JP2009091280A - マトリックスメタロプロテアーゼ及びこれを含有する組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】 皮膚の老化抑制に有用な、複数のＭＭＰを阻害する成分を提供する。
【解決手段】 次に示す植物の抽出物からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤を食品や化粧料等の組成物に含有させる。該マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は少なくともＭＭＰ１とＭＭＰ９とを阻害する。
（植物）サルノコシカケ科カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、ハマウツボ科カンカニクジュヨウ（Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight）、ベンケイソウ科コウケイテン（Rhodiolarosea L.）、ウコギ科エゾウコギ（Acanthopanax senticosus Harms）トチュウ科トチュウ（Eucommia ulmoides）
【選択図】 なし

Description

本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤及びそれを含有する組成物に関し、更に詳細には、皮膚の老化の予防、改善に有用な、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を含有する、組成物に関する。

皮膚を美しく保ちたいと願うことは万人に共通するものであり、老化により、シワが形成したり、肌理が消失したりすることを防ぐ手だてが長年にわたって求められてきている。この様な、皮膚の老化に伴う変化、特に、シワやきめの消失、弾力性の低下等については、従来より紫外線が大きく関与していると言われている。これらの変化の内、ミクロ的には、コラーゲン、エラスチン等の真皮マトリックス成分の減少が存し、この変化を誘導する因子として、特にマトリックスプロテアーゼの関与が指摘されてきている。マトリックスプロテアーゼには多くの種類が知られており、構造的、機能的特徴に共通点を有してはいるものの、それぞれの基質蛋白が異なっている（例えば、非特許文献１を参照）。マトリックスメタロプロテアーゼの中でも、コラゲナーゼに属するＭＭＰ１は、皮膚真皮マトリックスの主な構成成分であるタイプＩ、ＩＩＩコラーゲンを分解し、ゼラチナーゼ群に属するＭＭＰ２、９は基底膜成分であるタイプIVコラーゲンやラミニン、真皮マトリックス成分のエラスチン等を分解し、さらにストロムライシン群に属するＭＭＰ３、１０はプロテオグリカンやタイプIVコラーゲン、ラミニン等を分解する酵素として知られている。これらは紫外線の照射により、その発現が亢進し、細胞外マトリックスの減少変性を誘起し、皮膚のシワの形成等の大きな要因の一つとなると言われている（例えば、非特許文献２、非特許文献３を参照）。即ち、皮膚の老化予防、改善には、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９及びＭＭＰ１０から選択される複数種のＭＭＰを抑制することが重要であることが分かる。特に、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２又はＭＭＰ９、ＭＭＰ３又はＭＭＰ１０の３つの組合せの内の何れか２つに阻害活性を示す成分は複数点の阻害が可能となるので広く望まれていたが、得られていないのが現状であった。ＭＭＰ１乃至はＭＭＰ９に対して阻害効果を示す成分は既に知られており、クロバナツルアズキの抽出物（例えば、特許文献１を参照）、エルカンプーレ抽出物（例えば、特許文献２を参照）、茶（Ｔｈｅａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ．）抽出物（例えば、特許文献３を参照）などが存する。

宮崎香，生化学６８巻１２号，ＰＰ１７９１−１８０７（１９９６） Gary J.Fisher et al. Nature,379(25),335(1996) Gary J.Fisher et al. The New EnglandJournal of Medicine,337(20),1419(1997) 特開２００７−２１７３５２号公報 特開２００７−２０４３９８号公報 特開２００３−１８３１７５号公報

本発明は、この様な状況下為されたものであり、皮膚の老化抑制に有用な、複数のＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）を阻害する成分を提供することを課題とする。

この様な状況に鑑みて、本発明者らは、皮膚の老化抑制に有用な、複数のＭＭＰを阻害する成分を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、次に示す植物の抽出物がＭＭＰ１とＭＭＰ９とをともに阻害する作用を有することを見いだし、発明を完成させた。
（植物）サルノコシカケ科カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、ハマウツボ科カンカニクジュヨウ（Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight）、ベンケイソウ科コウケイテン（Rhodiolarosea L.）、ウコギ科エゾウコギ（Acanthopanax senticosus Harms）トチュウ科トチュウ（Eucommia ulmoides）
即ち、本発明は以下に示すとおりである。
（１）次に示す植物の抽出物からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
（植物）サルノコシカケ科カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、ハマウツボ科カンカニクジュヨウ（Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight）、ベンケイソウ科コウケイテン（Rhodiolarosea L.）、ウコギ科エゾウコギ（Acanthopanax senticosus Harms）トチュウ科トチュウ（Eucommia ulmoides）
（２）前記マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の対象とするマトリックスメタロプロテアーゼは、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−９であることを特徴とする、（１）に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
（３）前記植物の抽出物は、８．９mＵ/μｇ（酵素活性/植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１及びマトリックスメタロプロテアーゼ９の２種のMMPに４０％以上の阻害作用を有するものであることを特徴とする、（１）又は（２）に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
（４）次の工程を経て製造されるものであることを特徴とする、（１）〜（３）何れか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
（工程１）サルノコシカケ科カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、ハマウツボ科カンカニクジュヨウ（Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight）、ベンケイソウ科コウケイテン（Rhodiolarosea L.）、ウコギ科エゾウコギ（Acanthopanax senticosus Harms）トチュウ科トチュウ（Eucommia ulmoides）から選択される植物の植物体に抽出溶媒を加え、抽出物を作製する。
（工程２）前記抽出物の８．９mＵ/μｇ（酵素活性/植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ９の２種のMMPに４０％以上の活性阻害が存したものをマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤として選択する。
（５）（１）〜（４）何れか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を含有する、皮膚の老化の予防又は改善用の組成物。
（６）皮膚の老化が、コラーゲン線維束構造の崩壊、シワの形成、皮膚の弾力消失、及び、皮溝と皮丘の差の減少から選択される１種乃至は２種以上である、（５）に記載の皮膚の老化の予防又は改善用の組成物。
（７）皮膚外用剤又は食品の形態であることを特徴とする、（５）又は（６）に記載の皮膚の老化の予防又は改善用の組成物。

本発明によれば、皮膚の老化抑制に有用な、複数のＭＭＰを阻害する成分を提供することができる。

本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、皮膚の老化の予防又は改善のためのものであって、次に示す植物の抽出物から選択されるものからなることを特徴とする。抽出物の作製は、常法に従って行えば良く、植物体１質量部に対して、溶媒１〜１００質量部を加え、常温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、所望により濾過などで不溶物を取り除き、所望により減圧溜去、凍結乾燥等で溶媒を除去することも出来る。更に、これらの抽出物をカラムクロマトグラフィーや液液抽出などで分画精製することも出来る。カラムクロマトグラフィーとしては、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、「ダイアイオンＨＰ−２０」のようなイオン交換樹脂、ＯＤＳ等が好適に例示できる。勿論、植物体の一部又は全部を粉砕など加工しただけのものも本発明の抽出物に含まれる。

（植物）サルノコシカケ科カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、ハマウツボ科カンカニクジュヨウ（Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight）、ベンケイソウ科コウケイテン（Rhodiolarosea L.）、ウコギ科エゾウコギ（Acanthopanax senticosus Harms）トチュウ科トチュウ（Eucommia ulmoides）

サルノコシカケ科カバノアナタケは、菌体の部分何れもが使用可能であり、特に好ましくは子実体である。抽出物の作製に用いる溶媒としては、水性の極性溶媒が好ましく、具体的には、エタノールなどのアルコール及び／又は水が好ましい。中でも熱水抽出が特に好ましい。

ハマウツボ科カンカニクジュヨウは、全草の部分何れもが使用可能であり、特に好ましくは全草である。抽出物の作製に用いる溶媒としては、水性の極性溶媒が好ましく、具体的には、エタノールなどのアルコール及び／又は水が好ましい。中でも熱水抽出が特に好ましい。

ベンケイソウ科コウケイテンは、全草の何れの部分も使用可能であり、特に好ましくは全草である。抽出物の作製に用いる溶媒としては、水性の極性溶媒が好ましく、具体的には、エタノールなどのアルコール及び／又は水が好ましい。中でも熱水抽出が特に好ましい。

ウコギ科エゾウコギは、全草の何れの部分も使用可能であり、特に好ましくは根である。抽出物の作製に用いる溶媒としては、水性の極性溶媒が好ましく、具体的には、エタノールなどのアルコール及び／又は水が好ましい。中でも熱水抽出が特に好ましい。

トチュウ科トチュウは、葉、花、蕾、樹皮、木幹、根何れも使用可能であるが、特に好ましくは葉である。抽出物の作製に用いる溶媒としては、水性の極性溶媒が好ましく、具体的には、エタノールなどのアルコール及び／又は水が好ましい。中でも熱水抽出が特に好ましい。

以下に、これらの植物体を用いた抽出物の製造例を示す。

＜製造例１＞
サルノコシカケ科カバノアナタケの子実体５００ｇに水２Ｌを加え、３時間沸騰させて抽出を行い、室温まで冷却した後、濾過により不溶物を除き、凍結乾燥して、９７ｇのアモルファスとして抽出物１を得た。

＜製造例２＞
製造例１と同様の手技で、ハマウツボ科カンカニクジュヨウの全草５００ｇを処理し、１０５ｇのアモルファスとして抽出物２を得た。

＜製造例３＞
製造例１と同様の手技で、ベンケイソウ科コウケイテンの全草５００ｇを処理し、１２３ｇのアモルファスとして抽出物３を得た。

＜製造例４＞
製造例１と同様の手技で、ウコギ科エゾウコギの根５００ｇを処理し、２２ｇのアモルファスとして抽出物４を得た。

＜製造例５＞
製造例１と同様の手技で、トチュウ科トチュウの葉５００ｇを処理し、８５ｇのアモルファスとして抽出物５を得た。

斯くして得られた抽出物は、複数種のマトリックスメタロプロテアーゼに対して、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害活性、特に、マトリックスメタロプロテアーゼ１（MMP１）、マトリックスメタロプロテアーゼ９（MMP９）、マトリックスメタロプロテアーゼ１３（MMP１３）３種のMMP阻害作用に優れ、これにより、皮膚の老化を予防又は改善する作用に優れる。皮膚の老化と係わりの深い、ＭＭＰ１とＭＭＰ９とが同時に抑制される。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤としては、ＭＭＰ１とＭＭＰ９とを優れて阻害することにより特徴づけられる。ここで、皮膚の老化としては、コラーゲン線維束構造の崩壊、シワの形成、皮膚の弾力消失、及び、皮溝と皮丘の差の減少等が好ましく例示できる。この様な作用を発揮するには、かかる成分を経口経路で投与する場合は、これらの抽出物は、一日あたり１０〜１００００ｍｇを１回乃至は数回に分けて、経口経路で投与されることが好ましい。経皮経路で投与する場合には、０．０１〜１０質量％、より好ましくは０．０５〜１質量％皮膚外用剤中に含有させ、１日数回、適宜塗布し投与することが好ましい。この時留意すべきことは、ＭＭＰ１、MMP９、MMP１３の阻害活性が、８．９mＵ/μｇ（酵素活性/植物抽出物）溶液において、４０％以上存することを確認することである。阻害活性は既存のＭＭＰ１、MMP９、MMP１３阻害活性測定用のキット、例えば、フナコシ薬品株式会社から販売されている、「MMP−1 Colorimetric Assay Kit (AK-404)」「MMP−9 Colorimetric Assay Kit (AK-410)」「MMP−13 Colorimetric Assay Kit (AK-412)」等を用い、測定することが出来る。阻害活性は、（１−検体存在下のプロテアーゼの反応速度／検体非存在下でのプロテアーゼの反応速度）×１００の式で算出される。前記のＭＭＰ１、MMP９、MMP１３の阻害活性、特にＭＭＰ１とＭＭＰ９の阻害活性が４０％を下回るときには、皮膚の老化に対する作用を発現しない場合が存する。この様にＭＭＰ１、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１３をともに阻害することは、ＭＭＰをそのサブタイプにかかわらず阻害する蓋然性が高く、多くのサブタイプが関与する皮膚の老化の抑制、改善に於いては有用であると言える。

かかる本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、製剤化のための任意成分とともに処理することにより、本発明の経口投与組成物に加工することが出来る。本発明の経口投与組成物としては、経口投与される特徴を備えていれば特段の限定無く、例えば、経口投与医薬組成物、食品、飲み物などが好適に例示できる。この中では、食品が特に好ましく、中でも特定の機能を期待される特定保健用食品などの食品が特に好ましい。前記製剤化のための任意成分としては、例えば、乳糖、デキストリン、シクロデキストリンなどの賦形剤、デンプン、セルロースなどの崩壊剤、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアガムなどの結合剤、ペクチン、レシチンなどの乳化・分散剤、白糖、蜂蜜、麦芽糖などの矯味剤、シェラック、ゼラチンなどの被覆剤などが好適に例示できる。又、本発明の皮膚外用剤としては、通常皮膚外用剤で任意成分として使用されている成分、例えば、スクワラン、流動パラフィン、固形パラフィンなどの炭化水素類、ジメチコン、シクロメチコン、ポリエーテル変性ジメチコン、アモジメチコンなどのシリコーン類、ホホバ油、ゲイロウ等のエステル類、オリーブ油、菜種油、グリセリルトリイソオクタネートなどのトリグリセライド類、モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ＰＯＥ脂肪酸エステル、ＰＯＥ硬化ヒマシ油、ＰＯＥアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステルなどのノニオン、脂肪酸乃至は脂肪酸石鹸、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ビタミン類等の各種有効成分とともに皮膚外用剤に加工することが出来る。かかる加工は常法に従えばよい。

以下に実施例を挙げて、本発明について、更に詳細に説明を加える。

製造例１〜５で作製した抽出物１〜５について、そのＭＭＰ１、MMP９、MMP１３阻害活性を「MMP−1 Colorimetric Assay Kit (AK-404)」「MMP−9 Colorimetric Assay Kit (AK-410)」「MMP−13 Colorimetric Assay Kit (AK-412)」を用いて測定した。結果を表１に示す。何れの抽出物も８．９mＵ/μｇ（酵素活性/植物抽出物）で４０％以上の阻害率を示していることがわかる。

下記の処方に従って、本発明の経口投与組成物である、食品（錠剤）を作製した。即ち、成分を「ニューマルメライザー」（不二パウダル株式会社製）に仕込み、送風攪拌下、水１００ｍｌを噴霧し、造粒し、４０℃の温風を３時間送風して、乾燥させ、これを打錠して、錠剤１（１００ｍｇ）を得た。同時に抽出物１をデキストリンに置換したプラシーボ１も同様に製造した。

＜試験例１＞
錠剤１とプラシーボ１とを、皮膚のハリ・弾力感の衰えで悩む４０〜５０歳の女性パネラー１０名を使用して、使用テストで評価した。１０名は平均年齢が同程度になるように、かたよりの無いように５名ずつ２群に群わけした。それぞれの群は、１日朝晩２回錠剤を２錠ずつ６０日間摂取した。最後の摂取後３日目に、皮膚の状態を自分で観察してもらい、改善効果を、スコア０：改善無し、スコア１：少し改善が感じられる、スコア２：改善したと感じる、スコア３：明瞭に改善した、スコア４：著しく改善した、の基準でスコアを賦してもらった。結果を表３に出現例数として示す。これより、改善実感とＭＭＰ１及びＭＭＰ９の抑制作用がリンクしていることが分かる。

実施例２と同様に、下記に示す処方に従って、食品（錠剤２〜５）を作成した。

以下に示す処方に従って、皮膚外用剤を作成した。即ち、イ、ロの成分を８０℃に加温し、イを混練りしてゲルを形成させ、この中にハを加えて溶解させ、これに攪拌下徐々にロを加えて乳化し、攪拌冷却して油中水乳化剤形の化粧料１を得た。同様に操作して、抽出物１を水に置換したプラシーボ２も作成した。

＜試験例＞
化粧料１とプラシーボ２とを、皮膚のハリ・弾力感の衰えで悩む４０〜５０歳の女性パネラー１０名を使用して、使用テストで評価した。１０名は平均年齢が同程度になるように、かたよりの無いように５名ずつ２群に群わけした。それぞれの群は、１日朝晩２回適量を塗布してもらい、これを６０日続けた。最後の投与の４８時間後に、肌の改善度合いを、コア０：改善無し、スコア１：少し改善が感じられる、スコア２：改善したと感じる、スコア３：明瞭に改善した、スコア４：著しく改善した、の基準でスコアを賦してもらった。結果を表７に出現例数として示す。これより、改善実感とＭＭＰ１及びＭＭＰ９の抑制作用がリンクしていることが分かる。

実施例４と同様に化粧料２〜５を作成した。

本発明は、食品、化粧料等に応用できる。

Claims (7)

1. 次に示す植物の抽出物からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
   （植物）サルノコシカケ科カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、ハマウツボ科カンカニクジュヨウ（Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight）、ベンケイソウ科コウケイテン（Rhodiolarosea L.）、ウコギ科エゾウコギ（Acanthopanax senticosus Harms）トチュウ科トチュウ（Eucommia ulmoides）
2. 前記マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の対象とするマトリックスメタロプロテアーゼは、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−９であることを特徴とする、請求項１に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
3. 前記植物の抽出物は、８．９mＵ/μｇ（酵素活性/植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１及びマトリックスメタロプロテアーゼ９の２種のMMPに４０％以上の阻害作用を有するものであることを特徴とする、請求項１又は２に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
4. 次の工程を経て製造されるものであることを特徴とする、請求項１〜３何れか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
   （工程１）サルノコシカケ科カバノアナタケ（Fuscoporia obliqua）、ハマウツボ科カンカニクジュヨウ（Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight）、ベンケイソウ科コウケイテン（Rhodiolarosea L.）、ウコギ科エゾウコギ（Acanthopanax senticosus Harms）トチュウ科トチュウ（Eucommia ulmoides）から選択される植物の植物体に抽出溶媒を加え、抽出物を作製する。
   （工程２）前記抽出物の８．９mＵ/μｇ（酵素活性/植物抽出物）溶液において、マトリックスメタロプロテアーゼ１、マトリックスメタロプロテアーゼ９の２種のMMPに４０％以上の活性阻害が存したものをマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤として選択する。
5. 請求項１〜４何れか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を含有する、皮膚の老化の予防又は改善用の組成物。
6. 皮膚の老化が、コラーゲン線維束構造の崩壊、シワの形成、皮膚の弾力消失、及び、皮溝と皮丘の差の減少から選択される１種乃至は２種以上である、請求項５に記載の皮膚の老化の予防又は改善用の組成物。
7. 皮膚外用剤又は食品の形態であることを特徴とする、請求項５又は６に記載の皮膚の老化の予防又は改善用の組成物。