JP2006317226A - 加熱処理された動物性組織由来原料の検出試薬および検出方法 - Google Patents
加熱処理された動物性組織由来原料の検出試薬および検出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006317226A JP2006317226A JP2005138688A JP2005138688A JP2006317226A JP 2006317226 A JP2006317226 A JP 2006317226A JP 2005138688 A JP2005138688 A JP 2005138688A JP 2005138688 A JP2005138688 A JP 2005138688A JP 2006317226 A JP2006317226 A JP 2006317226A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- animal tissue
- detection
- antibody
- sample
- heat
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 239000002994 raw material Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 181
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 47
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 45
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 43
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 35
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 43
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 28
- 235000019735 Meat-and-bone meal Nutrition 0.000 claims description 22
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 16
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 claims description 14
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 12
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 8
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 7
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 claims description 6
- 235000013324 preserved food Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 claims description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 claims description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 50
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 47
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 24
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 23
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 21
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 14
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 12
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 12
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 11
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 11
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 208000018756 Variant Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 208000005881 bovine spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 7
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 7
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 6
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 6
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 6
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 5
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 5
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 5
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 5
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 4
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 4
- 229940036811 bone meal Drugs 0.000 description 4
- 239000002374 bone meal Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 4
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 2
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 2
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000013568 food allergen Substances 0.000 description 2
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 2
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 240000008620 Fagopyrum esculentum Species 0.000 description 1
- 235000009419 Fagopyrum esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010064983 Ovomucin Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 239000011358 absorbing material Substances 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920006284 nylon film Polymers 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】 熱変性した血清アルブミンを指標とした、試料中での加熱処理された動物性組織由来原料の存在を検出する検出試薬、及び該検出試薬を使用した検出方法の提供。
【解決手段】 動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが標識物質により標識された標識抗体(A)と前記試料とを、前記動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが固定された検出領域2を備えた担体(B)1の前記検出領域2に接触させ、前記検出領域2からの信号に基づいて、前記試料中の前記動物性組織由来原料の有無を判定する方法とそのための検出試薬10Aである。
【選択図】 図1
Description
なかでも、ウシ海綿状脳症(BSE)のヒトに対する感染のリスクは重大な問題であり、EU科学運営委員会は、「食物経由によるウシ海綿状脳症(BSE)へのヒトの曝露リスク(HER)に関する科学運営委員会の意見」(1999年12月10日採択)と題する報告の中で、「BSEと変異型クロイツフェルト・ヤコブ病(CJD)の関連を示す疫学的・病理学的・分子生物学的な確たる証拠を得ている。」とし、特に、BSE感染牛からの肉骨紛の家畜用飼料への使用について言及している。つまり、大半の可食部分を取り去った後の骨や、それに付着している少量の肉、筋等については、133℃以上の高温での加熱加圧で処理し、肉骨粉とした後に家畜用飼料等に再利用されてきており、一方で、BSE臨床徴候を発現した牛(潜伏期間の終わりの段階で)のBSE感染負荷のほとんどは、主に中枢神経系組織(脳、脊髄など)にあることが認められることから、当該肉骨粉の家畜用飼料への使用が重大な関心を集めていたのである。
これを受けて、EUでは、EU農相理事会特別会合において、域内では、2001年1月1日からの肉骨粉の家畜用飼料への使用禁止が合意されている。また、我が国でも、BSEの国内における確認を受けて、平成13年10月からは肉骨粉の輸入、国内における製造・出荷を一時全面停止した。これらを受けて、各自治体や関連業界等には、牛用飼料への動物由来タンパク質(肉骨粉を含む)の混入防止等に関する指針等が示され、肉骨粉等の家畜用飼料への混入の検査への関心が高まっている。
すなわち、本発明の検出試薬は、試料中に存在する100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料を検出するための検出試薬であって、前記動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが、標識物質により標識された標識抗体(A)と、前記動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが固定された検出領域を備えた担体(B)とを有することを特徴とする。
ここで、以下の1)〜10)を本発明の検出試料に対する好ましい態様としている。
1)前記検出試薬の動物性組織由来の原料が120℃以上、または130℃以上の温度で加熱処理された原料であること。
2)前記1)の動物性組織由来原料が加熱処理と同時に加圧処理された原料であること。
3)前記2)の動物性組織由来の原料が肉骨粉であること。
4)前記1)〜2)の試料が缶詰食品であること。
5)前記3)の試料が家畜用飼料であること。
6)前記1)〜5)の抗体またはその抗原結合性フラグメントが120℃以上の温度で加熱処理した血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであること。
7)前記6)の抗体またはその抗原結合性フラグメントが加圧処理した血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであること。
8)前記1)〜7)の標識物質が有色微粒子であること。
9)前記1)〜8)の担体(B)がニトロセルロース膜、ナイロン膜、ポリビニリデンジフルオライド膜からなる群より選ばれる1種であること。
10)前記1)〜9)の検出試薬がキットの形態であること。
ここで、以下の11)〜19)を本発明の検出方法に対する好ましい態様としている。
11)前記検出試薬の動物性組織由来の原料が120℃以上、または130℃以上の温度で加熱処理された原料であること。
12)前記11)の動物性組織由来原料が加熱処理と同時に加圧処理された原料であること。
13)前記12)の動物性組織由来の原料が肉骨粉であること。
14)前記11)〜12)の試料が缶詰食品であること。
15)前記13)の試料が家畜用飼料であること。
16)前記11)〜15)の抗体またはその抗原結合性フラグメントが120℃以上の温度で加熱処理した血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであること。
17)前記16)の抗体またはその抗原結合性フラグメントが更に加圧処理した血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであること。
18)前記11)〜17)の標識物質が有色微粒子であること。
19)前記11)〜18)の担体がニトロセルロース膜、ナイロン膜、ポリビニリデンジフルオライド膜からなる群より選ばれる1種であること。
本明細書において、「動物性組織由来原料」の用語は、血清アルブミンを含有する任意の動物組織、例えば、筋肉や骨、皮膚組織、血液に由来する原料を含み得る。筋肉組織は、食品における主要な成分となり得ることから興味深く、また、肉骨粉も特に興味深い本発明の対象である。本発明の重要な側面の1つは、当該肉骨粉のような、高温で加熱処理された動物性組織由来原料を特異的に認識し、高温加熱処理されていない動物性組織由来原料をそれらと区別し得ることにある。従って、本明細書にいう高温加熱処理、あるいは高温での加熱処理とは、当該動物性組織を認識する抗体の特異性に影響を与え得る加熱条件による処理を意味し、100℃を超える加熱処理に代表される、食品の加熱加工や殺菌の際に適用されるような温度処理を指し、好適には120℃以上、さらに好適には130℃以上を指す。具体的には、例えば、適切な加圧処理を伴ってよい、缶詰食品等の殺菌時の処理条件である121℃や、肉骨粉製造時の133℃以上の温度があげられる。なお、当該動物性組織由来原料は、加熱処理以外の任意の追加処理を受けていてよく、例えば、破砕、粉砕、乾燥、各種酵素処理、塩への浸漬、防腐処理等の、食品或いは飼料製造時に用いられ得る任意の追加処理を単独でまたは組み合わせて施されていてよい。
次いで、該血清アルブミンの加熱処理による変性は、実験室的に用い得る任意の加熱手段により達成できる。例えば、任意の加熱器により、各種動物由来の血清アルブミンを、乾式、或いは湿式で、100℃を超える温度まで昇温し、実質的な時間、該温度に保持すればよい。好ましくは、市販のオートクレーブを用いて、溶液状態の血清アルブミンを加熱処理または加熱加圧処理すればよく、例えば、121℃で40分、または135℃で30分間、オートクレーブ処理すればよい。
当該手法としては一般的なサンドイッチアッセイが例示され、本発明においては具体的に、イムノクロマト法(例えば、特開平11−125636号公報、特開2004−85425号公報を参照)、及びイムノフィルター法(例えば、特開平8−220099号公報、特開平9−61429号公報を参照)が好適である。
特に本発明においては、検査方法が簡便に実施可能であるので、試料の採取現場において、簡単に、加熱された動物性組織由来原料を検出することが可能である。よって、本発明のように、イムノクロマト法やイムノフィルター法を100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料の検出法に適用したことは、従来のイムノアッセイ法や他の検出法に比して、有利な効果を有することは明らかである。
なお、以下の説明において、100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料のことを「検出対象物質」ということがある。
本発明において、標識抗体(A)とは、100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料に含まれる血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが標識物質により標識されたものを指す。
標識物質による標識は、アフィニティークロマト法において通常に用いられる方法によって行うことが出来る。標識に用いられる標識物質としては、通常には、微粒子が用いられる。また、以下の記載において、標識抗体(A)のうち、特に微粒子により標識されたものを「反応微粒子」ということがある。
微粒子は、検出対象物質の存在を肉眼で判定するための標識であり、肉眼判定を容易にするためには有色微粒子であることが好ましい。材質としては、例えばポリスチレンラテックス等の合成高分子、ゼラチン等の天然高分子からなる均質な球状粒子、又は金コロイド等の金属コロイド粒子等、水不溶性素材が上げられる。なお、金属コロイド粒子は、その本質的な色があるため敢えて着色する必要は無い。また、無色であるものは、色素を用いて適宜着色すればよい。微粒子の粒径は、担体(B)の孔径よりも小さくなければならないが、概ね0.01〜5μmの範囲で使用でき、0.05〜2μm程度が特に望ましい。
このようにして調製された標識抗体(A)は、懸濁液の状態や、グラスファイバー等の部材に浸潤させた状態で、乾燥条件下において保存することが可能である。
本発明において用いられる担体(B)は、検出対象物質と、これと特異的に結合する上述の抗体またはその抗原結合性フラグメントとの結合を介して、標識物質を間接的に捕捉し、標識抗体(A)を固定化するものである。担体(B)としては、イムノクロマト法においては、クロマトグラフィー担体として水溶液中で対象物を展開することができるものが使用され、イムノフィルタ−法においては、未反応の標識抗体(A)を通過させることができるものが使用される。
すなわち、試料中の100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料は、標識抗体(A)と結合するとともに、検出領域に固定された上述の抗体またはその抗原結合性フラグメントとも結合する。よって、具体的には後述するように、試料と標識抗体(A)とが検出領域に接触することにより、検出対象物質が標識抗体(A)と検出領域に固定されている抗体またはその抗原結合性フラグメントとの間にサンドイッチされた状態となり、検出領域に固定される。その結果、試料中に検出対象物質が存在する場合には、標識物質が間接的に検出領域に固定されることとなり、一方、試料中に検出対象物質が存在しない場合には、標識物質は検出領域に固定されない。よって、検出領域に標識物質が固定されているかどうかが信号となり、検出対象物質の存在の有無を肉眼で判定することができる。
なお、こうして検出領域が形成された担体(B)には、検出対象物質や、上述の抗体またはその抗原結合性フラグメントとの非特異的な吸着を防止するために、ビニル系水溶性ポリマーを使用してブロッキング処理を行い、乾燥条件下で保存することが好ましい。なかでも、ビニル系水溶性ポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、またはポリビニルアルコール等を使用すると良好なブロッキング効果が得られるのでより好ましい。
[イムノクロマト法]
イムノクロマト法では、担体(B)において展開液が展開する。展開液は、水または緩衝液等に希釈されたものを例示できる。また、試料が液体であって微量のものでない場合には、試料自体を展開液として利用することができる。
例えば、標識抗体(A)(コンジュゲートとも呼ばれる場合がある。)を展開液に含ませるための部材(コンジュゲートパッド)を設けることが挙げられる。
コンジュゲートパッドは、コンジュゲートの性質に応じて、適宜作製することができる。例えば、コンジュゲートが反応微粒子の場合には、以下のようにしてコンジュゲートパッドを作製できる。反応微粒子は、コロイド化学的安定性及び反応微粒子の特異結合活性を保持させるため、0.05〜10%(w/w)程度のポリエチレングリコール等の水溶性高分子、その他の安定剤及び防腐剤を含有した緩衝液に懸濁され、冷所で保管されることが好ましい。コンジュゲートパッドとする際には、保管していた反応微粒子をコロイド化学的安定性を保持するために、0.05〜10%(w/w)程度のポリエチレングリコールなどの水溶性高分子、0.05〜10%(w/w)程度の界面活性剤及び0.05〜10%(w/w)程度の糖類などを含有した緩衝液に懸濁し、グラスファイバーなどに染み込ませ乾燥させ、短冊状にする。
試料が液体であって微量のものでない場合には、試料自体を展開液として用いることができるので、サンプルパッドを上流に配置する方が、構成が単純となって有利である。
また、担体(B)の検出領域の下流には、コンジュゲートを捕捉する物質を固定した参照領域を設けることもできる。特に参照領域に、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料に含まれる血清アルブミンを固定することにより、展開液が確実に目的通りに展開され、検出操作が終了したことやコンジュゲートの検出物質との反応性についても、参照領域の着色などの信号により確認できる。
例えば、ニトロセルロース膜、ナイロン膜、ポリビニリデンジフルオライド膜などからなる担体(B)の上に、上述の抗体またはその抗原結合性フラグメントをライン状に固定して検出領域とするとともに、好適には、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料に含まれる血清アルブミンに代表されるような検出対象物質競合物質を担体(B)上にライン状に固定して参照領域とし、さらに、コンジュゲートパッド、サンプルパッド、吸収パッドを作製し、これらを組み合わせて台紙などの支持体に貼り付け大きな短冊とする。そして、これを端から細く切断し、スティック状にすることにより、図1に示すような検出試薬10Aとすることができる。図1中、符号1が膜からなる担体(B)、符号2が検出領域、符号3が参照領域、符号4がサンプルパッド、符号5がコンジュゲートパッド、符号6が吸収パッドであり、支持体の図示は略している。
この場合、台紙などの支持体を吸収パッド6の位置よりも延長させておくことができ、この延長部分は、スティック状にしたときに検出試薬10Aのハンドル部として用いることができる。
まず、検出対象物質を含む試料を、例えば10倍量の0.5%Tween20、20mM2−メルカプトエタノール溶液、150mM塩化ナトリウム溶液、および1mg/mlオボアルブミン溶液を含む20mMトリス塩酸緩衝液pH7.4で抽出して抽出液を作製し、これを適当な大きさの容器に移す。そして、この中に、図1の検出試薬10Aのサンプルパッド4側の一端を浸漬させる。すると、ペーパークロマトグラフィーの場合と同様に、展開液が担体(B)1上を展開し、抽出液がコンジュゲートパッド5に到達する。ここで、コンジュゲートパッド5中の標識抗体(A)と、抽出液中の検出対象物質との免疫複合体が形成される。
すると、該免疫複合体は、コンジュゲートパッド5が浸潤状態になったことにより該部材内部を移動可能となり、検出領域2に移動する。そして、この検出領域2において、免疫複合体を構成している検出対象物質は、検出領域2に固定されている抗体またはその抗原結合性フラグメントとも結合する。その結果、検出対象物質がサンドイッチされた状態で検出領域2に固定される。このように固定されたことは、標識物質による検出領域2の着色が信号となり肉眼で確認でき、検出対象物質が試料中に存在していること、すなわち陽性であることを判定できる。一方、抽出液中に検出対象物質が存在しない場合は、上述のような免疫複合体が形成されないため、検出領域2には着色は認められず、陰性であると判定できる。
なお、図2は、本発明のイムノクロマト法に基づく検出方法の原理を示すものであって、図3は、陽性、陰性の各場合における検出領域2および参照領域3の着色の様子を示すものである。
本発明におけるイムノフィルター法による検出試薬は、標識抗体(A)と、上述の抗体またはその抗原結合性フラグメントが固定され、検出領域が形成された膜からなる担体(B)とを有し、さらに必要に応じて、反応容器と、試料希釈用の溶液と、洗浄液とを含んで構成される。
標識抗体(A)は、コロイド化学的安定性及び標識抗体(A)の特異結合活性を保持させるため、0.05〜10%(w/w)程度のポリエチレングリコ−ル等の水溶性高分子、その他の安定剤、及び防腐剤を含有した緩衝液等に懸濁し、冷所で保管する。また、長期間保管するために懸濁液を凍結乾燥し、検査時に蒸留水等で溶解して使用することもできる。
一方、検出領域が形成された担体(B)は、検出対象物質や標識抗体(A)との非特異的な吸着を防止するため、0.05〜5%(w/w)程度のポリビニルピロリドン等でブロッキング処理を行い、乾燥条件下で保存する。
また、吸収材13には、滴下される試料や標識抗体(A)を十分に吸収でき、かつ、その吸収速度が変動しないような素材が使用されることが望ましい。そのような素材として、綿、不織布、濾紙、多孔性プラスチック等が挙げられる。また、吸収材13の大きさは、上述の目的を果たすかぎり制限はない。
また、検出後には、必要に応じて洗浄液を使用してもよく、洗浄液としても試料希釈液で例示したものを適宜使用できる。
まず、検出対象物質を含む試料を、例えば10倍量の0.5%Tween20、20mM2−メルカプトエタノール溶液、150mM塩化ナトリウム溶液、および1mg/mlオボアルブミン溶液を含む20mMトリス塩酸緩衝液pH7.4で抽出して抽出液を作製し、これを、反応容器11の窓12に滴下し、完全に吸収材13に吸収させた後、標識抗体(A)を含む懸濁液を滴下し、同様に吸収材13に吸収させることで、これらを担体(B)の検出領域で接触させ、肉眼で担体(B)14上の着色の有無を観察する。ここで、試料中に検出対象物質が含まれると、図5および図6に示すように、検出対象物質は検出領域において標識抗体(A)と結合するとともに、検出領域に固定されている抗体またはその抗原結合性フラグメントとも結合するために着色を呈し、陽性であると判定できる。一方、試料中に検出対象物質が含まれない場合には着色が認められず、陰性であると判定できる。
なお、検出対象物質を含む抽出液の滴下後、または、標識抗体(A)を含む懸濁液の滴下後に、洗浄液を滴下してもよい。
また、判定後の担体(B)上の着色は、乾燥後に色調が変化することなく、長期間保存可能である。
[実施例1]
<イムノクロマト法>
(1)検出領域と参照領域が形成された担体(膜)の調製
ニトロセルロース膜(ミリポア社製)について、横300mm×縦30mmに裁断し、長辺の一端(以下、これを上端とする。)から18mmの位置に、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体(1mg/ml)を塗布機(IVEK社製)を用いて塗布して検出領域とした。なお、この抗体は、次のようにして得た。まず、牛血清アルブミン(和光純薬工業(株)製、カタログ番号014−15134)を水に1%になるように溶解し、135℃で30分間、オートクレーブ処理したものを免疫源として、CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY(カレント・プロトコール・イン・イムノロジー)、第2.4章、発行元:John Wiley&Sons,Inc.,New Yorkのプロトコールに準じて、ウサギに免疫し、抗血清を得た。同様のオートクレーブ処理をした牛血清アルブミンを樹脂に固相化してカラムに充填し、これに対し、先ほど得た抗血清を通して熱変性牛血清アルブミンに対する抗体を吸着させた。150mM塩化ナトリウムを含む10mMリン酸緩衝液(pH7.2)で充分に洗浄した後、0.1Mグリシン−塩酸緩衝液(pH2.3)で溶出し、高温加熱処理熱変性牛血清アルブミンに対する特異抗体を溶出した。溶出したフラクションは直ちにトリス塩酸緩衝液(pH8.6)を用いて中和した。
次に、上端から8mmの位置に、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料に含まれる血清アルブミン(1mg/ml)を塗布して参照領域とした。
膜を十分に乾燥し、さらに非特異的な吸着を回避するために、ブロッキングバッファー(0.5%ポリビニルピロリドン溶液)によりブロッキングを行い、さらに十分に乾燥して、検出領域と参照領域とが形成された膜を調製した。
標識物質で標識され、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体の溶液(着色ラテックス粒子懸濁液)を次のようにして調製した。
少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体を、10mMホウ酸緩衝液(pH8.0)にて透析した。
次に、カルボキシ変性ラテックス粒子(JSR製)を10mMホウ酸緩衝液(pH8.0)に固形分濃度5%(w/v)になるように分散し、5%(w/v)ラテックス分散液1mlに、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(シグマ社製)が50mg/mlとなるように10mMホウ酸緩衝液溶液で調整した溶液2mlを加え、2〜10℃で10分間撹拌した。遠心分離(15,000回転、10分間)により上清を除き、10mMホウ酸緩衝液に分散した。
これに、透析済みの少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体溶液を蛋白量換算で5mg添加し、室温で16時間以上撹拌しながら反応させた。遠心分離(15,000回転、10分間)により上清を除き、10mMホウ酸緩衝液に分散し、さらに、遠心操作を繰り返して、10mMホウ酸緩衝液にて洗浄して、0.1%オボアルブミン、及び0.05%アジ化ナトリウムを含む10mMホウ酸緩衝液に分散して着色ラテックス粒子懸濁液を調製した。
前記(1)で調製した担体(膜)を、幅85mm、長さ300mmのプラスチック板(支持体)に接着して固定した。この際、担体(膜)の短辺がプラスチック板の短辺とそれぞれ一致し、かつ、担体(膜)がプラスチック板の中央に位置するようにした。
そして、担体(膜)が固定されたプラスチック板の一端(長辺側)に、試料を染み込ませるための幅20mm、長さ300mmの吸収体を装着した。
次いで、前記(2)で調製した着色ラテックス粒子懸濁液をグラスファイバー板に染み込ませ乾燥させ、幅15mm、長さ300mmに切断した短冊状のグラスファイバー板を用意し、これを装着された吸収体とプラスチック板との間に約半分ほど(7〜8mm程度)挟み込んだ。一方、短冊状のグラスファイバー板の残りの部分がプラスチック板との間に担体(膜)を挟み込むようにするとともに、この短冊状のグラスファイバー板を保護するように粘着テープで覆った。さらに、別の吸収体を幅35mm、長さ300mmに裁断して、担体(膜)のもう一方の端(長辺側)にかかるように載置し、プラスチック板と接着して組み立て、イムノクロマト法による検出試薬を製造した。
試料として牛肉骨粉を、10倍量の0.5%Tween20、20mM2−メルカプトエタノール溶液、150mM塩化ナトリウム溶液、および1mg/mlオボアルブミン溶液を含む20mMトリス塩酸緩衝液pH7.4で抽出して抽出液を作製した。
該抽出液を種々の希釈倍率にて前記緩衝液を用いて希釈し、その希釈液100μlをプラスチック製の容器に採取し、前記検出試薬の吸収体の一端に浸漬し、15分間そのまま放置した。
次いで、参照領域が着色していることを確認した後、検出領域の着色の有無を確認した。
その結果、全ての試料において、参照領域は着色し、試料は担体(膜)上を展開していることが確認された。なお、検出領域に着色があったものは、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料が存在すると判定されたものであり、陽性(+)として表1に示し、一方、着色が無かったものは、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料が存在しないと判定されたものであり、陰性(−)として表1に示した。
表1から明らかなとおり、ブランク、及び抽出液を10000倍に希釈した場合では、検出領域には何ら変化が無く、着色は認められなかったことから、陰性と判定された。
一方、抽出液が5000倍以下の希釈までは、検出領域に着色が認められ、陽性と判定された。なお、試料の浸漬から判定までに要した時間は15分間であった。
<イムノクロマト法>
試料に配混合飼料、及び配混合飼料原料を用いて、実施例1と同様に製造した検出試薬により試験を行った。
(1)被検試料
a)検体番号1〜5:重量比で牛肉骨粉を0%〜0.4%含有する豚用配混合飼料(添加試験)
b)検体番号6〜15:植物質性混合飼料(原料)
c)検体番号16〜19:動物質性配混合飼料(原料)
d)検体番号20〜25:肉用牛肥育用配混合飼料
(2)試験方法
実施例1と同様にして、試験を行った。また、同じ被検試料について、本実施例の検出試薬に使用した抗体と同様の抗体類を用いて、ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)法でも試験を行った。
本試験の結果を表2に示す。判定は、実施例1と同様に、検出領域の着色の有無により行った。
表2から明らかなように、本実施例では、豚用配混合飼料に牛肉骨粉を重量比で0.05%添加した場合は、陽性・陰性の判定が困難であったが、0.1%以上添加した場合は膜上の検出領域において着色が観察された。また、乳用牛飼育用配混合飼料では陰性の判定であったが、その他の肉用牛肥育用配混合飼料では陽性となり、植物質性混合飼料(原料)及び動物質性配混合飼料(原料)では、いずれも陰性の判定結果が得られた。なお、イムノクロマト法での検査時間は、試料調製後、試験開始(キットへの試料添加)から判定まで、15分であった。
また、ELISA法においても、イムノクロマト法と同様の結果が得られたが、ELISA法では試験開始から判定までに約3時間を要した。
<イムノフィルター法>
(1)検出領域が形成された担体(膜)の調製
孔径5μmのニトロセルロース膜(ミリポア社製)上に、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体溶液(1mg/ml)をマイクロピペットを用いて1μl点着し、十分に乾燥させた。なお、この抗体は実施例1と同様にして製造したのものである。次いで、非特異的な吸着を回避するために、ブロッキングバッファー(0.5%ポリビニルピロリドン溶液)によりブロッキングを行い、十分に乾燥して、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体が固定され、検出領域が形成された担体(膜)を調製した。
標識物質で標識され、少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体の溶液(着色ラテックス粒子懸濁液)を次のようにして調製した。
少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体を、10mMホウ酸緩衝液(pH8.0)にて透析した。次に、カルボキシ変性ラテックス粒子(JSR製)を10mMホウ酸緩衝液(pH8.0)に固形分濃度5%(w/v)になるように分散し、5%(w/v)ラテックス分散液1mlに、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(シグマ社製)が50mg/mlとなるように10mMホウ酸緩衝液溶液で調整した溶液2mlを加え、2〜10℃で10分間撹拌した。遠心分離(15,000回転、10分間)により上清を除き、10mMホウ酸緩衝液に分散した。
これに、透析済みの少なくとも100℃を超える温度で加熱処理した血清アルブミンに対する抗体溶液を蛋白量換算で5mg添加し、室温で16時間以上撹拌しながら反応させた。遠心分離(15,000回転、10分間)により上清を除き、10mMホウ酸緩衝液に分散し、さらに、遠心操作を繰り返して、10mMほう酸緩衝液にて洗浄して、5%グリセリン、0.1%オボアルブミン、0.7%ポリビニルピロリドン、及び0.05%アジ化ナトリウムを含む20mMトリス塩酸緩衝液に分散して着色ラテックス粒子懸濁液を調製した。
プラスチック製の反応容器(蓋体と容器本体からなる。)の容器本体に、適当な大きさに切り出した吸収材(日本バイリーン社製)を組み入れ、その上に10mm四方に裁断したグラスファイバー(ワットマン社製)と、10mm四方に裁断した前記(1)で調製した検出領域が形成された担体(膜)を順次載置し、蓋体で蓋をして固定し、イムノフィルター法による検出試薬を製造した。なお、蓋体には試料などを滴下するための窓が、検出領域に対応する位置に穿設されたものを使用した。
試料として牛肉骨粉を、10倍量の0.5%Tween20、20mM2−メルカプトエタノール溶液、150mM塩化ナトリウム溶液、および1mg/mlオボアルブミン溶液を含む20mMトリス塩酸緩衝液pH7.4で抽出して抽出液を作製した。
該抽出液を種々の希釈倍率にて前記緩衝液を用いて希釈し、その希釈液200μlをマイクロピペットで採取し、それぞれ別個の反応容器内に窓から滴下した。希釈液が完全に吸収された後に、前記(2)で調製した着色ラテックス粒子懸濁液200μlをそれぞれの反応容器内に窓から滴下し、完全に吸収された後、直ちに肉眼で着色の有無を確認した。判定は実施例1と同様に行った。表3に結果を示す。
表3から明らかなように、抽出液を10000倍に希釈した場合では、検出領域には何ら変化が無く、着色は認められなかったことから、陰性と判定された。
一方、抽出液が5000倍以下の希釈までは、検出領域に着色が認められ、陽性と判定された。なお、試料の滴下から判定までに要した時間は5分間であった。
(1)本発明の検出試薬は、特別な機器や熟練技術者を必要とすることなく、試料(検体)の採取現場において簡単に加熱処理された動物性組織由来原料を検出できる。
(2)加熱処理された動物性組織由来原料の検出が1〜2ステップで完了し、従来に比して顕著に検出時間を短縮できる。
(3)缶詰等の高温加熱処理食品や、肉骨粉等の混入を検査すべく家畜用飼料において、殆ど擬陽性判定を与えず、極めて信頼性の高い検出法を提供できる。
2 検出領域
10A,10B 検出試薬
Claims (23)
- 試料中に存在する100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料を検出するための検出試薬であって、
前記動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが、標識物質により標識された標識抗体(A)と、
前記動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが固定された検出領域を備えた担体(B)とを有することを特徴とする検出試薬。 - 前記動物性組織由来原料は、120℃以上の温度で前記加熱処理されたものであることを特徴とする請求項1に記載の検出試薬。
- 前記動物性組織由来原料は、130℃以上の温度で前記加熱処理されたものであることを特徴とする請求項1に記載の検出試薬。
- 前記動物性組織由来原料は、前記加熱処理とともに加圧処理されたものであることを特徴とする請求項1ないし3のいずれかに記載の検出試薬。
- 前記動物性組織由来原料は、肉骨粉であることを特徴とする請求項4に記載の検出試薬。
- 前記試料は、缶詰食品であることを特徴とする請求項1ないし4のいずれかに記載の検出試薬。
- 前記試料は、家畜用飼料であることを特徴とする請求項5に記載の検出試薬。
- 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントは、120℃以上の温度で前記加熱処理された血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであることを特徴とする請求項1ないし7のいずれかに記載の検出試薬。
- 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントは、加圧処理された血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであることを特徴とする請求項8に記載の検出試薬。
- 前記標識物質は、有色微粒子であることを特徴とする請求項1ないし9のいずれかに記載の検出試薬。
- 前記担体(B)は、ニトロセルロース膜、ナイロン膜、ポリビニリデンジフルオライド膜からなる群より選ばれる1種であることを特徴とする請求項1ないし10のいずれかに記載の検出試薬。
- キットの形態であることを特徴とする請求項1ないし11のいずれかに記載の検出試薬。
- 試料中に存在する100℃を超える温度で加熱処理された動物性組織由来原料を検出する方法であって、
前記動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが標識物質により標識された標識抗体(A)と前記試料とを、前記動物性組織由来原料中の血清アルブミンに対する抗体またはその抗原結合性フラグメントが固定された検出領域を備えた担体(B)の前記検出領域に接触させ、前記検出領域からの信号に基づいて、前記試料中の前記動物性組織由来原料の有無を判定することを特徴とする検出方法。 - 前記動物性組織由来原料は、120℃以上の温度で前記加熱処理されたものであることを特徴とする請求項13に記載の検出方法。
- 前記動物性組織由来原料は、130℃以上の温度で前記加熱処理されたものであることを特徴とする請求項13に記載の検出方法。
- 前記動物性組織由来原料は、前記加熱処理とともに加圧処理されたものであることを特徴とする請求項13ないし15のいずれかに記載の検出方法。
- 前記動物性組織由来原料は、肉骨粉であることを特徴とする請求項16に記載の検出方法。
- 前記試料は、缶詰食品であることを特徴とする請求項13ないし16のいずれかに記載の検出方法。
- 前記試料は、家畜用飼料であることを特徴とする請求項17に記載の検出方法。
- 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントは、120℃以上の温度で前記加熱処理された血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであることを特徴とする請求項13ないし19のいずれかに記載の検出方法。
- 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントは、加圧処理された血清アルブミンに対しての抗体またはその抗原結合性フラグメントであることを特徴とする請求項20に記載の検出方法。
- 前記標識物質は、有色微粒子であることを特徴とする請求項13ないし21のいずれかに記載の検出方法。
- 前記担体(B)は、ニトロセルロース膜、ナイロン膜、ポリビニリデンジフルオライド膜からなる群より選ばれる1種であることを特徴とする請求項13ないし22のいずれかに記載の検出方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005138688A JP4313778B2 (ja) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | 加熱処理された動物性組織由来原料の検出試薬および検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005138688A JP4313778B2 (ja) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | 加熱処理された動物性組織由来原料の検出試薬および検出方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006317226A true JP2006317226A (ja) | 2006-11-24 |
JP4313778B2 JP4313778B2 (ja) | 2009-08-12 |
Family
ID=37538038
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005138688A Active JP4313778B2 (ja) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | 加熱処理された動物性組織由来原料の検出試薬および検出方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4313778B2 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009069779A1 (ja) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Morinaga & Co., Ltd. | 食品成分抽出方法及び食品検査方法並びに食品検査キット |
WO2010095469A1 (ja) * | 2009-02-23 | 2010-08-26 | プリマハム株式会社 | イムノクロマト法によるアレルゲン検出方法 |
WO2011102437A1 (ja) | 2010-02-18 | 2011-08-25 | 田中貴金属工業株式会社 | 加工食品中の豚肉検出法およびその検出キット |
WO2011105466A1 (ja) | 2010-02-25 | 2011-09-01 | 田中貴金属工業株式会社 | 生豚肉検出法およびその検出キット |
JP2013033062A (ja) * | 2012-10-30 | 2013-02-14 | Morinaga & Co Ltd | 食品成分抽出方法及び食品検査方法並びに食品検査キット |
CN105301258A (zh) * | 2015-09-23 | 2016-02-03 | 集美大学 | 一种热加工食品中蛋清含量的检测方法 |
-
2005
- 2005-05-11 JP JP2005138688A patent/JP4313778B2/ja active Active
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2008330507B2 (en) * | 2007-11-30 | 2014-05-22 | Morinaga & Co., Ltd. | Method of extracting food component, food inspection method and food inspection kit |
JP2009133712A (ja) * | 2007-11-30 | 2009-06-18 | Morinaga & Co Ltd | 食品成分抽出方法及び食品検査方法並びに食品検査キット |
WO2009069779A1 (ja) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | Morinaga & Co., Ltd. | 食品成分抽出方法及び食品検査方法並びに食品検査キット |
US8859212B2 (en) | 2007-11-30 | 2014-10-14 | Morinaga & Co., Ltd. | Method of extracting food component, food inspection method and food inspection kit |
WO2010095469A1 (ja) * | 2009-02-23 | 2010-08-26 | プリマハム株式会社 | イムノクロマト法によるアレルゲン検出方法 |
CN102317780B (zh) * | 2009-02-23 | 2016-02-17 | 普利玛食品株式会社 | 利用免疫层析法的变应原检测方法 |
CN102317780A (zh) * | 2009-02-23 | 2012-01-11 | 普利玛食品株式会社 | 利用免疫层析法的变应原检测方法 |
WO2011102437A1 (ja) | 2010-02-18 | 2011-08-25 | 田中貴金属工業株式会社 | 加工食品中の豚肉検出法およびその検出キット |
CN102687013A (zh) * | 2010-02-18 | 2012-09-19 | 田中贵金属工业株式会社 | 加工食品中的猪肉的检测法及其检测试剂盒 |
US9863943B2 (en) | 2010-02-18 | 2018-01-09 | Tanaka Kikinzoku Kogyo K.K. | Method of detecting pork in processed food and detection kit therefor |
WO2011105466A1 (ja) | 2010-02-25 | 2011-09-01 | 田中貴金属工業株式会社 | 生豚肉検出法およびその検出キット |
JP2013033062A (ja) * | 2012-10-30 | 2013-02-14 | Morinaga & Co Ltd | 食品成分抽出方法及び食品検査方法並びに食品検査キット |
CN105301258A (zh) * | 2015-09-23 | 2016-02-03 | 集美大学 | 一种热加工食品中蛋清含量的检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4313778B2 (ja) | 2009-08-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4313778B2 (ja) | 加熱処理された動物性組織由来原料の検出試薬および検出方法 | |
CN105651994B (zh) | 利用免疫层析法的变应原检测方法 | |
JPS5817834A (ja) | 担体結合免疫吸着剤およびその製法と用途 | |
JPH07506195A (ja) | 特異的結合性アッセイ試薬の固定化 | |
JP4778804B2 (ja) | バイオピリン検出用イムノクロマトグラフィー測定方法及び装置 | |
CN1438486A (zh) | 一种免疫层析检测abo血型的方法和制备的试纸及其应用 | |
CN104880552A (zh) | 检测恩诺沙星的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法 | |
CA2467082A1 (en) | Rapid prion-detection assay | |
US20120288962A1 (en) | Method of detecting raw pork and detection kit therefor | |
CN102135535A (zh) | 一种直接进行半定量分析的免疫胶体金属检测技术及其制备方法和用途 | |
WO2009149293A1 (en) | Rapid detection of post-vaccination antibody response | |
JP7510620B2 (ja) | アレルゲン固定化担体の製造方法及びアレルゲン特異的抗体の検出方法 | |
JP2008275511A (ja) | インフルエンザウイルス抗原の免疫測定法及びそれに用いられる物 | |
US20080014570A1 (en) | Method Of Removing Adhesive Microvesicles | |
CN101458254A (zh) | 一种盐酸克伦特罗检测试纸及其检测方法 | |
US9863943B2 (en) | Method of detecting pork in processed food and detection kit therefor | |
CN115166238A (zh) | 羊布鲁氏菌病初筛和确诊一体化抗体检测试纸条 | |
JP4969869B2 (ja) | クロマトグラフィー用試験具及びその製造方法 | |
JP4280225B2 (ja) | 被加熱処理動物性組織由来原料検出試薬 | |
US20030124618A1 (en) | Device for analysing analyte compounds and use hereof | |
KR100261050B1 (ko) | 면역크로마토그라피법을 이용한 돼지오제스키병 항체검사장치 및 이를 이용한 돼지오제스키병 진단방법 | |
EP1933141B1 (en) | Antigen detection method involving an oligonucleotide enhanced collodial gold signal | |
WO2022085719A1 (ja) | ビタミンa定量用イムノクロマトストリップおよび測定キット | |
US20030092199A1 (en) | Prion-detection business methods | |
JPH1123576A (ja) | サルモネラ菌の抗体測定法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070328 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20070713 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20070815 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20070815 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20090428 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090507 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090515 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120522 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4313778 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120522 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130522 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130522 Year of fee payment: 4 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140522 Year of fee payment: 5 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |