JP2007033201A - 敏感肌の評価方法及びその評価キット - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 敏感肌由来の角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量は、健常肌由来のそれに比べて有意に高いことを見出した。このとき用いる角質細胞は、テープストリッピングといった表皮の表層部分のみを採取する簡単な方法で採取することができる。また、本発明に用いる角質細胞は紫外線や化学物質等の刺激を与えることなくカルプロテクチンの存在量を測定できる。これらより、角質細胞におけるカルプロテクチンを指標として簡便に敏感肌を評価できる。
【選択図】 なし
Description
本人が敏感肌と感じる被験者(10名)および健常者(9名)に洗顔を行ってもらい、その30分後に経皮蒸散水分量(TEWL)をCourage&Khazaka社製テバメーター(TM210)で測定した。敏感肌を有すると自己申告した被験者(10名)を敏感肌群、健常肌を有すると自己申告した健常者(9名)を健常肌群とした。
実験1の測定後、被験者及び健常者から角質テープにより角質細胞を採取した。角質細胞を採取した角質テープ(25×45mm)を2mm角程度に細切してPBS750μL中に分散させ、氷冷下超音波破砕後4℃にて遠心して得られた上清を定量用のサンプルとした。PROTEIN Assay,Bradford法(BIO−RAD)により検定した総タンパク質濃度は693±37ng/mL程度であった。この溶液100μLについてMRP8/14EIA(Buhlmann Laboratories AG製)を用いて、マニュアルに従い定量を行った。
実験2で得たカルプロテクチン量を敏感肌群と健常肌群で比較した。図1は、敏感肌及び健常肌の角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量を示した図である。敏感肌群で有意に顔面角質細胞のカルプロテクチン量が高いことが明らかになった。
洗顔の15分後、医療用アロンアルファA(三共製薬)をシランコートスライド上に少量(約直径3mm程度)出して、直ちに対象の評価部位に軽く接着させ3分間保持したのち、ゆっくりと剥がして角質細胞を採取した。これをエタノール2分、洗浄(PBS溶液に3分)、3%PFA含有PBS溶液10分、洗浄(PBS溶液に5〜10分を3回繰返し)、0.1%トリトンX−100含有PBS溶液10分、洗浄(PBS溶液に5〜10分を3回繰返し)、10%ヤギ血清(ニチレイ)で1時間ブロッキングした後、マウス抗ヒトMRP8/14モノクローナル抗体T−1023(BMA Biomedicals AG)1μg/mLのPBS希釈液を4℃で一晩反応させた。洗浄(PBS溶液に5〜10分を3回繰返し)後、Alexa Fluor 488標識抗マウスIgG抗体の200倍希釈PBS溶液を1時間反応させた。
顕微鏡の写真を表したのが図3である。上段は、敏感肌の角質細胞の同一部位を蛍光顕微鏡(上段左)及び光学顕微鏡(上段右)で観察した結果の写真である。下段は、健常肌の角質細胞の同一部位を蛍光顕微鏡(下段左)及び光学顕微鏡(下段右)で観察した結果の写真である。カルプロテクチンが存在している箇所では、Alexa Fluor 488標識抗マウスIgG抗体により蛍光を発する。カルプロテクチンが存在している代表的な部位を矢印で示した(毛穴部近傍、毛穴部近傍以外の角質細胞)。
Claims (6)
- 角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量の多寡を指標とすることを特徴とする敏感肌の評価方法。
- 毛穴部近傍以外の角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量の多寡を指標とすることを特徴とする敏感肌の評価方法。
- 角質細胞を採取する採取工程と、前記採取工程で採取された角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量を測定する測定工程と、前記測定工程で測定されたカルプロテクチンの存在量を健常肌の角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量と比較する比較工程と、を備えたことを特徴とする請求項1又は2記載の敏感肌の評価方法。
- 被験者の評価対象部位の角質細胞を採取する採取工程と、前記採取工程で採取された角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量を測定する測定工程と、前記測定工程で測定されたカルプロテクチンの存在量を健常肌を有する人の前記評価対象部位の角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量と比較する比較工程と、を備えたことを特徴とする請求項1又は2記載の敏感肌の評価方法。
- 角質細胞を採取するための採取手段と、角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量を測定するための測定手段と、を備えたことを特徴とする敏感肌の評価キット。
- 角質細胞を採取するための採取手段と、毛穴部近傍以外の角質細胞におけるカルプロテクチンの存在量を測定するための測定手段と、を備えたことを特徴とする敏感肌の評価キット。
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