JP2006191858A - シミ、ソバカスまたは茶黒髪の予測方法並びにそれに基づく化粧品の選択方法 - Google Patents
シミ、ソバカスまたは茶黒髪の予測方法並びにそれに基づく化粧品の選択方法 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体(MC1R)のアミノ酸配列における92位のアミノ酸の変異が存在する場合に、皮膚におけるシミもしくはソバカスまたは毛髪における茶色の髪の発生確率が高いと鑑別する、又は、ヒトMC1Rのアミノ酸配列における163位のアミノ酸の変異が存在する場合に、皮膚におけるシミ又はソバカスの発生確率が高いと鑑別する、又は、ヒトMC1Rのアミノ酸配列における92位及び163位のアミノ酸の変異の数に基づいて、変異が2以上存在する場合に、皮膚におけるシミもしくはソバカス又は毛髪における茶色の髪の発生確率が高いと鑑別する。
【選択図】 なし
Description
Am. J. Hum. Genet., 2000, Vol. 66, 1351-1361 Human Molecular Genetics, 2000, Vol. 9, No. 17, 2531-2537 Journal of Cell Science, 2002, Vol. 115, 2349-2355 Human Molecular Genetics, 2001, Vol. 10, No. 16, 1701-1708
1. ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における92位のアミノ酸の変異に基づいて、変異が存在する場合に、皮膚におけるシミもしくはソバカスまたは毛髪における茶色の髪の発生確率が高いと鑑別することを特徴とする、黄色人種の皮膚におけるシミ又はソバカス又は毛髪における茶色の髪の発生確率の鑑別方法。
率の鑑別方法。
(1)ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体(MC1R)のアミノ酸配列における92位のアミノ酸の変異が存在する場合に、皮膚におけるシミもしくはソバカスまたは毛髪における茶色の髪の発生確率が高いと鑑別する。
(2)ヒトMC1Rのアミノ酸配列における163位のアミノ酸の変異が存在する場合に、皮膚におけるシミ又はソバカスの発生確率が高いと鑑別する。
(3)ヒトMC1Rのアミノ酸配列における92位及び163位のアミノ酸の変異の数に基づいて、変異が2以上存在する場合に、皮膚におけるシミもしくはソバカス又は毛髪における茶色の髪の発生確率が高いと鑑別する。
人種及び黄色人種のそれぞれにおいては、MC1RにおけるSNPの分布が類似しており、日本人を対象として得られた結果は、黄色人種においては同様であると考えられる。
(1)AcycloPrimerSNPキットG/A(PerkinElmr社)を用い、蛍光アシクロターミネーターを取り込ませ1塩基伸長させる(伸長用プライマーの例:tgctggtgagcgggagcaac(配列番号11))。その後、マルチラベルカウンター(ARVOmx-8:PerkinElmr社)で蛍光偏光を測定する。
(2)AcycloPrimerSNPキットC/T(PerkinElmr社)を用い、蛍光アシクロターミネーターを取り込ませ1塩基伸長させる(伸長用プライマーの例:gatgacggccgtctccagca(配列番号12))。その後マルチラベルカウンター(ARVOmx-8:PerkinElmr社)で蛍光偏光を測定する。
(1)ターミネーターを取り込ませ1〜数塩基伸長させる(伸長用プライマーの例:tgctggtgagcgggagcaac(配列番号13))。その後質量分析機器(MALDI-TOF:Bruker社)で質量を測定する。
(2)ターミネーターを取り込ませ1〜数塩基伸長させる(伸長用プライマーの例:gatgacggccgtctccagca(配列番号14))。その後質量分析機器(MALDI-TOF:Bruker社)で質量を測定する。
(1) AcycloPrimerSNPキットG/A(PerkinElmr社)を用い、蛍光アシクロターミネーターを取り込ませ1塩基伸長させる(伸長プライマーの例:ggcagaggtcgtggcgcggc(配列番号17))。その後マルチラベルカウンター(ARVOmx-8:PerkinElmr社)で蛍光偏光を測定する。(2) AcycloPrimerSNPキットC/T(PerkinElmr社)を用い、蛍光アシクロターミネーターを
取り込ませ1塩基伸長させる(伸長プライマーの例:cccagatggccgcaacggct(配列番号18))。その後マルチラベルカウンター(ARVOmx-8:PerkinElmr社)で蛍光偏光を測定する。
(1)ターミネーターを取り込ませ1〜数塩基伸長させる(伸長用プライマーの例:ggcagaggtcgtggcgcggc(配列番号19))。その後質量分析機器(MALDI-TOF:Bruker社)で質量を測定する。
(2) ターミネーターを取り込ませ1〜数塩基伸長させる(伸長用プライマーの例:cccagatggccgcaacggct(配列番号20))。その後質量分析機器(MALDI-TOF:Bruker社)で質量を測定する。
日本人のボランティア(245人)から10本ずつ採取された眉毛をエッペンドルフチューブに入れ、次いで、extraction buffer (ニッポンジーン (319-03401)) 200μl、enzyme solution (ニッポンジーン (319-03401)) 5μl、lysis solution (ニッポンジーン (319-03401)) 8μlを混合した。55℃で 20分インキュベートした後、enzyme solution (ニッポンジーン (319-03401)) 5μlを混合し、55℃で5-10分インキュベートした。水200μl及びフェノール/クロロホルム(1:1) (invitrogen (15593-031)) 400μl を加え、5分転倒混和した。Phase lock gel (エッペンドルフ(95651))をチューブに入れ15000rpmで5分遠心した。水層を採取し、3M 酢酸ナトリウム(pH5.2) (ニッポンジーン (312-01791)) 40μl及びethachinmate (ニッポンジーン (316-90081)) 4μlを混合した。エタノール800μlを追加し15000rpmで15分遠心した。上清を除去し、70%エタノールで洗浄し、乾燥した。 TE(pH8.0) (ニッポンジーン (316-90025)) 20μlで溶解し、DNA溶液とした。
One Shot LA PCR mix (TaKaRa (RR004))に、プライマー(tgacgaggggaggggtgaagg(配列番号1), agatggggtggggtggatgct(配列番号2))各1μl 、水22μl、及び、テンプレート(DNA溶液) 1μlを加えた。反応条件は以下の通りであった。
シークエンスの反応液及び反応条件は以下の通りであった。
Arg163GlnとVal92Metの検出結果は、以下の通りであった。
(1)シミスコア:皮膚科が老人性色素斑を特定した後に、その程度をアペックスアイ総合テキスト(1999年度)65〜66ページの写真を参考にして観察者3人によりスコア化(1→5シミ度は高い)した後、平均値を計算した。人数的に中間となる2.33と2.67を境とし
てシミ小グループ、シミ大グループと定義した(表4参照)。
1)Val 92 Met と肌データについて
測定項目は以下の通りであった。
関は見られなかった。
(1)シミスコア:皮膚科医が老人性色素斑を特定した後に、その程度をアペックスアイ総合テキスト(1999年度)65〜66ページの写真を参考にして観察者3人によりスコア化(1→5シミ度は高い)。その後平均値を計算。
(2)年齢:肌測定時点での年齢をアンケートにより採取
(3)上腕内側部位のITA°値:色彩色差計CR-200(ミノルタ社製)を用い、頬は目じりと小鼻を結ぶ交点付近で、黒子やシミがある場合はそこを避けた部位を測定箇所とした。上腕内側はUV照射等を行っていない場所で、血管直上を避けた部位を測定箇所とした。3回測定しその平均を採用した。得られたL*値、b*値を用いITA°値を計算した。
シミと年齢・腕ITA°に関係があるかχ二乗検定で調べたところ、年齢ではp<0.0001、腕ITA°ではp=0.0025であり、アミノ酸置換数0の場合、シミスコアは年齢/腕ITAと関係があることが判明した。そこで年齢/腕ITAをロジスティックモデルにあてはめて、以下のシミスコアの予測式を作成した。
シミと年齢・腕ITA°に関係があるかχ二乗検定で調べたところ、年齢でp<0.0001、腕ITA°でp=0.3154 であり、アミノ酸置換数1の場合、シミスコアは年齢とのみ関係があることが判明した。そこで年齢をロジスティックモデルにあてはめて、以下のシミスコアの予測式を作成した。
シミと年齢・腕ITA°に関係があるかχ二乗検定で調べたところ、年齢でp=0.1523、腕ITA°ではp=0.0390であり、アミノ酸置換数2以上の場合、シミスコアは腕ITAとのみ関係があることが判明した。そこで腕ITAをロジスティックモデルにあてはめて、以下のシミスコアの予測式を作成した。
Claims (13)
- ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における92位のアミノ酸の変異に基づいて、変異が存在する場合に、皮膚におけるシミもしくはソバカスまたは毛髪における茶色の髪の発生確率が高いと鑑別することを特徴とする、黄色人種の皮膚におけるシミ又はソバカス又は毛髪における茶色の髪の発生確率の鑑別方法。
- ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における、92位アミノ酸の変異を、ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体遺伝子における同変異をもたらす一塩基置換を検出することにより検出することを含む、請求項1記載の方法。
- 発生確率が、オッズ比で示される請求項1又は2記載の方法。
- ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における163位のアミノ酸の変異に基づいて、変異が存在する場合に、皮膚におけるシミ又はソバカスの発生確率が高いと鑑別することを特徴とする、黄色人種の皮膚におけるシミ又はソバカスの発生確率の鑑別方法。
- ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における、163位アミノ酸の変異を、ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体遺伝子における同変異をもたらす一塩基置換を検出することにより検出することを含む、請求項4記載の方法。
- 発生確率が、オッズ比で示される請求項5又は6記載の方法。
- ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における92位及び163位のアミノ酸の変異の数に基づいて、変異が2以上存在する場合に、皮膚におけるシミもしくはソバカス又は毛髪における茶色の髪の発生確率が高いと鑑別することを特徴とする、黄色人種の皮膚におけるシミもしくはソバカス又は毛髪における茶色の髪の発生確率の鑑別方法。
- ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における、92位及び/又は163位のアミノ酸の変異の数を、ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体遺伝子における同変異をもたらす一塩基置換を検出することにより求めることを含む、請求項1記載の方法。
- 発生確率が、オッズ比で示される請求項7又は8記載の方法。
- 請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法により鑑別された結果に基づいて、化粧品を選択することを特徴とする化粧品の選択方法。
- ヒトメラノサイト刺激ホルモン1受容体のアミノ酸配列における92位及び163位のアミノ酸の変異の数毎に、背景因子の指標を変数としてシミの程度の予測式を算出し、その予測式に基づいて、背景因子のシミに対する影響を予測する方法。
- 背景因子の指標が、年齢、又は、上腕内側部位のITA°値である請求項11の方法。
- 請求項11又は12に記載の方法により予測された結果に基づいて、化粧品を選択することを特徴とする化粧品の選択方法。
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