JP2010145202A - ポリエチレングリコールおよび尿素による免疫反応増強方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】抗原と抗体とをポリエチレングリコール及び尿素の共存下で反応させる方法と、当該方法を実施するための、抗原又は抗体のいずれか、ポリエチレングリコール及び尿素を含む試薬により前記課題を解決する。
【選択図】なし
Description
実施例1
免疫測定における対象抗原として、ヒト Staphylococcal Nuclease Domain containing 1(以下「SND1」とする)を選択し、その測定のための試薬を準備した。
実施例2
水不溶性の球状担体(内部にフェライトを練り込んだ粒子径約1.5mmのEVA製)に、実施例1で選択したモノクローナル抗体の一方を100ng/担体となるよう物理的に吸着させた後、BSAでブロッキング処理を行った。
実施例3
実施例2で作製した試薬を用い、精製SND1を子牛血清(FBS)に添加したものを対象サンプルとして、尿素の測定値に及ぼす影響を検証した。尿素を含む10mM Tris−HCl、0.1% Tween20(pH8)を対象サンプルと1:1の割合で混合し、混合液150μLを容器に添加した。37℃で10分は40分間、免疫反応を生じさせた後、B/F分離操作を行って遊離の標識抗体を担体から分離除去し、アルカリ性フォスファターゼの基質である4メチルウンベリフェリルリン酸を加え、4メチルウンベリフェロンの生成速度Rate(nM/秒)を測定した。なお測定は、市販の免疫測定装置(東ソー(株)製、商品名AIA−600II)を用いて自動的に実施した。この装置では、磁力透過性の容器に対して対象サンプルを150μL加え、37℃で10分又は40分間、担体を磁石によって攪拌し、その状態で免疫反応させるものである。またこの装置は、アルカリ性フォスファターゼの基質である4メチルウンベリフェリルリン酸を加えた後20から295秒までの酵素反応分解物(4メチルウンベリフェロン)の単位時間あたりの生成速度(nM/秒)を測定するものである。
結果を図3に示す。
実施例4
実施例3同様の方法で、ポリエチレングリコールの測定値に及ぼす影響を検証した。ポリエチレングリコールはPEG6000(ナイアライテスク社製、平均分子量7400〜12000)を用いた。結果を図4に示す。
実施例5
平均分子量の異なるポリエチレングリコール、PEG4000(ナイアライテスク社製、平均分子量3000〜3700)、PEG6000(ナイアライテスク社製、平均分子量7400〜12000)、PEG20000(ナイアライテスク社製、平均分子量15000〜25000)を用い、実施例3同様の方法で、SND1を含まないゼロサンプル及び1μg/mL含む対象サンプルの測定を行った。結果を図5に示す。
実施例6
実施例3において、10分間の免疫反応において最大のS/N比を示した共存尿素濃度2Mにおいて、更にポリエチレングリコール(PEG6000)を共存させた場合の反応性を検証した。測定方法は実施例3と同様である。結果を図6、図7に示す。
実施例7
実施例4の10分間の免疫反応において抗原特異的反応性が最大値を示した共存ポリエチレングリコール(PEG6000)濃度5%において、更に尿素を共存させた場合の反応性を検証した。結果を図8、図9に示す。
実施例8
実施例3の40分間の免疫反応においてS/N比が最大値を示した共存尿素濃度2Mにおいて、更にポリエチレングリコール(PEG6000)を共存させた場合の反応性を検証した。結果を図10、図11に示す。
実施例9
実施例3の40分間の免疫反応において抗原特異的反応性が最大値を示した共存ポリエチレングリコール(PEG6000)濃度4%において、更に尿素を共存させた場合の反応性を検証した。結果を図12、13に示す。
実施例10
SND1の1000ng/mL溶液をベースとして1/2倍希釈系列サンプルを調製し、実施例3の方法に従って10分及び40分の免疫反応を実施した。免疫反応を増強するため、(1)ポリエチレングリコール及び尿素非共存、(2)2M尿素のみ共存、又は(3)4%ポリエチレングリコール(PEG6000)及び3M尿素共存、の各条件下で免疫測定を実施した。結果を図14に示す。
実施例11
実施例10と同様に、SND1の50ng/mL溶液をベースとして1/2倍希釈系列サンプルを調製し、40分の免疫反応を実施した。免疫反応を増強するため、(1)ポリエチレングリコール及び尿素非共存、(2)2M尿素のみ共存、又は(3)4%ポリエチレングリコール(PEG6000)及び3M尿素共存、の各条件下で免疫測定を実施した。結果を図15、16に示す。
水不溶性の球状担体(内部にフェライトを練り込んだ粒子径約1.5mmのEVA製)に、実施例1で選択したモノクローナル抗体の一方を100ng/担体となるよう物理的に吸着させた後、BSAでブロッキング処理を行った。磁力透過性の容器(容量1.2ml)に12個の担体を入れた後、緩衝液(3% BSA、5%水溶性ゼラチン、10mMトリス緩衝液、pH8.0)を加え、凍結乾燥した。
Claims (5)
- 抗原抗体反応を増強する方法であって、抗原と抗体とをポリエチレングリコール及び尿素の共存下で反応させる方法。
- 抗原又は抗体をポリエチレングリコール及び尿素と混合し、次いで抗体又は抗原と反応させることを特徴とする、請求項1の方法。
- 抗原と抗体との反応を生じさせる溶液中におけるポリエチレングリコールの濃度が1〜10%(重量/重量)であることを特徴とする、請求項1又は2の方法。
- 抗原と抗体との反応を生じさせる溶液中における尿素の濃度が1〜4モル/リットルであることを特徴とする、請求項1又は2の方法。
- 抗原抗体反応を増強する試薬であって、抗原又は抗体のいずれか、ポリエチレングリコール及び尿素を含む試薬。
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