JP2006516405A - グルタミン産生能を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株 - Google Patents
グルタミン産生能を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006516405A JP2006516405A JP2006502776A JP2006502776A JP2006516405A JP 2006516405 A JP2006516405 A JP 2006516405A JP 2006502776 A JP2006502776 A JP 2006502776A JP 2006502776 A JP2006502776 A JP 2006502776A JP 2006516405 A JP2006516405 A JP 2006516405A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- strain
- dsm
- bifidobacterium infantis
- bifidobacterium
- strains
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 title claims abstract description 45
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 44
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 23
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 6
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 claims description 38
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 claims description 34
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 27
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 18
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 17
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 16
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 claims description 14
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 10
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 7
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 claims description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 6
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 5
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 claims description 5
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 claims description 4
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 3
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 claims description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 17
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 10
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 9
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 9
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 6
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 4
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 4
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 4
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 4
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 3
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 2
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 2
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 2
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical class OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010051606 Necrotising colitis Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 2
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 2
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 2
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 208000004995 necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 201000006195 perinatal necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- IFPQOXNWLSRZKX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-(diaminomethylideneamino)butanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCN=C(N)N IFPQOXNWLSRZKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 2-bromophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Br VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 206010070545 Bacterial translocation Diseases 0.000 description 1
- 241001655328 Bifidobacteriales Species 0.000 description 1
- 241000186020 Bifidobacterium dentium Species 0.000 description 1
- 241001468229 Bifidobacterium thermophilum Species 0.000 description 1
- 230000007018 DNA scission Effects 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000400064 Monomorium bifidum Species 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 102000008299 Nitric Oxide Synthase Human genes 0.000 description 1
- 108010021487 Nitric Oxide Synthase Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 208000007117 Oral Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241001437281 Piophila casei Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 229920000294 Resistant starch Polymers 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 206010049416 Short-bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 206010001584 alcohol abuse Diseases 0.000 description 1
- 208000025746 alcohol use disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037354 amino acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000386 athletic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005008 bacterial sepsis Diseases 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000007375 bacterial translocation Effects 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005370 electroosmosis Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 description 1
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 description 1
- PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N lactulose keto form Natural products OCC(=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PFCRQPBOOFTZGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004220 muscle function Effects 0.000 description 1
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229940012843 omega-3 fatty acid Drugs 0.000 description 1
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006014 omega-3 oil Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016236 parenteral nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000021254 resistant starch Nutrition 0.000 description 1
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
- A61P25/32—Alcohol-abuse
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/51—Bifidobacterium
- A23V2400/529—Infantis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Addiction (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Obesity (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
Abstract
本発明はｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの新規の菌株、特にＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ種（これは、腸管内で生存する、あるいは、ｉｎ ｖｉｖｏでグルタミン及び必要に応じてアルギニンを産生する能力を有する）に、そして前記菌株を含有する組成物にも関する。
Description
発明の分野
本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏでグルタミン及び必要に応じてアルギニンを産生する能力を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株に関する。
本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏでグルタミン及び必要に応じてアルギニンを産生する能力を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株に関する。
発明の背景
グルタミンは、体内で最も豊富なアミノ酸である。それは、組織間の「窒素シャトル（Ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｈｕｔｔｌｅ）」及び腸細胞、結腸細胞（ｃｏｌｏｎｏｃｙｔｅ）、リンパ球及び増殖細胞の燃料である。グルタミン欠乏患者においては消化管の機能が害され、これは特に、腸管内腔から門脈循環への細菌及び／またはエンドトキシンのトランスロケーションに対する保護が損なわれているためである。グルタミンが欠乏すると、深刻な疾患の及び損傷を受けた患者となり、そして、高頻度の感染や筋肉の消耗の一因となり得る。
グルタミンは、体内で最も豊富なアミノ酸である。それは、組織間の「窒素シャトル（Ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｈｕｔｔｌｅ）」及び腸細胞、結腸細胞（ｃｏｌｏｎｏｃｙｔｅ）、リンパ球及び増殖細胞の燃料である。グルタミン欠乏患者においては消化管の機能が害され、これは特に、腸管内腔から門脈循環への細菌及び／またはエンドトキシンのトランスロケーションに対する保護が損なわれているためである。グルタミンが欠乏すると、深刻な疾患の及び損傷を受けた患者となり、そして、高頻度の感染や筋肉の消耗の一因となり得る。
グルタミンを腸に投与することにより、あらゆる症状の患者に健康的で有益な効果をもたらしている。集中治療室の多臓器不全患者においてグルタミン投与は、患者における感染症の併発が減少した（Houdijk et al., Lancet, 352:772-776, 1998）。同様の効果が、グルタミンを補充した非経口的栄養を受ける骨髄移植を行った患者において観察された（Ziegler et al., Annals Internal Medicine, 116:821-828, 1992）。他の例は短小腸症候群の患者でみられ、これはグルタミン補給後に吸収能が相当改善した（Byrne et al., Annals of Surgery, 222:243-255, 1995）。化学療法中及び後の経口グルタミン補給も、化学療法が関与する口内炎の持続時間及び重篤度の両方が著しく減少することが示された。経口グルタミンは、集中的癌化学療法の結果として口腔潰瘍発生のハイリスクの多くの患者の快適性を増加する単純及び有用な手段のようであると結論付けられた（Anderson et al., Cancer 1998; 83:1433-9）。激しい運動の後のグルタミンの栄養補給も、感染症の発生、特に、上気道感染を減少している（Castell , Amino acids 2001; 20（1）:49-61）。しかし、免疫抑制に対するグルタミンの正確な効果はいまだ確立されていない。
グルタミンに関する主な技術的な困難性は、加工及び保存中にグルタミンは容易にグルタミン酸（グルタメート）に変化することであり、すなわち、グルタミンは、経口投与を目的とする製剤に組み込むことが困難な比較的不安定な化合物である。さらに、経口投与したグルタミンは、胃の酸性環境ではかなりの割合がグルタミン酸に変化し、そして、決して腸に到達せず、そしてグルタミンとして吸収され得ない。
アルギニンは免疫機能を高め、創傷治癒を助長する。アルギニン投与は、術後の患者及び集中治療下の患者に対して使用される。多くの臨床研究において、アルギニンはＲＮＡ及び魚油のような他の物質と共に投与されている。アルギニン投与は、術後の免疫応答を調節することが指摘されている。Daly, John E., et al. Surgery 112:55-67, 1992では、アルギニン、ＲＮＡ及びオメガ−３−脂肪酸を補足した経腸栄養剤を術後の患者に投与すると、種々のメカニズムを通して免疫防御が改善することを示している。アルギニンは、化学放射線療法及び手術を受けた患者の合併症を軽減し（Tepaske et al., 2001; Lancet 358: 696-701）、そして、患者が集中治療室に滞在する期間を短縮する（Bauer et al., 1995, Critical Case Medicine 23: 436-449）。
生存期間の増加は、アルギニン補給食を摂取させた動物において観察され得た。定量的なコロニー数及び残存している生菌の算出率は、アルギニンを摂取した動物において、移動した生物体を殺す能力がかなり高くなっていることを示している（Adawi, D., et al., 1997, Hepatology 25: 642-647）。
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．菌株、すなわちビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）は、ヒトの大腸、特に母乳育ちの赤ん坊に、たいてい多数存在する。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．由来の細菌は、プロバイオティクス（すなわち、摂取することにより宿主に健康的で有益な効果を提供する生きている細菌）とみなされている。大腸中の多数のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．は、健康的で有益な効果を有すると主張されている。しかし、前記の有益な効果の作用機構はほとんど知られていない。
先行技術
Matteuzzi et al. ［Ann. Microbiol.（Inst. Pasteur）1978; 129 B, 175-181］は異なる生息地由来の多数のビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏ−ｂａｃｔｅｒｉａ）において、培養液中に遊離アミノ酸を放出するそれらの能力について調査した。得られたデータは、Ｂｉｆｉｄｏ−ｂａｃｔｅｒｉａの幾つかの種は増殖に必要な全てのアミノ酸を合成でき、そしてまた、培養液中に前記化合物を放出できることを示した。Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ及びＢ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓは最も優れた生産菌であることが分かり、そして、培養液中に最も一般的に見られるアミノ酸は主にアラニン、バリン及びアスパラギン酸であった。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．は消化管のアミノ酸代謝を担うと推測された。
Matteuzzi et al. ［Ann. Microbiol.（Inst. Pasteur）1978; 129 B, 175-181］は異なる生息地由来の多数のビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏ−ｂａｃｔｅｒｉａ）において、培養液中に遊離アミノ酸を放出するそれらの能力について調査した。得られたデータは、Ｂｉｆｉｄｏ−ｂａｃｔｅｒｉａの幾つかの種は増殖に必要な全てのアミノ酸を合成でき、そしてまた、培養液中に前記化合物を放出できることを示した。Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ及びＢ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓは最も優れた生産菌であることが分かり、そして、培養液中に最も一般的に見られるアミノ酸は主にアラニン、バリン及びアスパラギン酸であった。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．は消化管のアミノ酸代謝を担うと推測された。
ＷＯ０１／８３７００（メリーランド大学）は、胃腸障害、新生児壊死性腸炎（ＮＥＣ）及び細菌性敗血症の治療及び予防用の組成物及び方法を開示している。該組成物はグラム（＋）細菌（特に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）とグルタミンの組み合わせを含有しており、そして、経口的に及び鼻口的に投与されるべきである。該組成物はグラム（−）細菌のような細菌性因子の移動を妨害すると言われている。
静脈を経由して投与したグルタミンは非常に効果的だが、高価で煩雑である。グルタミンを投与するより良い方法は、当然、腸内でかなりの量のグルタミンを産生できる能力を有する細菌株を使用することであろう。しかし、これまでに、このような菌株についての記載はない。
本発明の要約
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの特定の菌株がヒト大腸内の環境を模倣した増殖培地中でグルタミンを産生できることを驚くべきことに今日発見した。そして、前記の菌株は、哺乳類、特にヒトに対して経口で、または、腸に投与した後にｉｎ ｖｉｖｏでグルタミンを産生するために使用し得る。菌株によってはアルギニンも産生し得る。
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの特定の菌株がヒト大腸内の環境を模倣した増殖培地中でグルタミンを産生できることを驚くべきことに今日発見した。そして、前記の菌株は、哺乳類、特にヒトに対して経口で、または、腸に投与した後にｉｎ ｖｉｖｏでグルタミンを産生するために使用し得る。菌株によってはアルギニンも産生し得る。
本発明の記載
本発明は、腸管内で生存する能力及びｉｎ ｖｉｖｏでグルタミンを産生する能力を有するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株に関する。特に、グルタミンはヒトの大腸で産生される。このような環境で生存するということは、各個体由来の糞便において、異なるサンプリング時に、細菌株が分離されることを意味する。従って、細菌は、しばらくの間、それらの宿主内で明らかに増殖し、そして生存する。本発明のビフィドバクテリウム菌株（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ）は、ｐＨ７以下、特に５．５−６．５の栄養培地で増殖できる。ロゴサ寒天培地（Ｒｏｇｏｓａ ａｇａｒ）はこのような培地の一例であり、もう一つはＭＲＳである。
本発明は、腸管内で生存する能力及びｉｎ ｖｉｖｏでグルタミンを産生する能力を有するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株に関する。特に、グルタミンはヒトの大腸で産生される。このような環境で生存するということは、各個体由来の糞便において、異なるサンプリング時に、細菌株が分離されることを意味する。従って、細菌は、しばらくの間、それらの宿主内で明らかに増殖し、そして生存する。本発明のビフィドバクテリウム菌株（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ）は、ｐＨ７以下、特に５．５−６．５の栄養培地で増殖できる。ロゴサ寒天培地（Ｒｏｇｏｓａ ａｇａｒ）はこのような培地の一例であり、もう一つはＭＲＳである。
好ましい側面に従うと、新規の菌株はアンモニアを同化する能力も有する。
本発明は特に、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ種に属する菌株に関する。
特定の側面に従うと、本発明はまた、染色体ＤＮＡをＨｉｎｄ ＩＩＩで切断し、続いてアガロースゲル電気泳動により断片を分離し、そして、サザンブロットハイブリダイゼーションを利用して、Ｌ．ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｐｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０００８の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子をＤＩＧ標識した４２０ｂｐ断片プローブ（Ｅ.ｃｏｌｉ番号付けで、位置５０６〜９２６）とのハイブリダイゼーションにより得た、分子サイズ約２８４０ｋｂのシングルＤＮＡ断片上に位置する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株に関する。このような菌株は、例えば、the Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbHに2002年8月23日に寄託された菌株、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９（ＤＳＭ １５１５８）；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２１（ＤＳＭ １５１５９）；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６（ＤＳＭ １５１６０）；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８（ＤＳＭ １５１６１）；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９（ＤＳＭ １５１６２）である。
他の側面に従うと、本発明は、染色体ＤＮＡをＥｃｏＲＩで切断し、続いてアガロースゲル電気泳動により断片を分離し、そして、サザンブロットハイブリダイゼーションを利用して、Ｌ．ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｐｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０００８の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子をＤＩＧ標識した４２０ｂｐ断片プローブ（Ｅ.ｃｏｌｉ番号付けで位置５０６〜９２６）とのハイブリダイゼーションにより得た、分子サイズ約８９５ｋｂのシングルＤＮＡ断片上に位置する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株にも関する。好ましい側面に従うと、前記菌株はグルタミン酸を減少させることなくグルタミンを産生できる。
本発明は特に、菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２１及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６（これらはthe Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH に2002年8月23日に寄託され、そして、それぞれ、アクセッション番号ＤＳＭ １５１５９及びＤＳＭ １５１６０が与えられている）、またはこれらの変異株に関する。前記菌株は、グルタミン酸を減少させることなくグルタミンを産生できる。
もう一つの側面に従うと、本発明は、染色体ＤＮＡをＥｃｏＲＩで切断し、続いてアガロースゲル電気泳動により断片を分離し、そして、サザンブロットハイブリダイゼーションを利用して、Ｌ．ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｐｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０００８の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＤＩＧ標識した４２０ｂｐ断片プローブ（Ｅ.ｃｏｌｉ番号付け、位置５０６〜９２６）とのハイブリダイゼーションにより得た、分子サイズ約３４２０ｋｂのシングルＤＮＡ断片上に位置する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株にも関する。好ましい側面に従うと、前記菌株はアルギニン産生能を有する。
本発明は特に以下の菌株（これらは全てthe Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH に2002年8月23日に寄託され、そして寄託番号が与えられており、それはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９、ＤＳＭ １５１５８、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８、ＤＳＭ １５１６１及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９、ＤＳＭ １５１６２である菌株）、及び、これらの変異株にも関する。前記菌株は、グルタミンに加えてアルギニンも産生できる。
新規の菌株は、全て幼い子供由来の糞便から分離し、そして、ｐＨ７以下の寒天上で培養することにより選択した。該菌株は、その後、リポタイピング及びＲＥＡにより特徴づけられた。
本発明のもう一つの目的は、１以上の本発明のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株を担体と組み合わせて含有する組成物である。担体の例は、オートミールかゆ、乳酸発酵食品、イヌリン、ラクツロース、フルクトオリゴ糖、レジスタントスターチ（ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ ｓｔａｒｃｈ）、β−グルカン及びグアーガムである。ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）の増殖を促進し、そしてグルタミン及びアルギニンのそれぞれの産生量を増加させ、大腸でのアンモニア同化を高めるために、食物繊維も組成物に加えられるべきである。食物繊維は、例えばイヌリン、フルクトオリゴ糖、マルトデキストリン、β−グルカン及びグアーガムである。このように、本発明は、さらに食物繊維を含有する記載したような組成物にも関する。
本発明の組成物（懸濁液、錠剤、カプセル、粉末のような）は経口投与され得る。これらは浣腸剤としても投与され得る。
本発明の組成物は、担体が食品である食品組成物であり得る。グルタミン産生Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株は、若い子供、年配者、筋肉機能を改善して健康を保つこと及び運動後の免疫低下を回避することを望む運動競技や通常の消費者に与えられ得る。アルギニン産生Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株は、健康を保ち、そして免疫機能における良くない影響を避けることを望む通常の消費者に与えられ得る。
本発明の組成物は薬学的組成物であり得、ここで、担体は、治療的に許容される担体である。グルタミン産生株は（アルギニン産生株と同様に）、さらに経腸栄養法の様式で使用され得る。
本発明のアンモニアを同化するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株は、手術及び合併症の後の、あるいは重篤な感染症、中毒のような他の疾患の後の、集中治療下の患者にみられるような一時的な腎不全を有する患者に与えられ得る。このような場合、腎機能が回復することが予測でき、そして、消化官から負荷される窒素を減少させることを目的とする治療により、透析の必要性を回避し得る。アンモニアを同化する菌株は、肝疾患や脳症（例えば、肝炎または中毒あるいはそれに続くアルコール乱用）の患者に投与され得る。消化官からの窒素含有物質の吸収が低下すると、これらの状況において、脳症及び肝機能が改善し得る。アンモニアを同化するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株は、若い子供、年配者または、アンモニアを尿素に変換する肝臓の働きを妨害する疾患を患っている、または、消化管からの窒素の吸収が増加している消費者（例えば、移植または透析の必要がまだない軽度から中程度の慢性の腎または肝不全患者）に与えられ得る。
特定の側面に従うと、本発明の組成物は１以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ菌株も含有し得る。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉの任意の有益な効果に加えて、前記細菌が酸素の有害な影響からビフィズス菌（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）を保護し得る。
もう一方の側面に従うと、本発明は、治療での使用のための、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ種に属する１以上の菌株に関する。
本発明は、多臓器不全及び腸不全を有する集中治療患者を治療するための、化学療法患者及び炎症性疾患を有する患者を予防するための、及び、大手術後に術後投与するための薬剤の調製のための、１以上の菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９、ＤＳＭ １５１５８；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２１、ＤＳＭ １５１５９；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６、ＤＳＭ １５１６０；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８、ＤＳＭ １５１６１；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９、ＤＳＭ １５１６２；またはこれらの変異株の使用に関する。
実験
菌株の分離
全ての菌株は若い子供（生後１週間〜１年）の糞便から分離した。糞便試料を希釈溶液（０．９％［ｗ／ｖ］ＮａＣｌ、０．１％［ｗ／ｖ］ペプトン、０．１％［ｗ／ｖ］Ｔｗｅｅｎ８０、０．０２％［ｗ／ｖ］システイン−ＨＣｌ）で連続的に希釈し、次に、ロゴサ寒天平板上に塗抹した。分離株はロゴサ寒天培地（ｐＨ５．４）上でのそれらの増殖能を考慮して選択し、そして、一個体から繰り返し分離した。３７℃で７２時間培養した後、ロゴサ寒天平板から分離株を採取した。これらを、属特異的なＰＣＲ（Roy et al., 2000; FEMS Microbiological Letters 191:17-24）により属レベルまで同定し、次いで、１６Ｓ ｒＤＮＡシークエンスにより種レベルまで同定した（Pettersson et al., 2002; Systematic and Applied Microbiology 23:332-336）。菌株は、サンプリングの間１〜４週間に、同じ個体から少なくとも２回分離され得、これは、菌株が胃腸管（ＧＩ−ｔｒａｃｔ）にコロニーを形成する特定の能力を有することを強く示している。リボタイピング（すなわち、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の制限断片長多型（ＲＦＬＰ）である）により菌株を同定し、次いで、ＲＥＡ（すなわち、制限エンドヌクレアーゼ分析）により同定した。
菌株の分離
全ての菌株は若い子供（生後１週間〜１年）の糞便から分離した。糞便試料を希釈溶液（０．９％［ｗ／ｖ］ＮａＣｌ、０．１％［ｗ／ｖ］ペプトン、０．１％［ｗ／ｖ］Ｔｗｅｅｎ８０、０．０２％［ｗ／ｖ］システイン−ＨＣｌ）で連続的に希釈し、次に、ロゴサ寒天平板上に塗抹した。分離株はロゴサ寒天培地（ｐＨ５．４）上でのそれらの増殖能を考慮して選択し、そして、一個体から繰り返し分離した。３７℃で７２時間培養した後、ロゴサ寒天平板から分離株を採取した。これらを、属特異的なＰＣＲ（Roy et al., 2000; FEMS Microbiological Letters 191:17-24）により属レベルまで同定し、次いで、１６Ｓ ｒＤＮＡシークエンスにより種レベルまで同定した（Pettersson et al., 2002; Systematic and Applied Microbiology 23:332-336）。菌株は、サンプリングの間１〜４週間に、同じ個体から少なくとも２回分離され得、これは、菌株が胃腸管（ＧＩ−ｔｒａｃｔ）にコロニーを形成する特定の能力を有することを強く示している。リボタイピング（すなわち、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の制限断片長多型（ＲＦＬＰ）である）により菌株を同定し、次いで、ＲＥＡ（すなわち、制限エンドヌクレアーゼ分析）により同定した。
以下の菌株を分離した。：
１）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆをある程度まで発酵でき、発酵後は“すっぱい（ｓｏｕｒ）”においを発する。
１）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆをある程度まで発酵でき、発酵後は“すっぱい（ｓｏｕｒ）”においを発する。
２）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＣＵＲＥ ２０；ロゴサ寒天上で増殖でき、オートミールかゆをある程度まで発酵でき、発酵後は“すっぱい”においを発する。
３）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２１；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆをある程度まで発酵でき、発酵後は“すっぱい”においを発する。
４）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＣＵＲＥ ２２；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆをある程度まで発酵でき、発酵後は“よい（ｎｉｃｅ）”においを発する。
５）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＣＵＲＥ ２３；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆをある程度まで発酵でき、発酵後は“よい”においを発する。
６）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２４；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆをある程度まで発酵でき、発酵後は“よい”においを発する。
７）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＣＵＲＥ ２５；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆを発酵できる。
８）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆを発酵できる。
９）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｅｎｔｉｕｍ ＣＵＲＥ ２７；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆを発酵できる。
１０）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆを発酵できる。
１１）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆを発酵できる。
１２）Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ３０；ロゴサ寒天上で増殖でき、そして、オートミールかゆを発酵できる。
グルタミン産生
以下の手順により、ブロスにおけるグルタミン産生について、分離株１−１２を試験した。
以下の手順により、ブロスにおけるグルタミン産生について、分離株１−１２を試験した。
試験菌株を、Matteuzzi et al.（Ann. Microbil. （Inst. Pasteur, 1978, 129 B:175-181））により記載された培地を改良した増殖培地（ブロス）中、３７℃で４日間培養した。ブロスは以下から構成された：酢酸ナトリウム、１０ｇ／ｌ；アスコルビン酸、１０ｇ／ｌ；硫酸アンモニウム（（ＮＨ４）２ＳＯ４）、５ｇ／ｌ；リン酸水素二カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、３ｇ／ｌ；リン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）、３ｇ／ｌ；ＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、０．３２ｇ／ｌ；ＦｅＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、０．０１ｇ／ｌ；ＭｎＳＯ４Ｈ２Ｏ、０．００７ｇ／ｌ；ＮａＣｌ、０．０１ｇ／ｌ；酵母エキス、０．５ｇ／ｌ；グルコース、２０ｇ／ｌ；Ｔｗｅｅｎ ８０、１ｍｌ／ｌ。ｐＨは、オートクレーブの前に１Ｍ ＮａＯＨで６．１８−６．２４に調整した。
ブロス中のグルタミン濃度は、細菌の接種前及び試験菌株の増殖後に測定した。増殖後、培養液を遠心分離し、次いで、無菌的にろ過し、その後、細胞のない上清を−８０℃で冷凍した。スルホサリチル酸を添加し、そして水酸化リチウムでｐＨを調整した後に、アミノ酸を自動アナライザー（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ２０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で分析した。
種々の試験菌株が増殖した後のブロス中のグルタミン及びグルタミン酸濃度の増加を、以下の表１に示す。
全ての試験菌株が幾分かのグルタミンを産生したが、１２の試験菌株のうち７菌株だけが比較的多量のグルタミンを産生した（＞２０μｍｏｌ／ｌ）。２菌株（ＣＵＲＥ２１及びＣＵＲＥ２６）を除く全てにおいて、培地中のグルタミン酸のかなりの減少に伴いグルタミンが増加した。細菌を添加していない培地では、グルタミン酸の平均初期濃度は２２３μｍｏｌ／ｌであり、一方、グルタミン含有量は０であった。ＣＵＲＥ２０、ＣＵＲＥ２３及びＣＵＲＥ２４の３菌株は、培地中の全ての利用可能なグルタミン酸を消費し、一方、ＣＵＲＥ２８では２４７μｍｏｌ／ｌ、ＣＵＲＥ２９では２２０μｍｏｌ／ｌ、ＣＵＲＥ２２では１８７μｍｏｌ／ｌ、ＣＵＲＥ１９では１２８μｍｏｌ／ｌ、ＣＵＲＥ３０では１６０μｍｏｌ／ｌ、ＣＵＲＥ２７では１５１μｍｏｌ／ｌ及びＣＵＲＥ２５では４７μｍｏｌ／ｌでグルタミン酸濃度が減少した。これらの細菌がグルタミン酸をグルタミンに変換したかどうか推測し得る。２つの菌株（ＣＵＲＥ２１及びＣＵＲＥ２６）は培地中のグルタミン酸濃度を全く低下させることなくグルタミンを産生した。他の菌株とは対照的に、それらはブロス中のグルタミン酸濃度を高めた。
アルギニン産生
各試験菌株のアミノ酸産生は、Matteuzzi et al.（1978）により記載された培地を改良した増殖培地（ブロス）中、３７℃で４日間試験菌株を増殖させた後に測定した。該ブロスは以下を含む：酢酸ナトリウム、１０ｇ／ｌ；アスコルビン酸、１０ｇ／ｌ；硫酸アンモニウム（（ＮＨ４）２ＳＯ４）、５ｇ／ｌ；リン酸水素二カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、３ｇ／ｌ；リン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）、３ｇ／ｌ；ＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、０．３２ｇ／ｌ；ＦｅＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、０．０１ｇ／ｌ；ＭｎＳＯ４Ｈ２Ｏ、０．００７ｇ／ｌ；ＮａＣｌ、０．０１ｇ／ｌ；酵母エキス、０．５ｇ／ｌ；グルコース、２０ｇ／ｌ；Ｔｗｅｅｎ ８０、１ｍｌ／ｌ。ｐＨは、オートクレーブ処理の前に１Ｍ ＮａＯＨで６．１８−６．２４に調整した。
各試験菌株のアミノ酸産生は、Matteuzzi et al.（1978）により記載された培地を改良した増殖培地（ブロス）中、３７℃で４日間試験菌株を増殖させた後に測定した。該ブロスは以下を含む：酢酸ナトリウム、１０ｇ／ｌ；アスコルビン酸、１０ｇ／ｌ；硫酸アンモニウム（（ＮＨ４）２ＳＯ４）、５ｇ／ｌ；リン酸水素二カリウム（Ｋ２ＨＰＯ４）、３ｇ／ｌ；リン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）、３ｇ／ｌ；ＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、０．３２ｇ／ｌ；ＦｅＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、０．０１ｇ／ｌ；ＭｎＳＯ４Ｈ２Ｏ、０．００７ｇ／ｌ；ＮａＣｌ、０．０１ｇ／ｌ；酵母エキス、０．５ｇ／ｌ；グルコース、２０ｇ／ｌ；Ｔｗｅｅｎ ８０、１ｍｌ／ｌ。ｐＨは、オートクレーブ処理の前に１Ｍ ＮａＯＨで６．１８−６．２４に調整した。
該ブロス中のアミノ酸濃度は、細菌を接種する前及び試験菌株の増殖後に測定した。増殖後、培養液を遠心分離し、次いで無菌的にろ過し、続いて細胞のない上清を−８０℃で冷凍した。アミノ酸はスルホサリチル酸を添加し、そして水酸化リチウムでｐＨを調整した後に、自動アナライザー（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ２０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で分析した。
種々の試験菌株の増殖後のブロス中のアルギニン及びシトルリンの濃度の増加を、表２に示す。
１２の試験菌株のうち３株では、アルギニン濃度が１０μｍｏｌ／ｌより多く増加した（すなわち、ＣＵＲＥ１９、ＣＵＲＥ２８及びＣＵＲＥ２９）。前記菌株のうち２つは、シトルリンもかなり多量に産生した（＞１００μｍｏｌ／ｌ）（すなわち、ＣＵＲＥ１９及びＣＵＲＥ２８）。シトルリンはアルギニンの脱アミノ化によって、もしくは、ＮＯ−合成酵素及びＮＯ産生のいずれかによって産生される。シトルリン産生はまた、初期段階におけるアルギニン産生を反映する。
また、試験菌株の増殖中、ブロス中に他のアミノ酸も浸透した（表３参照）。ＣＵＲＥ２１はシトルリンまたはアルギニンのいずれも産生しなかったが、多量のアスパラギン酸及びチロシンを産生した。ＣＵＲＥ２６はシトルリンは全く産生しなかったが、非常に少量のアルギニン、及び、広範囲のスペクトルにおいて種々のアミノ酸を産生した。さらに、ＣＵＲＥ２６は、ブロス中のプロリン濃度を増加させた唯一の試験菌株であった。全ての試験菌株はトレオニンを産生した。
値は、３つまたは２つのそれぞれの培養物由来の３つまたは２つの試料の平均値を表す。
遺伝子型の同定
ＲＥＡ
菌株は、染色体ＤＮＡの切断パターンについて、制限エンドヌクレアーゼ分析−ＲＥＡ−法（Stahl M, Molin G, Persson A, Ahrne S及びStahl S, International Journal of Systematic Bacteriology, 40:189-193, 1990に従う、及び、さらにJohansson, M-L., et al., International Journal of Systematic Bacteriology, 45:670-675, 1995により開発された方法）により試験した。ＲＥＡについて、以下のように概略を示し得る：本研究に伴う菌株由来の染色体ＤＮＡを準備し、次いで、制限エンドヌクレアーゼにより切断した。０．７５μｇの各ＤＮＡは、１０ユニットのＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄ ＩＩＩを用いて、３７℃で４時間それぞれ消化した；各エンドヌクレアーゼは別々に使用した。切断されたＤＮＡ断片は、サブマージ水平型アガロース平板ゲル（ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ａｇａｒｏｓｅ ｓｌａｂ ｇｅｌｓ）を使用したゲル電気泳動によりサイズについて分離した。ゲルは１５０ｍｌの０．９％アガロースからなり（超純粋ＤＮＡグレード；低電気浸透（ｌｏｗ ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｄｏ ｏｓｍｏｓｉｓ）；ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＭＤ， ＵＳＡ）、そして平板ゲルとしてキャストされた（１５０×２３５ｍｍ）。０．２μｇの高分子量ＤＮＡマーカー（Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＭＤ， ＵＳＡ）は、０．５μｇのＤＮＡ分子量マーカーＶＩ（Ｒｏｃｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と共に、スタンダードとして使用した。フィコールローディングバッファー（Ｆｉｃｏｌｌ ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）（２ｇのフィコール、８ｍｌの水、０．２５％のブロムフェノール）中で試料のＤＮＡをアプライすることにより、最小のバンドの歪みと最大の鮮明さを達成した。
ＲＥＡ
菌株は、染色体ＤＮＡの切断パターンについて、制限エンドヌクレアーゼ分析−ＲＥＡ−法（Stahl M, Molin G, Persson A, Ahrne S及びStahl S, International Journal of Systematic Bacteriology, 40:189-193, 1990に従う、及び、さらにJohansson, M-L., et al., International Journal of Systematic Bacteriology, 45:670-675, 1995により開発された方法）により試験した。ＲＥＡについて、以下のように概略を示し得る：本研究に伴う菌株由来の染色体ＤＮＡを準備し、次いで、制限エンドヌクレアーゼにより切断した。０．７５μｇの各ＤＮＡは、１０ユニットのＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄ ＩＩＩを用いて、３７℃で４時間それぞれ消化した；各エンドヌクレアーゼは別々に使用した。切断されたＤＮＡ断片は、サブマージ水平型アガロース平板ゲル（ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ａｇａｒｏｓｅ ｓｌａｂ ｇｅｌｓ）を使用したゲル電気泳動によりサイズについて分離した。ゲルは１５０ｍｌの０．９％アガロースからなり（超純粋ＤＮＡグレード；低電気浸透（ｌｏｗ ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｄｏ ｏｓｍｏｓｉｓ）；ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＭＤ， ＵＳＡ）、そして平板ゲルとしてキャストされた（１５０×２３５ｍｍ）。０．２μｇの高分子量ＤＮＡマーカー（Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＭＤ， ＵＳＡ）は、０．５μｇのＤＮＡ分子量マーカーＶＩ（Ｒｏｃｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と共に、スタンダードとして使用した。フィコールローディングバッファー（Ｆｉｃｏｌｌ ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）（２ｇのフィコール、８ｍｌの水、０．２５％のブロムフェノール）中で試料のＤＮＡをアプライすることにより、最小のバンドの歪みと最大の鮮明さを達成した。
約６−８℃で１８時間、４０Ｖの一定圧でゲルを泳動した。泳動中に、バッファー（８９ｍＭ Ｔｒｉｓ、２３ｍＭ Ｈ３ＰＯ４、２ｍＭ ＥＤＴＡナトリウム、ｐＨ８．３）を再循環させた。その後、ゲルをエチジウムブロマイド（２μｇ／ｍｌ）で２０分間染色し、次いで蒸留水で汚れを落とし、ＵＶトランスイルミネーター（ＵＶＰ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｇａｂｒｉｅｌ，ＵＳＡ）により３０２ｎｍで可視化し、そして写真を撮った。ゲル電気泳動を行うこの方法では、分子量１．２×１０６に至るまで良好に分散し及び比較的良好に分離されたバンドが得られる。
１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＲＦＬＰ（リボタイピング）
染色体の調製及び染色体ＤＮＡの制限エンドヌクレアーゼ分析は、先に述べたように行った（Stahl et al., 1990, Stahl et al., 1994）。
染色体の調製及び染色体ＤＮＡの制限エンドヌクレアーゼ分析は、先に述べたように行った（Stahl et al., 1990, Stahl et al., 1994）。
プローブはＬ．ｃａｓｅｉ ｓｐｐ．ｐｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０００８の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の４２０ｂｐの断片（Ｅ.ｃｏｌｉ番号付けで、位置５０６〜９２６）であり、これは、ＰＣＲにより得られ、製造業者（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ， Ｂｒｏｍｍａ，Ｓｗｅｄｅｎ）により供給される使用説明書に従ったＤＩＧ ＤＮＡ標識技術により標識した。反応に使用したプローブ量は５０ｎｇであった。
サザンブロットハイブリダイゼーション．１μｇの染色体ＤＮＡを１０ＵのＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄ ＩＩＩ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で３７℃で４時間消化した。アガロースゲル電気泳動による制限断片の分離は、Stahl et al., 1994に従って行った。ＤＩＧ−標識分子量ＤＮＡマーカーＩＩ及び分子量ＤＮＡマーカーＶＩは、スタンダードとして使用した（Ｒｏｃｈｅ， Ｇｅｒｍａｎｙ）。ＤＮＡは、正に帯電したナイロン膜（Ｒｏｃｈｅ）上に１２０℃で３０分間ベーキングすることにより固定した。プレハイブリダイゼーション、ハイブリダイゼーション及び基質ＣＳＰＧ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ）を使用したケモルミネッセント検出は、製造業者により提供される使用説明書に従って行った。ハイブリダイゼーション温度は６８℃であった。試験の結果、染色体ＤＮＡをＨｉｎｄ ＩＩＩで切断した場合、全ての菌株（ＣＵＲＥ１９、２１、２６、２８及び２９）において、分子量約２８４０ｋｂの１つのシングルバンドが生じた。染色体ＤＮＡをＥｃｏＲＩで切断した場合、菌株ＣＵＲＥ２１及び２６において、分子量約８９５ｋｂのシングル断片上に１６Ｓ ｒＲＮＡに関する遺伝子が存在し、一方、分子量約３２４０ｋｂのもう１つのシングルバンドが、ＣＵＲＥ１９、２８及び２９において得られた。
ｉｎ ｖｉｖｏでの試験
試験１．ラットの大腸炎を誘発するＤＤＳに対するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株の影響
本研究の目的は、ラットの大腸炎を誘発するＤＤＳ（デキストラン硫酸ナトリウム（Dextran Sodium Sulfate））に対するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株の効果を比較することであった。
試験１．ラットの大腸炎を誘発するＤＤＳに対するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株の影響
本研究の目的は、ラットの大腸炎を誘発するＤＤＳ（デキストラン硫酸ナトリウム（Dextran Sodium Sulfate））に対するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株の効果を比較することであった。
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを６つの群に分け、１つは対照群（細菌を投与しない大腸炎）、そして、５つの群は異なる細菌株（それぞれ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ８７００：２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＧ１、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ３Ｂ１及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９）を投与した。大腸炎を誘発する前に、細菌株を７日間経口投与し（０日）、そして、ＤＤＳ（５％ ｗ／ｖとなるよう水に溶解）と組み合わせて連続的に７日間投与した。大腸炎の程度は毎日ＤＡＩ（疾患活動指数（Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ））で決定した。サンプリングは１４日間行い、そして、腸における細菌の移動や量を測定した。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ３Ｂ１及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＣＵＲＥ １９を投与した群において、ＤＡＩは、対照群と比較して、４、５、６及び７日目に有意に減少した。さらに、６及び７日後、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ８７００：２及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＧ１を受けた群と比較して、Ｂ． ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９を受けた群ではＤＡＩが有意に低下した。対照の大腸炎と比較すると、腸間膜リンパ節への細菌のトランスロケーションは、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅの肝臓への移動と同様に、全ての群において有意に低下した。
結論として、細菌株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ８７００：２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＬＧ１、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ３Ｂ１及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９を経口投与すると、ラットにおける実験的な大腸炎でのトランスロケーションを減少することによって、ポジティブな効果を及ぼし得る。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ２９９ｖ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ３Ｂ１及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９は、ＤＤＳにより誘発された大腸炎のラットのＤＡＩを向上する上で、最も顕著な効果を示した。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９は、投与後６日目及び７日目に、大腸炎を抑制する上で他のものより多少効果的であった。図６を参照のこと。
試験２．経口投与後の胃腸管におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及び／またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの生存
ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓまたはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを経口投与すると種々のポジティブな効果がもたらされ、例えば、抗生物質が関与した下痢を予防する（D’ Souza et al., 2002, BMJ 324:1361）。
ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓまたはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを経口投与すると種々のポジティブな効果がもたらされ、例えば、抗生物質が関与した下痢を予防する（D’ Souza et al., 2002, BMJ 324:1361）。
細菌が経口投与で生存し、そして、腸内で生存及び増殖する能力を有する場合に、ポジティブな効果が達成され得る。プロバイオティクスとして使用し得る適切な菌株を見出すために、多数の可能な見込みのありそうな菌株を健康な被験体に経口投与する。糞便中の投与した菌株の割合を測定することにより、高い生存能を有する菌株を同定した。本研究の目的は、ヒトの胃腸管内で生存及び増殖するための優れた能力を有している経口投与が可能な菌株を見出すことである。
本願の構想
４週間、１４のボランティアの被験体に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの約２０の種々の菌株の混合物を飲ませる。全ての菌株は、ヒトまたは乳酸産生食品に生息する代表的な菌株である。糞便の採取は投与前、投与した３週間後、そして、投与後の１週間に行う。細菌フローラは生菌数測定及びＲＡＰＤ（ランダム増幅多型ＤＮＡ（Ｒａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）；Johansson et al., 1995）により決定する。
４週間、１４のボランティアの被験体に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの約２０の種々の菌株の混合物を飲ませる。全ての菌株は、ヒトまたは乳酸産生食品に生息する代表的な菌株である。糞便の採取は投与前、投与した３週間後、そして、投与後の１週間に行う。細菌フローラは生菌数測定及びＲＡＰＤ（ランダム増幅多型ＤＮＡ（Ｒａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）；Johansson et al., 1995）により決定する。
結論
選択した菌株（すなわち、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９、ＤＳＭ １５１５８；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＣＵＲＥ ２１、ＤＳＭ １５１５９；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６、ＤＳＭ １５１６０；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８、ＤＳＭ １５１６１；及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９、ＤＳＭ １５１６２）は、経口投与した後、胃腸管を通過して生存し得るという結果を示している。ラットにおける研究はまた、実験的な大腸炎に対してポジティブな効果を発揮する可能性があることも示している。
選択した菌株（すなわち、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９、ＤＳＭ １５１５８；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＣＵＲＥ ２１、ＤＳＭ １５１５９；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６、ＤＳＭ １５１６０；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８、ＤＳＭ １５１６１；及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９、ＤＳＭ １５１６２）は、経口投与した後、胃腸管を通過して生存し得るという結果を示している。ラットにおける研究はまた、実験的な大腸炎に対してポジティブな効果を発揮する可能性があることも示している。
はＬ．ｇａｓｓｅｒｉと比較してｐ＜０．０５を意味し、＃はＬ．ｐａｒａｃａｓｉｅと比較してｐ＜０．０５を意味する。
Claims (20)
- 腸管内で生存する、及び、ｉｎ ｖｉｖｏでグルタミンを産生する能力を有するＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株。
- アンモニアを同化する能力を有する請求項１に記載の菌株。
- 該菌株がＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ種に属する請求項１または２に記載の菌株。
- Ｈｉｎｄ ＩＩＩで染色体ＤＮＡを切断し、続いてアガロースゲル電気泳動により断片を分離し、そして、サザンブロットハイブリダイゼーションを利用して、Ｌ．ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｐｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０００８の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＤＩＧ標識した４２０ｂｐ断片プローブ（Ｅ.ｃｏｌｉ番号付けで位置５０６〜９２６）とのハイブリダイゼーションにより得た分子サイズ約２８４０ｋｂのシングルＤＮＡ断片上に位置する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有する請求項１−３のいずれかに記載の菌株。
- ＥｃｏＲＩで染色体ＤＮＡを切断し、続いてアガロースゲル電気泳動により断片を分離し、そして、サザンブロットハイブリダイゼーションを利用して、Ｌ．ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｐｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０００８の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＤＩＧ標識した４２０ｂｐ断片プローブ（Ｅ.ｃｏｌｉ番号付けで位置５０６〜９２６）でのハイブリダイゼーションにより得た分子サイズ約８９５ｋｂのシングルＤＮＡ断片上に位置する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有する請求項１−４のいずれかに記載の菌株。
- ＥｃｏＲＩで染色体ＤＮＡを切断し、アガロースゲル電気泳動により断片を分離し、そして、サザンブロットハイブリダイゼーションを利用して、Ｌ．ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｐｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ ＤＳＭ ２０００８の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＤＩＧ標識した４２０ｂｐ断片プローブ（Ｅ.ｃｏｌｉ番号付けで５０６〜９２６）とのハイブリダイゼーションにより得た分子サイズ約３４２０ｋｂのシングルＤＮＡ断片上に位置する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を有する請求項１−４のいずれかに記載の菌株。
- 菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２１、ＤＳＭ １５１５９、または同一のＲＥＡ−パターンを本質的に有するこれらの変異株である請求項１−５のいずれかに記載の菌株。
- 菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６、ＤＳＭ １５１６０、または同一のＲＥＡ−パターンを本質的に有するこれらの変異株である請求項１−５のいずれかに記載の菌株。
- アルギニン産生能を有する請求項１−４及び６のいずれかに記載の菌株。
- 菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９、ＤＳＭ １５１５８、または同一のＲＥＡ−パターンを本質的に有するこれらの変異株である請求項１−４、６及び９のいずれかに記載の菌株。
- 菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８、ＤＳＭ １５１６１、または同一のＲＥＡ−パターンを本質的に有するこれらの変異株である請求項１−４、６及び９のいずれかに記載の菌株。
- 菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９、ＤＳＭ １５１６２、または同一のＲＥＡ−パターンを本質的に有するこれらの変異株である請求項１−４、６及び９のいずれかに記載の菌株。
- 担体と組み合わせた請求請１−１２のいずれかに記載の１菌株以上のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを含む組成物。
- 担体がオートミールかゆであることを特徴とする請求項１３に記載の組成物。
- 食物繊維も含有することを特徴とする請求項１３または１４に記載の組成物。
- 食品組成物であることを特徴とする請求項１３−１５のいずれかに記載の組成物。
- 薬学的組成物であることを特徴とし、ここで、担体が治療的に許容される担体であることを特徴とする請求項１３−１５のいずれかに記載の組成物。
- １以上のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ菌株もまた含有することを特徴とする請求項１３−１７のいずれかに記載の組成物。
- 治療に使用するためのＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ種に属する１以上の菌株。
- 多臓器不全及び腸不全を有する患者の集中治療処理のための、化学療法患者及び炎症性疾患を有する患者における予防のための、または大手術後の術後投与のための薬剤を調製のための、１以上の菌株Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ １９、ＤＳＭ １５１５８；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２１、ＤＳＭ １５１５９；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２６、ＤＳＭ １５１６０；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２８、ＤＳＭ １５１６１；Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ ＣＵＲＥ ２９、ＤＳＭ １５１６２；または、これらの変異株の使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE0300245A SE526711C2 (sv) | 2003-01-31 | 2003-01-31 | Nya stammar av Bifidobacterium med förmåga att överleva i magtarmkanalen och producera glutamin in vivo, samt kompositioner och användningar därav |
| US44727403P | 2003-02-14 | 2003-02-14 | |
| PCT/SE2004/000098 WO2004067731A1 (en) | 2003-01-31 | 2004-01-27 | New strains of bifidobacterium having the ability to produce glutamine |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2006516405A true JP2006516405A (ja) | 2006-07-06 |
| JP2006516405A5 JP2006516405A5 (ja) | 2010-07-01 |
| JP4540664B2 JP4540664B2 (ja) | 2010-09-08 |
Family
ID=20290264
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006502776A Expired - Lifetime JP4540664B2 (ja) | 2003-01-31 | 2004-01-27 | グルタミン産生能を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7947482B2 (ja) |
| EP (1) | EP1587913B1 (ja) |
| JP (1) | JP4540664B2 (ja) |
| CN (1) | CN100558883C (ja) |
| AT (1) | ATE496115T1 (ja) |
| AU (1) | AU2004208084B2 (ja) |
| BR (1) | BRPI0407176B8 (ja) |
| CA (1) | CA2514659C (ja) |
| DE (1) | DE602004031079D1 (ja) |
| DK (1) | DK1587913T3 (ja) |
| ES (1) | ES2362496T3 (ja) |
| PL (1) | PL212096B1 (ja) |
| RU (1) | RU2352628C2 (ja) |
| SE (1) | SE526711C2 (ja) |
| WO (1) | WO2004067731A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA200505777B (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2006296837B2 (en) | 2005-09-28 | 2012-12-13 | Nordic Rebalance A/S | Treatment of IBD and IBS using both probiotic bacteria and fermented cereal as treatment effectors |
| DK1951273T3 (da) * | 2005-10-06 | 2014-05-05 | Probi Ab | Anvendelse af lactobacillus til behandling af autoimmune sygdomme |
| JP5837879B2 (ja) * | 2010-07-05 | 2015-12-24 | 株式会社明治 | 腸内腐敗物質の低減作用を有するビフィズス菌 |
| CL2010001124A1 (es) | 2010-10-14 | 2011-01-21 | Univ De Concepcion 50% Ma Loreto Ormeno 50% | Alimento funcional probiotico que comprende cepas viables de lactobacillus sp.; uso de dicho alimento funcional para contrarestar los efectos colaterales de la quimioterapia. |
| KR20130049671A (ko) | 2011-11-04 | 2013-05-14 | 한미사이언스 주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법 |
| CN103131647B (zh) * | 2011-11-29 | 2017-06-27 | 上海上药信谊药厂有限公司 | 婴儿双歧杆菌及其制剂 |
| CN108771687A (zh) | 2012-02-29 | 2018-11-09 | 伊西康内外科公司 | 微生物区系的组合物及与其相关的方法 |
| AR090281A1 (es) | 2012-03-08 | 2014-10-29 | Hanmi Science Co Ltd | Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo |
| EP3881680A1 (en) | 2014-10-31 | 2021-09-22 | Pendulum Therapeutics, Inc. | Methods and compositions relating to microbial treatment |
| CA3073838A1 (en) | 2017-08-30 | 2019-03-07 | Pendulum Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for treatment of microbiome-associated disorders |
| CN108330166A (zh) * | 2017-09-06 | 2018-07-27 | 深圳市百澳飞生物技术有限公司 | 一种酶制剂的饲用活性评估方法 |
| RU2699967C1 (ru) * | 2018-12-25 | 2019-09-11 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) | Способ комплексного лечения энтеральной недостаточности у детей с тяжелой термической травмой |
| US11045507B2 (en) | 2019-02-21 | 2021-06-29 | Ewelina Sosnowska-Turek | Bifidobacterium animalis AMT30 strain and the composition containing the strain of Bifidobacterium animalis AMT30 |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59155321A (ja) * | 1983-02-25 | 1984-09-04 | Riyoushiyoku Kenkyukai | 整腸用製剤 |
| FR2560046A1 (fr) * | 1984-02-24 | 1985-08-30 | Schuler Rudolf | Produit dietetique utile pour diminuer la concentration de l'uree dans les liquides physiologiques et procede pour sa preparation |
| JPH07126177A (ja) * | 1993-10-29 | 1995-05-16 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 潰瘍性大腸炎治療剤 |
| JPH09227391A (ja) * | 1996-02-28 | 1997-09-02 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 腸管内細胞溶解活性抑制剤 |
| JP2002186422A (ja) * | 2000-12-22 | 2002-07-02 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | ラクトバシラス・ガッセリ及びビフィドバクテリウム属の菌を含有する非発酵食品 |
| WO2002060276A1 (en) * | 2001-01-25 | 2002-08-08 | Valio Ltd | Combination of probiotics |
| WO2002062360A1 (en) * | 2001-02-06 | 2002-08-15 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Endotoxin binding by lactic acid bacteria and bifidobacteria |
| JP2002534113A (ja) * | 1999-01-15 | 2002-10-15 | エンタープライズ・アイルランド（トレイディング・アズ・バイオリサーチ・アイルランド） | 炎症性疾患治療におけるビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ） |
| JP2002335860A (ja) * | 2002-07-25 | 2002-11-26 | Atelier De Fromage:Kk | ヨーグルトおよびその製造方法 |
| WO2002102168A1 (en) * | 2001-06-19 | 2002-12-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for producing extended shelf-life ready-to-use milk compositions containing probiotics |
| JP2005508617A (ja) * | 2001-07-26 | 2005-04-07 | アリメンタリー・ヘルス・リミテッド | プロバイオティックビフィドバクテリウム株類 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9002732D0 (sv) | 1990-08-24 | 1990-08-24 | Kabivitrum Ab | Product containing growth factor |
| IT1254210B (it) * | 1992-02-10 | 1995-09-14 | Simone Claudio De | Composizioni dietetiche e/o farmaceutiche a base di batteri lattici liofilizzati, loro preparazione e impiego |
| IT1288119B1 (it) | 1996-06-28 | 1998-09-10 | Renata Maria Anna Ve Cavaliere | Composizioni dietetiche da utilizzare nell'alimentazione per via enterica |
| US6203797B1 (en) * | 1998-01-06 | 2001-03-20 | Stephen C. Perry | Dietary supplement and method for use as a probiotic, for alleviating the symptons associated with irritable bowel syndrome |
| US6468525B1 (en) * | 1999-08-10 | 2002-10-22 | Renew Life, Inc. | Probiotic formulation |
| WO2001083700A2 (en) | 2000-05-03 | 2001-11-08 | University Of Maryland, Baltimore | Oral gram(+) bacteria and glutamine composition for prevention and/or treatment of gastro-intestinal |
| AU2001265253A1 (en) * | 2000-07-07 | 2002-01-21 | First Circle Medical, Inc. | Treatment of hiv using hyperthermia |
-
2003
- 2003-01-31 SE SE0300245A patent/SE526711C2/sv not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-01-27 WO PCT/SE2004/000098 patent/WO2004067731A1/en active Application Filing
- 2004-01-27 EP EP04705562A patent/EP1587913B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-27 CA CA2514659A patent/CA2514659C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-27 DE DE602004031079T patent/DE602004031079D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-27 DK DK04705562.9T patent/DK1587913T3/da active
- 2004-01-27 CN CNB2004800088252A patent/CN100558883C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-27 BR BRPI0407176A patent/BRPI0407176B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-01-27 AT AT04705562T patent/ATE496115T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-01-27 ES ES04705562T patent/ES2362496T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-27 RU RU2005127331/13A patent/RU2352628C2/ru active
- 2004-01-27 PL PL378435A patent/PL212096B1/pl unknown
- 2004-01-27 JP JP2006502776A patent/JP4540664B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-27 US US10/543,604 patent/US7947482B2/en active Active
- 2004-01-27 ZA ZA200505777A patent/ZA200505777B/en unknown
- 2004-01-27 AU AU2004208084A patent/AU2004208084B2/en not_active Expired
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59155321A (ja) * | 1983-02-25 | 1984-09-04 | Riyoushiyoku Kenkyukai | 整腸用製剤 |
| FR2560046A1 (fr) * | 1984-02-24 | 1985-08-30 | Schuler Rudolf | Produit dietetique utile pour diminuer la concentration de l'uree dans les liquides physiologiques et procede pour sa preparation |
| JPH07126177A (ja) * | 1993-10-29 | 1995-05-16 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 潰瘍性大腸炎治療剤 |
| JPH09227391A (ja) * | 1996-02-28 | 1997-09-02 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 腸管内細胞溶解活性抑制剤 |
| JP2002534113A (ja) * | 1999-01-15 | 2002-10-15 | エンタープライズ・アイルランド（トレイディング・アズ・バイオリサーチ・アイルランド） | 炎症性疾患治療におけるビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ） |
| JP2002186422A (ja) * | 2000-12-22 | 2002-07-02 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | ラクトバシラス・ガッセリ及びビフィドバクテリウム属の菌を含有する非発酵食品 |
| WO2002060276A1 (en) * | 2001-01-25 | 2002-08-08 | Valio Ltd | Combination of probiotics |
| WO2002062360A1 (en) * | 2001-02-06 | 2002-08-15 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Endotoxin binding by lactic acid bacteria and bifidobacteria |
| WO2002102168A1 (en) * | 2001-06-19 | 2002-12-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for producing extended shelf-life ready-to-use milk compositions containing probiotics |
| JP2005508617A (ja) * | 2001-07-26 | 2005-04-07 | アリメンタリー・ヘルス・リミテッド | プロバイオティックビフィドバクテリウム株類 |
| JP2002335860A (ja) * | 2002-07-25 | 2002-11-26 | Atelier De Fromage:Kk | ヨーグルトおよびその製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2004067731A1 (en) | 2004-08-12 |
| ES2362496T3 (es) | 2011-07-06 |
| BRPI0407176B8 (pt) | 2021-05-25 |
| CN1777670A (zh) | 2006-05-24 |
| EP1587913B1 (en) | 2011-01-19 |
| SE0300245L (sv) | 2004-08-01 |
| PL378435A1 (pl) | 2006-04-03 |
| EP1587913A1 (en) | 2005-10-26 |
| BRPI0407176B1 (pt) | 2018-05-08 |
| JP4540664B2 (ja) | 2010-09-08 |
| RU2005127331A (ru) | 2006-01-27 |
| PL212096B1 (pl) | 2012-08-31 |
| RU2352628C2 (ru) | 2009-04-20 |
| CA2514659A1 (en) | 2004-08-12 |
| CA2514659C (en) | 2014-07-08 |
| CN100558883C (zh) | 2009-11-11 |
| DK1587913T3 (da) | 2011-04-11 |
| US7947482B2 (en) | 2011-05-24 |
| US20060269533A1 (en) | 2006-11-30 |
| AU2004208084A1 (en) | 2004-08-12 |
| ATE496115T1 (de) | 2011-02-15 |
| BRPI0407176A (pt) | 2006-02-07 |
| SE526711C2 (sv) | 2005-10-25 |
| AU2004208084B2 (en) | 2008-10-09 |
| SE0300245D0 (sv) | 2003-01-31 |
| DE602004031079D1 (de) | 2011-03-03 |
| ZA200505777B (en) | 2007-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4706016B2 (ja) | 炎症性疾患治療におけるビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ） | |
| JP4011532B2 (ja) | ビフィズス菌およびそれを含有する製剤 | |
| EP2828375B1 (en) | Gaba-producing culturable bacteria derived from the human gastrointestinal tract | |
| KR20110018898A (ko) | 자연 면역을 증가시키는 프로바이오틱인 단리된 락토바실러스 플란타룸 균주 인듀시아 ｄｓｍ 21379와, 이를 포함하는 식품과 의약적 제제 | |
| JP4540664B2 (ja) | グルタミン産生能を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株 | |
| EP3808357A1 (en) | Composition and uses thereof | |
| CN113005067B (zh) | 多功能复合益生菌制剂及其制备方法 | |
| WO2018112739A1 (zh) | 一种假小链状双歧杆菌及其培养方法和应用 | |
| US20130309212A1 (en) | Lactobacillus salivarius and method for preparing metabolite thereof, composition of lactobacillus salivarius and metabolite thereof and use of the composition | |
| CN114774315B (zh) | 鼠李糖乳杆菌菌株LRa05在制备增强免疫力制品和/或缓解湿疹制品方面的用途 | |
| JP5610472B2 (ja) | 新規乳酸菌及び新規乳酸菌含有組成物 | |
| CN112029676B (zh) | 一种有利于提高免疫力的益生菌组合及其应用 | |
| JP5868519B2 (ja) | ロイテリン産生ラクトバチルス・ブレビス | |
| TWI429444B (zh) | 新穎乳酸菌株及其調節免疫反應的用途 | |
| TWI754929B (zh) | 乳酸菌用於提升對腸病毒７１型之抵抗力之用途 | |
| WO2013021239A1 (en) | New strain of l. bulgaricus capable of inhibiting the adhesion of h. pylori strains to epithelial cells | |
| CN114574405B (zh) | 植物乳杆菌菌株wka86及其在制备防治口臭制品方面的用途与制品 | |
| CN112236155A (zh) | 一种组合物及其应用 | |
| CN118240724B (zh) | 一株动物双歧杆菌乳亚种ProSci-246及由其制备的产品和应用 | |
| RU2735717C1 (ru) | Штамм Bifidobacterium bifidum, используемый в качестве пробиотика | |
| IE990033A1 (en) | Bifidobacterium longum infantis in the treatment of inflammatory bowel disease | |
| CN116333913A (zh) | 一种唾液乳杆菌、含有其的益生菌组合物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070112 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091111 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100202 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100209 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100511 |
|
| A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20100511 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100511 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100602 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100622 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4540664 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130702 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |