JP2008516632A5

JP2008516632A5 -

Info

Publication number: JP2008516632A5
Application number: JP2007537980A
Authority: JP
Filing date: 2005-10-19
Publication date: 2011-10-20

Description

次に、濃厚血小板のバッグは、１０ｃｆｕ／ｍｌの大腸菌でスパイクし、摂氏３７度で培養した。サンプルは１時間ごとに採取し、本実施例の上記の方法によって細菌を測定して相対発光量を得るか、またはｃｆｕ／ｍｌを定量的に測定するためにプレートした。結果を図９に示す。本器具で決定した相対発光量の結果は、プレーティングによるコロニー形成単位の判定に近似した。

Claims

細菌を含有する疑いのある液体試料中の細菌を検出する方法であって、
（ａ）前記液体試料中に存在する可能性のある無傷の細菌細胞から無傷の真核細胞を分離するステップと、
（ｂ）前記細菌細胞を溶解して液体中に細菌ＡＴＰを放出し、細菌溶解液を生成するステップと、
（ｃ）前記細菌溶解液中の前記細菌ＡＴＰをＡＴＰ消費酵素と接触させて、前記酵素が反応を触媒するＡＴＰ測定液を生成するステップと、
（ｄ）前記ＡＴＰ測定液中の酵素触媒反応をモニタリングするステップと、を含み、
前記方法は、セレウス菌、枯草菌、ウェルシュ菌、コリネバクテリウム種、大腸菌、エンテロバクタークロアカ、クレブシエラオキシトカ、挫瘡プロピオンバクテリウム、緑膿菌、豚コレラ菌、セラチアマルセッセンス、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、化膿レンサ球菌、および緑色連鎖球菌の細菌種それぞれにつき、液体試料１ｍｌにつき１０，０００細菌コロニー形成単位以下を検出し、
前記真核細胞は、血小板を含み、
前記液体試料は、血小板を含む哺乳類の血液製剤である、
方法。
前記細菌細胞から無傷の真核細胞を分離するステップは、前記真核細胞を阻止して細菌細胞が通過できるようにするフィルターを使用して、前記真核細胞をろ過し、前記細菌細胞を含むろ過された液体試料を生成するステップを含む、請求項１に記載の方法。
前記フィルターは、１〜１０ミクロンの細孔サイズである、請求項２に記載の方法。
前記フィルターは、２〜１０ミクロンの細孔サイズである、請求項３に記載の方法。
前記フィルターは、４〜１０ミクロンの細孔サイズである、請求項４に記載の方法。
前記真核細胞をろ過する前記ステップの後に、
前記ろ過した液体試料を、前記細菌を結合する担持表面と接触させるステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
前記担持表面は、ガラス、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲン、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐオリゴペプチド、またはＰｈｅ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｌａ（ＳＥＱＩＤＮｏ．１）オリゴペプチドを含む、請求項６に記載の方法。
前記担持表面は、真核細胞を結合しない、請求項６に記載の方法。
前記細菌細胞は、前記担持表面に結合しながら溶解され、液体中に細菌ＡＴＰを放出して細菌溶解液を生成する、請求項６に記載の方法。
前記細菌細胞を溶解させるステップの前に、前記担持表面からの前記細胞を溶出液に溶出させるステップをさらに含む、請求項６に記載の方法。
前記真核細胞をろ過するステップの後に、１ミクロン未満の細孔サイズのフィルターを通して前記ろ過した液体試料をろ過するステップを含むプロセスによって、前記ろ過した液体試料中の前記細菌細胞を濃縮するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
細菌細胞から無傷の真核細胞を分離するステップは、
前記液体試料を、前記細菌細胞を結合して前記真核細胞を結合しない担持表面と接触させるステップを含む、請求項１に記載の方法。
前記担持表面は、大部分の細菌種を結合する、請求項１２に記載の方法。
前記担持表面は、ポリカチオンを含む、請求項１３に記載の方法。
前記液体試料中に存在する可能性のある無傷の細菌細胞から無傷の真核細胞を分離するステップは、前記液体試料を、前記細菌を結合する担持表面と接触させるステップの前に、
前記真核細胞を阻止して前記細菌細胞が通過できるようにするフィルターを使用して、前記液体試料から前記真核細胞をろ過するステップをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
前記細菌細胞は、前記担持表面に結合しながら溶解され、液体中に細菌ＡＴＰを放出して細菌溶解液を生成する、請求項１２に記載の方法。
前記細菌細胞を溶解させるステップの前に、前記担持表面から前記細菌細胞を溶出液に溶出させるステップをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
前記細菌細胞を溶解させるステップの前に、前記細菌細胞を濃縮するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記ＡＴＰ測定液の容量は、前記液体試料の容量の少なくとも１０分の１である、請求項１８に記載の方法。
前記細菌細胞は、熱または洗浄剤、あるいはその両方によって溶解される、請求項１に記載の方法。
前記細菌細胞は、酸または塩基によって溶解される、請求項１に記載の方法。
前記細菌細胞は、音響エネルギーまたは粒子との接触、あるいはその両方によって溶解される、請求項１に記載の方法。
前記細菌細胞は、有機溶媒によって溶解される、請求項１に記載の方法。
前記細菌細胞は、酵素、凍結融解、フレンチプレスまたはその組み合わせによって溶解される、請求項１に記載の方法。
前記酵素触媒反応をモニタリングするステップは、前記反応によって生成される生成物をモニタリングするステップを含む、請求項１に記載の方法。
前記生成物は、光である、請求項２５に記載の方法。
前記酵素はルシフェラーゼであり、前記方法は、前記細菌ＡＴＰおよびルシフェラーゼをルシフェリンと接触させるステップをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
前記血液製剤は、濃厚血小板である、請求項１に記載の方法。
前記血液製剤は、全血、血清、血漿、濃厚骨髄幹細胞、または濃厚赤血球である、請求項１に記載の方法。
前記血液製剤は、哺乳類への輸血用である、請求項１に記載の方法。
前記方法は、前記液体試料１ｍｌにつき１０００の細菌コロニー形成単位レベルにおいて、少なくとも３つの細菌属を検出する、請求項１に記載の方法。
前記方法は、前記液体試料１ｍｌにつき１００の細菌コロニー形成単位レベルにおいて、少なくとも３つの細菌属を検出する、請求項３１に記載の方法。
前記液体試料は、５ｍｌ未満である、請求項１に記載の方法。
ステップ（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）は、自動化される、請求項１に記載の方法。
ステップ（ｂ）および（ｃ）は、前記細菌細胞を、溶解剤、ルシフェラーゼ、およびルシフェリンを含有する混合物と接触させるステップを含む、請求項１に記載の方法。
前記自動化ステップは、２分未満で完了する、請求項３４に記載の方法。
液体試料中に存在する可能性のある無傷の細菌細胞から真核細胞を分離して、細菌細胞を検査するための検査試料を生成するように構成された器具であって、
（ａ）（ｂ）に連結する液体容器と、
（ｂ）前記細菌細胞を結合するが前記真核細胞を結合しない担持表面である細菌分離部と、
を備え、
使用時に、前記液体試料は、前記液体容器から細菌分離部を通って流れ、前記液体試料中に存在した可能性のある細菌細胞を含有する検査試料を生成し、前記検査試料は、実質上真核細胞を含まない、器具。