JP2009534036A5 - - Google Patents
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Claims (23)
- 細胞株において細胞培養表現型を調節する、または細胞培養表現型の指標となるタンパク質を同定する方法であって、
試験細胞株に由来するサンプルのタンパク質発現プロフィールを作製すること、
そのタンパク質発現プロフィールを対照細胞株に由来する対照プロフィールと比較すること、および
その比較に基づき、1個または複数の示差的に発現されるタンパク質を同定すること
を含み、
ここで、試験細胞株が対照細胞株と異なる細胞培養表現型を有し、1個または複数の示差的に発現されるタンパク質が細胞培養表現型を調節または表示し得るところの、方法。 - 細胞株がチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞株である、請求項1記載の方法。
- 細胞培養表現型が細胞増殖速度、細胞生産性、極大細胞密度、持続的細胞生存力、アンモニアの産生もしくは消費速度、または乳酸塩の産生もしくは消費速度である、請求項1または2記載の方法。
- 細胞培養表現型が最大細胞生産性である、請求項1〜3いずれか1項記載の方法。
- 細胞培養表現型が持続的細胞生存力である、請求項1〜3いずれか1項記載の方法。
- 細胞培養表現型が極大細胞密度である、請求項1〜3いずれか1項記載の方法。
- 細胞培養表現型が細胞増殖速度である、請求項1〜3いずれか1項記載の方法。
- タンパク質発現プロフィールが、蛍光二次元ディファレンシャルゲル電気泳動により作製される、請求項1〜7いずれか1項記載の方法。
- (a)請求項1に記載の方法に従って同定された1個または複数のタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートすること;
(b)表20、24、25および26から選択される1個または複数の遺伝子を変調すること;または
(c)少なくとも2つの遺伝子またはタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートすることを含み、第一の遺伝子またはタンパク質が、第一の細胞培養表現型に影響を及ぼし、第二の遺伝子またはタンパク質は第二の異なる細胞培養表現型に影響を及ぼし、ここで該細胞培養表現型が、細胞増殖速度、細胞生産性、極大細胞密度、持続的細胞生存力、アンモニアの産生もしくは消費速度、または乳酸塩の産生もしくは消費速度からなる群から選択される、細胞株の改良方法。 - 請求項1に記載の方法に従って同定された1個または複数のタンパク質を過剰発現によりアップレギュレートすること、あるいは、請求項1に記載の方法に従って同定された1個または複数のタンパク質を、所望によりRNA干渉によりダウンレギュレートすることを含む、請求項9(a)に記載の方法。
- 第一および第二の細胞培養表現型とは異なる第三の細胞培養表現型に影響を及ぼす第三の遺伝子またはタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートすることをさらに含む、請求項9(c)記載の方法。
- (a)請求項1に記載の方法に従って同定された1個または複数のタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートすることを含む、細胞株の細胞生産性を改良する方法。
(b)表2、3、9、10、11および12から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質を変調することまたは請求項4に記載の方法に従って同定された1個または複数のタンパク質を変調することを含む、細胞株の細胞生産性を改良する方法。 - 表4、5、6、13、14、27および28から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質を変調すること、あるいは、請求項7に記載の方法に従って同定された1個または複数のタンパク質を変調することを含む、細胞株の細胞増殖速度を改良する方法。
- 表8、15、16および17から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質を変調すること、あるいは請求項6に記載の方法に従って同定された1個または複数のタンパク質を変調することを含む、細胞株の極大細胞密度を高める方法。
- 表7、18および19から選択される、あるいは請求項5に記載の方法に従って同定された1個または複数の遺伝子またはタンパク質を変調することを含む、細胞株の持続的細胞生存力を高める方法。
- 表29および30から選択される1個または複数の遺伝子を変調することを含む、細胞株において乳酸塩の産生または消費速度を変調する方法。
- 細胞株の細胞培養表現型を評価する方法であって、
(i)細胞培養由来のサンプルにおいて、請求項1に従って同定されたタンパク質の発現レベルを検出すること、および
その発現レベルを参照レベルと比較すること
ここにその比較が細胞培養表現型の指標となる、あるいは
(ii)細胞培養由来のサンプルにおいて、細胞培養表現型の指標となる1個または複数のマーカーを検出することを含み、ここに該マーカーが図7〜138から選択されるペプチド、表2〜8から選択されるタンパク質、ならびに表9〜20および24〜30から選択される遺伝子からの遺伝子発現産物からなる群から選択される、方法。 - 遺伝子操作細胞の集団を含む、改良された細胞培養表現型を有する、遺伝子操作された細胞株であって、その細胞の各々が、請求項1に従って同定された1個または複数のタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする遺伝子操作された構築物を含む、細胞株。
- 遺伝子操作された細胞の集団を含む遺伝子操作された細胞株であって、
(a)該細胞株が改良された細胞生産性を有し、その細胞の各々が、表2、3、9、10、11および12から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする遺伝子操作された構築物を含む;
(b)該細胞株が改良された細胞増殖速度を有し、その細胞の各々が、表4、5、6、13、14、27および28から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする遺伝子操作された構築物を含む;
(c)該細胞株が改良された極大細胞密度を有し、その細胞の各々が、表8、15、16および17から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする遺伝子操作された構築物を含む;
(d)該細胞株が改良された持続的細胞生存力を有し、その細胞の各々が、表7、18および19から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする遺伝子操作された構築物を含む;
(e)該細胞株が修飾された乳酸塩産生または消費を有し、その細胞の各々が、表29および30から選択される1個または複数の遺伝子をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする遺伝子操作された構築物を含む;および
(f)該細胞株が改良されており、その細胞の各々が、表20、24、25および26から選択される1個または複数の遺伝子またはタンパク質をアップレギュレートまたはダウンレギュレートする遺伝子操作された構築物を含む、
細胞株。 - 遺伝子操作された構築物が過剰発現構築物またはRNA干渉構築物である、請求項19記載の遺伝子操作された細胞株。
- 目的タンパク質を発現する方法であって、
請求項18に記載の遺伝子操作された細胞株に目的タンパク質をコードする核酸を導入すること、および
目的タンパク質を回収すること
を含む、方法。 - 表9、13、および15から選択されるCHO配列を含む、単離された核酸または組換え核酸。
- 表2および4から選択されるCHO配列を含む、単離されたタンパク質または組換えタンパク質。
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