JP2007297398A - 突然変異上皮成長因子受容体を標的とする試薬および方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 細胞系を、III型突然変異EGF受容体の過剰発現に対して提供する。これらの細胞系を生産する方法もまた提供する。更に、これらの細胞系によって発現されたペプチドに対して生じた抗体を提供する。突然変異ヒトEGF受容体中に存在する融合接合部からのペプチドを含むワクチン、並びに腫瘍形成の阻害および腫瘍後退の促進においてこれらのワクチンを使用する方法もまた提供する。更に、突然変異EGF受容体の発現を減少させる、突然変異EGF受容体を標的としたアンチセンスオリゴヌクレオチドを開示する。
【選択図】 なし
Description
本発明は、米国国立衛生研究所後援の研究中に得られた。米国政府は本発明の当然の権利を有することができる。
発明の背景
いずれの癌療法の成功も、腫瘍性細胞を正常細胞から区別するその能力に基いている。最新の化学療法または放射線療法計画は、腫瘍細胞の示差的成長速度に基いている。実際に、このような療法は、いくつかの癌を治療する場合に大いに成功してきたが、多数の他の癌に対して、現行の治療は、現実には一時しのぎであるかまたは長期間には効果がない。脳腫瘍療法の進歩は、60才を越えると生存曲線が顕著に変化しなかったように、特に不十分であった。患者の免疫系の採集などの生物学的に基礎付けられた理学療法または分子生物学における最近の研究に基いた治療法を用いて若干の進歩が成されてきた。しかしながら、癌細胞に対するこれらの治療法の特異性は不十分である。生物学に基いた療法の研究の多くは、腫瘍特異的変化を明確にすることに集中してきた。
本発明の目的は、III型突然変異EGF受容体を過剰発現することができる細胞系を提供することである。これらの細胞系を生産する方法もまた提供する。
III型突然変異EGF受容体は、EGF受容体cDNA中のヌクレオチド275−1075間の欠失である。この欠失は、通常は遠位配列であったものの融合を引き起こして、この融合接合部で新規ペプチド配列の生成を引き起こす突然変異したcDNA配列を生じる(図1)。それは、グリア芽細胞腫瘍の17%および肺の小細胞癌の25%に存在すると報告されているように、ヒト腫瘍中の最も頻繁に天然に存在する突然変異EGF受容体である。この受容体はまた、乳癌の67%に存在することが判った。突然変異受容体に対して特異的な単クローン性抗体(mAb)を用いて、この受容体は、乳癌、非小細胞肺癌およびグリオームのサブセットに特異的な腫瘍であることが今回確証された。受容体は、末梢、中枢神経系およびリンパ系の要素を含めた、検査されたいずれの正常組織においても発現されなかった。この受容体は、卵巣腫瘍でも見られなかった。
実施例1:発現ベクターの構築
完全に配列決定された全長EGF受容体cDNAを、突然変異受容体の生成の基準として用いた。正常ヒトEGF受容体cDNAを含むプラスミド構築物pCO12は、NCIから得られており、ウリッヒら、Nature 1984 309,418-425 によって決定されたcDNAの配列に該当する。EGF受容体cDNAは、モロニーネズミ白血病ウイルス長末端反復(LTR)プロモーターを用いて転写を駆動する哺乳動物発現ベクターpLTR−2中にクローン化された。この構築物をpLTR2−CO12と称した。III型EGF受容体突然変異体を発現する構築物を誘導するために、III型EGF受容体cDNAの一部分を、この特定の突然変異体を過剰発現するヒトグリア芽細胞腫瘍D270から作成されたcDNAライブラリーからクローン化した。異常な融合接合部を包含する251bpのSstI−DraIフラグメントを、pCO12からの2.9bpのDraI−XhoIフラグメントに対して連結させた。pLTR2−HC2と称されるこの構築物は、突然変異EGF受容体を発現すると考えられるが、他の点では正常EGF受容体を発現する構築物と一致した。
NIH−3T3細胞はATCCから得られた。NIH−3T3細胞系は、10%ウシ胎児血清を含むDMEM中で維持された。NIH−3T3細胞を、細胞1×106個/100mm皿で平板培養した。培地を翌日交換し、そして3時間後に、標準的なリン酸カルシウムトランスフェクション法の変法を用いて細胞をトランスフェクションした。細胞は、pKOneo(2μg)を加えたpLTR CO12か、pLTR−HC2かまたはpLTR2ベクター単独によって、10:1および20:1の比率で同時トランスフェクションされた。培地を翌日交換し、そして2日後に、各プレート中の細胞をトリプシン処理し、そしてG418硫酸塩350μg/mlを含有する10%ウシ胎児血清培地(完全培地)(ギブコ(Gibco)/BRL,ゲイサーズバーグ,MD)中に1:5に分配した。2週間以内に、個々のG418耐性コロニーが現れた。これらを採取し、そして最初に25cm2フラスコ中に、続いて75cm2フラスコ中に増殖させた。十分な細胞が得られた時点で、サブクローンを、最初に、以下に記載のようにタンパク質濃度についてウェスタンブロット法によって分析した。タンパク質量のスクリーニングは、まず第一に、所望のレベルのタンパク質発現と共にサブクローンを得る最も有効な方法であり且つ高レベルの発現と共にクローンを供給するのに決定的であった。全部で32のCO12および34のHC2クローンをウェスタンブロッティング法によって評価した。適当なクローンが見つけられた時点で、それらを増殖させた後、サザンブロット法によって分析して、ゲノム組込みを実証した。4種類のHC2クローンが、検出可能な量の突然変異EGF受容体を生じた。細胞系が高い均一レベルの発現を有したことを確かめるために、それぞれの細胞系を、実施例4で記載のように軟寒天中に播種した。
細胞を、1mMオルトバナジン酸ナトリウム含有、pH7.25のPBS/TDS緩衝液(10mM二塩基性リン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、1%トリトンX−100、0.5%デオキシコール酸ナトリウム、0.1%ドデシル硫酸ナトリウム、0.2%アジ化ナトリウムおよび0.004%フッ化ナトリウム)中で溶解させた。タンパク質濃度は、ブラドフォード色素結合法(バイオラド(BioRad),ヘラクレス,CA)によって測定された。溶解産物を、6%SDSおよび10%β−メルカプトエタノールを含有する等容量の2×試料緩衝液と混合し、3分間沸騰させ、そして7.5%SDS−PAGEゲル上において不連続緩衝液系中3.5%ポリアクリルアミドスタッカーによって電気泳動した。タンパク質を半乾燥転移装置によってニトロセルロース膜に転移させ、そしてその膜をブロトー(blotto)/TTBS中で遮断した。膜を、ブロトー/TTBS中において一次抗体と一緒に2時間インキュベートした。ヒトEGF受容体の細胞内エピトープに対する抗体(クローンZ025)またはヒトEGF受容体の活性型(クローンZ026)は、ザイムド・イムノケミカルズ(Zymed Immunochemicals)(サン・フランシスコ,CA)製であり且つ0.5μg/mlの濃度で用いられ;ホスホチロシンに対する抗体(クローン4G10)はアプステート・バイオテクノロジー・インコーポレーテッド(Upstate Biotechnology Inc.)(レーク・プラシッド,NY)製であり且つ1μg/mlの濃度で用いられた。TTBSによる洗浄後、ブロットを、0.3μCi/mlの125I−ヒツジ抗マウスIgF(ab′)2(アマーシャム(Amersham),アーリントン・ハイツ,IL)と一緒に1時間インキュベートし、そして−80℃で1〜3日間露出させた。
軟寒天培養物を、低ゲル化温度アガロース(VII 型、シグマ・ケミカル・カンパニー(Sigma Chemical Co.),セント・ルイス,MO)を用いて製造した。10%ウシ胎児血清完全培地および0.6%アガロースを含有する基層を分配し(2ml/35mm皿)、そして室温でゲル化させた。やや密集した培養物から細胞をトリプシン処理し、そしてEGF 20ng/ml含有または不含の、0.3%アガロース含有完全培地1ml中において細胞5,000個/皿で平板培養した。培養物は、7日目および14日目に再度栄養補給され、そして21日目に計数された。直径60μmより大きいコロニーを計数した。
HC2 20d2/c細胞の腫瘍形成について、6週令ヌード(BALB/c nu/nu雌)マウスで試験した。PBS 0.25ml中細胞1×106個を、6匹のマウスの後側腹部に s.c. 注射した。マウスを週に2回(biweekly)触診し且つ2か月間観察した。大部分の被験動物において、腫瘍は1週間以内に検出することができ、そして急速に増殖する腫瘍の結果として、被験動物は全て2か月までに屠殺されなければならなかった。腫瘍は全て、高濃度の突然変異EGF受容体を発現し続け、そしてG418耐性細胞系は、切り取られた腫瘍から容易に確立された。NM#3 HC2 20d2/cと称される1種類のこのような細胞系を、引き続きの腫瘍形成実験全てに用いた。
HC2 20d2/cが無胸腺マウスにおいて腫瘍形成性であったことを確認した後、正常な免疫機能を有する同系マウスにおけるそれらの腫瘍形成を研究した。NIH−スイスマウスに、上記のように細胞104個、105個、106個または107個;被験動物2匹/用量で注射した。細胞106個かまたは107個を与えられた被験動物は1週間以内に腫瘍を発生し、そしてこれらは、この実験の被験動物4匹の内3匹において後退する前に数週間増殖し続けた。107個投与動物の内1匹の腫瘍は、その被験動物を屠殺することが必要になるまで増殖し続けた。G418耐性細胞系は、この腫瘍から確立され、そしてHC2/NS1と称されるこれらの細胞は、高濃度の突然変異ヒトEGF受容体を発現し続けた。
突然変異ヒトEGF受容体中に存在する融合接合部の新規配列を包含するペプチド(LEEKKGNYVVTDHC(配列番号:1))を、標準的な方法によって合成し;ヘテロ二官能性試薬マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミドエステル(MBS)を用いて、カルボキシ末端システイン残基を包含させて、担体スカシガイのヘモシアニン(KLH)およびウシ血清アルブミン(BSA)に対するペプチドの結合を促進させた。これらの結合体を「KLH−LEEK」および「BSA−LEEK」と称し;前者を全てのワクチ注射用に、そして後者を血清抗体の滴定に用いた。最初のワクチン注射に対して、マウス(雌NIH−スイス)に、PBS中100μg/mlの等部の完全フロイントアジュバントおよびKLH−LEEKのエマルジョンを0.1ml s.c. で注射した。引き続きの注射には、不完全フロイントアジュバントを用いた。
屠殺された被験動物の脾臓を取出し、PBSによって洗浄し、そして標準的な方法によって破壊した。洗浄後、細胞を、10%FBS、5.5×10−5M β−メルカプトエタノール、0.1mMイーグルMEM非必須アミノ酸(NEAA)、ペニシリン100単位/ml、ストレプトマイシン100μg/mlおよびカナマイシン100μg/mlと、2μg/mlのコンカナバリンAかまたはLEEK−ペプチドとを含有するRPMI 1640中で平板培養した。脾臓細胞は、細胞障害性Tリンパ球(CTL)検定で用いる前に、5%CO2を含む給湿インキュベーター中において37℃で3〜4日間インキュベートした。検定は、当該技術分野において周知の標準法によって、または下記の変法によって行われた。すなわち、標的細胞(特異的な標的としてNM#3 HC2 20d2/c;正常ヒトEGF受容体を過剰発現するNIH−3T3トランスフェクタントクローンCO12 20c2/bを非特異的対照標的として用いた)を、24ウェルファルコン(Falcon)組織培養プレート中において細胞200,000個/16mmウェルで平板培養し、そして使用前に3日間インキュベートした。標的細胞を、100μCi/細胞1×107個の51Crによって in situ で1時間標識し、3回洗浄し、そしてそのエフェクター細胞を様々な比率で三重反復試験ウェルに対して加えた。プレートを4〜5時間インキュベートし、そしてアリコートをγカウンターで定量して、特異的溶解の程度を測定した。
用いられたアンチセンスオリゴマーの配列は、5'-CATAATTACCTTTCTTTT-3'(配列番号:2)であった。用いられたセンスオリゴマーの配列は、5'-AAAAGAAAGGTAATTATG-3'(配列番号:3)であった。オリゴヌクレオチドを、標準的なB−シアノエチルホスホルアミダイト化学によって合成し且つエタノール沈降によって精製した。
実施例10:突然変異受容体に対する単クローン性抗体の製造および特性決定
融合接合部の予測されたアミノ酸配列に対応する14アミノ酸ペプチドPep3を合成し、精製し、そしてアナスペク・インコーポレーテッド(Anaspec Inc.)(サン・ホセ,CA)によるスカシガイのヘモシアニンに対して共役させた。無関係の構造の10アミノ酸ペフチドPep1は、負の対照として役立った。
ミクロソーム膜部分を調製するために、HC2 20d2細胞またはA431無胸腺マウス異種移植片10グラムを、0.3Mスクロースおよび1mMフッ化フェニルメチルスルホニル含有の20mMトリス緩衝液、pH7.4中において4℃でホモジナイズした。ホモジネートを15,000×gで20分間回転させた。次に、上澄みを150,000×gで30分間回転させた。得られたペレットを、超遠心分離によって上澄みがタンパク質不含になるまで洗浄した。最終ペレットを、ホモジナイズされた組織のグラム当たり1mlの115mMリン酸緩衝液中に再懸濁させ且つ−135℃で貯蔵した。
精製mAbを、アセトン固定されたHC2 20d2、NIH 3T3およびA431単層に対して、または無胸腺ラットにおいて継代されたD−256MGおよびD−245MGグリオーム異種移植片のアセトン固定された凍結切片に対してスクリーニングした。mAb L8A4およびY10は、免疫組織化学に最適の試薬であったことが確認された。それらは、Pep3アフィニティー精製ウサギ抗血清mAb 528およびmAb 3B4(全ヒト組織正対照)から成る抗体パネル中に包含された。mAb 528は、それが、野生型EGFRおよびEGFR III型両方の細胞外ドメインに共通のエピトープと反応するので、免疫組織化学的分析のために包含された。免疫組織化学的分析は、ハンフリーら、Cancer Res.1988,48,2231-2238 によって記載された手順にしたがって、ラブテク(Labtec)スライド上で平板培養された正常または腫瘍組織の、アセトン固定された(−70℃、30秒間)、5〜8μm組織切片で行われた。試験された組織には、乳癌11例、グリオーム31例および35種類の正常組織試料のパネルが含まれる。
放射性標識された抗EGFR III型mAbを、HC2 20d2細胞と一緒に抗体過剰(2.5μg/細胞106個、分析用フローサイトメトリーによって測定される)において4℃で1時間インキュベートした。非結合mAbを、冷1%BSA/PBSによって洗浄することによって除去し、そして細胞密度を、10%FCS含有 Zinc Option 培地中において細胞2×106個/mlに再調整した。細胞を試料500μl中に分別し、そしてそして培養温度を37℃に調整した。試料を下記の手順によって0時間、1時間、2時間、4時間、8時間および20時間処理した。すなわち、細胞をペレットにし、そして培養物上澄みを除去し且つ計数用に貯蔵した。Zinc Option(pH2.0)による600μlで2回の酸洗浄は、4℃で15分間のインキュベーションを間にはさんで行った。細胞をペレットにし、そして酸洗浄を組み合わせ且つ細胞ペレットおよび細胞培養物上澄みを用いてγカウンターで計数した。最初の細胞培養物上澄みの計数は、12.5%トリクロロ酢酸中の溶解度についても検定された。
対標識免疫局在化実験は、皮下HC2 20d2異種移植片を有するマウスにおいて行われた。7日令異種移植片(寸法約150〜250mm3)を有する無胸腺マウスを、腫瘍容積(式、L×W2×1/2を用いて計算され、LおよびWは、ノギスによって測定される腫瘍の最長軸および横断径を表す)によってランダム化した。トリアミンセロビオース(TCB)を用いて125Iによって標識され、不適当な特異性を有する131I−標識イソタイプ対合対照mAb P3X63Ag8の等量とそれぞれ対にされたL8A4またはH10 2.5μgを尾静脈注射によってマウスに注射した。マウス5匹の群を、mAb注射後4時間、12時間、24時間、48時間、72時間、120時間および168時間に屠殺した。血液試料は、下大動脈の横断によって得られた。次に、完全に解剖を行い、そして腫瘍の他に、脾臓、肝、肺、心臓、甲状腺、胃、小腸・大腸、膀胱、骨、皮膚、筋肉および脳を含めた組織を摘出した。血液を含めた組織全てを、風袋を差引いたバイアル中で秤量し、そして125Iおよび131I活性について2チャンネルγカウンターを用いて検定した。データは、131Iおよび125Iシグナルのオーバーラップに対して並びに放射能の壊変に対して補正された。注射用量%/グラム(組織)の値は、注射用量標準を用いて得られた。
1.III型突然変異EGF受容体を過剰発現することができる細胞系。
2. クローンHC2 20d2、HC2 20d1、HC2 20d4、NM#3 HC2 20d2/cまたはHC2/NS1を含有する請求項1に記載の細胞系。
4. III型突然変異EGF受容体を過剰発現することができる細胞系を生産する方法であって、
(a)III型突然変異EGF受容体を包含するcDNAを同定し;
(b)同定されたcDNAフラグメントをベクター中にクローン化し;
(c)クローン化された同定されたcDNAフラグメントを、正常EGF受容体のcDNAからのフラグメントに対して連結させ、その結果として、III型突然変異EGF受容体を発現するがそれ以外は自然のままのEGF受容体を発現する構築物と同一である発現プラスミドを生じ;
(d)高濃度のIII型突然変異EGF受容体が発現されることを確実にする比率での該発現プラスミドおよび選択マーカーによって細胞をトランスフェクションし;
(e)細胞を選択培地上で増殖させ;
(f)選択培地に対して耐性のクローンを選択し;
(g)成長細胞の選択されたクローンからの溶解産物をスクリーニングして、発現されたIII型突然変異EGF受容体の量を測定し;そして
(h)III型突然変異EGF受容体を過剰発現することができる細胞系を同定することを含む上記方法。
6. トランスフェクションされた細胞がNIH−3T3細胞である請求項4に記載の方法。
9. 選択マーカーがpKOneoを含む請求項4に記載の方法。
10.腫瘍形成を阻害するワクチンであって、突然変異III型EGF受容体中に存在する融合接合部に対して、該突然変異体に対する免疫応答が引出されるように充分に類似性を有するペプチドを含む上記ワクチン。
13.天然に存在する突然変異EGF受容体を有する腫瘍の形成を阻害する方法であって、突然変異III型EGF受容体中に存在する融合接合部に対して、該突然変異体に対する免疫応答が引出されるように充分に類似性を有するペプチドを含むワクチンを投与することを含む上記方法。
17.天然に存在する突然変異EGF受容体を有する既存の腫瘍の後退を引き起こす方法であって、突然変異III型EGF受容体中に存在する融合接合部に対して、該突然変異体に対する免疫応答が引出されるように充分に類似性を有するペプチドを含むワクチンを投与することを含む上記方法。
19.III型突然変異EGF受容体を過剰発現する細胞系によって発現されたペプチドに対して生じた抗体。
21.配列番号:2を含む請求項20に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 1:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 14
(B) 型: アミノ酸
(D) トポロジー: 直鎖状
(xi) 配列: SEQ ID NO: 1:
Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Cys
1 5 10
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 2:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 18
(B) 型: 核酸
(C) 鎖の数: 一本鎖
(D) トポロジー: 直鎖状
(iv) アンチセンス: Yes
(xi) 配列: SEQ ID NO: 2:
CATAATTACC TTTCTTTT 18
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 3:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 18
(B) 型: 核酸
(C) 鎖の数: 一本鎖
(D) トポロジー: 直鎖状
(iv) アンチセンス: No
(xi) 配列: SEQ ID NO: 3:
AAAAGAAAGG TAATTATG 18
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 4:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 8
(B) 型: アミノ酸
(D) トポロジー: 直鎖状
(xi) 配列: SEQ ID NO: 4:
LEU GLU GLU LYS LYS VAL CYS GLN
1 5
CTG GAG GAA AAG AAA GTT TGC CAA 24
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 5:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 9
(B) 型: アミノ酸
(D) トポロジー: 直鎖状
(xi) 配列: SEQ ID NO: 5:
LYS CYS PRO ARG ASN TYR VAL VAL THR
1 5
AAG TGT CCC CGT AAT TAT GTG GTG ACA 27
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 6:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 11
(B) 型: アミノ酸
(D) トポロジー: 直鎖状
(xi) 配列: SEQ ID NO: 6:
LEU GLU GLU LYS LYS GLY ASN TYR VAL VAL THR
1 5 10
CTG GAG GAA AAG AAA GGT AAT TAT GTG GTG ACA 33
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 7:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 27
(B) 型: 核酸
(C) 鎖の数: 一本鎖
(D) トポロジー: 直鎖状
(iv) アンチセンス: No
(xi) 配列: SEQ ID NO: 7:
GGGGAATTCG CGATGCGACC CTCCGGG 27
(2) 配列情報 SEQ ID NO: 8:
(i) 配列の特性:
(A) 長さ: 27
(B) 型: 核酸
(C) 鎖の数: 一本鎖
(D) トポロジー: 直鎖状
(iv) アンチセンス: No
(xi) 配列: SEQ ID NO: 8:
GGGAAGCTTT CCGTTACACA CTTTGCG 27
Claims (10)
- 配列番号1を含むペプチドの、対象において突然変異III型EGF受容体を生じる腫瘍に対する細胞障害性T細胞応答を引き出すための医薬の製造のための使用。
- ペプチドが配列番号1からなる、請求項1に記載の使用。
- 医薬が、突然変異III型EGF受容体を生じる腫瘍の形成または成長を阻害するためのものである、請求項1または2に記載の使用。
- 医薬が、突然変異III型EGF受容体を生じる腫瘍の後退を誘導するためのものである、請求項1または2に記載の使用。
- ペプチドが担体に結合している、請求項1−4のいずれか1項に記載の使用。
- 担体がスカシガイのヘモシアニン(KLH)である、請求項5に記載の使用。
- 突然変異III型EGF受容体を生じる腫瘍が、グリオーム、あるいは乳癌、非小細胞肺癌、または卵巣腫瘍である、請求項1−6のいずれか1項に記載の使用。
- ペプチドが配列番号1の配列を含み、ペプチドがスカシガイのヘモシアニンに結合している、請求項1−7のいずれか1項に記載の使用。
- ペプチドが配列番号1の配列からなり、ペプチドがスカシガイのヘモシアニンに結合している、請求項1−7のいずれか1項に記載の使用。
- 対象がヒトである、請求項1−8のいずれか1項に記載の使用。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2014504851A (ja) * | 2010-11-17 | 2014-02-27 | アデュロ バイオテック | Egfrviiiに対する免疫応答を誘発する方法および組成物 |
WO2017142294A1 (ko) * | 2016-02-15 | 2017-08-24 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | EGFRvIII에 대한 항체 및 이의 용도 |
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Families Citing this family (36)
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JP4620808B2 (ja) * | 1994-11-28 | 2011-01-26 | トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティ | 突然変異上皮成長因子受容体を標的とする試薬および方法 |
US5914269A (en) * | 1997-04-04 | 1999-06-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide inhibition of epidermal growth factor receptor expression |
CA2380631A1 (en) * | 1999-07-30 | 2001-02-08 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Sec Retary Of The Department Of Health And Human Services | Human p53 mutations and a genetic system in yeast for functional indentification of human p53 mutations |
US7829693B2 (en) * | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
WO2001068711A1 (en) * | 2000-03-10 | 2001-09-20 | Thomas Jefferson University | Sensitive detection of wild-type and mutant egfr by specific elisa assays in any biological sample |
US6444465B1 (en) | 2000-09-29 | 2002-09-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antinsense modulation of Her-1 expression |
US8546143B2 (en) | 2001-01-09 | 2013-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
US20100056762A1 (en) | 2001-05-11 | 2010-03-04 | Old Lloyd J | Specific binding proteins and uses thereof |
EP1392359B2 (en) | 2001-05-11 | 2013-03-13 | Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. | Specific binding proteins and uses thereof |
WO2002097044A2 (en) | 2001-05-25 | 2002-12-05 | Thomas Jefferson University | Alternative splice forms of proteins as basis for multiple therapeutic modalities |
US9200036B2 (en) | 2002-07-12 | 2015-12-01 | The Johns Hopkins University | Mesothelin vaccines and model systems |
WO2004006837A2 (en) * | 2002-07-12 | 2004-01-22 | The Johns Hopkins University | Mesothelin vaccines and model systems |
US20090110702A1 (en) | 2002-07-12 | 2009-04-30 | The Johns Hopkins University | Mesothelin Vaccines and Model Systems and Control of Tumors |
US20040147428A1 (en) * | 2002-11-15 | 2004-07-29 | Pluenneke John D. | Methods of treatment using an inhibitor of epidermal growth factor receptor |
US7084246B2 (en) * | 2003-04-17 | 2006-08-01 | Molecular Logix, Inc. | Epidermal growth factor agonists |
AU2012268864B2 (en) * | 2003-06-27 | 2016-01-21 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof |
CN1930187B (zh) * | 2003-06-27 | 2015-08-19 | 艾默根佛蒙特有限公司 | 针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体及其使用 |
AU2011265359B9 (en) * | 2003-06-27 | 2014-04-10 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof |
AU2015242981B2 (en) * | 2003-06-27 | 2017-10-19 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof |
MXPA05014152A (es) * | 2003-06-27 | 2006-05-25 | Abgenix Inc | Anticuerpos dirigidos a los mutantes de delecion de receptor de factor de crecimiento epidermico y sus usos. |
US7767792B2 (en) | 2004-02-20 | 2010-08-03 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Antibodies to EGF receptor epitope peptides |
DK1940461T3 (da) * | 2005-11-02 | 2014-03-31 | Univ Duke | Samtidig kemoterapi og immunterapi |
US9090693B2 (en) | 2007-01-25 | 2015-07-28 | Dana-Farber Cancer Institute | Use of anti-EGFR antibodies in treatment of EGFR mutant mediated disease |
US9340601B2 (en) * | 2007-03-01 | 2016-05-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Splice variants of the EGF receptor |
EP2134854B1 (en) | 2007-03-15 | 2015-04-15 | Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. | Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations |
ES2609915T3 (es) | 2007-08-14 | 2017-04-25 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Anticuerpo monoclonal 175 direccionado al receptor de EGF y derivados y usos del mismo |
WO2009102493A2 (en) * | 2008-02-12 | 2009-08-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Use of egfrviii to identify and target cancer stem cells |
WO2010028054A1 (en) * | 2008-09-02 | 2010-03-11 | Alnylam Europe Ag. | Compositions and methods for inhibiting expression of mutant egfr gene |
US20130034573A1 (en) | 2009-12-22 | 2013-02-07 | Celldex Therapeutics, Inc. | Vaccine compositions |
CN104780938A (zh) | 2012-08-02 | 2015-07-15 | 小利兰·斯坦福大学托管委员会 | 用于肿瘤治疗的基于EGFRvIII序列的肽疫苗 |
US9752145B2 (en) | 2014-03-17 | 2017-09-05 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Compositions and methods for reducing C/EBP homologous protein activity in myeloid-derived suppressor cells |
TW202330606A (zh) | 2014-03-21 | 2023-08-01 | 美商艾伯維有限公司 | 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物 |
CN107108735B (zh) * | 2014-11-25 | 2021-05-04 | 药物抗体公司 | 新型egfrviii抗体和包含所述抗体的组合物 |
MX2017013174A (es) | 2015-04-13 | 2018-04-11 | Aduro Biotech Inc | Fusiones de variante iii del receptor de factor de crecimiento epidermico-mesotelina y métodos para usar los mismos. |
JP2018512165A (ja) | 2015-04-13 | 2018-05-17 | アデュロ バイオテック,インコーポレイテッド | 癌の治療のための免疫原性融合タンパク質 |
UY39610A (es) | 2021-01-20 | 2022-08-31 | Abbvie Inc | Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05500158A (ja) * | 1989-09-08 | 1993-01-21 | ザ・ジョーンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | ヒト神経膠腫のegf受容体遺伝子の構造変化 |
JPH05506039A (ja) * | 1991-02-26 | 1993-09-02 | ノルスク・ヒドロ・アクシェセルスカープ | 治療に有用なペプチドおよびペプチド断片 |
JPH10509878A (ja) * | 1994-11-28 | 1998-09-29 | トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティ | 突然変異上皮成長因子受容体を標的とする試薬および方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2261433A1 (en) | 1993-12-09 | 1995-06-10 | Belinda Sanchez Ramirez | Composition comprising autologous epidermal growth factor |
-
1995
- 1995-11-28 JP JP51898296A patent/JP4620808B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-28 EP EP95943342A patent/EP0796277B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-28 DE DE69532767T patent/DE69532767T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-28 AT AT95943342T patent/ATE262586T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-11-28 CA CA002206343A patent/CA2206343C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-28 WO PCT/US1995/015401 patent/WO1996016988A1/en active IP Right Grant
-
1997
- 1997-05-21 US US08/861,423 patent/US6224868B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-06-26 JP JP2007167580A patent/JP2007297398A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05500158A (ja) * | 1989-09-08 | 1993-01-21 | ザ・ジョーンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | ヒト神経膠腫のegf受容体遺伝子の構造変化 |
JPH05506039A (ja) * | 1991-02-26 | 1993-09-02 | ノルスク・ヒドロ・アクシェセルスカープ | 治療に有用なペプチドおよびペプチド断片 |
JPH10509878A (ja) * | 1994-11-28 | 1998-09-29 | トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティ | 突然変異上皮成長因子受容体を標的とする試薬および方法 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014504851A (ja) * | 2010-11-17 | 2014-02-27 | アデュロ バイオテック | Egfrviiiに対する免疫応答を誘発する方法および組成物 |
WO2017142294A1 (ko) * | 2016-02-15 | 2017-08-24 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | EGFRvIII에 대한 항체 및 이의 용도 |
CN109476738A (zh) * | 2016-02-15 | 2019-03-15 | 社会福祉法人三星生命公益财团 | 抗EGFRvIII的抗体及其用途 |
US10669340B2 (en) | 2016-02-15 | 2020-06-02 | Samsung Life Public Welfare Foundation | Antibody against EGFRvIII and use thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US6224868B1 (en) | 2001-05-01 |
JPH10509878A (ja) | 1998-09-29 |
ATE262586T1 (de) | 2004-04-15 |
EP0796277A1 (en) | 1997-09-24 |
JP4620808B2 (ja) | 2011-01-26 |
WO1996016988A1 (en) | 1996-06-06 |
EP0796277B1 (en) | 2004-03-24 |
CA2206343A1 (en) | 1996-06-06 |
EP0796277A4 (en) | 2001-01-24 |
DE69532767T2 (de) | 2004-08-12 |
CA2206343C (en) | 2009-04-07 |
DE69532767D1 (en) | 2004-04-29 |
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Emens et al. | of June 13, 2013. |
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