CN107271519B - 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用 - Google Patents

一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107271519B
CN107271519B CN201710655558.7A CN201710655558A CN107271519B CN 107271519 B CN107271519 B CN 107271519B CN 201710655558 A CN201710655558 A CN 201710655558A CN 107271519 B CN107271519 B CN 107271519B
Authority
CN
China
Prior art keywords
nanodendrites
carbon nanotube
load
sulfonated carbon
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201710655558.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107271519A (zh
Inventor
李月云
吕慧
高增强
张晓波
冯金慧
董云会
刘青
孔玲
陈志伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong University of Technology
Original Assignee
Shandong University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University of Technology filed Critical Shandong University of Technology
Priority to CN201710655558.7A priority Critical patent/CN107271519B/zh
Publication of CN107271519A publication Critical patent/CN107271519A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107271519B publication Critical patent/CN107271519B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
    • G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
    • G01N27/3277—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction being a redox reaction, e.g. detection by cyclic voltammetry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
    • G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
    • G01N27/3278—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction involving nanosized elements, e.g. nanogaps or nanoparticles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/48—Systems using polarography, i.e. measuring changes in current under a slowly-varying voltage
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57411—Specifically defined cancers of cervix

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Carbon And Carbon Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管作为基底材料，实现了宫颈癌肿瘤标志物CEA、CA125、SCCA的检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低，对宫颈癌的早期检测具有重要的科学意义和应用价值。

Description

一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器 的制备方法及应用
技术领域
本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用。
背景技术
目前宫颈癌已经成为危害女性健康的重要因素。宫颈癌肿瘤标志物的灵敏检测，在临床上对于肿瘤的早期发现，肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断，肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测产生极大的影响，引起人们的广泛关注。
目前电化学免疫传感器已经广泛用于宫颈癌及各种肿瘤标志物的检测，一般可分为有标记和无标记两种，其中无标记型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。
本发明成功构建了一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的无标记型免疫传感器，Rh@Pd双金属为纳米枝晶状，具有良好的水溶性和催化性能，具有更多的结合位点，能有效吸附并固载抗体。磺酸功能化的多壁碳纳米管具有优异的导电性，大的比表面积，良好的稳定性和生物相容性。二者通过物理静电吸附作用相互结合，由于二者的协同作用有助于提高材料的电化学性质，能够更好的对测定信号实现放大，提高肿瘤标志物检测的灵敏度。
发明内容
本发明提供了一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用，实现了对宫颈癌标志物的灵敏检测。
本发明的目的之一是提供一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法。
本发明的目的之二是将所制备的基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器应用于宫颈癌癌标志物的高灵敏、特异性检测。
本发明的技术方案，包括以下步骤。
1. 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，步骤如下：
（1）将直径为3 ~ 5 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
（2）取6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；
（3）继续将6 µL、8 ~ 10 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；
（4）继续将4 µL、0.8 ~ 1.2 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
（5）滴加6 µL、25 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干，制得一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器。
2.所述Rh@Pd纳米枝晶的制备，步骤如下：
取2 mL、10 ~ 20 mmol/L的Na2PdCl4与0.5 mL、10 ~ 20 mmol/L的RhCl3·3H2O混合，置于50 mL圆底烧瓶中，加入20 mg聚醚F127，超声溶解后，依次加入40 μL，6 mol/L的盐酸，5 mL、0.5 mol/L的抗坏血酸，继续超声至溶液变为黑色，将圆底烧瓶放入45 °C水浴中，在强磁力搅拌下加热5.0 ~ 6.0 h，分别用超纯水和无水乙醇离心洗涤，将离心后的产物于40 °C下烘干12 h，制得Rh@Pd 纳米枝晶。
3.所述磺化碳纳米管的制备，步骤如下：
称取2 ~3 g多壁碳纳米管，在60 °C下真空炉中干燥24 h；称取1 ~1.5 g烘干后的多壁碳纳米管置于圆底烧瓶中，依次缓慢加入10 mL浓硫酸，30 mL浓硝酸，超声10 min至溶液分散均匀，于120 °C油浴中，搅拌回流10 ~ 30 min，自然冷却至室温，用超纯水洗涤至中性，60 °C下烘干10 ~ 15 h，制得磺化碳纳米管；
4.所述负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液的制备，步骤如下：
称取10 mg上述制备的磺化碳纳米管，分散在10 ~ 20 mL、1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液中，室温下连续搅拌15 h，离心分离，35 °C下真空干燥箱中烘干，制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管；
称取5 ~15mg的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管超声分散至5mLpH7.2的PBS缓冲溶液中制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液；
所述1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液是将10 mg Rh@Pd纳米枝晶分散至10mL超纯水中制得。
5.肿瘤标志物的检测，检测步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL，含10 mmol/L的铁氰化钾的pH=5.8 ~8.0磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
（2）用差分脉冲伏安法对分析物进行检测，初始电位为0 V，终止电位为0.5 V，脉冲振幅为50 mV，脉冲宽度为50 ms，脉冲周期为50 ms，记录电流变化；
（3）记录不同浓度下的肿瘤标志物抗原所对应的电流峰值；
（4）利用工作曲线法，得到待测样品中肿瘤标志物抗原的浓度。
上述肿瘤标志物选自下列之一：CEA、CA125、SCCA。
本发明所用原材料均可在化学试剂公司或生物制药公司购买。
本发明的有益成果
（1）采用负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管作为基底材料。Rh@Pd双金属为纳米枝晶状，具有良好的水溶性和催化性能，纳米枝晶状的形貌，使其具有更多的结合位点，能有效吸附并固载抗体。磺酸功能化的多壁碳纳米管具有优异的导电性，大的比表面积，良好的稳定性和生物相容性。二者通过物理静电吸附作用相互结合，由于二者的协同作用有助于提高材料的电化学性质，实现了放大电化学信号的作用，从而提高了传感器的灵敏度，降低了检测限。
（2）一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器对肿瘤标志物的检测，对CEA检测的线性范围25 fg/mL ~ 100 ng/mL，检测限为8.3 fg/mL；对CA125其检测的线性范围100 fg/mL ~ 100 ng/mL，检测限为33.3 fg/mL；对SCCA检测的线性范围25 fg/mL ~ 100 ng/mL，检测限为8.3 fg/mL；表明一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器可以达到准确测定的目的。
具体实施方式
现将本发明通过具体实施方式进一步说明，但不限于此。
实施例1一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，步骤如下：
（1）将直径为3 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
（2）取6 µL、1.0 mg/mL的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；
（3）继续将6 µL、8 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；
（4）继续将4 µL、0.8 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
（5）滴加6 µL、25 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干，制得一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器。
实施例2一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，步骤如下：
（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
（2）取6 µL、2.0 mg/mL的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；
（3）继续将6 µL、9 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；
（4）继续将4 µL、1.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
（5）滴加6 µL、25 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干，制得一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器。
实施例3一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，步骤如下：
（1）将直径为5 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
（2）取6 µL、3.0 mg/mL的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；
（3）继续将6 µL、10 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；
（4）继续将4 µL、1.2 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
（5）滴加6 µL、25 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干，制得一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器。
实施例4 所述Rh@Pd纳米枝晶的制备，步骤如下：
取2 mL、10 mmol/L的Na2PdCl4与0.5 mL、10 mmol/L的RhCl3·3H2O混合，置于50mL圆底烧瓶中，加入20 mg聚醚F127，超声溶解后，依次加入40 μL，6 mol/L的盐酸，5 mL、0.5 mol/L的抗坏血酸，继续超声至溶液变为黑色，将圆底烧瓶放入45 °C水浴中，在强磁力搅拌下加热5.0 h，分别用超纯水和无水乙醇离心洗涤，将离心后的产物于40 °C下烘干12h，制得Rh@Pd 纳米枝晶。
实施例5所述Rh@Pd纳米枝晶的制备，步骤如下：
取2 mL、15 mmol/L的Na2PdCl4与0.5 mL、15 mmol/L的RhCl3·3H2O混合，置于50mL圆底烧瓶中，加入20 mg聚醚F127，超声溶解后，依次加入40 μL，6 mol/L的盐酸，5 mL、0.5 mol/L的抗坏血酸，继续超声至溶液变为黑色，将圆底烧瓶放入45 °C水浴中，在强磁力搅拌下加热6.0 h，分别用超纯水和无水乙醇离心洗涤，将离心后的产物于40 °C下烘干12h，制得Rh@Pd 纳米枝晶。
实施例6所述Rh@Pd纳米枝晶的制备，步骤如下：
取2 mL、20 mmol/L的Na2PdCl4与0.5 mL、20 mmol/L的RhCl3·3H2O混合，置于50mL圆底烧瓶中，加入20 mg聚醚F127，超声溶解后，依次加入40 μL，6 mol/L的盐酸，5 mL、0.5 mol/L的抗坏血酸，继续超声至溶液变为黑色，将圆底烧瓶放入45 °C水浴中，在强磁力搅拌下加热6.0 h，分别用超纯水和无水乙醇离心洗涤，将离心后的产物于40 °C下烘干12h，制得Rh@Pd 纳米枝晶。
实施例7 所述磺化碳纳米管的制备，步骤如下：
称取2 g多壁碳纳米管，在60 °C下真空炉中干燥24 h；称取1 g烘干后的多壁碳纳米管置于圆底烧瓶中，依次缓慢加入10 mL浓硫酸，30 mL浓硝酸，超声10 min至溶液分散均匀，于120 °C油浴中，搅拌回流10 min，自然冷却至室温，用超纯水洗涤至中性，60 °C下烘干10 h，制得磺化碳纳米管。
实施例8所述磺化碳纳米管的制备，步骤如下：
称取2.5 g多壁碳纳米管，在60 °C下真空炉中干燥24 h；称取1.2 g烘干后的多壁碳纳米管置于圆底烧瓶中，依次缓慢加入10 mL浓硫酸，30 mL浓硝酸，超声10 min至溶液分散均匀，于120 °C油浴中，搅拌回流20 min，自然冷却至室温，用超纯水洗涤至中性，60 °C下烘干12 h，制得磺化碳纳米管。
实施例9所述磺化碳纳米管的制备，步骤如下：
称取3 g多壁碳纳米管，在60 °C下真空炉中干燥24 h；称取1.5 g烘干后的多壁碳纳米管置于圆底烧瓶中，依次缓慢加入10 mL浓硫酸，30 mL浓硝酸，超声10 min至溶液分散均匀，于120 °C油浴中，搅拌回流30 min，自然冷却至室温，用超纯水洗涤至中性，60 °C下烘干15 h，制得磺化碳纳米管。
实施例10所述负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液的制备，步骤如下：
称取10 mg上述制备的磺化碳纳米管，分散在10 mL、1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液中，室温下连续搅拌15 h，离心分离，35 °C下真空干燥箱中烘干，制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管；
称取5 mg的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管超声分散至5 mLpH7.2的PBS缓冲溶液中制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液；
所述1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液是将10 mg Rh@Pd纳米枝晶分散至10 mL超纯水中制得。
实施例11所述负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液的制备，步骤如下：
称取10 mg上述制备的磺化碳纳米管，分散在15 mL、1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液中，室温下连续搅拌15 h，离心分离，35 °C下真空干燥箱中烘干，制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管；
称取10 mg的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管超声分散至5 mLpH7.2的PBS缓冲溶液中制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液；
所述1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液是将10 mg Rh@Pd纳米枝晶分散至10 mL超纯水中制得。
实施例12所述负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液的制备，步骤如下：
称取10 mg上述制备的磺化碳纳米管，分散在20 mL、1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液中，室温下连续搅拌15 h，离心分离，35 °C下真空干燥箱中烘干，制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管；
称取15 mg的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管超声分散至5 mLpH7.2的PBS缓冲溶液中制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液；
所述1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液是将10 mg Rh@Pd纳米枝晶分散至10 mL超纯水中制得。
实施例13 肿瘤标志物CEA的检测，检测步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL，含10 mmol/L的铁氰化钾的pH=5.8 ~8.0磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
（2）用差分脉冲伏安法对分析物进行检测，初始电位为0 V，终止电位为0.5 V，脉冲振幅为50 mV，脉冲宽度为50 ms，脉冲周期为50 ms，记录电流变化；
（3）记录不同浓度下的肿瘤标志物抗原所对应的电流峰值；
（4）利用工作曲线法，测定样品中CEA的线性范围为25 fg/mL ~ 100 ng/mL，检测限为8.3 fg/mL。
实施例14肿瘤标志物SCCA的检测
按照实施例13的方法对样品中SCCA进行检测，其线性范围为25 fg/mL ~ 100 ng/mL，检测限为8.3 fg/mL。
实施例15肿瘤标志物CA125的检测
按照实施例13的方法对样品中CA125进行检测，其线性范围100 fg/mL ~ 100 ng/mL，检测限为33.3 fg/mL。

Claims (6)

1.一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将直径为3 ~ 5 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
（2）取6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液滴涂到电极表面，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；
（3）继续将6 µL、8 ~ 10 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；
（4）继续将4 µL、0.8 ~ 1.2 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
（5）滴加6 µL、25fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干，制得一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器。
2.如权利要求1所述的一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述Rh@Pd纳米枝晶的制备，步骤如下：
取2 mL、10 ~ 20 mmol/L的Na2PdCl4与0.5 mL、10 ~ 20 mmol/L的RhCl3·3H2O混合，置于50 mL圆底烧瓶中，加入20 mg聚醚F127，超声溶解后，依次加入40 μL，6 mol/L的盐酸，5mL、0.5 mol/L的抗坏血酸，继续超声至溶液变为黑色，将圆底烧瓶放入45 °C水浴中，在强磁力搅拌下加热5.0 ~ 6.0 h，分别用超纯水和无水乙醇离心洗涤，将离心后的产物于40 °C下烘干12 h，制得Rh@Pd 纳米枝晶。
3.如权利要求1所述的一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述磺化碳纳米管的制备，步骤如下：
称取2 ~3 g多壁碳纳米管，在60 °C下真空炉中干燥24 h；称取1 ~1.5 g烘干后的多壁碳纳米管置于圆底烧瓶中，依次缓慢加入10 mL浓硫酸，30 mL浓硝酸，超声10 min至溶液分散均匀，于120 °C油浴中，搅拌回流10 ~ 30 min，自然冷却至室温，用超纯水洗涤至中性，60 °C下烘干10 ~ 15 h，制得磺化碳纳米管；
如权利要求1所述的一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液的制备，步骤如下：
称取10 mg上述制备的磺化碳纳米管，分散在10 ~ 20 mL、1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液中，室温下连续搅拌15 h，离心分离，35 °C下真空干燥箱中烘干，制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管；
称取5 ~15 mg的负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管超声分散至5 mLpH7.2的PBS缓冲溶液中制得负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管分散液；
所述1 mg/mL的Rh@Pd纳米枝晶分散液是将10 mg Rh@Pd纳米枝晶分散至10 mL超纯水中制得。
4.如权利要求1~3任一项所述的一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述肿瘤标志物选自下列之一：CEA、CA125、SCCA。
5.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器，用于肿瘤标志物的检测，检测步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL，含10 mmol/L的铁氰化钾的pH=5.8 ~ 8.0磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
（2）用差分脉冲伏安法对分析物进行检测，初始电位为0 V，终止电位为0.5 V，脉冲振幅为50 mV，脉冲宽度为50 ms，脉冲周期为50 ms，记录电流变化；
（3）记录不同浓度下的肿瘤标志物抗原所对应的电流峰值；
（4）利用工作曲线法，得到待测样品中肿瘤标志物抗原的浓度。
6.如权利要求5所述的一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器，其特征在于，所述肿瘤标志物选自下列之一：CEA、CA125、SCCA。
CN201710655558.7A 2017-08-03 2017-08-03 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用 Expired - Fee Related CN107271519B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710655558.7A CN107271519B (zh) 2017-08-03 2017-08-03 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710655558.7A CN107271519B (zh) 2017-08-03 2017-08-03 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107271519A CN107271519A (zh) 2017-10-20
CN107271519B true CN107271519B (zh) 2019-08-20

Family

ID=60074840

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710655558.7A Expired - Fee Related CN107271519B (zh) 2017-08-03 2017-08-03 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107271519B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108709996B (zh) * 2018-05-17 2020-11-06 山东理工大学 一种金钯复合纳米酶免疫传感器的制备方法及应用
CN108982629B (zh) * 2018-07-20 2020-02-14 山东理工大学 一种利用双检测方法相互验证的电流型免疫传感器的制备方法及应用
CN109211995B (zh) * 2018-08-30 2020-08-18 华南理工大学 磺化碳纳米管复合辣根过氧化物酶的过氧化氢生物传感器及其制备与应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102095769A (zh) * 2010-11-29 2011-06-15 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 碳纳米管气敏传感器及其制备方法
CN103397387A (zh) * 2013-07-05 2013-11-20 浙江大学 一种铑钯合金纳米枝晶的制备方法及其制备的铑钯合金纳米枝晶
CN103435829A (zh) * 2013-07-24 2013-12-11 烟台绿水赋膜材料有限公司 一种基于邻苯二酚衍生物的纳米功能化表面修饰方法
WO2015178994A2 (en) * 2014-03-02 2015-11-26 Massachusetts Institute Of Technology Gas sensors based upon metal carbon complexes
CN105319254A (zh) * 2015-11-26 2016-02-10 济南大学 一种基于Pt/PdCu-三维石墨烯标记的电化学免疫传感器的制备及应用
CN105572356A (zh) * 2016-02-25 2016-05-11 山东理工大学 一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102095769A (zh) * 2010-11-29 2011-06-15 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 碳纳米管气敏传感器及其制备方法
CN103397387A (zh) * 2013-07-05 2013-11-20 浙江大学 一种铑钯合金纳米枝晶的制备方法及其制备的铑钯合金纳米枝晶
CN103435829A (zh) * 2013-07-24 2013-12-11 烟台绿水赋膜材料有限公司 一种基于邻苯二酚衍生物的纳米功能化表面修饰方法
WO2015178994A2 (en) * 2014-03-02 2015-11-26 Massachusetts Institute Of Technology Gas sensors based upon metal carbon complexes
CN105319254A (zh) * 2015-11-26 2016-02-10 济南大学 一种基于Pt/PdCu-三维石墨烯标记的电化学免疫传感器的制备及应用
CN105572356A (zh) * 2016-02-25 2016-05-11 山东理工大学 一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107271519A (zh) 2017-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Li et al. Simultaneous electrochemical immunoassay of three liver cancer biomarkers using distinguishable redox probes as signal tags and gold nanoparticles coated carbon nanotubes as signal enhancers
CN109991207B (zh) 一种用于检测酪氨酸酶的三明治结构的sers传感器及其制备和检测方法
CN106442994B (zh) 一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN105319254B (zh) 一种基于Pt/PdCu‑三维石墨烯标记的电化学免疫传感器的制备及应用
CN104122309B (zh) 一种环糊精-Cu@Ag电化学免疫传感器的制备
CN114235907B (zh) 用于非小细胞肺癌cyfra21-1检测的电化学发光免疫传感器及检测方法
CN103116023A (zh) 用于检测肿瘤标志物的电化学发光免疫传感器及其制备方法和应用
CN107271519B (zh) 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用
CN104880456A (zh) 一种基于GO/MWCNTs-COOH/Au@CeO2构建的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用
CN104297480A (zh) 一种前列腺特异性抗原夹心型免疫传感器制备方法及应用
CN106018806B (zh) 一种基于Au‑Fe3O4@Pd‑ZIF‑8标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用
CN105954339A (zh) 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用
CN107328930B (zh) 一种基于双信号响应比率型丝网印刷电极免疫传感器的制备及应用
CN108896638B (zh) 一种基于二氧化钛掺杂石墨烯负载海参状金钯核壳纳米粒子的免疫传感器的制备方法及应用
CN109613244A (zh) 一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用
CN109342745A (zh) 一种基于PdCu@GO的夹心型电化学免疫传感器的构建方法及应用
CN109738496A (zh) 一种用于检测单核细胞趋化蛋白-1新型电化学生物传感器制备方法
CN104931698A (zh) 一种基于NP-NiGd@Au的胃癌标志物金纳米簇电致化学发光传感器的制备方法及应用
CN106093396A (zh) 一种基于Au‑GQD@PtPd的免疫传感器的制备方法及应用
CN104297478B (zh) 一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法及应用
Wang et al. Facile fabrication of an ultrasensitive sandwich-type electrochemical immunosensor for the quantitative detection of alpha fetoprotein using multifunctional mesoporous silica as platform and label for signal amplification
CN105158469B (zh) 一种基于生物素化氨基化Fe3O4与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法及应用
CN109709189A (zh) 一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法
CN104133059B (zh) 一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN106770530B (zh) 一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20190820

Termination date: 20200803

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee