JP2006201187A - 前立腺ガンの免疫診断のための化合物およびそれらの使用方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】患者における前立腺ガンを検出するための方法であって、以下の工程:(a)該患者から得た生物学的サンプルを、ポリぺプチドに結合し得る結合因子と接触させる工程であって、該ポリぺプチドは、前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含み、該タンパク質は、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、ならびに該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、工程;および(b)該サンプルにおいて、該結合因子に結合するタンパク質またはポリぺプチドを検出し、それにより該患者における前立腺ガンを検出する工程、を包含する、方法。
【選択図】なし
Description
前立腺ガンは、50歳を越える男性において30%の推定の発生率をともなう、男性の間ではガンの最も一般的な形態である。圧倒的な臨床証拠により、ヒト前立腺ガンは骨に転移する傾向を有し、そしてこの疾患はアンドロゲン依存性からアンドロゲン不応性状態に回避不能に進行するようであり、そして増大した患者の死亡率を導くことが示されている。この多く見られる疾患は、現在、米国の男性の間でガン死亡の第2の主要な原因である。
本発明は、前立腺ガンの免疫診断のための方法を、このような方法において用いられるキットと共に提供する。ポリペプチドは、少なくとも、前立腺腫瘍タンパク質、または保存的置換および/または改変においてのみ異なる上記タンパク質の改変体の免疫原性部分を含有するように開示され、ここで、前立腺腫瘍タンパク質は、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、179〜224に記載のヌクレオチド配列およびそれらの改変体からなる群より選択される配列を有するDNA分子によりコードされるアミノ酸配列を含む。このようなポリペプチドは、前立腺ガンの診断およびモニタリングに有用に利用され得る。
(項目1)患者における前立腺ガンを検出するための方法であって、以下の工程:
(a)該患者から得た生物学的サンプルを、ポリぺプチドに結合し得る結合因子と接触させる工程であって、該ポリぺプチドは、前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含み、該タンパク質は、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、ならびに該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、工程;および
(b)該サンプルにおいて、該結合因子に結合するタンパク質またはポリぺプチドを検出し、それにより該患者における前立腺ガンを検出する工程、
を包含する、方法。
(項目2)前記結合因子が、モノクローナル抗体である、項目1に記載の方法。
(項目3)前記結合因子が、ポリクローナル抗体である、項目2に記載の方法。
(項目4)患者における前立腺ガンの進行をモニターするための方法であって、以下の工程:
(a)該患者から得た生物学的サンプルを、ポリぺプチドに結合し得る結合因子と接触させる工程であって、該ポリぺプチドは、前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含み、該タンパク質は、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、ならびに該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、工程;
(b)該サンプルにおいて、該結合因子に結合するタンパク質またはポリぺプチドの量を測定する工程;
(c)工程(a)および(b)を繰り返す工程;ならびに
(d)該患者における前立腺ガンの進行をモニターするために、工程(b)および(c)において検出されたポリぺプチドの量を比較する工程、
を包含する、方法。
(項目5)前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含むポリぺプチドに結合するモノクローナル抗体であって、該タンパク質は、配列番号2〜3、8〜29、41〜45、47〜52、54〜65、70、73、74、79、81、87、90、92、93、97、103、104、107、109〜111、115〜160、171、173〜175、177、181、188、191、193、194、198、203、204、207、209〜211、220、222〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、抗体。
(項目6)患者における前立腺ガンの発症を阻害するための方法において使用するための医薬の製造における使用のための、治療的有効量の項目5に記載されるモノクローナル抗体。
(項目7)前記モノクローナル抗体が、治療剤に結合している、項目6に記載のモノクローナル抗体。
(項目8)患者における前立腺ガンを検出するための方法であって、以下の工程:
(a)該患者から生物学的サンプルを得る工程;
(b)該サンプルを、ポリメラーゼ連鎖反応において少なくとも2つのオリゴヌクレオチドプライマーと接触させる工程であって、少なくとも1つの該オリゴヌクレオチドが、前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含むポリぺプチドをコードするDNA分子に特異的であり、該タンパク質が、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、工程;ならびに
(c)該サンプルにおいて、該オリゴヌクレオチドプライマーの存在下で増幅するDNA配列を検出し、それにより前立腺ガンを検出する工程、
を包含する、方法。
(項目9)前記オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つが、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224から選択される配列を有するDNA分子の少なくとも約10個の連続するヌクレオチドを含む、項目8に記載の方法。
(項目10)以下を含む診断キット:
(a)1つ以上の項目5に記載のモノクローナル抗体;および
(b)検出試薬。
(項目11)以下を含む診断キット:
(a)配列番号5〜7、30〜40、46、53、66〜69、71、72、75〜78、80、82〜86、88、89、91、94〜96、98〜102、105、106、161〜170、179、180、182〜187、189、190、192、195〜197、199〜202、205、206、208、212〜219、221からなる群から選択されるヌクレオチド配列、該配列の相補体、および該ヌクレオチド配列の改変体を有するDNA分子によってコードされるポリぺプチドに結合する1つ以上のモノクローナル抗体;ならびに
(b)検出試薬。
(項目12)前記モノクローナル抗体が固相支持体に固定されている、項目10または11に記載のキット。
(項目13)前記固相支持体が、ニトロセルロース、ラテックス、またはプラスチック材料を含む、項目12に記載のキット。
(項目14)前記検出試薬が、結合因子に結合されたレポーター基を含む、項目10または11に記載のキット。
(項目15)前記結合因子が、抗免疫グロブリン、プロテインG、プロテインA、およびレクチンからなる群から選択される、項目14に記載のキット。
(項目16)前記レポーター基が、ラジオアイソトープ、蛍光基、発光基、酵素、ビオチン、および色素粒子からなる群から選択される、項目14に記載のキット。
(項目17)少なくとも2つのオリゴヌクレオチドプライマーを含む診断キットであって、該オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つが、前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含むポリぺプチドをコードするDNA分子に特異的であり、該タンパク質が配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、ならびに該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、キット。
(項目)18.項目17に記載の診断キットであって、前記オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つが、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224から選択される配列を有するDNA分子の少なくとも約10個の連続するヌクレオチドを含む、キット。
(項目19)患者における前立腺ガンを検出するための方法であって、以下の工程:
(a)該患者から生物学的サンプルを得る工程;
(b)該生物学的サンプルを、前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含むポリぺプチドをコードするDNA分子に特異的なオリゴヌクレオチドプローブと接触させる工程であって、該タンパク質が配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、ならびに該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、工程;ならびに
(c)該サンプルにおいて、該オリゴヌクレオチドプローブにハイブリダイズするDNA配列を検出し、それにより該患者における前立腺ガンを検出する工程、
を包含する、方法。
(項目20)前記オリゴヌクレオチドプローブが、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224からなる群から選択される配列を有するDNA分子の少なくとも約15個の連続するヌクレオチドを含む、項目19に記載の方法。
(項目21)前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含むポリぺプチドをコードするDNA分子に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを含む診断キットであって、該タンパク質が配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、ならびに該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、キット。
(項目22)前記オリゴヌクレオチドプローブが、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224からなる群から選択される配列を有するDNA分子の少なくとも約15個の連続するヌクレオチドを含む、項目21に記載の診断キット。
上記のように、本発明は、一般に、前立腺ガンの免疫診断およびモニタリングのための組成物および方法に関する。本発明の組成物は、一般に、前立腺腫瘍タンパク質の少なくとも一部を含むポリペプチドである。本発明のポリペプチドに結合する分子(例えば、抗体またはそのフラグメント)もまた、本発明内に含まれる。このような分子は、本明細書中では「結合因子」と呼ばれる。
前立腺腫瘍ポリペプチドの単離および特徴付け
本実施例は、前立腺腫瘍cDNAライブラリーからの前立腺腫瘍ポリペプチドの単離を記載する。
前立腺腫瘍ポリペプチドの組織特異性の決定
遺伝子特異的プライマーを用いて、代表的な前立腺腫瘍ポリペプチドF1-16、H1-1、J1-17、L1-12、F1-12、およびN1-1862についてのmRNA発現レベルを、RT-PCRを用いて、種々の正常組織および腫瘍組織において調べた。
PCRに基づくサブトラクションによる前立腺腫瘍ポリペプチドの単離および特徴付け
10個の他の正常組織cDNA(脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、卵巣、胎盤、骨格筋、脾臓、および胸腺)でサブトラクションされ、次いで、第1回のPCR増幅に供された、正常前立腺に由来するcDNAを含むcDNAサブトラクションライブラリーをClontechから購入した。このライブラリーを、製造者のプロトコルに従って、第2回のPCR増幅に供した。得られたcDNAフラグメントを、ベクターpT7Blue T-ベクター(Novagen,Madison,WI)にサブクローニングし、そしてXL-1 Blue MRF’ E.coli(Stratagene)に形質転換した。DNAを独立したクローンから単離し、そしてPerkin Elmer/Applied Biosystems Division Automated Sequencer Model 373Aを用いて配列決定した。
ポリペプチド合成
ポリペプチドを、HPTU(O-ベンゾトリアゾール-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート)活性化を用いるFMOC化学を用いて、Applied Biosystems 430Aペプチド合成機において合成し得る。Gly-Cys-Gly配列をペプチドのアミノ末端に接着して、共役、固定化表面への結合、またはペプチド標識の方法を提供し得る。固相支持体からのペプチドの切断を、以下の切断混合物:トリフルオロ酢酸:エタンジチオール:チオアニゾール:水:フェノール(40:1:2:2:3)を用いて行い得る。2時間切断した後、ペプチドを、冷メチル-t-ブチル-エーテル中で沈殿させ得る。次いで、ペプチドペレットを、0.1%トリフルオロ酢酸(TFA)を含む水に溶解し、そしてC18逆相HPLCによる精製前に凍結乾燥し得る。水(0.1% TFAを含む)中の0%〜60%アセトニトリル(0.1% TFAを含む)勾配を使用して、ペプチドを溶出し得る。純粋画分の凍結乾燥後、ペプチドを、エレクトロスプレーまたは他の型の質量分析法を用いて、およびアミノ酸分析により特徴付け得る。
Claims (1)
- 患者における前立腺ガンを検出するための方法であって、以下の工程:
(a)該患者から得た生物学的サンプルを、ポリぺプチドに結合し得る結合因子と接触させる工程であって、該ポリぺプチドは、前立腺タンパク質またはその改変体の免疫原性部分を含み、該タンパク質は、配列番号2〜3、5〜107、109〜111、115〜171、173〜175、177、および179〜224に示されるヌクレオチド配列、該ヌクレオチド配列の相補体、ならびに該ヌクレオチド配列の改変体からなる群から選択される配列を有するDNA分子によってコードされるアミノ酸配列を含む、工程;および
(b)該サンプルにおいて、該結合因子に結合するタンパク質またはポリぺプチドを検出し、それにより該患者における前立腺ガンを検出する工程、
を包含する、方法。
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