JP2007526443A - ラテラルフローアッセイの基準としての天然分析物 - Google Patents
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Abstract
Description
潜在的妨害を補正するための基準ラインを用いた尿中hCGの定量検出
本実施例は、試料中の溶液遊離状態のhCGおよび標識モノクローナル抗ベータhCG抗体の結合に対する潜在的妨害の補正を可能にする固定化hCGを含有する基準ラインを用いたhCGの定量検出を実証する。
様々な亜成分を接着プラスチック積層板に集合させることによって試薬カードを調製し、次にディップスティック形式またはカセット形式のどちらかで使用するために様々な幅に切って試薬ストリップにする。ディップスティック形式の例は、5mm幅のストリップであるApplied Biotech, Inc.のSureStrip(商標)hCG妊娠テスト、カタログ#6007である。Applied Biotech, Inc.がこれもまた製造しているClinitest(登録商標)hCG妊娠テストはプラスチックカセットのケースに入った8mm幅のテストストリップを含んでいる(Bayer Corporation、US D456,082S)。
金ゾル溶液(40nm径粒子に対し4.0の520nmでの吸光度)1mLあたり(リン酸緩衝生理食塩水、pH7.4に溶かした)マウス抗hCG0.048mgを含有する溶液を1:10に希釈した液に結合体パッド(長さ7mm)を浸し、乾燥させる。ヤギ抗hCG(1.5mg/mLリン酸緩衝生理食塩水、pH7.4)でニトロセルロースのテストラインの位置に線を引く。基準領域について、25mIU/mLのhCGテスト溶液200uLの適用と等しい基準ライン強度を生じるであろう濃度で精製hCG(リン酸緩衝生理食塩水、pH7.4に溶解)で線を引く。さらに、リン酸緩衝生理食塩水、pH7.4に溶解した2.0mg/mLのヤギ抗マウスIgGで対照領域に線を引く。調製したマトリックスを次に乾燥させる。
hCGの結合動態に及ぼす比重の作用を評価するために、hCG原液を男性プール尿に加え、低(1.006)、中(1.014)および高(1.024)比重尿に溶けた20mIU/mLのhCGの被験溶液を作った。組み立てた5mm幅のストリップ(5回の繰り返し)を尿試料に室温で15秒間浸し(ディップスティック形式)、5分間のアッセイ顕色時間にわたり15秒ごとにClinitek Status(登録商標)計器を用いて生じたピーク振幅(相対強度)を測定、記録した。結果を図2に示す。
比重がテストラインの結合強度に及ぼす影響を確認するために、男性27人および妊娠していない女性11人の尿試料にhCG原液を加え、25mIU/mLのhCGを含有する試料を作った。個別の尿の比重の測定をTSメータで行った。簡潔には、添加後の尿200uLをカセットテストに加えた。投入の5分後にテストライン強度を自動的に読み取るClinitek Status(登録商標)計器に装置を導入した。二つの試薬カードのロットのそれぞれで測定する3台の異なるClinitek Status(登録商標)計器で各試料をアッセイした。この混合(男性および女性の添加尿試料)研究の結果を95%信頼区間を表す誤差の棒線と共に図3に示す。
Claims (23)
- 液体試料中の分析物の存在を検出するためのラテラルフローアッセイであって、以下を含むアッセイ:
(a)該液体試料中の分析物に相補的な拡散性に結合した標識試薬を含み、該拡散性に結合した標識試薬および該分析物が拡散性の第一複合体を形成する第一領域;
(b)該第一複合体と複合体を形成する能力のある非拡散性に結合した捕捉試薬を含むテスト領域;
(c)該拡散性に結合した標識試薬に相補的な非拡散性に結合した対照試薬を含む対照領域;
(d)該拡散性に結合した標識試薬と複合体を形成する能力のある非拡散性に結合した分析物を含む基準領域。 - 液体試料が毛管現象によって通過流動できるマトリックスをさらに含む、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- マトリックスがニトロセルロースを含む、請求項2記載のラテラルフローアッセイ。
- 基準ラインが第一領域における分析物および結合した標識試薬の間の結合の妨害の検出を可能にする、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- テスト領域および基準領域の間のシグナル強度が妨害の関数として互いに平行する、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 液体試料が尿を含む、請求項4記載のラテラルフローアッセイ。
- 分析物が卵胞刺激ホルモン(FSH)、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)、黄体形成ホルモン(LH)、淋疾抗原、クラミジア抗原、架橋N−テロペプチド、デオキシプリジノロン(Dpd)、HIV抗体および核膜タンパク質−22(NMP−22)からなる群より選択される、請求項6記載のラテラルフローアッセイ。
- 分析物がヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)である、請求項7記載のラテラルフローアッセイ。
- 分析物が黄体形成ホルモン(LH)である、請求項7記載のラテラルフローアッセイ。
- 妨害が尿の比重(SG)を原因とする、請求項6記載のラテラルフローアッセイ。
- 妨害がpH、総タンパク質、尿素または糖尿を原因とする、請求項6記載のラテラルフローアッセイ。
- 基準領域が第一領域およびテスト領域の間に位置する、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 基準領域がテスト領域および対照領域の間に位置する、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 拡散性に結合した標識試薬が抗体を含む、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 拡散性に結合した標識試薬が、hCGと特異的に結合して標識抗hCG抗体と該hCGとの第一複合体を形成する能力のある抗hCG抗体を含む、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 標識が金ゾルである、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 標識が着色ラテックス粒子である、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 非拡散性に結合した分析物が所定の濃度を有する、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 濃度が、分析物の存在を目視的にかつ計装なしに検出できる最小濃度を表す、請求項18記載のラテラルフローアッセイ。
- 濃度が、検出可能な標識からのシグナルを測定する能力のある検出器を有する計器によって分析物の存在を検出できる最小濃度を表す、請求項18記載のラテラルフローアッセイ。
- 基準領域に検出されたシグナルは最小検出濃度でアッセイが分析物を感知することを示す、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 対照領域におけるシグナルの存在と組み合わさった基準領域およびテスト領域の両方におけるシグナルの不在が偽陰性の結果の見込みを示す、請求項1記載のラテラルフローアッセイ。
- 前記計器が反射分光器である、請求項20記載のラテラルフローアッセイ。
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