JP2010207200A - アトピー素因判定マーカー、アレルギー性皮膚疾患素因判定マーカー及びそれらの使用法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 FcεR1α遺伝子発現物質またはCD207遺伝子発現物質を含むマーカーは、アトピー素因判定及びアトピー性皮膚炎診断用マーカーとして利用できる。さらに、健康な皮膚における表皮を用いてこれらのマーカーを測定することによって、アトピー素因を判定でき、アトピー性皮膚炎の予防につなげることができる。
【選択図】 なし
Description
本発明に係るマーカーはHigh affinity immunoglobulin E receptor (FcεR1)α遺伝子の遺伝子発現物質あるいはCD207遺伝子の遺伝子発現物質である。
マーカーの測定は被検体の表皮組織を採取することにより行う。表皮は被検体の身体のいずれの部位から採取した表皮であってもよく、例えば、バイオプシーにより採取した皮膚から単離した表皮であっても、粘着性のあるパッチなどではがし取った表皮であってもよいが、被検体への侵襲度と簡易性を考慮すると、採取した体毛の毛根周囲に付着した表皮であることが好ましく、体毛は頭髪であることがより好ましい。頭髪を採取する場合、一被検体からの採取数は1本であっても、複数本であってもよいが、被検体の苦痛を考慮すると、3本から7本であることが好ましく、より安定した結果を得るためには5本以上であることがさらに好ましい。なお、ここで用いる体毛あるいは頭髪は、自然に抜け落ちた毛より、生育中の健康な毛であることが好ましい。
FcεR1α-Forward: GCAAAGTGTGGCAGCTGGAC(配列番号1)
FcεR1α-Reverse: TCCACAGCAAACAGAATCACCA(配列番号2)
CD207-Forward: TTGGCCAAACCCCCTAGAA(配列番号3)
CD107-Reverse: CACTGCAAACACAGCCAGCT(配列番号4)
を例示することができる。
上記のようにマーカーの測定に用いるプライマー、プローブ、抗体を、当業者に周知の薬学的に許容される担体、希釈剤、腑形剤等を用いて剤形化して、アトピー素因判定剤またはアレルギー性皮膚疾患素因判定剤として利用することができる。この剤形化に伴って、FcεR1α及びCD207の2種のmRNAを同時に検出できるように、プローブやプライマーを混合してもよく、また、FcεR1α及びCD207の2種のタンパク質を同時に検出できるように抗体を混合してもよい。
本発明に係るマーカーを上記に例示したような任意の方法で測定することにより、アトピー素因判定あるいはアレルギー性皮膚疾患素因判定を行うことができる。アトピー素因判定あるいはアレルギー性皮膚疾患素因判定のためには、あらかじめ測定した複数人の健常体表皮組織におけるマーカー測定値から平均値や正常値範囲等の指標を設定し、この指標と被検体における測定値を比較することにより行うことが好ましく、被検体の測定値が指標より高い場合に、アトピー素因あるいはアレルギー性皮膚疾患素因があると判定する。なお、ここで、健常体とは、アトピー性皮膚炎を含むI型アレルギー性疾患を発症していない被検体をいう。
[実験方法]
==試料採取==
頭部にアトピー性皮膚炎を発症している患者(日本皮膚炎学会アトピー性皮膚炎重症度分類では重症に分類される患者群)(頭部AD、N=8、女性6名、男性2名、15歳〜54歳 平均34歳)、頭部以外の身体の一部に重度のアトピー性皮膚炎を発症している患者(日本皮膚炎学会アトピー性皮膚炎重症度分類では重症に分類される患者群)(体AD、N=8、女性7名、男性1名、5歳〜54歳、平均34歳)、頭部が乾癬に罹患している患者(頭部乾癬、N=5、男性3名、女性2名、20歳〜56歳、平均41歳)、頭以外の身体の一部が乾癬に罹患している患者(体乾癬、N=3、男性1名、女性2名、29歳〜56歳、平均44歳)、健常被検者(N=15、男性7名、女性8名、21歳〜38歳、平均25歳)から健康な頭髪を5本ずつ採取した。なお、健常被検者各群は異なる被験者から異なる時期に試料を採取した。なお、アトピー性皮膚炎の診断は、日本皮膚科学会アトピー性皮膚炎診療ガイドライン作成委員会が作成した診断基準に基づき行った(日皮会誌:118(3), 325-342, 2008)。
上記のように採取した頭髪の毛根部分(根元から1cm程)を QIAGEN RNAlater(QIAGEN社) 1mlに浸し、4℃にて保存した。遠心してRNAlaterを除去した後に、 QIAGEN RNeasy Mini Kit (QIAGEN社)のBuffer RLTを加えて毛根組織を溶解し、QIAshredderを用いてホモゲナイズした後に、RNeasy Mini Kitのプロトコールに従って全RNAを抽出した。抽出した全RNAは、iScript cDNA Synthesis Kit(BIO-RAD社)を用いてcDNAを合成した。
SYBR Green Realtime PCR Master Mix-Plus(TOYOBO社)を用いて、Applied Biosystems 7300 リアルタイムPCRシステムにて測定した。測定に際しては、Human Universal Reference Total RNA(Clontech社)を使って調製したスタンダードを用いて検量線を作成し、House keeping geneとしてACTB(Forward: CCCAGCCATGTACGTTGCTAT(配列番号5), Reverse: TCACCGGAGTCCATCACGAT(配列番号6))で補正を行って全 RNA 1ngあたりのコピー数を算出した。測定のためのプライマーセットとして、FcεR1α (Forward: GCAAAGTGTGGCAGCTGGAC(配列番号1), Reverse: TCCACAGCAAACAGAATCACCA(配列番号2))CD207 (Forward: TTGGCCAAACCCCCTAGAA(配列番号3), Reverse: CACTGCAAACACAGCCAGCT(配列番号4)),を使用した。
本実施例では健康な頭髪及び患者から採取した頭髪において、毛根組織量と、その毛根に付着する表皮組織量の比が一定であることを示す。
KRT14-Forward: ACCAAGAACTGAGGCTGCCC(配列番号7)
KRT14-Reverse: TGAAGCTGTATTGATTGCCAGGA(配列番号8)
LOXL2-Forward: TCGAGGTTGCAGAATCCGATT(配列番号9)
LOXL2-Reverse: TCCGTCTCTTCGCTGAAGGAA(配列番号10)
なお、マイクロアレイ解析によって、培養皮膚角化細胞と培養毛乳頭細胞をさまざまなサイトカインで刺激しても変動が少なく、かつ培養皮膚角化細胞と培養毛培養乳頭細胞の間で遺伝子発現量が大きく異なる遺伝子を検索したところ、皮膚角化細胞ではKRT4が、毛乳頭細胞ではLOXL2が見出されている。
本実施例では、FcεR1α及びCD207がアトピー性皮膚炎に罹患した表皮及びアトピー素因を有する被検体の表皮で高く発現することを示す。
Claims (6)
- 健康な皮膚における表皮を用いてアトピー素因またはアレルギー性皮膚疾患素因を判定するための素因判定マーカーであって、
FcεR1α遺伝子発現物質またはCD207遺伝子発現物質であるマーカー。 - 健康な皮膚における表皮を用いてアトピー素因またはアレルギー性皮膚疾患素因を判定するための素因判定剤であって、
FcεR1α遺伝子発現物質またはCD207遺伝子発現物質を検出するためのプライマー、プローブ、または抗体を含有することを特徴とする素因判定剤。 - 健康な皮膚における表皮を用いてアトピー素因またはアレルギー性皮膚疾患素因を判定するための素因判定キットであって、
請求項2に記載の素因判定剤を含有することを特徴とするキット。 - 健康な皮膚における表皮の抽出物において、FcεR1α遺伝子の発現またはCD207遺伝子の発現を検出することを特徴とする測定方法。
- 被検者から採取した健康な頭髪を用いて、FcεR1α遺伝子の発現またはCD207遺伝子の発現を検出する工程を含むことを特徴とする測定方法。
- 前記頭髪が3〜7本であることを特徴とする、請求項5に記載の測定方法。
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