CN105954339A - 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 - Google Patents
一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105954339A CN105954339A CN201610259323.1A CN201610259323A CN105954339A CN 105954339 A CN105954339 A CN 105954339A CN 201610259323 A CN201610259323 A CN 201610259323A CN 105954339 A CN105954339 A CN 105954339A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- ceo
- preparation
- electrode
- detection antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域,提供了一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用。采用CeO2@Cu2O/Au@Pt作为检测抗体标记物制备的电化学免疫传感器具有特异性强,灵敏度高和检出限低等优点,对肝癌肿瘤标志物的检测具有重要的科学意义和应用价值。
Description
技术领域
本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域,提供了一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用。
背景技术
肿瘤的发病率高,生长和转移速度快,对人类的健康有极大的危害。肿瘤标记物是肿瘤细胞产生和释放的以抗原、酶、激素等形式的代谢产物存在于肿瘤细胞内或宿主体液中,其在临床上对于随原发肿瘤的发现,肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断,肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测产生极大的影响,引起人们的广泛关注。
CA15-3、CEA等常见的肿瘤标志物,对于肝癌的诊断都能起到一定的作用。对于肿瘤标记物的检测方法很多,如放射免疫分析法、免疫放射分析法、酶标记免疫分析法、化学免疫发光分析法、时间分辨荧光免疫分析法等,但多数检测方法繁琐,操作复杂,费用昂贵,检出限高,因此,建立一种快速、简便、灵敏的检测方法有重要意义。
夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术,具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低、等优点,在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。而构建电化学免疫传感器的关键有两点:其一是采用简单、快速、有效的方法将抗原抗体等生物分子固定在电极表面;其二是开发传感器的信号放大技术。
发明内容
本发明提供了一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用,实现了对肝癌肿瘤标志物的高灵敏检测。
本发明的目的之一是提供一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法。
本发明的目的之二是将所制备的CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器,用于检测肿瘤标志物。
本发明的技术方案,包括以下步骤。
1. 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨,超纯水清洗干净;
(2)以质量浓度为1%的HAuCl4溶液为底液,在-0.2 V电压下扫描30 s,将金电沉积到电极表面,用超纯水冲洗,晾干;
(3)继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液孵化到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(4)继续将3 µL、质量分数为0.5 ~ 2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,以封闭电极表面上非特异性活性位点,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 80 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag标准溶液到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中干燥;
(6)将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液孵化于电极表面上,置于4℃冰箱中晾干,制得一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器。
2.所述CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备,步骤如下:
(1)CeO2@Cu2O的制备
将8 ~ 12 mL 、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到100mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液,充分搅拌0.5 h;继续将8 ~ 12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中, 55℃下充分搅拌5h;离心分离,所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次;室温下真空干燥12h,制得Cu2O立方纳米晶体;
1 ~ 3 mL、0.855 mol/L的NaCl水溶液与80 mL、0.25 mg/mL Cu2O立方纳米晶体乙醇溶液混合,超声30 min;转移到40℃油浴,逐滴加入18 ~ 22 mL、0.1 mmol/L的 (NH4)2Ce(NO3)6乙醇溶液,反应1~2 h;离心分离,用超纯水和无水乙醇分别洗涤三次,室温下真空干燥12 h,得到CeO2@Cu2O;
(2)NH2-CeO2@Cu2O的制备
0.03 ~0.07 g的CeO2@Cu2O加入到10 mL的无水甲苯中,加入0.2~ 0.4 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷,70℃回流1.5 ~ 2.5 h,离心分离,超纯水洗涤,80℃干燥12 h,得到NH2-CeO2@Cu2O;
(3)Au@Pt核壳纳米粒子的制备
金纳米粒子溶液是用100mL、质量分数为0.01% 的HAuCl4 溶液加热至沸腾,加入2.5mL、浓度为10mg/mL的柠檬酸钠溶液,回流1.5 h,冷却至室温,得到酒红色的金纳米粒子溶液;
75 mL 金纳米粒子溶液与等体积超纯水混合加热到100℃,磁力搅拌下加入7.5 mL、质量分数为1%的H2PtCl6,反应20min,制成Au@Pt核壳纳米粒子;
(4)CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液的制备
将4 ~ 8 mg 的NH2-CeO2@Cu2O加入到25 mLAu@Pt核壳纳米粒子溶液中,振荡24 h,离心分离,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt,分散到2 mL的pH为7.4的磷酸缓冲溶液中,制得CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液;
(5)CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备
在2 mL、2 ~ 4 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液中,加入2 mL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液,4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12h;离心分离后,加入2 mL的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液,4℃下保存备用。
肿瘤标志物的检测,检测步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.1 ~ 8.6磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)用计时电流法对肿瘤标志物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化。
所述肿瘤标志物选自下列之一: CA15-3、CEA。
本发明所用原材料均可在化学试剂公司或生物制药公司购买。
本发明的有益成果
(1)本发明使用了电沉积金作为基底材料,电沉积金具有大的比表面积,以及良好的导电能力,能够很好的固载捕获抗体,并能加速电子的传递,对于实现传感器的高灵敏度以及低检测限具有重要意义。
(2)采用CeO2@Cu2O/Au@Pt作为检测抗体标记物,CeO2、Cu2O、Au和Pt具有良好的导电能力以及对过氧化氢有催化作用,CeO2@Cu2O/Au@Pt实现了信号的多重协同放大,因此提高了传感器的灵敏度,降低了检测限;
(3)一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器对CA15-3的检测,其线性范围0.1pg/mL~80 ng/mL,检测限最低0.03 pg/mL;对CEA进行检测,其线性范围为0.1 pg/mL~50ng/mL,检测限为0.03 pg/mL。表明基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器可以达到准确测定的目的。
具体实施方式
现将本发明通过具体实施方式进一步说明,但不限于此
实施例1一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨,超纯水清洗干净;
(2)以质量浓度为1%的HAuCl4溶液为底液,在-0.2 V电压下扫描30 s,将金电沉积到电极表面,用超纯水冲洗,晾干;
(3)继续将6 µL、8 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液孵化到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(4)继续将3 µL、质量分数为0.5%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,以封闭电极表面上非特异性活性位点,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 80 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag标准溶液到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中干燥;
(6)将6 µL、1 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液孵化于电极表面上,置于4℃冰箱中晾干,制得一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器。
实施例2一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨,超纯水清洗干净;
(2)以质量浓度为1%的HAuCl4溶液为底液,在-0.2 V电压下扫描30 s,将金电沉积到电极表面,用超纯水冲洗,晾干;
(3)继续将6 µL、10 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液孵化到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(4)继续将3 µL、质量分数为1.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,以封闭电极表面上非特异性活性位点,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 80 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag标准溶液到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中干燥;
(6)将6 µL、2 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液孵化于电极表面上,置于4℃冰箱中晾干,制得一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器。
实施例3
一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨,超纯水清洗干净;
(2)以质量浓度为1%的HAuCl4溶液为底液,在-0.2 V电压下扫描30 s,将金电沉积到电极表面,用超纯水冲洗,晾干;
(3)继续将6 µL、12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液孵化到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(4)继续将3 µL、质量分数为2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,以封闭电极表面上非特异性活性位点,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 80 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag标准溶液到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中干燥;
(6)将6 µL、3 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液孵化于电极表面上,置于4℃冰箱中晾干,制得一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器。
实施例4所述CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备,步骤如下:
(1)CeO2@Cu2O的制备
将8 mL 、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到100 mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液,充分搅拌0.5 h;继续将8 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中, 55℃下充分搅拌5 h;离心分离,所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次;室温下真空干燥12 h,制得Cu2O立方纳米晶体;
1 mL、0.855 mol/L的NaCl水溶液与80 mL、0.25 mg/mL Cu2O立方纳米晶体乙醇溶液混合,超声30 min;转移到40℃油浴,逐滴加入18 mL、0.1 mmol/L的 (NH4)2Ce(NO3)6乙醇溶液,反应1 h;离心分离,用超纯水和无水乙醇分别洗涤三次,室温下真空干燥12 h,得到CeO2@Cu2O;
(2)NH2-CeO2@Cu2O的制备
0.03 g的CeO2@Cu2O加入到10 mL的无水甲苯中,加入0.2 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷,70℃回流1.5 h,离心分离,超纯水洗涤,80℃干燥12 h,得到NH2-CeO2@Cu2O;
(3)Au@Pt核壳纳米粒子的制备
金纳米粒子溶液是用100mL、质量分数为0.01% 的HAuCl4 溶液加热至沸腾,加入2.5mL、浓度为10mg/mL的柠檬酸钠溶液,回流1.5h,冷却至室温,得到酒红色的金纳米粒子溶液;
75 mL 金纳米粒子溶液与等体积超纯水混合加热到100℃,磁力搅拌下加入7.5 mL、质量分数为1%的H2PtCl6,反应20 min,制成Au@Pt核壳纳米粒子;
(4)CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液的制备
将4 mg 的NH2-CeO2@Cu2O加入到25 mLAu@Pt核壳纳米粒子溶液中,振荡24 h,离心分离,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt,分散到2 mL的pH为7.4的磷酸缓冲溶液中,制得CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液;
(5)CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备
在2 mL、2 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液中,加入2 mL、8 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液,4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h;离心分离后,加入2 mL的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液,4℃下保存备用。
实施例5所述CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备,其特征在于,步骤如下:
(1)CeO2@Cu2O的制备
将10 mL 、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到100 mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液,充分搅拌0.5 h;继续将10 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中, 55℃下充分搅拌5 h;离心分离,所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次;室温下真空干燥12 h,制得Cu2O立方纳米晶体;
2 mL、0.855 mol/L的NaCl水溶液与80 mL、0.25mg/mL Cu2O立方纳米晶体乙醇溶液混合,超声30 min;转移到40℃油浴,逐滴加入20 mL、0.1 mmol/L的 (NH4)2Ce(NO3)6乙醇溶液,反应1.5 h;离心分离,用超纯水和无水乙醇分别洗涤三次,室温下真空干燥12 h,得到CeO2@Cu2O;
(2)NH2-CeO2@Cu2O的制备
0.05 g的CeO2@Cu2O加入到10mL的无水甲苯中,加入0.3mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷,70℃回流2 h,离心分离,超纯水洗涤,80℃干燥12 h,得到NH2-CeO2@Cu2O;
(3)Au@Pt核壳纳米粒子的制备
金纳米粒子溶液是用100 mL、质量分数为0.01% 的HAuCl4 溶液加热至沸腾,加入2.5mL、浓度为10mg/mL的柠檬酸钠溶液,回流1.5 h,冷却至室温,得到酒红色的金纳米粒子溶液;
75 mL 金纳米粒子溶液与等体积超纯水混合加热到100℃,磁力搅拌下加入7.5 mL、质量分数为1%的H2PtCl6,反应20 min,制成Au@Pt核壳纳米粒子;
(4)CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液的制备
将6 mg 的NH2-CeO2@Cu2O加入到25 mLAu@Pt核壳纳米粒子溶液中,振荡24 h,离心分离,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt,分散到2 mL的pH为7.4的磷酸缓冲溶液中,制得CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液;
(5)CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备
在2 mL、3 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液中,加入2 mL、10 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液,4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h;离心分离后,加入2 mL的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液,4℃下保存备用。
实施例6所述CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备,其特征在于,步骤如下:
(1)CeO2@Cu2O的制备
将12 mL 、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到100 mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液,充分搅拌0.5 h;继续将12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中, 55℃下充分搅拌5 h;离心分离,所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次;室温下真空干燥12 h,制得Cu2O立方纳米晶体;
3 mL、0.855 mol/L的NaCl水溶液与80 mL、0.25 mg/mL Cu2O立方纳米晶体乙醇溶液混合,超声30 min;转移到40℃油浴,逐滴加入22 mL、0.1 mmol/L的 (NH4)2Ce(NO3)6乙醇溶液,反应2 h;离心分离,用超纯水和无水乙醇分别洗涤三次,室温下真空干燥12 h,得到CeO2@Cu2O;
(2)NH2-CeO2@Cu2O的制备
0.07 g的CeO2@Cu2O加入到10 mL的无水甲苯中,加入0.4 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷,70℃回流2.5 h,离心分离,超纯水洗涤,80℃干燥12 h,得到NH2-CeO2@Cu2O;
(3)Au@Pt核壳纳米粒子的制备
金纳米粒子溶液是用100 mL、质量分数为0.01% 的HAuCl4 溶液加热至沸腾,加入2.5mL、浓度为10 mg/mL的柠檬酸钠溶液,回流1.5 h,冷却至室温,得到酒红色的金纳米粒子溶液;
75 mL 金纳米粒子溶液与等体积超纯水混合加热到100℃,磁力搅拌下加入7.5 mL、质量分数为1%的H2PtCl6,反应20min,制成Au@Pt核壳纳米粒子;
(4)CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液的制备
将8 mg 的NH2-CeO2@Cu2O加入到25 mLAu@Pt核壳纳米粒子溶液中,振荡24 h,离心分离,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt,分散到2 mL的pH为7.4的磷酸缓冲溶液中,制得CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液;
(5)CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备
在2 mL、4 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液中,加入2 mL、12 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液,4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h;离心分离后,加入2 mL的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液,4℃下保存备用。
实施例7肿瘤标志物CA15-3的检测
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.1 ~ 8.6磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)用计时电流法对肿瘤标志物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化;
(4)测定样品中CA15-3的线性范围为0.1 pg/mL~80 ng/mL,检测限为0.03 pg/mL。
实施例8肿瘤标志物CEA的检测
按照实施例7的方法对样品中CEA进行检测,其线性范围为0.1pg/mL~50ng/mL,检测限为0.03 pg/mL。
Claims (4)
1.一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨,超纯水清洗干净;
(2)以质量浓度为1%的HAuCl4溶液为底液,在-0.2 V电压下扫描30s,将金电沉积到电极表面,用超纯水冲洗,晾干;
(3)继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液孵化到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(4)继续将3 µL、质量分数为0.5 ~ 2.0%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,以封闭电极表面上非特异性活性位点,超纯水冲洗,4℃冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 80 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag标准溶液到电极表面,超纯水冲洗,4℃冰箱中干燥;
(6)将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液孵化于电极表面上,置于4℃冰箱中晾干,制得一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器。
2.如权利要求1所述的一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法,所述CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备,其特征在于,步骤如下:
(1)CeO2@Cu2O的制备
将8 ~ 12 mL 、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到100mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液,充分搅拌0.5 h;继续将8 ~ 12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中, 55℃下充分搅拌5h;离心分离,所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次;室温下真空干燥12h,制得Cu2O立方纳米晶体;
1 ~ 3 mL、0.855 mol/L的NaCl水溶液与80 mL、0.25 mg/mL Cu2O立方纳米晶体乙醇溶液混合,超声30min;转移到40℃油浴,逐滴加入18 ~ 22 mL、0.1 mmol/L的 (NH4)2Ce(NO3)6乙醇溶液,反应1~2 h;离心分离,用超纯水和无水乙醇分别洗涤三次,室温下真空干燥12h,得到CeO2@Cu2O;
(2)NH2-CeO2@Cu2O的制备
0.03 ~0.07 g的CeO2@Cu2O加入到10 mL的无水甲苯中,加入0.2~ 0.4 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷,70℃回流1.5 ~ 2.5 h,离心分离,超纯水洗涤,80℃干燥12h,得到NH2-CeO2@Cu2O;
(3)Au@Pt核壳纳米粒子的制备
金纳米粒子溶液是用100mL、质量分数为0.01% 的HAuCl4 溶液加热至沸腾,加入2.5mL、浓度为10 mg/mL的柠檬酸钠溶液,回流1.5h,冷却至室温,得到酒红色的金纳米粒子溶液;
75 mL 金纳米粒子溶液与等体积超纯水混合加热到100℃,磁力搅拌下加入7.5 mL、质量分数为1%的H2PtCl6,反应20min,制成Au@Pt核壳纳米粒子;
(4)CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液的制备
将4 ~ 8 mg 的NH2-CeO2@Cu2O加入到25mLAu@Pt核壳纳米粒子溶液中,振荡24h,离心分离,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt,分散到2mL的pH为7.4的磷酸缓冲溶液中,制得CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液;
(5)CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液的制备
在2 mL、2 ~ 4 mg/mL的CeO2@Cu2O/Au@Pt检测抗体标记物溶液中,加入2 mL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液,4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h;离心分离后,加入2 mL的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液,得到CeO2@Cu2O/Au@Pt-Ab2检测抗体孵化物溶液,4℃下保存备用。
3.如权利要求1所述一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法制备的免疫传感器,用于肿瘤标志物的检测,检测步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.1 ~ 8.6磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)用计时电流法对肿瘤标志物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化。
4.如权利要求1、2、3所述的肿瘤标志物,其特征在于,所述肿瘤标志物选自CA15-3或CEA。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610259323.1A CN105954339B (zh) | 2016-04-25 | 2016-04-25 | 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610259323.1A CN105954339B (zh) | 2016-04-25 | 2016-04-25 | 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105954339A true CN105954339A (zh) | 2016-09-21 |
CN105954339B CN105954339B (zh) | 2018-02-23 |
Family
ID=56915836
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610259323.1A Expired - Fee Related CN105954339B (zh) | 2016-04-25 | 2016-04-25 | 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105954339B (zh) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106645351A (zh) * | 2017-01-19 | 2017-05-10 | 济南大学 | 一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器的构建 |
CN108760863A (zh) * | 2018-04-12 | 2018-11-06 | 陕西师范大学 | 一种Au@Pt核壳型超微电极的制备方法及应用 |
CN108918853A (zh) * | 2018-04-08 | 2018-11-30 | 山东理工大学 | 一种Pd@Ag@CeO2标记的免疫传感器的制备方法及应用 |
CN111678962A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-09-18 | 山东理工大学 | 一种黄曲霉毒素电化学传感器的制备方法及应用 |
CN113325179A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-08-31 | 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) | 一种基于Au@Pt酶的免疫层析试纸条及其制备方法 |
CN115201294A (zh) * | 2022-07-12 | 2022-10-18 | 江南大学 | 基于铂包金纳米探针的肿瘤标志物的电化学检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104459132A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-03-25 | 济南大学 | 一种基于金电沉积和Au@Ag/CuO-GS为标记物的胰腺癌免疫传感器的制备方法及应用 |
CN105467132A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-04-06 | 山东理工大学 | 一种基于Cr3+@Au@OMC的免疫传感器的制备方法及应用 |
-
2016
- 2016-04-25 CN CN201610259323.1A patent/CN105954339B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104459132A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-03-25 | 济南大学 | 一种基于金电沉积和Au@Ag/CuO-GS为标记物的胰腺癌免疫传感器的制备方法及应用 |
CN105467132A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-04-06 | 山东理工大学 | 一种基于Cr3+@Au@OMC的免疫传感器的制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (5)
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106645351A (zh) * | 2017-01-19 | 2017-05-10 | 济南大学 | 一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器的构建 |
CN106645351B (zh) * | 2017-01-19 | 2019-01-15 | 济南大学 | 一种基于Au@Ag异质结纳米棒的玉米赤霉烯酮免疫传感器的构建 |
CN108918853A (zh) * | 2018-04-08 | 2018-11-30 | 山东理工大学 | 一种Pd@Ag@CeO2标记的免疫传感器的制备方法及应用 |
CN108918853B (zh) * | 2018-04-08 | 2021-03-12 | 山东理工大学 | 一种Pd@Ag@CeO2标记的免疫传感器的制备方法及应用 |
CN108760863A (zh) * | 2018-04-12 | 2018-11-06 | 陕西师范大学 | 一种Au@Pt核壳型超微电极的制备方法及应用 |
CN111678962A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-09-18 | 山东理工大学 | 一种黄曲霉毒素电化学传感器的制备方法及应用 |
CN111678962B (zh) * | 2020-06-17 | 2022-07-01 | 山东理工大学 | 一种黄曲霉毒素电化学传感器的制备方法及应用 |
CN113325179A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-08-31 | 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) | 一种基于Au@Pt酶的免疫层析试纸条及其制备方法 |
CN113325179B (zh) * | 2021-04-14 | 2024-02-27 | 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) | 一种基于Au@Pt酶的免疫层析试纸条及其制备方法 |
CN115201294A (zh) * | 2022-07-12 | 2022-10-18 | 江南大学 | 基于铂包金纳米探针的肿瘤标志物的电化学检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105954339B (zh) | 2018-02-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105954339B (zh) | 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN103116023B (zh) | 用于检测肿瘤标志物的电化学发光免疫传感器及其制备方法和应用 | |
CN107621493B (zh) | 一种用于重金属铅污染物检测的电化学传感器制备方法 | |
CN104880456B (zh) | 一种基于GO/MWCNTs-COOH/Au@CeO2构建的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106442994B (zh) | 一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106018806A (zh) | 一种基于Au-Fe3O4@Pd-ZIF-8标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN105675697A (zh) | 一种基于纳米探针c60的癌胚抗原的电化学免疫传感器的构建方法 | |
CN104569427B (zh) | 一种基于二氧化锰负载银纳米粒子多壁碳纳米管构建的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN107328930B (zh) | 一种基于双信号响应比率型丝网印刷电极免疫传感器的制备及应用 | |
CN105241939A (zh) | 一种基于金银核壳磁性石墨烯吸附镉离子免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN104122309A (zh) | 一种环糊精-Cu@Ag电化学免疫传感器的制备及应用 | |
CN109613244B (zh) | 一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106066324A (zh) | 一种电致化学发光生物传感器标记物的制备方法及应用 | |
CN107525835B (zh) | 一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN108918853B (zh) | 一种Pd@Ag@CeO2标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106198699A (zh) | 制备两种二抗共轭物及其用于同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原的方法 | |
CN106093396A (zh) | 一种基于Au‑GQD@PtPd的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN105842460A (zh) | 一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法 | |
CN108469461A (zh) | 一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法及应用 | |
CN105158469B (zh) | 一种基于生物素化氨基化Fe3O4与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN108375612B (zh) | 一种复合纳米材料电化学检测甲胎蛋白的方法 | |
CN107271519B (zh) | 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN104297478A (zh) | 一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN104133059B (zh) | 一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN104198563B (zh) | 铅离子负载金磁性多壁碳纳米管传感器的制备方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180223 Termination date: 20190425 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |