JP2008169143A - テアニン含有神経細胞新生促進組成物及び飲食物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】テアニンを有効成分とする神経細胞新生促進組成物、具体的には、テアニンを有効成分として神経細胞への分化能を増強することを特徴とする神経細胞新生促進組成物や、テアニンを有効成分としてアストログリア細胞への分化能を抑制することを特徴とする神経細胞新生促進組成物や、テアニンを有効成分として神経系前駆細胞の増殖能を向上させることを特徴とする神経細胞新生促進組成物や、かかる神経細胞新生促進組成物を含有する飲食品を提供する。
【選択図】 図2
Description
1. テアニンを有効成分とする神経細胞新生促進組成物。
2. 神経細胞への分化能を増強することを特徴とする上記1記載の神経細胞新生促進組成物。
3. アストログリア細胞への分化能を抑制することを特徴とする上記1又は2記載の神経細胞新生促進組成物。
4. 神経系前駆細胞の増殖能を向上させることを特徴とする上記1〜3のいずれか記載の神経細胞新生促進組成物。
5. 上記1〜4のいずれか記載の神経細胞新生促進組成物を配合することを特徴とする飲食物。
6. 上記1〜4のいずれか記載の神経細胞新生促進組成物を配合し、脳機能低下抑制、老化防止、運動機能障害予防及び/又は言語障害予防のために用いられるものである旨の表示を付した食品又は飲料。
に関する。
)、L−グルタミン酸−γ−メチルアミド、D−グルタミン酸−γ−エチルアミド(D−テアニン )、D−グルタミン酸−γ−メチルアミド等のL−またはD−グルタミン酸−γ−アルキルアミド、L−またはD−グルタミン酸−γ−アルキルアミドを基本構造に含む誘導体(例えばL−またはD−グルタミン酸−γ−アルキルアミドの配糖体など)からなる群から選ばれた1種類の化合物又は2種類以上の化合物からなる混合物を用いることができる。中でも、L−テアニンは、天然物から取得可能であるばかりか、食品添加物として認められており、入手の容易さ及び安全性などからも特に好ましい。
神経幹細胞は、神経系前駆細胞を経て神経細胞に分化されるか、グリア前駆細胞を経てアストロサイト又はオリゴデンドロサイトに分化する。胎児の神経幹細胞は約50%の確率で神経細胞又はグリア細胞に分化するが、成人の神経幹細胞は、全てがグリア細胞に分化する。グリア細胞への分化を抑制して、神経系前駆細胞の増殖能を上昇させ、さらに神経細胞への分化を促進する成分があれば、神経細胞新生による老化予防作用や中枢神経系に関する疾病の予防や治療が期待できる。このことから、ラットの脳神経細胞にテアニンを作用させることにより神経細胞新生を評価した。
2−1.神経系前駆細胞の培養及び分化能の確認
胎児18日齢ラット胎児脳から大脳皮質を切り出した後、酵素処理及びPercoll密度勾配遠心分離法により下層フラクションを画分した。この下層フラクションを、20ng/mLのbFGF又は10ng/mLのEGFを添加した条件下で12日間培養することにより、神経塊Neurosphereを得た。前記神経塊を4%のパラホルムアルデヒドで固定後、神経系前駆細胞のマーカータンパク質であるnestin、神経細胞マーカータンパク質であるMAP−2、及びアストログリア細胞マーカータンパク質であるGFAPの発現量を、免疫細胞化学法によりそれぞれ調べた結果、神経塊のほとんど全てがnestin陽性であったのに対して、MAP−2陽性細胞およびGFAP陽性細胞は全く検出されないことを確認した。このことから、得られた神経塊Neurosphereは、神経系前駆細胞から成るものであって、神経細胞やアストログリア細胞を含むものではないことがわかった。
テアニンの作用については、1〜100μMのテアニン添加条件下で神経系前駆細胞を12日間培養した後、細胞を一部回収して細胞増殖能を評価した。100μMのテアニン存在下で形成された神経塊をテアニン非添加条件下にさらに6日間培養した後、18日目に細胞を回収してウエスタンブロット法により、神経細胞とアストログリア細胞の各マーカータンパク質を定量的に測定した。このときに、神経塊培養液から増殖因子のbFGFやEGFを除去するだけでなく、神経細胞分化を促進する分化誘導因子ATRA 100ng/mL、又はアストログリア細胞分化を促進する分化誘導因子CNTF 20ng/mLを添加し、それぞれ添加条件下に12日目から6日間細胞培養を継続後、細胞を回収してウエスタンブロット法により解析を行った。
細胞増殖能の測定については、3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-
dimethyltetrazolium bromide(MTT)還元能の定量化により行った。培養12日目の神経塊について、0.5mg/mLのMTTを含むHepes Krebs-Ringer緩衝液に培養液を交換してから、CO2インキュベーター内で37℃、1時間インキュベーション後、99.5%イソプロパノールと0.04MのHClの混液で可溶化した。生成したMTTホルマザン量は、マイクロプレートリーダーを用いた550nm吸光度測定により定量化した。各試験は全てトリプルケイトで行った。得られた吸光度の値をもとに対照群に対するパーセントで算出し、その結果を平均値および標準誤差で表示した。なお、MTT法とは生細胞数の測定に用いる方法であり、MTTが細胞内のミトコンドリアの脱水素酵素の基質となって、生存能の高い細胞ほど多くのMTTが還元される性質を利用するものである。
3−1.神経系前駆細胞の増殖促進能
テアニン1〜100μM存在下に12日間神経塊を培養すると、テアニン含有量の多少に関係なく、非添加群と比較して有意なMTT還元能が観察された(図1)。特に、100μMテアニン添加条件下で神経塊を培養した場合のMTT還元能は、テアニン非添加群で神経塊を培養した場合のMTT還元能と比較して、約2倍程度という顕著な還元能が観察された。このことから、テアニンは神経系前駆細胞の増殖能力を増強することがわかった。
増殖能に対する効果の最も強かったテアニン100μMの存在下において12日間神経塊を培養した後、培養液からテアニンとbFGFを除去してさらに6日間培養した。このようにして合計18日間培養した細胞について、神経細胞マーカータンパク質であるMAP2発現量を検討したところ、事前にテアニン存在下で培養した神経塊では、テアニン非存在下で培養した神経塊と比較して、自発的分化条件下では50%以上多いMAP2が発現することが明らかとなった(図2のCont.)。
同様に、テアニン100μMの存在下において12日間神経塊を培養した後、培養液からテアニンとbFGFを除去してさらに6日間培養した。合計18日間培養した細胞について、アストログリア細胞マーカータンパク質であるGFAP発現量を調べたところ、事前にテアニン存在下で培養した神経塊では、テアニン非存在下で培養した神経塊と比較して、自発的な分化条件下ではGFAP発現量が有意に低下することが明らかとなった(図3のCont.)。
以上の結果は、緑茶成分であるテアニンが、神経系前駆細胞の増殖能を上昇させるだけでなく、神経細胞への分化を促進すると同時にアストログリア細胞への分化を抑制することを示している。この事実は、テアニンが上述用途の他に下記用途に用いることが可能である。
1.胎児期及び乳幼児期等の発達過程にある脳の機能制御剤
2.老化に伴う神経細胞死、アルツハイマー病やパーキンソン病など成熟脳における神経変性疾患発病後の神経細胞新生及び神経細胞新生促進
3.脳障害に伴う神経細胞死あるいは神経細胞脱落に対して、神経細胞新生及び神経細胞新生促進による脳機能改善
4.強烈なストレス付加に伴う神経細胞新生抑制剤あるいは脱落の予防
以上のように、テアニンを利用した予防医学、神経再生医療への臨床的応用、飲料食品への応用が期待できる。
Claims (6)
- テアニンを有効成分とする神経細胞新生促進組成物。
- 神経細胞への分化能を増強することを特徴とする請求項1記載の神経細胞新生促進組成物。
- アストログリア細胞への分化能を抑制することを特徴とする請求項1又は2記載の神経細胞新生促進組成物。
- 神経系前駆細胞の増殖能を向上させることを特徴とする請求項1〜3のいずれか記載の神経細胞新生促進組成物。
- 請求項1〜4のいずれか記載の神経細胞新生促進組成物を配合することを特徴とする飲食物。
- 請求項1〜4のいずれか記載の神経細胞新生促進組成物を配合し、脳機能低下抑制、老化防止、運動機能障害予防及び/又は言語障害予防のために用いられるものである旨の表示を付した食品又は飲料。
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- 2007-01-11 JP JP2007003314A patent/JP2008169143A/ja active Pending
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