JP2006151996A - 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 - Google Patents
組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006151996A JP2006151996A JP2006044585A JP2006044585A JP2006151996A JP 2006151996 A JP2006151996 A JP 2006151996A JP 2006044585 A JP2006044585 A JP 2006044585A JP 2006044585 A JP2006044585 A JP 2006044585A JP 2006151996 A JP2006151996 A JP 2006151996A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tfpi
- protein
- item
- kunitz
- factor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8114—Kunitz type inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】(a)TFPI-2のクニッツ型ドメイン1、および(b)TFPIのクニッツ型ドメイン2を含むキメラタンパク質を産生する方法であって、(a)該キメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、そして上述のキメラタンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列の発現に適合性の発現制御配列をさらに含む発現ベクターを含む形質転換宿主細胞を提供する工程;(b)上述のキメラタンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列を発現させ得る条件下で、該形質転換宿主細胞をインキュベートする工程、
を包含する、方法。
【選択図】なし
Description
本発明は、第VIIa因子/組織因子複合体(第VIIa因子/TF複合体)および第Xa因子を自然発生的に結合し、そして阻害し得るキメラタンパク質、本発明のタンパク質をコードする発現ベクター、発現ベクターで形質転換された宿主細胞、タンパク質を産生する方法、このタンパク質を含有する薬学的組成物、このタンパク質を用いる敗血症性ショックの処置方法または予防方法、凝固性障害の阻害方法、およびこのタンパク質に対するモノクローナル抗体に関する。
(1)以下を含むキメラタンパク質:
(a)TFPI-2のクニッツ型ドメイン1、および
(b)TFPIのクニッツ型ドメイン2。
(2)前記キメラタンパク質が、以下の一般構造で表される、項目1に記載のキメラタンパク質:
A-(X1)a-B-(X2)b-C
ここで、
AおよびCは、独立して、任意の隣接ペプチドであり、該隣接ペプチドは0〜100のアミノ酸を含み;
Bは、任意のスペーサーペプチドであり、該スペーサーペプチドは0〜25のアミノ酸を含み;
X1の各々は、-D-K1-E-であり、
D、Eは、独立して、0〜25のアミノ酸のポリペプチドであり、
K1は、TFPI クニッツ型ドメイン1またはその変異タンパク質、あるいは、TFPI-2クニッツ型ドメイン1またはその変異タンパク質を含み;
X2の各々は、-F-K2-G-であり、
F、Gは、独立して、0〜25のアミノ酸のポリペプチドであり、
K2は、TFPI クニッツ型ドメイン2またはその変異タンパク質、あるいは、TFPI-2クニッツ型ドメイン2またはその変異タンパク質を含み;
a、bは、0〜6の整数であり;
A、B、C、D、E、F、Gは、天然TFPIまたはTFPI-2配列あるいは非天然配列の部分を含み得;そして
この分子は、天然TFPIでもTFPI-2でもない、変異タンパク質。
(3)AまたはCが、TFPIのクニッツ型ドメイン3を含む、項目2に記載のキメラタンパク質。
(4)AまたはCが、TFPI-2のクニッツ型ドメイン3を含む、項目2に記載のキメラタンパク質。
(5)前記隣接ペプチドの少なくとも1つが、1つ以上の細胞表面成分と結合し得るアミノ酸配列を含む、項目2に記載のキメラタンパク質。
(6)前記1つ以上の細胞表面成分と結合し得るアミノ酸配列が、グリコサミノグリカンと結合し得るアミノ酸配列である、項目5に記載のキメラタンパク質。
(7)前記グリコサミノグリカンと結合し得るアミノ酸配列が、ヘパリンと結合し得るアミノ酸配列である、項目6に記載のキメラタンパク質。
(8)前記ヘパリンと結合し得るアミノ酸配列が、タンパク質由来のヘパリン結合ドメインであり、該タンパク質が以下からなる群から選択される、項目7に記載のキメラタンパク質:
(a)プロテアーゼネキシン-1;
(b)プロテアーゼネキシン-2;
(c)アンチトロンビンIII;
(d)ヘパリン補因子II;
(e)プロテインCインヒビター;
(f)血小板第4因子;
(g)ウシ膵臓トリプシンインヒビター;および
(h)ギランテン関連インヒビター。
(9)前記ヘパリンと結合し得るアミノ酸配列が、以下からなる群から選択されるヘパリン結合ドメインである、項目7に記載のキメラタンパク質:
(a)配列番号:10;
(b)配列番号:11;
(c)配列番号:12;
(d)配列番号:13;
(e)配列番号:14;
(f)配列番号:15;
(g)配列番号:16;
(h)配列番号:17;および
(i)配列番号:18。
(10)前記隣接ペプチドが、TFPIのC末端テール(配列番号:7)を含む、項目5に記載のキメラタンパク質。
(11)前記隣接ペプチドが、TFPI-2のC末端テール(配列番号:8)を含む、項目5に記載のキメラタンパク質。
(12)K1の各々がTFPI-2のクニッツ型ドメイン1であり、K2の各々がTFPIのクニッツ型ドメイン2であり、ならびに、aおよびbが1より大きい整数である、項目2に記載のキメラタンパク質。
(13)K1の各々がTFPI-2のクニッツ型ドメイン1の変異タンパク質であり、K2の各々がTFPIのクニッツ型ドメイン2の変異タンパク質であり、ならびに、aおよびbが1より大きい整数である、項目2に記載のキメラタンパク質。
(14)前記キメラタンパク質の一次アミノ酸配列が、配列番号:19である、項目1に記載のキメラタンパク質。
(15)前記キメラタンパク質が第1および第2のアミノ酸配列を含み、該第1のアミノ酸配列が配列番号:19を含み、そして該第2のアミノ酸配列が以下からなる群から選択される、項目1に記載のキメラタンパク質:
(a)配列番号:7;
(b)配列番号:8;
(c)配列番号:10;
(d)配列番号:11;
(e)配列番号:12;
(f)配列番号:13;
(g)配列番号:14;
(h)配列番号:15;
(i)配列番号:16;
(j)配列番号:17;および
(k)配列番号:18。
(16)前記キメラタンパク質が、以下の一般構造で表される、項目1に記載のキメラタンパク質:
A-[X1-B-X2]c-C
ここで、
AおよびCは、任意の隣接ペプチドであり、該隣接ペプチドは、独立して、1〜100のアミノ酸を含み;
Bは、任意のスペーサーペプチドであり、該スペーサーペプチドは1〜25のアミノ酸を含み;
X1の各々は、-D-K1-E-であり、
D、Eは、独立して、1〜25のアミノ酸のペプチドであり、
K1は、TFPIまたはTFPI-2由来のクニッツ型ドメイン1、あるいは前記クニッツ型ドメインの変異タンパク質であり;
X2の各々は、-F-K2-G-であり、
F、Gは、独立して、1〜25のアミノ酸のペプチドであり、
K2は、TFPIまたはTFPI-2由来のクニッツ型ドメイン2、あるいは前記クニッツ型ドメインの変異タンパク質であり;
cは、1〜10の整数である、キメラタンパク質。
(17)AまたはCが、TFPIのクニッツ型ドメイン3(配列番号:7)を含む、項目16に記載のキメラタンパク質。
(18)AまたはCが、TFPI-2のクニッツ型ドメイン3(配列番号:8)を含む、項目16に記載のキメラタンパク質。
(19)前記隣接ペプチドの少なくとも1つが、1つ以上の細胞表面成分と結合し得るアミノ酸配列を含む、項目16に記載のキメラタンパク質。
(20)前記1つ以上の細胞表面成分と結合し得るアミノ酸配列が、グリコサミノグリカンと結合し得るアミノ酸配列である、項目19に記載のキメラタンパク質。
(21)前記グリコサミノグリカンと結合し得るアミノ酸配列が、ヘパリンと結合し得るアミノ酸配列である、項目20に記載のキメラタンパク質。
(22)前記ヘパリンと結合し得るアミノ酸配列が、タンパク質由来のヘパリン結合ドメインであり、該タンパク質が以下からなる群から選択される、項目21に記載のキメラタンパク質:
(a)プロテアーゼネキシン-1;
(b)プロテアーゼネキシン-2;
(c)アンチトロンビンIII;
(d)ヘパリン補因子II;
(e)プロテインCインヒビター;
(f)血小板第4因子;
(g)ウシ膵臓トリプシンインヒビター;および
(h)ギランテン関連インヒビター。
(23)前記ヘパリンと結合し得るアミノ酸配列が、以下からなる群から選択されるヘパリン結合ドメインである、項目21に記載のキメラタンパク質:
(a)配列番号:10;
(b)配列番号:11;
(c)配列番号:12;
(d)配列番号:13;
(e)配列番号:14;
(f)配列番号:15;
(g)配列番号:16;
(h)配列番号:17;および
(i)配列番号:18。
(24)前記隣接ペプチドが、TFPIのC末端テール(配列番号:7)を含む、項目19に記載のキメラタンパク質。
(25)前記隣接ペプチドが、TFPI-2のC末端テール(配列番号:8)を含む、項目19に記載のキメラタンパク質。
(26)前記タンパク質が酵母細胞で産生され、そして哺乳動物において免疫原性の炭水化物を含まない、項目1に記載のキメラタンパク質。
(27)前記タンパク質が、α-1,6-ポリマンノース末端炭水化物を含まない、項目26に記載のキメラタンパク質。
(28)TFPI変異タンパク質であって、該TFPI変異タンパク質は1つ以上の置換を有し、該1つ以上の置換が、1つ以上のクニッツ型ドメインのP1反応性部位において独占的に起こる、TFPI変異タンパク質。
(29)前記1つ以上の置換が一置換である、項目28に記載のTFPI変異タンパク質。
(30)前記変異タンパク質が、配列番号:9の一次アミノ酸配列を有する、項目28に記載のTFPI変異タンパク質。
(31)TFPI-2変異タンパク質であって、該TFPI-2変異タンパク質は1つ以上の置換を有し、該1つ以上の置換が、1つ以上のクニッツ型ドメインのP1反応性部位において独占的に起こる、TFPI-2変異タンパク質。
(32)前記1つ以上の置換が一置換である、項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質。
(33)前記1つの置換が、クニッツ型ドメイン2(配列番号:4)のP1反応性部位でのGluからArgへの置換である、項目27に記載のTFPI-2変異タンパク質。
(34)項目1に記載のキメラタンパク質をコードする核酸を含む、核酸配列。
(35)項目28に記載のTFPI変異タンパク質をコードする核酸を含む、核酸配列。
(36)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質をコードする核酸を含む、核酸配列。
(37)項目1に記載のキメラタンパク質を産生し得る発現ベクターであって、項目34に記載の核酸配列と、該キメラタンパク質の発現に適合性の発現制御配列とを含む、発現ベクター。
(38)項目28に記載のTFPI変異タンパク質を産生し得る発現ベクターであって、項目35に記載の核酸配列と、項目28に記載のTFPI変異タンパク質の発現に適合性の発現制御配列とを含む、発現ベクター。
(39)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質を産生し得る発現ベクターであって、項目36に記載の核酸配列と、項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質の発現に適合性の発現制御配列とを含む、発現ベクター。
(40)キメラタンパク質を産生し得る形質転換宿主細胞であって、該形質転換宿主細胞は項目37に記載の発現ベクターを含み、該発現ベクターが、該宿主細胞において作動可能な発現制御配列に作動可能に連結した発現制御配列をさらに含む、形質転換宿主細胞。
(41)項目28に記載のTFPI変異タンパク質を産生し得る形質転換宿主細胞であって、該形質転換宿主細胞は項目38に記載の発現ベクターを含み、該発現ベクターが、該宿主細胞において作動可能な発現制御配列に作動可能に連結した発現制御配列をさらに含む、形質転換宿主細胞。
(42)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質を産生し得る形質転換宿主細胞であって、該形質転換宿主細胞は項目39に記載の発現ベクターを含み、該発現ベクターが、該宿主細胞において作動可能な発現制御配列に作動可能に連結した発現制御配列をさらに含む、形質転換宿主細胞。
(43)項目1に記載のキメラタンパク質を産生する方法であって、
(a)該キメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、そして項目1に記載のキメラタンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列の発現に適合性の発現制御配列をさらに含む発現ベクターを含む形質転換宿主細胞を提供する工程;
(b) 項目1に記載のキメラタンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列を発現させ得る条件下で、該形質転換宿主細胞をインキュベートする工程、
を包含する、方法。
(44)前記宿主細胞が酵母細胞である、項目43に記載の方法。
(45)前記酵母細胞が、Candida albicans、Candida Maltosa、Hansenula polymorpha、Kluyveromyces fragilis、Kluyveromyces lactis、Pichia guillerimondii、Pichiapastoris、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe、およびYarrowia lipolyticaからなる群から選択される、項目44に記載の方法。
(46)前記酵母細胞が、Saccharomyces cerevisiaeである、項目45に記載の方法。
(47)前記タンパク質が、前記酵母細胞内で保持される、項目46に記載の方法。
(48)ユビキチンをコードするポリヌクレオチド配列が、インフレームで、前記タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の直前に位置する、項目47に記載の方法。
(49)前記タンパク質が酵母細胞から分泌される、項目43に記載の方法。
(50)酵母α因子をコードするポリヌクレオチド配列が、インフレームで、前記タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の直前に位置する、項目49に記載の方法。
(51)酵母細胞がα-1,6-ポリマンノース末端炭水化物を産生するのを防止する、項目43に記載の方法。
(52)前記酵母細胞が、ochl、mnnlおよびalg3変異を有する、項目51に記載の方法。
(53)項目28に記載のTFPI変異タンパク質を産生する方法であって、
(a)項目28に記載のTFPI変異タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、そして項目28に記載のTFPI変異タンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列の発現に適合性の発現制御配列をさらに含む発現ベクターを含む形質転換宿主細胞を提供する工程;および
(b)項目28に記載のTFPI変異タンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列を発現させ得る条件下で、該形質転換宿主細胞をインキュベートする工程、
を包含する、方法。
(54)前記宿主細胞が酵母細胞である、項目53に記載の方法。
(55)前記酵母細胞が、Candida albicans、Candida Maltosa、Hansenula polymorpha、Kluyveromyces fragilis、Kluyveromyces lactis、Pichia guillerimondii、Pichia pastoris、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe、およびYarrowia lipolyticaからなる群から選択される、項目54に記載の方法。
(56)前記酵母細胞が、Saccharomyce scerevisiaeである、項目55に記載の方法。
(57)前記タンパク質が、前記酵母細胞内で保持される、項目56に記載の方法。
(58)ユビキチンをコードするポリヌクレオチド配列が、インフレームで、項目28に記載のTFPI変異タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の直前に位置する、項目57に記載の方法。
(59)前記タンパク質が酵母細胞から分泌される、項目53に記載の方法。
(60)酵母α因子をコードするポリヌクレオチド配列が、インフレームで、項目28に記載のTFPI変異タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の直前に位置する、項目59に記載の方法。
(61)前記酵母細胞がα-1,6-ポリマンノース末端炭水化物を産生するのを防止する、項目53に記載の方法。
(62)前記酵母細胞が、ochl、mnnlおよびalg3変異を有する、項目61に記載の方法。
(63)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質を産生する方法であって、
(a)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを含む形質転換宿主細胞を提供する工程であって、該発現ベクターが項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列の発現に適合性の発現制御配列をさらに含む、工程;および
(b)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質をコードする該ポリヌクレオチド配列を発現させ得る条件下で、該形質転換宿主細胞をインキュベートする工程
を包含する、方法。
(64)前記宿主細胞が酵母細胞である、項目63に記載の方法。
(65)前記酵母細胞が、Candida albicans、Candida Maltosa、Hansenula polymorpha、Kluyveromyces fragilis、Kluyveromyces lactis、Pichia guillerimondii、Pichia pastoris、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe、およびYarrowia lipolyticaからなる群から選択される、項目64に記載の方法。
(66)前記酵母細胞が、Saccharomyces cerevisiaeである、項目65に記載の方法。
(67)前記タンパク質が、前記酵母細胞内で保持される、項目66に記載の方法。
(68)ユビキチンをコードするポリヌクレオチド配列が、インフレームで、項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の直前に位置する、項目67に記載の方法。
(69)前記タンパク質が前記酵母細胞から分泌される、項目66に記載の方法。
(70)酵母α因子をコードするポリヌクレオチド配列が、インフレームで、前記タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の直前に位置する、項目69に記載の方法。
(71)前記酵母細胞がα-1,6-ポリマンノース末端炭水化物を産生するのを防止する、項目66に記載の方法。
(72)前記酵母細胞が、ochl、mnnlおよびalg3変異を有する、項目71に記載の方法。
(73)項目1に記載のキメラタンパク質と薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
(74)項目28に記載のTFPI変異タンパク質と薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
(75)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質と薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
(76)項目68に記載の薬学的組成物の有効量を哺乳動物に投与することを包含する、敗血症を処置する方法。
(77)項目69に記載の薬学的組成物の有効量を哺乳動物に投与することを包含する、敗血症を処置する方法。
(78)項目70に記載の薬学的組成物の有効量を哺乳動物に投与することを包含する、敗血症を処置する方法。
(79)項目68に記載の薬学的組成物の有効量を哺乳動物に投与することを包含する、血栓症疾患を処置する方法。
(80)項目69に記載の薬学的組成物の有効量を哺乳動物に投与することを包含する、血栓症疾患を処置する方法。
(81)項目70に記載の薬学的組成物の有効量を哺乳動物に投与することを包含する、血栓症疾患を処置する方法。
(82)項目1に記載のキメラタンパク質に選択的に結合し得る、モノクローナル抗体。
(83)少なくとも107/Mの親和定数を有する、項目82に記載のモノクローナル抗体。
(84)項目28に記載のTFPI変異タンパク質に選択的に結合し得る、モノクローナル抗体。
(85)少なくとも107/Mの親和定数を有する、項目84に記載のモノクローナル抗体。
(86)項目31に記載のTFPI-2変異タンパク質に選択的に結合し得る、モノクローナル抗体。
(87)少なくとも107/Mの親和定数を有する、項目86に記載のモノクローナル抗体。
(発明の要旨)
このため、本発明の目的は、哺乳動物細胞、酵母細胞、または細菌細胞から得られる完全長TFPIと比較して、等価または強化された抗凝固活性、特に第VIIa因子/TF複合体、および/または第Xa因子阻害活性を有するタンパク質を提供することである。
本明細書中で使用する用語「TFPI」は、凝固インヒビターである組織因子活性インヒビターを意味し、これはまた、リポタンパク質関連凝固インヒビター(LACI)、組織因子インヒビター(TFI)および外部経路インヒビター(EPI)としても知られている。TFPIをコードするヌクレオチド配列、およびTFPIの予測されるアミノ酸配列は、米国特許第4,966,852号に開示され、その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
A−(X1)2−B−(X2)b−C
ここで、AおよびCは、任意の隣接ペプチドであり、この隣接ペプチドは、独立して、1個〜100個のアミノ酸を含有する;
ここで、Bは、任意のスペーサーペプチドであり、このスペーサーペプチドは、1個〜25個のアミノ酸を含有する;
ここで、各X1は、−D−K1−E−であり、ここで、D、Eは、1個〜25個のアミノ酸を有するペプチドであり、K1は、独立して、TFPIまたはTFPI-2のクニッツ型ドメイン1[配列番号1または配列番号2]であるか、または前記クニッツ型ドメインの変異タンパク質である;
ここで、各X2は、−F−K2−G−であり、ここで、F、Gは、1個〜25個のアミノ酸を有するペプチドであり、K2は、独立して、TFPIまたはTFPI-2のクニッツ型ドメイン2[配列番号3または配列番号4]であるか、または前記クニッツ型ドメインの変異タンパク質である;
ここで、a、bは、0〜6の整数である;そして
ここで、この分子は、天然のTFPIまたはTFPI-2ではない。
A−[X1−B−X2]c−C
ここで、AおよびCは、任意の隣接ペプチドであり、この隣接ペプチドは、独立して、1個〜100個のアミノ酸を含有する;
ここで、Bは、任意のスペーサーペプチドであり、このスペーサーペプチドは、1個〜25個のアミノ酸を含有する;
ここで、各X1は、−D−K1−E−であり、ここで、D、Eは、1個〜25個のアミノ酸を有するペプチドであり、K1は、TFPIまたはTFPI-2のクニッツ型ドメイン1[配列番号1または配列番号2]であるか、または前記クニッツ型ドメインの変異タンパク質である;
ここで、各X2は、−F−K2−G−であり、ここで、F、Gは、1個〜25個のアミノ酸を有するペプチドであり、K2は、TFPIまたはTFPI-2のクニッツ型ドメイン2[配列番号3または配列番号4]であるか、または前記クニッツ型ドメインの変異タンパク質である;
ここで、cは、1〜10の整数である。
非常に多くの細菌発現技術は、当該技術分野で公知である。Sambrookら、(1989)「Expression of cloned genes in Escherichia coli」、Molecular Cloning:A Laboratory Manual。
発現ベクターおよび形質転換ベクターは、染色体外レプリコンまたは組み込みベクターのいずれかであるが、多くの細菌への形質転換のために開発されている。例えば、発現ベクターは、とりわけ、以下の細菌に対して開発されている:
本発明のVIIa/TF/Xa因子結合タンパク質は、敗血症性ショックの治療および予防に治療上効果的な濃度で投与され得る。この目的を遂げるために、好ましくは、本発明のVIIa/TF/Xa因子結合タンパク質は静脈内へ投与される。この投与を遂げる方法は当業者に公知である。
本発明のVIIa/TF/Xa因子結合タンパク質は敗血症または敗血症性ショックの哺乳動物を治療するのに有用である。一般に、状態は、高熱(>38.5℃)または低体温(>35.5℃)、低血圧、頻呼吸(>20呼吸/分)、頻拍(>100拍/分)、白血球増加症(>15,000細胞/mm3)、および血小板減少症(<100,000血小板/mm3)により特徴付けられる。好ましくは、本発明のVIIa/TF/Xa因子結合タンパク質は、以下のように被験体が敗血症であると疑われれば直ちに投与される;フィブリノーゲンの20%を上回る降下(drop)またはフィブリン分裂産物の出現の提示、被験体の体温の上昇、および敗血症性ショックに関連する白血球増加症および低血圧の診断。上述の場合、静脈内投与が好ましい。一般的に、本発明のVIIa/TF/Xa因子結合タンパク質は1μg/kgと20mg/kgとの間の用量で、より好ましくは20μg/kgと10mg/kgとの間の用量で、最も好ましくは1mg/kgと7mg/kgとの間の用量で与えられる。好ましくは、ボーラス投与として与えられ、ボーラス投与後4〜6時間循環レベルを10〜20倍まで増加させる。継続的な注入もまたボーラス投与後に用いられ得る。そうであれば、本発明のVIIa/TF/Xa因子結合タンパク質は、5μg/kg/分と20μg/kg/分との間の用量で、より好ましくは7μg/kg/分と15μg/kg/分との間の用量で注入され得る。
シャトルベクターpBS24が、Barrら、EXPRESSION SYSTEMS & PROCESSES FOR rDNA PRODUCTS(American Chemical Society, 1991), 51〜64頁)に記載される。pBS24UbはpBS24.1の誘導体であり、そして唯一のBam HIおよびSalI制限部位、グルコース制御可能ADH2/GAPプロモーター、および合成ユビキチン(Ub)遺伝子を側面に有する発現カセットを含む。Ub融合体の構築のために、唯一のSstII部位をUb遺伝子の3’末端に作成する。Sst II部位の存在により、ユビキチン融合ペプチドを発現するヌクレオチド配列のインフレーム挿入が可能になる。挿入は合成DNAアダプターまたはPCR法の使用により遂げられ得る。合成DNAアダプター(リンカー)の使用法は当該分野において公知である。DNAおよびタンパク質の全ての酵素的修飾は酵素の製造者に提供される説明書に従ってなされる。PCRプロトコルはPCR PROTOCOLS:A GUIDE TO METHODS AND APPLICATIONS, (編) Innis, Gelfand, SninskyおよびWhite(Academic Press, 1990)に記載される。いずれの場合でも、5’結合配列は:
配列番号21 GCTCCGCGGTGGCGATTCTGAGGAGGAGATGAAGAAC
配列番号22 TCTGTCGACTCACATATTTTTAACAAAAATTTCTTCAT
増幅後、PCR産物を酵素の製造者により特定される条件を用いてSalIおよびSst IIにより消化した。次いで、消化PCR産物を上記のようにpBS24Ubにクローン化し、pLACI 4.1を生成した。 pLACI 4.1で形質転換されたS.cerevisiae AB122株は1994年7月19日にATCCに寄託され、そして受託番号74291が与えられている。
TPFIが、プレプロα因子リーダーを有する完全長の融合タンパク質として発現された。pAB125を中間プラスミドとして用いて、α因子/TFPI融合タンパク質を構築した。(Changら、J.Immunol.149:548-555(1992))。pAB125は、唯一のBamHI制限部位およびSalI制限部位、グルコース調節可能なADH2/GAPプロモーター、およびα因子プレプロリーダー配列、ならびにプロセッシング部位が隣接する発現カセットを含んでいる。α因子融合の構築のために、唯一のXbaI部位が、α因子リーダー配列の3’末端に生成されている。XbaI部位の存在は、α因子融合ペプチドとして発現するためのヌクレオチド配列のインフレーム挿入を可能にする。挿入は、合成DNAアダプターまたはPCR方法論の使用によって達成され得る。どちらの場合も、5’接合配列は以下であり
短縮型TFPI(成熟TFPIのアミノ酸1〜161を含有する)を、分泌のためにα因子融合タンパク質として発現させた。TFPIコード配列の調製を、本質的には実施例2のように達成した。ここでは、配列番号24および第2プライマーとして配列番号25を用いた。配列番号25は、TFPIコード配列内にハイブリダイズする。配列番号25の配列は以下である:
酵母振とうフラスコ培養物を、遠心分離によって採集し、そしてα因子-TFPIを含有する上清液を回収して0.8μメンブレンにより濾過した。TFPI培養物由来の細胞を遠心分離によってペレット化した。α因子-TFPIおよびユビキチンTFPI由来の細胞溶解物を、50mMTris pH7.5、2mM EDTA, 50mM NaCl, 1mM PMSF中でガラスビーズを用いたボルテックスにより細胞ペレットを破砕することによって調製した。いくつかの場合において、細胞溶解物を、12000gで10分間、4℃で遠心分離することによって、可溶性画分および不溶性画分にさらに分画した。
TFPI内のN-結合グリコシル化の潜在的部位を、Innisら、前出において記載されるように、重複PCR(overlappingPCR)を用いて除去した。前記の実施例のように、TFPIコード配列をPCRによって調製し、pAB125にクローン化し、そして発現のために、pBS24.1にさらにサブクローニングした。
クニッツ型ドメイン1のP1反応部位中において、LysからArgへの置換を含有するTFPIの変異タンパク質を産生するために、pBS24Ub/TFPI1由来のBglII-SalIフラグメントをpSP72(Promegaから市販されている)へサブクローニングした。次いで、AvaIII-BspHIフラグメントを、以下のプライマーを用いて調製した:
TFPIのクニッツ型ドメイン1が、TFPI-2のクニッツ型ドメイン1で置換されているキメラTFPIタンパク質をコードする構築物を、重複PCRを用いて調製した。SstII-BsmI制限フラグメントは、TFPI-2のクニッツ型ドメイン1およびTFPIのクニッツ型ドメイン2の部分を含んでおり、これは重複PCRにより作製される。プライマーの配列は以下である:
ochI、mnnI、およびalg3変異を含有する酵母株を作製した結果、本発明の分泌されたTFPI分子に付随した、炭水化物の減少が生じた。この遺伝子を当業者に利用可能な配列に基づく標準的なPCR技術を用いてクローン化した。
Claims (1)
- (a)TFPI-2のクニッツ型ドメイン1、および
(b)TFPIのクニッツ型ドメイン2
を含むキメラタンパク質。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/286,521 US5589359A (en) | 1994-08-05 | 1994-08-05 | Chimeric proteins |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50659896A Division JP4177453B2 (ja) | 1994-08-05 | 1995-07-25 | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007293770A Division JP2008120810A (ja) | 1994-08-05 | 2007-11-12 | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006151996A true JP2006151996A (ja) | 2006-06-15 |
JP2006151996A5 JP2006151996A5 (ja) | 2007-06-14 |
Family
ID=23098994
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50659896A Expired - Fee Related JP4177453B2 (ja) | 1994-08-05 | 1995-07-25 | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 |
JP2006044585A Withdrawn JP2006151996A (ja) | 1994-08-05 | 2006-02-21 | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 |
JP2007293770A Withdrawn JP2008120810A (ja) | 1994-08-05 | 2007-11-12 | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50659896A Expired - Fee Related JP4177453B2 (ja) | 1994-08-05 | 1995-07-25 | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007293770A Withdrawn JP2008120810A (ja) | 1994-08-05 | 2007-11-12 | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US5589359A (ja) |
EP (1) | EP0776366A1 (ja) |
JP (3) | JP4177453B2 (ja) |
AU (1) | AU710535B2 (ja) |
CA (1) | CA2196290A1 (ja) |
WO (1) | WO1996004378A2 (ja) |
Families Citing this family (75)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6057287A (en) | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
ATE277081T1 (de) * | 1994-01-11 | 2004-10-15 | Dyax Corp | Inhibitoren des humanplasmins, die sich von den kunitz domänen ableiten |
US5589359A (en) * | 1994-08-05 | 1996-12-31 | Chiron Corporation | Chimeric proteins |
US5872098A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-16 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
US5863894A (en) * | 1995-06-05 | 1999-01-26 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
US5866542A (en) * | 1994-10-18 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
CA2202351A1 (en) * | 1994-10-18 | 1996-04-25 | George Phillip Vlasuk | Nematode-extracted serine protease inhibitors and anticoagulant proteins |
US5945275A (en) * | 1994-10-18 | 1999-08-31 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
US5866543A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
NZ296648A (en) * | 1994-10-18 | 2001-05-25 | Corvas Int Inc | Nematode-extracted serine protease inhibitors and anticoagulant proteins |
US20030199450A1 (en) * | 2001-04-27 | 2003-10-23 | Chiron Corporation | Regulation of cytokine synthesis and release |
US5885781A (en) * | 1995-06-07 | 1999-03-23 | Chiron Corporation | Regulation of cytokine synthesis and release |
GB9513967D0 (en) * | 1995-07-08 | 1995-09-06 | Univ Leicester | Insulin |
US6346510B1 (en) | 1995-10-23 | 2002-02-12 | The Children's Medical Center Corporation | Therapeutic antiangiogenic endostatin compositions |
US5772629A (en) * | 1995-10-23 | 1998-06-30 | Localmed, Inc. | Localized intravascular delivery of TFPI for inhibition of restenosis in recanalized blood vessels |
DE69633133T2 (de) * | 1995-10-24 | 2005-07-28 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | TFPI-verwandte Peptide die das Wachstums von glatten Muskelzellen inhibieren |
US20060025329A1 (en) * | 1997-02-06 | 2006-02-02 | Todd Hembrough | Compositions and methods for inhibiting cellular proliferation comprising TFPI fragments |
US6946439B2 (en) | 1997-02-06 | 2005-09-20 | Entre Med, Inc. | Compositions and methods for inhibiting cellular proliferation comprising TFPI fragments |
US5981471A (en) | 1997-02-06 | 1999-11-09 | Entremed, Inc. | Compositions and methods for inhibiting cellular proliferation |
JP4243355B2 (ja) | 1997-03-26 | 2009-03-25 | インペリアル カレッジ イノベイションズ リミテッド | 細胞膜に固定された抗凝固性融合タンパク質 |
DE19725014A1 (de) * | 1997-06-13 | 1998-12-17 | Bayer Ag | Aprotininvarianten mit verbesserten Eigenschaften und Bikunine von Aprotininvarianten |
US6214333B1 (en) | 1997-07-08 | 2001-04-10 | Texas Heart Institute | Vasoprotective recombinant adenovirus vector containing a human TFPI gene |
AU5736899A (en) * | 1998-08-25 | 2000-03-14 | Knut Kleesiek | A mutant of tissue factor pathway inhibitor, dna sequence and use for detecting thrombotic disorders |
US7262005B1 (en) | 2000-02-04 | 2007-08-28 | Aurora Biosciences Corporation | Methods of protein destabilization and uses thereof |
US7863020B2 (en) | 2000-06-28 | 2011-01-04 | Glycofi, Inc. | Production of sialylated N-glycans in lower eukaryotes |
US7795002B2 (en) * | 2000-06-28 | 2010-09-14 | Glycofi, Inc. | Production of galactosylated glycoproteins in lower eukaryotes |
US20040115180A1 (en) * | 2001-03-06 | 2004-06-17 | Mustapha Abdelouahed | Carrier chimeric proteins targeted carrier chimeric proteins and preparation thereof |
HUP0500472A2 (hu) * | 2001-10-15 | 2005-08-29 | Chiron Corporation | Szepszis kezelése kis dózisú szöveti faktor bioszintézis inhibitor (TFPI) beadásával |
ATE528014T1 (de) | 2002-06-07 | 2011-10-15 | Dyax Corp | Polypeptid mit modifizierten kunitz domains |
US7153829B2 (en) | 2002-06-07 | 2006-12-26 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibitor therapies |
ATE312605T1 (de) * | 2002-06-29 | 2005-12-15 | Aquanova Ger Solubilisate Tech | Isoflavonkonzentrate sowie verfahren zu ihrer herstellung |
US7482427B2 (en) * | 2002-08-20 | 2009-01-27 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Positive modulator of bone morphogenic protein-2 |
US8227411B2 (en) * | 2002-08-20 | 2012-07-24 | BioSurface Engineering Technologies, Incle | FGF growth factor analogs |
US7598224B2 (en) * | 2002-08-20 | 2009-10-06 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Dual chain synthetic heparin-binding growth factor analogs |
US7166574B2 (en) | 2002-08-20 | 2007-01-23 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Synthetic heparin-binding growth factor analogs |
DE602004031589D1 (de) * | 2003-01-07 | 2011-04-14 | Dyax Corp | Kunitz-domäne-bibliothek |
US6989369B2 (en) * | 2003-02-07 | 2006-01-24 | Dyax Corp. | Kunitz domain peptides |
WO2005019265A1 (en) | 2003-08-13 | 2005-03-03 | Chiron Corporation | Improved method of purifying tfpi and tfpi analogs |
AU2004268144A1 (en) * | 2003-08-29 | 2005-03-10 | Dyax Corp. | Modified protease inhibitors |
AU2004268145B2 (en) * | 2003-08-29 | 2010-09-16 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Poly-PEGylated protease inhibitors |
US7414028B1 (en) * | 2004-02-04 | 2008-08-19 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Growth factor analogs |
US7528105B1 (en) | 2004-02-10 | 2009-05-05 | Biosurface Engineering Technologies | Heterodimeric chain synthetic heparin-binding growth factor analogs |
US7671012B2 (en) | 2004-02-10 | 2010-03-02 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Formulations and methods for delivery of growth factor analogs |
US20060024347A1 (en) * | 2004-02-10 | 2006-02-02 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Bioactive peptide coatings |
US20080227696A1 (en) * | 2005-02-22 | 2008-09-18 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Single branch heparin-binding growth factor analogs |
CA2560103A1 (en) * | 2004-03-17 | 2005-11-24 | Chiron Corporation | Treatment of severe community-acquired pneumonia by administration of tissue factor pathway inhibitor (tfpi) |
US7235530B2 (en) | 2004-09-27 | 2007-06-26 | Dyax Corporation | Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof |
WO2006066960A1 (en) * | 2004-12-23 | 2006-06-29 | Ludwig-Maximilians- Universität München | Variant tfpi with increased anti-thrombotic activity |
EP1913025A2 (en) * | 2005-07-22 | 2008-04-23 | Novartis AG | Anti-microbial agents that interact with the complement system |
WO2007070372A2 (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-21 | Entremed, Inc. | Compositions and methods for inhibiting cellular proliferation |
LT1981519T (lt) | 2005-12-29 | 2018-04-25 | Dyax Corp. | Proteazės slopinimas |
US7820172B1 (en) | 2006-06-01 | 2010-10-26 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Laminin-derived multi-domain peptides |
CA2692240C (en) | 2006-06-22 | 2018-03-13 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Composition and method for delivery of bmp-2 amplifier/co-activator for enhancement of osteogenesis |
WO2008077478A1 (en) * | 2006-12-22 | 2008-07-03 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Preparation and use of variants of the kunitz domain 2 of the human placental bikunin gene |
CN104480140B (zh) | 2007-04-03 | 2019-12-31 | 奥克西雷恩英国有限公司 | 分子的糖基化 |
AU2008289005A1 (en) * | 2007-08-21 | 2009-02-26 | Genzyme Corporation | Treatment with kallikrein inhibitors |
UA112050C2 (uk) | 2008-08-04 | 2016-07-25 | БАЄР ХЕЛСКЕР ЛЛСі | Терапевтична композиція, що містить моноклональне антитіло проти інгібітора шляху тканинного фактора (tfpi) |
US8324344B2 (en) * | 2008-12-15 | 2012-12-04 | Stc.Unm | Membrane transduction peptides and methods of delivering material to a target cell |
RU2562114C2 (ru) | 2008-12-22 | 2015-09-10 | Ново Нордиск А/С | Антитела против ингибитора метаболического пути тканевого фактора |
WO2010080833A1 (en) * | 2009-01-06 | 2010-07-15 | Dyax Corp. | Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors |
US8088599B2 (en) * | 2009-02-06 | 2012-01-03 | Fudan University | Nucleic acids encoding genetically modified tissue factor pathway inhibitor (TFPI) and method of making the same |
GB0916578D0 (en) * | 2009-09-22 | 2009-10-28 | Malmsten Nils M | Polypeptides and uses thereof |
CN104651428A (zh) | 2009-09-29 | 2015-05-27 | 根特大学 | 水解甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖连接为磷酸-6-甘露糖 |
BR112012011980A2 (pt) | 2009-11-19 | 2021-09-08 | Oxyrane Uk Limited | Métodos de produzir células transformadas de yarrowia lipolytica e proteínas-alvocompreendendo n-glicanos, células transformadas de yarrowia lipolytica e suas culturas, bem como composição compreendendo glicoproteínas |
HUE057244T2 (hu) | 2010-01-06 | 2022-04-28 | Takeda Pharmaceuticals Co | Plazma kallikreint kötõ fehérjék |
US9689015B2 (en) | 2010-09-29 | 2017-06-27 | Oxyrane Uk Limited | De-mannosylation of phosphorylated N-glycans |
CN103328646B (zh) | 2010-09-29 | 2021-06-18 | 奥克西雷恩英国有限公司 | 能够使甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖连接脱帽并使磷酸化的n-聚糖脱甘露糖基化的甘露糖苷酶及促进糖蛋白的哺乳动物细胞摄取的方法 |
JP2014506257A (ja) | 2011-01-06 | 2014-03-13 | ダイアックス コーポレーション | 血漿カリクレイン結合タンパク質 |
EP2665488B1 (en) * | 2011-01-18 | 2018-05-09 | Health Corporation - Rambam | Methods and kits for assessing heparanase procoagulant activity, compositions comprising heparanase, and methods for the treatment of coagulation-related disorders |
US11448657B2 (en) | 2011-01-18 | 2022-09-20 | Rambam Med-Tech | Methods and kits for assessing Heparanase procoagulant activity, compositions comprising Heparanase, and methods for the treatment of coagulation-related disorders |
WO2013056221A1 (en) * | 2011-10-13 | 2013-04-18 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods for modulating thrombin generation |
US9249399B2 (en) | 2012-03-15 | 2016-02-02 | Oxyrane Uk Limited | Methods and materials for treatment of pompe's disease |
JP6719384B2 (ja) | 2014-03-27 | 2020-07-15 | ダイアックス コーポレーション | 糖尿病黄斑浮腫の治療のための組成物および方法 |
US11279771B2 (en) | 2014-09-17 | 2022-03-22 | Novo Nordisk A/S | Antibodies capable of binding two epitopes on tissue factor pathway inhibitor (1-161) |
US11286307B2 (en) | 2015-12-11 | 2022-03-29 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5106833A (en) * | 1987-07-23 | 1992-04-21 | Washington University | Coagulation inhibitors |
US4966852A (en) * | 1987-07-23 | 1990-10-30 | Monsanto Company | DNA clone of human tissue factor inhibitor |
DK408089D0 (da) * | 1989-08-18 | 1989-08-18 | Novo Nordisk As | Proteiner |
BE1003330A4 (fr) * | 1990-08-24 | 1992-02-25 | Goblet Serge | Appareil et procede de chauffage d'appoint: |
EP0473564B1 (en) * | 1990-08-27 | 1996-03-20 | Monsanto Company | Anticoagulant combination of laci and sulfated polysaccharides |
IL104326A0 (en) * | 1992-01-07 | 1993-05-13 | Novo Nordisk As | Variant of human kunitz-type protease inhibitor |
IL104324A0 (en) * | 1992-01-07 | 1993-05-13 | Novo Nordisk As | Variant of human kunitz-type protease inhibitor |
IL104325A (en) * | 1992-01-07 | 2000-10-31 | Novo Nordisk As | Variants of human kunitz-type protease inhibitor domain II of tissue factor pathway inhibitor (TFPI) pharmaceutical compositions containing them a DNA construct encoding them their expression vectors a cell containing said DNA constructs and methods for the production of all the above |
US5212091A (en) * | 1992-03-02 | 1993-05-18 | Monsanto Company | Method of producing tissue factor pathway inhibitor |
WO1993025230A1 (en) * | 1992-06-11 | 1993-12-23 | G.D. Searle & Co. | Prophylaxis and treatment of sepsis and sepsis-associated coagulation disorders |
US5589359A (en) * | 1994-08-05 | 1996-12-31 | Chiron Corporation | Chimeric proteins |
-
1994
- 1994-08-05 US US08/286,521 patent/US5589359A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-05-09 US US08/437,841 patent/US5563123A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-09 US US08/436,175 patent/US5696088A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-25 JP JP50659896A patent/JP4177453B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-25 CA CA002196290A patent/CA2196290A1/en not_active Abandoned
- 1995-07-25 AU AU31500/95A patent/AU710535B2/en not_active Ceased
- 1995-07-25 WO PCT/US1995/009464 patent/WO1996004378A2/en not_active Application Discontinuation
- 1995-07-25 EP EP95927478A patent/EP0776366A1/en not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-10-14 US US08/943,682 patent/US6174721B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-12-21 US US09/741,106 patent/US6783960B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-08-16 US US10/918,366 patent/US20050008654A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-02-21 JP JP2006044585A patent/JP2006151996A/ja not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-11-12 JP JP2007293770A patent/JP2008120810A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US6783960B2 (en) | 2004-08-31 |
JP2008120810A (ja) | 2008-05-29 |
WO1996004378A2 (en) | 1996-02-15 |
US5589359A (en) | 1996-12-31 |
WO1996004378A3 (en) | 1996-03-14 |
JP4177453B2 (ja) | 2008-11-05 |
CA2196290A1 (en) | 1996-02-15 |
AU710535B2 (en) | 1999-09-23 |
US20050008654A1 (en) | 2005-01-13 |
JPH10503375A (ja) | 1998-03-31 |
US6174721B1 (en) | 2001-01-16 |
US5696088A (en) | 1997-12-09 |
US5563123A (en) | 1996-10-08 |
AU3150095A (en) | 1996-03-04 |
US20020197667A1 (en) | 2002-12-26 |
EP0776366A1 (en) | 1997-06-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4177453B2 (ja) | 組織因子活性インヒビターtfpiおよびtfpi−2のキメラタンパク質および変異体 | |
JP3779728B2 (ja) | 組織因子活性インヒビターの産生 | |
JP3051995B2 (ja) | 酸化抵抗性トロンボモジュリン類縁体 | |
JP3122127B2 (ja) | 抗凝血タンパク質 | |
JP2525438B2 (ja) | ファクタ―8:cの製造方法 | |
JP3350549B2 (ja) | ヒトKunitz型プロテアーゼ阻害剤変異体 | |
KR101640962B1 (ko) | 재조합 인간 알파1-항트립신 | |
CZ164494A3 (en) | Human variant of kunitz-type protease inhibitor | |
CZ164694A3 (en) | Human variant of kunitz-type protease inhibitor | |
JP2015172056A (ja) | 組換えエラスターゼタンパク質ならびにその製造方法および使用 | |
EP0762889B1 (en) | Heparin-binding protein for the treatment of sepsis | |
JP3862753B2 (ja) | 細胞表面局在化ドメインを有するキメラmcpおよびdafタンパク質 | |
JPH03505398A (ja) | 新しい結合特性を有する超酸化物不均化酵素類縁体 | |
DE4241659C1 (de) | Thrombininhibitor aus Speichel von Protostomiern | |
JPH09503646A (ja) | アンチトロンビンポリペプチド類似体及びその製造法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070514 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20070813 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20070816 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071112 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080801 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20080912 |