JP2008504528A - 2粒子複合体を用いた生物学的分子の検出のための方法及び組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
BとDの両方が対象の分析物に連結してはいないという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物に連結しているか、又は対象の分析物の第1の特異的結合パートナーに連結してあり、
Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、
Dは対象の分析物に連結しているか、又は対象の第2の特異的結合パートナーに連結している第2の担体であり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象のを含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)ECL部分を電気化学的エネルギーに曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象のを検出する方法を提供する。
BとDの両方が対象の生物学的分子に連結してはいないという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを捕足若しくは含む第1の固体支持体であり、Bは対象の生物学的分子に連結しているか、又は対象の生物学的分子の第1の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の生物学的分子を含むことがある試料であり、
Dは対象の生物学的分子に連結しているか、又は対象の生物学的分子の第2の特異的結合パートナーに連結している第2の固体支持体であり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象の生物学的分子を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより生物学的分子の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の生物学的分子を検出する方法を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物に連結しているか、又は対象の分析物の第1の特異的結合パートナーに連結しており、Cは、対象の分析物を含むことがある試料であり、Dは対象の分析物に連結しているか、又は対象の分析物の第2の特異的結合パートナーに連結している第2の担体であり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、BとDの両方が対象の分析物に連結してはいない。]
を含む、試料における対象の分析物を検出するのに有用な組成物を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、BはAを含む第1の固体支持体であり、Bは対象の生物学的分子に連結しているか、又は対象の生物学的分子の特異的結合パートナーに連結しており、Cは対象の生物学的分子を含むことがある試料であり、Dは対象の生物学的分子に直接連結するか、又は対象の生物学的分子の第2の特異的結合パートナーに連結することができる第2の固体支持体であり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、BとDの両方が対象の分析物に連結してはいない。]
を含む、試料における生物学的分子を検出するのに有用な組成物を提供する。
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
Bは、Aを含む、有機溶剤に可溶のビーズ、例えばポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸分子に結合しているか、又は対象の核酸分子の第1の特異的結合パートナーに結合しており、
Cは、対象の核酸分子を含むことがある試料であり、
Dは対象の核酸分子に連結しているか、又は対象の核酸分子の第2の特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象の核酸分子を含む複合体を、他の組成物の構成成分から分離するステップと、
(c)Bを有機溶剤に溶解するステップと、
(d)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(e)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の核酸分子の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の核酸分子を検出する方法を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るRu(bpy)3[B(C6F5)4]2部分であり、BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸分子に連結しているか、又は対象の核酸分子の結合パートナーに連結しており、Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、Dは対象の核酸分子に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、BとDの両方が対象の核酸分子に連結してはいない。]
を含む、試料における対象の核酸分子を検出するのに有用な組成物を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸分子に連結するか、又は対象の核酸分子の第1の特異的結合パートナーに連結し、Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、Dは対象の核酸分子に連結するか、又は対象の核酸分子の第2の特異的結合パートナーに連結する磁性ビーズであり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、BとDの両方が対象の核酸分子に連結してはいない。]
を含む、試料における対象の核酸分子を検出するための組成物を提供する。
BとDの両方が対象のタンパク質に連結してはいないという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質、又は対象のタンパク質に特異的に結合している第1の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象のタンパク質を含むことがある試料であり、
Dは対象のタンパク質、又は対象のタンパク質に特異的に結合している第2の特異的結合パートナーに連結することができる磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象のタンパク質分子を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象のタンパク質の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象のタンパク質を検出する方法を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質に連結しているか、又は対象のタンパク質の第1の特異的結合パートナーに連結しており、Cは対象のタンパク質分子を含むことがある試料であり、Dは対象のタンパク質に連結しているか、又は対象のタンパク質分子に特異的に結合している第2の特異的結合パートナーに連結している磁化ビーズであり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、BとDの両方が対象のタンパク質に連結してはいない。]
を含む、試料における対象のタンパク質を検出するための組成物を提供する。
B及びDの1つのみが、対象の分析物の類似体に連結し、Bが対象の分析物の類似体に連結している場合には、Dは対象の分析物の結合パートナーに連結しており、Bが対象の分析物の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象の分析物の類似体に連結しているという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物の類似体に連結しているか、又は対象の分析物の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、
Dは、対象の分析物の類似体に連結しているか、又は対象の分析物の特異的結合パートナーに連結している第2の担体であり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、Dを含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)複合体におけるECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の分析物の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の分析物を検出する方法を提供する。
B及びDの1つのみが、対象の核酸の類似体に連結し、Bが対象の核酸分子の類似体に連結している場合には、Dは対象の核酸分子の結合パートナーに連結しており、Bが対象の核酸分子の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象の核酸分子の類似体に連結しているという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、
Dは対象の核酸の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象の核酸分子を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)Bを有機溶剤に溶解するステップと、
(d)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(e)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の核酸分子の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の核酸分子を検出する方法を提供する。
B及びDの1つのみが、対象のタンパク質の類似体に連結し、Bが対象のタンパク質の類似体に連結している場合は、Dは対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結しており、Bが対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結している場合には、Dは対象のタンパク質の類似体に連結しているという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質の類似体、又は対象のタンパク質に特異的に結合している特異的結合パートナーに連結し、
Cは対象のタンパク質を含むことがある試料であり、
Dは、対象のタンパク質の類似体、又は対象のタンパク質に特異的に結合している特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象のタンパク質を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象のタンパク質の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象のタンパク質を検出する方法を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物の類似体に連結しているか、又は対象の分析物の第1の特異的結合パートナーに連結しており、Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、Dは対象の分析物の類似体に連結することができるか、又は対象の分析物の第2の特異的結合パートナーに連結することができる第2の担体であり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、B及びDの1つのみが、対象の分析物の類似体に連結し、Bが対象の分析物の類似体に連結している場合には、Dは対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結しており、Bが対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結している場合には、Dは対象のタンパク質の類似体に連結している。]
を含む、試料における対象の分析物を検出するための組成物を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸分子の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結しており、Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、Dは対象の核酸分子の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、B及びDの1つのみが、対象の核酸分子の類似体に連結し、Bが対象の核酸分子の類似体に連結している場合には、Dは対象の核酸分子の結合パートナーに連結しており、Bが対象の核酸分子の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象の核酸分子の類似体に連結している。]
を含む、試料における対象の核酸分子を検出するための組成物を提供する。
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質の類似体に連結するか、又は対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結し、Cは対象のタンパク質を含むことがある試料であり、Dは対象のタンパク質の類似体に連結するか、又は対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結する磁性ビーズであり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。但し、B及びDの1つのみが、対象のタンパク質の類似体に連結し、Bが対象のタンパク質の類似体に連結している場合には、Dは対象のタンパク質の結合パートナーに連結しており、Bが対象のタンパク質の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象のタンパク質の類似体に連結している。]
を含む、試料における対象のタンパク質を検出するための組成物を提供する。
本明細書で用いられる「抗体」は、免疫グロブリン又はその一部分を意味し、起源、製造方法、又はその他の特徴に関係なく、抗原結合部位を含むあらゆるポリペプチドを包含する。この語は、例えば、ポリクローナルの、モノクローナルの、単一特異性の、多特異性の、ヒト化の、単鎖の、キメラの、合成の、リコンビナントの、ハイブリッドの、変異の、及びCDR移植の抗体を含む。抗体の一部分は、Fab、F(ab’)2、Fv、scFvなど、抗原と結合することができるあらゆるフラグメントを含むことができる。
ある実施形態では、本発明は、ECLを用いて試料における対象の分析物の検出をもたらす。ECL部分は、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射の繰り返し放射が引き起こされ得る、あらゆる化合物であることができる。一部の実施形態では、ECL部分は、共反応化合物の存在下で電磁放射の繰り返し放射が引き起こされ得る。一部の実施形態では、ECL部分は、金属が、例えば、ルテニウム、オスミウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、白金、パラジウム、モリブデン、及びテクネチウムから選択される金属含有有機化合物を含むことができる。本発明の一部の実施形態では、金属はルテニウム又はオスミウムである。金属は、例えば、それだけには限定されない、セリウム、ジスプロシウム、エルビウム、ユーロピウム、ガドリニウム、ホルミウム、ランタン、ルテチウム、ネオジム、プラセオジム、プロメチウム、テルビウム、ツリウム、及びイッテルビウムを含む希土類金属から選択することもできる。本発明のいくつかの実施形態では、金属はセリウム、ユーロピウム、テルビウム、又はイッテルビウムである。
ある実施形態において、本発明は、対象の分析物の検出に用いることができる、第1及び第2の担体を提供する。第1及び第2の担体は、試料の提示、特異的結合パートナーの提示、ECL部分の包み込み又は捕捉、及び対象の分析物と特異的結合パートナーとの間に形成された複合体を組成物の他の構成成分から分離するための手段の提供を含む、いくつかの機能の少なくとも1つを果たすことができる。
対象の分析物又は特異的結合パートナーを含む試料を、当技術分野では知られている手段により担体に連結することができる。例えば、タンパク質及び核酸には、架橋試薬を用いることができる(Lundら、1988年、Nucleic Acids Res.、16巻、10861頁)。同様に、核酸及びタンパク質の両者には、光反応性の架橋試薬が用いられている(Penchovskyら、2000年、Nucleic Acids Res.、28巻(22)、98頁;Harrisonら、1989年、Biochemistry、28巻、6023頁)。好適な手段の選択は、試料の性質、及び担体の性質による。結合は、例えば、共有結合、非共有の相互作用、例えば、静電気相互作用、疎水性相互作用、親水性相互作用、ファンデルワールス相互作用、又は水素結合によることができる。試料を担体に結合する方法の選択は、当業者の通常の技能の範囲内にある。
ある実施形態では、ECL部分は担体の表面に連結することができる。試料を担体に連結することに関して上記に記載した方法を、同様に、ECL部分を担体に連結するのに用いることができる。担体が固体支持体、例えばビーズである場合は、ECL部分は、例えば、共有結合、非共有の相互作用、静電相互作用、疎水性相互作用、親水性相互作用、ファンデルワールス相互作用、又は水素結合により、担体の表面に結合することができる。
本発明は、試料中に含まれている対象の分析物を検出する様々な方法を提供する。本発明の一部の実施形態では、対象の分析物は、第1の担体などの担体に連結することができる。対象の分析物は担体の表面上に存在し、したがって特異的結合パートナーへのその接近を促進する。一部の実施形態では、対象の分析物は、いかなる担体とも連結することができない。一部の実施形態では、対象の分析物は溶液に存在することができる。
(a)式
(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、Bは、Aと関連している(対象の分析物の特異的結合パートナーに連結する)第1の担体であり、Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、Bは対象の分析物の結合パートナーにより対象の分析物に連結し、Dは対象の分析物に直接連結するか、又は対象の分析物の第2の特異的結合パートナーを介して対象の分析物に連結する第2の担体であり、k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]を有する複合体を形成するステップと、
(b)(a)で形成された複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の分析物の存在を検出するステップと
を含む、対象の分析物を検出するためのアッセイにおいて、ECL部分を使用するための方法も提供する。
ある実施形態では、対象の分析物は、疾患又は病状に関連するマーカーであることができる。本発明は、したがって、疾患又は病状に関連するマーカーを検出し、それにより、疾患又は病状を有する対象を診断する方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、疾患又は病状に関連するマーカーの存在又は量をモニターすることにより、疾患又は病状の進行をモニターする方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は疾患又は病状に関連するマーカーの存在又は量をモニターすることにより疾患又は病状を処置するのに用いられる治療法の有効性をモニターするための方法を提供する。
ある実施形態では、本発明は、試料における対象の分析物を検出するためのキットを提供する。キットは、少なくとも1つのECL部分を含む第1の担体と、第2の担体と、第1及び第2の担体の少なくとも1つに連結する対象の分析物の特異的結合パートナーの少なくとも1つと、少なくとも1つの容器と、場合により指示書とを含むことができる。ある実施形態では、キットは2つ又はそれを超えるECL部分を含むことができる。
Aldrich(ウィスコンシン州、Milwaukee)より入手した、トリス(2,2’−ビピリジル)ルテニウム(II)二塩化物六水和物(Ru(bpy)3Cl2・6H2O)、トリフルオロ酢酸(TFAA、99%)、テトラフルオロホウ素銀(AgBF4、98%)、及びトリ−n−プロピルアミン(TPrA、99+%);Boulder Scientific社(コロラド州、Mead)より入手した、リチウムテトラキス(ペンタフルオロフェニル)ホウ酸塩(Li[(B(C6F5)4)]nEt2O、n=2〜3);Fluka(ウィスコンシン州、Milwaukee)から入手した、テトラブチルアンモニウムテトラフルオロボレート((TBA)BF4、電気化学グレード);Life Technologies(メリーランド州、Rockville)から入手した、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Tris、超高純度);Sigma(ミズーリ州、St.Louis)より入手した、塩酸1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDAC、SigmaUltra)、N−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)、フルオレセインビオチン(90%)、1−メチルイミダゾール、及びDNAハイブリダイゼーションバッファー(PerfectHyb(登録商標)プラス);EM(ニュージャージー州、Gibbstown)より入手した、水酸化ナトリウム(GR)、塩酸(GR)、塩化ナトリウム(GR)、エチルエーテル(無水)、アセトニトリル(HPLC)、テトラヒドロフラン(THF、GR)、及びエチレンジニトリロテトラ酢酸(EDTA)、Pierce(イリノイ州、Rockford)より入手した、アビジン(NeutrAvidin)、D−ビオチン(Immunopure(登録商標))、及びビオチン−PEO−LC−アミン;並びにFisher(ニュージャージー州、Fairlawn)より入手した、メタノール(分光分析用グレード)は、別段の記載がなければ更に精製しないで使用した。ポリスチレンカルボキシレート微粒子/ビーズ(PSB、直径10μm、ビーズ6.5×104個/μLの2.6%(w/w)水性懸濁液)、及びストレプトアビジンコーティングした超常磁性ポリスチレンビーズ(磁性ビーズ又はMBと呼ぶ、(a)直径1.0μm、約9.5×106ビーズ/μLで10mg/mLの水性懸濁液、(b)直径2.8μm、約6.5×105ビーズ/μLで10mg/mLの水性懸濁液)を、それぞれPolySciences社(ペンシルベニア州、Warington)及びDynalBiotech社(ニューヨーク州、Lake Success)から購入した。炭疽菌(Bacillus anthacis)(Ba813)に由来する合成の23−mer1本鎖DNA(ssDNA)オリゴヌクレオチドは、Qiagen Operon(カリフォルニア州、Alameda)から入手し、以下の配列を有しており、:(a)プローブ、5’−[ビオチン−TEG]−AACGA TAGCT CCTAC ATTTG GAG−3’(p−ss−DNA、M.W.=7617g/mol;配列番号:1);(b)標的又は相補的、5’−[ビオチン−TEG]−CTCCA AATGT AGGAG CTATC GTT−3’(t−ssDNA、M.W.=7608g/mol;配列番号:2);(c)非相補的、5’−[ビオチン−TEG]−TTAAC ACCTT AGCGA CGGCT AGT−3’(nc−ssDNA、M.W.=7593g/mol;配列番号:3)、及び(d)2塩基対ミスマッチのオリゴマー配列、5’−[ビオチン−TEG]−CTCCA AACGT AGGAG TTATC GTT−3’(2−bp−m−ssDNA;配列番号:4)、この場合、ビオチンTEGはトリエチレングリコールをベースにした16原子混合の極性スペーサーを含み、ビオチン化したDNAと、表面を制限されたアビジン/ストレプトアビジン相互作用との間の立体障害を減少させるために用いられた。別段の記載がなければ、溶液は全て、18MΩ−cm脱イオン化Mill−Q水(Millipore Corp.、マサチューセッツ州、Bedford)で新たに調製した。
直径2.2mmのPtディスク、作用電極として直径2.0mmのAu又は直径3.0mmのグラッシーカーボン(GC)ディスク、対電極としてPtワイヤー、及び基準電極としてAg/Ag+(10mM AgBF4及び50mM TBABF4のMeCN溶液)の、3電極セルシステムを用いた。各実験の前に、電極は全て慎重に清浄にした。清浄ステップには、作用電極をコーミック(chomic)酸溶液中に浸すステップと、0.05μmアルミナスラリー(Buehler Ltd.、イリノイ州、Lake Bluff)で磨くステップと、大量の水で洗浄するステップと、MeCNですすぐステップと、多孔性のVycorチップとガラスチューブとを基準電極に置き換えるステップが含まれる。5mLの使い捨てのガラスバイアルを、電気化学的セルとした。ECLシグナルがRu(bpy)3 2+の汚染されたシステムから生成される可能性を除外するために、必要に応じて真新しいガラス器具及び電極を用いた。サイクリックボルタモグラム(CV)とともにECL強度を、電気化学的セルの下に設置した光電子増倍管(PMT、HamamatsuR4220p、日本)と組み合わせた自家製のポテンシオスタットで同時に測定した。高電圧供給電力(Bertan High Voltage Corp.、Series225、ニューヨーク州、Hicksville)で、PMTに750Vの電圧を供給した。
Ru(bpy)3 2+含有ECL標識の合成
本試験では、トリス(2,2’−ビピリジル)ルテニウム(II)テトラキス(ペンタフルオロフェニル)ホウ酸塩(Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2)をECL標識として用いた、というのは、次項で示すように、この複合体は適切な有機溶液を用いてポリスチレンビーズ中に効果的に充填することができ、水性溶液におけるビーズの一連の修飾の間中ビーズ中の捕捉を維持することができるからである。換言すれば、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2は、有機溶剤に十分可溶であるが、水性溶液には完全に不溶である。ECL標識としてRu(bpy)3[B(C6F5)4]2を選択した別の理由は、複合体のRu(bpy)3 2+部分のECL効率は非常に高いという事実であった。Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2は、水中でRu(bpy)3Cl2とLi[B(C6F5)4]nEt2O(n=2〜3)との間のメタセシス反応により調製される。沈殿物を水で洗浄し、アセトニトリル/水溶液から再結晶し、真空下で乾燥させる。
共反応化合物としてTPrAを用いた、MeCNにおけるRu(bpy)3 2+の電気化学的及びECLの挙動
0.10μM Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2の、0.10M(TBA)BF4電解質−0.10M TPrA共反応化合物含有MeCN溶液の、Pt電極での、スキャン速度50mV/sでのサイクリックボルタンメトリー及びECLの応答を、図4に示す。TPrAは、約0.5VvsAg/Ag+のポテンシャルで酸化し始め、約0.75VvsAg/Ag+で最大の酸化のピークを示す(図4a)。電極が、Ru(bpy)3 2+がRu(bpy)3 3+に酸化される1.1VvsAg/Ag+よりも陽性のポテンシャルをスキャンされる場合に(図4c)、ECLが生成される(図4b)。ECL強度は、ポテンシャルの上昇とともに継続的に上昇し、最終的に、約700mVの半波長幅の幅広いピーク及び約1.6VvsAg/Ag+のピークポテンシャルを形成する。リバーススキャンの際は、より大きいECL強度、及び同様のピーク位置が観察される。ECLのピークポテンシャルは、TPrAの非存在下でのRu(bpy)3 2+の酸化ポテンシャルと比べるとよりポジティブであるので、Ru(bpy)3 2+の酸化ポテンシャルは、TPrAの存在下でポジティブにわずかにシフトすることができることを留意されたい(図4b及びc)。予想通り、Ru(bpy)3 2+複合体の対イオンにおける変化、例えば、B(C6F5)4 −からClO4 −への変化は、ECLの挙動を変化させなかった。aμMレベルのRu(bpy)3 2+を用いた場合にTPrA・+とRu(bpy)3 +との反応時の励起状態のRu(bpy)3 2+・の形成により(Ru(bpy)3 2+とTPrA・との反応により形成された)TPrA酸化のポテンシャル領域に前値波のECLが現れる水溶液の場合とは対照的に(Miao、Choi、及びBard、2002年、J.Am.Chem.Soc.、124巻、14478頁)、顕著な対応するECLシグナルはMeCNにおいては見られなかった。これが示唆するのは、本実験条件下では、MeCNにおけるTPrA・+の寿命は中性の水溶液におけるよりも短く、又はTPrA・+は、Ru(bpy)3 +をRu(bpy)3 2+*に酸化するほどエネルギー的に十分強力ではないということのいずれかである。これとは別に、我々の結論は、共反応化合物としてTPrAを用いて水溶液で展開したECLのメカニズムは、MeCNにおいて効果があるということである。
ECL標識のポリスチレンビーズ中への充填
直径10μmのポリスチレンカルボキシレートビーズをEppendorf5415D遠心機(Brinkmann Instruments,Inc、ニューヨーク州、Westbury)10krpm5分間で、好適な容積(0.10〜1.0mL)の2.6%(w/w)ポリスチレンビーズ懸濁液から分離し、次いで、水1mLで1回洗浄した。
Ru(II)⊂PSBの表面上へのアビジンの固定化
ビーズを0.10M EDAC及び0.10M NHSを含む、調製してすぐの25μMアビジンの0.10M 1−メチル−イミダゾールバッファー(pH7)溶液1.5mLに浸漬し、混合物を約40rpmで1時間回転することにより、Ru(II)⊂PSB−CO−NH−アビジンの形成により、アビジンの層を、Ru(II)⊂PSBの表面に共有結合させた。Ru(II)⊂PSB/アビジンと呼ばれる、新たに形成された、アビジンでコーティングしたRu(II)⊂PSBを、5〜10krpmで5分間反応溶液から遠心分離し、1mLの「1×B&Wバッファー」(1×バッファー&洗浄溶液、5mM Tris−HCl(pH7.5)+0.5mM EDTA+1.0M NaCl)で3回洗浄した。最終のRu(II)⊂PSB/アビジン生成物を、出発のPSB懸濁液(0.10〜1.0mL)と同じ容積を有し、使用まで約4℃に保っていた1×B&Wバッファー溶液に再懸濁した。このようにして、Ru(II)⊂PSB/アビジンの調製中のビーズの損失はないと仮定して、約6.5×104Ru(II)⊂PSB/アビジンビーズ/μLを概算することができる。図2bは、ビーズをフルオレセインビオチンと反応させた後のRu(II)⊂PSB/アビジンの明緑色蛍光画像を示しており、高品質のアビジンの層がRu(II)⊂PSBの表面上に形成されたことを示唆している。これとは対照的に、「裸の」Ru(II)⊂PSB上に非特異的に吸着されたフルオレセインビオチンは、非常に弱い蛍光画像を生成するにすぎない。Ru(II)⊂PSB/アビジンのビオチン化23−mer ssDNA(p−ssDNA)に対する結合能力は、フルオレセインビオチン滴定実験に基づくと、0.565nmol(p−ssDNA)/mgPSB又は1.4×108p−ssDNA分子/ビーズの値を有することが見出された(図10及び以下の表1を参照されたい)。
MB及びRu(II)⊂PSB/アビジンビーズの表面へのssDNAの結合
プローブDNA−MB複合体
プローブDNAの担体として、直径1.0μm又は2.8μmのストレプトアビジンでコーティングした磁性ビーズ(MB)を用いた。プローブDNA−MB複合体を形成するために、5.0μLの1.0μmMB、又は10.0μLの2.8μmMBを、最初に2mLの微小遠心管中に移し、次いで、マグネット(Dynal MPC(登録商標)−S)でオリジナルの懸濁液から分離し、その後200μLの「2×B&Wバッファー」(バッファー&洗浄溶液:10mM Tris−HCL(pH7.5)、1.0mM EDTA、2.0M NaCl)で1回、200μLの1×B&Wバッファーで2回洗浄した後、ビーズを2.5μMのビオチン化p−ssDNA100μLに浸漬し、40rpmで穏やかに回転しながら30から60分間インキュベートした。形成したプローブDNA−MB複合体を、引き続き分離し、200μLのB&Wバッファーで3回洗浄し、以前の遠心管の壁面上への可能なプローブDNAの吸着を避けるために新しい2mLの微小遠心管に移し、20μLのハイブリダイゼーションバッファーに再懸濁した。この方法で生成された複合体は、直径1.0μm及び2.8μmのMBに対してそれぞれ、約2.53及び1.1nmole(p−ssDNA)/mg(ビーズ)、又はビーズ1個あたり1.6×106及び10×107個のp−ssDNA分子の飽和プローブのDNA付着量を有していた(図10及び表1を参照されたい)。
好適な濃度のビオチン化t−ssDNA(1.0×10−8から1.0×10−15M)100μL、又は1.0×10−9Mの非相補的−ssDNA(nc−ssDNA)及び2塩基対ミスマッチのssDNA(2−bp−m−ssDNA)を、約6.5×104ビーズ/μL Ru(II)⊂PSB/アビジンの1×B&Wバッファー溶液25μLに加え、20rpmの回転速度で穏やかに混合しながら1時間インキュベートし、1×B&Wバッファー200μLで2回洗浄し、3k−5k−10krpmで5分間遠心分離し、ハイブリダイゼーションバッファー50μLに再懸濁した。
DNAハイブリダイゼーション及びECL検出
新たに調製した標的のDNA−Ru(II)⊂PSB/アビジン複合体(実施例5)を、先に形成したプローブDNA−MB複合体(実施例5)を含む2mL遠心分離管に移した。好適な容積のハイブリダイゼーションバッファーを分離管中に加えて、ハイブリダイゼーション溶液の全容積を200μLにした。20rpmで1時間穏やかに混合した後、プローブDNA−MB−標的DNA−Ru(II)⊂PSB/アビジン凝集物を、遊離の非結合のRu(II)⊂PSB/アビジンビーズを含む「溶液」から磁気的に分離し、200μLの1×B&Wバッファーで3回穏やかに洗浄し、分離管の壁面上への遊離のRu(II)⊂PSB/アビジンビーズの可能な吸着を最小にするために新しい遠心分離管中に慎重に移した。DNAハイブリダイゼーションの凝集物とともに、壁面上の遊離のRu(II)⊂PSB/アビジンビーズがMeCNに溶解することもあるので、この種の非特異的な吸着により、著しく高レベルのバックグラウンドのECLが生成され得る。凝集物は、最終的に水200μLで洗浄し、後にECLを測定するために0.50mLの0.10M TPrA−0.055M TFAA−0.10M(TBA)BF4MeCN溶液に溶解した。DNAハイブリダイゼーションの後、プローブDNA−MB−標的DNA−Ru(II)⊂PSB/アビジン凝集物の形成は、図3に示すSEM画像により明らかに証明することができ、この場合、プローブDNAも相補的なDNAも濃度は5μMであり、MB/PSBの初期比率=29であり、MB及びPSBのサイズは、それぞれ1.0μm及び10μmであった。
ビオチン−PEO−LC−アミンのポリスチレンカルボキシレートビーズへの付着、及びポアソン分布検定
ビオチン−PEO−LC−アミン(M.W.=418.6g/mol)は、水に可溶性の架橋剤であり、22.9Åのポリエチレンオキシド(PEO)ベースのスペーサーアームを用いて、ビオチンとアビジンとの相互作用の立体障害を低下させている(2003〜2004年、Applications Handbook&Catalog;Pierce Biotechnology,Inc.、2003年)。ビオチン−PEO−LC−アミン分子は、0.10M EDAC−0.10M NHSの0.10M 1−メチル−イミダゾールバッファー溶液(pH7)の存在下でポリスチレンカルボキシレートビーズの表面に、架橋剤の第1級アミン基とビーズのカルボキシル基との間にアミド結合を形成することにより、共有結合している。5mMビオチン−PEO−LC−アミンの1mLを用いて、2.6%PSB懸濁液の250μLから分離したPSBと反応させる。反応は、回転速度40rpmで2時間行った。架橋剤が修飾したPSBは、PSB−CO−NH−LC−PEO−ビオチンと呼ばれ、引き続き分離され、1×B&Wバッファー400μLで3回洗浄し、1×B&Wバッファー250μLに再懸濁し、次いで使用するまで4℃に保った。
(Haight、Handbook of the Poisson Distribution、John Willey&Sons,Inc.、ニューヨーク、1967年を参照されたい。)
である場合は、1個のポリスチレンビーズに結合し、それを引き出すのに必要とされる磁性ビーズの最小数は、j+1でなければならない。
2つの芳香族炭化水素であるDPA及びルブレンのポリスチレンビーズ中への充填
Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2の他に、芳香族炭化水素、例えば、9,10−ジフェニルアントラセン(DPA、図11a)及びルブレン(RUB、図11b)も、ポリスチレンビーズ(PSB)中に充填した。その結果、発光波長の様々なECL標識が得られた。充填の手順は、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2の捕捉に用いた手順と同様であったが、5%THF−95%MeOHの「膨張溶剤」を5%ベンゼン−95%MeOHに置き換えたので、2つの芳香族炭化水素はベンゼンを含んだ溶剤に十分に可溶である。図12は、充填手順を要約したものである。
C反応性タンパク質(CRP)のECL検出
Ru(II)⊂PSB/アビジン←抗−CRP複合体を、以下のように調製した:0.100〜0.500mLのRu(II)⊂PSB/アビジン(6.5×104ビーズ/μL)(実施例4を参照されたい)を、2.0mg/mLビオチン化抗−CRP(Miao及びBard、2003年、Anal.Chem.、75巻、5825頁)の0.10M PBSバッファー(0.1Mリン酸ナトリウム、0.15M塩化ナトリウム)(pH7.2)(Pierce、イリノイ州、Rockford)溶液の1mLと、室温で1時間、回転速度25rpmで混合した。新たに形成した複合体を遠心分離により回収し、1×B&Wバッファーで3回洗浄し(実施例4を参照されたい)、2%ウシ血清アルブミン(BSA)/0.10M PBS(pH7.2)溶液1mLに30分間再懸濁した。遠心分離及び洗浄後(上記の通り)、複合体を適切な容積(0.100〜0.500mL)の0.10M PBS(pH7.2)バッファー溶液に懸濁し、使用するまで4℃に保った。
Claims (206)
- BとDの両方が対象の分析物に連結してはいないという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物に連結しているか、又は対象の分析物の第1の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、
Dは対象の分析物に連結しているか、又は対象の分析物の第2の特異的結合パートナーに連結している第2の担体であり、
k、u、及びxは、各々1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象の分析物を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)複合体におけるECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の分析物の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の分析物を検出する方法。 - B及びDの少なくとも1つが固体支持体である、請求項1に記載の方法。
- Bが第1の固体支持体であり、Dが第2の固体支持体である、請求項1に記載の方法。
- 前記対象の分析物がDに直接連結している、請求項1に記載の方法。
- 前記対象の分析物の第2の結合パートナーがDに連結している、請求項1に記載の方法。
- 対象の分析物がBにもDにも連結しない、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つの特異的結合パートナーが、B及びDの少なくとも1つに連結している、請求項1に記載の方法。
- 同一の特異的結合パートナーがBとDに連結する、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つの特異的結合パートナーが抗体である、請求項1に記載の方法。
- 前記対象の分析物が核酸である、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つの特異的結合パートナーが核酸である、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸がDNAである、請求項11に記載の方法。
- 前記対象の分析物がタンパク質である、請求項1に記載の方法。
- 前記ECL部分が前記第1の担体に含まれており、該第1の担体の表面に連結する、請求項1に記載の方法。
- 前記ECL部分が有機溶剤に可溶である、請求項1に記載の方法。
- 前記ECL部分が水性溶剤に不溶である、請求項1に記載の方法。
- 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記ECL部分に電気化学的ポテンシャルを適用することを更に含む、請求項1に記載の方法。
- 前記放射された電磁放射を光電子増倍管で検出することを更に含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第1及び第2の担体が、ビーズ、ゲル、膜、リポソーム、及びミセルから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記第1及び第2の担体が、ポリスチレン、ポリプロピレン、アガロース、アクリルアミド、リン脂質、ニトロセルロース、ナイロン、PVDF、セファロース、セファデックス、ヒアルロン酸、キチン、アシルジェラン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、カルボキシメチルキチン、ポリ(ラクチド−co−エチレングリコール)、及び界面活性剤から選択される化合物を含む、請求項18に記載の方法。
- 前記第1及び第2の担体がビーズである、請求項1に記載の方法。
- 前記第2の担体が磁性ビーズである、請求項23に記載の方法。
- 前記第1の担体がポリスチレンビーズである、請求項23に記載の方法。
- (a)で形成された複合体が、電磁場を適用することにより前記組成物の他の構成成分から単離される、請求項23に記載の方法。
- Bを有機溶剤に溶解するステップを更に含む、請求項1に記載の方法。
- 前記有機溶剤がアセトニトリルである、請求項27に記載の方法。
- 共反応化合物の添加を更に含む、請求項1に記載の方法。
- 前記共反応化合物がアミン又はアミン部分である、請求項29に記載の方法。
- 前記共反応化合物がトリ−n−プロピルアミン(TPrA)である、請求項30に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の分析物の量が定量される、請求項1に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の分析物の量を、既知量の対象の分析物を含む試料Cを用いる方法を実行することにより調製した検量線と、放射された電磁放射の量を比較することにより定量される、請求項32に記載の方法。
- BとDの両方が対象の核酸分子に連結してはいないという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸分子に連結しているか、又は対象の核酸分子の第1の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、
Dは対象の核酸分子に連結しているか、又は対象の核酸分子の第2の特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象の核酸分子を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)Bを有機溶剤に溶解するステップと、
(d)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(e)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の核酸分子の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の核酸分子を検出する方法。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項34に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項34に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項36に記載の方法。
- Dが前記対象の核酸分子の前記第2の特異的結合パートナーに連結しており、更に該第2の特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項34に記載の方法。
- Bが前記対象の核酸分子の前記第1の特異的結合パートナーに連結しており、Dが前記対象の核酸分子の前記第2の特異的結合に連結している、請求項34に記載の方法。
- 前記第1及び前記第2の特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項39に記載の方法。
- Bが、アセトニトリル、THF、ベンゼン、又はこれらの混合物から選択される有機溶剤に溶解している、請求項34に記載の方法。
- 前記対象の核酸分子がDNA又はRNAである、請求項34に記載の方法。
- 共反応化合物の添加を更に含む、請求項34に記載の方法。
- 前記共反応化合物がアミン又はアミン部分である、請求項34に記載の方法。
- 前記共反応化合物がトリ−n−プロピルアミン(TPrA)である、請求項34に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の核酸の量が定量される、請求項34に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の核酸の量を、既知量の対象の核酸を含む試料(C)を用いる方法を実行することにより調製した検量線と、放射された電磁放射の量を比較することにより定量される、請求項46に記載の方法。
- (A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物に連結しているか、又は対象の分析物の第1の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、
Dは対象の分析物に連結しているか、又は対象の分析物の第2の特異的結合パートナーに連結している第2の担体であり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。
但し、BとDの両方が対象の分析物に連結してはいない。]
を含む、試料における対象の分析物を検出するための組成物。 - 前記対象の分析物がBに連結している、請求項48に記載の組成物。
- 前記対象の分析物がDに連結している、請求項48に記載の組成物。
- 前記対象の分析物がBにもDにも連結していない、請求項48に記載の組成物。
- B及びDの少なくとも1つが固体支持体である、請求項48に記載の組成物。
- Bが第1の固体支持体であり、Dが第2の固体支持体である、請求項52に記載の組成物。
- 前記第1の特異的結合パートナーがBに連結している、請求項48に記載の組成物。
- 前記第2の特異的結合パートナーがDに連結している、請求項48に記載の組成物。
- 前記第1の特異的結合パートナーがBに連結しており、前記第2の特異的結合パートナーがDに連結している、請求項48に記載の組成物。
- 2つの特異的結合パートナーを含む、請求項48に記載の組成物。
- 前記2つの特異的結合パートナーが、前記第1及び第2の担体に独立して連結している、請求項57に記載の組成物。
- 前記対象の分析物が核酸である、請求項48に記載の組成物。
- 前記核酸がDNAである、請求項59に記載の組成物。
- 前記対象の分析物がタンパク質である、請求項48に記載の組成物。
- 前記ECL部分が有機溶剤に可溶である、請求項48に記載の組成物。
- 前記ECL部分が水性溶剤に不溶である、請求項48に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項48に記載の組成物。
- B及びDが、ビーズ、ゲル、膜、リポソーム、又はミセルである、請求項48に記載の組成物。
- 前記第1及び第2の固体支持体が、ポリスチレン、ポリプロピレン、アガロース、アクリルアミド、ニトロセルロース、ナイロン、PVDF、セファロース、セファデックス、ヒアルロン酸、キチン、アシルジェラン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、及びカルボキシメチルキチン、ポリ(ラクチド−co−エチレングリコール)から選択される化合物から独立して構成される、請求項53に記載の組成物。
- 前記第1及び第2の固体支持体の少なくとも1つがビーズである、請求項53に記載の組成物。
- 前記第2の固体支持体が磁化ビーズである、請求項53に記載の組成物。
- 前記第1の固体支持体がポリスチレンビーズである、請求項53に記載の組成物。
- (A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸分子に連結し、又は対象の核酸分子の第1の特異的結合パートナーに連結し、
Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、及び
Dは対象の核酸分子に連結し、又は対象の核酸分子の第2の特異的結合パートナーに連結する磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。
但し、BとDの両方が対象の核酸分子に連結してはいない]。
を含む、試料における対象の核酸分子を検出するための組成物。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項70に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項70に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項72に記載の組成物。
- Bが対象の核酸分子の前記第1の特異的結合パートナーに連結し、更に該第1の特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項70に記載の組成物。
- Dが対象の核酸分子の第2の特異的結合パートナーに連結し、更に該第2の特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項70に記載の組成物。
- Bが対象の核酸分子の第1の特異的結合パートナーに連結しており、Dが対象の核酸分子の第2の特異的結合に連結する、請求項70に記載の組成物。
- 前記第1及び前記第2の特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項76に記載の組成物。
- 前記対象の核酸分子がDNA又はRNAである、請求項70に記載の組成物。
- (A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質に連結しているか、又は対象のタンパク質の第1の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象のタンパク質を含むことがある試料であり、
Dは対象のタンパク質に連結しているか、又は対象のタンパク質の第2の特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。
但し、BとDの両方が対象のタンパク質に連結してはいない。]
を含む、試料における対象のタンパク質を検出するための組成物。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項79に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項79に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項81に記載の組成物。
- Bが前記対象のタンパク質の前記第1の特異的結合パートナーに連結しており、更に該特異的結合パートナーが抗体又は結合タンパク質である、請求項79に記載の組成物。
- Dが前記対象のタンパク質の前記第2の特異的結合パートナーに連結しており、更に該特異的結合パートナーが抗体又は結合タンパク質である、請求項79に記載の組成物。
- 前記対象のタンパク質の前記第1の特異的結合パートナー、及び前記対象のタンパク質の前記第2の特異的結合パートナーが抗体である、請求項79に記載の組成物。
- 但し、BとDの両方が対象のタンパク質に連結してはいないという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質に、又は対象のタンパク質に特異的に結合している第1の特異的結合パートナーに連結し、
Cは対象のタンパク質を含むことがある試料であり、
Dは対象のタンパク質に、又は対象のタンパク質に特異的に結合している第2の特異的結合パートナーに連結することができる磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象のタンパク質を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象のタンパク質の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象のタンパク質を検出する方法。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項86に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項86に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項86に記載の方法。
- 前記ECL部分を光電子増倍管で検出することを更に含む、請求項86に記載の方法。
- Bが前記対象のタンパク質の前記第1の特異的結合パートナーに連結し、更に該第1の特異的結合パートナーが抗体、抗体の一部分、又は結合タンパク質である、請求項86に記載の方法。
- Dが前記対象のタンパク質の前記第2の特異的結合パートナーに連結し、更に該第2の特異的結合パートナーが抗体、抗体の一部分、又は結合タンパク質である、請求項86に記載の方法。
- Bが前記対象のタンパク質の前記第1の特異的結合パートナーに連結し、Dが前記対象のタンパク質の前記第2の特異的結合パートナーに連結している、請求項86に記載の方法。
- 前記第1及び第2の特異的結合パートナーが抗体、抗体の一部分、又は結合タンパク質である、請求項93に記載の方法。
- Bが、アセトニトリル、THF、ベンゼン、又はそれらの混合物から選択される有機溶剤に溶解している、請求項86に記載の方法。
- 共反応化合物の添加を更に含む、請求項86に記載の方法。
- 前記共反応化合物がアミン又はアミン部分である、請求項96に記載の方法。
- 前記共反応化合物がトリ−n−プロピルアミン(TPrA)である、請求項96に記載の方法。
- 前記試料における前記対象のタンパク質の量が定量される、請求項86に記載の方法。
- 前記試料における前記対象のタンパク質の量を、既知量の対象のタンパク質を含む試料(C)を用いる方法を実行することにより調製した検量線と、放射された電磁放射の量を比較することにより定量する、請求項99に記載の方法。
- B及びDの1つのみが対象の分析物の類似体に連結し、
Bが対象の分析物の類似体に連結している場合には、Dは対象の分析物の結合パートナーに連結しており、Bが対象の分析物の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象の分析物の類似体に連結しているという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物の類似体に連結しているか、又は対象の分析物の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、
Dは対象の分析物の類似体に連結しているか、又は対象の分析物の特異的結合パートナーに連結している第2の担体であり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、Dを含む複合体を、該組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)該複合体におけるECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の分析物の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の分析物を検出する方法。 - B及びDの少なくとも1つが固体支持体である、請求項101に記載の方法。
- Bが第1の固体支持体であり、Dが第2の固体支持体である、請求項101に記載の方法。
- 前記特異的結合パートナーが抗体である、請求項101に記載の方法。
- 前記対象の分析物が核酸である、請求項101に記載の方法。
- 前記特異的結合パートナーが核酸である、請求項101に記載の方法。
- 前記対象の核酸分子がDNAである、請求項101に記載の方法。
- 前記対象の分析物がタンパク質である、請求項101に記載の方法。
- 前記ECL部分が第1の担体に含まれている、請求項101に記載の方法。
- 前記ECL部分が有機溶剤に可溶である、請求項101に記載の方法。
- 前記ECL部分が水性溶剤に不溶である、請求項101に記載の方法。
- 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項101に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項101に記載の方法。
- 前記ECL部分に電気化学的ポテンシャルを適用することを更に含む、請求項101に記載の方法。
- 前記放射された電磁放射を光電子増倍管で検出することを更に含む、請求項101に記載の方法。
- 前記第1及び第2の担体が、ビーズ、ゲル、膜、リポソーム、及びミセルから選択される、請求項101に記載の方法。
- B及びDが、ポリスチレン、ポリプロピレン、アガロース、アクリルアミド、ニトロセルロース、ナイロン、PVDF、セファロース、セファデックス、ヒアルロン酸、キチン、アシルジェラン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、カルボキシメチルキチン、及びポリ(ラクチド−co−エチレングリコール)から選択される化合物を独立に含む、請求項103に記載の方法。
- 前記第1及び第2の担体がビーズである、請求項101に記載の方法。
- 前記第2の担体が磁化ビーズである、請求項118に記載の方法。
- 前記第1の担体がポリスチレンビーズである、請求項118に記載の方法。
- A、B、Dを含む複合体が、電磁場を適用することにより前記組成物の他の構成成分から単離される、請求項118に記載の方法。
- Bを有機溶剤に溶解するステップを更に含む、請求項101に記載の方法。
- 前記有機溶剤がアセトニトリルである、請求項122に記載の方法。
- 共反応化合物の添加を更に含む、請求項101に記載の方法。
- 前記共反応化合物がアミン又はアミン部分である、請求項124に記載の方法。
- 前記共反応化合物がトリ−n−プロピルアミン(TPrA)である、請求項124に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の分析物の量を定量する、請求項101に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の分析物の量を、既知量の対象の分析物を含む試料(C)を用いる方法を実行することにより調製した検量線と、放射された電磁放射の量を比較することにより定量する、請求項127に記載の方法。
- B及びDの1つのみが、対象の核酸の類似体に連結し、
Bが対象の核酸分子の類似体に連結している場合には、Dは対象の核酸分子の結合パートナーに連結しており、Bが対象の核酸分子の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象の核酸分子の類似体に連結しているという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、
Dは対象の核酸の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結する磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象の核酸分子を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)Bを有機溶剤に溶解するステップと、
(d)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(e)放射された電磁放射を検出し、それにより対象の核酸分子の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象の核酸分子を検出する方法。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項129に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項129に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項131に記載の方法。
- Bが前記対象の核酸分子の類似体に連結しており、更に該類似体がオリゴヌクレオチドである、請求項129に記載の方法。
- Dが前記対象の核酸分子の類似体に連結し、更に該類似体がオリゴヌクレオチドである、請求項129に記載の方法。
- 前記対象の核酸分子の類似体と、前記対象の核酸分子の特異的結合パートナーの両方が、オリゴヌクレオチドである、請求項129に記載の方法。
- Bが、アセトニトリル、THF、ベンゼン、又はこれらの混合物から選択される有機溶剤に溶解している、請求項129に記載の方法。
- 前記対象の核酸分子がDNA又はRNAである、請求項129に記載の方法。
- 共反応化合物の添加を更に含む、請求項129に記載の方法。
- 前記共反応化合物がアミン又はアミン部分である、請求項129に記載の方法。
- 前記共反応化合物がトリ−n−プロピルアミン(TPrA)である、請求項129に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の核酸の量を定量する、請求項129に記載の方法。
- 前記試料における前記対象の核酸の量を、既知量の対象の核酸を含む試料(C)を用いる方法を実行することにより調製した検量線と、放射された電磁放射の量を比較することにより定量する、請求項141に記載の方法。
- B及びDの1つのみが、対象のタンパク質の類似体に連結して、
Bが対象のタンパク質の類似体に連結している場合には、Dは対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結しており、Bが対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結している場合には、Dは対象のタンパク質の類似体に連結しているという条件で、
(a)(A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質の類似体、又は対象のタンパク質に特異的に結合している特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象のタンパク質を含むことがある試料であり、
Dは対象のタンパク質の類似体、又は対象のタンパク質に特異的に結合している特異的結合パートナーのいずれかに連結する磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である]
を含む組成物を形成するステップと、
(b)A、B、D、及び対象のタンパク質を含む複合体を、組成物の他の構成成分から分離するステップと、
(c)ECL部分を電気化学的エネルギーに直接曝すことにより、ECL部分に電磁放射の繰り返し放射を引き起こすステップと、
(d)放射された電磁放射を検出し、それにより対象のタンパク質の存在を検出するステップと
を含む、試料における対象のタンパク質を検出する方法。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項143に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項143に記載の方法。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項143に記載の方法。
- 前記ECL部分を光電子増倍管で検出することを更に含む、請求項143に記載の方法。
- 前記Bが前記対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結し、更に該特異的結合パートナーが抗体、抗体の一部分、又は結合タンパク質である、請求項143に記載の方法。
- Dが前記対象のタンパク質の前記特異的結合パートナーに連結し、更に該特異的結合パートナーが抗体、抗体の一部分、又は結合タンパク質である、請求項143に記載の方法。
- Bが、アセトニトリル、THF、ベンゼン、又はこれらの混合物から選択される有機溶剤に溶解している、請求項143に記載の方法。
- 共反応化合物の添加を更に含む、請求項143に記載の方法。
- 前記共反応化合物がアミン又はアミン部分である、請求項151に記載の方法。
- 前記共反応化合物がトリ−n−プロピルアミン(TPrA)である、請求項151に記載の方法。
- 前記試料における前記対象のタンパク質の量を定量する、請求項143に記載の方法。
- 前記試料における前記対象のタンパク質の量を、既知量の対象のタンパク質を含む試料(C)を用いる方法を実行することにより調製した検量線と、放射された電磁放射の量を比較することにより定量する、請求項154に記載の方法。
- (A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含む第1の担体であり、Bは対象の分析物の類似体に連結しているか、又は対象の分析物の第1の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の分析物を含むことがある試料であり、
Dは対象の分析物の類似体に連結することができるか、又は対象の分析物の第2の特異的結合パートナーに連結することができる第2の担体であり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。
但し、B及びDの1つのみが、対象の分析物の類似体に連結し、
Bが対象の分析物の類似体に連結している場合には、Dは対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結しており、Bが対象のタンパク質の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象のタンパク質の類似体に連結している。]
を含む、試料における対象の分析物を検出するための組成物。 - B及びDの少なくとも1つが固体支持体である、請求項156に記載の組成物。
- Bが第1の固体支持体であり、Dが第2の固体支持体である、請求項157に記載の組成物。
- 前記特異的結合パートナーがBに連結している、請求項156に記載の組成物。
- 前記特異的結合パートナーがDに連結している、請求項156に記載の組成物。
- 前記対象の分析物が核酸である、請求項156に記載の組成物。
- 前記核酸がDNA又はRNAである、請求項161に記載の組成物。
- 前記対象の分析物がタンパク質である、請求項156に記載の組成物。
- 前記ECL部分が有機溶剤に可溶である、請求項156に記載の組成物。
- 前記ECL部分が水性溶剤に不溶である、請求項156に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項156に記載の組成物。
- B及びDが、ビーズ、ゲル、膜、リポソーム、及びミセルである、請求項156に記載の組成物。
- B及びDが、ポリスチレン、ポリプロピレン、アガロース、アクリルアミド、ニトロセルロース、ナイロン、PVDF、セファロース、セファデックス、ヒアルロン酸、キチン、アシルジェラン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、及びカルボキシメチルキチン、ポリ(ラクチド−co−エチレングリコール)から選択される化合物から独立に構成される、請求項157に記載の組成物。
- 前記固体支持体がビーズである、請求項157に記載の組成物。
- 前記第2の固体支持体が磁化ビーズである、請求項158に記載の組成物。
- 前記第1の固体支持体がポリスチレンビーズである、請求項158に記載の組成物。
- (A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象の核酸分子の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結しており、
Cは対象の核酸分子を含むことがある試料であり、
Dは対象の核酸分子の類似体に連結しているか、又は対象の核酸分子の特異的結合パートナーに連結している磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。
但し、B及びDの1つのみが、対象の核酸分子の類似体に連結し、
Bが対象の核酸分子の類似体に連結している場合には、Dは対象の核酸分子の結合パートナーに連結しており、Bが対象の核酸分子の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象の核酸分子の類似体に連結している]
を含む、試料における対象の核酸分子を検出するための組成物。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項172に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項172に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項174に記載の組成物。
- Bが前記対象の核酸分子の前記特異的結合パートナーに連結し、更に該特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項172に記載の組成物。
- Dが前記対象の核酸分子の前記特異的結合パートナーに連結し、更に該特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項172に記載の組成物。
- 前記対象の核酸分子の類似体、及び前記特異的結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項172に記載の組成物。
- 前記対象の核酸がDNA又はRNAである、請求項172に記載の組成物。
- (A)k、(B)u、(C)、(D)x
[式中、
Aは、電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得るECL部分であり、
BはAを含むポリスチレンビーズであり、Bは対象のタンパク質の類似体に連結するか、又は対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結し、
Cは対象のタンパク質を含むことがある試料であり、
Dは対象のタンパク質の類似体に連結するか、又は対象のタンパク質の特異的結合パートナーに連結する磁性ビーズであり、
k、u、及びxは、各々、1以上の整数である。
但し、B及びDの1つのみが、対象のタンパク質の類似体に連結し、
Bが対象のタンパク質の類似体に連結している場合には、Dは対象のタンパク質の結合パートナーに連結しており、Bが対象のタンパク質の結合パートナーに連結している場合には、Dは対象のタンパク質の類似体に連結している。]
を含む、試料における対象のタンパク質を検出するための組成物。 - 前記ECL部分がオスミウム及びルテニウムから選択される金属イオンを含む、請求項180に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項180に記載の組成物。
- 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2である、請求項182に記載の組成物。
- Bが前記対象のタンパク質の前記特異的結合パートナーに連結し、更に該特異的結合パートナーが抗体又は結合タンパク質である、請求項180に記載の組成物。
- Dが前記対象のタンパク質の前記特異的結合パートナーに連結し、更に該特異的結合パートナーが抗体又は結合タンパク質である、請求項180に記載の組成物。
- 電気化学的エネルギー源に直接曝すことにより電磁放射を繰り返し放射することが引き起こされ得る少なくとも1つのECL部分と、
該ECL部分を含む第1の担体であって、対象の分析物の類似体に連結するか、又は対象の分析物の第1の特異的結合パートナーに連結する、第1の担体と、
対象の分析物の類似体に連結するか、又は対象の分析物の第2の特異的結合パートナーに連結する、第2の担体と
を含む、試料における対象の分析物を検出するためのキット。 - 前記ECL部分が、Ru(bpy)3[B(C6F5)4]2、ルブレン、及び9,10−ジフェニルアントラセンから選択される、請求項186に記載のキット。
- 前記第1及び第2の担体が固体支持体である、請求項186に記載のキット。
- 前記第1の担体がポリスチレンビーズである、請求項186に記載のキット。
- 前記第2の担体が磁性ビーズである、請求項186に記載のキット。
- 前記第1の担体がポリスチレンビーズであり、前記第2の担体が磁性ビーズである、請求項186に記載のキット。
- 前記対象の分析物が核酸である、請求項186に記載のキット。
- 前記対象の分析物の前記第1及び第2の結合パートナーがオリゴヌクレオチドである、請求項192に記載のキット。
- 前記対象の分析物の類似体がオリゴヌクレオチドである、請求項192に記載のキット。
- 前記対象の分析物がタンパク質である、請求項186に記載のキット。
- 前記対象の分析物の前記第1及び第2の結合パートナーが抗体又は特異的結合タンパク質である、請求項195に記載のキット。
- 芳香族炭化水素を含有するポリスチレンビーズを含む組成物。
- 前記芳香族炭化水素がジフェニルアントラセン及びルブレンから選択される、請求項197に記載の組成物。
- 前記ポリスチレンビーズが約7.5×109個のジフェニルアントラセン分子を含む、請求項197に記載の組成物。
- 前記ポリスチレンビーズが約4×108個のルブレン分子を含む、請求項197に記載の組成物。
- 前記タンパク質がC反応性タンパク質である、請求項13、86、108、又は143に記載の方法。
- 前記タンパク質がC反応性タンパク質である、請求項61、79、163、又は180に記載の組成物。
- 前記タンパク質がC反応性タンパク質である、請求項195に記載のキット。
- kが2以上の整数である、請求項1、34、86、101、129、又は143に記載の方法。
- kが2以上の整数である、請求項48、70、79、156、172、又は180に記載の組成物。
- 少なくとも2つのECL部分を更に含む、請求項186に記載のキット。
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---|---|
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012117888A (ja) * | 2010-11-30 | 2012-06-21 | Sysmex Corp | 被検物質の電気化学的検出方法 |
WO2021019732A1 (ja) * | 2019-07-31 | 2021-02-04 | 株式会社日立ハイテク | 生体分子分析方法および生体分子分析装置 |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6312896B1 (en) * | 1998-09-17 | 2001-11-06 | Igen Inaternational, Inc. | Assays for measuring nucleic acid binding proteins and enzyme activities |
AU2005326758B2 (en) | 2004-06-23 | 2011-07-14 | Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and compositions for the detection of biological molecules using a two particle complex |
EP2271938B1 (en) * | 2008-04-11 | 2014-02-26 | Board of Regents of the University of Texas System | Method and apparatus for nanoparticle electrogenerated chemiluminescence amplification |
AU2009244904B2 (en) | 2008-05-08 | 2014-04-17 | Board Of Regents Of The University Of Texas System | Luminescent nanostructured materials for use in electrogenerated chemiluminescence |
CN102183657B (zh) * | 2011-02-24 | 2014-02-05 | 南京基蛋生物科技有限公司 | 一种依赖聚苯乙烯纳米粒大幅度增加化学发光磁酶免疫灵敏度的方法 |
US20150087526A1 (en) * | 2012-01-24 | 2015-03-26 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Peptide identification and sequencing by single-molecule detection of peptides undergoing degradation |
CN102854183A (zh) * | 2012-09-04 | 2013-01-02 | 上海师范大学 | 一种固态电化学发光检测三聚氰胺的方法 |
GB201218555D0 (en) * | 2012-10-16 | 2012-11-28 | Mode Diagnostics Ltd | Immunoassay using electrochemical detection |
US20170059567A1 (en) * | 2013-10-07 | 2017-03-02 | The University Of Utah Research Foundation | Methods and systems for electrochemically detecting or quantifying an analyte |
CN106248659A (zh) * | 2016-09-14 | 2016-12-21 | 燕山大学 | 一种晶相依赖有机半导体微纳电化学发光传感器及其应用 |
CN106596972B (zh) * | 2016-12-16 | 2018-08-10 | 青岛科技大学 | 一种检测力竭运动小鼠心肌连接蛋白43含量的方法 |
CN108152275B (zh) * | 2017-12-27 | 2019-07-19 | 福州大学 | 一种基于电化学发光体系的透明质酸酶检测方法 |
US11307206B2 (en) * | 2018-04-27 | 2022-04-19 | Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin | Functionalized metal-labeled beads for mass cytometry |
CN108827946B (zh) * | 2018-04-30 | 2021-03-02 | 福建师范大学 | 一种共用共反应试剂类型的呕吐毒素比率型电致化学发光免疫传感器及其检测方法 |
CN109651621B (zh) * | 2019-01-08 | 2021-05-14 | 安徽师范大学 | 一种锆基金属有机框架复合材料及其制备方法和应用 |
CN109946289B (zh) * | 2019-04-16 | 2021-06-22 | 济南大学 | 一种基于自发光材料Ru@MOF-5检测雌二醇的无标型电致化学发光传感器的制备方法 |
CN110146692A (zh) * | 2019-05-28 | 2019-08-20 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种基于吖啶酯化学发光、链霉亲和素磁珠-生物素放大反应体系及检测试剂盒 |
CN112649605B (zh) * | 2020-12-14 | 2022-11-01 | 哈尔滨理工大学 | 一种基于NaBiF4上转换纳米粒子的ECL生物传感器 |
CN113267629B (zh) * | 2021-05-13 | 2022-06-24 | 广东优尼德生物科技有限公司 | 一种抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法 |
WO2023084370A1 (en) * | 2021-11-12 | 2023-05-19 | 3M Innovative Properties Company | Solid support comprising ligands suitable for polynucleic acid processing, articles and methods |
WO2023084369A1 (en) * | 2021-11-12 | 2023-05-19 | 3M Innovative Properties Company | Method of processing polynucleic acids |
CN114113051B (zh) * | 2021-12-16 | 2023-06-16 | 南京信息工程大学 | 一种psma电致化学发光传感器的制备方法及应用 |
CN114752374B (zh) * | 2022-04-11 | 2023-02-03 | 北京艾维镝生物技术有限责任公司 | 一种均相化学发光免疫检测技术所用微球组合物的制备方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06300763A (ja) * | 1993-04-14 | 1994-10-28 | Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> | 蛍光免疫測定用蛍光マイクロビーズ及びその製造方法 |
JPH07267972A (ja) * | 1986-04-30 | 1995-10-17 | Igen Inc | エレクトロ化学ルミネセンスアッセイ |
JPH09184841A (ja) * | 1992-07-02 | 1997-07-15 | Becton Dickinson & Co | 異なった検出可能な物質を含む微粒子を用いた免疫検定における信号の強化方法 |
JPH09184842A (ja) * | 1995-12-28 | 1997-07-15 | Hitachi Ltd | 生理活性物質を固定化した導電性磁気ビーズ |
US20040058389A1 (en) * | 2002-09-20 | 2004-03-25 | New Mexico State University Technology Transfer Corporation | Electroactive microspheres and methods |
JP2004361334A (ja) * | 2003-06-06 | 2004-12-24 | Satake Corp | ダイオキシン類の測定方法及び装置 |
JP2005523027A (ja) * | 2002-04-22 | 2005-08-04 | ユニヴァーシティ オヴ フロリダ | 機能化されたナノ粒子及びその使用方法 |
Family Cites Families (46)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5500188A (en) | 1984-03-01 | 1996-03-19 | Molecular Devices Corporation | Device for photoresponsive detection and discrimination |
US5310687A (en) * | 1984-10-31 | 1994-05-10 | Igen, Inc. | Luminescent metal chelate labels and means for detection |
US6271041B1 (en) * | 1986-04-30 | 2001-08-07 | Igen International, Inc. | Electrochemiluminescent reaction utilizing amine-derived reductant |
US6316607B1 (en) | 1986-04-30 | 2001-11-13 | Igen International, Inc. | Electrochemiluminescent assays |
US6881536B1 (en) * | 1986-04-30 | 2005-04-19 | Bioveris Corporation | Particle based electrochemiluminescent assays |
US5935779A (en) * | 1988-11-03 | 1999-08-10 | Igen International Inc. | Methods for improved particle electrochemiluminescence assay |
US5182016A (en) * | 1990-03-22 | 1993-01-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Polymer-coated carbon-clad inorganic oxide particles |
ZA92803B (en) * | 1991-02-06 | 1992-11-25 | Igen Inc | Method and apparatus for magnetic microparticulate based luminescene asay including plurality of magnets |
IL100867A (en) | 1991-02-06 | 1995-12-08 | Igen Inc | Method and device for improved luminescence testing |
US5342774A (en) | 1991-05-23 | 1994-08-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | Nucleotide sequence encoding the tumor rejection antigen precursor, MAGE-1 |
US5336596A (en) * | 1991-12-23 | 1994-08-09 | Tropix, Inc. | Membrane for chemiluminescent blotting applications |
ES2172287T4 (es) | 1992-12-22 | 2003-04-16 | Ludwig Inst Cancer Res | Metodos de deteccion y tratamiento de individuos con celulas anormales que expresan los antigenos peptidicos hla-a2/tirosinasa. |
US5620886A (en) | 1993-03-18 | 1997-04-15 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid sequence coding for a tumor rejection antigen precursor processed to at least one tumor rejection antigen presented by HLA-A2 |
US5571711A (en) | 1993-06-17 | 1996-11-05 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules coding for BAGE tumor rejection antigen precursors |
US5610013A (en) * | 1993-07-22 | 1997-03-11 | Ludwig Institute For Cancer Research | Method for diagnosing a disorder by determining expression of gage tumor rejection antigen precursors |
US5935818A (en) * | 1995-02-24 | 1999-08-10 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecule encoding alternatively spliced prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
EP0746613B1 (en) * | 1994-03-08 | 2006-05-24 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Recombinant humanized anti-fb5 antibodies |
US5589334A (en) * | 1994-06-03 | 1996-12-31 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecule which codes for a tumor rejection antigen precursor which is processed to an antigen presented by HLA-B44, and uses thereof |
US5599889A (en) * | 1994-08-16 | 1997-02-04 | Stoever; Harald D. H. | Method of forming polymer microspheres |
US5830753A (en) | 1994-09-30 | 1998-11-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursor dage and uses thereof. |
CA2162210A1 (en) * | 1994-11-07 | 1996-05-08 | Takumi Kunikiyo | Process to form a coated film |
AU4756296A (en) | 1995-01-06 | 1996-07-24 | Igen, Inc. | Electrogenerated chemiluminescence through enhanced particle luminescence |
US6140045A (en) | 1995-03-10 | 2000-10-31 | Meso Scale Technologies | Multi-array, multi-specific electrochemiluminescence testing |
US5939526A (en) * | 1995-03-21 | 1999-08-17 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated RAGE-1 derived peptides which complex with HLA-B7 molecules and uses thereof |
US6319670B1 (en) * | 1995-05-09 | 2001-11-20 | Meso Scale Technology Llp | Methods and apparatus for improved luminescence assays using microparticles |
US5679519A (en) * | 1995-05-09 | 1997-10-21 | Oprandy; John J. | Multi-label complex for enhanced sensitivity in electrochemiluminescence assay |
US5821122A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | Inserm (Institute Nat'l De La Sante Et De La Recherche . .) | Isolated nucleic acid molecules, peptides which form complexes with MHC molecule HLA-A2 and uses thereof |
ATE358276T1 (de) * | 1995-06-07 | 2007-04-15 | Bioveris Corp | Elektrochemilumineszenz-enzymimmunoassay |
US5792621A (en) | 1995-06-28 | 1998-08-11 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Fiber-optic chemiluminescent biosensors for monitoring aqueous alcohols and other water quality parameters |
US6037124A (en) * | 1996-09-27 | 2000-03-14 | Beckman Coulter, Inc. | Carboxylated polyvinylidene fluoride solid supports for the immobilization of biomolecules and methods of use thereof |
US6548246B1 (en) * | 1997-05-16 | 2003-04-15 | The Regents Of The University Of California | Method and probes for the identification of microbial genes specifically induced during host infection |
US6365346B1 (en) | 1998-02-18 | 2002-04-02 | Dade Behring Inc. | Quantitative determination of nucleic acid amplification products |
US6200531B1 (en) | 1998-05-11 | 2001-03-13 | Igen International, Inc. | Apparatus for carrying out electrochemiluminescence test measurements |
US6312896B1 (en) * | 1998-09-17 | 2001-11-06 | Igen Inaternational, Inc. | Assays for measuring nucleic acid binding proteins and enzyme activities |
AU1219800A (en) * | 1998-10-20 | 2000-05-08 | Ljl Biosystems, Inc. | Improvements in luminescence assays |
US6136268A (en) | 1999-08-17 | 2000-10-24 | Orion Diagnostica | Method for luminescence measurements |
US6248353B1 (en) * | 1999-12-10 | 2001-06-19 | Dade Behring Inc. | Reconstitution of purified membrane proteins into preformed liposomes |
US6548264B1 (en) | 2000-05-17 | 2003-04-15 | University Of Florida | Coated nanoparticles |
US6808939B2 (en) | 2001-06-29 | 2004-10-26 | Igen International, Inc. | ECL labels having improved non-specific binding properties, methods of using and kits containing the same |
EP1436598B1 (en) | 2001-09-10 | 2013-11-27 | Meso Scale Technologies LLC | Assay buffer, compositions containing the same, and methods of using the same |
AU2003217552A1 (en) | 2002-02-19 | 2003-09-09 | Choicepoint Asset Company | Selective extraction of dna from groups of cells |
US7597936B2 (en) | 2002-11-26 | 2009-10-06 | University Of Utah Research Foundation | Method of producing a pigmented composite microporous material |
US7741033B2 (en) | 2003-05-13 | 2010-06-22 | Trustees Of Boston College | Electrocatalytic nucleic acid hybridization detection |
WO2005062982A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Xing-Xiang Li | Signal amplification methods for analyte detection |
WO2005085850A1 (en) * | 2004-02-27 | 2005-09-15 | Tianxin Wang | Methods for multiplexed analyte detection |
AU2005326758B2 (en) * | 2004-06-23 | 2011-07-14 | Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and compositions for the detection of biological molecules using a two particle complex |
-
2005
- 2005-06-23 AU AU2005326758A patent/AU2005326758B2/en active Active
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- 2008-04-08 HK HK08103920.1A patent/HK1114173A1/xx unknown
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2014
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07267972A (ja) * | 1986-04-30 | 1995-10-17 | Igen Inc | エレクトロ化学ルミネセンスアッセイ |
JPH09184841A (ja) * | 1992-07-02 | 1997-07-15 | Becton Dickinson & Co | 異なった検出可能な物質を含む微粒子を用いた免疫検定における信号の強化方法 |
JPH06300763A (ja) * | 1993-04-14 | 1994-10-28 | Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> | 蛍光免疫測定用蛍光マイクロビーズ及びその製造方法 |
JPH09184842A (ja) * | 1995-12-28 | 1997-07-15 | Hitachi Ltd | 生理活性物質を固定化した導電性磁気ビーズ |
JP2005523027A (ja) * | 2002-04-22 | 2005-08-04 | ユニヴァーシティ オヴ フロリダ | 機能化されたナノ粒子及びその使用方法 |
US20040058389A1 (en) * | 2002-09-20 | 2004-03-25 | New Mexico State University Technology Transfer Corporation | Electroactive microspheres and methods |
JP2004361334A (ja) * | 2003-06-06 | 2004-12-24 | Satake Corp | ダイオキシン類の測定方法及び装置 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN7010003283; BARD,A.J. et al.: 'Electrogenerated Chemiluminescence 80. C-Reactive Protein Determination at High Amplification with' Anal.Chem. Vol.76, No.23, 2004, p.7109-7113 * |
JPN7010003284; BARD,A.J. et al.: 'Electrogenerated Chemiluminescence 77 DNA Hybridization Detection at High Amplification with [Ru(bp' Anal.Chem. Vol.76, No.18, 2004, p.5379-5386 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012117888A (ja) * | 2010-11-30 | 2012-06-21 | Sysmex Corp | 被検物質の電気化学的検出方法 |
WO2021019732A1 (ja) * | 2019-07-31 | 2021-02-04 | 株式会社日立ハイテク | 生体分子分析方法および生体分子分析装置 |
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