JP2006516289A

JP2006516289A - ミフェプリストンおよびその誘導体のヘッジホッグタンパク質シグナリング経路調節剤としての新規な使用ならびにその適用

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Publication number: JP2006516289A
Application number: JP2006502119A
Authority: JP
Inventors: ルアト，マーシャル; トライフォート，エリザベス; フォレ，エレン
Original assignee: サントルナショナルドゥラルシェルシュシアンティフィク
Priority date: 2003-01-22
Filing date: 2004-01-22
Publication date: 2006-06-29
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Abstract

本発明は、ミフェプリストン(RU 486またはRU 38 486)を含む式(I)を有する化合物およびその誘導塩の、ヘッジホッグタンパク質シグナリング経路を調節(活性化または阻害)することができる医薬品の製造のための新規な使用に関する。これは、該経路の非調節に関係する組織機能不全に関係する病理の治療を意図する。
【化１】

Description

本発明は、ミフェプリストンおよびその誘導体のヘッジホッグタンパク質シグナリング経路調節剤としての新規な使用、ならびに該経路の非調節(deregulation)に関連する組織機能不全に関係する病理の治療のためのその適用に関する。

ヘッジホッグタンパク質シグナリング経路は、多くの胚組織、特に神経系の発達に必須の役割を演じ、成体における組織の維持および修復に関係すると考えられる。

ヘッジホッグ遺伝子(Hh)は、ショウジョウバエ、次いで脊椎動物でも単離され、分泌され非常に保存されたシグナリングタンパク質であるヘッジホッグ(Hh)タンパク質のファミリーをエンコードする。該タンパク質は、多くの組織においてモルフォゲンとして働く(Inghamら、Genes Dev., 2001, 15, 3059〜3087；Martiら、Trends Neurosci, 2002, 25, 89〜96；Weschlerら、Annu Rev Neurosci, 2001, 24, 385〜428を参照)。Hhタンパク質は、約45 kDaの未成熟の前駆体の形で合成され、活性なアミノ末端型(HhNp；N-末端プロセスドメイン)に自己プロセシングされる(autoprocessed)。これは、2つの脂質：コレステロール残基(カルボキシ末端エステル結合)およびパルミテート(アミノ末端アミド結合)の付加により二重に修飾される。哺乳動物において、Hhタンパク質の3つのファミリーが存在する：ソニック(Shh)、インディアン(Ihh)およびデザート(Dhh)である。Shhは、神経管の腹側への配置(ventralization)を促進し、腹側の中央線(ventral median line)に沿ったいくつかのタイプのニューロン(脊髄運動ニューロン、ドーパミン作動性またはコリン作動性ニューロン)の早期の表現型を規定し、腹側脊髄からの乏突起膠細胞の発生を誘導する。さらに、Shhは、GABA作動性(gabaergic)およびドーパミン作動性ニューロンの生存を誘導し、セロトニン作動性前駆体の成果(outcome)を管理して、MPPトキシンにより引き起こされるドーパミン作動性ニューロンの死を防ぐ。最後に、これは早期出生後小脳(early post-natal cerebellum)における顆粒細胞前駆体の増殖を誘導する。ヘッジホッグファミリーの他のメンバーは、それらの部分について、骨組織(Ihh)、精巣および末梢神経(Dhh)の発達にそれぞれ貢献する。

より最近では、Shh経路は成体の脳で同定され、ここでは該分子の活性なアミノ末端型が成熟神経系の多くの領域で、早期出生後の期間に遭遇するレベルより高いレベルで発現される(Traiffortら, Eur. J. Neurosci.: 1999: 11, 3199〜3214および2001, 14, 839〜850)。成体でのShhの役割は完全に解明されていないが、これはまず他の神経栄養性分子のように、神経系細胞の表現型の生存と維持を促進し得る因子として明らかになった(Reillyら, Mol. Cell. Neurosci., 2002, 19, 88〜96; Charytoniukら, Eur. J. Neurosci., 2002, 16, 2351〜2357)。病理の状態、例えばパーキンソン病のモデルまたは末梢神経疾患のモデルの下では、Shhは、線条におけるドーパミン作動性ニューロンの軸策突起を保存することまたは坐骨神経の挫傷の後の運動回復に要する時間を向上することが可能である(Tsuboiら, Exp. Neurol., 2002, 173, 95〜104; Pepinskiら, J. Pharm. Sci., 2002, 91, 371〜387)。

ヘッジホッグモルフォゲンに対する細胞性応答は、腫瘍抑制遺伝子であるPatched (Ptc)遺伝子およびSmoothened (Smo)癌原遺伝子の発現産物により制御される。しかしながら、ヘッジホッグ経路の厳密な調節の機構は完全に解明されていない。哺乳動物において、Ptc1およびPtc2をそれぞれエンコードする2つのPatched遺伝子が存在し、これらは細菌のトランスポーターと相同な12の膜貫通ドメインを有する糖タンパク質である。Gタンパク質共役型受容体ファミリーのタンパク質をエンコードするSmo遺伝子の産物は、内生的なリガンドが知られていない。ヘッジホッグの不在下で、PtcはSmoの構成的な活性をブロックすると考えられている。ヘッジホッグのPtcへの結合は、この阻害を高め、Smoを介するシグナル変換を許容すると考えられる。哺乳動物におけるPtcによるSmo活性の調節の機構は、Ptcにより輸送されかつSmoと相互作用する分子を含み得るであろう(Taipaleら, Nature, 2002, 418, 892〜896)。Gli転写因子の活性化は、Smoの活性に起因する事象のカスケードに関係する。I型膜貫通タンパク質HIP (Hedgehog-Interacting Protein、ヘッジホッグ相互作用タンパク質)は、ヘッジホッグ分子に対する別の受容体を構成し、これはPtcの親和性に匹敵する親和性で結合する。HIPは、該経路の負の調節剤として提案されている(Inghamら,上記; Hoら, Curr. Opin. Neurobiol., 2002, 12, 57〜63; Taipaleら, Nature, 2001, 411, 349〜354)。さらに、Dispatched (disp)遺伝子、特にDispAは、細胞外媒質中の可溶型のヘッジホッグタンパク質の放出と蓄積に関係すると考えられる(Maら, Cell, 2002, 111, 63〜75)。

Shhシグナリング経路の機能不全は、特に腫瘍抑制遺伝子としてのPtcの特徴付けに続いて、多くの癌と関係している。具体的には、Ptcの不活性化変異体は、ゴーリン症候群または基底細胞母斑症候群、脳顔面頭蓋および大脳の奇形、特に種々の腫瘍の高い発生率により特徴付けられる常染色体優性疾患、より具体的には皮膚の基底細胞癌および脳の髄芽腫に関連する。Ptc遺伝子についてのマウスヘテロ接合体は小脳の腫瘍を発生し、Shh経路の修飾がこれらの腫瘍の原因であることを示唆する(Goodrichら, Science, 1997, 277, 1109〜1113)。

ヒトPtcまたはSmo遺伝子における変異は、中枢神経系の原始神経外胚葉腫瘍(primitive neuroectodermal tumor)、主に髄芽腫においても観察される(事例の30％)が、基底細胞癌の散在性の形においても観察される(PtcおよびSmoについてそれぞれ40％および20％)。さらに、Shh変異体(H133Y)も基底細胞癌に関連する。受容体の7番目の疎水性ドメインにおける2アミノ酸に主に関係するSmo変異(W535LおよびS533N)は、該経路の構成的な活性化を誘導し、このことがPtcによる負の制御を回避する。一方、Ptc変異は、Shhの不在下でSmoに影響する阻害の減少をもたらす。この2つの場合に、Shh経路の活性化がここに起因し、成長中の小脳顆粒細胞前駆体の培養中に証明される強力な有糸分裂活性およびこれらの神経芽細胞の終末の分化工程のブロックを導く(Traiffortら, Eur. J.; Neurosci., 1999, 上記; Charytoniukら, J. Physiol. Paris, 2002, 96, 9〜16; Dahmaneら, development, 1999, 126, 3089〜3100; Wallaceら, Curr. Biol., 1999, 22, 103〜114; Weshler-Reyaら, Neuron., 1999, 22, 103〜114)。同様に、トランスジェニックマウスにおいてこれらの変異の1つを有するSmoの発現は、基底細胞癌の存在をもたらし、このことはSmoのこれらの腫瘍の進行における直接の関与を示す(Xieら, Nature, 1998, 391, 90〜92)。

基底細胞癌および髄芽腫の他に、他の種類の腫瘍がヘッジホッグシグナリング経路の機能不全に関連する。これらの腫瘍の位置は、胚発生の間の該経路の成分の発現の位置と密接に関係する。限定しない例として、Ptc変異に関係する乳癌および髄膜腫ならびにGli変異に関係するグリア芽腫が挙げられる。

多くの生理的プロセスにおけるヘッジホッグタンパク質シグナリング経路の必須の役割、および結果としてその機能不全に関連する病理の重要性のために、この経路の成分、例えばSmoothenedまたはPatched (Patched 1およびPatched 2)タンパク質、Dispatched (Dispatched 1およびDispatched 2)タンパク質またはHIPタンパク質は、この経路を調節(活性化または阻害)することができ、よって発生(増殖、分化、遊走、生存(アポトーシス))および／または分化した細胞と幹細胞の活性をインビトロおよび／またはインビボで、胚または成体において正あるいは負に調節することができる新規な分子の開発の標的を表す。

このような分子は、ヘッジホッグ経路の過剰活性化(hyperactivation)に関係する腫瘍：神経組織腫瘍(髄芽腫、原始神経外胚葉腫瘍、グリア芽腫、髄膜腫および乏突起膠腫)、皮膚腫瘍(基底細胞癌、毛包上皮腫)、筋肉および骨組織の腫瘍(横紋筋肉腫、骨肉腫)ならびにその他の組織(腎臓、膀胱)の腫瘍の治療に有用である。

このような分子は、ヘッジホッグ経路のブロックを必要とする神経変性タイプの病理(パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、アルツハイマー病、多発性硬化症、運動ニューロン疾患)、およびヘッジホッグシグナリング経路のブロックが有益であり得る疾患、例えば糖尿病の治療にも有用である。

このような分子は、組織、限定しないが例えば神経組織(中枢神経系(脳)および末梢神経系(感覚、運動、交感神経のニューロン))、骨、軟骨、精巣、肝臓、脾臓、小腸、膵臓、腎臓、平滑筋および骨格筋、心臓、肺、皮膚および体毛系、粘膜、血液細胞および免疫系の細胞の形成、再生、修復および／または活性の増加を誘導するための、ヘッジホッグ経路の非調節に関係する組織機能不全を含む多くの急性、亜急性または慢性で遺伝的もしくは後天性の病理の内科的あるいは外科的な治療(形成手術または癒合手術、組織または臓器の移植)においても有用である。これらの病理の限定しない例としては、特に神経性および関係する神経筋の疾患、糖尿病、脱毛症、熱傷、潰瘍形成(皮膚および粘膜)および精子形成障害が挙げられる。

ヘッジホッグ経路の活性を調節することが可能な種々の分子が同定されている。
−ヘッジホッグタンパク質およびポリペプチド誘導体(フラグメント、変異体など)、特にヘッジホッグタンパク質アゴニストおよびアンタゴニスト(Biogenの名でのPCT国際出願WO 01/98344号)；それらのサイズのために、これらのタンパク質およびポリペプチド誘導体は血液脳関門を横切ることができず、よってヘッジホッグタンパク質シグナリング経路の過剰活性化に関連する脳腫瘍の治療のために全身的に投与できない。さらに、このような分子は製造および精製するのが困難であり、比較的不安定である。

−複素環式有機分子(Curisの名でのPCT国際出願WO 01/74344号およびChenら, PNAS, 2002, 99, 14071〜14076)。
−窒素含有複素環式分子(Curis の名でのPCT国際出願WO 01/19800号、WO 01/26644号およびWO 02/30421号ならびにKamenetsky ら, J. Biol., 2002, 1, 1〜19)。

−16-、17-または18-位においてアミンまたはアミン誘導体およびコレステロールで置換されたVeratrum spp (ジェルビン、シクロパミン(cyclopamine)およびシクロポシン(cycloposine))およびSolanum spp. (ソラニジン)由来の植物ステロイド：Johns Hopkins University School of Medicineの名での米国特許US 6,432,970号ならびにPCT 国際出願WO 99/52534号およびWO 01/27135号；Ontogenyの名での米国特許US 6,291,516号およびPCT国際出願WO 00/41545号、ならびにCuris の名でのPCT国際出願WO 02/30462号；Talpaleら, Nature, 2000, 406, 1005〜1009; Bermanら, Science, 2002, 297, 1559〜1561。しかしながら、シクロパミンは哺乳動物の胎児に全前脳症および単眼症を引き起こす催奇性の剤であり、哺乳動物にとって毒性がないことは、他の植物ステロイド由来化合物について証明されていない。

上記のことから、ヘッジホッグタンパク質シグナリング経路の活性の調節を必要とする病理の状態の治療に有用であり、かつヒトにおける臨床試験により毒性がないことが証明されている分子は、現存しないことが明らかである。結果として、本発明者らは、実際の必要性をよりよく満足させ、ヒトにおける毒性がないのでヒトの治療に用いることができる可能性がある化合物を提供することを目的とした。

Roussel-Uclafの名での欧州特許EP 0 057 115号および米国特許US 4,386,085号は、抗グルココルチコイド特性、プロゲスト模倣性(progestomimetic)または抗プロゲスト模倣性特性、アンドロゲン性または抗アンドロゲン性特性を有する、11β-位において窒素、リンまたはケイ素原子を含む基で置換された19-ノルステロイド化合物を記載している。これらの特性のために、これらのステロイド化合物の使用は、コルチコステロイドの過剰分泌に関係する状態を抑制するため、特に加齢を抑制するため、具体的には高血圧、アテローム性硬化症、糖尿病、肥満、ならびに免疫抑制および不眠症を抑制するため、避妊薬の製造のため、ホルモンの非調節、特にホルモン依存性癌、無月経、月経困難症および黄体機能不全を抑制するため、ならびに栄養過度および前立腺癌、アンドロゲン過多(hyperandrogenism)、貧血、多毛症およびアクネの治療のために推奨される。

これらの化合物のうち、ミフェプリストン(17β-ヒドロキシ-11β-(4-ジメチルアミノフェニル)-17α-(プロピ-1-イニル)エストラ-4,9-ジエン-3-オン、RU-486またはRU-38486ともよばれる)は、11β位において窒素原子を含む基で置換された19-ノルステロイドであり、これはプロゲステロン受容体アンタゴニスト活性と、グルココルチコイド受容体に対する強い親和性およびアンドロゲン受容体に対する弱い親和性とを有する。この分子は、妊娠中絶(termination of pregnancy)のための販売認可を与えられており、また閉経後の女性の転移性乳癌の治療のためのフェーズII臨床試験が現在進行している。

本発明者らは、1級、2級または3級アミン官能基または窒素含有複素環または16-、17-および18-位において置換されたアミン誘導体を有さない点において上記のシクロパミン由来ステロイドとは異なるミフェプリストンおよびいくつかのその誘導体が、驚くべきことにヘッジホッグタンパク質シグナリング経路に活性であることを示している。

何年にもわたって各国でヒトの治療に用いられているミフェプリストンは、ヒトにおける毒性がないので、ヘッジホッグタンパク質シグナリング経路の活性の調節(活性化または阻害)を必要とする病理の状態の治療のための、シクロパミンおよびその誘導体の有利な代替物である。

結果として、本発明の主題は、式(I)：

〔式中：
− R₁は1〜18の炭素原子を含み、少なくとも１つの窒素、リンまたはケイ素原子を含む有機基であって、炭素11に直接隣接する原子は炭素原子である有機基を表し、
− R₂は1〜8の炭素原子を含む炭化水素ベースの基を表し、
− 式：

のXは、次の基：C₁〜C₁₂のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールもしくはアラルキル、ヒドロキシル-OH、カルボニル

、エーテル-O-X₂、エステル

、オキシカルボニル

、ハロゲン、チオール、チオエーテル-S-X₅、スルフィニル

、スルホニル

および1以上のヒドロキシル-OH、カルボニル

、エーテル-O-X₂、エステル

、オキシカルボニル

、ハロゲン、チオール、チオエーテル-S-X₅、スルフィニル

もしくはスルホニル

官能基で置換されたC₁〜C₁₂のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールもしくはアラルキル(ここで、X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆およびX₇は、C₁〜C₈アルキル、C₂〜C₈アルケニルもしくはC₂〜C₈アルキニル基、またはC₆〜C₁₅アリールもしくはC₆〜C₁₅アラルキル基を表す)
から選択される1つ以上の基で任意に置換されていてもよい飽和または不飽和で五角形または六角形の環の残基を表し、
− 3位の基C=Aはオキソ基を表し、これは遊離であるかまたはケタール、アルコール-CH-OH、エーテル-CH-O-Y₁、アルキルカルボキシレート

、C=NOHもしくはC=NO-Y₃基、またはCH₂基(ここで、Y₁、Y₂およびY₃は1〜8の炭素原子を含むアルキル基または7〜15の炭素原子を含むアラルキル基を表す)の形でブロックされており、そして
− BおよびCは一緒に二重結合またはエポキシドブリッジを形成する〕
の化合物およびその誘導塩の、ヘッジホッグタンパク質シグナリング経路を修飾(活性化または阻害)することができ、該経路の非調節に関連する組織機能不全に関係する病理の治療を意図する医薬品を製造するための使用である。

該誘導塩のうち、式Iの化合物の酸との付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、酢酸、蟻酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸、メタンスルホン酸またはエタンスルホン酸のようなアルカンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸またはパラトルエンスルホン酸のようなアリールスルホン酸およびアリールカルボン酸と形成される塩が挙げられる。

本発明の有利な実施形態によると、R₂は、1〜4の炭素原子を含む直鎖状または分岐鎖状で飽和のアルキル基、好ましくはメチル基を表す。

別の有利な実施形態によると、Xは任意に置換されていてもよい五角形の環(pentagonal ring)を表す。
この実施形態の有利な形によると、該五角形の環は、少なくとも1つのアルケニルまたはアルキニル基、好ましくはアルキニル基で、好ましくは17位において置換される。
有利には、該五角形の環は、少なくとも1つのヒドロキシル基でも置換される。
好ましくは、Xは式：

の五角形の環の残基を表す。

本発明の別のさらなる実施形態によると、R₁は：
− 少なくとも1つの窒素原子を含むかあるいは少なくとも1つの窒素原子を含みかつ1〜8の炭素原子を含むアルキル基、例えばメチル、エチルもしくはn-プロピル基で任意に置換されていてもよい複素環、特に3,4-もしくは2-ピリジル基、チアゾリル基またはピペリジニル基で置換された1〜8の炭素原子を含む1級、2級または3級のアルキル基、特にメチル、エチル、n-プルピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル基を表すR₁価(value)、および
− アミン官能基を有するアリールまたはアラルキル基、特にアミン官能基：

〔式中、同一または異なっていてもよいZ₁およびZ₂は、1〜8の炭素原子を含む直鎖状、分岐鎖状または環状のアルキル基を表し、Z₁およびZ₂は窒素原子と複素環を形成するように任意に結合できる〕
を有するフェニルまたはベンジル基を表すR₁価
から選択される1〜18の炭素原子を含みかつ少なくとも1つの窒素原子を含む炭化水素ベースの基を表す。

本発明の別の有利な実施形態によると、3位の基C=Aはオキソ基を表す。

本発明のさらに別の有利な実施形態によると、BおよびCは一緒に二重結合を形成する。
上記の実施形態の有利な形によると、式(I)の該化合物は、式：

の17β-ヒドロキシ-11β-(4-ジメチルアミノフェニル)-17α-(プロピ-1-イニル)エストラ-4,9-ジエン-3-オンである。

式Iの化合物および医薬的に許容される酸とのその付加塩は、欧州特許第0 057 115号および米国特許第4,386,085号に記載されるようにして製造される。

ヘッジホッグタンパク質シグナリング経路の活性を調節し得る式Iの化合物および医薬的に許容される酸とのその付加塩は、ヘッジホッグ経路の過剰活性化に関係する腫瘍、特に神経組織腫瘍(髄芽腫、原始神経外胚葉腫瘍、グリア芽腫、髄膜腫および乏突起膠腫)、皮膚腫瘍(基底細胞癌、毛包上皮腫)、筋肉および骨組織の腫瘍(横紋筋肉腫、骨肉腫)ならびにその他の組織(腎臓、膀胱)の腫瘍の治療に用いられる。

このような化合物は、ヘッジホッグ経路のブロックを必要とする病理、特にパーキンソン病、ハンチントン舞踏病、アルツハイマー病、多発性硬化症および運動ニューロン疾患のような神経変性タイプの病理、または糖尿病のようなヘッジホッグシグナリング経路のブロックが有益であり得る他の疾患の治療においても用いられる。

このような化合物は、組織、限定しないが例えば神経組織(中枢神経系(脳)および末梢神経系(感覚、運動、交感神経ニューロン))、骨、軟骨、精巣、肝臓、脾臓、小腸、膵臓、腎臓、平滑筋および骨格筋、心臓、肺、皮膚および体毛系、粘膜、血液細胞および免疫系の細胞の形成、再生、修復および／または活性の増加を幹細胞または分化した細胞から誘導するための、ヘッジホッグ経路の非調節に関係する組織機能不全を含む多くの急性、亜急性または慢性で遺伝的もしくは後天性の病理の内科的あるいは外科的な治療(形成手術または癒合手術、組織または臓器の移植)においても用いられる。これらの病理の限定しない例としては、特に神経性および関係する神経筋の疾患、糖尿病、脱毛症、熱傷、潰瘍形成(皮膚および粘膜)および精子形成障害が挙げられる。

有用な用量は、治療される状態、投与経路および頻度(rate)ならびに治療される種(人または動物)の体重により変動する。例えば、用量は、経口投与される場合に成体で1日当たり100 mg〜1 g変動する。

式(I)の化合物およびそれらの塩は、消化経路(経口または舌下)を介して、非経口的にまたは局所的に用いられる。これらは単純または糖衣の錠剤、ゼラチンカプセル、顆粒剤、シロップ剤、坐剤、注射可能な製剤、軟膏剤、クリーム、ゲルまたはエアロソル剤の形にあることができ、これらは通常の方法にしたがって製造される。

これらの医薬的形態において、式(I)の化合物は、医薬組成物において通常用いられる賦形剤、例えばタルク、アラビアゴム、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、カカオ脂、水性または非水性の担体、動物または植物起源の脂肪の物質、パラフィン誘導体、グリコール、種々の湿潤剤、分散剤もしくは乳化剤または防腐剤と組み合わせる。

上記で規定される式(I)の化合物、特にミフェプリストンの使用は、現存するヘッジホッグタンパク質シグナリング経路調節剤よりも、これらの化合物が、催奇性のシクロパミンおよびその誘導体と違ってヒトにおいて毒性がなく、よってヒトの治療において有効に用いることができる点でより有利である。

上記の形の他に、本発明は、以下の記載から明らかになる他の形も含む。以下の記載は、本発明によるミフェプリストンおよびその誘導体の使用の実施例および添付の図に言及する。ここで：
− 図1は、ソニックヘッジホッグ(Shh)タンパク質により誘導された間葉細胞(C3H10T1/2細胞株)の分化のミフェプリストンによる阻害を示す。トランスフェクションされていないC3H10T1/2細胞(白のカラム)およびpRK5とよばれるShhタンパク質発現プラスミドでトランスフェクションされた細胞(C3H10T1/2-SHH、灰色状のカラム)を、ミフェプリストン(RU 38 486、10μM)、シクロパミン(10μM)またはそれらのそれぞれの担体であるジメチルスルホキシド(DMSO)もしくはエタノール(EtOH)で5日間処理するか、あるいは処理しない。次いで、アルカリホスファターゼ活性の誘導を伴うC3H10T1/2細胞の分化を、アルカリホスファターゼの基質であるパラニトロフェニルホスフェートの存在下で415 nmでの吸光度を測定することにより評価する。示した値は、平均±標準誤差(n = 4)に対応する。

− 図2は、ミフェプリストンによるC3H10T1/2細胞の分化の阻害の用量-効果カーブを示す。pRK5とよばれるShhタンパク質発現プラスミドでトランスフェクションされたC3H10T1/2細胞を、増加する量のミフェプリストン(RU 38 486、1 nM〜10μM)で5日間処理するかまたは処理しない。C3H10T1/2細胞の分化の阻害は、処理していない細胞に対するアルカリホスファターゼ活性のパーセンテージで表される(最大活性 = 100%)。示した値は、2つの独立した実験の平均±標準誤差(n = 4)に対応する。細胞分化の50％を阻害する濃度(IC₅₀)は、3.7μM±0.3μMである。

実施例：ミフェプリストンのヘッジホッグタンパク質シグナリング経路に対する影響
ミフェプリストンのヘッジホッグタンパク質シグナリング経路に対する影響を、予めShhNタンパク質で誘導した、C3H10T1/2多分化能性線維芽細胞株の分化を、ミフェプリストンまたは比較としてシクロパミンの存在下もしくは不在下で分析することにより測定する。

1) 材料および方法
C3H10T1/2多分化能性線維芽細胞株(ATCC)を、ATCCにより推奨される条件下で培養する。C3H10T1/2細胞を、マウスShhタンパク質をエンコードするプラスミドpRK5 (Taipaleら, Nature, 2001, 411, 349〜354)で、リン酸カルシウムを用いて通常のプロトコルにしたがってトランスフェクションした。次いで細胞を5日間、ミフェプリストン(10μM)、シクロパミン(10μM)またはそれらのそれぞれの担体である相当する量のジメチルスルホキシド(DMSO)およびエタノール(EtOH)の存在下に培養した。次に、C3H10T1/2細胞の筋肉細胞、脂肪細胞、軟骨細胞または骨芽細胞への分化により誘導されるアルカリホスファターゼ活性を、415 nmでの吸光度をアルカリホスファターゼの基質であるパラニトロフェニルホスフェートの存在下に測定することにより評価した。代わりに、ミフェプリストンの用量応答カーブを、同じ実験条件下で、増加する濃度のミフェプリストン (1 nM〜10μM)の存在下に測定した。

2) 結果
a) C3H10T1/2細胞分化に対するミフェプリストンおよびシクロパミンの影響の比較
図1に示す結果は、Shhの過剰発現により誘導されるアルカリホスファターゼの3〜10倍の増加が10μMのミフェプリストンまたはシクロパミンの存在下で完全に阻害されることを示す。

これらの結果は、ミフェプリストンが、シクロパミンと違っていずれの催奇性の影響もなく、シクロパミンのようにShhタンパク質に誘導される間葉細胞の分化をブロックし得ることを証明する。よって、ミフェプリストンは、いずれの催奇性の影響もなくかつヘッジホッグ経路のブロックを必要とする病理、例えば癌、神経変性疾患および糖尿病の治療に有用であるヘッジホッグタンパク質シグナリング経路アンタゴニストである。

b) ミフェプリストンによるC3H10T1/2細胞の分化の阻害の用量-効果カーブ
図2に示す結果は、図1に示す結果を確かにし、10μMの濃度のミフェプリストンが、Shhタンパク質の過剰発現により誘導されるアルカリホスファターゼの活性化を完全に阻害することを示す。細胞分化の50%を阻害する濃度(IC₅₀)は、3.7μM±0.3μMである。

上記から明らかなように、本発明は、すぐ上でより明確に記載したその実施、実行および適用の方法に限定されるものではない。一方、本発明は、本発明の状況および範囲からそれることなく当業者に想定されるその全ての変形を包含する。

図1は、ソニックヘッジホッグ(Shh)タンパク質により誘導された間葉細胞(C3H10T1/2細胞株)の分化のミフェプリストンによる阻害を示す。図2は、ミフェプリストンによるC3H10T1/2細胞の分化の阻害の用量-効果カーブを示す。

Claims

式(I)：

〔式中：
− R₁は1〜18の炭素原子を含み、少なくとも１つの窒素、リンまたはケイ素原子を含む有機基であって、炭素11に直接隣接する原子は炭素原子である有機基を表し、
− R₂は1〜8の炭素原子を含む炭化水素ベースの基を表し、
− 式：

のXは、次の基：C₁〜C₁₂のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールもしくはアラルキル、ヒドロキシル-OH、カルボニル

、エーテル-O-X₂、エステル

、オキシカルボニル

、ハロゲン、チオール、チオエーテル-S-X₅、スルフィニル

、スルホニル

および1以上のヒドロキシル-OH、カルボニル

、エーテル-O-X₂、エステル

、オキシカルボニル

、ハロゲン、チオール、チオエーテル-S-X₅、スルフィニル

もしくはスルホニル

官能基で置換されたC₁〜C₁₂のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールもしくはアラルキル(ここで、X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆およびX₇は、C₁〜C₈アルキル、C₂〜C₈アルケニルもしくはC₂〜C₈アルキニル基、またはC₆〜C₁₅アリールもしくはC₆〜C₁₅アラルキル基を表す)
から選択される1つ以上の基で任意に置換されていてもよい飽和または不飽和で五角形または六角形の環の残基を表し、
− 3位の基C=Aはオキソ基を表し、これは遊離であるかまたはケタール、アルコール-CH-OH、エーテル-CH-O-Y₁、アルキルカルボキシレート

、C=NOHもしくはC=NO-Y₃基またはCH₂基(ここで、Y₁、Y₂およびY₃は1〜8の炭素原子を含むアルキル基または7〜15の炭素原子を含むアラルキル基を表す)の形でブロックされており、そして
− BおよびCは一緒に二重結合またはエポキシドブリッジを形成する〕
の化合物およびその誘導塩の、ヘッジホッグタンパク質シグナリング経路を修飾(活性化または阻害)することができ、該経路の非調節に関連する組織機能不全に関係する病理の治療を意図する医薬品を製造するための使用。
R₂が1〜4の炭素原子を含む直鎖状または分岐鎖状で飽和のアルキル基、好ましくはメチル基であることを特徴とする請求項1に記載の化合物の使用。
Xが任意に置換されていてもよい五角形の環を表すことを特徴とする請求項1または2に記載の化合物の使用。
前記五角形の環が、少なくとも1つのアルケニルまたはアルキニル基、好ましくはアルキニル基で、好ましくは17位において置換されていることを特徴とする請求項3に記載の化合物の使用。
前記五角形の環が、少なくとも1つのヒドロキシル基でも置換されていることを特徴とする請求項3または4に記載の化合物の使用。
Xが式：

の五角形の環の残基を表すことを特徴とする請求項5に記載の化合物の使用。
R₁が：
− 少なくとも1つの窒素原子を含むかあるいは少なくとも1つの窒素原子を含みかつ1〜8の炭素原子を含むアルキル基、例えばメチル、エチルもしくはn-プロピル基で任意に置換されていてもよい複素環、特に3,4-もしくは2-ピリジル基、チアゾリル基またはピペリジニル基で置換された1〜8の炭素原子を含む1級、2級または3級のアルキル基、特にメチル、エチル、n-プルピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル基を表すR₁価、および
− アミン官能基を有するアリールまたはアラルキル基、特にアミン官能基：

〔式中、同一または異なっていてもよいZ₁およびZ₂は、1〜8の炭素原子を含む直鎖状、分岐鎖状または環状のアルキル基を表し、Z₁およびZ₂は窒素原子と複素環を形成するように任意に結合できる〕
を有するフェニルまたはベンジル基を表すR₁価
から選択される1〜18の炭素原子を含みかつ少なくとも1つの窒素原子を含む炭化水素ベースの基を表すことを特徴とする請求項1〜5のいずれか1つに記載の化合物の使用。
Z₁およびZ₂がC₁〜C₄アルキル基、好ましくはメチル基を表すことを特徴とする請求項7に記載の化合物の使用。
3位の基C=Aがオキソ基を表すことを特徴とする請求項1〜8のいずれか1つに記載の化合物の使用。
BおよびCが一緒に二重結合を形成することを特徴とする請求項1〜9のいずれか1つに記載の化合物の使用。
式(I)の化合物が、式：

の17β-ヒドロキシ-11β-(4-ジメチルアミノフェニル)-17α-(プロピ-1-イニル)エストラ-4,9-ジエン-3-オンであることを特徴とする請求項1〜10のいずれか1つに記載の化合物の使用。
前記医薬品が、ヘッジホッグ経路の過剰活性化に関係する腫瘍の治療を意図することを特徴とする請求項1〜11のいずれか1つに記載の化合物の使用。
前記腫瘍が、神経組織腫瘍(髄芽腫、原始神経外胚葉腫瘍、グリア芽腫、髄膜腫および乏突起膠腫)、皮膚腫瘍(基底細胞癌、毛包上皮腫)、筋肉および骨組織の腫瘍(横紋筋肉腫、骨肉腫)ならびにその他の組織(腎臓、膀胱)の腫瘍から選択されることを特徴とする請求項12に記載の使用。
前記医薬品が、神経変性タイプの病理の治療を意図することを特徴とする請求項1〜11のいずれか1つに記載の化合物の使用。
前記医薬品が、糖尿病の治療を意図することを特徴とする請求項1〜11のいずれか1つに記載の化合物の使用。