JP2009521907A - 細胞および組織の培養のためのバイオリアクター - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、1つ以上の細胞培養物、組織生検、細胞クラスター、組織様構造、「原型組織(prototissue)」、または類似の試料のインキュベーション用バイオリアクターまたは培養容器に関する。
本質的に平坦な培養容器での「古典的な」細胞培養時には、一般的には細胞が、特に生検が脱分化する傾向がある。見かけ上は、細胞が組織の塊から培養容器の平面支持面の上に移動するにつれて、生検が「溶けたアイスクリームのような作用」を示す。遺伝子発現は、分化した組織の細胞成分としてよりもむしろ単離した細胞として生化学的に反応を示し始める、これらの「移動」細胞内で変わる。脱分化細胞は、インタクトな生物内の対応する細胞によって通常発現されるものとは異なる生化学的経路を発現する。
好ましい実施形態において、本発明は、上述の先行技術の問題の1つ以上を軽減する、緩和する、解消する、またはその他の方法で解決するバイオリアクターを提供する。
−インキュベーションキャビティであって、所定の分子量もしくは分子サイズまでの分子に対して透過性を有する第1の半透性フィルターとともに、実質的に閉ざされた境界を提供し、前記インキュベーションチャンバー内の栄養素および液体培地の流入を可能にすると同時に、前記インキュベーションキャビティ内の細胞および細胞凝集体の保持を可能にする、インキュベーションキャビティ、
−平衡チャンバーであって、前記インキュベーションキャビティ内に存在する1つ以上の細胞培養物、組織生検、または細胞クラスターのために栄養素および/または酸素、ならびに場合により二酸化炭素および/またはpH制御物質を供給するための容量を備える、平衡チャンバー、ならびに
−前記半透性フィルターから前記平衡チャンバーまで実質的に液密性の導管を提供する導通手段、
を含み、
前記インキュベーションキャビティが、約25μL〜約1mLの内部液量を有する、
リアクターを提供することにより、本発明の第1の態様において得られる。
−インキュベーションキャビティであって、第1の半透性膜とともに、実質的に閉ざされた境界を提供する、インキュベーションキャビティ、
−水性液体を含む湿潤チャンバーであって、前記チャンバーが、水性液体と流体接触して配置される第2の半透性膜と第3の半透性膜の両方を含み、前記第3の半透性膜がさらに、前記バイオリアクターを取り囲む大気との気体交換のために配置される、チャンバー、ならびに
−前記第1の半透性膜から前記第2の半透性膜まで実質的に気密性の導管を提供する導通手段、
を含み、
前記第1、第2および第3の半透性膜が、
a)前記第1の半透性膜および前記湿潤チャンバーを介した前記インキュベーションキャビティの通気、ならびに
b)前記イキュベーションチャンバー内の実質的な保水、
を促進するために、実質的に水を透過せず、かつ実質的に酸素および二酸化炭素を透過し、
場合により、前記インキュベーションキャビティが約25μL〜約1mLの内部液量を有する、
バイオリアクターを提供する。
−可撓性膜または可撓性フィルターとともに内面を含む、インキュベーションキャビティ、
−前記インキュベーションキャビティの充填に適合した1つ以上の貫通ポートであって、前記インキュベーションキャビティの中心軸から見て異なる角度で方位角により配置される、ポート、ならびに
−1つ以上のインサートであって、各インサートが、対応する貫通ポートに嵌め込んで、各ポートの実質的に液密性のロックを提供するように適合される、インサート、
を含み、
前記インサートの1つ以上が、前記対応するポートに挿入されることで、本質的にゼロ容量のポートを作り出す場合に、前記インキュベーションキャビティの内面と実質的に並んだ端部を有し、
場合により、前記インキュベーションキャビティが、約25μL〜約1mLの内部液量を有する、
バイオリアクターを提供する。
−半透性膜とともに、実質的に閉ざされた境界を提供する、インキュベーションキャビティ、
を含み、
大気圧で前記半透性膜が、
a)前記第1の半透性膜を介した前記インキュベーションキャビティの通気、ならびに
b)前記インキュベーションチャンバー内の実質的な保水、
を促進するために、ほぼ完全に水を透過しないが、酸素および二酸化炭素は実質的に透過し、
場合により、前記インキュベーションキャビティが、約25μL〜約1mLの内部液量を有する、
バイオリアクターを提供する。
1)インキュベーション区画の容量がより少ないために、それに伴って経費が削減されることで、資源(化学薬品、細胞または組織)の消費を低減。
2)湿潤チャンバーを導入したために、それに伴って長期増殖の培養条件の維持が改善されることで、インキュベーションチャンバー内の保湿を改善。
3)インキュベーションチャンバー内の保湿が改善されたことにより、小容量バイオリアクターで長期間培養物をインキュベートする期間を延長。
4)本質的にゼロ容量のアクセスポートを導入したことにより、流体乱流を低減。
5)いくつかの実施形態では自動ビデオ/カメラ画像技術による、細胞増殖のモニタリングの改善;選択した生検または培養物の試料をより少なくすることによる、増殖因子およびシグナル分子の生物学的閾値の向上;同時に操作できる個別のバイオリアクターの数の増加による、標準サイズのインキュベーターの効率の向上を含めた、その他の小容量バイオリアクターの利点。
定義
本明細書で使用される以下の用語は、以下の意味を有する:
「半透性フィルター」および「半透性膜」という用語は、すべてではないが一部の化学または生物学的物質によって浸透され得るフィルターまたは膜を指す。これらの用語は交換可能に使用されるが、但し、通常「フィルター」は、水が自由に透過できる所で使用されるのに対し、通常「膜」は、水が自由に透過できない所、および水が自由に透過できる所の両方で使用される。
・角質化上皮細胞(表皮の角化細胞(分化中の表皮細胞);表皮の基底細胞(幹細胞);指の爪および足指の爪の角化細胞、爪床の基底細胞(幹細胞);毛幹細胞の毛髄質;毛幹細胞の毛皮質;毛幹細胞の毛小皮;毛根鞘細胞の鞘小皮;毛根鞘細胞のハックレイ層;毛根鞘細胞のヘンレ層;毛根鞘細胞の外毛根鞘;毛母細胞(幹細胞)を含む)。
・湿潤で重層のバリアの上皮細胞(角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道、および膣の重層扁平上皮の表面上皮細胞;角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道、および膣の上皮の基底細胞(幹細胞);泌尿器の上皮細胞(膀胱および尿管の内表面))。
・外分泌腺分泌上皮細胞(唾液腺粘液細胞(多糖が豊富な液を分泌)を含む);唾液腺漿液細胞(糖タンパク質酵素が豊富な液を泌物);舌のフォンエブネル腺細胞(味蕾を洗浄);乳腺細胞(乳汁を分泌);涙腺細胞(涙液を分泌);耳内の耳道腺細胞(耳垢を分泌);エクリン汗腺暗細胞(糖タンパク質を分泌);エクリン汗腺明細胞(小分子を分泌);アポクリン汗腺細胞(芳香性物質を分泌、性ホルモン感受性);まぶたのモル腺細胞(特殊化した汗腺);皮脂腺細胞(脂質が豊富な皮脂を分泌);鼻のボーマン腺細胞(嗅上皮を洗浄);十二指腸のブルナー腺細胞(酵素およびアルカリ性粘液);精嚢細胞(精子が泳ぐための果糖を含む精液の成分を分泌);前立腺細胞(精液の成分を分泌);尿道球腺細胞(粘液を分泌);バルトリン腺細胞(膣の潤滑液を分泌);リトレ腺細胞(粘液を分泌);子宮内膜細胞(炭水化物を分泌);気道および消化管の単離された杯細胞(粘液を分泌);胃内表面の粘膜細胞(粘液を分泌);胃腺の酵素原細胞(ペプシノゲンを分泌);胃腺の酸分泌細胞(塩酸を分泌);膵腺房細胞(重炭酸塩および消化酵素を分泌);小腸のパネート細胞(リゾチームを分泌);肺のII型肺細胞(界面活性物質を分泌);肺のクララ細胞を含む)。
・ホルモン分泌細胞(下垂体前葉細胞;成長ホルモン産生細胞;乳腺刺激ホルモン分泌細胞;甲状腺刺激ホルモン産生細胞;性腺刺激ホルモン産生細胞;副腎皮質刺激因子;メラニン細胞刺激ホルモンを分泌する下垂体中葉細胞;オキシトシンまたはバソプレシンを分泌する巨細胞性神経分泌細胞;消化管および気道の細胞(以下から1つ以上を分泌:セロトニン、エンドルフィン、ソマトスタチン、ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、インスリン、グルカゴン、ボンペシン);甲状腺細胞;甲状腺上皮細胞;副甲状腺細胞;上皮小体主細胞;好酸性細胞;副腎細胞;クロム親和性細胞(1つ以上のステロイドホルモン鉱質コルチコイドまたは糖質コルチコイドを分泌);精巣のライディッヒ細胞(テストステロンを分泌);卵胞の内卵胞膜細胞(エストロゲンを分泌);破裂卵胞の黄体細胞(プロゲステロンを分泌);腎傍糸球体装置細胞(レニンを分泌);腎密集斑細胞;腎極周囲細胞;腎メサンギウム細胞を含む)。
・吸収上皮細胞(消化管、外分泌腺、および尿生殖路)(腸の刷子縁細胞(微繊毛を有する);外分泌腺の線条管細胞;胆嚢上皮細胞;腎近位尿細管の刷子縁細胞;腎遠位尿細管細胞;精巣輸出管の無線毛細胞;精巣上体の主細胞;精巣上体の基底細胞;代謝および貯蔵細胞;肝細胞(肝細胞);脂肪細胞(褐色または白色の脂肪細胞);肝脂肪細胞を含む)。
・バリア機能細胞(肺、消化管、外分泌腺、および尿生殖路)(I型肺細胞(肺気腔の内表面);膵導管細胞(腺房中心細胞);(汗腺、唾液腺、乳腺等の)無線毛の導管細胞;腎糸球体の壁細胞;腎糸球体の足細胞;(腎臓内の)ヘンレ係蹄の細い部分の細胞;腎集合尿細管細胞;(精嚢、前立腺等の)導管細胞を含む)。
・体内で閉じた管腔の内表面の上皮細胞(血管およびリンパ管の内皮有窓細胞;血管およびリンパ管の内皮連続細胞;血管およびリンパ管の内皮脾細胞;滑膜細胞(関節腔の内面を覆い、ヒアルロン酸を分泌);漿膜細胞(腹膜腔、胸膜腔、および囲心腔の内表面);扁平細胞(耳の外リンパ腔の内表面);扁平細胞(耳の内リンパ腔の内表面);微繊毛を有する内リンパ嚢の円柱細胞(耳の内リンパ腔の内表面);暗細胞(耳の内リンパ腔の内表面);前庭膜細胞(耳の内リンパ腔の内表面);血管条基底細胞(耳の内リンパ腔の内表面);血管条周辺細胞(耳の内リンパ腔の内表面);クラウディウス細胞(耳の内リンパ腔の内表面);ベッチャー細胞(耳の内リンパ腔の内表面);脈絡叢細胞(脳脊髄液を分泌);軟膜くも膜の扁平細胞;目の色素毛様体上皮細胞;目の無色素毛様体上皮細胞;角膜内皮細胞)。
・運動機能を有する線毛細胞(気道線毛細胞;卵管線毛細胞(女性)子宮内膜線毛細胞(女性);精巣網線毛細胞(男性);精巣輸出管毛細胞(男性);中枢神経系の線毛上衣細胞(脳腔の内表面))。
・細胞外基質分泌細胞(エナメル芽細胞の上皮細胞(歯のエナメル質を分泌);耳の前庭器の半月面上皮細胞(プロテオグリカンを分泌);コルチ器官の歯間上皮細胞(有毛細胞を覆う蓋膜を分泌);疎性結合組織の線維芽細胞;腱線維芽細胞;骨髄の細網組織線維芽細胞;その他非上皮線維芽細胞;毛細血管の周皮細胞;椎間板の髄核細胞;セメント芽細胞/セメント細胞(歯根の骨様セメント質を分泌);象牙芽細胞/歯牙細胞(歯の象牙質を分泌);硝子様軟骨の軟骨細胞;線維軟骨の軟骨細胞;弾性軟骨の軟骨細胞;骨芽細胞/骨細胞;骨細胞前駆細胞(骨芽細胞の幹細胞);目の硝子体の硝子体細胞:耳の外リンパ腔の星状細胞を含む)。
・収縮性細胞(赤色骨格筋細胞(遅筋);白色骨格筋細胞(速筋);中間骨格筋細胞;筋紡錘の核袋細胞;筋紡錘の核鎖細胞;筋衛星細胞(幹細胞);固有心筋細胞;結節心筋細胞;プルキンエ線維細胞;平滑筋(種々の型);虹彩の筋上皮細胞;外分泌腺の筋上皮細胞を含む)。
・血液および免疫系の細胞(赤血球;巨核球(血小板前駆体);単球:結合組織マクロファージ(種々の型);表皮ランゲルハンス細胞;破骨細胞(骨内);樹状細胞(リンパ組織内);小グリア細胞(中枢神経系内);好中性顆粒球;好酸性顆粒球;好塩基性顆粒球;マスト細胞;ヘルパーT細胞;サプレッサT細胞;細胞傷害性T細胞;B細胞;ナチュラルキラー細胞;メモリ細胞;網状赤血球;血液および免疫系の幹細胞および前駆細胞(種々の型)を含む)。
・感覚変換器細胞(目の光受容器の棹体細胞;目の光受容器の青色感受性錐体細胞;目の光受容器の緑色感受性錐体細胞;目の光受容体の赤色感受性錐体細胞;コルチ器官の聴覚内側有毛細胞;コルチ器官の聴覚外側有毛細胞;耳の前庭器のI型有毛細胞(加速および重力);耳の前庭器のII型有毛細胞(加速および重力);I型味蕾細胞;嗅覚受容体ニューロン;嗅上皮基底細胞(嗅覚ニューロンの幹細胞);I型頚動脈小体細胞(血液pHセンサー);II型頚動脈小体細胞(血液pHセンサー);表皮のメルケル細胞(触覚センサー);触覚感受性一次知覚性ニューロン(種々の型);低温感受性一次知覚性ニューロン;熱感受性一次知覚性ニューロン;痛覚感受性一次知覚性ニューロン(種々の型);固有受容性一次知覚性ニューロン(種々の型)を含む)。
・自律神経ニューロン細胞(コリン作動性神経細胞(種々の型);アドレナリン作動性神経細胞(種々の型);ペプチド作動性神経細胞(種々の型)を含む)。
・感覚器官および末梢ニューロンの支持細胞(コルチ器官の内柱細胞;コルチ器官の外柱細胞;コルチ器官の内支持細胞;コルチ器官の外支持細胞;コルチ器官の領域細胞;前庭器の支持細胞;I型味蕾支持細胞;嗅上皮支持細胞;シュワン細胞;衛星細胞(末梢神経細胞体を被包する);腸管グリア細胞を含む)。
・中枢神経系ニューロンおよびグリア細胞(ニューロン細胞(多種多様の型があるが、分類は依然として不十分);アストロサイト(種々の型);オリゴデンドロサイトを含む)。
・水晶体細胞(前水晶体上皮細胞;クリスタリン含有水晶体線維細胞を含む)。
・色素細胞(メラニン細胞;網膜色素上皮細胞を含む)。
・生殖細胞(卵原細胞/卵母細胞;精細胞;精母細胞;精原細胞(精母細胞の幹細胞);精子を含む)。
・ナース細胞(卵胞細胞;セルトリ細胞(精巣内の);胸腺上皮細胞を含む)。
・幹細胞(胚および成体の両由来の全能性、分化全能性、多能性、単能性の幹細胞または前駆体または前駆細胞)。
・上述の細胞型のいずれかに由来するすべての癌細胞(定義不可能な起源の奇形癌腫を含む)。
好ましい実施形態において、本発明で使用される半透性のフィルターは、ある一定の分子量または分子サイズまでの分子を通過させることができる。明確に定義された孔径を有する半透性フィルターは、当業者にとって既知であり、市販されている。本発明の好ましい実施形態において、50kDa、10OkDa、150kDa、200kDa、または250kDa等の所定の分子量までの分子を透過する場合がある。あるいは、半透性フィルターの透過性は、その孔径によって決定される場合がある。半透性フィルターの孔径は、0.5μm以下、例えば0.3μm以下、好ましくは0.2μm以下、さらにより好ましくは0.1μm以下、最も好ましくは0.05μm以下である場合がある。多種多様なフィルターが使用され得る。これらは、ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)、フッ化ビニリデン樹脂(PVDF)、シリコンゴム、発泡樹脂、放射線処理樹脂、および類似の物質からなる群から選択される(がこれらに限定されない)物質で作られ得る。好ましい一実施形態において、WhatmanのTE 35フィルターまたはZefluorフィルター(カタログ番号66142、Pall Life Sciences)が使用され得る。
・角質化上皮細胞(表皮の角化細胞(分化中の表皮細胞);表皮の基底細胞(幹細胞);指の爪および足指の爪の角化細胞、爪床の基底細胞(幹細胞);毛幹細胞の毛髄質;毛幹細胞の毛皮質;毛幹細胞の毛小皮;毛根鞘細胞の鞘小皮;毛根鞘細胞のハックレイ層;毛根鞘細胞のヘンレ層;毛根鞘細胞の外毛根鞘;毛母細胞(幹細胞)を含む)。
・湿潤で重層のバリアの上皮細胞(角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道、および膣の重層扁平上皮の表面上皮細胞;角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道、および膣の上皮の基底細胞(幹細胞);泌尿器の上皮細胞(膀胱および尿管の内表面))。
・外分泌腺分泌上皮細胞(唾液腺粘液細胞(多糖が豊富な液を分泌)を含む);唾液腺漿液細胞(糖タンパク質酵素が豊富な液を泌物);舌のフォンエブネル腺細胞(味蕾を洗浄);乳腺細胞(乳汁を分泌);涙腺細胞(涙液を分泌);耳内の耳道腺細胞(耳垢を分泌);エクリン汗腺暗細胞(糖タンパク質を分泌);エクリン汗腺明細胞(小分子を分泌);アポクリン汗腺細胞(芳香性物質を分泌、性ホルモン感受性);まぶたのモル腺細胞(特殊化した汗腺);皮脂腺細胞(脂質が豊富な皮脂を分泌);鼻のボーマン腺細胞(嗅上皮を洗浄);十二指腸のブルナー腺細胞(酵素およびアルカリ性粘液);精嚢細胞(精子が泳ぐための果糖を含む精液の成分を分泌);前立腺細胞(精液の成分を分泌);尿道球腺細胞(粘液を分泌);バルトリン腺細胞(膣の潤滑液を分泌);リトレ腺細胞(粘液を分泌);子宮内膜細胞(炭水化物を分泌);気道および消化管の単離された杯細胞(粘液を分泌);胃内表面の粘膜細胞(粘液を分泌);胃腺の酵素原細胞(ペプシノゲンを分泌);胃腺の酸分泌細胞(塩酸を分泌);膵腺房細胞(重炭酸塩および消化酵素を分泌);小腸のパネート細胞(リゾチームを分泌);肺のII型肺細胞(界面活性物質を分泌);肺のクララ細胞を含む)。
・ホルモン分泌細胞(下垂体前葉細胞;成長ホルモン産生細胞;乳腺刺激ホルモン分泌細胞;甲状腺刺激ホルモン産生細胞;性腺刺激ホルモン産生細胞;副腎皮質刺激因子;メラニン細胞刺激ホルモンを分泌する下垂体中葉細胞;オキシトシンまたはバソプレシンを分泌する巨細胞性神経分泌細胞;消化管および気道の細胞(以下から1つ以上を分泌:セロトニン、エンドルフィン、ソマトスタチン、ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、インスリン、グルカゴン、ボンペシン);甲状腺細胞;甲状腺上皮細胞;副甲状腺細胞;上皮小体主細胞;好酸性細胞;副腎細胞;クロム親和性細胞(1つ以上のステロイドホルモン鉱質コルチコイドまたは糖質コルチコイドを分泌);精巣のライディッヒ細胞(テストステロンを分泌);卵胞の内卵胞膜細胞(エストロゲンを分泌);破裂卵胞の黄体細胞(プロゲステロンを分泌);腎傍糸球体装置細胞(レニンを分泌);腎密集斑細胞;腎極周囲細胞;腎メサンギウム細胞を含む)。
・吸収上皮細胞(消化管、外分泌腺、および尿生殖路)(腸の刷子縁細胞(微繊毛を有する);外分泌腺の線条管細胞;胆嚢上皮細胞;腎近位尿細管の刷子縁細胞;腎遠位尿細管細胞;精巣輸出管の無線毛細胞;精巣上体の主細胞;精巣上体の基底細胞;代謝および貯蔵細胞;肝細胞(肝細胞);脂肪細胞(褐色または白色の脂肪細胞);肝脂肪細胞を含む)。
・バリア機能細胞(肺、消化管、外分泌腺、および尿生殖路)(I型肺細胞(肺気腔の内表面);膵導管細胞(腺房中心細胞);(汗腺、唾液腺、乳腺等の)無線毛の導管細胞;腎糸球体の壁細胞;腎糸球体の足細胞;(腎臓内の)ヘンレ係蹄の細い部分の細胞;腎集合尿細管細胞;(精嚢、前立腺等の)導管細胞を含む)。
・体内で閉じた管腔の内表面の上皮細胞(血管およびリンパ管の内皮有窓細胞;血管およびリンパ管の内皮連続細胞;血管およびリンパ管の内皮脾細胞;滑膜細胞(関節腔の内面を覆い、ヒアルロン酸を分泌);漿膜細胞(腹膜腔、胸膜腔、および囲心腔の内表面);扁平細胞(耳の外リンパ腔の内表面);扁平細胞(耳の内リンパ腔の内表面);微繊毛を有する内リンパ嚢の円柱細胞(耳の内リンパ腔の内表面);暗細胞(耳の内リンパ腔の内表面);前庭膜細胞(耳の内リンパ腔の内表面);血管条基底細胞(耳の内リンパ腔の内表面);血管条周辺細胞(耳の内リンパ腔の内表面);クラウディウス細胞(耳の内リンパ腔の内表面);ベッチャー細胞(耳の内リンパ腔の内表面);脈絡叢細胞(脳脊髄液を分泌);軟膜くも膜の扁平細胞;目の色素毛様体上皮細胞;目の無色素毛様体上皮細胞;角膜内皮細胞)。
・運動機能を有する線毛細胞(気道線毛細胞;卵管線毛細胞(女性)子宮内膜線毛細胞(女性);精巣網線毛細胞(男性);精巣輸出管毛細胞(男性);中枢神経系の線毛上衣細胞(脳腔の内表面))。
・細胞外基質分泌細胞(エナメル芽細胞の上皮細胞(歯のエナメル質を分泌);耳の前庭器の半月面上皮細胞(プロテオグリカンを分泌);コルチ器官の歯間上皮細胞(有毛細胞を覆う蓋膜を分泌);疎性結合組織の線維芽細胞;腱線維芽細胞;骨髄の細網組織線維芽細胞;その他非上皮線維芽細胞;毛細血管の周皮細胞;椎間板の髄核細胞;セメント芽細胞/セメント細胞(歯根の骨様セメント質を分泌);象牙芽細胞/歯牙細胞(歯の象牙質を分泌);硝子様軟骨の軟骨細胞;線維軟骨の軟骨細胞;弾性軟骨の軟骨細胞;骨芽細胞/骨細胞;骨細胞前駆細胞(骨芽細胞の幹細胞);目の硝子体の硝子体細胞:耳の外リンパ腔の星状細胞を含む)。
・収縮性細胞(赤色骨格筋細胞(遅筋);白色骨格筋細胞(速筋);中間骨格筋細胞;筋紡錘の核袋細胞;筋紡錘の核鎖細胞;筋衛星細胞(幹細胞);固有心筋細胞;結節心筋細胞;プルキンエ線維細胞;平滑筋(種々の型);虹彩の筋上皮細胞;外分泌腺の筋上皮細胞を含む)。
・血液および免疫系の細胞(赤血球;巨核球(血小板前駆体);単球:結合組織マクロファージ(種々の型);表皮ランゲルハンス細胞;破骨細胞(骨内);樹状細胞(リンパ組織内);小グリア細胞(中枢神経系内);好中性顆粒球;好酸性顆粒球;好塩基性顆粒球;マスト細胞;ヘルパーT細胞;サプレッサT細胞;細胞傷害性T細胞;B細胞;ナチュラルキラー細胞;メモリ細胞;網状赤血球;血液および免疫系の幹細胞および前駆細胞(種々の型)を含む)。
・感覚変換器細胞(目の光受容器の棹体細胞;目の光受容器の青色感受性錐体細胞;目の光受容器の緑色感受性錐体細胞;目の光受容体の赤色感受性錐体細胞;コルチ器官の聴覚内側有毛細胞;コルチ器官の聴覚外側有毛細胞;耳の前庭器のI型有毛細胞(加速および重力);耳の前庭器のII型有毛細胞(加速および重力);I型味蕾細胞;嗅覚受容体ニューロン;嗅上皮基底細胞(嗅覚ニューロンの幹細胞);I型頚動脈小体細胞(血液pHセンサー);II型頚動脈小体細胞(血液pHセンサー);表皮のメルケル細胞(触覚センサー);触覚感受性一次知覚性ニューロン(種々の型);低温感受性一次知覚性ニューロン;熱感受性一次知覚性ニューロン;痛覚感受性一次知覚性ニューロン(種々の型);固有受容性一次知覚性ニューロン(種々の型)を含む)。
・自律神経ニューロン細胞(コリン作動性神経細胞(種々の型);アドレナリン作動性神経細胞(種々の型);ペプチド作動性神経細胞(種々の型)を含む)。
・感覚器官および末梢ニューロンの支持細胞(コルチ器官の内柱細胞;コルチ器官の外柱細胞;コルチ器官の内支持細胞;コルチ器官の外支持細胞;コルチ器官の領域細胞;前庭器の支持細胞;I型味蕾支持細胞;嗅上皮支持細胞;シュワン細胞;衛星細胞(末梢神経細胞体を被包する);腸管グリア細胞を含む)。
・中枢神経系ニューロンおよびグリア細胞(ニューロン細胞(多種多様の型があるが、分類は依然として不十分);アストロサイト(種々の型);オリゴデンドロサイトを含む)。
・水晶体細胞(前水晶体上皮細胞;クリスタリン含有水晶体線維細胞を含む)。
・色素細胞(メラニン細胞;網膜色素上皮細胞を含む)。
・生殖細胞(卵原細胞/卵母細胞;精細胞;精母細胞;精原細胞(精母細胞の幹細胞);精子を含む)。
・ナース細胞(卵胞細胞;セルトリ細胞(精巣内の);胸腺上皮細胞を含む)。
・幹細胞(胚および成体の両由来の全能性、分化全能性、多能性、単能性の幹細胞または前駆体または前駆細胞)。
・上述の細胞型のいずれかに由来するすべての癌細胞(定義不可能な起源の奇形癌腫を含む)。
a)播種する1つ以上の細胞培養物を得る手順、
b)本発明によるバイオリアクターのインキュベーションキャビティに前記1つ以上の細胞培養物を移す手順、
c)前記インキュベーションキャビティに増殖培地を充填する手順、
d)場合により、前記インキュベーションキャビティから空気(気泡)を除去する手順、
e)微小重力条件下で前記細胞培養物をインキュベートする手順、
f)所望の期間わたりインキュベーションを持続させるために、必要に応じて増殖培地を交換する手順、ならびに
g)場合により、ぜんき培養を分化させて、前記細胞間に接着結合または緊密な細胞接触の他の形態を形成する(例えば、細胞間マトリックスタンパク質の分泌によって)手順、
を含む。
a)播種する前記1つ以上の細胞培養物を得る手順、
b)1mL未満の内部液量を有する前記インキュベーションキャビティ内に相対的な保水手段を具備する微小重力バイオリアクターの前記インキュベーションキャビティに、前記1つ以上の細胞培養物を移す手順、
c)前記インキュベーションキャビティに増殖培地を充填する手順、
d)場合により、前記インキュベーションキャビティから空気(気泡)を除去する手順、
e)微小重力条件下で前記細胞培養物をインキュベートする手順、
f)所望の期間わたりインキュベーションを持続させるために、必要に応じて増殖培地を交換する手順、
g)場合により、培養を分化させて、細胞間に接着結合または緊密な細胞接触の他の形態を形成する(例えば、細胞間マトリックスタンパク質の分泌によって)手順、
を含み、
前記インキュベーションキャビティ内の前記相対的な保水性が、2日後に95%を超えるか、あるいは前記インキュベーションキャビティ内の前記相対的な保水性が、5日後に95%を超える。
a)1つ以上の細胞培養物から単離した集団を化学組成物と接触させる手順、ならびに
b)前記化学組成物の前記生物学的作用の分子プロファイルを作製するために、前記化学組成物に反応する前記1つ以上の細胞培養物の遺伝子発現またはタンパク質発現の変化を記録する手順、
を含み、
前記1つ以上の細胞培養物が、上述の方法によってインキュベートされている、
方法に関する。
a)1つ以上の細胞培養物から単離した集団を、所定の毒性を有する化学組成物と接触させる手順、
b)前記化学組成物の生物学的作用の分子プロファイルを作製するために、前記化学組成物に反応する前記1つ以上の細胞培養物の遺伝子発現またはタンパク質発現の変化を記録する手順、ならびに
c)所定の毒性を有する少なくとも2つの化学組成物を使用して手順a)およびb)を繰り返すことにより、分子プロファイルのライブラリーまたはデータベースを蓄積する手順、
を含み、
前記1つ以上の細胞培養物が、上述の方法によってインキュベートされている、
方法に関する。
a)上述の通り、試験化学組成物の生物学的作用の分子プロファイルを作製する手順、ならびに
b)手順a)の前記分子プロファイルを、上述の方法によって蓄積した所定の毒性を有する化学組成物の生物学的作用の分子プロファイルと比較する手順、
を含み、
前記試験化学組成物の毒性の型が、手順b)の比較によって判定される、
方法に関する。
完全に分化したヒト肝臓によって発現され、通常の(平面)培養条件下で増殖される肝細胞内では一般的に見られない特異的タンパク質は、本発明のバイオリアクターを使用して培養される細胞に見られる。完全に分化した肝細胞タンパク質は、302日後にも依然として培養液中に見られる。
表1 培養302日後にバイオリアクター培養で認められた完全に分化した肝細胞によって発現され、通常の平面培養条件下で増殖した肝細胞によって一般的に分泌されない、細胞タンパク質
完全に分化した正常な成人肝臓によって分泌され、通常の平面培養条件下で増殖した肝細胞によって一般的に分泌されない特異的タンパク質は、本発明のバイオリアクターを使用して微小重力条件下で培養した肝細胞によって分泌される。
表2 バイオリアクター培地に見られた完全に分化した肝細胞により分泌され、通常の(平面)培養条件下で増殖した肝細胞によって一般的に分泌されない、タンパク質
Claims (56)
- 回転に適合したバイオリアクターであって、前記リアクターが、
−インキュベーションキャビティであって、所定の分子量もしくは分子サイズまでの分子に対して透過性を有する第1の半透性フィルター(F1)とともに、実質的に閉ざされた境界を提供し、前記インキュベーションチャンバー内の栄養素および液体培地の流入を可能にすると同時に、前記インキュベーションキャビティ内の細胞および細胞凝集体の保持を可能にする、インキュベーションキャビティ、
−平衡チャンバーであって、前記インキュベーションキャビティ内に存在する1つ以上の細胞培養物、組織生検、または細胞クラスターのために栄養素を供給し、老廃物を除去し、酸素および二酸化炭素のような気体を交換するための容量と、そして/またはpH制御物質とを備える、平衡チャンバー、ならびに
−前記半透性フィルター(F1)から前記平衡チャンバーまで実質的に液密性の導管を提供する導通手段、
を含み、
前記インキュベーションキャビティが、約25μL〜約1mLの内部液量を有する、
バイオリアクター。 - 前記インキュベーションキャビティの前記内部液量が、900μL未満、800μL未満、700μL未満、600μL未満、500μL未満、400μL未満、300μL未満、200μL未満、100μL未満、50μL未満、および25μLからなる群から選択される、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記インキュベーションキャビティが、実質的に円筒の形状を有する、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記バイオリアクターが、付随する回転手段によって横回転軸を中心に回転するように適合されており、前記回転軸が前記インキュベーションキャビティを通る中心軸と実質的に一致する、請求項3に記載のバイオリアクター。
- 前記流体導通手段が、前記回転軸と実質的に平行の部分を有する、請求項4に記載のバイオリアクター。
- 前記平衡チャンバーと前記インキュベーションキャビティの間に液体培地を循環させるためのポンプ手段もさらに含む、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記半透性フィルターが、小分子を透過するが、細菌、マイコプラズマまたはその他の生物体の通過は防止することができる、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記導通手段が、約25μL〜約2mL、約50μL〜約1mL、および約0.200mLからなる群から選択される内部液量を有する、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記平衡チャンバーが、約25μL〜約2mL、約50μL〜約1mL、および約0.200mLからなる群から選択される内部液量を有する、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 前記半透性フィルターが、0.2μm、100nm以下、50nm以下、および10nm以下からなる群から選択される最大孔径を有する、請求項1に記載のバイオリアクター。
- 回転に適合したバイオリアクターであって、前記バイオリアクターが、
−インキュベーションキャビティであって、第1の半透性膜(M1)とともに、実質的に閉ざされた境界を提供する、インキュベーションキャビティ、
−水性液体を含む湿潤チャンバーであって、前記チャンバーが、水性液体と流体接触して配置される第2の半透性膜(M2)と第3の半透性膜(M3)の両方を含み、前記第3の半透性膜(M3)がさらに、前記バイオリアクターを取り囲む大気との気体交換のために配置される、チャンバー、ならびに
−前記第1の半透性膜(M1)から前記第2の半透性膜(M2)まで実質的に気密性の導管を提供する導通手段、
を含み、
前記第1、第2および第3の半透性膜(M1、M2、M3)が、
a)前記第1の半透性膜(M1)および前記湿潤チャンバーを介した前記インキュベーションキャビティの通気、ならびに
b)前記インキュベーションチャンバー内の実質的な保水、
を促進するために、実質的に水を透過せず、かつ実質的に酸素および二酸化炭素を透過する、
バイオリアクター。 - 前記湿潤チャンバーおよび/またはインキュベーションチャンバーから蒸発した水が、少なくとも50%、少なくとも70%、および少なくとも90%からなる群から選択される相対湿度を前記気密性の導管内に提供する、請求項11に記載のバイオリアクター。
- 前記バイオリアクターが、前記インキュベーションキャビティ内に水溶液または懸濁液が入った状態で37℃にて操作される時、3日後に少なくとも80%、少なくとも90%、および少なくとも95%からなる群から選択される相対的な保水性を前記インキュベーションキャビティ内に有する、請求項11に記載のバイオリアクター。
- 前記バイオリアクターが、前記インキュベーションキャビティ内に水溶液または懸濁液が入った状態で37℃にて操作される時、5日後に少なくとも80%、少なくとも90%、および少なくとも95%からなる群から選択される相対的な保水性を前記インキュベーションキャビティ内に有する、請求項11に記載のバイオリアクター。
- 前記バイオリアクターが、前記インキュベーションキャビティ内に水溶液または懸濁液が入った状態で37℃にて操作される時、10日後に少なくとも80%、少なくとも90%、および少なくとも95%からなる群から選択される相対的な保水性を前記インキュベーションキャビティ内に有する、請求項11に記載のバイオリアクター。
- 前記インキュベーションキャビティが、実質的に円筒の形状を有する、請求項11に記載のバイオリアクター。
- 前記バイオリアクターが、付随する回転手段によって横回転軸を中心に回転するように適合されており、前記回転軸が前記インキュベーションキャビティを通る中心軸と実質的に一致する、請求項16に記載のバイオリアクター。
- 前記インキュベーションキャビティの前記内部液量が、900μL未満、800μL未満、700μL未満、600μL未満、500μL未満、400μL未満、300μL未満、200μL未満、100μL未満、50μL未満、および25μLからなる群から選択される、請求項11に記載のバイオリアクター。
- 前記インキュベーションキャビティが、1つ以上の細胞培養物を含むように適合されており、前記インキュベーションキャビティが、細胞培養に使用され得、かつ細胞の付着をもたらさない非毒性物質で作られていることを特徴とする、請求項1または請求項11に記載のバイオリアクター。
- 前記インキュベーションキャビティが、種々の種類のガラス、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレン、およびポリメチルメタクリレートからなる群から選択される物質で作られている、請求項19に記載のバイオリアクター。
- 前記インキュベーションキャビティが、球体の形状であるか、マイクロキャリアビーズ上にあるか、またはスカフォールド上にある1種類以上の細胞培養物のうちの培養物を含むように適合されている、請求項17に記載のバイオリアクター。
- 回転に適合したバイオリアクターであって、前記バイオリアクターが、
−第1の半透性膜(M12)とともに、実質的に閉ざされた境界を提供する、インキュベーションキャビティ、
−前記第1の半透性膜(M12)と流体接触する水性液体を含む湿潤チャンバーであって、前記チャンバーが、前記水性液体と流体接触して配置される第2の半透性膜(M3)を含み、前記第2の半透性膜(M3)がさらに、前記バイオリアクターを取り囲む大気との気体交換のために配置される、チャンバー、
を含み、
前記第1および第2の半透性膜(M12、M3)が、実質的に水を透過せず、かつ実質的に酸素および二酸化炭素を透過し、前記第1の半透性膜(M12)が、
a)前記第1の半透性膜(M12)および前記湿潤チャンバーを介した前記インキュベーションキャビティの通気、ならびに
b)前記インキュベーションチャンバー内の実質的な保水、
を促進するために、塩類を透過しない、
バイオリアクター。 - 前記インキュベーションキャビティの前記内部液量が、900μL未満、800μL未満、700μL未満、600μL未満、500μL未満、400μL未満、300μL未満、200μL未満、100μL未満、50μL未満、および25μLからなる群から選択される、請求項22に記載のバイオリアクター。
- 前記インキュベーションキャビティが、実質的に円筒の形状を有する、請求項22に記載のバイオリアクター。
- 前記バイオリアクターが、付随する回転手段によって横回転軸を中心に回転するように適合されており、前記回転軸が前記インキュベーションキャビティを通る中心軸と実質的に一致する、請求項24に記載のバイオリアクター。
- 回転に適合したバイオリアクターであって、前記バイオリアクターが、
−半透性膜とともに、実質的に閉ざされた境界を提供する、インキュベーションキャビティ、
を含み、
大気圧で前記半透性膜が、
a)前記第1の半透性膜および前記湿潤チャンバーを介した前記インキュベーションキャビティの通気、ならびに
b)前記インキュベーションチャンバー内の実質的な保水、
を促進するために、ほぼ完全に水を透過しないが、酸素および二酸化炭素は実質的に透過する、
バイオリアクター。 - 回転に適合したバイオリアクターであって、前記バイオリアクターが、
−可撓性膜または可撓性フィルター(M1/F1)とともに内面を含む、インキュベーションキャビティ、
−前記インキュベーションキャビティの充填に適合した1つ以上の貫通ポートであって、前記インキュベーションキャビティの中心軸から見て異なる角度で方位角により配置される、ポート、ならびに
−1つ以上のインサートであって、各インサートが、対応する貫通ポートに嵌め込んで、各ポートの実質的に液密性のロックを提供するように適合される、インサート、
を含み、
前記1つ以上のインサートが、前記対応するポートに挿入されることで、本質的にゼロ容量のポートを作り出す場合に、前記インキュベーションキャビティの内面と実質的に並んだ端部を有する、
バイオリアクター。 - 前記貫通ポートの1つ以上が外側凹部を含む、請求項27に記載のバイオリアクター。
- 前記インサートの1つ以上が、ネジ山を有する外側部を含む、請求項27に記載のバイオリアクター。
- 前記内面の一部が、円筒形、楕円形、球形、および放物形からなる群から選択される形状を有する、請求項27に記載のバイオリアクター。
- 請求項27に記載のバイオリアクターを充填する方法であって、前記バイオリアクターが、充填前に開いている少なくとも第1および第2の貫通ポートを含み、前記方法が、
a)前記バイオリアクターが、少なくとも前記インキュベーションキャビティ全体に、ならびに前記第1のポートの少なくとも一部におよび前記第2のポートの少なくとも一部に液体を含むように、前記第1のポートを介して前記バイオリアクターに液体を過剰に充填する手順、
b)対応する前記インサートを前記第1のポートに挿入して、前記第1のポートをロックする手順、
c)対応する前記インサートを前記第2のポートに挿入して、前記第2のポートをロックし、それによって前記インキュベーションキャビティ内の前記液体に中程度の過剰圧力をかける手順、ならびに
d)前記可撓性膜が前記過剰圧力を本質的に均等にできるようにする手順、
を含む、
方法。 - 請求項27に記載のバイオリアクターを充填する方法であって、前記バイオリアクターが、充填前に開いている唯一の貫通ポートを含み、前記方法が、
a)前記バイオリアクターが、少なくとも前記インキュベーションキャビティ全体におよび前記ポートの少なくとも一部に液体を含むように、前記ポートを介して前記バイオリアクターに前記液体を過剰に充填する手順、
b)対応する前記インサートを前記ポートに挿入して、前記ポートをロックし、それによって前記インキュベーションキャビティ内の前記液体に中程度の過剰圧力をかける手順、ならびに
d)前記可撓性膜が前記過剰圧力を本質的に均等にできるようにする手順、
を含む、
方法。 - 請求項27および請求項1に記載のバイオリアクター。
- 請求項27および請求項11に記載のバイオリアクター。
- 請求項27および請求項22に記載のバイオリアクター。
- 請求項27および請求項26に記載のバイオリアクター。
- 1つ以上の細胞培養物をインキュベートするための、請求項1、11、22、26、27、または32〜36のいずれか1項に記載のバイオリアクターの使用。
- 前記1つ以上の細胞培養物が、例えば1週間、2週間、または3週間、好ましくは少なくとも1ヵ月間、例えば2ヵ月間、最も好ましくは少なくとも10ヵ月間等の長期間にわたりインキュベートされる、請求項37に記載の使用。
- 1つ以上の細胞培養物をインキュベートする方法であって、
a)播種する前記1つ以上の細胞培養物を得る手順、
b)請求項1〜30または32〜36のいずれか1項に記載のバイオリアクターのインキュベーションキャビティに前記1つ以上の細胞培養物を移す手順、
c)前記インキュベーションキャビティに増殖培地を充填する手順、
d)場合により、前記インキュベーションキャビティから空気(気泡)を除去する手順、
e)微小重力条件下で前記細胞培養物をインキュベートし、所望の期間わたりインキュベーションを持続させるために、必要に応じて増殖培地を交換する手順、ならびに
f)場合により、前記培養物を分化させて、細胞間に接着結合または同様の細胞間接着構造または細胞間マトリックスタンパク質を形成する手順、
を含む、
方法。 - 1つ以上の細胞培養物をインキュベートする方法であって、
a)播種する前記1つ以上の細胞培養物を得る手順、
b)1mL未満の内部液量を有する前記インキュベートキャビティ内に相対的な保水手段を具備する微小重力バイオリアクターの前記インキュベーションキャビティに、前記1つ以上の細胞培養物を移す手順、
c)前記インキュベーションキャビティに増殖培地を充填する手順、
d)場合により、前記インキュベーションキャビティから空気(気泡)を除去する手順、
e)微小重力条件下で前記細胞培養物をインキュベートする手順、
f)所望の期間にわたりインキュベーションを持続させるために、必要に応じて増殖培地を交換する手順、ならびに
g)場合により、前記培養物を分化させて、細胞間に接着結合または同様の細胞間接着構造または細胞間マトリックスタンパク質を形成する手順、
を含み、
前記インキュベートキャビティ内の前記相対的な保水性が、2日後に95%を超える、
方法。 - 1つ以上の細胞培養物をインキュベートする方法であって、
a)播種する前記1つ以上の細胞培養物を得る手順、
b)1mL未満の内部液量を有する前記インキュベートキャビティ内に相対的な保水手段を具備する微小重力バイオリアクターの前記インキュベーションキャビティに、前記1つ以上の細胞培養物を移す手順、
c)前記インキュベーションキャビティに増殖培地を充填する手順、
d)場合により、前記インキュベーションキャビティから空気(気泡)を除去する手順、
e)微小重力条件下で前記細胞培養物をインキュベートする手順、
f)所望の期間にわたりインキュベーションを持続させるために、必要に応じて増殖培地を交換する手順、ならびに
g)場合により、前記培養物を分化させて、細胞間に接着結合または同様の細胞間接着構造または細胞間マトリックスタンパク質を形成する手順、
を含み、
前記インキュベートキャビティ内の前記相対的な保水性が、5日後に95%を超える、
方法。 - 手順b)で使用される前記インキュベーションキャビティの前記内部液量が、900μL未満、800μL未満、700μL未満、600μL未満、500μL未満、400μL未満、300μL未満、200μL未満、100μL未満、50μL未満、および25μLからなる群から選択される、請求項40または請求項41に記載の方法。
- 前記1つ以上の細胞培養物が、球形であるか、マイクロキャリアビーズ上にあるか、またはスカフォールド上にある、請求項39〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項11〜25または33〜36のいずれか1項に記載のバイオリアクターの前記湿潤チャンバーが、少なくとも50%、少なくとも70%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、および少なくとも99%からなる群から選択される相対湿度を気密性の導管内に維持するために、必要に応じて水溶液を補充されるか、交換される、請求項34に記載の方法。
- 請求項11〜30または32〜36のいずれか1項に記載のバイオリアクターの前記インキュベーションキャビティが、前記細胞を前記インキュベーションキャビティに移す前に濡らされる、請求項39〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 化学組成物の生物学的作用の分子プロファイルを作製する方法であって、
a)1つ以上の細胞培養物から単離した集団を化学組成物と接触させる手順、ならびに
b)前記化学組成物の前記生物学的作用の分子プロファイルを作製するために、前記化学組成物に反応する前記1つ以上の細胞培養物の遺伝子発現またはタンパク質発現の変化を記録する手順、
を含み、
前記1つ以上の細胞培養物が、請求項39〜42のいずれか1項に記載の方法によってインキュベートされている、
方法。 - 前記1つ以上の細胞培養物から単離した集団を、例えば少なくとも1ヵ月、好ましくは少なくとも2ヵ月、またはより好ましくは少なくとも3ヵ月等の長期間にわたり、前記化学組成物と接触させる、請求項46に記載の方法。
- 前記1つ以上の細胞培養物から単離した集団を、例えば5日未満、好ましくは3日未満、またはより好ましくは1日未満等の短期間にわたり、前記化学組成物と接触させる、請求項46に記載の方法。
- 前記1つ以上の細胞培養物が、肝細胞、脂肪細胞、腎細胞、筋細胞、肝組織、脂肪組織(褐色または白色)、肝生検、腎生検、筋生検、卵胞、ランゲルハンス島、およびそれらに由来するすべての癌細胞からなる群から選択される、請求項46〜48のいずれか1項に記載の方法。
- 所定の毒性を有する化学組成物の生物学的作用の分子プロファイルのライブラリーを蓄積する方法であって、
a)1つ以上の細胞培養物から単離した集団を、所定の毒性を有する化学組成物と接触させる手順、
b)前記化学組成物の前記生物学的作用の分子プロファイルを作製するために、前記化学組成物に反応する前記1つ以上の細胞培養物の遺伝子発現またはタンパク質発現の変化を記録する手順、ならびに
c)所定の毒性を有する少なくとも2つの化学組成物を使用して手順a)およびb)を繰り返すことにより、分子プロファイルのライブラリーを蓄積する手順、
を含み、
前記1つ以上の細胞培養物が、請求項39〜42のいずれか1項に記載の方法によってインキュベートされている、
方法。 - 前記1つ以上の細胞培養物から単離した集団を、例えば少なくとも1ヵ月、好ましくは2ヵ月、またはより好ましくは3ヵ月等の長期間にわたり、前記化学組成物と接触させる、請求項50に記載の方法。
- 前記1つ以上の細胞培養物から単離した集団を、例えば3日未満、好ましくは2日未満、またはより好ましくは1日未満等の短期間にわたり、前記化学組成物と接触させる、請求項50に記載の方法。
- 前記接触が、請求項39〜42のいずれか1項に記載の方法によって、前記化学組成物と前記1つ以上の細胞培養物とを一緒にインキュベートすることにより実施される、請求項50に記載の方法。
- 前記1つ以上の細胞培養物が、肝細胞、脂肪細胞、腎細胞、筋細胞、肝組織、脂肪組織(褐色または白色)、肝生検、腎生検、筋生検、卵胞、ランゲルハンス島、およびそれらに由来するすべての癌細胞からなる群から選択される、請求項50〜53のいずれか1項に記載の方法。
- 試験化学組成物の毒性を型別する方法であって、
a)請求項46に記載の試験化学組成物の生物学的作用の分子プロファイルを作製する手順、ならびに
b)手順a)の前記分子プロファイルを、請求項32に記載の方法によって蓄積される所定の毒性を有する化学組成物の生物学的作用の分子プロファイルのライブラリーと比較する手順、
を含み、
前記試験化学組成物の毒性の種類が、手順b)の比較によって判定される、
方法。 - 前記1つ以上の細胞培養物が、肝細胞、脂肪細胞、腎細胞、筋細胞、肝組織、脂肪組織(褐色または白色)、肝生検、腎生検、筋生検、卵胞、ランゲルハンス島、およびそれらに由来するすべての癌細胞からなる群から選択される、請求項55に記載の方法。
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