JP2008283879A5 - - Google Patents

Claims (10)

1. 常温菌由来のアミダーゼ遺伝子が導入された形質転換体を破砕および加熱して得られるアミダーゼ。
2. アミダーゼがα−アミノ酸アミドまたはα−ヒドロキシ酸アミドを立体選択的に加水分解する活性を有する酵素である、請求項１に記載のアミダーゼ。
3. アミダーゼ遺伝子がEnterobacter cloacae由来の遺伝子である、請求項１または２に記載のアミダーゼ。
4. アミダーゼ遺伝子が以下の(a)または(b)のタンパク質をコードする遺伝子である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のアミダーゼ。
   (a) 配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質
   (b) 配列番号１で示されるアミノ酸配列と少なくとも70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつアミダーゼ活性を有するタンパク質
5. 加熱が亜鉛塩の存在下で実施される、請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミダーゼ。
6. 亜鉛塩の濃度が、0.1 mM〜40 mMである請求項５に記載のアミダーゼ。
7. 亜鉛塩が、硫酸亜鉛または塩化亜鉛である、請求項５または６に記載のアミダーゼ。
8. 下記１）から４）の少なくとも１つの理化学的性質を有するアミダーゼ。
   １）SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動分析から算出される分子量が33,000〜35,000Daである。
   ２）ゲル濾過クロマトグラフィー分析においてそのピーク面積の80%以上が130,000Daを越える。
   ３）10 mM亜鉛塩存在、７０℃保温下のアミダーゼ活性の失活が１０％以下である。
   ４）40℃における比活性が、20〜40ユニット／ｍｇタンパク質である。
9. 常温菌由来のアミダーゼ遺伝子が導入された形質転換体を破砕して得られる破砕物を加熱し、可溶性画分を採取することを含む、アミダーゼの調製方法。
10. カルボン酸の製造方法であって、
    (i) 常温菌由来のアミダーゼ遺伝子が導入された形質転換体を破砕し、
    (ii) 得られる破砕物を加熱し、
    (iii) 加熱処理物から可溶性画分を採取してアミダーゼを調製し、および
    (iv) 得られたアミダーゼをアミド化合物と接触させる
    ことを含む、前記方法。