JP2008255054A - エビアレルゲン及び抗エビアレルゲン抗体並びにその利用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明のエビアレルゲンはエビコラーゲン又はそのポリペプチド断片からなる。本発明によれば、新規エビアレルゲンを提供し、これを用いて、抗エビアレルゲン抗体、エビアレルゲン混入検査方法、エビアレルゲン混入検査用試薬、エビアレルゲン感受性測定方法、エビアレルゲン感受性測定用試薬等を提供することができる。
【選択図】なし
Description
Yoneyama K, Ono A. Study of food allergy among university students in Japan. Allergology International 2002; 51: 205-208. 中村 晋、飯倉洋治: 最新食物アレルギー. 永井書店 2004; 241-244. Daul CB, Slattery M, Reese G, et al : Identification of the major brown shrimp(Penaeus aztecus)allergen as the muscle protein tropomyosin. Int Arch Allergy Immunol 1994; 105: 49-55. Yu CJ, Lin YF, Chiang BL, Chow LP. Proteomics and immunological analysis of a novel shrimp allergen, Pen m 2. J Immunol. 2003; 170: 445-453. Hamada Y, Nagasima Y,Shiomi K, et al. Reactivity of IgE in fish-allergic patients to fish muscle collagen.Allergology International 2003; 52: 139-147. Sakaguchi M, Toda M, Ebihara T, et al. IgE antibody to fish gelatin (type I collagen) in patients with fish allergy. J Allergy Clin Immunol. 2000; 106: 579-584.
クルマエビの尾肉より、蛯原、入江の方法(蛯原哲也,入江伸吉:魚類および無脊椎動物コラーゲン細胞学マトリックス研究法(I)コラーゲン技術研修会刊 1998; 52-57.)に従い、以下のようにしてコラーゲンを精製した。
エビアレルギー患者の多くはエビトロポミオシン(TMS)とエビアルギニンキナーゼ(AK)の両方あるいはいずれかに対する特異的IgE抗体を保有する。
製造例1で得られたタンパク質がコラーゲンであることを確認するために、未変性コラーゲンのヘリックス構造に特異的に結合する色素であるSirius-redによる染色を行った。具体的には、製造例1のクルマエビコラーゲン精製物について、コラーゲン同定キットである「Sircol Collagen Assayキット」(商品名、英国Biodye science社製、Northern Ireland)を用いて、Sirius-redによる染色の程度を測定した。また、加熱処理(変性)したものについても同様に測定した。図2にはその結果を示す。
ボタンエビの尾肉より、製造例1と同様にしてコラーゲンを精製した。その結果、クルマエビコラーゲンと同様の特性を有する、分子量約120キロダルトン(kDa)のボタンエビコラーゲンを精製することができた。
エビアレルギー患者(エビCAP RAST陽性23例)の血清中で、エビコラーゲンに対するIgE抗体の発現量が増加しているかどうかを調べる目的で、以下のようにして、間接ELISA法による測定を行った。なお、上記エビアレルギー患者は、エビの摂食で口唇浮腫やじん麻疹、また接触皮膚炎(調理中)などのアレルギーを発症した経験があり、その血清は、市販のアレルゲンIgE抗体検査キット(CAP-RAST)での判定で陽性である。
コラーゲンは様々な生物が保有し、その構造や性質は類似している。また、Sakaguchiらは魚アレルギー患者の魚ゼラチンIgE抗体陽性率は約30%であったと報告している(上記非特許文献6参照。)。
・抑制率(%)=(抑制剤未添加穴のFU?抑制剤添加穴のFU)÷抑制剤未添加穴のFU×100
一般成人175例におけるエビ又はサバのコラーゲンに対するIgE抗体保有状況を調べた。具体的には、各被験者から血清を採取し、試験例3と同様にして、陽性者を検出した。その結果を表3に示す。
Claims (17)
- エビコラーゲン又はそのポリペプチド断片からなることを特徴とするエビアレルゲン。
- 前記エビコラーゲンは、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析による分子量が110〜140キロダルトンである請求項1記載のエビアレルゲン。
- 前記エビコラーゲンは、クルマエビ又はボタンエビ由来である請求項1又は2記載のエビアレルゲン。
- 請求項1〜3のいずれか1つに記載のエビアレルゲンを認識する抗エビアレルゲン抗体。
- 抗血清、IgG画分、ポリクローナル抗体、又はモノクローナル抗体である請求項4記載の抗エビアレルゲン抗体。
- 試料中のエビアレルゲンの混入を検査する方法であって、試料から抽出物を調製し、前記抽出物中のエビコラーゲン又はそのポリペプチド断片の存在の有無を検出することを特徴とするエビアレルゲン混入検査方法。
- 前記試料は、飲食品又はその原材料である請求項6記載のエビアレルゲン混入検査方法。
- 前記エビコラーゲンは、クルマエビ又はボタンエビ由来である請求項6又は7記載のエビアレルゲン混入検査方法。
- 前記抽出物中のエビコラーゲン又はそのポリペプチド断片の存在の有無を検出する手段が、請求項4又は5記載の抗エビアレルゲン抗体を用いた免疫学的検出手段である請求項6〜8のいずれか1つに記載のエビアレルゲン混入検査方法。
- 試料中のエビアレルゲンの混入を検査するために用いられる検査用試薬であって、請求項4又は5記載の抗エビアレルゲン抗体を含むことを特徴とするエビアレルゲン混入検査用試薬。
- 請求項4又は5記載の抗エビアレルゲン抗体を含有する溶液を含む請求項10記載のエビアレルゲン混入検査用試薬。
- 請求項4又は5記載の抗エビアレルゲン抗体を担持した担体を含む請求項10記載のエビアレルゲン混入検査用試薬。
- 被験者の生体試料又はその調製物に、請求項1〜3のいずれか1つに記載のエビアレルゲンを作用させ、前記生体試料又はその調製物に含まれるIgE抗体のうち、前記エビアレルゲンに結合するIgE抗体の量を測定することを特徴とするエビアレルゲン感受性測定方法。
- 被験者のエビアレルゲンに対する感受性を測定するために用いられる測定用試薬であって、請求項1〜3のいずれか1つに記載のエビアレルゲンを含むことを特徴とするエビアレルゲン感受性測定用試薬。
- 請求項1〜3のいずれか1つに記載のエビアレルゲンを含有する溶液を含む請求項14記載のエビアレルゲン感受性測定用試薬。
- 請求項1〜3のいずれか1つに記載のエビアレルゲンを担持した担体を含む請求項14記載のエビアレルゲン感受性測定用試薬。
- 更に、標識抗IgE抗体を含む請求項14〜16のいずれか1つに記載のエビアレルゲン感受性測定用試薬。
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