JP2006056886A

JP2006056886A - 作物抗真菌剤として使用されるソルダリンおよびその誘導体

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Publication number: JP2006056886A
Application number: JP2005218360A
Authority: JP
Inventors: Gerald F Bills; ジエラルド・エフ・ビルズ; Anne W Dombrowski; アン・ダブリユ・ドンブロウスキー; Wendy S Horn; ウエンデイ・エス・ホーン; Richard K Jansson; リチヤード・ケイ・ジヤンソン; Mark Rattray; マーク・ラツトレイ; Dennis Schmatz; デニス・シユマツツ; Robert E Schwartz; ロバート・イー・シユバルツ
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1996-09-18
Filing date: 2005-07-28
Publication date: 2006-03-02
Also published as: EP0938307A1; DE69721805D1; JP4165714B2; AU729659B2; ES2196364T3; JP2005245450A; JP2001503032A; CA2265949A1; DE69721805T2; EP0938307B1; EP0938307A4; AU4346797A; CA2265949C; WO1998011891A1; ATE239466T1

Abstract

【課題】作物における植物病原性真菌に対して保護的および全身的効果を有するソルダリンおよびその誘導体の提供。
【解決手段】式

（式中、Ｚは、テトラヒドロピラノ基を示す。）で表される化合物を有効成分として含む農薬組成物。
【選択図】なし

Description

本発明は、作物での植物病原菌類の制御におけるソルダリンおよびその誘導体；該化合物を含有する農薬組成物；およびソルダリンの発酵製法ならびにそこで使用される微生物に関する。

植物または植物の部分での真菌類増殖は葉、果実または種子の生産、および栽培作物の総量を抑制するので、植物病原真菌類の制御は経済的に大いに重要である。事実、作物保護がなければ、７５％を超える世界の食物生産が失われるであろう。たとえそうであっても、１２％は依然として植物病で失われる。農業および園芸栽培における真菌類感染の莫大な経済的結果のため、広範囲の抗真菌性および静真菌性製品が、一般的および特殊な適用のために開発されたきた。しかしながら、農業抗真菌剤の広範囲の使用は、しばしば、現行の利用できる剤に対する抵抗性を誘導し；かくして、公知の化学クラスの農業抗真菌剤以外であって／または現在利用できる剤とは異なるメカニズムによる新しい抗真菌性化合物を発見する必要性が存在する。

ソルダリン（Ｉ、ここでＺは（ｄ）である）は子嚢菌Ｓｏｒｄａｒｉａａｒａｎｅｏｓａから単離された抗菌抗生物質である（ＧＢ１，１６２，０２７およびＨｅｌｖｅｔｉｃａＣｈｉｍｉｃａＡｃｔａ，１９７１，５１：１１９−２０参照）。ソルダリン骨格を有する他の化合物も抗真菌剤として報告されてきた。特開昭６２−０４０２９２号はＺｏｐｆｉｅｌａｍａｒｉｎａｓｐ．から単離された化合物ゾフィマリン（Ｉ、ここでＺは（ｅ）である）を開示しており；特開平６−１５７５８２号はＰｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．から単離された化合物ＢＥ−３１４０５（Ｉ、ここでＺは（ｆ）であってＲ^ａはアセチルである）を開示し；およびＳＣＨ５７４０４（Ｉ、ここでＺは（ｆ）であってＲ^ａはメチルである）がＪ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，１９９５，４８：１１７１−１１７２に報告されている。半合成ソルダリン誘導体がＰＣＴ出願ＷＯ９６／１４３２６およびＷＯ９６／１４３２７に報告されている。前記化合物は全て抗真菌剤といわれてきたが、文献で言及されてる唯一の用途はヒト及び／又は動物真菌病の治療のためであった。ソルダリンおよびその誘導体が植物病原真菌に対して効果的であるか、またはそれらが農業用途で適しているという教示または示唆はない。

（発明の詳細な記載）
本発明は、１つの態様において、抗真菌有効量の式（Ｉ）：

［式中、Ｚは、

から選択されるテトラヒドロピラノ基であり、
ここで、Ｒ^ａはＯＣ（Ｏ）ＣＨ_３またはＣＨ_３であり；
Ｒ^１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ_１−４アルコキシまたはアシルオキシであり；
Ｒ^２およびＲ^３は、各々独立して、水素、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_１−４アルコキシＣ_１−４アルキルを表すことができるか、あるいは
Ｒ^２およびＲ^３はそれらが結合する炭素原子と一緒になって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ_３−８シクロアルキルを表すことができ；
Ｒ^４は、水素またはＣＨ_２Ｒ^７（ここで、Ｒ^７は水素、ヒドロキシル、Ｃ_１−４アルコキシまたはＲ^８がＣ_１−４アルキルまたはアリールである基ＯＣＯＲ^８である）；
Ｒ^５およびＲ^６は、各々独立して、水素、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_１−４アルコキシＣ_１−４アルキルを表すことができるか、あるいは
Ｒ^５およびＲ^６はそれらが結合する炭素原子と一緒になってＣ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ_３−８シクロアルキルを表すことができ；
ｎは０または１であり；
ＸおよびＹは、各々独立して、酸素、硫黄またはＣＲ^９Ｒ^１０（ここで、Ｒ^９およびＲ^１０は、各々独立して水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−４アルコキシまたはＣ_１−４アルコキシＣ_１−４アルキルを表すことができるか、あるいはＲ^９およびＲ^１０はそれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｃ_３−８シクロアルキルまたはＲ^１１が水素またはＣ_１−４アルキルを表すＣ＝ＣＨＲ^１１を表すことができる）を表すことができ；あるいはＸまたはＹが酸素であってｎが０である場合、−Ｙ−ＣＲ^２Ｒ^３または−Ｘ−ＣＲ^２Ｒ^３−は、各々、−Ｎ＝ＣＲ^３−または−ＮＲ^１２−ＣＲ^２Ｒ^３−（ここで、ＣＲ^２およびＲ^３はＣ＝Ｏであって、Ｒ^１２はＣ_１−４アルキルまたはＲ^１３がＣ_１−６アルキルであるアシル基ＣＯＲ^１３である）を表すことができるか、あるいはＹが酸素であってｎが０である場合、Ｘは二重結合によってピラン環に結合した基ＣＲ^１１（ここで、Ｒ^１１は前記定義の意味を有する）を表すことができ；
Ｒ^１５は水素、ハロゲン、アジド、Ｃ_１−６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ（任意に１または２個のヒドロキシまたはそのケタールまたは１または２個のＣ_１−３アルコキシ基によって置換されていてもよい）、アリールＣ_１−４アルコキシ、Ｃ_３−６アルケニルオキシ、基ＯＣＯＲ^１８（ここで、Ｒ^１８はアリールＣ_１−４アルコキシまたはＣ_１−１０アルキル基であり、任意に１個または２個の二重結合を含有していもよい）またはＣ_１−６アルコキシカルボニルＣ_１−４アルコキシであり、Ｒ^１６は水素を表すか、あるいはＲ^１５およびＲ^１６はそれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ＝ＯまたはＣ＝ＣＨ_２を表すことができ；
Ｒ^１７はＲ^１９が水素、ヒドロキシル、Ｃ_１−１４アルコキシまたは基ＯＣＯＲ^２０(Ｒ^２０がＣ_１−４アルキルである）であるＣＨ_２Ｒ^１９であり；および
Ｗは酸素、硫黄またはＣＨ_２であり；
および基（ａ）における破線はさらなる結合の任意の存在を示し；
Ｒ^１ａは水素、ハロゲン、ヒドロキシルまたはＣ_１−４アルコキシ；
Ｒ^２ａは水素、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ_１−１０アルコキシ、Ｃ_１−１０アルキルチオ、Ｃ_１−６アルコキシＣ_１−４アルコキシ、アリールＣ_１−６アルキルオキシ、アリールＣ_３−６アルケニルオキシ、アジド、ＮＲ^５ａＣＯＲ^５ａ（ここで、各Ｒ^５ａは、独立して、水素またはＣ_１−６アルキルである）、ＯＲ^６ａ（ここで、Ｒ^６ａは環酸素原子に隣接した環炭素原子を介して酸素原子に連結した４ないし８個の原子を含有する環状エーテルである）または基Ｙ^ａＣ（＝Ｏ）−Ｘ^ａ−Ｒ^７ａであり、ここで、Ｙ^ａは酸素、硫黄またはＮＨであり、Ｘ^ａは結合、酸素原子または部位ＮＲ^８ａいずれかであり、ここで、Ｒ^８ａは水素またはＣ_１−６アルキルであり、Ｒ^７ａは任意に１個または２個の二重結合を含有していてもよいＣ_１−１０アルキル、アリール、アリールＣ_１−４アルキル、アリールＣ_２−４アルケニル、ハロＣ_１−６アルキル、またはＣ_１−６アルコキシＣ_１−４アルキルであり）、およびＲ^３ａは水素を表し、または、
Ｒ^２ａおよびＲ^３ａはそれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ＝ＯまたはＣ＝ＮＯＲ^９ａ（ここで、Ｒ^９ａはＣ_１−６アルキルである）を表すことができ；およびＲ^４ａはヒドロキシル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^７ａ（ここで、Ｒ^７ａは前記定義に同じ）であり；但し、Ｒ^１ａが軸配置のヒドロキシル基を表してＲ^４ａがメトキシである場合、Ｒ^２ａはヒドロキシルおよび

から選択される軸配置の基を表すことができない］
の化合物またはその塩または溶媒和物（例えば、水和物）または代謝的に不安定な誘導体を、植物病原性真菌類の制御を必要とする植物に投与することを含む植物病原性真菌類を制御する方法を提供する。

もう１つの態様において、本発明は、抗真菌類有効量の式Ｉの化合物および農業上許容される担体を含む植物病原真菌類を制御するのに使用される農業用組成物を提供する。

本発明のもう１つの態様は、
炭素および窒素の同化源を含有する栄養培地でＲｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａのソルダリン産生株を培養し；次いで、
ソルダリンを単離する；
ことを含むソルダリンの生産方法を提供する。

本発明のもう１つの態様は、ＡＴＣＣ７４３８６の同定特徴を有するＲｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａの生物学的純粋培養を提供する。

本発明のさらなる態様は、
炭素および窒素の同化源を含有する栄養培地でＡＴＣＣ７４３８７の同定特徴を有する真菌のソルダリン産生株を培養し、次いで
ソルダリンを単離する；
ことを含むソルダリンの生産方法を提供する。

本発明のもう１つの態様は、ＡＴＣＣ７４３８７の同定特徴を有する真菌の生物学的純粋培養を提供する。

本出願において、特に断りのない限り、以下の定義が適用される。

「制御」または「制御する」という用語は、予防的使用（すなわち、感染に対して保護すること）および治療的使用（すなわち、感染を根絶すること）を含む。

「植物」という用語は、生植物全体またはその部分、葉、花、種子、果実および植物に由来する他の物質を含む。また、該用語は有効成分の土壌への適用を介する植物の根も含む。

農業用組成物または農業化学組成物におけるごとく、「組成物」という用語は、有効成分（類）、および担体をなす不活性成分（類）を含む生成物、ならびにいずれかの２以上の成分の組合せ、複合体化または凝集から、または１以上の成分類の解離から、または１以上の成分の反応または相互反応の他のタイプから、直接的にまたは間接的に得られるいずれかの生成物を含むことを意図する。従って、本発明の組成物は、本発明の化合物および農業上許容される担体を混合することによって作成されたいずれの組成物も含む。

基または基の一部としての「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソプロピル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ−オクチルのごとき直鎖または分岐鎖アルキル部位を意味する。

基または基の一部としての「アリール」は、各々、任意にハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−４アルコキシカルボニルから独立して選択される１ないし３個の基によって置換されていてもよいフェニルまたはヘテロアリールを意味する。該ヘテロアリール基は窒素、酸素および硫黄から選択される１個以上のヘテロ原子を含有する５−または６−員のヘテロ芳香族であり得る。ヘテロアリール基の適当な例はピリジル、フリル、チエニルおよびピロリルを含む。

「ハロゲン」または「ハロ」はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。

Ｒ^１がアシルオキシ基である場合、それは、例えばＲ^１３が前記定義に同じである基ＯＣＯＲ^１３を表し得る。

式Ｉの化合物の適当な塩は、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）のごとき無機塩基塩、アンモニウム塩、および有機塩基塩を含む。適当な有機塩基塩は、アミン塩、例えばトリアルキルアミン（例えば、トリエチルアミン）、ジアルキルアミン塩（例えば、ジシクロヘキシルアミン）、任意に置換されていてもよいベンジルアミン（例えば、フェニルベンジルアミンまたはｐ−ブロモベンジルアミン）、エタノールアミン、ジエタノールアミン、Ｎ−メチルグルコサミン、Ｎ−メチルピペリジン、ピリジンおよび置換されたピリジン（例えば、コリジン、ルチジン、４−ジメチルアミノピリジン）、およびトリ（ヒドロキシメチル）メチルアミン塩、およびアミノ酸塩（例えば、リシンまたはアルギニン塩）を含む。

式Ｉの化合物の代謝的に不安定な誘導体は、処理すべき対象（植物、葉、花、果実、または植物の他の部分または産物、または土壌）において式Ｉの化合物に変換される化合物である。かかる誘導体の例は、分子中のカルボン酸から形成された慣用の代謝的不安定エステルを含む。

１の好ましい具体例において、式Ｉの化合物はソルダリンである。

もう１つの好ましい具体例において、制御される植物病原新菌類はＥｒｙｓｉｐｈｅｓｐｐ．（ウドンコ病）およびＳｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａｓｐｐ、Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａｓｐｐ．、およびＵｎｃｉｎｕｌａｓｐｐ．のごとき他のウドンコ病；Ｐｕｃｃｉｎｉａｓｐｐ．（サビ病）；Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｐｐ；Ｕｓｔｉｌａｇｏｓｐｐ．（黒穂病）；Ｖｅｎｔｕｒｉａｓｐｐ．（瘡痂病）、Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍｓｐｐ．（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ、Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ、Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍｓｐｐ．）；Ｓｔａｇｎｏｓｐｏｒａｓｐｐ．；Ｓｅｐｔｏｒｉａｓｐｐ．；Ｂｏｔｒｙｔｉｓｓｐｐ．（灰色カビ病）；Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａｓｐｐ．；Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａｓｐｐ．；Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａｓｐｐ．；Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｓｐｐ．；Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐｐ；Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐｐ．；Ｐｌａｓｍｏｐａｒａｓｐｐ．；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｐｐ．である。

これらの制御される植物病原性新菌類のより好ましい具体例は、Ｅｒｙｓｉｐｈｅｇｒａｍｉｎｉｓ、Ｐｕｃｃｉｎｉａｒｅｃｏｎｄｉｔａ、Ｓｔａｇｎｏｓｐｏｒａｎｏｄｏｒｕｍ、Ｓｅｐｔｏｒｉａｔｒｉｔｉｃｉ、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａｏｒｙｚａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ、ＰｌａｓｍｏｐａｒａｖｉｔｉｃｏｌａおよびＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａである。

もう１つの具体例において、処理される植物は穀物作物（例えば、小麦、ライ麦、えん麦、大麦、米、ソルガムおよび関連作物）；ビート（砂糖ダイコンおよび飼料ビート）；梨果、ドロープ（ｄｒｏｐｅ）および柔軟果実（例えば、リンゴ、ナシ、スモモ、モモ、アーモンド、チェリー、イチゴ、キイチゴおよびクロイチゴ）；マメ科植物（豆類、エンドウ、ヒラマメおよび大豆）；油植物（菜種、芥子、ケシ、オリーブ、ヒマワリ、ヤシ、ヒマシ油植物、カカオ豆およびアメリカホドイモ）；ウリ科植物（例えば、キュウリ、カボチャおよびメロン）；繊維植物（例えば、ワタ、亜麻、麻およびジュート）；柑橘果実（例えば、オレンジ、レモン、マンダリンおよびグレープフルーツ）；野菜（例えば、レタス、キャベツ、ホウレンソウ、ニンジン、アスパラガス、シシトウガラシ、タマネギ、トマト、およびジャガイモ）；クスノキ科：（アボカド、シナモンおよびショウノウ）；またはトウモロコシ、タバコ、ナッツ、コーヒー、サトウキビ、茶、ブドウ、ホップ、バナナおよび天然ゴム植物のごとき植物、ならびに鑑賞植物（花、低木、広葉樹木および針葉樹のごとき常緑樹）である。

化合物の調製
式Ｉの化合物は全て公知の化合物であり、その製法は文献で利用できる。

ソルダリン（Ｉ、ここでＺは（ｄ）である）は、ＧＢ１，１６２，０２７およびＷＯ９６／１４３２６に記載されている手法に従って（ＡＴＣＣ３６３８６としてＡＴＣＣに寄託もされている）ＳｏｄａｒｉａａｒａｎｅｏｓａＮＲＲＬ３１９６の培養によって得ることができる。また、ソルダリンはＲｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａおよび後記する未同定真菌ＡＴＣＣ７４３８７の発酵から単離することもできる。

ゾフィルマリン（Ｉ、ここでＺは（ｅ）である）は、特開昭６２−０４０２９２号に記載されているごとくＺｏｆｉｅｌａｍａｒｉｎａＳＡＮＫ２１２７４（ＡＴＣＣ３４４５６）の発酵ブロスから得ることができる。ＢＥ３１４０５（Ｉ、ここでＡは（ｆ）であってＲ^ａはアセチルである）は、特開平６−１５７５８２号に記載されているごとくＰｅｎｉｃｉｌｌｕｍｓｐ．Ｆ３１４０５によって生産される。ＳＣＨ５７４０４（Ｉ、ここでＡは（ｆ）であってＲ^ａはメチルである）は、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，１９９５，４８（１０）：１１７１−１１７２に報告されているごとくシェリング（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）培養番号ＳＣＦ１０８２Ａとして同定された真菌によって生産される。

ソルダリン誘導体（Ｉ、ここでＺは（ａ）または（ｂ）である）、およびそれらの調製はＰＣＴ出願ＷＯ９６／１４３２６に記載され；ソルダリン誘導体（Ｉ、ここでＺは（ｃ）である）およびその調製はＰＣＴ出願ＷＯ９６／１４３２７に記載されている。

前記したごとく、２つの他の生物がソルダリンを生産することが判明している。

ソルダリンを生産するのに使用される真菌株の１つは、コスタリカ、ＰｒｏｖｉｎｃｉａｄｅＰｕｎｔａｒｅｎａｓ、ＰｅｎｉｎｓｕｌａｄｅＯｓａ、ＭａｎｇｌａｒｄｅＲｉｏＲｉｎｃｏｎで収集され、ニュージャージー州、ＲａｈｗａｙのＭｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．の培養コレクションでＭＦ６２３２として同定されたマングローブ低木Ｃｏｎｏｃａｒｐｕｓｅｒｅｃｔｕｓの根の内部組織から単離された未同定不稔性真菌ＧＢ３１０９である。この培養は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定下に米国２０８５２、メリーランド州、ロックビル、１２３０１ＰａｒｋｌａｗｎＤｒｉｖｅのＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎの永久寄託にて１９９６年８月２７日に寄託し、受託番号ＡＴＣＣ７４３８７が与えられた。

該真菌は種々の光法の下で種々の菌学的培地上、および滅菌した葉および濾紙上で増殖させたが、全ての場合、再現性のある構造を生じず、かくして、同定できない。

寒天培地では、該真菌のコロニーは以下の菌学的性質を呈する：
２３℃にて、１２時間の光周期にて、オートミール寒天（Ｄｉｆｃｏ）上でコロニー、中程度の速さで増殖、１４日以内で８５−９０ｍｍに到達、密着したゾーンが進行、均一、不明瞭な帯状、強く放射状の縞、中央が湿気固着した菌糸体、放射状に伸びてはう菌糸の束またはストランドを持ち絹状となる、半透明ないし淡いピンク色、淡い黄土色がかったサーモン色（ワシントンＤＣ、ＣｏｌｏｒＳｔａｎｄａｒｄｓａｎｄＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，Ｒ．１９１２、Ｒｏｄｇｗａｙからの大文字印刷の色彩名称）、明るい黄土色がかったサーモン色、ピンクがかった灰色Ａｖｅｌｌａｎｅｏｕｓ、シナモントビ色、または最上空中菌糸体において白色、裏は淡ピンク色がかった灰色、浸出物無し、香りはわずかに芳香性。オートミール寒天上で３７℃で増殖無し。

２３℃、１２時間の光周期にてＶ８ジュース寒天（Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｒ．Ｂ．１９８１．ＭｙｃｏｌｏｇｙＧｕｉｄｅｂｏｏｋ．ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＰｒｅｓｓ，シアトル，６６５頁）上でコロニー、ゆっくりと増殖して１４日以内に３７−４２ｍｍに到達、縁が隠れる、固着したほどんどの菌糸体、外１／３に向かう不十分なむら毛状空中菌糸体、帯状、半透明ないし淡い灰色がかったピンク色、オートミール寒天上の色と同様、裏は半透明ないし淡い赤色がかった茶色、木材茶色に近い、栗毛色。

２５℃、１２時間の光周期にてコーンミール寒天（Ｄｉｆｃｏ）上でコロニー、ゆっくりと増殖、１４日以内で３３−３４ｍｍに到達、縁が隠れる、空中菌糸を欠く、帯状、半透明。

該菌糸体は高度に分岐した単純な隔膜、透明菌糸からなる。

ソルダリンを生産するのに使用される第２の真菌株（ＧＢ３７１９）は、ニュージャージー州、ＲａｈｗａｙのＭｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．の培養コレクションにおいてＭＦ６２３９と命名されたＲｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａ（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔｉｎａ、Ｘｙｌａｒｉａｃｅａｅ）の株である。この培養は、微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定下に米国２０８５２、メリーランド州、ロックビル、１２３０１ＰａｒｋｌａｗｎＤｒｉｖｅのＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎの永久寄託にて１９９６年８月２７日に寄託し、受託番号ＡＴＣＣ７４３８６が与えられた。

Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａ（ＧＢ３７１９）のａｓｃｏｍａｔａはニュージャージー州、ＭｏｎｍｏｕｔｈＣｏ．、Ｎａｖｅｓｉｎｋ川沿岸の剥皮した堅木大枝で発見された。研究所において、いくつかのａｓｃｏｍａｔａの先端を滅菌したミクロトーム刃で取り除き、被子器壁の堅い部分からの子嚢、側糸および子嚢胞子を昆虫ピンで取り出し、麦芽酵母エキス寒天上に画線した。子嚢胞子をそれが発芽するまで一晩インキュベートし、麦芽酵母エキス寒天のチューブに移して、純粋コロニーを開始した。

Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａ（ＧＢ３７１９）の形態は文献中の記載と合致した（Ｊ．Ｂ．Ｅｌｌｉｓ＆Ｂ．Ｍ．Ｅｖｅｒｈａｒｔ，１９８２、ＴｈｅＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａｎＰｙｒｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、著者らによって公表、Ｎｅｗｆｉｌｅｄ、ニュージャージー州、１６５−１６６頁；Ｌ．Ｅ．Ｐｅｔｒｉｎｉ，１９９３，Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｐｉｅｃｅｓｏｆｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔａｚｏｎｅｓ，Ｓｙｄｏｗｉａ４４：１６９−２８１）。Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａとしての真菌の同定に導く鍵となる特徴は以下のものであった：子座ａｓｃｏｍａｔａは単独で起こるが、剥皮した木材の菌糸支柱上の小さなクラスターに凝集または融合する；子座は半球状、乳頭状、平滑、艶があり、黒色であり、支柱は薄い菌糸マット、淡黄色、または時々は子座に隣接する木材の明るく着色変色；子嚢はアミロイド頂上プラグを持ち円筒状；子嚢胞子は茶色がかった灰色、広く楕円状ないしわずかに腎臓形、平滑、付属物または鞘無し、真っすぐな、腹側胚スリット有り、１０−１２×５−６μｍ。

寒天培地において、該真菌のコロニーは以下の形態を示す：
２３℃、１２時間の光周期でオートミール寒天上にコロニー、中程度に速く増殖、１４日以内に７３−７５ｍｍに到達、密着したゾーンが進行、均一、不明瞭な帯状、内側１／３にわたって白色ビロード状ないしむら毛状菌糸体有り、外側２／３にわたって湿気固着した菌糸体有り、半透明ないし白色または淡ピンク色、淡葡萄酒色がかったピンク色、裏は明るいブドウ酒色シナモン、浸出物無し、わずかに芳香性臭。オートミール寒天上、３７Ｃで増殖無し。

２３℃、１２時間の光周期でＶ８ジュース寒天上でコロニー、ゆっくりと増殖して１４日以内に２５−３５ｍｍの到達、縁が隠れる、ほとんどは最も固着した菌糸体、外側１／３に向けていくらかむら毛状の菌糸体、帯状、半透明ないし淡灰色がかったピンク色、葡萄酒色シナモン、裏は半透明ないしシナモン、オレンジ色−シナモン、シナモン、または淡赤色がかった茶色、小豆色、栗毛色、臭は芳香性。

２５℃、１２時間の光周期でコーンミール寒天上でコロニー、ゆっくりと増殖、１４日以内に２９−３４ｍｍに到達、隠れた縁、空中菌糸を欠く、非帯状、半透明、または接種点に不十分な白色菌糸体、裏は無色。

１９９３年８月に培養で最初に増殖させた場合、該株は、Ｐｅｔｒｉｎｉ１９９３によって記載されたものと同様のＧｅｎｉｃｕｌｏｓｐｏｒｉｕｍａｎａｍｏｒｐｈの不十分な分生子柄および分生子を生じた。しかしながら、胞子形成はもはや明らかではなく、これはどうも延長された貯蔵および反復した移動と思われる。少なくとも１つの場合において、天然で観察されるものと同一の子嚢および子嚢胞子を持つ少数の成熟した被子器が、オートミール寒天上での増殖５週間後に形成された。室温で麦芽酵母エキス寒天に接種すると、子嚢胞子は発芽した。菌糸体は高度に分岐した単純な隔膜のある透明菌糸よりなる。

ソルダリンは、慣用的固体培地上または慣用的水性培地中でＲｏｓｅｌｌｉｎａｓｕｂｉｃｕｌａｔａの株又は当該化合物を生産できる未同定真菌ＭＦ６２３２（ＡＴＣＣ７４３８７）を培養することによって生産される。該生物は同様の真菌用の公知の栄養源、すなわち、炭素および窒素の同化源＋任意の無機塩および他の公知の増殖因子を含有する栄養培地中で増殖する。他の同様の真菌の培養で使用される一般的手法が本発明に適用できる。

栄養培地は、リボース、グルコース、スクロース、セロビオースまたはフラクトースのごとき適当な同化性炭素源を含有すべきである。窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等を、単独で、あるいはペプトン、フィッシュミールエキス、酵母エキス、トウモロコシ浸出液、大豆粉、綿実粉等のごとき有機窒素源と組み合わせて使用することができる。また、要すれば、栄養無機塩を添加して、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、ホスフェート、スルフェート、クロライド、ブロマイド、カーボネート、亜鉛、マグネシウム、マンガン、コバルト、鉄等の源を供することもできる。

ソルダリンの生産は、該産生生物の満足できる増殖に導くいずれかの温度、例えば２０℃−３０℃で行うことができる。通常、所望の化合物の最適生産は、７−２１日のインキュベーション期間後の震盪フラスコ中で得られる。震盪フラスコ中でのエアレーションは、撹拌によって、例えばロータリーシェーカーで震盪することによって達成される。発酵をタンク発酵槽中で行うべき場合、当該生物の斜面培養、凍結乾燥培養または凍結培養からの栄養ブロス培養を接種することによって、該ブロス中に栄養接種物を生じさせるのが望ましい。このようにして活性接種物を得た後、それを発酵タンク培地に無菌的に移す。通常、インキュベーションの７ないし２１日後にタンク発酵槽で所望の化合物が生産される。タンク発酵槽におけるアジテーションは撹拌することによって供され、エアレーションは空気または酸素を撹拌混合物に注入することによって達成することができる。化合物生産は、クロマトグラフィーまたは分光学的技術を用い、あるいは慣用的生物学的アッセイによってモニターすることができる。

好ましい具体例において、該生産株は、ＡＴＣＣ７４３８６の同定特徴を有するＲｏｓｅｌｌｉｎａｓｕｂｉｃｕｌａｔａ、またはその突然変異体または変種である。

もう１つの好ましい具体例において、未同定真菌の該生産株はＡＴＣＣ７４３８７である。

メチルエチルケトンのごとき有機溶媒で全ブロスを抽出することによって、ソルダリンは発酵ブロスから容易に回収される。該化合物は、ゲル濾過、クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高効率液体クロマトグラフィー、濃縮、沈殿及び／又は結晶化、またはそれらの組合せのごとき当該分野でよく知られている標準的方法を用いて精製することができる。別法として、全ブロスまたはその有機抽出物はスプレイ乾燥または凍結乾燥し、続いて前記したごとくに精製することができる。

利用性
式Ｉの化合物は、広域スペクトル作物抗真菌剤としての用途を有し、植物病原真菌、特に以下のクラスよりなる広域スペクトルに対して極めて効果的である：Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ（例えば、Ｂｏｔｒｙｔｉｓｓｐｐ．、Ｓｅｐｔｏｒｉａｓｐｐ．、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａｓｐｐ．、Ｓｔａｇｎｏｓｐｏｒａｓｐｐ．、Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍｓｐｐ．（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ、Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ、Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ，ｓｐｐ．）、Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐｐ．、Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａｓｐｐ．、Ｐｈｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍｓｐｐ．、Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａｓｐｐ．及びＡｌｔｅｒｎａｒｉａｓｐｐ．）；Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ（例えば、Ｐｕｃｃｉｎｉａｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｐｐ．およびＨｅｍｉｌｅｉａ）；Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ（例えば、Ｖｅｎｔｕｒｉａｓｐｐ．、Ｐｏｄｏｓｐｈａｒｅｒａｓｐｐ．、Ｅｒｙｓｉｐｈｅｓｐｐ．、Ｍｏｎｉｌｉｎｉａｓｐｐ．およびＵｎｃｉｎｕｌａｓｐｐ．）；およびＯｏｍｙｃｅｔｅｓ（例えば、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｓｐｐ．、Ｐｅｒｎｏｓｐｏｒａｓｐｐ．、Ｂｒｅｍｉａｓｐｐ．、Ｐｙｔｈｉｕｍｓｐｐ．、およびＰｌａｓｍｏｐａｒａｓｐｐ．）。前記リストは、それに対して指名した化合物が活性を示す植物病原真菌を例示するが、断じてそれに限定されるものではない。これらの化合物は、植物を保護するための非常に有利な治療的、予防的および全身的殺真菌特性を有し、これを用いて、同時に、後で成長する植物の部分も微生物に対して保護しつつ、有用植物の異なる作物の植物または植物の部分（果実、蕾、葉、茎、塊茎または根）で発生する微生物を抑制しまたは破壊することができる。また、それらは植物増殖材料、特に種子（果実、塊茎、穀粒）および切穂（例えば、稲）の処置において肥料として用いて、真菌感染から、および土壌中で生じる植物病原真菌からの保護を供することができる。本発明の式Ｉの化合物は、それらが植物によって特によく許容され、環境に対して優しいという事実によって区別される。

活性のスペクトルに基づいて、本発明の化合物を用いて、種々の有用な作物に影響する植物病原真菌から植物を保護し治療する。以下の植物種は、述べた化合物の本発明の範囲に記載された使用に適している：穀物（例えば、小麦、ライ麦、えん麦、大麦、米、ソルガムおよび関連作物）：ビート（サトウダイコンおよび飼料ビート）；梨果、ドロープ（ｄｒｏｐｅ）および柔軟果実（例えば、リンゴ、ナシ、スモモ、モモ、アーモンド、チェリー、イチゴ、キイチゴおよびクロイチゴ）；マメ科植物（豆類、エンドウ、ヒラマメおよび大豆）；油植物（菜種、芥子、ケシ、オリーブ、ヒマワリ、ヤシ、ヒマシ油植物、カカオ豆およびアメリカホドイモ）；ウリ科植物（キュウリ、カボチャおよびメロン）；繊維植物（例えば、ワタ、亜麻、麻およびジュート）；柑橘果実（例えば、オレンジ、レモン、マンダリンおよびグレープフルーツ）；野菜（例えば、レタス、キャベツ、ホウレンソウ、ニンジン、アスパラガス、シシトウガラシ、タマネギ、トマト、およびジャガイモ）；クスノキ科：（アボカド、シナモンおよびショウノウ）；またはトウモロコシ、タバコ、ナッツ、コーヒー、サトウキビ、茶、ブドウ、ホップ、バナナおよび天然ゴム植物のごとき植物、ならびに鑑賞植物（花、低木、広葉樹木および針葉樹のごとき常緑樹）。しかしながら、前記植物種は、述べた化合物によるスペクトルに関して植物の限定的リストを構成しない。

式Ｉの化合物は以下の植物病を制御するのに特に有用である：
小麦、大麦、えん麦、ライ麦および芝生についてのＥｒｙｓｉｐｈｅｇｒａｍｉｎｉｓ（ウドンコ病）およびウリ科植物についてのＥｒｙｓｉｐｈｅｃｉｃｈｏｒａｃｅａｒｕｍおよびＳｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａｆｕｌｉｇｉｎｅａ、リンゴについてのＰｏｄｏｓｐｈａｅｒａｌｅｕｃｏｔｒｉｃｈａ、ブドウについてのＵｎｃｉｎｕｌａｎｅｃａｔｏｒのごとき種々宿主についての他のウドンコ病；小麦、大麦および他の宿主についてのＰｕｃｃｉｎｉａ種（サビ病）；ワタにおけるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、穀物およびサトウキビにおけるＵｓｔｉｌａｇｏ種（黒穂病）、リンゴにおけるＶｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅｑｕａｌｉｓ（瘡痂病）、穀物におけるＨｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ、Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ、Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ）種、小麦におけるＳｔａｇｎｏｓｐｏｒａｎｏｄｏｒｕｍおよびＳｅｐｔｏｒｉａｔｒｉｔｉｃｉ、イチゴおよびブドウにおけるＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ（灰色かび）、アメリカホドイモにおけるＣｅｒｃｏｓｐｏｒａａｒａｃｈｉｄｉｃｏｌａ、小麦および大麦におけるＰｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａｈｅｒｐｏｔｒｉｃｈｏｉｄｅｓ、米におけるＰｙｒｉｃｕｌａｒｉａｏｒｙｚａｅ、ジャガイモおよびトマトにおけるＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ、種々の植物におけるＦｕｓａｒｉｕｍおよびＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ種、ブドウにおけるＰｌａｓｍｏｐａｒａｖｉｔｉｃｏｌａ、果実および野菜におけるＡｌｔｅｒｎａｒｉａ種。また、式Ｉの化合物は物質を保護するのにも使用することができる（例えば、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｖａｒｉｏｔｉｉに対して材木を保護）。

農業用組成物
式Ｉの化合物はそのままで、あるいは農薬処方の当該分野で慣用的に使用されるアジュバントと一緒に好ましくは使用され、この目的では、主として以下の公知の形態である：乳化性濃縮物、被覆性ペースト、直接的に噴霧可能なまたは希釈可能な溶液、希釈溶液、懸濁液（高パーセンテージ水性、油性または他の懸濁液含む）、分散液、油分散液、バラマキ剤、湿潤性粉末、可溶性粉末、ダスト、顆粒およびカプセル化。該処方は、例えば、有効成分をエキステンダー、例えば、溶媒、固体担体および、適当な場合は表面活性化合物（界面活性剤）と共な均一に混合及び／又は粉砕することによって、公知の方法で調製される。粉末、ダストおよびバラマキ剤は、有効成分を固体担体と共に混合または粉砕することによって調製することができる。顆粒、例えば、コートした、含浸したまたは均質な顆粒は有効成分を固体担体に結合させることによって調製できる。

適当な溶剤は以下のものである：芳香族炭化水素、好ましくは、キシレン混合物または置換ナフタレンのごとき８ないし１２個の炭素原子を含有する留分、クロロベンゼンのごとき塩素化芳香族、ジブチルもしくはジオクチルフタレートのごときフタレート、シクロヘキサンまたはパラフィンのごとき脂肪族炭化水素、エタノール、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルもしくはモノエチルエーテルのごときアルコールおよびグリコールおよびそれらのエーテルおよびエステル、シクロヘキサノンのごときケトン、エタノールアミンのごときアミン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドのごとき強極性溶剤、およびエポキシ化ヤシ油または大豆油のごとき植物油またはエポキシ化植物油：および水。

界面活性剤の例は以下のものである：芳香族スルホン酸、例えば、リグニンスルホン酸、フェノールスルホン酸、ナフタレンスルホン酸およびジブチルナフタレンスルホン酸の、および脂肪酸のアルカリ金属、アルカリ土類金属およびアンモニウム塩、アルキルおよびアルキルアリールスルホネート、およびアルキル、ラウリルエーテルおよび脂肪アルコールスルフェート、および硫酸化ヘキサデカノール、ヘプタデカノールおよびオクタデカノールの塩、脂肪アルコールグリコールエーテルの塩、スルホン化ナフタレンおよびナフタレン誘導体のホルムアルデヒドとの縮合生成物、ナフタレンまたはナフタレンスルホン酸のフェノールおよびホルムアルデヒドとの縮合生成物、ポリオキシエチレンオクチルフェノールエーテル、エトキシル化イソオクチルフェノール、エトキシル化オクチルフェノールおよびエトキシル化ノニルフェノール、アルキルフェノールポリグリコールエーテル、トリブチルフェニルポリグリコールエーテル、アルキルアリールポリエーテルアルコール、イソトリデシルアルコール、脂肪アルコールエチレンオキシド縮合物、エトキシル化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、エトキシル化ポリオキシプロピレン、ラウリルアルコールポリグリコールエーテルアセタール、ソルビトールエステル、リグニン−サルファイト廃液およびメチルセルロース。

固体担体の例はケイ酸、シリカゲル、シリケート、タルク、カオリン、アタパルジャイト粘土、石灰石、石灰、白亜、膠灰粘土、黄土、粘土、ドロマイト、ケイソウ土、硫酸アルミナカルシウム、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウムのごとき鉱物土、粉砕プラスチック、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウムおよび尿素のごとき肥料、および穀粒粗粉、樹皮粗粉、木材粗粉、およびナッツ殻粗粉、セルロース粉末等のごとき植物生成物である。

式Ｉの化合物は他の有効成分、例えば、除草剤、殺虫剤、殺菌剤、殺線虫剤、殺軟体動物剤、成長調節物質、微量栄養、および肥料と混合し、それと一緒に適用することができる。他の成分は、限定されるものではないが、以下のクラス抗真菌剤：カルボキシアミド、ベンズイミダゾール、トリアゾール、ヒドロキシピリジン、ジカルボキシアミド、フェニルアミド、チアジアゾール、カルバメート、シアノ−オキシム、ケイ皮酸誘導体、モルホリン、イミダゾール、β−メトキシアクリレートやよびピリジン／ピリミジンに属する１種以上の抗真菌剤であってもよい。さらに、これらのさらなる有効成分は、所望ならば、処方分野で通常に使用される他の適用促進アジュバントと一緒に製剤のいくつかの混合物として使用することができる。適当な担体およびアジュバントは固体または液体であり得るが、処方技術で典型的には使用される物質（例えば、天然または再生鉱物物質、溶剤、分散剤および湿潤剤）に対応する。

式Ｉの化合物と組み合わせることができる抗真菌剤の以下のリストは、可能な組合せを説明することを意図し、いずれかの制限を課すものではない。式Ｉの化合物と組み合わせることができる抗真菌剤の例は以下のものである：硫黄、ジメチルジチオカルバミン酸第二鉄、ジメチルジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、エチレンジアミンビトジチオカルバミン酸マンガン亜鉛、テトラメチルチウラムジスルフィド、Ｎ，Ｎ’−エチレンビトジチオカルバミン酸亜鉛のアンモニア錯体、Ｎ，Ｎ’−プロピレンビスジチオカルバミン酸亜鉛のアンモニア錯体、Ｎ，Ｎ’−プロピレンビスジチオカルバミン酸亜鉛およびＮ，Ｎ’−ポリプロピレンビス（チオカルバミル）ジスルフィドのごときジチオカルバメートおよびそれらの誘導体；ジニトロ（１−メチルヘプチル）−フェニルクロトン酸、３，３−ジメチルアクリル酸２−ｓｅｃ−ブチル−４，６−ジニトロフェニル、イソプロピル炭酸２−ｓｅｃ−ブチル−４，６−ジニトロフェニルおよび５−ニトロイソフタル酸ジイソプロピルのごときニトロ化合物；酢酸２−ヘプタデシルイミダゾール−２−イル、２，４−ジクロロ−６−（ｏ−クロロアニリノ）−ｓ−トリアジン、Ｏ，Ｏ−ジエチルフタルイミドホスホノチオエート、５−アミノ−１−［ビス（ジメチルアミノ）−ホスフィニル］−３−フェニル−１，２，４−トリアゾール、２，３−ジシアノ−１，４−ジチオアントラキノン、２−チオ−１，３−ジチオ［４，５−ｂ］キノキサリン、１−（ブチルカルバミル）−２−ベンズイミダゾールカルバミン酸メチル、２−メトキシカルボニルアミノベンズイミダゾール、２−（フル−２−イル）−ベンズイミダゾール、２−（チアゾール−４−イル）ベンズイミダゾール、Ｎ−（１，１，２，２−テトラクロロエチルチオ）−テトラヒドロフタルイミド、Ｎ−トリクロロメチルチオテトラヒドロフタルイミド、Ｎ−トリクロロメチルチオフタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−フェニル硫酸ジアミド、５−エトキシ−３−トリクロロメチル−１，２，３−チアジアゾール、２−チオシアナトメチルチオベンゾチアゾール、１，４−ジクロロ−２，５−ジメトキシベンゼン、４−（２−クロロフェニルヒドラゾノ）−３−メチル−５−イソオキサゾロン、２−チオピリジン１−オキシド、８−ヒドロキシキノリンおよびその銅塩、２，３−ジヒドロ−５−カルボキシアニリド−６−メチル−１，４−オキサチイン、２，３−ジヒドロ−５−カルボキシアニリド−６−メチル−１，４−オキサチイン４，４−ジオキシド、２−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピラン−３−カルボキシアニリド、２−メチルフラン−３−カルボキシアニリド、２，５−ジメチルフラン−３−カルボキシアニリド、２，４，５−トリメチルフラン−３−カルボキシアニリド、２，５−ジメチル−Ｎ−シクロヘキシルフラン−３−カルボキシアミド、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ−メトキシ−２，５−ジエチルフラン−３−カルボキシアミド、２−メチルベンズアニリド、２−ヨードベンズアニリド、Ｎ−ホルミル−Ｎ−モルホリン−２，２，２−トリクロロエチルアセタール、ピペラジン−１，４−ジイルビス（１−（２，２，２−トリクロロエチル）−ホルムアミド）、１−（３，４−ジクロロアニリノ）−１−ホルミルアミノ−２，２，２−トリクロロエタン、２，６−ジメチル−Ｎ−トリデシルモルホリンおよびその塩、２，６−ジメチル−Ｎ−シクロドデシルモルホリンおよびその塩、Ｎ［３−（ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−２−メチルプロピル］−シス−２，６−ジメチルモルホリン、Ｎ−３−（ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−２−メチルプロピル］−ピペリジン、１−[２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−エチル−１，３−ジオキソラン−２−イル−エチル］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１−［２−（２，４−ジクロロフェニル）−４−ｎ−プロピル−１，３−ジオキソラン−２−イル−エチル］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール、Ｎ−（ｎ−プロピル）−Ｎ−（２，４，６−トリクロロフェノキシエチル）−Ｎ］−イミダゾリル尿素、１−（４−クロロフェノキシ）−３，３−ジメチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−ブタン−２−オン、１−（４−クロロフェノキシ）−３，３−ジメチル−１−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−ブタン−２−オール、アルファ−（２−クロロフェニル）−アルファ−（４−クロロフェニル）−５−ピリミジンメタノール、５−ブチル−（２−ジメチルアミノ）−４−ヒドロキシ−６−メチルピリミジン、ビス−（ｐ−クロロフェニル）−３−ピリジンメタノール、１，２−ビス−（３−エトキシカルボニル−２−チオウレイド）−ベンゼン、１，２−ビス−（３−メトキシカルボニル−２−チオウレイド）−ベンゼンのごとき複素環物質、およびドデシルグアニジン酢酸塩、３−［３−（３，５−ジメチル−２−オキシシクロヘキシル）−２−ヒドロキシエチル］−グルタルアミド、ヘキサクロロベンゼン、ＤＬ−メチル−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−フル−２−イルアラネート、メチルＤＬ−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−（２］−メトキシアセチル）−アラネート、Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−クロロアセチル−ＤＬ−２−アミノブチロラクトン、メチルＤＬ−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ−（フェニルアセチル）−アラネート、５−メチル−５−ビニル−３−（３，５−ジクロロフェニル)−２，４−ジオキソ−１，３−オキサゾリジン、３−［３，５−ジクロロフェニル］−５−メチル−５−メトキシメチル−１，３−オキサゾリジン−２，４−ジオン、３−（３，５−ジクロロフェニル）−１−イソプロピルカルバミルヒダントイン、Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−１，２−ジメチルシクロプロパン−１，２−ジカルボキシイミド、２−シアノ−［Ｎ−（エチルアミノカルボニル）−２−メトキシイミノ］−アセトアミド、１−［２−（２，４−ジクロロフェニル）−ペンチル］−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール、２，４−ジフルオロ−ａ−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルメチル）−ベンズヒドリルアルコール、Ｎ−（３−クロロ−２，６−ジニトロ−４−トリフルオロメチルフェニル）−５−トリフルオロメチル−３−クロロ−２−アミノピリジン、および１−（（ビス−（４−フルオロフェニル）−メチルシリル）−メチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールのごとき各種抗真菌剤。

使用方法
組成物の性質に関しては、噴霧、アトマイジング、ダスティング、散布、コーティング、ドレッシングおよび注ぎのごとき適用方法が、適用の意図した目的および主たる状況に応じて選択される。有効成分または少なくとも１種の述べた化合物を含有する農薬組成物を適用する１つの方法は、植物への適用である（例えば、葉適用）。しかしながら、有効成分は土壌を介して根を通って植物に浸透させることもできる（すなわち、土壌適用）。これは、土壌への液体適用（浴びせ）または顆粒適用のいずれかの形態であり得る。

また、有効成分は種子（果実、塊茎または穀粒）のごとき植物増殖材料または植物切穂に液体形態（コーティング）または固体形態（ドレッシング）で適用することもできる。例えば、播種前に種子にドレッシングを施すことができる。また、本発明の化合物は、穀粒に液体処方を含浸させることによって、またはそれらを固体処方でコーティングすることによって穀粒に適用することもできる。また、該組成物は、増殖材料を例えば播種の間に種子畦溝に植える場合に植える場所に適用することもできる。

適用の有利な率は、通常、ヘクタール当たり５０ｇないし５０ｋｇの有効成分（ａ．ｉ．）、好ましくは１００ｇないし２ｋｇａ．ｉ．／ｈａ、最も好ましくは１００ｇないし６００ｇａ．ｉ．／ｈａである。述べた化合物の有効成分は、典型的には、組成物の形成で使用され、植物、または植物の部分に、さらなる有効成分と同時に、あるいはそれに続いて適用することができる。これらのさらなる有効成分は肥料、さらなる微量栄養、または他の植物生長影響性化合物であり得る。しかしながら、それらは選択的除草剤、殺虫剤、殺菌剤、殺線虫剤および殺軟体動物剤、ならびに他の抗真菌剤でもあり得る。

以下の実施例は本発明を説明する意図のものであり、断じてその範囲を限定しない。実施例で言及する種々の種子および生産培地の調製および組成は以下の通りである：
種子培地１

該培地は蒸留水で調製し、滅菌に先立ってｐＨを７．０に調整し、５０ｍｌ／２５０ｍｌ無邪魔板エルレンマイアーフラスコで分注した。コットンクロージャーを用いた。滅菌は１２１℃で２０分間であった。

種子培地２

微量元素溶液

該培地は蒸留水で調製し、滅菌に先立ってｐＨを６．８に調整し、５０ｍｌ／２５０ｍｌ無邪魔板エルレンマイアーフラスコで分注した。コットンクロージャーを用いた。滅菌は１２１℃で２０分間であった。

固体生産培地１
１．固体部分：
６７５ｃｃのバーミキュライトを２リットルのローラーボトルに添加する。ラテックスクロージャーで栓をする；６０分間オートクレーブ処理し、３０分間乾燥する。

２．液体部分：
５００ｍｌボトルに以下の２２０ｍｌを添加する。

該培地は蒸留水で調製し、滅菌に先立ってｐＨを７．０に調整した。グルコースは別にオートクレーブ処理した。それを５００ｍｌボトルに分注し、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。

液体生産培地１

該培地は蒸留水で調製し、滅菌に先立ってｐＨを７．０に調整した。該培地は５０ｍｌ／２５０ｍｌ無邪魔板エルレンマイアーフラスコで分注した。フラスコはコットンで閉じ、１２１℃で２０分間オートクレーブ処理した。

固体生産培地２
１．固体部分：
２−リットルのローラーボトルに６７５ｃｃのバーミキュライトを添加する。ラテックスクロージャーで栓をする；６０分間オートクレーブ処理し、３０分間乾燥する。

該培地は蒸留水で調製し、滅菌に先立ってｐＨを７．０に調整した。それを５００ｍｌボトル当たり２２０ｍｌで分注し、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。

液体生産培地２
組成は固体生産培地１の液体部分と同一である。培地は蒸留水で調製し、滅菌に先立ってｐＨを７．０に調整した。グルコースは別途にオートクレーブ処理した。培地は２５０ｍｌ無邪魔板エルレンマイアーフラスコ当たり５０ｍｌで分注した。フラスコはコットンで閉じ、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。

Ｒｏｓｅｌｌｉｎａｓｕｂｉｃｕｌａｔａ（ＭＦ６２３９、ＡＴＣＣ７４３８６）の発酵によるソルダリンの生産
１．培養：培養を含有する寒天斜面の一部を無菌的に種子培地１（５０ｍｌ／２５０ｍｌ無邪魔板フラスコ）に移した。これを、２５℃、８５％相対湿度（ｒｈ）にて２−インチのスロー旋回震盪機（２２０ｒｐｍ）上で５日間インキュベートしてバイオマスを得た。該バイオマスの複数部分をグリセロールを含有する滅菌バイアルに移し、（凍結栄養菌糸体（ＦＶＭ）として）凍結した。これらを−７５℃にて１０−１５％グリセロールの最終濃度で維持した。解凍した一次ＦＶＭ１．０ｍｌを種子培地２に移し、２５℃で７日間インキュベートし、前記したごとくに凍結することによって、二次ＦＶＭを一次ＦＶＭから調製した。
２．種子：ＭＦ６２３９の凍結バイアル（ＦＶＭ）を室温に解凍し、これを用いて５０ｍｌの種子培地２当たり１．０ｍｌで種子培養を接種した。これらを、２５℃、８５％ｒｈにて旋回震盪機（２２０ｒｐｍ）で７日間増殖させた。
３．生産：固体生産培地にて：該種子のアリコート（１０−１２ｍｌ）を固体生産培地１の液体部分２２０ｍｌに入れた。このフラスコを激しく渦巻かせてバイオマスを分散させた。大粒子のバーミキュライト６７５ｃｍ^３を含有する２Ｌローラー培養に注ぐことによって、内容物を分注した。ローラーボトルの内容物を震盪／混合して、均一な接種および被覆を確実とした。２２℃、７０％ｒｈにてＷｈｅａｔｏｎローラー装置上でほぼ４ｒｐｍで１７日間回転させて、ローラーボトルを水平にてインキュベートして、発酵培地中に二次代謝産物を得た。

液体生産培地種子培養を前記したごとくに接種した。該種子のアリコート（１．５ｍｌ）を使用して、５０ｍｌ／２５０ｍｌフラスコの液体生産培地１を含有する各生産フラスコを接種した。２５℃、５０−８５％ｒｈにて、フラスコを旋回震盪機（２２０ｒｐｍ）で７−２１日間インキュベートした。

ＭＦ６２３２（ＡＴＣＣ７４３８７）によるソルダリンの生産
１．培養：ＭＦ６２３２を含有する寒天の一部を無菌的に種子培地１（５０ｍｌ／２５０ｍｌ無邪魔板フラスコ）に移した。これを、２５℃、８５％相対湿度（ｒｈ）にて２−インチのスロー旋回震盪機（２２０ｒｐｍ）上で３日間インキュベートしてバイオマスを得た。該バイオマスの複数部分をグリセロールを含有する滅菌バイアルに移し、（ＦＶＭとして）凍結した。これらを−７５℃にて１０−１５％グリセロールの最終濃度で維持した。解凍した一次ＦＶＭ１．０ｍｌを種子培地２（組成は後記）に移し、２５℃、２２０ｒｐｍで７日間インキュベートし、前記したごとくに凍結すことによって、二次ＦＶＭを一次ＦＶＭから調製した。
２．種子：ＭＦ６２３２の凍結バイアル（ＦＶＭ）を室温に解凍し、これを用いて５０ｍｌの種子培地２当たり１．０ｍｌで種子培養を接種した。これらを、２５℃、８５％ｒｈにて旋回震盪機（２２０ｒｐｍ）で７日間増殖させた。
３．生産：固体生産培地にて：該種子のアリコート（１０−１２ｍｌ）を固体生産培地２の２２０ｍｌに入れた。このフラスコを激しく渦巻かせて、バイオマスを分散させた。大粒子のバーミキュライト６７５ｃｍ^３を含有する２Ｌローラー培養に注ぐことによって、内容物を分注した。ローラーボトルの内容物を震盪／混合して、均一な接種および被覆を確実とした。２２℃、７０％ｒｈにてＷｈｅａｔｏｎローラー装置上でほぼ４ｒｐｍで２１日間回転させて、ローラーボトルを水平にてインキュベートして、発酵培地中に二次代謝産物を得た。

液体生産培地種子培養を前記したごとくに接種した。該種子のアリコート（１．５ｍｌ）を使用して、５０ｍｌ／２５０ｍｌフラスコの液体生産培地２を含有する各生産フラスコを接種した。２５℃、５０−８５％ｒｈにて、フラスコを旋回震盪機（２２０ｒｐｍ）で７−２１日間インキュベートした。

ＭＦ６２３２（ＡＴＣＣ７４３８７）の大規模生産
固体生産培地１の液体部分を、種子および生産発酵槽双方用に使用した。種子発酵槽培地中の後滅菌したセレロースは３０ｇ／Ｌであり、他方、生産発酵槽培地のそれは１５０ｇ／Ｌであった。種子発酵槽を、震盪フラスコ中で増殖させた２Ｌの培養で接種した。これらの発酵槽を、酸素接種率が約３ミリモル／Ｌ−時間となるまで２５℃で３０時間増殖させた。３０時間において、２５Ｌの発酵槽種子培養を生産発酵槽に移した。

５０時間後、生産発酵槽における増殖は８−１０ミリモル／Ｌ−時間に達し、培養の最後まで５−７の間傾斜させた。溶解した酸素は、撹拌を増加させることによって制御した。ブロスｐＨは制御せず、２００時間において一般的に５．３まで低下した。温度は２５℃であった。

発酵槽の増殖の２８０時間後、発酵を停止し、収穫の調製を開始した。水酸化ナトリウムでｐＨを約１２に調整し、発酵温度にてバツチを２０時間熟成させた。次いで、さらなる処理のためにドラムに移すに先立ってｐＨを硫酸で６．０に調整した。

ソルダリンの単離
単離Ｉ
全ブロス６４ｍＬに対応する培養ＭＦ６２３２（ＡＴＣＣ７４３８７）の発酵のメチルエチルケトン抽出物を真空中で濃縮乾固した（３６５ｍｇ）。この物質を９８部の塩化メチレン中の２部メタノールに溶解させて４．６ｍｌの最終容量とした。４．３ｍｌの部分（３４１ｍｇ）を、塩化メチレン中の２パーセントメタノールで平衡化させた６０ｍｌシリカゲル６０（０．０４０−０．０６３０ｍｍ、２３０−４００メッシュ、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ）フラッシュクロマトグラフィーカラムに適用した。塩化メチレン中２、５、１０および３０パーセントメタノールの各２４０ｍｌ、続いて１２０ｍｌのメタノールの段階勾配によって該カラムを溶出させた。１６の１５ｍｌ画分を各溶媒系から収集した。生成物富裕の画分３９−５６を生物学的アッセイによって決定した。

粗製画分プールを真空中で濃縮乾固した（１０３．１ｇ）。この試料の３４．４ｍｇ部分を、さらに、ＨＰＬＣ分離（ＺｏｒｂａｘＲｘ−Ｃ８、５μｍ、９．４ｍｍ×２５０ｍｍ、濃Ｈ_３ＰＯ_４でｐＨ６．９に調整した２０％アセトニトリル／８０％水性０．０１ＭＫ_２ＨＰＯ_４よりなる移動相で溶出、流速４ｍｌ／分、４０℃、ダイオードアレイ検出）によって精製した。４ミリリットルずつの画分を収集した。生成物富裕の画分１６−２０をプールし、元の容量のほぼ２５パーセントまで真空中で濃縮した。濃縮物を、等容量の酢酸エチルで二重抽出し、酢酸エチル層を等容量のブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、真空中で濃縮した３．７ｍｇのソルダリンを得た。

単離ＩＩ
全ブロス９８０ｍＬに対応する培養ＭＦ６２３２（ＡＴＣＣ７４３８７）のバッチ−００４Ｙ発酵のメチルエチルケトン抽出物を真空中で濃縮乾固した（４．９ｇ）。この物質を９部の塩化メチレン中１部メタノールに溶解させて、２１．５ｍｌの最終容量とした。２１ｍｌの部分（４．８ｇ）を、塩化メチレン中の２パーセントメタノールで平衡化させた５００ミリリットルシリカゲル６０（０．０４０−０．０６３０ｍｍ、２３０−４００メッシュ、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ）フラッシュクロマトグラフィーに適用した。塩化メチレン中２および５パーセントメタノールの各１リットルで開始し、続いて塩化メチレン中１５パーセントメタノールの２リットル１２０ｍｌのメタノールの段階勾配によって、該カラムを液速度２５ｍｌ／分で溶出させた。カラム溶出は３０および１００パーセントメタノールの各１リットルで完了した。２５ミリリットルずつの画分を収集した。生成物富裕の画分７５−８５および１１１−１２１を生物学的アッセイによって決定し、酸性条件下でＲＰＨＰＬＣ分析によると化合物Ｉを含有した。

粗製画分プール７５−８５および１１１−１２１を真空中で別々に濃縮乾固した（各々、６９．３ｍｇおよび９５．３ｍｇ）。プール７５−８５の２つの３４ｍｇ部分を、さらに、２つの同一ＨＰＬＣ分離（ＺｏｒｂａｘＲｘ−Ｃ８、７μｍ、２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ、４０％アセトニトリル／６０％Ｈ_２Ｏ（０．１％Ｈ_３ＰＯ_４含有）、全液速２０ｍｌ／分、２５℃、２２０ｎｍ）によって精製した。１０ミリリットルずつの画分を収集した。両泳動からの生成物富裕の画分２７−３１を一緒にプールし、真空中で濃縮して元の容量のほぼ４０％とした。濃縮物を等容量の酢酸エチルで抽出し、等容量のブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、真空中で濃縮して２７ｍｇのソルダリンを得た。また、プール１１１−１２１の部分４６ｍｇを、さらに、前記の同一ＨＰＬＣ条件下で精製した。両泳動からの画分２５−２８を合わせ、前記したごとく調製してさらに１７ｍｇのソルダリンを得た。

ソルダリンの生物学的評価
１．小麦についてのＥｒｙｓｉｐｈｅｇｒａｍｉｎｉｓに対する作用
ａ）培養１週間後、小麦植物にスプレイ混合物（２００ｐｐｍ有効成分／２０％アセトン／０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ１５５）をスプレイする。２時間後、処理した植物を接種物植物から震盪した子嚢胞子で感染させる。２２℃、５０％相対湿度における８日間のインキュベーションの後、真菌攻撃を評価して、当該化合物によって与えられた保護を測定する。
ｂ）培養１週間後、小麦植物を接種物植物からの震盪した子嚢胞子で感染させる。２４時間後、小麦植物にスプレイ混合物（２００ｐｐｍ有効成分／２０％アセトン／０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ１５５）をスプレイする。２２℃、５０％相対湿度における８日間のインキュベーションの後、真菌攻撃を評価して、当該化合物によって与えられた治療活性の程度を測定する。
ｃ）培養１週間後、小麦植物を接種物植物からの震盪した子嚢胞子で感染させる。２４時間後、小麦植物が成長している土壌にドレンチ混合物（２００ｐｐｍ有効成分／２０％アセトン／０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ１５５）を十分にかける。２２℃、５０％相対湿度における８日間のインキュベーションの後、真菌攻撃を評価して当該化合物によって供された治療活性の程度を測定する。

ソルダリンを含有する混合物で処理してある小麦植物は、全ての３つのテストで、２００ｐｐｍにおいて真菌感染の１００％制御を呈した。すなわち、それは小麦についてのＥｒｙｓｉｐｈｅｇｒａｍｉｎｉｓに対して強力な保護的、治療的および全身的活性を示す。

２．小麦についてのＰｕｃｃｉｎｉａｒｅｃｏｎｄｉｔａに対する作用
ａ）培養１週間後、小麦植物にスプレイ混合物（２００ｐｐｍ有効成分／２０％アセトン／０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ１５５）をスプレイする。２時間後、処理した植物を胞子で感染させる。２０℃における９５−１００％相対湿度での１時間、続いての２５℃、５０％相対湿度における７日間のインキュベーションの後、真菌攻撃を評価して当該化合物によって与えられた保護を測定する。
ｂ）培養１週間後、小麦植物を胞子懸濁液で感染させる。２４時間後、小麦植物にスプレイ混合物（２００ｐｐｍ有効成分／２０％アセトン／０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ１５５）をスプレイする。２０℃、９５−１００％相対湿度での１日間、続いての２５℃、５０％相対湿度における７日間のインキュベーションの後、真菌攻撃を評価して当該化合物によって供される治療活性の程度を測定する。
ｃ）培養１週間後、小麦植物を胞子懸濁液で感染させる。２４時間後、小麦植物が成長している土壌にドレンチ混合物（２００ｐｐｍ有効成分／２０％アセトン／０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ１５５）を十分にかける。２０℃、９５−１００％相対湿度での１日間、続いての２５℃、５０％相対湿度における７日間のインキュベーションの後、真菌攻撃を評価して当該化合物によって供された治療活性の程度を測定する。

ソルダリンを含有する混合物で処理してある小麦植物は、全ての３つのテストで、２００ｐｐｍにおいて真菌感染の１００％制御を呈した。すなわち、それは小麦についてのＰｕｃｃｉｎｉａｒｅｃｏｎｄｉｔａに対して強力な保護的、治療的および全身的活性を示す。

Claims

ソルダリン化合物および農業上許容される担体を含む農業用組成物であり、前記ソルダリン化合物がローセリニア・サビクラータ（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａ）ＡＴＣＣ７４３８６および真菌ＡＴＣＣ７４３８７よりなる群から選択される微生物の菌株により生産される前記組成物。
植物病原性真菌の制御方法であって、抗真菌有効量のソルダリン化合物を前記制御を必要とする植物に投与することを含み、前記ソルダリン化合物がローセリニア・サビクラータ（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａｓｕｂｉｃｕｌａｔａ）ＡＴＣＣ７４３８６および真菌ＡＴＣＣ７４３８７よりなる群から選択される微生物の菌株により生産され、前記植物病原性真菌がＥｒｙｓｉｐｈｅｇｒａｍｉｎｉｓ、Ｐｕｃｃｉｎｉａｒｅｃｏｎｄｉｔａ、Ｓｔａｇｎｏｓｐｏｒａｎｏｄｒｕｍ、Ｓｅｐｔｏｒｉａｔｒｉｔｉｃｉ、Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａｏｒｙｚａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ、ＰｌａｓｍｏｐａｒａｖｉｔｉｃｏｌａおよびＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒａよりなる群から選択される前記方法。