CN113495139A - 一种宠物特应性体质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种宠物特应性体质的检测方法，该检测方法具体包括以下步骤：步骤一：抽取样本，抽取宠物的血液样本，将血液样本静置一段时间再进行离心，离心后的血液样本出现分层，吸取上层清液作为待检样本，步骤二：混合样本，吸取10ul待检样本至500ul稀释液中，用搅拌器充分混匀一段时间，得到混合溶液，步骤三：滴入加样区，将混合后的样本滴入加样区。本发明所述的一种宠物特应性体质的检测方法，操作简单、方便，半个小时内完成检测，灵敏度高，检测上限广，不受宠物毛发等因素的影响，检测成本低，有利于大范围推广和使用，样本可长期保存，安全可靠，适用于包括犬、猫及超敏反应的各类宠物。
Description
技术领域
本发明涉及免疫胶体金层析检测方法领域，具体涉及一种宠物特应性体质的检测方法。
背景技术
随着经济社会的发展，宠物逐渐走进人们的生活，成为了人们家庭中的重要成员，据不完全统计，中国有近1亿养宠家庭数量，且随着中国城市化进程的不断发展，有养宠意愿的人群比例会进一步增加，本方案具体涉及一种宠物特应性体质的检测方法；
过敏性疾病是临床最常见的一类疾病，主要指IgE抗体介导的I型速发型变态反应，具有特应性体质(过敏体质)的宠物，相较于健康宠物更容易对日常环境中的常见过敏原产生致敏，体内产生相应的特异性IgE抗体，所以过敏原特异性IgE检测是过敏性疾病体外诊断最常用和最有价值的检测方法，但目前尚无针对宠物特应性体质(过敏体质)的快速筛查检测技术。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种宠物特应性体质的检测方法，可以有效解决背景技术中提出的技术问题。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种宠物特应性体质的检测方法，该检测方法具体包括以下步骤：
步骤一：抽取样本，抽取宠物的血液样本，将血液样本静置一段时间再进行离心，离心后的血液样本出现分层，吸取上层清液作为待检样本；
步骤二：混合样本，吸取10ul待检样本至500ul稀释液中，用搅拌器充分混匀一段时间，得到混合溶液；
步骤三：滴入加样区，将混合后的样本滴入加样区；
步骤四：静置观察，静置一段时间后观察检测区的检测结果；
步骤五：结果判断，检测区分为C区和T区，C区为阳性质控区，T区为实验结果区，当C区、T区均出现检测线条，且T区检测线条超过比色基准线时，表明检测结果为阳性；当仅有C区出现检测线条，或C区、T区均出现检测线条，且T区检测线条未超过比色基准线时，表明检测结果为阴性；当C区未出现检测线条时，应重新检测。
作为本发明的进一步方案，所述步骤一中上层清液为血清或者血浆，离心是通过转子高速旋转产生的强大的离心力，加快混合液中不同比重成分的沉降速度，把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
作为本发明的进一步方案，所述步骤二中搅拌器搅拌的时间为20min，所述搅拌器为斜浆式搅拌器，所述搅拌器桨叶直径与高度之比为4：10，桨叶转动的圆周速度为1.5～3m/s，斜桨式搅拌器的两叶相反折转45°或60°。
作为本发明的进一步方案，所述步骤四中检测方法采用免疫胶体金层析技术，以胶体金作为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，所述胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸的作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的静电结合。
作为本发明的进一步方案，所述步骤五中结果判断的方法为把常见的环境几十种过敏原包被在聚苯乙烯检测板上，通过免疫胶体金层析技术检测宠物体内所有针对这些过敏原的抗体，从而判断宠物是否为为特应性体质。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
操作简单、方便，半个小时内完成检测，灵敏度高，检测上限广，不受宠物毛发等因素的影响，检测成本低，有利于大范围推广和使用，样本可长期保存，安全可靠，适用于包括犬、猫及超敏反应的各类宠物。
附图说明
图1为本发明一种宠物特应性体质的检测方法的流程图；
图2为本发明一种宠物特应性体质的检测方法的检测示意图。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
如图1-2所示，一种宠物特应性体质的检测方法，该检测方法具体包括以下步骤：
步骤一：抽取样本，抽取宠物的血液样本，将血液样本静置一段时间再进行离心，离心后的血液样本出现分层，吸取上层清液作为待检样本；
步骤二：混合样本，吸取10ul待检样本至500ul稀释液中，用搅拌器充分混匀一段时间，得到混合溶液；
步骤三：滴入加样区，将混合后的样本滴入加样区；
步骤四：静置观察，静置一段时间后观察检测区的检测结果；
步骤五：结果判断，检测区分为C区和T区，C区为阳性质控区，T区为实验结果区，当C区、T区均出现检测线条，且T区检测线条超过比色基准线时，表明检测结果为阳性；当仅有C区出现检测线条，或C区、T区均出现检测线条，且T区检测线条未超过比色基准线时，表明检测结果为阴性；当C区未出现检测线条时，应重新检测；
步骤一中，上层清液为血清或者血浆，离心是通过转子高速旋转产生的强大的离心力，加快混合液中不同比重成分的沉降速度，把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
步骤二中，搅拌器搅拌的时间为20min，搅拌器为斜浆式搅拌器，搅拌器桨叶直径与高度之比为4：10，桨叶转动的圆周速度为1.5～3m/s，斜桨式搅拌器的两叶相反折转45°或60°。
步骤四中，检测方法采用免疫胶体金层析技术，以胶体金作为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸的作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的静电结合。
步骤五中，结果判断的方法为把常见的环境几十种过敏原包被在聚苯乙烯检测板上，通过免疫胶体金层析技术检测宠物体内所有针对这些过敏原的抗体，从而判断宠物是否为为特应性体质。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (5)
1.一种宠物特应性体质的检测方法，其特征在于：该检测方法具体包括以下步骤：
步骤一：抽取样本，抽取宠物的血液样本，将血液样本静置一段时间再进行离心，离心后的血液样本出现分层，吸取上层清液作为待检样本；
步骤二：混合样本，吸取10ul待检样本至500ul稀释液中，用搅拌器充分混匀一段时间，得到混合溶液；
步骤三：滴入加样区，将混合后的样本滴入加样区；
步骤四：静置观察，静置一段时间后观察检测区的检测结果；
步骤五：结果判断，检测区分为C区和T区，C区为阳性质控区，T区为实验结果区，当C区、T区均出现检测线条，且T区检测线条超过比色基准线时，表明检测结果为阳性；当仅有C区出现检测线条，或C区、T区均出现检测线条，且T区检测线条未超过比色基准线时，表明检测结果为阴性；当C区未出现检测线条时，应重新检测。
2.根据权利要求1所述的一种宠物特应性体质的检测方法，其特征在于：所述步骤一中上层清液为血清或者血浆，离心是通过转子高速旋转产生的强大的离心力，加快混合液中不同比重成分的沉降速度，把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
3.根据权利要求1所述的一种宠物特应性体质的检测方法，其特征在于：所述步骤二中搅拌器搅拌的时间为20min，所述搅拌器为斜浆式搅拌器，所述搅拌器桨叶直径与高度之比为4：10，桨叶转动的圆周速度为1.5～3m/s，斜桨式搅拌器的两叶相反折转45°或60°。
4.根据权利要求1所述的一种宠物特应性体质的检测方法，其特征在于：所述步骤四中检测方法采用免疫胶体金层析技术，以胶体金作为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，所述胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸的作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的静电结合。
5.根据权利要求1所述的一种宠物特应性体质的检测方法，其特征在于：所述步骤五中结果判断的方法为把常见的环境几十种过敏原包被在聚苯乙烯检测板上，通过免疫胶体金层析技术检测宠物体内所有针对这些过敏原的抗体，从而判断宠物是否为为特应性体质。
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