JP2006160667A - 低比重リポタンパク酸化抑制方法 - Google Patents

Abstract

【発明の課題】人体に安全な、ＬＤＬ酸化抑制剤を提供する。
【解決手段】羅布麻抽出物およびビタミンＣ類を併用して用いることによって、動脈疾患、心筋梗塞等のアテローム性動脈硬化症の原因ともなるＬＤＬ酸化を抑制する。
【選択図】なし

Description

本発明は、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）酸化抑制方法に関する。

心臓疾患、脳血管疾患などの循環器系疾患は動脈硬化症が主因を成しており、健康上の大きな懸念事項である。動脈硬化発症の主な要因の一つとして、アテローム性（粥状）動脈硬化症が挙げられ、その進行は狭心症、心筋梗塞、痴呆などの発症にもつながる。

低比重リポタンパク質（以下、ＬＤＬとする）はアテローム性動脈硬化症に深く関与しているといわれている。血液中を循環する非アテローム発生性ＬＤＬは、各種要因により酸化されアテローム発生性酸化ＬＤＬに変換されることによりアテローム性動脈硬化症となるといわれているが、そのメカニズムは現在明確には解明されていない。

ＬＤＬはコレステロールを各組織に運搬する役割を果たしており、その組成としては、２０％アポリポタンパクＢ、２０％リン脂質、４０％コレステロール、２０％トリグリセライドである。特にこれらの脂質には酸化されやすい不飽和脂肪酸が含まれており、活性酸素やフリーラジカルなどによる攻撃の標的となる。

酸化ＬＤＬ中の不飽和脂肪酸は、次々と連鎖反応を起こし、共役ジエンを経て、過酸化脂質やアルデヒドとなる。これに伴ってアポリポタンパクＢは断裂し、ＬＤＬ粒子は球形の構造を失っていく。こうして酸化ＬＤＬは、ＬＤＬ受容体に認識されなくなり、細胞に取り込まれなくなる。一方、マクロファージのスカベンジャー受容体に認識されるようになり、マクロファージに取り込まれ、泡沫細胞化することで動脈硬化の初期病変となるといわれている。

酸化ＬＤＬは、マクロファージの泡沫細胞化だけでなく、そのほか様々な面において動脈硬化促進的に働くことが知られている。例えば、酸化ＬＤＬは、血管内皮細胞に対し直接の細胞傷害作用を示し、動脈硬化形成の引き金となりうる。またそれ自身が単球、リンパ球などの遊走因子として働くだけでなく、内皮細胞からのサイトカインの放出を刺激し、単球の接着・遊走あるいはマクロファージへの分化を促進することが知られている。

動脈硬化症と動脈内における過酸化脂質量には密接な関係があることが示唆されている。また、酸化によって増加する過酸化脂質は、ＴＢＡ法で測定することができる。ＴＢＡ法は2- Thiobarbituric acid（ＴＢＡ）と反応するＴＢＡＲＳ（Thiobarbituric acid reacting substance）と呼ばれる物質量を測定するものである。動脈硬化症とＴＢＡ法によって測定される、ＴＢＡＲＳ量にも正の相関があることが確認されている。（例えば、特許文献１参照）

現在、動脈硬化症を治療する手段としては、食事療法、運動療法または薬事療法などがあるが、発症した組織に直接作用して、疾患を治療する方法は現在では開発されていない。

薬剤による治療も、肝臓におけるコレステロール合成を抑制して、ＬＤＬ受容体数を増加させ、血中からのＬＤＬの取り込みを促進して血中ＬＤＬ濃度を低下させるといったものしかない。

動脈硬化症によって誘発される重大な結果と、薬剤等による医療処置にかかる費用を考えると、これらの症状の発生および再発を防止するのに有効な薬理学的かつ栄養学的介入が必要である。

そこで、ＬＤＬ酸化抑制等を目的とした、フラボノイドを用いた食物サプリメント（例えば、特許文献２参照）や、ＬＤＬ取り込み促進作用を有し、脂肪低下剤として動脈硬化性疾患に有用なリグナン系化合物（例えば特許文献３参照）、ＬＤＬ−コレステロール値を低下させる作用と同時にＨＤＬ−コレステロール値を上昇させる作用を有する焙煎した羅布麻の葉から得られる羅布麻茶（例えば、特許文献４参照）等多くの方法が提案されている。

また、羅布麻については、その成分にヒペロシドとイソクエルシトリンが含まれていること（例えば、非特許文献１）、また、その羅布麻の成分であるヒペロシドがＡＤＰ(adenosine 5'-diphosohote)とＡｓＡ(ascorbic acid)やＮＡＤＰＨ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate)を用いて誘導した酸化を抑制すること（例えば、非特許文献２）、焙煎した羅布麻葉エキスが銅イオンによるＬＤＬの酸化を抑制する（例えば、非特許文献３）などが知られている。

特開平０９−６７２５５号公報 特表２００１−５１３３３２号公報 特開平０５−１９４４６４号公報 特許第３５１７３１８号公報 生薬学雑誌,47(1),27-33(1993) Natural Medicines,48(4),322-323(1994) 和漢医薬学雑誌,13,306-307(1996)

本発明は、動脈硬化症の発症要因であるＬＤＬの酸化を抑制する有用な方法を提供することを目的とする。さらに、ＬＤＬ酸化抑制に有用なＬＤＬ酸化抑制剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討を重ねた結果、羅布麻抽出物およびビタミンＣ類を併用して用いることによってＬＤＬの酸化が相乗的に抑制されることを見いだした。本発明は、かかる知見に基づいて完成したものである。

すなわち、本発明は、下記に掲げるものである：
項１．羅布麻抽出物およびビタミンＣ類を併用して用いることを特徴とするＬＤＬ酸化抑制方法。
項２.羅布麻抽出物がＬＤＬ１００重量部に対し０．０１〜１００重量部用いることを特徴とする請求項１記載のＬＤＬ酸化抑制方法。
項３.羅布麻抽出物１００重量部に対し、ビタミンＣ類を０．１〜５０重量部用いることを特徴とする請求項１記載のＬＤＬ酸化抑制方法。
項４.羅布麻抽出物およびビタミンＣ類を含有することを特徴とするＬＤＬ酸化抑制剤。
項５.項４記載のＬＤＬ酸化抑制剤を有効量含有する飲食物。
以下、本発明について詳細に説明をする。

本発明のＬＤＬ酸化抑制方法は、羅布麻抽出物およびビタミンＣ類を併用して用いることを特徴とする。

ここで、羅布麻（学名:Apocynum venetum L）とは、キョウチクトウ科に属する多年生宿草木である。バシクルモン、紅麻、沢漆麻とも呼ばれ、葉を茶としたものは、燕龍茶とか老喜茶と呼ばれ飲用されている。羅布麻は植物体全体であっても、また葉、花、茎、種子及び根等の植物体の一部であってもよいが、葉または葉を含む部分であることが好ましい。

抽出に用いる羅布麻（好ましくは葉）は、採取したての新鮮なもの、あるいは発酵または半発酵させたもの、それらを乾燥させたもの、または更に焙煎したもののいずれでもよいが、好ましくは羅布麻の葉を乾燥させたものである。

これらの羅布麻の抽出に使用される溶媒は、特に制限されず、水、極性有機溶媒または非極性有機溶媒のいずれであってもよいが、好ましくは水、極性有機溶媒またはこれらの混合物（含水極性有機溶媒）である。ここで極性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等の炭素数１〜６、好ましくは炭素数１〜３の低級アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの多価アルコール；またはアセトン、酢酸エチル、酢酸メチルなどを例示することができる。抽出溶媒として、好ましくは水、低級アルコール及びこれらの混合物（含水アルコール）であり、より好ましくは水、エタノール及びこれらの混合物（含水エタノール）である。なお、含水アルコール、特に含水エタノールを使用する場合の、当該溶液中のアルコール（エタノール）の含有割合としては、制限されないが、好ましくは１０〜９０容量％、好ましくは１０〜６０容量％、より好ましくは２０〜４０容量％の範囲を例示することができる。

抽出方法としては、一般に用いられる方法を広く採用することができる。制限はされないが、例えば上記の羅布麻を抽出溶媒の中に浸漬する方法（浸漬法）又は抽出溶媒に羅布麻を入れて加温しながら還流する方法（加熱還流法）等を挙げることができる。なお、浸漬法による場合は加熱（加温、高温）、室温又は冷却（低温）条件下のいずれであってもよく、また静置した状態の浸漬または攪拌しながらの浸漬のいずれであってもよい。

かかる抽出操作により得られた抽出物は、各種の固液分離手段に供され、溶媒に不溶な残渣（不溶性固形分）が除去される。ここで固液分離手段としてはデカンテーション、濾過、遠心分離または圧搾などの各種の固液分離手段を用いることができる。かくして得られる抽出液（濾液、上清、圧搾液）はそのままの状態で、またはさらに水、エタノール等の極性有機溶媒またはこれらの混合液で希釈して使用することができる。また、抽出溶媒を留去して一部濃縮または乾燥（減圧乾燥、凍結乾燥、スプレードライなどを含む）して、ペースト状（またはエキス粘稠物）または粉末状態（またはエキス乾燥物）の状態で用いることもできる。また抽出液を濃縮若しくは乾燥した後、該濃縮物若しくは乾燥物をさらに非溶解性溶媒で洗浄して精製して用いても、またこれを更に適当な溶媒（好ましくは、水やエタノール等の極性有機溶媒またはこれらの混合液）に溶解もしくは懸濁して用いてもよい。

また、抽出液は、必要に応じて濃縮若しくは乾燥した後に、脱臭または脱色等を目的として精製処理を行ってもよい。かかる精製方法は、特に制限されず、慣用されている精製法を任意に組み合わせて実施することができ、具体的には各種の樹脂処理法（吸着法、イオン交換法、ゲルろ過法など）、超臨界抽出法、膜処理法（限外濾過膜処理法、逆浸透膜処理法、イオン交換膜処理法など）、溶媒分画法および活性炭処理法等を例示することができる。

羅布麻抽出物については、前述した羅布麻の抽出物、好ましくは羅布麻の葉の抽出物（抽出液そのもの、その濃縮物、乾固物または精製物の別を問わない）を含有するものであればよく、これらの抽出物だけからなるものであってよいが、当該抽出物以外の成分として、希釈剤、担体またはその他の添加剤を含有していてもよい。

ビタミンＣ類は、Ｌ−アスコルビン酸またはその塩、またはＬ−アスコルビン酸の誘導体で、例えばＬ−アスコルビン酸ナトリム、Ｌ−アスコルビン酸モノステアレート，Ｌ−アスコルビン酸モノパルミテート，Ｌ−アスコルビン酸モノオレエート等のアスコルビン酸モノアルキル若しくはモノアルケニルエステル類、Ｌ−アスコルビン酸モノリン酸エステル，Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステル等のアスコルビン酸モノエステル誘導体、Ｌ−アスコルビン酸ジステアレート，Ｌ−アスコルビン酸ジパルミテート，Ｌ−アスコルビン酸ジオレエート等のＬ−アスコルビン酸 ジアルキル若しくはジアルケニルエステル誘導体、Ｌ−アスコルビン酸トリステアレート，Ｌ−アスコルビン酸トリパルミテート，Ｌ−アスコルビン酸トリオレエート等のＬ−アスコルビン酸トリアルキル若しくはトリアルケニルエステル誘導体、Ｌ−アスコルビン酸トリリン酸エステル等のＬ−アスコルビン酸トリエステル誘導体等を挙げることが出来る。これらのＬ−アスコルビン酸またはその塩、またはＬ−アスコルビン酸の誘導体のうち、特に好ましいものは、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル及びこれらの塩である。

ＬＤＬに直接羅布麻抽出物、ビタミンＣ類を添加した場合のそれぞれの添加量は、ＬＤＬ１００重量部に対して、羅布麻抽出物の添加量は、０．０１〜１００重量部、好ましくは０．１〜５０重量部、ビタミンＣ類の添加量は０．００１〜１０重量部、好ましくは ０．０１〜５重量部である。

本発明のＬＤＬ酸化抑制剤は、上述の羅布麻抽出物とビタミンＣ類を含有するものであればよく、羅布麻抽出物とビタミンＣ類だけからなるものでも良いが、これら以外の成分として希釈剤、担体またはその他の添加物を含有していてもよい。

希釈剤または担体としては、本発明の効果を妨げないものであれば特に制限されず、例えばシュクロース、グルコース、デキストリン、澱粉類、サイクロデキストリン、トレハロース、乳糖、マルトース、水飴、液糖などの糖類；エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等のアルコール類；ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール等の糖アルコール；アラビアガム、キサンタンガム、カラギーナン、グァーガム、ジェランガム等の多糖類；または水を挙げることができる。また添加剤としては、抗酸化剤、キレート剤等の助剤、香料、香辛料抽出物、防腐剤などを挙げることができる。

使用上の利便等から、これらの希釈剤、担体または添加剤を用いてＬＤＬ酸化抑制剤を調製する場合は、羅布麻の抽出物（乾固物として換算）が、ＬＤＬ酸化抑制剤１００重量％中に固形換算で０．０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜３０重量％、ビタミンＣ類が０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％の割合で含まれるように調製することが望ましい。

なお、ここで添加剤として用いられる抗酸化剤としては、食品添加物として用いられるものを広く例示することができる。例えば、制限はされないが、エリソルビン酸及びその塩（例えばエリソルビン酸ナトリウム）等のエリソルビン酸類；亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウムまたはピロ亜硫酸カリウムなどの亜硫酸塩類；α−トコフェロールやミックストコフェロール等のトコフェロール類；ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）やブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）等；エチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウムやエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム等のエチレンジアミン四酢酸類；没食子酸や没食子酸プロピル等の没食子酸類；アオイ花抽出物、アスペルギルステレウス抽出物、カンゾウ油性抽出物、食用カンナ抽出物、グローブ抽出物、精油除去ウイキョウ抽出物、セイヨウワサビ抽出物、セージ抽出物、セリ抽出物、チャ抽出物、テンペ抽出物、ドクダミ抽出物、生コーヒー豆抽出物、ヒマワリ種子抽出物、ピメンタ抽出物、ブドウ種子抽出物、ブルーベリー葉抽出物、プロポリス抽出物、ヘゴ・イチョウ抽出物、ペパー抽出物、ホウセンカ抽出物、ヤマモモ抽出物、ユーカリ葉抽出物、リンドウ根抽出物、ルチン（抽出物）（小豆全草，エンジュ，ソバ全草抽出物）、ローズマリー抽出物、チョウジ抽出物、リンゴ抽出物等の各種植物の抽出物；その他、酵素処理ルチン、クエルセチン、ルチン酵素分解物（イソクエルシトリン）、酵素処理イソクエルシトリン、酵素分解リンゴ抽出物、ごま油抽出物、菜種油抽出物、コメヌカ油抽出物、コメヌカ酵素分解物、没食子酸及びそのエステル類等を挙げることができる。好ましくは、ヤマモモ抽出物、エンジュ抽出物、ルチン（抽出物）、生コーヒー豆抽出物、ローズマリー抽出物等の植物抽出物；酵素処理ルチン、ルチン酵素分解物（イソクエルシトリン）、酵素処理イソクエルシトリン等を挙げることができる。

本発明において特に好ましい抗酸化剤として、フラボノール類を挙げることができる。このフラボノール類としては、フラボノール並びにアグリコン部にフラボノールを有するフラボノール配糖体を広く挙げることができる。例えば、エンジュ、ダッタンソバ、ドクダミ及びヤマモモなどの植物体から抽出することにより入手できるもの、さらにそれを精製した精製物、並びにそれらに酵素処理若しくは加水分解等の各種処理を施したものを挙げることができる。具体的には、ルチン、イソクエルシトリン、及びミリシトリン等、並びにルチン、イソクエルシトリンと澱粉質の共存下において糖転移酵素を用いて公知の方法で処理することにより得られる糖転移ルチン等を例示することができる。これらのフラボノール類は１種単独で使用されてもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用することもできる。

またフラボノール類そのものに代えて、上記に掲げる各種フラボノール類を含む植物抽出物をそのまま用いることもできる。かかるものとしてはエンジュ抽出物、ダッタンソバ抽出物、ドクダミ抽出物及びヤマモモ抽出物等を例示することができる。なお、かかる植物抽出物は、フラボノール類を比較的多量に含む植物の該当部位を水、アルコールまたはその他の有機溶剤を用いて抽出することによって得ることができ、そのままで使用しても、またさらに酵素処理して使用することもできる。例えばヤマモモ抽出物は、ヤマモモ科植物を本出願人による特許出願の方法（特開平５−１５６２４９号、特開平９−８７６１９号）を用いて抽出することによって調製取得でき、このような操作により得られるヤマモモ抽出物はフラボノール配糖体であるミリシトリン（ミリセチン−３−Ｏ−ラムノシド）の給源となる。またこのヤマモモ抽出物は、そのままで使用することもできるが、さらに特開平９−９５６７２号公報記載の方法に従って糖転移酵素処理を施すこともでき、これは水易溶性ヤマモモ抽出物として使用することができる。なお、これらの植物抽出物も１種単独で使用されても、また２種以上を任意に組み合わせて使用することもできる。

また、前述するフラボノール類の中には水難溶性で取り扱いにくい物質があるため、必要に応じて、フラボノール類をエタノールなどの低級アルコールやグリセリンまたはプロピレングリコールなどの多価アルコールに溶かして用いてもよい。

抗酸化剤を用いる場合、ＬＤＬ酸化抑制剤１００重量％中に配合される当該抗酸化剤の割合としては、制限されないが、例えば、酵素処理イソクエルシトリンを用いる場合、０．０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜３０重量％を挙げることができる。他の抗酸化剤もこれに準じて用いることができる。

本発明のＬＤＬ酸化抑制剤はその形態を特に制限するものではなく、例えば粉末状、顆粒状、錠剤状などの固体状；液状、乳液状等の溶液状；またはペースト状等の半固体状などの、任意の形態に調製することができる。

本発明のＬＤＬ酸化抑制剤は様々な製品に広く適応することができ、例えば飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品、飼料等をあげることができる。

本発明が対象とする飲食物としては、例えば乳飲料、乳酸菌飲料、果汁入り清涼飲料、清涼飲料、炭酸飲料、果汁飲料、野菜飲料、野菜・果実飲料、アルコール飲料、粉末飲料、コーヒー飲料、紅茶飲料、緑茶飲料、麦茶飲料などの飲料類；カスタードプリン、ミルクプリン、スフレプリン、果汁入りプリン等のプリン類、ゼリー、ババロア及びヨーグルト等のデザート類；アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、ミルクアイスクリーム、果汁入りアイスクリーム及びソフトクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、氷菓等の冷菓類；チューインガムや風船ガム等のガム類（板ガム、糖衣状粒ガム）；マーブルチョコレート等のコーティングチョコレートの他、イチゴチョコレート、ブルーベリーチョコレート及びメロンチョコレート等の風味を付加したチョコレート等のチョコレート類；ハードキャンディー（ボンボン、バターボール、マーブル等を含む）、ソフトキャンディー（キャラメル、ヌガー、グミキャンディー、マシュマロ等を含む）、ドロップ、タフィ等のキャラメル類；ハードビスケット、クッキー、おかき、煎餅等の焼き菓子類（以上、菓子類）；コンソメスープ、ポタージュスープ等のスープ類；浅漬け、醤油漬け、塩漬け、味噌漬け、粕漬け、麹漬け、糠漬け、酢漬け、芥子漬、もろみ漬け、梅漬け、福神漬、しば漬、生姜漬、梅酢漬け等の漬物類；セパレートドレッシング、ノンオイルドレッシング、ケチャップ、たれ、ソースなどのソース類；ストロベリージャム、ブルーベリージャム、マーマレード、リンゴジャム、杏ジャム、プレザーブ等のジャム類；赤ワイン等の果実酒；シロップ漬のチェリー、アンズ、リンゴ、イチゴ、桃等の加工用果実；ハム、ソーセージ、焼き豚等の畜肉加工品；魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚肉すり身、蒲鉾、竹輪、はんぺん、薩摩揚げ、伊達巻き、鯨ベーコン等の水産練り製品；バター、マーガリン、チーズ、ホイップクリーム等の酪農・油脂製品類；うどん、冷麦、そうめん、ソバ、中華そば、スパゲッティ、マカロニ、ビーフン、はるさめ及びワンタン等の麺類；その他、各種総菜及び麩、田麩等の種々の加工食品を挙げることができる。好ましくは飲料及び菓子類である。

本発明の飲食物は、製造の任意の工程で羅布麻抽出物およびビタミンＣ類、または本発明のＬＤＬ酸化抑制剤を配合することを除けば、各種飲食物の慣用の製造方法に従って製造することができる。羅布麻抽出物およびビタミンＣ類、またはＬＤＬ酸化抑制剤の配合方法やその順番に特にも制限はない。

本発明が対象とする化粧品としてはスキン化粧料（ローション、乳液、クリームなど）、口紅、日焼け止め化粧品、メークアップ化粧品等を；医薬品としては各種錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ剤、うがい薬等を；医薬部外品としては歯磨き剤、口中清涼剤、口臭予防剤等を；また飼料としてはキャットフードやドッグフード等の各種ペットフード、観賞魚若しくは養殖魚の餌等を一例として挙げることができるが、これらに制限されるものではない。

これらの化粧品、医薬品、医薬部外品または飼料などの各種製品は、それら製造の任意の工程で羅布麻抽出物およびビタミンＣ類、または本発明のＬＤＬ酸化抑制剤を配合することを除けば、各種製品の慣用方法に従って製造することができる。化粧品、医薬品、医薬部外品または飼料に対する羅布麻抽出物およびビタミンＣ類、またはＬＤＬ酸化抑制剤の配合時期も特に制限されない。

本発明によれば、ＬＤＬの酸化を有意に抑制することのできるＬＤＬ酸化抑制方法並びにＬＤＬ酸化抑制剤を提供することができる。このため、本発明のＬＤＬ酸化抑制方法並びにＬＤＬ酸化抑制剤を用いることにより、動脈硬化症の発症要因であるＬＤＬの酸化を抑制することができ、かつ脂質の酸化を抑制する効果も有する為、極めて有効な動脈硬化症の予防方法の一つとして期待することができる。

また日常的に経口摂取することが可能であり、これによって動脈硬化症の主要因であるＬＤＬの酸化を日常的に予防し、しかも副作用の無い安全な抗酸化剤を提供することができる。

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。また、特に記載のない限り「部」とは、「重量部」を意味するものとする。文中「＊」印のものは、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の製品を表し、文中の「※」印は、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社の登録商標であることを意味する。

実験例１
羅布麻の葉の乾燥物（乾燥重量１００ｇ）を粉砕し、８倍量の３５％エタノールで加温抽出（７５℃４時間）し、濾過後、合成吸着樹脂（セパビーズ ＳＰ−２０７：三菱化学株式会社）で通液処理を行った。これに、エタノールを２０％になるように加えたもの（固形分４．５％）を調製し、これを羅布麻抽出物とした。

実験例２
試験管に下記の表１の各濃度の試料（実験例１の羅布麻抽出物、Ｌ−アスコルビン酸（和光製薬株式会社製）（以下、ＡｓＡとする））を調製し、該試料に、ヒト由来ＬＤＬ（ＳＩＧＭＡ社製、終濃度１００μｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍｌ）を添加しよく混合した。次いで、水溶性ラジカルであるＡＡＰＨ(2,2'-azobis(2-aminodinopropane)-dihydrochloride、終濃度１０ｍＭ)を上記試料液に添加して、３７℃で酸化を誘導し、３７℃１８０分間インキュベート後の脂質過酸化度（ＴＢＡＲＳ）をＴＢＡ法（Ohkawa,H., Ohishi,N., Yagi,k., Anal.Biochem., 95, p351-358 (1979) Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction.）を用いて測定した。

すなわち、上記酸化誘導後の反応液を０．５ｍｌ採取し、これに３５％ＴＣＡ(trichloro acetic acid)溶液を０．５ｍｌ、０．５％ＴＢＡ溶液を１．０ｍｌ、０．２％ＢＨＴ（butylated hydroxytoluene）溶液０．０５ｍｌ、０．５％ＳＤＳ（sodium dodecyl sulfate）溶液を０．０５ｍｌ加えた後、１００℃で３０分加熱する。冷却後、酢酸０．５ｍｌ、クロロホルム１．０ｍｌを加えて攪拌後、遠心分離(３，０００ｒｐｍ×１０分)を行い、上層の吸光度を５３２nmで測定して、過酸化脂質量を求めた。結果は無添加（リン酸緩衝液）のものを脂質酸化度（ＴＢＡＲＳ）１００％として表した。

なお、ＴＢＡ法は生体組織中の過酸化脂質を高感度に測定するのに適した方法であり、現在もこれを改変したものなど多くの報告がある。ＴＢＡ法は酸性条件下で試料をＴＢＡと加熱することで、試料から遊離するＴＢＡ反応性物質（ＴＢＡＲＳ）とＴＢＡの反応で生じる赤色色素を定量することにより脂質過酸化度を測定するものである。すなわち、ＴＢＡＲＳの数値が高いほど、過酸化脂質が多く生成したこととなる。

ＴＢＡ法によって測定されるＴＢＡＲＳとしては、脂質ヒドロペルオキシド、マロンジアルデヒド、アルデヒドとタンパク質などとの反応物であり、ＴＢＡ法はこれらを総合的に測定するものである。

羅布麻抽出物単独添加でも濃度依存的にＬＤＬの酸化を抑制した。一方、ＡｓＡ単独添加では全く酸化を抑制せず、無添加のものとＴＢＡＲＳの生成量は変わらなかった。

しかし、羅布麻抽出物と全く効果の無いＡｓＡを同時に添加したところ、羅布麻抽出物のＬＤＬ酸化抑制能が向上した。

羅布麻抽出物０．００２％添加 (固形分４．５％の羅布麻抽出物製剤を０．０４４％%添加に相当)ではＴＢＲＳ７５．４％であったのが、ＡｓＡ０．００００５％同時添加で５４．６％に、ＡｓＡ０．０００１％同時添加で４８．０％まで相乗性を示し、ＬＤＬの酸化が有意(ｐ＜０．０５)に抑制された。

これらのことから、羅布麻抽出物とＡｓＡを同時に添加することでＬＤＬの酸化をより効果的に抑制し、羅布麻抽出物とＡｓＡの組み合わせは動脈硬化予防に効果的であることが示唆される。

実施例１
羅布麻の葉の乾燥物（乾燥重量１００ｇ）を粉砕し、８倍量の３５％エタノールで加温抽出（７５℃４時間）し、濾過後、合成吸着樹脂（セパビーズＳＰ−２０７：三菱化学株式会社）で通液処理を行った。これを濃縮し固形分８〜１２％、グリセリン２０％、エタノール２０％に調製した。これを羅布麻抽出物Ａとした。

実施例２ レモン飲料
果糖ブドウ糖液糖 １０ （％）
５倍濃縮レモン透明果汁 １
レモン香料 ０．１５
クエン酸 ０．０９
クエン酸三ナトリウム ０．０１
羅布麻抽出物Ａ １
Ｌ−アスコルビン酸 ０．１
水にて全量を１００％とする。

上記全成分を混合して調製した溶液を、９３℃達温殺菌して５００ｍｌＰＥＴボトルに熱時充填を行う。これを室温まで冷却して羅布麻抽出物含有飲料（レモン）を調製した。

実施例３ オレンジゼリー
＜原料Ａ＞
砂糖 ５ （％）
果糖ブドウ糖液糖 １０
ゲル化剤 ０．８
＜原料Ｂ＞
５倍濃縮柑橘混合混濁果汁 ２
オレンジ香料 ０．２
カロテン色素 ０．３
羅布麻抽出物Ａ ２
Ｌ−アスコルビン酸 ０．１
水にて全量を１００％とする。

＜原料Ａ＞の成分を全て水に分散し８０℃に加熱して１０分間撹拌溶解し、それをクエン酸にてｐＨ４に調製した後、＜原料Ｂ＞を加えて半透明ポリエチレン容器に充填した。これを８５℃で２０分間加熱殺菌した後、冷却して羅布麻抽出物含有ゼリーを調製した。

実施例４ 酸乳飲料
発酵乳（無脂乳固形分９．５％） １０ （％）
グラニュー糖 ７
酸性乳飲料用安定剤 ０．２
ヨーグルト香料 ０．１３
５０％クエン酸水溶液 適量
羅布麻抽出物Ａ １
Ｌ−アスコルビン酸 ０．１
水にて全量を１００％とする。

発酵乳、グラニュー糖及び酸性乳飲料用安定剤を水に溶解し、次いで５０％クエン酸溶液にてｐＨ３．８に調整した。これを湯煎にて７０℃に加温してホモゲナイズ（１５０ｋｇ/ｃｍ^２＝１４７１００００Ｐａ）した後、９０℃まで加温し、香料、羅布麻抽出物１、アスコルビン酸を加えて９３℃まで加温し５００ｍｌＰＥＴボトルにホットパックし羅布麻抽出物含有酸乳飲料を調製した。

実施例５ ミルクコーヒー
グラニュー糖 ７ （％）
コーヒー（粗引き） ５
牛乳 ２５
乳化安定剤 ０．１３
コーヒー香料 ０．１５
羅布麻抽出物Ａ ３
Ｌ−アスコルビン酸 ０．２
水にて全量を１００％とする。

コーヒーを熱湯加えて４０分煮出し、その後ろ過を行いコーヒー液を得た。水に乳化安定剤、グラニュー糖を加えて８０℃に加温して１０分間撹拌、冷却後、牛乳を加えて１０％重曹溶液にてｐＨ６．８に調製した。これをコーヒー液と合わせて、更に羅布麻抽出物１、アスコルビン酸を加えて再度ｐＨ６．８に調製し、７０℃まで湯煎で加温しホモゲナイズ（１５０ｋｇ/ｃｍ^２＝１４７１００００Ｐａ）した。香料を加えて２００ｍｌ缶に充填後、１２４℃２０分間殺菌を行い、羅布麻抽出物含有ミルクコーヒーを調製した。

本発明によると、心臓疾患、脳血管疾患等の循環器系疾患の発症要因であり、アテローム性動脈硬化症の主因ともなるＬＤＬの酸化を抑制するＬＤＬ酸化抑制方法およびＬＤＬ酸化抑制剤を提供することができ、極めて有効な動脈硬化症の予防方法の一つとして期待することができる。

ＬＤＬ酸化抑制における羅布麻抽出物とアスコルビン酸との相乗性を示す。

Claims (3)

1. 羅布麻抽出物およびビタミンＣ類を併用して用いることを特徴とする低比重リポタンパク(ＬＤＬ)酸化抑制方法。
2. 羅布麻抽出物およびビタミンＣ類を含有することを特徴とする低比重リポタンパク(ＬＤＬ)酸化抑制剤。
3. 請求項２記載の低比重リポタンパク(ＬＤＬ)酸化抑制剤を有効量含有する飲食物。
   

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