是，两种抗体都不与小鼠或大鼠IL-12交叉反应(见实施例3，小节F)。
本发明的抗体或抗体部分能体外(见实施例3)和体内(见实施例4)中和hIL-12活性。因此，本发明的抗体或抗体部分可用于抑制具有本发明的抗体与之交叉反应的IL-12的人受试者或其他哺乳动物(哺乳动物例如狒狒、食蟹猴和恒河猴)受试者中，例如含有hIL-12的细胞培养物中的IL-12活性。在优选实施方案中，本发明提供分离的人抗体或其抗原结合部分，其中和人IL-12，以及至少一种选自狒狒IL-12、狨猴IL-12、黑猩猩IL-12、食蟹猴IL-12和恒河猴IL-12的另外的灵长类动物IL-12的活性，但其不中和小鼠IL-12的活性。优选地，所述IL-12是人IL-12。例如在含有或怀疑含有hIL-12的细胞培养物中，本发明的抗体或抗体部分可加到培养基中，以抑制培养物中hIL-12活性。
在另一实施方案中，本发明提供抑制患其中IL-12活性是有害的受试者的IL-12活性。IL-12已经涉及各种疾病的病理学(Windhagen etal.，(1995)J.Exp.Med.182：1985-1996；Morita et al.(1998)Arthritis andRheumatism.41：306-314；Bucht et al.，(1996)Clin.Exp.Immunol.103：347-367；Fais et al.(1994)J.Interferon Res.14：235-238；Parronchi et al.，(1997)Am.J.Path.150：823-832；Monteleone et al.，(1997)Gastroenterology.112：1169-1178，and Berrebi et al.，(1998)Am.J.Path152：667-672；Parronchi et al(1997)Am.J.Path.150：823-832)。本发明提供抑制患这样疾病的受试者中的IL-12活性的方法，此方法包含将本发明的抗体或抗体部分施用于受试者，从而抑制受试者中IL-12活性。优选地，IL-12是人IL-12，所述受试者是人受试者。或者，受试者可以是表达本发明抗体与之交叉反应的IL-12的哺乳动物。更进一步地，所述受试者可以是其中已经引入hIL-12的哺乳动物(例如通过施用hIL-12或通过表达hIL-12转基因)。本发明的抗体可为治疗目的施用于人受试者(以下进一步讨论)。另外，本发明的抗体可出于兽医之目的或作为人疾病的动物模型，施用于表达抗体与之交叉反应的IL-12的非人哺乳动物。考虑到后者，这样的动物模型可用于评价本发明抗体的治疗疗效(例如检测给药剂量和时程)。
本文所用的短语“其中IL-12活性是有害的疾病”指包括疾病或其他紊乱，其中患所述疾病的受试者中出现IL-12，已证实或怀疑是所述疾病的病理生理学原因或促使所述疾病恶化的因素。因此，其中IL-12活性是有害的疾病是其中预计抑制IL-12活性以减轻所述疾病症状和/或进程的疾病。这样的疾病例如通过增加患所述疾病的受试者生物流体中IL-12的浓度(例如增加受试者血清、血浆、滑液等中的IL-12的浓度)得以证实，这可以例如通过使用如上所述的抗IL-12抗体检测。有很多其中IL-12活性是有害的疾病的例子。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分可用于治疗本文所述的疾病或紊乱。在另一实施方案中，抗体或其抗原结合部分可用于制备治疗本文所述疾病的药物。本发明的抗体或抗体部分在治疗一些非限制性特定疾病中的用途下文进一步讨论：
A.类风湿关节炎
白介素-12被认为在炎性疾病，例如类风湿关节炎中起作用。已经从类风湿关节炎患者的滑液中检测到可诱导的IL-12p40信息，已证实IL-12存在于类风湿关节炎患者的滑液中(见例如Morita et al.，(1998)Arthritis and Rheumatism 41：306-314)。已发现IL-12阳性细胞存在于类风湿关节炎滑膜的衬里层中。本发明的人抗体和抗体部分可用于治疗，例如类风湿关节炎、幼年型类风湿关节炎、莱姆关节炎、类风湿脊椎炎、骨关节炎和痛风性关节炎。一般来说，抗体或者抗体部分是系统给药，虽然对某些疾病而言，抗体或抗体部分的局部给药可能是有益的。本发明的抗体或者抗体部分还可与一种或多种用于治疗自身免疫疾病的治疗药物合用。
在类风湿关节炎的胶原诱导的关节炎(CIA)鼠模型中，关节炎之前用抗IL-12mAb(大鼠抗小鼠IL-12单克隆抗体，C17.15)治疗小鼠，深度抑制关节炎的发生，并减少疾病的发生率和严重程度。关节炎发病后早期用抗IL-12mAb治疗，降低严重程度，但疾病发病后用抗IL-12mAb进行的之后治疗对疾病严重程度作用最小。
B.克罗恩病
白介素12还在炎症性肠病、克罗恩病中起作用。克罗恩病患者肠粘膜中IFN-γ和IL-12表达增加(见例如Fais et al.，(1994)J.InterferonRes.14：235-238；Parronchi et al.，(1997)Amer.J.Pathol.150：823-832；Monteleone et al.，(1997)Gastroenterology 112：1169-1178；Berrebi et al.，(1998)Amer.J.Pathol.152：667-672)。抗IL-12抗体已证实抑制小鼠结肠炎模型，例如TNBS诱导结肠炎IL-12基因敲除小鼠，以及最近IL-10基因敲除小鼠的疾病。因此，本发明的抗体或抗体部分可用于治疗炎症性肠病。
C.多发性硬化症
白介素-12被认为是多发性硬化症的关键中介体。可证明在患有多发性硬化症患者的病变中表达可诱导的IL-12p40信息或IL-12自身(Windhagen et al.，(1995)J.Exp.Med.182：1985-1996，Drulovic et al.，(1997)J.Neurol.Sci.147：145-150)。多发性硬化症的慢性进行性患者IL-12循环水平升高。对多发性硬化症患者T细胞和抗原呈递细胞(APCs)的研究揭示了自保持的一系列免疫相互作用是导致Th1型免疫反应的进行性多发性硬化症的基础。T细胞分泌的
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增加使APCs生成的IL-12增加，这使导致Th1型免疫激活长期状态的循环和疾病持续(Balashov et al.，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.94：599-603)。多发性硬化症中IL-12的作用已经利用小鼠和大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)多发性硬化症模型进行了研究。在小鼠多发性硬化症的复发型多发性EAE动物模型中，用抗IL-12mAb预治疗延迟麻痹并降低临床分数。在麻痹高峰或随后的临床缓解期，用抗IL-12mAb治疗降低临床分数。因此，本发明的抗体或抗原结合部分可能有助于缓解与人多发性硬化症相关的症状。
D.胰岛素依赖型糖尿病
白介素12被认为是胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)的重要中介体。施用IL-12诱发NOD小鼠的IDDM，IDDM继承性转移模型中，抗IL-12抗体有保护作用。早发性IDDM患者往往经历了所谓的“蜜月期”，期间保留了一些残余胰岛细胞功能。这些残余胰岛细胞产生胰岛素，并且调节血糖的水平优于施用的胰岛素。用抗IL-12抗体治疗这些早期发病的患者可以防止胰岛细胞的进一步破坏，从而维持内源性胰岛素源。
E.银屑病
白介素-12被认为是银屑病的关键中介体。银屑病包括与Th1型细胞因子表达谱相关的急性和慢性皮肤损伤(Hamid et al.(1996)J.Allergy Clin.Immunol.1：225-231；Turka et al.(1995)Mol.Med.1：690-699)。IL-12p35和p40mRNA在患病人体皮肤样本中检出。因此，本发明的抗体或抗原结合部分可有助于减轻慢性皮肤病如银屑病。
从以下不应该被解释为以任何方式进行限制的实施例进一步说明本发明。如本申请通篇引用的所有引用文献，包括参考文献、已授权专利以及公开的专利申请的内容在此明确引入参考。还应当认识到，后面所附所有表(见附录A)的内容引作参考。
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实施例
实施例1：抗IL-12抗体的分离
A.筛选IL-12结合抗体
hIL-12的抗体通过筛选三个独立的scFv噬菌体展示库分离，这三个独立的scFv噬菌体展示库使用来自从人扁桃体(称作scFv 1)、扁桃体和外周血淋巴细胞(PBL)(称为scFv 2)和骨髓衍化的淋巴细胞(称作BMDL)的mRNA的人VL和VH衍生的cDNA制备。构建文库和筛选方法在Vaughan et al.(1996)Nature Biotech.14：309-314中描述。
使用抗原、人IL-12p70亚基、人IL-12p40亚基、嵌合IL-12(小鼠p40/人p35)、小鼠IL-12、生物素化人IL-12和生物素化嵌合IL-12筛选文库。IL-12特异性抗体使用标准方法，通过将抗原包被在免疫管上进行筛选(Marks et al.，(1991)J.Mol.Biol.222：581-597)。scFv文库2使用IL-12或生物素化IL-12筛选，并生成大量IL-12特异性结合物(binder)。选择5种不同的克隆型，以BstN1酶消化模型测定，并通过DNA测序确认。主要的克隆型为VHDP58/VLDPL11、VHDP77/VLDPK31、VHDP47/VL和VHDP77/VLDPK31，所有这些都识别IL-12的p40亚基。
用IL-12p70筛选BMDL文库，生成3种不同的克隆型。发现其中两种是交叉反应克隆。占优势的克隆测序，由VHDP35/VLDP组成。此克隆识别IL-12的p40亚基。用IL-12p70筛选scFv文库1，没有产生特异性IL-12抗体。
为确认优选结合到IL-12的p70异源二聚体或p35亚基，而非p40亚基的IL-12抗体，使用合并的scFv 1+2文库和BMDL文库。为选择识别p70异源二聚体或p35亚基的IL-12抗体，存在游离p40下预培养噬菌体文库并筛选。分离的克隆测序，发现9种不同的抗体谱系。通过“微Friguet”滴定进一步分析亚基偏好。用ELISA根据生物素捕获的IL-12滴定含scFv的上清液，确定ED50。产生50％ED的scFv浓度与递增浓度的游离p70或p40(抑制剂)预温育。测量生物素IL-12包被板上ELISA信号的降低，并对游离p70或p40的浓度作图。这提供了p70和p40相关的每种克隆的IC50。如果两个亚基的滴定重叠，则scFv结合到p40和p70两者。由此的任何变化给出p70优于p40的程度。
B.IL-12(Joe 9)特异性抗体谱系的亲和力成熟
检测所述克隆在IL-12受体结合分析(称作RBA)中抑制IL-12结合到其受体的能力，并检测其抑制IL-12诱导的PHA刺激的人母细胞增殖(PHA分析)的能力，如实施例3所述。在RBA和PHA分析中，克隆Joe 9的IC50值最低，两种分析中IC50值为1x10-6M。此外，与VBASE数据库确定的最接近种系序列COS-3相比，Joe 9的重链可变区(VH)变化的数量最小。表1(见附录A)显示COS-3是其中成员的VH3家族种系序列，以及Vλ1家族种系序列的成员。因此，选择Joe 9进行亲和力成熟。Joe 9野生型(Joe9wt)抗体VH和VL氨基酸序列见图1A-1D。
为增加Joe9的亲和力，进行重和轻链互补决定区3(CDR3)的各种突变。CDR3变体使用每个CDR3中平均有三个碱基取代(称为“掺加(物)(spike)”)的重链CDR3(称为“H3”)或轻链CDR3(称为“L3”)特异性简并寡核苷酸，通过定点PCR诱变创建。重链CDR3的PCR突变使用含有所有四种核苷酸随机混合物的简并重链寡核苷酸5’TGTCCCTTGGCCCCA(G)(T)(A)(G)(T)(C)(A)(T)(A)(G)(C)(T)(C)(C)(C)(A)(C)(T)GGTCGTACAGTAATA 3’(SEQ ID NO：580)，以及寡核苷酸pUC反向标记GAC ACC TCG ATC AGC GGA TAA CAA TTTCACACA GG(SEQ ID NO：581)进行，生成重链CDR3突变体的所有组成部分。亲本轻链使用Joe 9反向寡核苷酸(5′TGG GGC CAA GGGACA3′(SEQ ID NO：582)和fdteteseq 24+21寡核苷酸(5′-ATT CGT CCTATA CCG TTC TAC TTT GTC GTC TTT CCA GAC GTT AGT-3′(SEQID NO：583)扩增。
两种PCR产物间的互补性用于驱使PCR装配反应中的两个片段退火，全长重组scFv文库用pUC反向标记(SEQ ID NO：581)和fdT标记5′-ATT CGT CCT ATA CCG TTC-3′(SEQ ID NO：584)扩增。轻链的PCR突变用含有所有四种核苷酸的混合物的轻链寡核苷酸5′GGTCCCAGTTCCGAAGACCCTCGAACC(C)(C)(T)(C)(A)(G)(G)(C)(T)(G)(C)(T)(G)(T)(C)ATATGACTGGCAGTAATAGTCAGC 3′(SEQ IDNO：585)，以及Joe9反向寡核苷酸5′TGG GGC CAA GGG ACA3′(SEQ ID NO：586)进行，生成轻链CDR3突变体的所有组成部分。亲本重链用pUC反向标记(SEQ ID NO：581)和HuJH3FOR寡核苷酸5′TGAAGAGACGGTGACCATTGTCCC3′(SEQ ID NO：587)扩增。两种PCR产物间的互补性用于在PCR装配反应中驱动所述两个片段退火，全长重组scFv文库用反向标记GAC ACC TCG ATC AGC G(SEQID NO：588)和HuJλ2-3FOR NOT寡核苷酸5′GAG TCA TTC TCG ACTTGC GGC CGC ACC TAG GAC GGT CAG CTT GGT CCC 3′(SEQ IDNO：589)扩增。
重链CDR3突变体用1nM生物素化的IL-12筛选，室温下用含浓度7nM的游离IL-12或p40的PBS洗涤1小时。通过噬菌体ELISA分析克隆，结合到IL-12的那些用低密度IL-12芯片在BIAcore动力学结合研究中检测(见实施例5中BIAcore分析的过程)。通常，BIAcore分析使用BIAcore系统(Pharmacia Biosensor，Piscataway，NJ)，通过表面等离振子共振(SPR)测量配体(固定在生物传感器基质上的重组人IL-12)和分析物(溶液中抗体)之间的实时结合相互作用。系统利用SPR的光学性质检测葡聚糖生物传感器基质中蛋白浓度的改变。蛋白共价结合到已知浓度的葡聚糖基质上。抗体注射通过葡聚糖基质，注射的抗体和固定化的配体之间的特异性结合导致基质蛋白浓度增加，以及由此产生的SPR信号的改变。SPR信号的这些变化以共振单位(RU)记录，相对于时间沿着传感图的y轴显示。使用BIAcore动力学评价软件(版本2.1)，确定脱附速率(koff)、附着速率(kon)、结合速率(ka)、解离速率(Kd)常数。表现出koff速率提高的克隆用包括抑制IL-12的抗体结合到其受体(RBA分析)、抑制IL-12诱导的PHA刺激人母细胞增殖(PHA分析)，以及抑制IL-12诱导的人母细胞生成干扰素γ(IFNγ分析)的中和分析进行分析。重链CDR3已掺加的克隆70-1至70-13中和分析解离速率和/或IC50值总结见表2(见附录A)。克隆70-1的koff速率好于亲本Joe 9克隆，具有最低的IC50值2.0x10-7M。因此选择克隆70-1，转化为完整IgG1。
使用1nM生物素IL-12选择轻链CDR3突变体，并用含7nM的游离p40的PBS洗涤。克隆在噬菌体ELISA中筛选，使用低密度IL-12芯片，检测BIAcore结合分析中结合到IL-12上的那些克隆。在测量抑制IL-12受体结合或抑制PHA母细胞增殖的中和分析中，检测显示脱附速率优于亲本Joe 9克隆的克隆。轻链CDR3突变体克隆78-34至79-1的中和分析的解离速率和/或IC50值总结见表2(见附录A)。
基于koff速率，与亲本Joe 9相比，克隆78-34和78-35的koff速率提高。筛选这些克隆，用重链突变体进行组合分析。
C.组合克隆
表现出最佳结合特性的突变体轻和重链克隆用于scFvs的组合和装配。具有提高的效价特性的突变体克隆通过如上所述PCR重叠延伸和突变的VH和VL片段的拖出进行组合。表2所示的克隆101-14至26-1(见附录A)是由重链突变体(70-2、70-13和70-1)和轻链突变体(78-34、78-35和79-1)组合生成的。这些克隆的中和分析的koff速率和/或IC50值见表2。
BIAcore结合分析识别由重链CDR3突变体克隆70-1和轻链CDR3突变体克隆78-34组合制备的克隆101-11，其脱附速率为0.0045S-1。与仅重链CDR3突变体克隆70-1(0.0134s-1)，或轻链CDR3突变体克隆78-34(0.0164s-1)的koff速率相比，此koff速率明显提高。而且克隆101-11在中和分析中表现出明显的改善。因此，如下所述选择克隆101-11进行亲和力成熟。
D.克隆101-11的亲和力成熟
克隆101-11的进一步亲和力成熟由使用已掺加的寡核苷酸引物，重复循环的101-11的重和轻链CDR3的PCT突变组成。降低生物素化IL-12(bio-IL-12)的浓度，筛选所述克隆。突变克隆的结合特性通过BIAcore结合分析和RBA、PHA中和分析进行评价。克隆136-9至170-25的koff速率和/或IC50值见表2(见附录A)。克隆103-14在受体结合分析和PHA母细胞分析中表现出IC50值提高。克隆103-14还表现出低koff速率，因此选作进行进一步亲和力成熟。
E.克隆103-14轻链CDR3的随机化文库的生成和筛选
使用如下概述的3种不同文库，这里X由以N为任意核苷酸，以S为脱氧胞嘧啶或脱氧鸟苷的序列NNS的随机化密码子编码，在3个片段对克隆103-14轻链CDR3(QSYDRGFTGSMV(SEQ ID NO：590))系统随机化。
L3.1＝XXXXXXFTGSMV(SEQ ID NO：591)
L3.2＝QSYXXXXXXSMV(SEQ ID NO：592)
L3.3＝QSYDRGXXXXXX(SEQ ID NO：593)
进行克隆103-14的所有三种轻链CDRs(称作L3.1、L3.2和L3.3)的随机突变。克隆103-14的重链CDR3(称作H3)未突变。构建基于克隆103-14(H3和L3.1、L3.2&L3.3)的四种随机化文库，所述文库经受多种涉及使用限制抗原浓度以及有或没有过量游离抗原(p40和p70)存在的筛选条件。选择得到的结果(克隆73-B1至99-G11)主要由BIAcore筛选，有时用RBA筛选，见表2(见附录A)。
103-14的轻链CDR的随机突变生成克隆Y61，与亲本克隆103-14相比其IC50值表现出显著提高。选择Y61转化为全IgG1。PHA分析确定，全Y61-IgG1的IC50值为约130pM。游离p40以摩尔为单位过量50倍，不影响IC50值，这表明游离p40不与Y61抗IL-12抗体交叉反应，从而降低抗体结合到所述异源二聚体上。Y61重链可变区和轻链可变区的全长序列如下所示。
Y61重链可变区肽序列
CDR H1
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASFTFS SYGMHWVRQAPGKGLEWVA
CDR H2
FIRYDGSNKYYADSVKG
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCKT
CDR H3
HGSHDN WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：23)
Y61轻链可变区肽序列
CDR L1
QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISC SGGRSNIGSNTVKWYQQLPGTAPKLLIY
CDR L2
GNDQRPS
GVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYC
CDR L3
QSYDRGTHPALL FGTGTKVTVLG(SEQ ID NO：24)
根据Kabat定义指定CDR残基。
实施例2：Y61在高突变和接触位置的突变
一般情况下选择具有改善的亲和力的重组抗体可使用噬菌体展示方法进行。这是通过CDR残基的随机突变组合实现的，从而生成含有不同序列的单链抗体的大文库。通常情况下，具有改善的亲和力的抗体是基于其在抗体抗原反应中达到平衡的能力选择的。但是，当Y61scFV在噬菌体表面表达，并与IL-12孵育时，找不到允许体系达到正常抗体抗原平衡的选择条件。由于纯化的Y61 scFv表现出正常的解离动力学，所以大概由于非特异性相互作用，该scFV噬菌体保持结合到IL-12上。由于不能利用通常的噬菌体亲和力成熟为Y61(即通过突变多个CDR残基，生成文库并筛选)的方法，开发了其中突变单个CDR位置的新策略。
此策略包括突变的适当CDR位置的选择，并且是基于优选选择性突变位置、接触位置和/或高突变位置的氨基酸的识别和选择。接触位置被定义为抗原与抗体相互作用时，有高概率与抗原接触的残基，而高突变位置被定义为在抗体体内亲和力成熟过程中，被认为具有高概率体细胞高突变的残基。优选的选择性突变位置是为既接触又高突变位置的CDR位置。Y61抗体已使用实施例1所述的程序在CDR3区优化，因此很难用噬菌体展示选择方法进一步改善位于抗体结合位点中心的区域。活性的更大提高是通过消除有害的抗原抗体接触或基因工程建立新接触，来突变CDR3区外可能接触位置得到的。
被认为是与抗原接触点的Y61氨基酸残基，以及在体内亲和力成熟过程中是体细胞高突变位点的那些CDR位置见表3(见附录A)。对于Y61亲和力成熟，选择CDR3外的15个残基、L3环内的3个残基，以及H3环内的5个残基进行PCR突变。
Y61 scFv基因克隆到pUC119(Sfi)质粒载体中，进行突变。用随机化的密码子设计并合成寡核苷酸，以突变每个选定的位置。PCR突变后，少数克隆(～24)测序，并在宿主细胞，例如细菌、酵母或哺乳动物宿主细胞中表达。纯化表达的抗体，使用BIAcore系统测量koff。随后在中和分析中检测与Y61相比具有提高的脱附速率的克隆。其他CDR位置重复此程序。组合证实有改善的中和活性的个别突变，生成具有甚至更高中和效价的抗体。
为提高中和效价而突变的Y61 CDR位置，以及每个位置的相应氨基酸取代见图2A-2H。给出BIAcore分析确定的脱附速率。这些脱附速率见每个表右侧的直方图。
位置H30、H32、H33、H50、H53、H54、H58、H95、H97、H101、L50、L92、L93的这些取代结果表明，所有检测的氨基酸取代得到具有比Y61更低脱附速率的抗体。在位置H52、L32和L50仅一个氨基酸取代被发现改善Y61的脱附速率，所有其他变化都不利地影响活性。对于L50，此单个Gly→Tyr变化明显(5-10倍)提高了Y61的中和效价。结果表明了这些位置对Y61活性的重要性，并表明在大多数情况下噬菌体展示能够选择最佳残基。然而，在位置H31、H56、L30和L94，几个取代被发现改善Y61脱附速率，这意味着这些位置对于抗原结合也很重要，虽然噬菌体展示方法不允许选择最佳残基。
Y61的既接触又高突变位置的选择性突变鉴别轻链CDR2中氨基酸残基L50，以及轻链CDR3的残基L94，这改善了Y61的中和能力。这些突变的组合产生另外的作用，生成表现出中和能力显著增加的抗体J695。J695重和轻链可变区序列的全长序列如下所示。
J695重链可变区肽序列
CDR H1
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS SYGMHWVRQAPGKGLEWVA
CDR H2
FIRYDGSNKYYADSVKG
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCKT
CDR H3
HGSHDN WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：31)
J695轻链可变区肽序列
CDR L1
QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISC SGSRSNIGSNTVKWYQQLPGTAPKLLIY
CDR L2
YNDQRPS
GVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYC
CDR L3
QSYDRYTHPALL FGTGTKVTVLG(SEQ ID NO：32)
根据Kabat定义指定CDR残基。
显示从Joe9至J695路径的克隆谱系开发的重和轻链可变区序列比对的总结见图1A-1D。CDR和残基编号是根据Kabat。
实施例3：抗hIL-12抗体的功能性活性
为检测本发明的人抗人IL-12抗体的功能性活性，该抗体用于一些测量抗体抑制IL-12活性的能力的分析中。
A.人PHA激活淋巴母细胞的制备
如Current Protocols in Immunology，Unit 7.1所述，1500rpm Ficoll-Hypaque梯度离心45分钟，从来自健康供体的leukopac分离人外周血单核细胞(PBMC)。收集含水血溶液和淋巴细胞分离介质界面的PBMC，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤三次，1500rpm离心15分钟，除去Ficoll-Paque颗粒。
然后如Current Protocols in Immunology，Unit 6.16所述，激活PBMC，形成淋巴母细胞。洗涤过的PBMC再悬浮在添加了0.2％(v/v)PHA-P(Difco，Detroit，MI)的RPMI完全培养基(RPMI 1640培养基、10％胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素)中，0.5-1x106细胞/ml，并在37℃下、5％CO2培养四天。四天后，细胞培养物在添加了0.2％(v/v)PHA-P和50U/ml重组人IL-2的RPMI完全培养基中以体积1∶1分开。重组人IL-2是通过将携带有人IL-2 cDNA的表达载体转染到COS细胞中制备的(见Kaufman et al.，(1991)Nucleic Acids Res.19，4484-4490)，并如PCT/US96/01382所述纯化。细胞培养物随后再培养一至三天。收集PHA母细胞，用RPMI完全培养基洗涤两次，并在95％FBS、5％DMSO中冷冻，10x106个细胞/ml。
在IL-2存在下培养一天后，收集用于IL-12受体结合分析(见B部分)的PHA母细胞，而在IL-2存在下培养三天后收集用于PHA母细胞增殖分析(见C部分)和γ-干扰素诱导分析法(见D部分)的PHA母细胞。
B.IL-12受体结合分析
抗IL-12抗体抑制放射性标记IL-12结合到PHA母细胞上IL-12受体的能力分析如下。不同浓度抗IL-12抗体37℃下与结合缓冲液(RPMI 1640、5％FBS、25mM Hepes pH 7.4)中的50-100pM 125I-hIL-12(碘化hIL-12用Bolton-Hunter标记方法制备，达到来自NEN-Dupont的比活20-40mCi/mg)预孵育1小时。PHA母细胞如上所述分离，洗涤一次，并重悬浮在结合缓冲液中，至细胞密度2x107个细胞/ml。PHA母细胞(1x106个细胞)加到抗体125I-hIL-12混合物中，室温培养两小时。细胞结合放射性通过室温下离心分析混合物30秒从游离125I-hIL-12分离，吸取液体，并用0.1ml结合缓冲液洗涤，随后4℃下10,000xg离心4分钟。使用伽玛计数器检测细胞沉淀的结合放射性。在没有抗体存在下测定总结合，非特异性结合通过在检测中包括25nM未标记IL-12确定。进行重复孵育两次。
在IL-12受体结合分析中，使用Y61和J695人抗IL-12抗体，两种抗体表现出相当的抑制IL-12受体结合。Y61抑制IL-12受体结合的IC50值为约1.6x10-11M，而J695的IC50值约为1.1x10-11M。
C.人PHA母细胞增殖分析
评价抗IL-12抗体抑制PHA母细胞增殖的能力(IL-12刺激该增殖)。连续稀释的抗IL-12抗体在37℃、5％CO2下与100ml RPMI完全培养基中的230pg/ml hIL-12，在微量滴定板(U型底，96孔，Costar，Cambridge，MA)预孵育1小时。如上所述分离的PHA母细胞，洗涤一次，并重混悬在RPMI完全培养基中，至细胞密度为3x105个细胞/ml。PHA母细胞(100ml，3x104个细胞)加到抗体/hIL-12混合物中，37℃、5％CO2下孵育3天，用0.5mCi/孔(3H)-胸苷(Amersham，Arlington Heights，IL)标记4-6小时。用细胞收集器(Tomtec，Orange，CT)将培养物内含物收集到玻璃纤维滤器上，用液体闪烁计数仪测量掺入到细胞DNA的(3H)-胸苷。所有样品进行重复测定两次。
各种浓度p70∶p40(即IL-12异源二聚体和游离p40亚基的比率)存在下中和的结果见表4(见附录A)。
PHA母细胞增殖分析中Y61人抗IL-12抗体的分析表明，仅存在IL-12 p70，没有任何过量p40(p70∶p40比率1∶0)时，抗体抑制PHA母细胞增殖的IC50值为约1.8x10-10M。存在过量50倍的游离p40(p70∶p40比率1∶50)下，Y61抗体抑制PHA母细胞增殖的IC50值为约1.8x10-10M。此结果说明，过量p40的存在不影响Y61抑制母细胞增殖的能力。
1∶0比率的p70∶p40存在下，人抗IL-12抗体J695抑制PHA母细胞增殖的IC50值为约1.0x10-11M。比率1∶50的p70∶p40存在下，此抗体抑制PHA母细胞增殖的IC50值为约5.8±2.8x10-12M(n＝2)，表明过量p40仅对抗体有轻微抑制作用。总体结果显示，较之Y61，J695中和活性提高归因于L50和L94处的突变。
D.干扰素γ诱导分析
抗IL-12抗体抑制PHA母细胞生成IFNγ(IL-12刺激此生成)的能力分析如下。各种浓度抗IL-12抗体与100ml RPMI完全培养基中的200-400pg/ml hIL-12，37℃、5％CO2下，在微量滴定板(U型底，96孔，Costar)中预孵育1小时。PHA母细胞如上所述分离，洗涤一次，并重混悬在RPMI完全培养基中，至细胞浓度1x107个细胞/ml。PHA母细胞(100μl的1x106细胞)加到抗体/hIL-12混合物中，37℃、5％CO2孵育18小时。孵育后，从每个孔取出150μl无细胞上清液，ELISA(Endogen Interferon gamma ELISA，Endogen，Cambridge，MA)测量生成的人IFNγ水平。每个上清重复分析两次。
在此分析中人抗IL-12抗体Y61的分析表明，Y61抑制人IFNγ生成的IC50值为约1.6x10-10M，而人抗IL-12抗体J695抑制人IFNγ生成的IC50值为约5.0±2.3x10-12M(n＝3)。结果表明J695的亲和力的实质性提高是L50和L94处修饰的结果。
E.从分离的PBMC诱导非人IL-12
为检查人抗IL-12抗体与其他种IL-12的交叉反应性，非人IL-12如下制备。如上所述，对于食蟹猴、狒狒和狗PBMC使用lymphoprep(Nycomed，Oslo，Norway)，对于狗PBMC使用Accu-paque(Accurate Chemical&Sci.Corp.，Westbury，NY)，对于大鼠PBMC使用大鼠淋巴细胞分离液(Accurate Chemical&Sci.Corp.，Westbury，NY)，密度梯度离心从新鲜的肝素化的血分离PBMC。
然后如上所述诱导PMBC生成IL-12(D′Andrea et al.，(1992)J.Exp.Med 176，1387-1398，Villinger et al.，(1995)J.Immunol.155，3946-3954，Buettner et al.，(1998)Cytokine 10，241-248)。洗涤过的PBMC重混悬在添加了0.0075％(wt/vol)SAC(Pansorbin；Calbiochem-Behring Co.，LaJolla，CA)或1-5mg/ml Con(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)加0.0075％SAC的的RPMI完全培养基中，1x106个细胞/ml，37℃、5％CO2通气培养18小时。离心收集无细胞和无SAC的培养基，过0.2mm滤膜过滤。
如Emory University School of Medicine，Atlanta，GA的重组恒河猴IL-12一样，获得恒河猴IL-12。
F.鼠2D6细胞增殖分析
对鼠IL-2、IL-4、IL-7和IL-12应答，鼠T细胞克隆2D6增殖(Maruo et al.，(1997)J.Leukocyte Biol.61，346-352)。还检测到对含大鼠IL-12的PBMC上清液应答的明显增殖。细胞不对狗、食蟹猴、狒狒或人IL-12应答。鼠2D6细胞在添加50mM β-巯基乙醇(βME)和30ng/ml鼠IL-12的RPMI完全培养基中增殖。测定前一天，洗掉鼠IL-12，细胞在添加βME的RPMI完全培养基中孵育过夜。
连续稀释的抗IL-12抗体在37℃、5％CO2下与添加βME的100ml RPMI完全培养基中的40pg/ml鼠IL-12，在微量滴定板(U型底，96孔，Costar，Cambridge，MA)预孵育1小时。2D6细胞洗涤一次，重混悬在含有βME的RPMI完全培养基中，至细胞密度1x105个细胞/ml。2D6细胞(100μl，1x104个细胞)加到抗体/hIL-12混合物中，37℃、5％CO2孵育3天，用0.5mCi/孔(3H)-胸苷标记4-6小时。收集培养物内含物，并用液体闪烁计数仪计数。所有样品重复分析两次。
G.J695与非人IL-12的种交叉反应性
J695与非人IL-12的种交叉反应性使用从一些非人种分离的PBMC分析。大鼠、狗、食蟹猴和狒狒PBMC上清液中非人IL-12活性的存在，使用如上所述的几种生物测定确证，如鼠2D6细胞增殖分析、人PHA母细胞增殖分析，以及用鼠和/或人IL-12的兔和/或羊多克隆抗体阻断非人PBMC诱导的反应的γ-干扰素诱导分析。然后在相同生物鉴定中，通过检测观察到反应50％抑制时的J695抗体浓度，评估人抗hIL-12抗体Y61和J695与PBMC上清中非人IL-12或纯化的鼠和恒河猴IL-12的交叉反应性。种交叉反应结果总结于表5。结果表明，Y61和J695每个都能够识别猴IL-12(如Y61的食蟹猴和恒河猴IL-12，以及J695的食蟹猴、恒河猴和狒狒IL-12)，J695对狗IL-12的活性低约35倍；Y61或J695都不与小鼠或大鼠IL-12交叉反应。
H.J695的人细胞因子特异性
J695的特异性在竞争ELISA中检测，其中检测了一组人细胞因子的干扰可溶J695结合到固定化人IL-12上的能力。该组人细胞因子包括
Figure A20078005173601511
和
Figure A20078005173601512
(Genzyme，Boston，MA)、IL-2(Endogen)、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ和TGF-β1(R&D，Minneapolis，MN)、IL-8(Calbiochem)、PDGF、IGF-I和IGF-II(Boehringer Mannheim Corp.，Indianapolis，IN)、TNFo和淋巴毒素、IL-6、可溶性IL-6受体、IL-11、IL-12 p70、IL-12 p40、M-CSF和LIF。EBI-3是B淋巴细胞Epstein-Barr病毒感染诱导的IL-12 p40相关蛋白(Devergne et al.，(1996)J.Virol.70，1143-1153)，作为人IgG-Fc嵌合体(EBI-3/Fc)表达。还检测单链鲑鱼精子DNA(Sigma)。
表5种交叉反应性数据
Figure A20078005173601521
平底ELISA免疫分析微滴定板(96孔，高结合，Costar)用0.1ml人IL-12(2μg/ml的0.1M碳酸盐包被缓冲液(4体积0.1M NaHCO3加8.5体积0.1M NaHCO3))4℃包被过夜。板用含0.05％吐温20的PBS(PBS-T)洗涤两次，用200μl 1mg/ml牛血清白蛋白(BSA，Sigma)的PBS-T室温下封闭1小时，并用PBS-T再洗涤两次。加入含有IL-12抗体J695的样品(100ng/ml)，以及每细胞因子(2nM)的含50μg/mlBSA的PBS-T(PBS-T/BSA)溶液，室温孵育2小时。板洗涤4次，室温下与100μl小鼠抗人λ-HRP(1∶500的PBS-T/BSA，Southern Biotech.Ass.Inc.，Birrningham，AL)孵育1小时。板洗涤4次，在暗处用ABTS(Kirkegaard&Perry Lab.，Gaithersburg，MD)显影20-30分钟。用微量读板仪(Molecular Devices，Menlo Park，CA)读取OD450nm。测定在任何可溶性细胞因子不存在下，相对于结合到IL-12包被板的J695的结合百分比。
结果表明，结合到固定化人IL-12的J695仅被人IL-12 p70封闭，并且在较小程度上被人IL-12 p40，而不是由任何其他检测的细胞因子封闭。
I.结合到新型IL-12分子
已描述了另选的IL-12异源二聚体，其中p35亚基被新型p19分子取代。P19使用3D同源搜索IL-6/IL-12家庭成员鉴别，并由激活的树突状细胞合成。P19结合到p40形成p19/p40二聚体，其具有IL-12样活性，但在IFNγ诱导中不如p35/p40异二聚体有效。仅识别p40，但优选在p70分子环境中的抗体(例如J695和Y61，见实施例3)预计也中和p35/p40分子和p19/p40分子。
实施例4：抗hIL-12抗体的体内活性
IL-12抗体对IL-12诱导反应的体内作用在改良的Bree et al.用于研究人IL-12对食蟹猴外周血液学作用的模型中检测(Bree et al.，(1994)Biochem Biophys Res.Comm.204：1150-1157)。在那些以前的研究中，给予人IL-12 1μg/kg/天为期5天导致白细胞计数(WBC)减少，特别在24小时后淋巴细胞和单核细胞亚群减少。72小时时观察到血小板计数减少。响应IFN-γ的单核细胞激活的标记物血浆新喋呤的水平在24小时时开始升高，72小时时达最高。
第一次人hIL-12抗抗体研究中，15只健康的平均体重5kg的食蟹猴服镇静剂，分为5组(n＝3)。第一组接受静脉注射(IV)10mg/kg人静脉注射免疫球蛋白(IVIG，Miles，Eckhart，IN，用蛋白A琼脂糖凝胶纯化)。第2组接受静脉注射1mg/kg C8.6.2(中和小鼠抗人IL-12单克隆抗体)。第三组接受静脉注射10mg/kg C8.6.2。第4组接受静脉注射1mg/kg Y61(人抗人IL-12抗体，从CHO细胞条件培养基纯化)。
第5组接受静脉注射10mg/kg Y61。
抗体给药后一小时，所有动物接受单个皮下(SC)注射人IL-12(1μg/kg)。下列时间点取血样：基线、8、24、48、96和216小时，并分析有偏差的全血细胞计数和血清化学。还测量血清人IL-12、C8.6.2抗体、Y61抗体、猴IFN-γ、猴IL-10、猴IL-6和血浆新喋呤水平。
用IL-12加IVIG对照抗体处理的动物(第一组)显示许多预期血液学改变，包括WBC、血小板、淋巴细胞计数和单核细胞计数减少。用1或10mg/kg C8.6.2或Y61抗体处理的动物(第2-5组)中，未见这些减少或这些减少没有这么明显。
ELISA分析了猴IFN-γ和猴IL-10(Biosource International，Camarillo，CA)、猴IL-6(Endogen)和血浆新喋呤(ICN Pharmaceuticals，Orangeburg，NY)特异性血清或血浆样品。在任何IL-12处理的动物包括用IL-12加IVIG处理的对照动物中，未检测到IFN-γ、IL-10或IL-6。这可能是由于接触IL-12的水平低(只有1个剂量，1μg/kg)。然而，血浆新喋呤水平在IL-12加IVIG处理的动物中增加约3倍，但在所有C8.6.2或Y61处理的动物中没有变化，包括低剂量(1mg/kg)Y61处理的动物，这表明Y61在体内阻断对IL-12的此敏感应答上是有效的。
第二项研究中，通过给予外源性rhIL-12并确定是否J695能阻断或降低通常与施用rhIL-12相关的反应，研究食蟹猴J695的体内活性和药效学(PD)。雄性食蟹猴(每组n＝3)通过背部皮肤隐静脉或皮下(SC)，静脉(IV)快速注射单剂量为0.05、0.2或1.0mg/kg的J695或1mg/kg的静脉注射免疫球蛋白(IVIG)。J695或IVIG给药后一小时，所有动物给予背部皮肤单SC剂量1μg/kg的rhIL-12。J695给药后经股静脉收集最多达28天的血样。每个血样取血清，经ELISA分析IL-12、J695、IFN-γ和抗J695抗体。反相高效液相色谱法检测新蝶呤。
相对于施用J695或rhIL-12前测量的新喋呤水平归一化的新蝶呤水平显示于图3。为比较组之间新蝶呤的抑制，计算每个动物的新蝶呤水平的归一化曲线下面积(AUC)(表6)。相对于IVIG对照组，以剂量依赖方式抑制新喋呤暴露(AUC)，第IV组中约71至93％，SC组71至100％。这些结果表明，无论IV还是SC途径施用，新蝶呤反应的50％抑制所需的J695剂量(ED50)小于0.05mg/kg。
表6：食蟹猴中J695对IL-12诱导新蝶呤的剂量依赖性抑制
Figure A20078005173601551
用J695治疗还防止或减少通常与施用rhIL-12有关的血液学变化(白血病和血小板减少症)。施用rhIL-1224小时后，与对照IV和SC IVIG处理组的基线值相比时，淋巴细胞计数减少约50％。SC或IV施用所有三个剂量水平的J695防止此减少，使24小时时的淋巴细胞计数与基线值大致相同。施用IL-12后48小时，用IV和SC IVIG处理的组中血小板计数与基线值相比减少大约25％。
目标是维持血清水平在90％有效水平以上的剂量方案的例子为IV和SC约每隔一周给药约1mg/kg，或约每周给药0.3mg/kg，假定重复给药期间略有累积。这项研究表明，抗体可以此剂量安全地给予猴子。在独立毒性研究中，还发现高达100mg/kg抗体可安全给予猴子。
J695还有效防止用嵌合IL-12处理的小鼠生成IFN-γ，嵌合IL-12是将鼠p35亚基和人IL-12 p40亚基组合的分子。与在小鼠中是生物非活性的人IL-12相比，此嵌合IL-12在小鼠中保持生物功能，包括诱导干扰素IFN-γ。此外，人p40亚基允许分子被J695结合并中和。在第0、1、2、3、4天，每天剂量0.05mg/kg i.p.的嵌合IL-12给予雌性C3H/HeJ小鼠(10只/实验组)五天。第0、2、4天，IL-12注射前30分钟，给予剂量0.05、0.01、0.002、0.0004、0.00008和0.000016mg/kg i.p.的J695。在0、2和4天，IP.给予剂量0.05mg/kg的对照hulgG1γ。第5天小鼠取血，ELISA测定血清IFN-γ水平。结果表明，J695引起剂量依赖性抑制IFN-γ生成，ED50为约0.001mg/kg。
总的来说，这些结果表明J695是体内IL-12活性的有效抑制剂。
实施例5：人抗体结合到重组人IL-12(rhIL-12)的动力学分析
使用BIAcore系统(Biacore AB，Uppsala，Sweden)，通过表面等离振子共振(SPR)测量捕获的配体(人抗IL-12抗体J695，生物传感器基质捕获)和分析物(溶液中的rhIL12)之间的实时结合相互作用。该系统利用SPR的光学性质，检测葡聚糖生物传感器基质中蛋白浓度的改变。蛋白以已知浓度共价结合到葡聚糖基质。抗体注射通过葡聚糖基质，注射的抗体和固定化配体之间的特异性结合使基质蛋白浓度增加，并使SPR信号改变。SPR信号的这些变化以共振单位(RU)记录，并相对于时间沿着传感图谱的y轴显示。
为便于羊抗人IgG(Southern Biotechnology Associates，目录号2040-01，Birmingham，AL)固定在生物传感器基质上，用100mM N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和400mM N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)首先激活基质上的羧基基团，使羊抗人IgG通过游离胺基团共价连接到葡聚糖基质上。然后羊抗人IgG注入通过激活的基质。35微升羊抗人IgG(25μg/ml)，用醋酸钠稀释，pH值为4.5，注射通过激活的生物传感器，蛋白上的游离胺直接连接到激活的羧基基团上。未反应的基质EDC-酯通过注射1M乙醇胺失活。标准胺偶联试剂盒(Biacore AB，目录号BR-1000-50，Uppsala，Sweden)商业上可得。
J695用HBS运行缓冲液(Biacore AB，Cat.No.BR-1001-88，Uppsala，Sweden)稀释，被基质上羊抗人IgG捕获。为测定rhIL12特异性抗体结合到固定化羊抗人IgG的能力，如下进行结合分析。J695的等分试样(25μg/ml；25μl等分试样)以流速5μl/分钟注射流过羊抗人IgG多克隆抗体偶联的葡聚糖基质。蛋白注射之前和紧接其后，仅HBS缓冲液流经每个流动池。采用基线和对应J695注射完成后约30秒的点之间的净信号差，代表结合的IgG1J695的量(约1200RU)。测量结合到可溶性rhIL12的直接rhIL12特异性抗体。细胞因子用HBS运行缓冲液稀释，50μl等分试样以流速5μl/min注射通过固定化蛋白基质。采用的rhIL-12浓度为10、20、25、40、50、80、100、150和200nM。rhIL-12注射之前和紧接其后，仅HBS缓冲液流经每个流动池。采取基线信号和细胞因子注射完成后的信号间的净差值，代表特定样品的结合值。注射下一样品前，生物传感器基质用100mM HCI再生。为确定解离常数(解附速率)、结合常数(附着速率)，使用BIAcore动力学评价软件(版本2.1)。
与COS来源的J695相比，CHO来源的J695结合到rhIL-12的代表性结果见表7。
表7.CHO或COS来源的J695结合到rhIL-12.
  来源   rhIL12，nM  结合的rhIL12，RU′s  结合的Ab，，RU′s   rhIL12/AB
  CHO   200  1112  1613   1.48
  CHO   150  1033  1525   1.45
  CHO   100  994  1490   1.43
  CHO   80  955  1457   1.40
  CHO   50  912  1434   1.36
  CHO   40  877  1413   1.33
  CHO   25  818  1398   1.25
  CHO   20  773  1382   1.20
  CHO   10  627  1371   0.98
  来源   rhIL12，nM  结合的rhIL12，RU′s  结合的Ab，RU′s   rhIL12/AB
  COS   200  1172  1690   1.49
  COS   150  1084  1586   1.46
  COS   100  1024  1524   1.44
  COS   80  985  1489   1.42
  COS   50  932  1457   1.37
  COS   40  894  1431   1.34
  COS   25  833  1409   1.27
  COS   20  783  1394   1.20
  COS   10  642  1377   1.00
捕获的J695和可溶性rhIL-12间的分子动力学相互作用使用
BIAcore技术定量分析。进行一些独立的试验，结果用可获得的
BIAcore数学分析软件分析，得到动力学常数，见表8。
表8.J695对rhIL-12的表观动力学速率和亲和力常数
  抗体   来源   附着速率(M-1s-1)，均值   脱附速率(s-1)，均值  Kd(M)，均值
  J695   CHO   3.52E+05   4.72E-05  1.34E-10
  J695   COS   3.40E+05   2.61E-05  9.74E-11
CHO来源J695(Kd＝1.34-10M-1)和COS来源J695(Kd＝9.74x10-11M-1)抗体间相互作用的计算的表观常数(Kd)之间有小的差异。J695和rhIL12之间的表观解离常数(Kd)通过公式Kd＝脱附速率/附着速率的观测的速率常数评估。
为确定J695和rhIL-12间相互作用的表观结合和解离速率常数，使用固定量的J695(2μg/ml)和变化浓度的rhIL-12进行一些结合反应。捕获的J695和可溶性rhIL12之间的实时结合相互作用传感图谱显示，两种形式的抗体在结合和解离阶段非常类似。
为进一步评价捕获的IgG1 J695 mAb结合到可溶性重组细胞因子的能力，使用直接BIAcore方法。在此方法中，羊抗人IgG(25μg/ml)偶合的羧甲基葡聚糖传感器表面用IgG1 J695(2μg/ml)包被，然后加入重组细胞因子。当可溶性rhIL12注射流过CHO或COS来源IgG1J695捕获的生物传感器表面时，由于溶液中细胞因子浓度增加，信号量增加。未观察到与最高达1000nM的任意受试浓度rmIL12(R&DSystems，目录号419-ML，Minneapolis，MN)或rh IL12的结合。这些结果支持IgG1 J695抗体识别rhIL-12上明显不同决定簇的结论。
表9显示用BIAcore证实人IgG1 J695 mAb结合到仅可溶性rhIL12，不结合到其他重组细胞因子上的试验的结果。
表9：使用BIAcore技术的J695表位作图
  捕获的配体COS J695   捕获的配体CHO J695
  可溶性分析物
  重组人IL12   阳性   阳性
  重组鼠IL12   阴性   阴性
实施例6：J695对IL-12亲和力的进一步研究
J695抗体和人IL-12之间的分子动力学相互作用使用BIAcore等离振子共振技术定量分析，得到表观动力学速率常数。
BIAcore技术用于测量可溶性rhIL-12与固相捕获的J695的结合。羊抗人IgG抗体固定在生物传感器芯片上，然后注射固定量的J695，在表面上捕获。使用不同浓度的rhIL-12，作为时间的函数测量不同浓度的IL-12与J695的结合。假设零级解离和一级结合动力学，以及J695和IL-12之间的一对一分子相互作用，计算表观解离和结合速率常数。进行三次独立的试验，显示的值是该三次试验的平均。从这些测量，推出表观解离(kd)和结合(ka)速率常数，并用于计算相互作用的Kd值(见表10)。结果表明J695对rhIL-12有高亲和力。
表10：J695和人IL-12间相互作用的动力学参数
  动力学参数   值
  kd   3.71±0.40x10-5s-1
  ka   3.81±0.48x105M-1s-1
  Kd   9.74x10-11M(14ng/mL)
实施例7：鼠白介素-12的大鼠单克隆抗体C17.15的特征和中和活性
为评估使用鼠IL-12特异性单克隆抗体，在炎症和自身免疫小鼠模型中IL-12治疗研究与人疾病中类似方法的相关性，检查大鼠抗鼠IL-12单克隆抗体C17.15与鼠IL-12的相互作用。评估了C17.15在PHA母细胞增殖分析中中和鼠IL-12活性，并阻断鼠IL-12结合到细胞表面受体的能力，同样也评估了C17.15-鼠IL-12结合相互作用的动力学。
在人PHA母细胞增殖分析(见实施例3)中，系列稀释的C17.15或大鼠IgG2a(对照抗体)与230pg/mL鼠IL-12，37℃下预孵育1小时。PHA刺激的母细胞加到抗体IL-12混合物中，37℃下孵育3天。细胞随后用1μCi/孔[3H]-胸苷标记6小时。收集培养物，测量掺入的[3H]-胸苷。在不存在加入的鼠IL-12的情况下，测量背景非特异性增殖。所有样品重复测定两次。与相同条件下观察到的J695对重组人IL-12的IC50值为5.8x10-12相比，发现此分析中C17.15对重组鼠IL-12的IC50(M)是1.4x10-11(见表11)。
表11：抗人IL-12单克隆抗体J695和大鼠抗小鼠IL-12单克隆抗体C17.15的性质比较
Figure A20078005173601601
还测量C17.15抑制鼠IL-12结合到细胞受体的能力。系列稀释的C17.15与结合缓冲液中的100pM[125I]-鼠IL-12，37℃下预孵育1小时。2D6细胞(2x106)加到抗体/[125I]-鼠IL-12混合物中，室温孵育2小时。细胞结合放射性从游离[125I]-IL-12分离，确定剩余的细胞结合放射活性。在无抗体存在下，确定标记的鼠IL-12结合到2D6细胞上的受体的总结合，通过在此分析中包括25nM未标记的鼠IL-12确定非特异性结合。以总结合减去非特异性结合，计算特异性结合。重复进行两次孵育。结果表明，C17.15抑制鼠IL-12结合到细胞受体的IC50(M)为1.5x10-10。
C17.15对重组鼠IL-12的亲和力通过生物分子相互作用分析评价。羊抗鼠IgG抗体固定在生物传感器芯片上，随后注射固定量的C17.15抗体，从而捕捉芯片表面上的C17.15。不同浓度的重组鼠IL-12用于C17.15表面，鼠IL-12结合到固定化的C17.15作为时间函数进行测量。假设零级解离和一级结合动力学以及固定化C17.15和鼠IL-12之间的简单一对一分子相互作用，计算表观解离和结合速率常数。从这些测量计算表观解离(kd，脱附速率)和结合(ka，附着速率)速率常数。这些结果用来计算相互作用的Kd值。对于重组鼠IL-12-C17.15相互作用，观察到附着速率为3.8x105M-1s-1，脱附速率为1.84x10-4s-1，以及Kd为4.8x10-10。
C17.15在中和鼠IL-12活性以及结合到细胞表面受体中观察到的活性，以及C17.15结合到鼠IL-12的动力学与对J695-rhIL-12相互作用的类似测量有关联。这表明，基于附着速率、脱附速率、Kd、IC50和PHA母细胞分析，大鼠抗小鼠IL-12抗体C17.15和抗人IL-12抗体J695的作用模式几乎是一样的。因此，在炎症和自身免疫性疾病鼠模型中，C17.15用作J695的同源抗体，以研究IL-12在这些模型动物中对疾病引发或进展的阻断作用(见实施例8)。
实施例8：施用α-鼠IL-12抗体治疗小鼠基于自身免疫或炎症的疾病
A.α-Il-12抗体C17.15抑制小鼠的胶原诱导关节炎
已证明IL-12水平和类风湿关节炎(RA)之间的相关性。例如，与健康对照相比，已在RA患者的滑膜中发现了提高水平的IL-12p70(Morita et al(1998)Arthritis and Rheumatism.41：306-314)。因此，对大鼠抗小鼠IL-12抗体C17.15抑制小鼠胶原诱导的关节炎的能力进行了评估。
第0天，用II型胶原免疫雄性DBA/1小鼠(10只/组)，用C17.15，或对照大鼠IgG治疗，从第-1天(胶原免疫前1天)隔天10mg/kg腹腔给药至第12天。临床监测动物爪关节炎的发展，直到第90天。关节炎分级为：0-正常；1-一个关节有关节炎；2-涉及超过一个爪但非整个爪；3-涉及整个爪；4-爪畸形；5-涉及的关节僵硬。小鼠关节炎评分是小鼠每单个爪关节炎评级的总和(最大值＝20)。结果以每组平均值±SEM表示。
正如图4所示，结果表明，仅在治疗后第50天可测量C17.15处理的小鼠的关节炎分值，峰值意味着用C17.15治疗的小鼠得到的关节炎分值比IgG治疗小鼠中测量到的至少低5倍。这表明，大鼠抗小鼠IL-12抗体C17.15防止小鼠胶原诱导关节炎的发展。
B.大鼠α-鼠IL-12抗体C17.15抑制小鼠结肠炎
还证明IL-12在结肠炎的发展/病理学中起作用。例如，抗IL-12抗体已证明抑制结肠炎小鼠模型，例如TNBS诱导结肠炎IL-2基因敲除小鼠中的疾病(Simpson et al.(1998)J.Exp.Med.187(8)：1225-34)。同样，抗IL-2抗体已证明能够抑制IL-10基因敲除小鼠中结肠炎形成。在两项研究中，评价大鼠抗小鼠IL-12抗体C17.15抑制小鼠TNBS结肠炎的能力(Davidson et al.(1998)J.Immunol.161(6)：3143-9)。
在第一项研究中，施用经小儿脐动脉导管递送进入直肠的含2.0mg TNBS的150μL 50％乙醇溶液，在无病原SJL小鼠中诱导结肠炎。对照动物仅用150μL 50％乙醇溶液治疗。第11天尾静脉注射给予单剂量0.75、0.5、0.25或0.1mg C17.15或0.75mg对照大鼠IgG2a，通过第11和17天给动物称重，并在第17天组织学打分，评价治疗的疗效。用C17.15治疗的小鼠体重在抗体治疗48小时内增加，治疗后第6天标准化。用C17.15治疗的效果经组织学证实。此外，还评估从治疗小鼠的脾或结肠的CD4+T-细胞的IFN-γ分泌，以及从治疗小鼠脾或结肠源性巨噬细胞分泌的IL-12水平(见表12)。
第二项研究中，优化了剂量，用总剂量分别为0.1mg或0.5mgC17.15或0.1mg对照IgG2a治疗小鼠，分开在第12和14天之间。结果发现，与未治疗对照相比，剂量0.1mg/小鼠或0.25mg/小鼠单剂量给予C17.15使TNBS诱导的结肠炎仅部分改善，并且没有使CD4+T细胞体外生成IFN-γ显著降低，但显著降低IL-12的分泌。单剂量0.5mg/小鼠或更高时，观察到应答。采用最低剂量的检测抗体，两次分开注射给药(第12和14天)，改善给药方案，这表明多个低剂量可以比单个大剂量更有效。得到的数据见表12。
表12：抗小鼠Il-12 mAb C17.15抑制已建立的小鼠结肠炎
Figure A20078005173601631
如通过结肠的消瘦和目视外观所评估的，施用间隔一天的两个分剂量的总量0.1mg/小鼠或0.05mg/小鼠的C17.15单克隆抗IL-12完全逆转结肠炎。此外，此剂量表导致固有层T细胞生成IFN-γ，和巨噬细胞生成IL-12的显著下调，这样后者与对照用乙醇处理的无TNBS结肠炎的小鼠中看到的水平相当。因此，将C17.15施用于TNBS结肠炎的小鼠模型以剂量依赖方式逆转疾病进程。
C.α-IL-12抗体抑制小鼠实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)
普遍认为，IL-12在多发性硬化症(MS)的发病机制中起作用。可诱导的IL-12 p40信息已证明在MS患者的急性斑块，但非炎症脑梗塞病灶中表达(Windhagen，A.et al.(1995)J.Exp.Med.182：1985-1996)。MS患者的T细胞(但非对照T细胞)通过未调控的CD40L表达，刺激抗原呈递细胞生成IL-12(Balashov，K.E.et al.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：599-603)。MS患者已经增强可用α-IL-12抗体体外阻断的IFN-γ的分泌(Balashov，K.E.et al.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：599-603)。在MS患者中，但不是在其他神经疾病中检测到提高水平的血清IL-12(Nicoletti，F.et al.(1996)J.Neuroimmunol.70：87-90)。IL-12生成增加已证明与MS患者中疾病活性相关(Cormabella，M.et al.(1998)J.Clin.Invest.102：671-678)。已经研究了IL-12在多发性硬化症、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的鼠模型发病机理中的作用(Leonard，J.P.et al.(1995)J.Exp.Med.181：281-386；Banerjee，S.et al.(1998)Arthritis Rheum.(1998)41：S33；and Segal，B.M.et al.(1998)J.Exp.Med.187：537-546)。此模型中的疾病众所周知是TH1亚群的T细胞诱导的。因此，评估了α-IL-12抗体在预防急性EAE发作的能力。
发现α-IL-12抗体能够抑制用自身抗原髓鞘碱性蛋白免疫的小鼠中急性EAE的发作，抑制发病后该疾病，并减少复发的严重性(Banerjee，S.et al.(1998)Arthritis Rheum.(1998)41：S33)。治疗停止后，小鼠中α-IL-12抗体治疗的有益效果持续超过2个月。这也表明，抗IL-12抗体通过继承性转移抑制是致脑炎T细胞受体的小鼠的疾病(Leonard，J.P.et al.(1995)J.Exp.Med.181：281-386)。
实施例9：J695的临床药理学
在双盲交叉研究中，64个健康的人类男性受试者给予递增剂量的J695或安慰剂。给药前和给药后0.25小时，补体片段C3a的测量没有证明补体系统激活。CRP和纤维蛋白原水平仅在观察到合并感染症状的受试者中增加。
所有受试者存活，J695的总体耐受性非常好。在任何情况下，没有治疗因为副反应(AEs)必须停止。最常见的AEs是头痛和普通感冒/支气管炎，两者都没有被归类为严重。
研究开始时，其中一个研究对象33岁的单身男性患有滴状牛皮癣。根据随机研究设计，此受试者碰巧接受SC给药5mg/kg J695。抗体给药前10天，受试者仅在胳膊和腿上有小的分散丘疹病变。抗体给药时，受试者红斑变红，变厚，表皮角化过度增加。J695给药后一周，报告受试者皮肤状况改善，包括病变变平和剥落减少。J695(5mg/kg IV)第二次给药后不久，在没有任何局部治疗下，受试者的皮肤完全没有银屑病病变。抗体第二次给药后，白色鳞屑覆盖的红斑随J695的预期清除再出现。
实施例10：两种CHO细胞系生成的J695的比较
对于J695的重组表达，编码抗体重链和抗体轻链的重组表达载体通过磷酸钙介导的转染，引入dhfr-CHO细胞中(Urlaub，G.and Chasin，L.A.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220)。重组表达载体中，抗体重和轻链基因每个都可操作地连接到增强子/启动子调控元件(例如来自SV40、CMV、腺病毒等的，如CMV增强子/AdMLP启动子调控元件或SV40增强子/AdMLP启动子调控元件)，以推动高水平的基因转录。重组表达载体还携带DHFR基因，其允许选择已经使用甲氨蝶呤选择/扩增，用载体转染的CHO细胞。
150微克编码人抗体J695的肽序列的表达载体溶解在50ml锥形管内的2.7ml水中。加入300μL的2.5M CaCl2，DNA混合物滴加到50ml锥形管内3ml 2x HEPES缓冲盐水中。涡旋振荡5秒并室温孵育20分钟，1ml均匀分布在每块板(仍在F12培养基中)上，板37℃孵育4小时。吸取除去液体，2ml 10％DMSO的F12加到每块板。DMSO休克持续1分钟，之后每块板加5ml PBS稀释DMSO。板用PBS洗两次，然后加入10ml添加了H/T和5％FBS(选择进行细胞表达DHFR)的αMEM，37℃孵育过夜。细胞接种到96孔板，密度每孔100个细胞，板37℃，5％CO2孵育两星期，每周换一次培养基。
最后更换培养基后过5天，培养物上清1∶50稀释，使用人IgGγ链特异性ELISA检测。产生最高ELISA信号的克隆从96孔板转移到12孔板1.5ml/孔αMEM+5％透析血清中。3天后，进行另一人IgGγ链特异性ELISA，具有最高活性的12个克隆分到αMEM+5％透析血清和20nM MTX中。细胞系031898218在20nM MTX存在下生长，没有任何明显的细胞死亡或增长速度降低，在为期3天的分析中，生成1.8μg/ml hIgG。在含有MTX的培养基中生长的031898218的T-25培养物产生平均11.9μg/ml J695。指定为ALP903的谱系适应无血清条件下悬浮生长，生成7.5pg J695/细胞/24h。
ALP903细胞在αMEM/5％FBS/20nM MTX培养基中初筛后，再次传代到20nM MTX中。细胞在100nM MTX筛选下培养，然后在接下来的30天中传代到500nM MTX中两次。此时培养物正生成32μg J695/mL/24h。通过有限稀释，亚克隆培养物。亚克隆218-22两天内在96孔板中生成16.5μg/ml，两天内在12孔板中生成50.3μg/ml的J695。如上，克隆218-22在αMEM/5％透析的FBS/500nM MTX中培养38天，随后适应无血清旋动培养。称为ALP 905的无血清悬浮培养物平均细胞特异性生成率为58pg/细胞/24h。
用于生成J695(ALP 903)的第一细胞系从培养物得到比第二细胞系ALP 905产率低的抗体。为确保ALP 905生成的J695功能上与ALP 903生成的相同，评价这两批抗体的IL-12亲和力，阻断IL-12结合到细胞受体的能力，抑制IL-12诱导IFN-γ的能力，以及抑制IL-12介导的PHA母细胞增殖的能力。
通过表面等离振子共振研究(BIAcore分析)测量结合到IL-12的动力学速率常数，确定J695批次ALP 903和ALP 905对IL-12的亲和力。在三次实验中，测定抗体批次ALP903和ALP905结合到rhIL-12的脱附速率常数(kd)和附着速率常数(ka)(如实施例3中所述)。结合到IL-12的亲和力Kd，通过脱附速率常数除以附着速率常数进行计算。计算每个独立实验的Kd，然后平均。结果表明，对于J695批次ALP 903和ALP 905，结合到rhIL-12的确定的动力学参数和亲和力非常相似：批次ALP 903的计算Kd为1.19±0.22x10-10M，批次ALP905的为1.49±0.47x10-10M(见表13)。
评估来自ALP 903和ALP 905的J695阻断rhIL-12结合到人PHA激活T淋巴母细胞上IL-12受体的能力(见实施例3)。检测起始浓度1x10-8，10倍系列稀释的J695的每个样品。抗体与缓冲液中50pM[125I]-人IL-12在37℃下预孵育1小时。PHA母细胞加到抗体/[125I]-人IL-12混合物中，室温下孵育2小时。细胞结合放射活性从游离[125I]-IL-12通过离心和洗涤步骤分离，计算抑制百分比。使用4参数曲线拟合，从抑制曲线测定J695的IC50值，并通过两次独立的试验确证。孵育重复进行两次。两批J695的结果非常相似(见表13)。
评估来自ALP 903和ALP 905细胞的J695抑制rhIL-12诱导的人PHA激活淋巴母细胞体外生成IFN-γ的能力。系列稀释的J695与200pg/mL rhIL-12，在37℃下预孵育1小时。加入PHA淋巴母细胞，37℃下孵育18小时。孵育后，取出无细胞的上清液，用ELISA测定人IFN-γ的水平。使用4参数抑制拟合，抑制曲线的IC50值对抗体浓度作图。结果表明，两批次抑制IFN-γ生成的能力非常相似。
体外PHA母细胞增殖分析用于测量ALP 903和ALP 905J695对rhIL-12的中和能力。系列稀释的每种类型J695与230pg/mL人IL-12，在37℃下预孵育1小时。下一步加入PHA母细胞，37℃下培养3天。细胞随后用1γCi/孔[3H]-胸苷标记6小时。收集培养物，测量[3H]-胸苷掺入。在无rhIL-12存在下，测量非特异性增殖(背景)。发现ALP 903和ALP 905 J695的IC50值非常类似，并列于表13。
J695抗体中和rhIL-12活性、阻断IL-12结合到细胞表面受体，并结合到rhIL-12的活性与批ALP 903至批ALP 905无显著不同。因此，两种不同细胞类型产生的抗体是相当的。
表13.J695批次ALP 903和ALP 905性质的比较
  抗体   ka，附着速率(M-1，s-1)   kd，脱附速率(s-1)   Kd(M)   RB分析IC50(M)   PHA母细胞分析IC50(M)   IFN-γ分析IC50(M)
  J695ALP 903   3.75x105   4.46x10-5   1.19x10- 10   3.4x10-11   5.5x10-12   5.8x10-12
  J695ALP 905   3.91x105   5.59x10-5   1.49x10- 10   3.0x10-11   4.4x10-12   4.3x10-12
实施例11：Biacore确定的抗rhIL12单克隆抗体表位作图
基于表面等离振子共振技术的实时生物特异性相互作用分析(BIA)，用于绘制J695和4种其他单克隆抗可溶性重组人IL-12的抗体表位特异性图谱。这项技术不需标记抗体或抗原。针对单独和明显不同表位的抗体会同时结合到抗原上，而针对密切相关的表位的抗体会干扰相互间的结合。此外，如果第二抗体不能结合，则所述两种抗体确定的表位可能相同或重叠，或第一抗体的结合可能通过目标分子中构象改变引起的别构抑制防止第二抗体的结合。
使用Biacore进行表位作图分析。首先，葡聚糖基质上的羧基用100mM N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和400mM N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化，流经四个不同的流动池。下一步，抗体1注射流经活化的基质。约50微升抗rhIL12抗体(25μg/ml)，用pH值4.5醋酸钠稀释，注射流经活化的生物传感器，蛋白上的游离胺直接结合到活化的羧基基团上。通常情况下，固定化5000共振单位。未反应的基质EDC-酯通过注射1M乙醇胺失活。标准胺偶合试剂盒商业上可获得(Biacore AB，Cat.No.BR-1000-50，Uppsala，Sweden)。用CM生物传感器芯片(Biacore AB，分类号BR-1000-14，Uppsala，Sweden)进行SPR测量。生物传感器表面待分析的所有抗体和抗原以HBS-EP运行缓冲液稀释(Biacore AB，分类号BR-1001-88，Uppsala，Sweden)。
下一步，rhuIL12(100nM)注射流经共价固定在CM5生物传感器表面的抗体，流速为25μl/分钟。抗原注射之前以及紧随其后，仅HBS-EP缓冲液流经每个流动池。
随后注射过量可溶性抗体2(25μg/ml)流经捕获的rhuIL12(5分钟接触时间)。抗体2注射之前以及紧随其后，仅HBS-EP缓冲液流经每个流动池。采用基线和对应于Mab注射完成后约30秒的点之间信号净差值，代表最终结合值。再次以共振单位测量反应。生物传感器基质用10mM HCl(5分钟接触时间)，然后注射下一样品。
Abbott Bioresearch Center和/或商业供应商提供的抗体和抗原如下：人J695；小鼠C8.6.2Mab；人1D4.7Mab；人C340Mab；小鼠7G3Mab；人IgG1对照(1.0mg/ml，Sigma目录号I-3889)。用于此项研究的每个抗体结合于人IL-12的p40亚基表位上。抗体ID4.7和7G3在2005年6月29日提交的美国临时专利申请No.60/695,679，以及2006年6月29号提交的美国专利申请No.11/478,096中描述。抗体C340在美国专利No.7,063,964和美国专利No.6,902,734中描述。每个以上专利和专利申请的全部内容在此引作参考。抗体C8.6.2是抗体C8.6的亚克隆，因此具有抗体C8.6的相同特征，这在A.D’Andrea etal.，1992 J.Exp.Med.176：1387-1398中有描述，其全部内容在此引作参考。重组人白细胞介素12(rhIL12，商业上由Wyeth获得)。
检测的单克隆抗体的反应模式见表14。这些实验中，J695和7G3单克隆抗体可以同时结合于重组人IL-12。在这种情况下，同时结合重组人IL-12，证实所述抗体占据不同的位点。从作图实验得到的传感图谱表明1D4.7和7G3单克隆抗体识别独立的表位。另一对单克隆抗体显示以顺序[C340]-[rhIL12]-[7G3]同时结合。此序列中的阳性结果又显示这两种抗体的不同且独立的表位。当以顺序[C8.6.2]-[rhIL12]-[C8.6.2]，[C340]-[rhIL12]-[C8.6.2]和[C340]-[rhIL12]-[1D4.7]使用时，检测抗体给出阴性结果。缺乏第二抗体的结合大概是由于表位的占据。在阴性对照中，从正常Biacore分析序列省略重组人IL-12，降低第二抗体对背景水平的响应。此外，不考虑定向，鼠和人IgG匹配的同种型对照给出了阴性结果。
表14：Biacore对IL-12抗体的配对表位作图的总结
Figure A20078005173601701
如果抗人IL-12抗体两者可同时结合于目标分子(rhIL-12)，它们确定不同和独立的抗原表位。
如果第二个抗体无法结合，则所述两种抗体确定的表位可能是相同或重叠的，或第一抗体的结合可通过目标分子中构象变化的阻止第二抗体的结合。
可溶性抗原＝重组IL-12(p40/p35)
此实施例中描述的结果说明Biacore可用来表征单克隆抗体表位。每个抗体和抗原长时期注射，直到在SPR信号中达到平台。传感图谱的检查表明，当其通过羧甲基葡聚糖表面直接固定化时，所有人抗rhIL12单克隆抗体特异性结合到rhIL12。此实施例中出现的结果表明，能同时结合到IL-12的抗体结合于非重叠表位。尤其是，7G3结合于与J695、C8.6.2、C340或1D4.7非共有的不同表位。结果进一步表明，不能同时结合到IL-12的检测的抗体结合于重叠表位(即当IL-12结合到抗体1时，未观察到抗体2的结合)。尤其地，在所有情况下，由于这些抗体中的一个结合于IL-12不允许第二抗体的结合，所以C8.6.2、C340和1D4.7结合于重叠的表位。最终结果表明，由于防止抗体同时结合的别构相互作用，防止不能同时结合于IL-12的该抗体的结合(即抗体2从抗体1释放IL-12)。尤其地，J695不能与C8.6.2、C340或1D4.7同时结合rhuIL-12。抗体不能同时结合IL-12并不表明抗体对相同结合位点间的简单竞争，而是通过结合，目标分子IL-12中出现构象变化。在观察到可溶性J695迅速取代结合于固定化C8.6.2、C340或1D4.7的IL-12时，这种不寻常的别构机理是显而易见。相反地，C8.6.2、C340和1D4.7慢慢取代结合到固定化J695的IL-12。
实施例12：鉴定能改变含p40亚基的白介素的构象结构的抗体
鉴别结合到白介素如IL-12或IL-23的p40亚基的抗体，通过使用实时生物特异性相互作用分析(BIA)，所述抗体能改变其构象结构。使用的试验方案基本上如上述实施例11所述。
具体来说，葡聚糖基质上的羧基基团通常用100mM N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和400mM N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化。其次，随后将特异性结合到白介素如IL-12或IL-23的p40亚基的第一抗体注射流经活化的基质。特别地，注射流经活化基质的第一抗体是结合到抗体C8.6.2、C340或1D4.7结合的IL-12 p40亚基的表位的抗体。优选地，所述第一抗体是C8.6.2、C340或1D4.7。然后，约50微升第一抗体(例如25μg/ml，醋酸钠稀释，pH值4.5)注射流经活化的生物传感器，蛋白上的游离胺直接连接到活化的羧基基团。通常情况下，固定化5000共振单位。注射1M乙醇胺使未反应的基质EDC-酯失活。如上述实施例11所述，使用CM生物传感芯片(Biacore AB，目录号BR-1000-14，Uppsala，Sweden)进行SPR测量。生物传感器表面待分析的所有抗体和抗原用HBS-EP运行缓冲液(Biacore AB，目录号BR-1001-88，Uppsala，Sweden)稀释。
接着，白介素如IL-12或IL-23的p40亚基(例如100nm)注入CM5生物传感器表面共价固定的抗体，通常流速约25μl/分钟。白介素如IL-12或IL-23的p40亚基可例如作为分离的单个亚基(或片段)注射，或者可以以异二聚体形式注射，其中所述异二聚体包括p40亚基和第二亚基，如异源二聚体p40/p35(IL-12)，或包含IL-12 p40亚基和p19亚基的替代异源二聚体(p40/p19；IL-23)。抗原注射之前和紧随其后，仅HBS-EP缓冲液流经每个流动池。在此之后，过量的可溶性测试抗体(例如浓度25μg/ml)注射通过捕获的白介素(如IL-12或IL-23)p40亚基，一般接触时间大约5分钟。测试抗体注射之前和紧随其后，仅HBS-EP缓冲液流经每个流动池。采取基线和对应于抗体注射完成后约30秒之间的信号净差值，代表最终结合值，并以共振单位测量。迅速从CM5生物传感器表面固定化的第一抗体取代白介素(如IL-12或IL-23)p40亚基的抗体，被鉴定为可改变白介素如白介素p40亚基的构象结构的抗体。
白介素(如IL-12或IL-23)结构中的此构象变化可通过任何本领域熟知的监测蛋白三维结构的技术证实。例如可使用X射线晶体学或圆二色性。
等同方案
仅使用常规试验，本领域熟练技术人员将领会或能够确定本文所述本发明所述具体实施方案的许多等同方案。这种等同方案意在包括于以下权利要求中。
序列表
<110>Abbott GMBH&Co.，KG，et al.
<120>Human Antibodies That Bind Human IL-12和Methods For Producing
<130>BBI-093CP2PC
<140>Concurrently herewith
<141>Concurrently herewith
<150>11/645,287
<151>2006-12-22
<150>09/534,717
<151>2000-03-24
<150>60/126,603
<151>1999-03-25
<160>675
<170>PatentIn Ver.2.0
<210>1
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置1，可为His或Ser
<220>
<223>Xaa在位置4，可为Tyr或His
<220>
<223>Xaa在位置6，可为Tyr，Asn或Thr
<400>1
Xaa Gly Ser Xaa Asp Xaa
  1               5
<210>2
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置2，可为Ser或Thr
<220>
<223>Xaa在位置4，可为Asp或Glu
<220>
<223>Xaa在位置5，可为Ser，Arg或Lys
<220>
<223>Xaa在位置6，可为Ser，Gly或Tyr
<220>
<223>Xaa在位置7，可为Leu，Phe，Thr或
Ser
<220>
<223>Xaa在位置8，可为Arg，Ser，Thr，
Trp或His
<220>
<223>Xaa在位置9，可为Gly或Pro
<220>
<223>Xaa在位置10，可为Ser，Thr，Ala
或Leu
<220>
<223>Xaa在位置11，可为Arg，Ser，Met，
Thr或Leu
<220>
<223>Xaa在位置12，可为Val，Ile，Thr，
Met或Leu
<400>2
Gln Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
  1                5                 10
<210>3
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>3
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>4
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置1，可为Gly或Tyr
<220>
<223>Xaa在位置3，可为Asp或Ser
<220>
<223>Xaa在位置4，可为Gln或Asn
<400>4
Xaa Asn Xaa Xaa Arg Pro Ser
  1               5
<210>5
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa表示Ser或Glu
<400>5
Phe Thr Phe Ser Xaa Tyr Gly Met His
  1               5
<210>6
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置1，可为Ser或Thr
<220>
<223>Xaa在位置3，可为Ser或Gly
<220>
<223>Xaa在位置4，可为Arg或Ser
<220>
<223>Xaa在位置8，可为Gly或Val
<220>
<223>Xaa在位置9，可为Ser或Ala
<220>
<223>Xaa在位置10，可为Asn，Gly或Tyr
<220>
<223>Xaa在位置11，可为Thr或Asp
<220>
<223>Xaa在位置13，可为Lys或His
<400>6
Xaa Gly Xaa Xaa Ser Asn Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa
1                 5                  10
<210>7
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置6，可为Gln或Glu
<220>
<223>Xaa在位置16，可为Arg或Gly
<220>
<223>Xaa在位置31，可为Ser或Glu
<220>
<223>Xaa在位置84，可为Lys或Asn
<220>
<223>Xaa在位置97，可为Thr，Ala或Lys
<220>
<223>Xaa在位置98，可为Thr或Lys
<220>
<223>Xaa在位置99，可为Ser或His
<220>
<223>Xaa在位置102，可为Tyr或His
<220>
<223>Xaa在位置104，可为Tyr，Asn或
Thr
<400>7
Gln Val Gln Leu Val Xaa Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Xaa
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Asx
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Xaa Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Xaa Xaa Xaa Gly Ser Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Sar
        115
<210>8
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置1，可为Ser或Gln
<220>
<223>Xaa在位置2，可为Tyr或Ser
<220>
<223>Xaa在位置13，可为Thr或Ala
<220>
<223>Xaa在位置23和91，可为Ser或
Thr
<220>
<223>Xaa在位置25，可为Gly或Ser
<220>
<223>Xaa在位置26，可为Arg或Ser
<220>
<223>Xaa在位置30，可为Gly或Val
<220>
<223>Xaa在位置31，可为Ser或Ala
<220>
<223>Xaa在位置35，可为Lys或His
<220>
<223>Xaa在位置51，可为Gly或Lys
<220>
<223>Xaa在位置54，可为Gln或Asn
<220>
<223>Xaa在位置79，可为Val或Leu
<220>
<223>Xaa在位置93，可为Asp或Glu
<220>
<223>Xaa在位置94，可为Ser，Arg或Lys
<220>
<223>Xaa在位置95，可为Ser，Gly或Tyr
<220>
<223>Xaa在位置96，可为Leu，Phe，Thr
或Ser
<220>
<223>Xaa在位置97，可为Arg，Ser，Thr，
Trp或His
<220>
<223>Xaa在位置98，可为Gly或Pro
<220>
<223>Xaa在位置99，可为Ser，Thr，Ala
或Leu
<220>
<223>Xaa在位置100，可为Arg，Ser，Met，
Thr或Leu
<220>
<223>Xaa在位置101，可为Val，Ile，Thr，
Met或Leu
<220>
<223>Xaa在位置32，可为Asn，Gly或Tyr
<220>
<223>Xaa在位置33，可为Thr或Asp
<220>
<223>Xaa在位置53，可为Asp或Ser
<400>8
Xaa Xaa Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Xaa Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Xaa Gly Xaa Xaa Ser Asn Ile Xaa Xaa Xaa
             20                  25                  30
Xaa Val Xaa Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Xaa Asn Xaa Xaa Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Xaa Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa
                 85                  90                  95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>9
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置2，可为Gly，Val，Cys或
His
<220>
<223>Xaa在位置3，可为Ser或Thr
<220>
<223>Xaa在位置4，可为His，Thr，Val，Arg，或Ile
<220>
<223>Xaa在位置5，可为Asp或Ser
<220>
<223>Xaa在位置6，可为Asn，Lys，Ala，
Thr，Ser，Phe，Trp，或His
<400>9
His Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
  1               5
<210>10
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置4，可为Asp或Ser
<220>
<223>Xaa在位置5，表示任何氨基酸
<220>
<223>Xaa在位置6，可为Gly，Asp，Gln，
Leu，Phe，Arg，His，Asn或Tyr
<400>10
Gln Ser Tyr Xaa Xaa Xaa Thr His Pro Ala Leu Leu
 1                5                  10
<210>11
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置1，可为Phe，Thr或Tyr
<220>
<223>Xaa在位置3，可为Arg或Ala
<220>
<223>Xaa在位置5，可为Asp，Ser，Glu或
Ala
<220>
<223>Xaa在位置6，可为Gly或Arg
<220>
<223>Xaa在位置8，表示任何氨基酸
<220>
<223>Xaa在位置10，可为Tyr或Glu
<400>11
Xaa Ile Xaa Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Lys Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>12
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置1，可为Gly，Tyr，Ser，
Thr，Asn或Gln
<400>12
Xaa Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>13
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置4和5，表示任何氨基酸
<220>
<223>Xaa在位置6，可为Tyr或His
<220>
<223>Xaa在位置7，可为Gly，Met，Ala，
Asn或Ser
<400>13
Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Met His
  1               5
<210>14
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置9，可为Ser，Cys，Arg，
Asn，Asp或Thr
<220>
<223>Xaa在位置10，可为Asn，Met或Ile
<220>
<223>Xaa在位置11，可为Thr，Tyr，Asp，
His，Lys或Pro
<400>14
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Xaa Xaa Xaa Val Lys
  1               5                  10
<210>15
<211>114
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置30，可为Ser或Glu
<220>
<223>Xaa在位置83，可为Lys或Asn
<220>
<223>Xaa在位置5，可为Gln或Glu
<400>15
Gln Val Gln Val Xaa Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser
  1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Tyr Gly
             20                  25                  30
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
         35                  40                  45
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Sar Val Lys
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Xaa Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
                 85                  90                  95
Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val
            100                 105                 110
Ser Ser
<210>16
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置1，可为Ser或Gln
<220>
<223>Xaa在位置2，可为Tyr或Ser
<220>
<223>Xaa在位置13，可为Thr或Ala
<220>
<223>Xaa在位置25，可为Gly或Ser
<220>
<223>Xaa在位置51和95，可为Gly或
Tyr
<220>
<223>Xaa在位置79，可为Val或Leu
<400>16
Xaa Xaa Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Xaa Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Xaa Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Xaa Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Xaa Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Xaa Thr
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>17
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>17
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>18
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>18
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>19
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>19
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>20
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>20
Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>21
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>21
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>22
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>22
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>23
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>24
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>24
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Trp Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>25
<211>6
<212>RPT
<213>人(Homo sapiens)
<400>25
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>26
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>26
Gln Ser Tyr Asp Arg Tyr Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>27
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>27
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>28
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>28
Tyr Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>29
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>29
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>30
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>30
Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>31
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
              20                 25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>32
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>32
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  l               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Tyr Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Tyr Thr
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>33
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>34
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>34
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
                 85                  90                  95
Arg Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>35
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>35
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Mer His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Ash Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>36
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa在位置32，表示Gly或Tyr
<400>36
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Xaa
             20                  25                  30
Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
                 85                  90                  95
Ser Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>37
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>38
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>38
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
                 85                  90                  95
Arg Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>39
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>40
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>40
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>41
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>42
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>42
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1              5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
                 85                  90                  95
Trp Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>43
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>44
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>44
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>45
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>46
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>46
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
                 85                  90                  95
Trp Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>47
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>48
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>48
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Asp Lys Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ser Ser Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>49
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>49
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>50
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>50
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Asp Lys Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ser Ser Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>51
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr His Gly Ser His Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>52
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>52
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
                 85                  90                  95
Trp Gly Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>53
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>54
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>54
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Val Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ser Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>55
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>56
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>56
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Val Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ala Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>57
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>58
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>58
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Asp Lys Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ser Ser Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>59
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>60
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>60
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Glu Arg Gly Phe
                 85                  90                  95
Thr Gly Ser Met Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>61
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>62
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>62
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr
                 85                  90                  95
His Pro Leu Thr Ile Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>63
<211>115
<2L2>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>63
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>64
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>64
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>65
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>65
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>66
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>66
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr
                 85                  90                  95
His Pro Leu Thr Met Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>67
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>67
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1                  5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
                 20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
             35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
         50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>68
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>68
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr
                 85                  90                  95
His Pro Leu Thr Met Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>69
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>69
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>70
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>70
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>71
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Glu Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>72
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>72
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>73
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>73
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>74
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>74
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn lle Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Tyr Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>75
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>75
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Sar Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
            100                 105                 110
Val Ser Ser
        115
<210>76
<211>112
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>76
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Tyr Thr
                 85                  90                  95
His Pro Ala Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>77
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>77
Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr
  1               5
<210>78
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>78
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>79
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>79
His Gly Ser Tyr Asp Tyr
  1               5
<210>80
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>80
Arg Arg Arg Ser Asn Tyr
  1               5
<210>81
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>81
Ser Gly Ser Ile Asp Tyr
  1               5
<210>82
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>82
His Gly Ser His Asp Asp
  1               5
<210>83
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>83
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>84
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>84
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly
  1               5                  10
<210>85
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>85
Ala Lys His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly
  1               5                  10
<210>86
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>86
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Ser Gln Gly
  1               5                  10
<210>87
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>87
Thr Thr His Gly Ser His Asp Thr Trp Gly Gln Gly
  1               5                  10
<210>88
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<40G>88
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly Gln Gly
  1                5                  10
<210>89
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>89
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Gly His Gly
  1               5                  10
<210>90
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>90
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn Trp Ser Gln Gly
  1               5                  10
<210>91
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>91
Thr Thr His Arg Ser His Asn Asn Trp Gly Gln Gly
  1               5                  10
<210>92
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>92
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>93
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>93
Thr Thr His Gly Ser His Asp Thr
  1               5
<210>94
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>94
Thr Lys His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>95
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>95
Thr Thr Gln Gly Arg His Asp Asn
  1               5
<210>96
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>96
Lys Thr Arg Gly Arg His Asp Asn
  1               5
<210>97
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>97
Thr Thr His Gly Ser His Asp Lys
  1               5
<210>98
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>98
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asp
  1               5
<210>99
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>99
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>100
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>100
Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>101
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>101
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>102
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>102
Thr Thr Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr
  1               5
<210>103
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>103
Thr Thr His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>104
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>104
Thr Thr His Gly Ser Gln Asp Asn
  1               5
<210>105
<211>8
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>105
Ala Thr His Gly Ser Gl  Asp Asn
  1               5
<210>106
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>106
His Gly Ser Gln Asp Thr
  1               5
<210>107
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>107
Ser Gly Ser Tyr Asp Tyr
  1               5
<210>108
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>108
His Gly Ser Gln Asp Asn
  1               5
<210>109
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>109
Cys Lys Thr His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>110
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>110
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Arg Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>111
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>111
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>112
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>112
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Arg Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>113
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>113
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>114
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>114
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Trp Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>115
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>115
Gln Thr Tyr Asp Ile Ser Glu Ser Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>116
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>116
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>117
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>117
Gln Thr Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                   10
<210>118
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>118
Gln Thr Tyr Asp Lys Gly Phe Thr Gly Ser Ser Val
  1               5                  10
<210>119
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>119
Gln Ser Tyr Asp Arg Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>120
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>120
Gln Ser Tyr Asp Trp Asn Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>121
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>121
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>122
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>122
Gln Ser Tyr Asp Asn Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>123
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>123
Gln Ser Tyr Asp Asn Ala Val Thr Ala Ser Lys Val
  1               5                  10
<210>124
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>124
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>125
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>125
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Trp Gly Thr Arg Val
  1               5                  10
<210>126
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>126
Gln Ser Tyr Asp Arg Asp Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>127
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>127
Gln Ser Tyr Glu Arg Gly Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>128
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>128
Gln Ser Tyr Asp Asn Gly Phe Thr Gly Ala Arg Val
  1               5                  10
<210>129
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>129
Gln Ser Tyr Asp Arg Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>130
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>130
Gln Thr Tyr Asp Lys Gly Phe Thr Gly Ser Ser Val
  1               5                  10
<210>131
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>131
Gln Ser Tyr Asp Arg Asp Phe Thr Gly Thr Arg Val
  1               5                  10
<210>132
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>132
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Tyr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>133
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>133
Gln Thr Tyr Asp Lys Gly Phe Thr Gly Ser Ser Val
  1               5                  10
<210>134
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>134
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ala Arg Val
  1               5                  10
<210>135
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>135
Gln Ser Tyr Glu Arg Gly Phe Thr Gly Ala Arg Val
  1               5                  10
<210>136
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>136
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>137
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>137
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Phe Lys Val Phe
  1               5                   10
<210>138
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>138
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Val Ser Ala Tyr Val Phe
  1               5                  10
<210>139
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>139
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Thr Val Thr Lys Val Phe
  1               5                  10
<210>140
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>140
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Tyr Thr Ala Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>141
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>141
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Lys Val Phe
  1               5                  10
<210>142
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>142
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Thr Gly Phe Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>143
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>143
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Tyr Lys Val Phe
  1               5                  10
<210>144
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>144
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Thr Gly Tyr Arg Leu Phe
  1               5                  10
<210>145
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>145
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Asp Tyr Lys Val Phe
  1               5                  10
<210>146
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>146
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Pro Arg Leu Phe
  1               5                  10
<210>147
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>147
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>148
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>148
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ala Arg Val Trp
  1               5                  10
<210>149
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>149
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Tyr Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>150
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>150
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Pro Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>151
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>151
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Met Thr Ser Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>152
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>152
Gln Ser Tyr Asp Arg Asp Ser Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>153
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>153
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Arg Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>154
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>154
His Ser Tyr Asp Ser Asp Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>155
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>155
His Ser Ser Glu Ser Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>156
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>156
His Ser Tyr Asp Asn Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>157
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>157
His Ser Tyr Asp Ser Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>158
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>158
Gln Ser Tyr Asp Ser Glu Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>159
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>159
Gln Ser Tyr Asp Thr Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>160
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>160
His Ser Tyr Asp Ser Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>161
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>161
Gln Ser Tyr Asp Thr Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>162
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>162
His Ser Tyr Asp Thr Lys Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>163
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>163
His Ser Ser Asp Ser Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>164
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>164
Gln Ser Tyr Asp Ser Asp Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>165
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>165
His Ser Tyr Glu Ser Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>166
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>166
Gln Ser Tyr Asp Ala Pro Trp Ser Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>167
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>167
Gln Ser Tyr Asp Ser Asp Phe Thr Gly Ser Lys Val Phe
  1               5                  10
<210>168
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>168
His Thr Asn Asp Ser Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>169
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>169
His Ser Tyr Asp Thr Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>170
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>170
Gln Ser Tyr Asp Met Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>171
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>171
His Ser Ser Asp Ser Asp Ser Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>172
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>172
Gln Ser Tyr Asn Thr Asp Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>173
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>173
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>174
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>174
His Ser Tyr Asp Met Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>175
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>175
His Ser Tyr Asp Asn Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>176
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>176
His Ser His Asp Arg Asp Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>177
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>177
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Arg Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>178
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>178
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ile His Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>179
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>179
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Phe Pro Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>180
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>180
Gln Ser Tyr Asp Ile Gly Ser Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>181
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapicns)
<400>181
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Leu Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>182
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>182
Gln Ser Tyr Asp Ile Gly Met Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>183
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>183
Gln Ser Tyr Asp Ile Gly Leu Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>184
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>184
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Val Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>185
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>185
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Thr Ala Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>186
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>186
Gln Ser Tyr Asp Thr Gly Leu Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>187
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>187
Gln Ser Tyr Asp Thr Ala Leu Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>188
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>188
Gln Ser Tyr Asp Ile Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>189
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>189
Gln Ser Tyr Asp Ile Arg Ser Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>190
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>190
Gln Sar Tyr Asp Asn Arg Leu Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>191
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>191
Gln Ser Tyr Glu Thr Ser Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>192
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>192
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Ser Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>193
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>193
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Phe Thr Ala Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>194
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>194
Gln Thr Tyr Asp Lys Gly Phe Thr Gly Ser Ser Val Phe
  1               5                  10
<210>195
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>195
Gln Ser Tyr Asp Asn Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>196
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>196
Gln Ser Tyr Asp Thr Gly Phe Thr Lys Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>197
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>197
Gln Ser Tyr Asp Ser Asp Val Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>198
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>198
Gln Ser Tyr Asp Ala Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val Phe
  1               5                  10
<210>199
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>199
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ser Met Leu
  1               5                  10
<210>200
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>200
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Thr Pro Arg Pro Met
  1               5                  10
<210>201
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>201
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Arg Asn Pro Ala Leu Thr
  1               5                  10
<210>202
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>202
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Trp Leu His
  1               5                  10
<210>203
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>203
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Asn Ser Pro Ala Thr Val
  1               5                  10
<210>204
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>204
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Phe Pro Ser Pro Gln
  1               5                  10
<210>205
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>205
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Asn Pro Ser Ala Thr
  1               5                  10
<210>206
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>206
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Lys Ser Asn Lys Met Leu
  1               5                  10
<210>207
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>207
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly His Thr Ala His Leu Tyr
  1               5                  10
<210>208
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>208
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Gln Thr Pro Ser Ile Thr
  1               5                  10
<210>209
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>209
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Tyr Pro Arg Asn Ile Leu
  1               5                  10
<210>210
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>210
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ile Thr Pro Gly Leu Ala
  1               5                  10
<210>211
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>211
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Gln Pro His Ala Val Leu
  1               5                  10
<210>212
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>212
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Asn Ser Pro Ile Pro Thr
  1               5                  10
<210>213
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>213
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Pro Asn Asn Ser Phe
  1               5                  10
<210>214
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>214
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Val Asp Pro Gly Pro Tyr
  1               5                  10
<210>215
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>215
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Arg Pro Arg His Ala Leu
  1               5                  10
<210>216
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>216
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Pro Tyr His Pro Ile Arg
  1               5                  10
<210>217
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>217
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Pro His Thr Gln Pro Thr
  1               5                  10
<210>218
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>218
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly His Asn Asn Phe Ser Pro
  1               5                  10
<210>219
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>219
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Pro Thr His Leu Pro His
  1               5                  10
<210>220
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>220
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Pro Ser Tyr Pro Thr
  1               5                  10
<210>221
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>221
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Thr Ser Asn Leu Leu Pro
  1               5                  10
<210>222
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>222
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Asp Ser Asn His Asp Leu
  1               5                  10
<210>223
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>223
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Pro Arg Leu Thr His
  1               5                  10
<210>224
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>224
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ile Pro Thr Ser Tyr Leu
  1               5                  10
<210>225
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>225
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Arg Val Gln Ala Pro
  1               5                  10
<210>226
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>226
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Leu Ser Asp Ser Pro Leu
  1               5                  10
<210>227
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>227
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Ser Leu Arg Arg Ile Leu
  1               5                  10
<210>228
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>228
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Pro Ala Arg Thr Ser Pro
  1               5                  10
<210>229
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>229
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Arg Ala Ala His Pro Gln
  1               5                  10
<210>230
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>230
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Gln Pro Ala Asx Ile
  1               5                  10
<210>231
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>231
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Thr Met Ile
  1               5                   10
<210>232
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>232
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Arg Ile Pro Ala Asx Thr
  1               5                  10
<210>233
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>233
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Val Pro Ala
  1               5                  10
<210>234
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>234
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser Asx Pro Ile Pro Ala
  1               5                  10
<210>235
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>235
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Val Pro Ala
  1               5                  10
<210>236
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>236
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Thr Met Tyr
  1               5                  10
<210>237
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>237
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly His His Tyr Thr Thr Phe
  1               5                  10
<210>238
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>238
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser His Pro Ala Ala Glu
  1               5                  10
<210>239
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>239
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Ile Pro Ser Ile Glu
  1               5                  10
<210>240
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>240
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser Ser Pro Ala Ile Met
  1               5                  10
<210>241
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>241
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ile Trp Pro Asn Leu Asn
  1               5                  10
<210>242
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>242
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Asn Leu Asn
  1               5                  10
<210>243
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>243
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ser Ile Ser
  1               5                  10
<210>244
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>244
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser Ala Pro Met Ile Asn
  1               5                  10
<210>245
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>245
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly His His Pro Ala Met Ser
  1               5                  10
<210>246
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>246
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ser Ile Thr
  1               5                  10
<210>247
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>247
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Asp Pro Ala Ile Val
  1               5                  10
<210>248
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>248
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>249
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>249
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser His Pro Ala Leu Thr
  1               5                  10
<210>250
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>250
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Thr Pro Ala Pro Glu
  1               5                  10
<210>251
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>251
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser His Pro Thr Leu Ile
  1               5                  10
<210>252
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>252
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ser Met Leu
  1               5                  10
<210>253
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>253
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Thr Pro Arg Pro Met
  1               5                  10
<210>254
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>254
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Arg Leu Pro Ala Gln Thr
  1               5                  10
<210>255
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>255
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Leu Thr Ile
  1               5                  10
<210>256
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>256
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Gln Thr Pro Ser Ile Thr
  1               5                  10
<210>257
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>257
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Phe Gln Met Tyr
  1               5                  10
<210>258
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>258
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Arg Asn Pro Ala Leu Thr
  1               5                  10
<210>259
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>259
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Leu Thr Met
  1               5                  10
<210>260
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>260
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Leu Thr Met
  1               5                  10
<210>261
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>261
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Tyr Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>262
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>262
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>263
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>263
Gln Ser Tyr Asp Ser Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>264
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>264
Gln Ser Tyr Pro Asp Gly Thr Pro Ala Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>265
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>265
Gln Ser Tyr Ser Thr His Met Pro Ile Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>266
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>266
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Ser Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>267
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>267
Gln Ser Tyr Pro Asn Ser Tyr Pro Ile Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>268
<211>10
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>268
Gln Ser Tyr Ile Arg Ala Pro Gln Gln Val
  1               5                  10
<210>269
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>269
Gln Ser Tyr Leu Lys Ser Arg Ala Phe Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>270
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>270
Gln Ser Tyr Asp Ser Arg Phe Thr Gly Ser Arg Val
  1               5                  10
<210>271
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>271
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>272
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>272
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>273
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>273
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Phe Asp Gly
  1               5                  10
<210>274
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>274
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Ala Pro Ala Leu Ser
  1               5                  10
<210>275
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>275
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Ser Tyr Pro Ala Leu Arg
  1               5                  10
<210>276
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>276
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Asn Trp Pro Asn Ser Asn
  1               5                  10
<210>277
<211>12
<2L2>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>277
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Ala Pro Ser Leu Leu
  1               5                  10
<210>278
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>278
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>279
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>279
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr Thr Pro Arg Ile Arg
  1                  5               10
<210>280
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>280
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>281
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>281
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>282
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>282
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Met Ile Pro Ala Leu Thr
  1               5                  10
<210>283
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>283
Gln Ser Tyr Asp Arg Asn Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>284
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>284
Gln Ser Tyr Asp Arg Phe Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>285
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>285
Gln Ser Tyr Asp Arg Tyr Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>285
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>286
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>287
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>287
Gln Ser Tyr Asp Arg Tyr Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>288
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>288
Phe Thr Phe Glu Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>289
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>289
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>290
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>290
Phe Thr Phe Tyr Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>291
<211>9
<212>PRT
<212>人(Homo sapiens)
<400>291
Phe Thr Phe His Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>292
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>292
Phe Thr Phe Lys Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>293
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>293
Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>294
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>294
Phe Thr Phe Asn Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>295
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>295
Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>296
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>296
Phe Thr Phe Gly Set Tyr Gly Met His
  1               5
<210>297
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>297
Phe Thr Phe Val Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>298
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>298
Phe Thr Phe Ile Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>299
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>299
Phe Thr Phe Trp Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>300
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>300
Phe Thr Phe Ser Glu Tyr Gly Met His
  1               5
<210>301
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>301
Phe Thr Phe Ser Cys Tyr Gly Met His
  1               5
<210>302
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>302
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>303
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>303
Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr Gly Met His
  1               5
<210>304
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>304
Phe Thr Phe Ser His Tyr Gly Met His
  1               5
<210>305
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>305
Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly Met His
  1               5
<210>306
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>306
Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly Met His
  1               5
<210>307
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>307
Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Gly Met His
  1               5
<210>308
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>308
Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met His
  1               5
<210>309
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>309
Phe Thr Phe Ser Ala Tyr Gly Met His
  1               5
<210>310
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>310
Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Gly Met His
  1               5
<210>311
<211)9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>311
Phe Thr Phe Ser Ser Glu Gly Met His
  1               5
<210>312
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>312
Phe Thr Phe Ser Ser Cys Gly Met His
  1               5
<210>313
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>313
Phe Thr Phe Ser Ser Ser Gly Met His
  1               5
<210>314
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>314
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>315
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>315
Phe Thr Phe Ser Ser His Gly Met His
  1               5
<210>316
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>316
Phe Thr Phe Ser Ser Arg Gly Met His
  1               5
<210>317
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>317
Phe Thr Phe Ser Ser Asn Gly Met His
  1               5
<210>318
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>318
Phe Thr Phe Ser Ser Thr Gly Met His
  1               5
<210>319
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>319
Phe Thr Phe Ser Ser Ala Gly Met His
  1               5
<210>320
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>320
Phe Thr Phe Ser Ser Val Gly Met His
  1               5
<210>321
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>321
Phe Thr Phe Ser Ser Leu Gly Met His
  1               5
<210>322
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>322
Phe Thr Phe Ser Ser Ile Gly Met His
  1               5
<210>323
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>323
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met His
  1               5
<210>324
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>324
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Glu Met His
  1               5
<210>325
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>325
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Cys Met His
  1               5
<210>326
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>326
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met His
  1               5
<210>327
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>327
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr Met His
  1               5
<210>328
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>328
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asn Met His
  1               5
<210>329
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>329
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
  1               5
<210>330
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>330
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His
  1               5
<210>331
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>331
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val Met His
  1               5
<210>332
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>332
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Met Met His
  1               5
<210>333
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>333
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ile Met His
  1               5
<210>334
<211>9
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>334
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Pro Met His
  1               5
<210>335
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>335
Glu Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>336
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>336
Cys Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>337
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>337
Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>338
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>338
His Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>339
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>339
Lys Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>340
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>340
Asn Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>341
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>341
Gln Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>342
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>342
Thr Ile Arg Tyr Asp Gly ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>343
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>343
Leu Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>344
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>344
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>345
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>345
Phe Ile Glu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>346
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>346
Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>347
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>347
Phe Ile Tyr Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>348
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>348
Phe Ile His Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>349
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>349
Phe Ile Lys Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>350
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>350
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>351
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>351
Phe Ile Gln Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>352
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>352
Phe Ile Thr Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>353
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>353
Phe Ile Gly Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>354
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>354
Phe Ile Ala Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<211>355
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>355
Phe Ile Val Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>356
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>356
Phe Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>357
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>357
Phe Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>358
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>358
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>359
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>359
Phe Ile Arg Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>360
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>360
Phe Ile Arg Tyr Ser Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>361
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>361
Phe Ile Arg Tyr Tyr Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>362
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>362
Phe Ile Arg Tyr Lys Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>363
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>363
Phe Ile Arg Tyr Arg Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>364
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>364
Phe Ile Arg Tyr Asn Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>365
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>365
Phe Ile Arg Tyr Gln Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>366
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>366
Phe Ile Arg Tyr Thr Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>367
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>367
Phe Ile Arg Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>368
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>368
Phe Ile Arg Tyr Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>369
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>369
Phe Ile Arg Tyr Leu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>370
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>370
Phe Ile Arg Tyr Ile Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>371
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>371
Phe Ile Arg Tyr Phe Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>372
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>372
Phe Ile Arg Tyr Asp Asp Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>373
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>373
Phe Ile Arg Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>374
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>374
Phe Ile Arg Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>375
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>375
Phe Ile Arg Tyr Asp Tyr Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>376
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>376
Phe Ile Arg Tyr Asp Lys Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>377
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>377
Phe Ile Arg Tyr Asp Arg Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>378
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>378
Phe Ile Arg Tyr Asp Asn Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>379
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>379
Phe Ile Arg Tyr Asp Gln Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>380
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>380
Phe Ile Arg Tyr Asp Thr Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>381
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>381
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>382
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>382
Phe Ile Arg Tyr Asp Val Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>383
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>383
Phe Ile Arg Tyr Asp Phe Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>384
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>384
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>385
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>385
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                 15
Gly
<210>386
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>386
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>387
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>387
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>388
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>388
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>389
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>389
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Gly Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>390
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>390
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Met Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>391
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>391
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Leu Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>392
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>392
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>393
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>393
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Pro Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>394
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>394
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Phe Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>395
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>395
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Scr Asn Lys Glu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>396
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>396
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>397
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>397
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>398
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>398
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>399
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>399
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>400
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>400
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>401
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>401
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Ile Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>402
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>402
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Pro Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>403
<211>17
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>403
Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
  1               5                  10                  15
Gly
<210>404
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>404
Glu Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>405
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>405
Ser Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>406
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>406
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>407
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>407
Lys Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>408
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>408
Gln Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>409
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>409
Thr Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>410
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>410
Ala Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>411
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>411
Leu Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>412
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>412
Pro Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>413
<211>6
<212>PRT
<212>人(Homo sapiens)
<400>413
Phe Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>414
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>414
His Asp Ser His Asp Asn
  1               5
<210>415
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>415
His Cys Ser His Asp Asn
  1               5
<210>416
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>416
His His Ser His Asp Asn
  1               5
<210>417
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>417
His Arg Ser His Asp Asn
  1               5
<210>418
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>418
His Thr Ser His Asp Asn
  1               5
<210>419
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapicns)
<400>419
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>420
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>420
His Val Ser His Asp Asn
  1               5
<210>421
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>421
His Met Ser His Asp Asn
  1               5
<210>422
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>422
His Leu Ser His Asp Asn
  1               5
<210>423
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>423
His Ile Ser His Asp Asn
  1               5
<210>424
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>424
His Pro Ser His Asp Asn
  1               5
<210>425
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>425
His Trp Ser His Asp Asn
  1               5
<210>426
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>426
His Gly Asp His Asp Asn
  1               5
<210>427
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>427
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>428
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>428
His Gly Tyr His Asp Asn
  1               5
<210>429
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>429
His Gly His His Asp Asn
  1               5
<210>430
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>430
His Gly Arg His Asp Asn
  1               5
<210>431
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>431
His Gly Asn His Asp Asn
  1               5
<210>432
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>432
His Gly Thr His Asp Asn
  1               5
<210>433
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>433
His Gly Gly His Asp Asn
  1               5
<210>434
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>434
His Gly Ala His Asp Asn
  1               5
<210>435
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>435
His Gly Ile His Asp Asn
  1               5
<210>436
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>436
His Gly Pro His Asp Asn
  1               5
<210>437
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>437
His Gly Trp His Asp Asn
  1               5
<210>438
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>438
His Gly Phe His Asp Asn
  1               5
<210>439
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>439
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>440
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>440
His Gly Ser Arg Asp Asn
  1               5
<210>441
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>441
His Gly Ser Thr Asp Asn
  1               5
<210>442
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>442
His Gly Ser Ala Asp Asn
  1               5
<210>443
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>443
His Gly Ser Val Asp Asn
  1               5
<210>444
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>444
His Gly Ser Leu Asp Asn
  1               5
<210>445
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>445
His Gly Ser Ile Asp Asn
  1               5
<210>446
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>446
His Gly Ser Phe Asp Asn
  1               5
<210>447
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>447
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>448
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>448
His Gly Ser His Ser Asn
  1               5
<210>449
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>449
His Gly Ser His Tyr Asn
  1               5
<210>450
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>450
His Gly Ser His His Asn
  1               5
<210>451
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>451
His Gly Ser His Arg Asn
  1               5
<210>452
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>452
His Gly Ser His Asn Asn
  1               5
<210>453
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>453
His Gly Ser His Gly Asn
  1               5
<210>454
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>454
His Gly Ser His Ala Asn
  1               5
<210>455
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>455
His Gly Ser His Val Asn
  1               5
<210>456
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>456
His Gly Ser His Ile Asn
  1               5
<210>457
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>457
His Gly Ser His Asp Ser
  1               5
<210>458
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>458
His Gly Ser His Asp His
  1               5
<210>459
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>459
His Gly Ser His Asp Lys
  1               5
<210>460
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>460
His Gly Ser His Asp Arg
  1               5
<210>461
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>461
His Gly Ser His Asp Asn
  1               5
<210>462
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>462
His Gly Ser His Asp Thr
  1               5
<210>463
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>463
His Gly Ser His Asp Gly
  1               5
<210>464
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>464
His Gly Ser His Asp Ala
  1               5
<210>465
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>465
His Gly Ser His Asp Leu
  1               5
<210>466
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>466
His Gly Ser His Asp Ile
  1               5
<210>467
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>467
His Gly Ser His Asp Pro
  1               5
<210>468
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>468
His Gly Ser His Asp Trp
  1               5
<210>469
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>469
His Gly Ser His Asp Phe
  1               5
<210>470
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>470
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Asp Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>471
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>471
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Cys Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>472
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>472
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>473
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>473
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Tyr Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>474
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>474
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Lys Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>475
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>475
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Arg Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>476
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>476
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Asn Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>477
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>477
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Thr Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>478
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>478
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Pro Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>479
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>479
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asp Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>480
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>480
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Glu Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>481
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>481
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Ser Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>482
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>482
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Tyr Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>483
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>483
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser His Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>484
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>484
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Lys Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>485
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>485
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>486
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>486
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Gln Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>487
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>487
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Thr Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>488
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>488
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Gly Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>489
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>489
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Met Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>490
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>490
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Ile Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>491
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>491
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Lys
  1               5                  10
<210>492
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>492
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Cys Val Lys
  1               5                  10
<210>493
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>493
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ser Val Lys
  1               5                  10
<210>494
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>494
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Lys
  1               5                  10
<210>495
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>495
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn His Val Lys
  1               5                  10
<210>496
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>496
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Lys Val Lys
  1               5                  10
<210>497
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>497
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Arg Val Lys
  1               5                  10
<210>498
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>498
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asn Val Lys
  1               5                  10
<210>499
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>499
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Gln Val Lys
  1               5                  10
<210>500
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>500
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Lys
  1               5                  10
<210>501
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>501
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ala Val Lys
  1               5                  10
<210>502
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>502
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Val Val Lys
  1               5                  10
<210>503
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>503
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Leu Val Lys
  1               5                  10
<210>504
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>504
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ile Val Lys
  1               5                  10
<210>505
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>505
Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Pro Val Lys
  1               5                  10
<210>506
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>506
Asp Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>507
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>507
Glu Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>508
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>508
Cys Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>509
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>509
Ser Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>510
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>510
Tyr Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>511
<211)7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>511
His Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>512
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>512
Lys Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>513
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>513
Arg Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>514
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>514
Asn Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>515
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>515
Gln Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>516
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>516
Thr Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>517
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>517
Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>518
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>518
Ala Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>519
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>519
Val Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>520
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>520
Met Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>521
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>521
Leu Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>522
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>522
Ile Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>523
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>523
Pro Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>524
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>524
Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>525
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>525
Phe Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>526
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>526
Gly Asn Asp Ser Arg Pro Ser
  1               5
<210>527
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>527
Gly Asn Asp Tyr Arg Pro Ser
  1               5
<210>528
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>528
Gly Asn Asp Arg Arg Pro Ser
  1               5
<210>529
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>529
Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser
  1               5
<210>530
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>530
Gly Asn Asp Thr Arg Pro Ser
  1               5
<210>531
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>531
Gly Asn Asp Ala Arg Pro Ser
  1               5
<210>532
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>532
Gly Asn Asp Ile Arg Pro Ser
  1               5
<210>533
<211>7
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>533
Gly Asn Asp Pro Arg Pro Ser
  1               5
<210>534
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>534
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>535
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>535
Gln Ser Tyr Cys Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>536
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>536
Gln Ser Tyr Ser Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>537
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>537
Gln Ser Tyr Tyr Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>538
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>538
Gln Ser Tyr Asn Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>539
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>539
Gln Ser Tyr Gln Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>540
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>540
Gln Ser Tyr Thr Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>541
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>541
Gln Ser Tyr Gly Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>542
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>542
Gln Ser Tyr Ala Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>543
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>543
Gln Ser Tyr Leu Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>544
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>544
Gln Ser Tyr Ile Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>545
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>545
Gln Ser Tyr Trp Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>546
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>546
Gln Ser Tyr Phe Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>547
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>547
Gln Ser Tyr Asp Asp Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>548
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>548
Gln Ser Tyr Asp Cys Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>549
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>549
Gln Ser Tyr Asp Ser Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>550
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>550
Gln Ser Tyr Asp Tyr Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>551
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapicns)
<400>551
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>552
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>552
Gln Ser Tyr Asp Asn Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>553
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>553
Gln Ser Tyr Asp Gln Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>554
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>554
Gln Ser Tyr Asp Thr Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>555
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>555
Gln Ser Tyr Asp Gly Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>556
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>556
Gln Ser Tyr Asp Ala Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>557
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>557
Gln Ser Tyr Asp Val Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>558
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>558
Gln Ser Tyr Asp Met Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>559
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>559
Gln Ser Tyr Asp Leu Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>560
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>560
Gln Ser Tyr Asp Ile Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>561
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>561
Gln Ser Tyr Asp Pro Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>562
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>562
Gln Ser Tyr Asp Trp Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>563
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>563
Gln Ser Tyr Asp Arg Asp Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>564
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>564
Gln Ser Tyr Asp Arg Cys Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>565
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>565
Gln Ser Tyr Asp Arg Ser Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>566
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>566
Gln Ser Tyr Asp Arg Tyr Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>567
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>567
Gln Ser Tyr Asp Arg His Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>568
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>568
Gln Ser Tyr Asp Arg Arg Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>569
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>569
Gln Ser Tyr Asp Arg Asn Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>570
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>570
Gln Ser Tyr Asp Arg Gln Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>571
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>571
Gln Ser Tyr Asp Arg Thr Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>572
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>572
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>573
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>573
Gln Ser Tyr Asp Arg Ala Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>574
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>574
Gln Ser Tyr Asp Arg Val Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>575
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>575
Gln Ser Tyr Asp Arg Leu Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>576
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>576
Gln Ser Tyr Asp Arg Ile Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>577
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>577
Gln Ser Tyr Asp Arg Pro Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>578
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>578
Gln Ser Tyr Asp Arg Trp Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>579
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>579
Gln Ser Tyr Asp Arg Phe Thr His Pro Ala Leu Leu
  1               5                  10
<210>580
<211>48
<212>DNA
<213>合成构建体
<223>在位置16-34的核苷酸可被任何核苷酸取代，
从而使随机选择的核苷酸占所述序列的12％
<400>580
tgtcccttgg ccccagtagt catagctccc actggtcgta cagtaata    48
<210>581
<211>35
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>581
gacacctcga tcagcggata acaatttcac acagg                  35
<210>582
<211>15
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>582
tggggccaag ggaca                                        15
<210>583
<211>45
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>583
attcgtccta taccgttcta ctttgtcgtc tttccagacg ttagt                 45
<210>584
<211>18
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>584
attcgtccta taccgttc                                               18
<210>585
<211>66
<212>DNA
<213>合成构建体
<223>来自位置28-42的核苷酸可被任何核苷酸取代，
从而使随机选择的核苷酸占所述序列的12％
<400>585
ggtcccagtt ccgaagaccc tcgaacccct caggctgctg tcatatgact ggcagtaata 60
gtcagc                                                            66
<210>586
<211>15
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>586
tggggccaag ggaca                                                  15
<210>587
<211>24
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>587
tgaagagacg gtgaccattg tccc                                        24
<210>588
<211>16
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>588
gacacctcga tcagcg                                                 16
<210>589
<211>48
<212>DNA
<213>合成构建体
<400>589
gagtcattct cgacttgcgg ccgcacctag gacggtcagc ttggtccc              48
<210>590
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>590
Gln Sar Tyr Asp Arg Gly Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>591
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa由序列NNS的随机选择的密码子编码，N为任何核苷酸，S为
脱氧胞苷或脱氧鸟苷
<400>591
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Thr Gly Ser Met Val
  1               5                  10
<210>592
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa由序列NNS的随机选择的密码子编码，N为任何核苷酸，S为
脱氧胞苷或脱氧鸟苷
<400>592
Gln Ser Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Met Val
  1               5                  10
<210>593
<211>12
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>Xaa由序列NNS的随机选择的密码子编码，N为任何核苷酸，S为
脱氧胞苷或脱氧鸟苷
<400>593
Gln Ser Tyr Asp Arg Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
  1               5                  10
<210>594
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>594
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
             20                  25                  30
Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg
            100
<210>595
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>595
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
             20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
         35                  40                  45
Gly Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Ser Val Lys G1y Arg Leu Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg
            100
<210>596
<211>100
<2L2>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>596
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
             20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
         35                  40                  45
Gly Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Met Tyr Leu Gln Met Ser Asn Leu Lys Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg
            100
<210>597
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>597
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
             20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
         35                  40                  45
Gly Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg
            100
<210>598
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>598
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>599
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>599
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
             20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>600
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>600
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
             20                  25                  30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Trp Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>601
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>601
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
             20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>602
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>602
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
             20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>603
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>603
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ser
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Ala Thr Ala Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Thr Arg
            100
<210>604
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>604
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
             20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr
            100
<210>605
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>605
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
             20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Glu Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr
            100
<210>606
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>605
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
             20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
     50                 55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr
            100
<210>607
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>607
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
             20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr
            100
<210>608
<211>100
<212>PRT
<2L3>人(Homo sapiens)
<400>608
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
             20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr
            100
<210>609
<211>100
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>609
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
             20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
     50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
 65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                 85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr
            100
<210>610
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>610
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Pro Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn His
             20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Gly Asp Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ser Pro Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Lys
<210>611
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>611
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn His
             20                  25                  30
Tyr Thr Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Tyr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Lys
<210>612
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>612
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly G1y Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
             20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val His Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Val Ser Trp Asn Gly Ser Arg Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Thr Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Arg
<210>613
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>613
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
             20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Ala Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Val Ser Trp Asn Gly Ser Arg Thr His Tyr Val Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Arg Arg Phe IIe Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Lys Asn Arg Arg Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Arg
<210>614
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>614
Thr Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Glu Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
             20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Val Ser Trp Asn Gly Ser Arg Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Phe Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Gln Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Arg
<210>615
<211>97
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>615
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ala Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
             20                  25                  30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Asn Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg
<210>616
<211>97
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>616
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
 1                5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
             20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg
<210>617
<211>97
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>617
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Thr Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg
<210>618
<211>97
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>618
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Thr Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg
<210>619
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>619
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>620
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>620
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Val Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Lys
<210>621
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>621
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Val Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Lys
<210>622
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>622
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>623
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>623
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>624
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>624
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>625
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>625
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
AlaArg
<210>626
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>626
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>627
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>627
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>628
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>628
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>629
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>629
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>630
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>630
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<2l0>631
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>631
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>632
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>632
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                   70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>633
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>633
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Val Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Lys
<210>634
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>634
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>635
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>635
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>636
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>636
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>637
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>637
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>638
<211>97
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>638
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg
<210>639
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>639
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>640
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>640
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Leu Arg Ala Arg Leu Cys Ile Thr Val
                 85                  90                  95
Arg Glu
<210>641
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>641
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>642
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>642
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>643
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>643
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>644
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>644
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>645
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>645
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>646
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>646
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg G1n Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>647
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>647
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>648
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>648
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                 25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Gly Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>649
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>649
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>650
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>650
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>651
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>651
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>652
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>652
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys
<210>653
<211>95
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>653
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Arg Lys
                 85                  90                  95
<210>654
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>654
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>655
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>655
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Thr Asn Thr Leu Phe
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>656
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>656
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>657
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>657
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>658
<211>97
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>658
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg
<210>659
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>659
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
               85                  90                  95
Ala Arg
<210>660
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>660
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>661
<211>97
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>661
Glu Asp Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  l               5                  10                  15
Ser Leu Arg Pro Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Val Leu His Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Gly Thr Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Met
     50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Ile Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg
<210>662
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>662
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
         35                  40                  45
Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>663
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>663
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
         35                  40                  45
Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>664
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>664
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>665
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>665
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
         35                  40                  45
Ser Arg Ile Asn Ser Asp Gly Ser Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Met
     50                  55                  60
Lys Gly Gln Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Arg
<210>666
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>666
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg
<210>667
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>667
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Thr Thr
<210>668
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>668
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
             20                  25                  30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
                 85                  90                  95
Ser Ala
<210>669
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>669
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asp Met Gly Asn Tyr
             20                  25                  30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Glu Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Trp
 65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Thr Ser Pro
                 85                  90                  95
Arg Ala
<210>670
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>670
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                 85                  90                  95
Asn Gly
<210>671
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>671
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
 65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                 85                  90                  95
Ser Gly
<210>672
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>672
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Glu Ala Pro Arg Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
             20                  25                  30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
         35                  40                  45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
     50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
 65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
                 85                  90                  95
Asn Gly
<210>673
<211>99
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>673
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Cly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
             20                  25                  30
Tyr Val Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
         35                  40                  45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Gln Phe
     50                  55                  60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Lys Ala Trp Asp Asn Ser
                 85                  90                  95
Leu Asn Ala
<210>674
<211>99
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>674
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
             20                  25                  30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
         35                  40                  45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
     50                  55                  60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
 65                  70                  75                  80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
                 85                  90                  95
Leu Ser Gly
<210>675
<211>98
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>675
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
  1               5                  10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn
             20                  25                  30
Thr Val Lys Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Gly Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Val Gln
65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
                85                  90                  95
Arg Gly

Claims (20)

1.分离的抗体，或其抗原结合部分，其能结合到IL-12的p40亚基，并能改变IL-12的所述p40亚基的构象结构。
2.权利要求1所述的分离的抗体，或其抗原结合部分，据表面等离振子共振测定，其从人IL-12的所述p40亚基解离的Kd为1×10- 10M或更少，或koff速率常数为1×10-3s-1或更少。
3.权利要求1所述的分离的抗体，或其抗原结合部分，其为中和抗体。
4.权利要求3所述的分离的抗体，或其抗原结合部分，其在体外PHA分析中抑制植物凝集素母细胞增殖的IC50为1×10-9M或更少，或其抑制人IFNγ生成的IC50为1×10-10M或更少。
5.权利要求1所述的分离的抗体，或其抗原结合部分，其为人抗体。
6.药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，以及药学上可接受的载体。
7.检测白细胞介素的所述p40亚基的方法，其包含使IL-12的所述p40亚基与权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分接触，从而检测所述p40亚基。
8.检测白细胞介素的所述p40亚基的方法，其包含使所述白细胞介素的p40亚基与权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分接触，从而检测所述白细胞介素的p40亚基。
9.权利要求7所述的方法，其中所述白细胞介素的p40亚基在体外检测。
10.权利要求7所述的方法，其中为诊断目的，在生物样本中检测所述白细胞介素的p40亚基。
11.抑制包含p40亚基的白细胞介素活性的方法，其包含将所述白细胞介素与权利要求1的所述抗体，或其抗原结合部分接触，从而抑制所述活性。
12.抑制患其中所述活性是有害的疾病的人受试者中，包含p40亚基的白细胞介素活性的方法，其包含将权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分施用于所述人受试者，从而抑制所述人受试者中的所述活性。
13.权利要求11所述的方法，其中所述白细胞介素是IL-12。
14.权利要求11所述的方法，其中所述白细胞介素包含p40亚基和p19亚基。
15.权利要求11所述的方法，其中所述白细胞介素是IL-23。
16.权利要求12所述的方法，其中所述疾病选自类风湿关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎、莱姆关节炎、银屑病性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎症性肠病、多发性硬化症、胰岛素依赖型糖尿病、甲状腺炎、哮喘、过敏病、牛皮癣、硬化性皮炎、甲状腺炎、移植物抗宿主病、器官移植排斥反应、器官移植相关急性或慢性免疫疾病、结节病、动脉粥样硬化、弥漫性血管内凝血、川崎氏病、格雷夫病、肾病综合征、慢性疲劳综合征、结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、过敏性紫癜、肾脏的显微镜下血管炎、慢性活动性肝炎、干燥综合征、葡萄膜炎、败血症、感染性休克、脓毒症综合征、成人呼吸窘迫综合征、恶病质、传染病、寄生虫病、获得性免疫缺陷综合症、急性横贯性脊髓炎、重症肌无力症、亨廷顿氏舞蹈病、帕金森氏症、阿尔茨海默氏症、中风、原发性胆汁性肝硬化、肝纤维化肺疾病、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰竭和心肌梗死。
17.权利要求12所述的方法，其中所述疾病是银屑病。
18.权利要求12所述的方法，其中所述疾病是类风湿性关节炎。
19.改变IL-12的p40亚基构象结构的方法，所述方法包含将所述亚基与能以有效改变所述亚基构象结构的量结合到所述亚基，并能改变所述亚基构象结构的抗体或其抗原结合部分接触，从而改变所述亚基的构象结构。
20.抑制包含p40亚基的白细胞介素活性的方法，所述方法包含将所述白细胞介素与能以有效改变所述白介素构象结构的量结合到IL-12的所述p40亚基，并能改变所述白介素构象结构的抗体或其抗原结合部分接触，从而抑制所述白细胞介素的活性。
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