JP5676777B2 - 関節リウマチ活動性指標を同定する方法及びそれに用いるバイオマーカー - Google Patents
関節リウマチ活動性指標を同定する方法及びそれに用いるバイオマーカー Download PDFInfo
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Description
本実施形態に係る被験者における関節リウマチに関連する指標の値を同定する方法は、上述したように、前記被験者由来の血液中のFAM20A遺伝子の発現量を測定する工程と、前記測定した発現量を、予め用意された前記指標に相関する遺伝子発現プロファイルを用いて解析する工程と、前記解析した結果に基づき、前記被験者における前記指標の値を推定する工程と、を有することを特徴とするものである。
以下に、本願発明の一実施形態に係る遺伝子マーカーの効果を証明するために使用した実験手法および物質並びにその定義を説明する。なお、本実施形態において、以下の実験手法を用いているが、これら以外の実験手法を用いても、同様の結果を得ることができる。
(遺伝子の定量)
また、本実施形態において、遺伝子マーカーが遺伝子または遺伝子の転写物(mRNA)である場合、遺伝子の発現量の測定(定量)は、例えば、DNAチップ、マイクロアレイ法、リアルタイムPCR、ノーザンブロット法、ドットブロット法、定量的RT−PCR(quantitative reverse transcription−polymerase chain reaction)法等の種々の分子生物学的手法によってmRNA量を測定することにより行うことができる。
以下に、本発明のマーカー遺伝子の探索・選定方法について説明する。
以下に、本願発明に係るFAM20A遺伝子の解析結果について説明する。
同一関節リウマチ患者について、薬物治療前後をフォローした際にFAM20Aがどのように発現変動するかを検証した。
FAM20Aの関節リウマチ患者、健常者、肝炎患者における発現量を比較し、FAM20Aの関節リウマチ診断マーカーとしての可能性を検証した。なお、肝炎患者のサンプルは、炎症疾患コントロールとして比較に用いた。
「関節リウマチ患者における末梢血FAM20A発現と関節リウマチ活動性の相関」および「健常者と関節リウマチ患者における末梢血FAM20A発現の差」について、リアルタイムPCRにて結果のバリデーションを行なった。
Left:CGACACTCCCATGATGAAATC(配列ID番号3)
Right:GCTGCAGGTGCAAAAGTGT(配列ID番号4)
また、GAPDH検出用プライマーは以下の通りである。
Left:AGCCACATCGCTCAGACAC(配列ID番号5)
Right:GCCCAATACGACCAAATCC(配列ID番号6)
図5A〜Cに結果を示す。
Claims (10)
- 被験者における関節リウマチに関連する指標の値を推定する方法であって、
前記被験者由来の末梢血中のFAM20A遺伝子の発現量を測定する工程と、
前記測定した発現量を、予め用意された前記指標に相関する遺伝子発現プロファイルを用いて解析する工程と、
前記解析した結果に基づき、前記被験者における前記指標の値を推定する工程と、
を有し、
前記解析する工程は、前記測定したFAM20A遺伝子の発現量を、関節リウマチ患者から得られた末梢血におけるFAM20A遺伝子発現量に基づいて作成される、FAM20A遺伝子の発現量と前記指標との相関関係を示す遺伝子発現プロファイルと比較することによって行われるものであることを特徴とする、方法。 - 請求項1記載の方法において、
前記指標は、DAS28−CRP、DAS28−ESR、DAS44、EULAR改善基準、CDAI、SDAI、ACR、及び血清CRP濃度からなる群から選択されるものである、
ことを特徴とする、方法。 - 請求項2記載の方法において、
前記指標は、関節リウマチ疾患の病勢を示し、又は関節リウマチ治療薬の治療効果を判定するものである、
ことを特徴とする、方法。 - 請求項1記載の方法において、
前記遺伝子発現プロファイルは正の相関関係を示すものであり、前記被験者由来の末梢血中のFAM20A遺伝子の発現量が高い場合には、前記指標は高い病勢活動度を示すものである、
ことを特徴とする、方法。 - 請求項1記載の方法において、
前記FAM20A遺伝子は、(i)配列ID番号1に記載される塩基配列、又は(ii)配列ID番号1に記載の塩基配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズする塩基配列であって、配列ID番号2に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質をコードする塩基配列からなるものである、
ことを特徴とする、方法。 - 請求項1記載の方法において、
前記被験者は関節リウマチに罹患しているものである、
ことを特徴とする、方法。 - 請求項6記載の方法において、
前記測定する工程は、前記被験者に対する関節リウマチ治療薬の投与前および投与後における末梢血由来のFAM20A遺伝子の発現量を測定するものであり、
前記投与前および投与後における末梢血におけるFAM20A遺伝子発現量を、前記遺伝子発現プロファイルを用いて解析することにより、前記関節リウマチ治療薬の治療効果を判定するものである、
ことを特徴とする、方法。 - 配列ID番号1に記載される塩基配列を有する、被験者における関節リウマチに関連する指標の数値を推定するための末梢血由来のFAM20Aバイオマーカー。
- 被験者における関節リウマチに関連する指標の数値を推定するためのバイオマーカーとしての、配列ID番号1に記載される塩基配列を有する末梢血由来のFAM20Aの使用。
- 請求項1記載の方法に用いられるアレイであって、
FAM20A遺伝子をコードする少なくとも一部の塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするプローブが、固体支持体上の位置に固定してなることを特徴とするアレイ。
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