JP2009538357A - 部位特異的peg化法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】 なし
Description
本発明は、タンパク質、ペプチド及び他の分子中に非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基とをもつシステイン残基の化学選択的PEG化法に関する。
本発明は、通常、タンパク質、ペプチド及び他の分子の部位特異的PEG化の新規方法に関する。アルデヒド官能基を含むPEG(PEG-アルデヒド)は、広範囲なpHで水溶液中、非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ酸とを保持するシステインと自発的に反応して、チアゾリジンを生成し、PEGの親水性の性質とサイズが大きい(たとえば30 kDa)ため、確実ではなかったが、PEG-アルデヒドが種々の官能基を含むペプチドフラグメントと反応が可能になることが見出された。我々は、非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基とをもつシステイン残基のみがPEG-アルデヒドと反応することも見出した。他の残基中の他の官能基(たとえば、遊離α-アミノ基のないシステインのチオール基、Argのグアニジニル基、Lysのアミノ基、Aspの側鎖カルボン酸基、Gluの側鎖カルボン酸基、Tyrのヒドロキシル基及びSerのヒドロキシル基)は、PEG-アルデヒドと反応しない。
本明細書の記載に基づいて、当業者は本発明を存分に利用できると考えられよう。従って、以下の具体的な態様は、単なる例示であって、本開示の残りの部分をいかなるものにも限定するものではない。
記号:意味
ArgまたはR:アルギニン
AsnまたはN:アスパラギン
AspまたはD:アスパラギン酸
CysまたはC:システイン
hCys:ホモシステイン
GlnまたはQ:グルタミン
GluまたはE:グルタミン酸
GlyまたはE:グリシン
HisまたはH:ヒスチジン
IleまたはH:イソロイシン
LeuまたはL:ロイシン
LysまたはK:リジン
MetまたはM:メチオニン
Nle:ノルロイシン
N-Me-CysまたはNMeCys:N-メチル-システイン、以下の構造をもつ。
Pen:ペニシラミン
PheまたはF:フェニルアラニン
ProまたはP:プロリン
SerまたはS:セリン
セレノCys:セレノシステイン
ThrまたはT:トレオニン
TrpまたはW:トリプトファン
TyrまたはY:チロシン
ValまたはV:バリン。
Boc:tert-ブチルオキシカルボニル
Bzl:ベンジル
DCM:ジクロロメタン
DIC:N,N-ジイソプロピルカルボジイミド
DIEA:ジイソプロピルエチルアミン
Damb:4-{N-(1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキシリデン)-3-メチルブチル)-アミノ}ベンジル
DMAP:4-(ジメチルアミノ)ピリジン
DMF:ジメチルホルムアミド
DNP:2,4-ジニトロフェニル
DTT:ジチオトレイトール
EDTA:エチレンジアミン四酢酸
Fmoc:フルオレニルメチルオキシカルボニル
HBTU:2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
cHex:シクロヘキシル
HOAT:O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
HOBt:1-ヒドロキシ-ベンゾトリアゾール
Me:メチル
Mmt:4-メトキシトリチル
NMP:N-メチルピロリドン
Pbf:2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル
tBu:tert-ブチル
TCEP:トリス(カルボキシエチル)ホスフィン
TIS:トリイソプロピルシラン
TOS:トシル
trt:トリチル
TFA:トリフルオロ酢酸
TFFH:テトラメチルフルオロフォラミジニウム(tetramethylfluoroforamidinium)ヘキサフルオロホスフェート
Z:ベンジルオキシカルボニル
Tha:1,3-チアゾリジン-4-カルボン酸、以下の構造をもつもの:
実施例1)H-NMeCys-Lys-Phe-NH 2 の製造
本実施例のmPEGは、CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)2-の構造をもち、ここでnは正の整数である。
本実施例のmPEGは、CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)2-の構造をもち、ここでnは正の整数である。
本実施例のmPEGは、CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)2-の構造をもち、ここでnは正の整数である。
本実施例のmPEGは、CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)2-の構造をもち、ここでnは正の整数である。
本実施例のmPEGは、CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)2-の構造をもち、ここでnは正の整数である。
本実施例のmPEGは、CH3O(CH2CH2O)n-(CH2)2-の構造をもち、ここでnは正の整数である。
Claims (152)
- ある分子のシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合(conjugate)させる方法であって、前記PEGの遊離アルデヒド基と前記システイン残基の非酸化スルフドリル側鎖と遊離α-アミノ基とを反応させて、生成物中に1,3-チアゾリジン基を生成することを含み、ここで前記生成物は、構造:
- ある分子のシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離アルデヒド基と前記システイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基とを反応溶液中で反応させて、中間体に1,3-チアゾリジン基を生成し、前記反応溶液のpHを約7に調節し、これによって前記中間体が再配置して最終生成物を形成することを含み、ここで前記中間体は、構造:
- 前記遊離アルデヒド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項1または2に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項1または2に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項1または2に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム(multi-arm)構造をもつ、請求項1または2に記載の方法。
- 一つ以上の遊離アルデヒド基を前記PEGに結合させる、請求項1または2に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項1または2に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項8に記載の方法。
- 前記システイン残基がL-形である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記システイン残基がD-形である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記システイン残基がタンパク質中にある、請求項1または2に記載の方法。
- 前記システイン残基がペプチド中にある、請求項1または2に記載の方法。
- 前記システイン残基が有機分子中にある、請求項1または2に記載の方法。
- 前記生成物または前記最終生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記中間体が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項2に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項1または2に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEP及び、非酸化スルフヒドリル基を含む化合物からなる群から選択される、請求項16に記載の方法。
- ある分子のペニシラミン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離アルデヒド基と前記ペニシラミン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基とを反応させて、生成物中に5,5-ジメチル-1,3-チアゾリジン基を生成させることを含み、ここで前記生成物は、構造:
- ある分子のペニシラミン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、反応溶液中で前記PEGの遊離アルデヒド基と前記ペニシラミン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基とを反応させて、中間体に5,5-ジメチル-1,3-チアゾリジン基を生成させ、前記反応溶液のpHを約7に調節し、これによって前記中間体が再配置して最終生成物を形成することを含み、ここで前記中間体は、構造:
- 前記遊離アルデヒド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項19または20に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項19または20に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項19または20に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項19または20に記載の方法。
- 一つ以上の遊離アルデヒド基を前記PEGに結合させる、請求項19または20に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項19または20に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項26に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がL-形である、請求項19または20に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がD-形である、請求項19または20に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がタンパク質中にある、請求項19または20に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がペプチド中にある、請求項19または20に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基が有機分子中にある、請求項19または20に記載の方法。
- 前記生成物または前記最終生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項19または20に記載の方法。
- 前記中間体が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項19または20に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項19または20に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEP及び、非酸化スルフヒドリル基を含む化合物からなる群から選択される、請求項35に記載の方法。
- ある分子のホモシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離アルデヒド基と前記ホモシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基とを反応させて、生成物中に六員環系を生成させることを含み、ここで前記生成物は、構造:
- ある分子のホモシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、反応溶液中で前記PEGの遊離アルデヒド基と前記ホモシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-アミノ基とを反応させて、中間体に六員環系を生成させ、前記反応溶液のpHを約7に調節し、これによって前記中間体が再配置して最終生成物を形成することを含み、ここで前記中間体は、構造:
- 前記遊離アルデヒド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項37または38に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項37または38に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項37または38に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項37または38に記載の方法。
- 一つ以上の遊離アルデヒド基を前記PEGに結合させる、請求項37または38に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項37または38に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項44に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がL-形である、請求項37または38に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がD-形である、請求項37または38に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がタンパク質中にある、請求項37または38に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がペプチド中にある、請求項37または38に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基が有機分子中にある、請求項37または38に記載の方法。
- 前記生成物または前記最終生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項37または38に記載の方法。
- 前記中間体が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項37または38に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項37または38に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEP及び、非酸化スルフヒドリル基を含む化合物からなる群から選択される、請求項53に記載の方法。
- ある分子のセレノシステイン残基の非酸化遊離セレノ基と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離アルデヒド基と前記セレノシステイン残基の非酸化遊離セレノ基と遊離α-アミノ基とを反応させて、生成物中に五員環系を生成させることを含み、ここで前記生成物は、構造:
- ある分子のセレノシステイン残基の非酸化遊離セレノ基と遊離α-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、反応溶液中で前記PEGの遊離アルデヒド基と前記セレノシステイン残基の非酸化遊離セレノ基と遊離α-アミノ基とを反応させて、中間体に五員環系を生成させ、前記反応溶液のpHを約7に調節し、これによって前記中間体が再配置して最終生成物を形成することを含み、ここで前記中間体は、構造:
- 前記遊離アルデヒド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項55または56に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項55または56に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項55または56に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項55または56に記載の方法。
- 一つ以上の遊離アルデヒド基を前記PEGに結合させる、請求項55または56に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項55または56に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項62に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がL-形である、請求項55または56に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がD-形である、請求項55または56に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がタンパク質中にある、請求項55または56に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がペプチド中にある、請求項55または56記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基が有機分子中にある、請求項55または56に記載の方法。
- 前記生成物または前記最終生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項55または56に記載の方法。
- 前記中間体が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項56に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項55または56に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEP及び、非酸化遊離セレノ基を含む化合物からなる群から選択される、請求項53に記載の方法。
- ある分子のN-メチル-システイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-メチル-アミノ基に遊離アルデヒド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離アルデヒド基と前記N-メチル-システイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖と遊離α-メチル-アミノ基とを反応させて、生成物中に3-メチル-1,3-チアゾリジン基を生成させることを含み、ここで前記生成物は、構造:
- 前記遊離アルデヒド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項73に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項73に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項73に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項73に記載の方法。
- 一つ以上の遊離アルデヒド基を前記PEGに結合させる、請求項73に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項73に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項79に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がL-形である、請求項73に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がD-形である、請求項73に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がタンパク質中にある、請求項73に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がペプチド中にある、請求項73に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基が有機分子中にある、請求項73に記載の方法。
- 前記生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項73に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項73に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEP及び、非酸化スルフヒドリル基を含む化合物からなる群から選択される、請求項87に記載の方法。
- ある分子のN-メチル-システイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖に遊離マレイミド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離マレイミド基と前記N-メチル-システインの非酸化スルフヒドリル側鎖とを反応させて複合体生成物(conjugate product)を生成させることを含み、ここで前記複合体生成物は、構造:
- 前記マレイミド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項89に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項89に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項89に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項89に記載の方法。
- 一つ以上の遊離マレイミド基を前記PEGに結合させる、請求項89に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項89に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項95に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がL-形である、請求項89に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がD-形である、請求項89に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がタンパク質中にある、請求項89に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基がペプチド中にある、請求項89に記載の方法。
- 前記N-メチル-システイン残基が有機分子中にある、請求項89に記載の方法。
- 前記複合体生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項89に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項89に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEPである、請求項103に記載の方法。
- ある分子のペニシラミン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖に遊離マレイミド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離マレイミド基と前記ペニシラミン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖とを反応させて複合体生成物を生成させることを含み、ここで前記複合体生成物は、構造:
- 前記遊離マレイミド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項105に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項105に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項105に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項105に記載の方法。
- 一つ以上の遊離マレイミド基を前記PEGに結合させる、請求項105に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項105に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項111に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がL-形である、請求項105に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がD-形である、請求項105に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がタンパク質中にある、請求項105に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基がペプチド中にある、請求項105に記載の方法。
- 前記ペニシラミン残基が有機分子中にある、請求項105に記載の方法。
- 前記複合体生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項105に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項105に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEPである、請求項119に記載の方法。
- ある分子のホモシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖に遊離マレイミド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離マレイミド基と前記ホモシステイン残基の非酸化スルフヒドリル側鎖とを反応させて複合体生成物を生成させることを含み、ここで前記複合体生成物は、構造:
- 前記遊離マレイミド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項121に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項121に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項121に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項121に記載の方法。
- 一つ以上のマレイミド基を前記PEGに結合させる、請求項121に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項121に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項127に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がL-形である、請求項121に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がD-形である、請求項121に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がタンパク質中にある、請求項121に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基がペプチド中にある、請求項121に記載の方法。
- 前記ホモシステイン残基が有機分子中にある、請求項121に記載の方法。
- 前記複合体生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項121に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項121に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEPである、請求項135に記載の方法。
- ある分子のセレノシステイン残基の非酸化セレノ側鎖に遊離マレイミド基を含むPEGを化学的に結合させる方法であって、前記PEGの遊離マレイミド基とセレノシステイン残基の非酸化セレノ側鎖とを反応させて複合体生成物を生成させることを含み、ここで前記複合体生成物は、構造:
- 前記遊離マレイミド基は、アミド、エステル、スルホンアミド、スルホニル、チオール、オキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、マレイミド若しくはアミン官能基、またはその任意の組み合わせを含んでもよいリンカーによって前記PEGに結合している、請求項137に記載の方法。
- 前記PEGが線状構造をもつ、請求項137に記載の方法。
- 前記PEGが分岐構造をもつ、請求項137に記載の方法。
- 前記PEGが多アーム構造をもつ、請求項137に記載の方法。
- 一つ以上の遊離アルデヒド基を前記PEGに結合させる、請求項137に記載の方法。
- 前記PEGが約100 Da〜約500,000 Daの平均分子量をもつ、請求項137に記載の方法。
- 前記PEGが約1,000 Da〜約50,000 Daの平均分子量をもつ、請求項143に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がL-形である、請求項137に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がD-形である、請求項137に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がタンパク質中にある、請求項137に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基がペプチド中にある、請求項137に記載の方法。
- 前記セレノシステイン残基が有機分子中にある、請求項137に記載の方法。
- 前記複合体生成物が、一つ以上のタンパク質、ペプチド若しくは有機分子部分、またはその任意の組み合わせを含む、請求項137に記載の方法。
- 還元剤を前記反応で使用する、請求項137に記載の方法。
- 前記還元剤が、TCEPである、請求項151に記載の方法。
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