CN113229293A - 一种杀菌组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有极细链格孢激活蛋白和中生菌素的杀菌组合物及其应用，涉及农用化学品领域。所述杀菌组合物包含极细链格孢激活蛋白和中生菌素两种活性组分，极细链格孢激活蛋白和中生菌素之间的重量比为0.5～3.5：1。试验结果表明，本发明提供的上述杀菌组合物增效明显，施用量减少，使用成本降低。该杀菌组合物可将不同作用机制和作用方式的杀菌剂进行复配，有效降低各单剂的施用量，对于扩大杀菌谱和延缓细菌、真菌抗药性以及提高防治效果等方面具有很好的作用。

Description

一种杀菌组合物及其应用

技术领域

本发明涉及农用化学品领域，特别是涉及一种具有改进性能的杀菌组合物，具体涉及一种含有极细链格孢激活蛋白和中生菌素的杀菌组合物及其在防治谷类、蔬菜、果树细菌或真菌性病害中的应用。

背景技术

农药是指农业上用于防治病虫害及调节植物生长的化学药剂，广泛用于农林牧业生产、环境和家庭卫生除害防疫、工业品防霉与防蛀等，农药按原料来源可分为矿物源农药(无机农药)、生物源农药(天然有机物、微生物、抗生素等)及化学合成农药；按用途主要可分为杀虫剂、杀螨剂、杀鼠剂、杀线虫剂、杀软体动物剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂等。无机农药种类少，适用范围较窄，在土壤和生物体内残留问题严重；化学合成农药在杀死植物病原菌的同时，也会杀死环境中的有益微生物，进而导致植物病原菌的抗药性提高，同时诱发环境污染和农药残留等问题。此外，不科学用药和单一用药已经引发致病菌抗药性的不断增强和致病变种的不断增加。因此，在农业活动中坚持可持续发展，增强药效、延缓病害的抗药性风险是值得开展研究的重要课题。

白菜软腐病，又叫腐烂病、烂疙瘩、烂葫芦头病、水烂病、脱帮子，是白菜生产中一种毁灭性病害，如果发生，可成片绝收，主要危害叶片、柔嫩多汁组织及茎或根部。最初发病于接触地面的叶柄和根尖部，叶柄发病部位呈水渍状，外叶失去水分而萎蔫，最后整个植株枯死。生长后期发病时，首先出现水渍状小斑点，叶片半透明，呈油纸状，最后整株软化、腐烂，散发出特殊的恶臭。该病在贮藏期间可继续扩展危害，造成烂窖。有时，在运输途中亦会发生软化腐烂现象。

玉米青枯病，在中国主要为镰刀菌和腐霉菌中一种或两种侵染所引起玉米病害。该病在玉米灌浆期开始显症，乳熟后期至蜡熟期为显症高峰。症状表现为突然青枯萎蔫，整株叶片呈水烫状干枯褪色；果穗下垂，苞叶枯死；茎基部初为水浸状，后逐渐变为淡褐色，手捏有空心感，常导致倒伏。镰刀菌以分生孢子或菌丝体，腐霉菌以卵孢子在病残体内外及土壤内存活越冬，带病种子是翌年的主要侵染源。病菌借风雨、灌溉、机械、昆虫携带传播，通过根部或根茎部的伤口侵入或直接侵入玉米根系或植株近地表组织并进入茎节。

极细链格孢激活蛋白是经极细链格孢菌发酵、提取的一种具有生物活性的、单一的、稳定的蛋白质，化学名称：207肽蛋白质，分子式：C₉₆₃H₁₅₆₄O₃₄₂N₂₈，该蛋白质是由207个氨基酸组成，其理论分子量为22590；易溶于水；在pH4-10范围内稳定，遇强碱和强氧化剂易分解；耐高温，100℃沸水中煮30分钟仍然稳定，自然光照下2天对效果不产生影响，常温贮存2年稳定。当极细链格孢激活蛋白接触到植物器官表面后，可以与植物细胞膜上的受体蛋白结合，引起植物体内一系列相关酶活性增加和基因表达量的增强，激发植物体内的一系列代谢调控，促进植物根茎叶生长、提高叶绿素含量，提高作物产量，在农作物抗病防逆中发挥重要作用。然而，极细链格孢激活蛋白极易脱离植株，在应用过程中至少需要3至4次的反复施用来达到一定的抗病效果。

中生菌素是国内农科院生防所研制成功的一种新型农用抗生素，是由淡紫灰链霉菌海南变种产生的，属N-糖苷类碱性水溶性物质。该菌的加工剂型是一种杀菌谱较广的保护性杀菌剂，具有杀菌谱广、低毒、无污染等多种特点。其作用原理是：对细菌是抑制菌体蛋白质的合成，导致菌体死亡；对真菌是使丝状菌丝变形，抑制孢子萌发并能直接杀死孢子。最大的特色是使用安全，可在苹果花期使用。在应用过程中，遇雨需要及时补喷，且需要3至4次的反复施用来达到抗病效果。

公告号为CN107232217B的专利公开了一种唑醚磺胺酯、中生菌素的杀菌剂组合物，用于防治姜瘟病、水稻细菌性条斑病、水稻白叶枯病等细菌性病害，同时也可用于防治小麦赤霉病、玉米丝黑穗病、黄瓜霜霉病等真菌性病害。

公告号为CN102405938B的专利公开了一种极细链格孢激活蛋白-井冈霉素可湿性粉剂及应用，该生物农药降低了水稻或烟草病害的发生程度，特别是解决了水稻条纹叶枯病和烟草花叶病毒病在当时无药可冶的技术问题，使用时没有残留，环保，对作物、环境都很安全，且生产成本低，适宜广泛推广。

发明内容

发明目的：

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于针对农药在实际应用中致病菌抗药性以及土壤残留问题，筛选出不同杀菌原理的杀菌剂进行复配，得到一种新的杀菌组合物，提高杀菌剂防治效果，延缓致病菌抗药性的产生，进而减少施用次数，降低防治成本。

本发明的另一个目的是提供包含两种有效成分极细链格孢激活蛋白和中生菌素的杀菌组合物在农业领域防治谷类、蔬菜、果树细菌或真菌性病害方面的应用，特别是在防治白菜软腐病、玉米青枯病中的应用。

本发明的技术方案：

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种含有极细链格孢激活蛋白和中生菌素的杀菌组合物，两组分之间的重量比为0.5～3.5∶1。

通过试验发现，本发明的杀菌组合物用于防治农作物细菌或真菌性病害，特别是用于防治白菜软腐病、玉米青枯病，防治增效明显，进而减少施用量，降低成本。活性成分极细链格孢激活蛋白与活性成分中生菌素的化合物结构类型不同，作用机制各异，两者复配能够扩大杀菌谱，并且可以在一定程度上延缓致病菌抗药性的产生和发展速度，且活性组分极细链格孢激活蛋白与活性组分中生菌素之间无交互抗性。

在一种优选方案中，两种活性组分极细链格孢激活蛋白和中生菌素的重量比为2∶1。

本发明的杀菌组合物由占总重量1～30％的活性组分、5～10％的微生物菌剂和60～94％的农药助剂和/或辅料制成农药上允许的剂型。

本发明的杀菌组合物中，还含有微生物菌剂用来提高使用效果。通常可以将本发明的活性组分与微生物菌剂加工成某种特定剂型如水剂或颗粒剂等液体或固体剂型进行施用，也可以将本发明的活性组分制成剂型后，在施用时与微生物菌剂共同施用。合适的微生物菌剂包括东洋芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌中至少一种微生物菌种，且微生物菌剂的有效活菌数总量大于5亿/克。

在一种优选方案中，微生物菌剂优选为东洋芽孢杆菌，有效活菌数总量为20亿/克。

本发明提供了包含组分极细链格孢激活蛋白与组分中生菌素的杀菌组合物在农业领域防治谷类、蔬菜、果树细菌或真菌性病害方面的用途，特别是在防治白菜软腐病、玉米青枯病方面的用途。

本发明杀菌组合物在作为农药使用时，具体可包含农药助剂或辅料，例如溶剂、载体、分散剂、润湿剂、胶粘剂、粘合剂、表面活性剂或肥料等中的一种或几种。在施用的过程中可以混合常用的助剂。

合适的助剂或辅料可以是固体或液体，它们通常是剂型加工过程中常用的物质，例如天然的或再生的矿物质，溶剂、分散剂、润湿剂、胶粘剂、增稠剂、粘合剂。

本发明杀菌组合物可以仅包含活性成分进行施用，也可以与农药助剂或辅料混合使用。

本发明杀菌组合物的施用方法包括将本发明的组合物用于植物生长的地上部分，特别是叶部或叶面。可以选择浸种或涂抹于防治对象表面。施用的频率和施用量取决于病原体的生物学和气候生存条件。可以将植物的生长场所，如稻田，用组合物的液体制剂浸湿，或者将组合物以固体形式施用于土壤中，如以颗粒形式(土壤施用)，组合物可以由土壤经植物根部进入植物体内(内吸作用)。

可以用已知的方法将本发明的杀菌组合物制备成农药上可接受的各种剂型，也可以将活性组分与助剂，需要时可以与表面活性剂一起均匀混合、研磨，制备成所需要的剂型，包括但不限于乳油、悬浮剂、可湿性粉剂、水分散粒剂、粉剂、粒剂、水剂、水乳剂、微乳剂、毒饵、母液、母粉等。在一种优选方案中，本发明的剂型采用水剂、悬浮剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。根据这些组合物的性质以及施用组合物所要达到的目的和环境情况，可以选择将组合物以喷雾、弥雾、喷粉、撒播或泼浇等之类的方法施用。

上述的溶剂可选自酞酸酯类，如酞酸二丁酯或酞酸二辛酸，脂肪烃类，如环己烷或石蜡，烃类衍生物，如二氯甲烷，氯仿，醇和乙二醇和它们的醚和酯，如乙醇，乙二醇，乙二醇单甲基，乙二醇单丁醚，乙酸乙酯，酮类，如环己酮，丙酮，强极性的溶剂，如N-甲基-2-吡咯烷酮，二甲基甲酰胺，和植物油，如大豆油、蓖麻油、菜籽油、棕榈油；矿物油；芳香烃，如纯苯，二甲苯混合物或取代的苯，重质笨，董芳烃。

上述的固体载体，如用于粉剂和可分散剂的通常是天然矿物填料，例如高岭土、陶土、硅藻土、滑石、蒙脱石或活性白土。可以在固体载体中加入高分散性硅酸或高分散性吸附聚合物载体用来调节组合物的物理性能，例如粒状吸附载体或非吸附载体，合适的粒状吸附载体是多孔型的，如浮石、皂土或膨润土；合适的非吸附载体如方解石或砂。另外，可以使用大量的无机性质或有机性质的预制成粒状的材料作为载体，特别是白云石。

根据本发明的杀菌组合物中的有效成分的化学性质，合适的表面活性剂为木质素磺酸盐、萘磺酸、苯酚磺酸、胺盐，烷基芳基磺酸盐，烷基硫酸盐，烷基磺酸盐，脂肪醇硫酸盐，脂肪酸和硫酸化脂肪醇乙二醇醚，还有磺化萘和萘衍生物与甲醛的缩合物，萘或萘磺酸与苯酚和甲醛的缩合物，聚氧乙烯辛基苯基醚，乙氧基化异辛基酚，辛基酚，烷基芳基聚乙二醇醚，三丁基苯聚乙二醇醚，三硬脂基苯基聚乙二醇醚，烷基芳基聚醚醇，聚氧乙烯烷基醚，氧化乙烯缩合物，乙氧基化聚氧丙烯，月桂酸聚乙二醇醚缩醛，EO-PO嵌段化合物，山梨醇酯和甲基纤维素。

在制备液体剂型时，可以先将活性组分极细链格孢激活蛋白溶于碱性物质，形成极细链格孢激活蛋白金属盐，合适的碱性物质包括：碱金属碳酸盐、碱金属氢氧化物(如氢氧化钠、氢氧化钾)、碱金属烷氧基碳酸盐、碱金属醇盐或甲醇镁。

本发明的杀菌组合物中两种有效成分具有较显著的增效效果，该组合物的活性比使用单个组分的单独活性，以及组合物的预期活性更为显著。增效效果表现为见效快、允许施用量减少、杀菌控制谱更宽、更持久的防治效果、通过仅仅一次或少数几次施用更好的控制植物有害真菌、以及加宽了可能的施用间隔时间。这些特性是植物细菌、真菌控制实践过程中特别需要的。

本发明的杀菌剂组合物可应用于农业领域防治谷类、蔬菜、果树细菌或真菌性病害方面，特别是白菜软腐病和玉米青枯病。但是本发明的杀菌组合物还能防治的具体病症包括但不限于高粱病(高粱黑穗病、炭疽病、高粱细菌性斑点病)、小麦病害(如：小麦赤霉病、小麦白粉病、小麦锈病等)、玉米病害(如：玉米枯萎病、玉米大斑病、小斑病等)水稻病害(如：水稻纹枯病、水稻稻曲病、水稻细菌性条斑等)、黄瓜病害(如：黄瓜白粉病、黄瓜炭疽病、黄瓜灰霉病、黄瓜细菌性角斑病等)、番茄病害(如：番茄白粉病、番茄炭疽病、番茄病毒病、番茄细菌性角斑病等)、葡萄病害(如：葡萄霜霉病、葡萄灰霉病)、苹果病害(如：苹果轮纹病、苹果炭疽病等)等。

有益效果：

经试验证明，本发明杀菌组合物化学性质稳定，增效显著，对防治对象表现出明显的增效作用，并且由于本发明的杀菌组合物的两个单剂化学结构差异很大，作用机理完全不同，不存在交互抗性、可延缓两单剂单独使用所产生的抗性问题。本发明提供的杀菌组合物在防治谷类、蔬菜、果树细菌或真菌性病害方面，特别是防治白菜软腐病、玉米青枯病，具有良好的应用前景。

具体实施方式

以下将结合具体实施方案来说明本发明。需要说明的是，下面的实施例为本发明的示例，仅用来说明本发明，而不用来限制本发明。在不偏离本发明主旨或范围的情况下，可进行本发明构思内的其他组合和各种改良。

以下实施例所有配方中百分比均为重量百分比。本发明杀菌组合物各种制剂的加工工艺均为现有技术，如果没有其他说明，实施例及对比例所用原料均为市售。

一、生物测定

1.极细链格孢激活蛋白与中生菌素复配对玉米青枯病毒力测定试验

实施例1

试验药剂：36％极细链格孢激活蛋白母药，10％中生菌素母药。

试验方法：

在河北省石家庄元氏县选择有典型玉米青枯病的叶片，对病斑的形状、大小、颜色进行观察测量。在实验室内对采集的病采集病叶用组织分离法对病原菌进行分离，再选择纯化之后的菌落，挑取病菌菌丝对分生孢子梗以及分生孢子观察其形态特征。

以菌丝生长速率法测定其对玉米青枯病的毒力大小。将供试的2种药剂使用无菌水配制成所需浓度，吸取1mL于9mL PDA培养基(温度冷却至50℃左右)中，充分摇匀后倒入培养皿(φ＝90mm)，制成不同浓度梯度的含药平板，以未添加杀菌剂的PDA平板做对照，每个浓度设置4次重复。取出预先培养的玉米青枯病的致病菌镰刀菌平板，在无菌条件下用直径为5mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，接种于含药培养基上，每皿接种1块，倒置培养于25℃的人工培养箱。5天后取出以十字交叉法测定菌落直径，对各配比的4个重复取平均值，利用公式计算其抑菌率。将防治效果换算成几率值(y)，药液浓度(μg/ml)转换成对数值(x)，以最小二乘法计算毒力方程和抑制中浓度EC₅₀，根据孙云沛法计算共毒系数(CTC)，并以此作出综合评价。CTC≤80，组合物表现为拮抗作用，80＜CTC＜120，组合物表现为相加作用，CTC≥120，组合物表现为增效作用。相关公式如下：

实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂EC₅₀/供试药剂EC₅₀)*100

理论毒力指数(TTI)＝A药剂毒力指数*混剂中A的百分含量+B药剂毒力指数*混剂中B的百分含量

其中，A药剂：极细链格孢激活蛋白，B药剂：中生菌素。

共毒系数(CTC)＝[混剂实测毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]*100

试验结果：

表1.极细链格孢激活蛋白与中生菌素复配对玉米青枯病毒力测定结果分析

由表1可以看出，本发明杀菌组合物中极细链格孢激活蛋白与中生菌素在0.5～3.5∶1区间范围内，对玉米青枯病的防治具有显著的增效作用。

二、田间药效验证试验

(一)水剂的加工

实施例2. 30％极细链格孢激活蛋白·中生菌素水剂(0.5∶1)

极细链格孢激活蛋白10％，中生菌素20％，东洋芽孢杆菌8％(20亿孢子/克)，烷基多糖苷6％，乙二醇4％，去离子水补足至100％。

实施例3. 30％极细链格孢激活蛋白·中生菌素水剂(1∶1)

极细链格孢激活蛋白15％，中生菌素15％，东洋芽孢杆菌8％(20亿孢子/克)，聚丙烯酸酯4％，异丙二醇1.5％，菜籽油11％，去离子水补足至100％。

实施例4. 30％极细链格孢激活蛋白·中生菌素悬浮剂(1.5∶1)

极细链格孢激活蛋白19.2％，中生菌素12.8％，东洋芽孢杆菌8％(20亿孢子/克)，酞酸二丁酯7％，丙二醇5％，萘磺酸4％，有机硅2％，水补足至100％。

对比例1： 30％极细链格孢激活蛋白水剂

本对比例与实施例4的区别在于活性成分中只含有极细链格孢激活蛋白30％，其他农药助剂或辅料一致。

对比例2： 30％中生菌素水剂

本对比例与实施例4的区别在于活性成分中只含有中生菌素30％，其他农药助剂或辅料一致。

制备方法：将活性成分极细链格孢激活蛋白和中生菌素与各种助剂或辅料等按比例充分混合，与水溶解后制得水剂。

(二)悬浮剂的加工

实施例5. 30％极细链格孢激活蛋白·中生菌素悬浮剂(2∶1)

极细链格孢激活蛋白20％，中生菌素10％，东洋芽孢杆菌8％(20亿孢子/克)，白炭黑2％，脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸酯5％，异丙二醇1％，水补足至100％。

实施例6. 30％极细链格孢激活蛋白·中生菌素悬浮剂(2.5∶1)

极细链格孢激活蛋白21.4％，中生菌素8.6％，东洋芽孢杆菌8％(20亿孢子/克)，甲基萘磺酸钠苯酚缩合物2％，木质素磺酸钠4％，丙三醇5％，膨润土3％，水补足至100％。

对比例3： 30％极细链格孢激活蛋白悬浮剂

本对比例与实施例6的区别在于活性成分中只含有极细链格孢激活蛋白30％，其他农药助剂或辅料一致。

对比例4： 30％中生菌素悬浮剂

本对比例与实施例6的区别在于活性成分中只含有中生菌素30％，其他农药助剂或辅料一致。

制备方法：将活性组分极细链格孢激活蛋白与活性组分中生菌素，与分散剂、润湿剂、增稠剂和水等各组分按配方的比例混合均匀，经砂磨和或高速剪切后，得到半成品，分析后补加水混合均匀过滤即得成品。

(三)水分散粒剂的加工

实施例7. 30％极细链格孢激活蛋白·中生菌素水分散粒剂(3∶1)

极细链格孢激活蛋白22.5％，中生菌素7.5％，东洋芽孢杆菌8％(20亿孢子/克)，十二烷基磺酸钠3％，甲基萘磺酸钠苯酚缩合物3％，硫酸铵5％，硅藻土补足至100％。

实施例8. 30％极细链格孢激活蛋白·中生菌素水分散粒剂(3.5∶1)

极细链格孢激活蛋白23.3％，中生菌素6.7％，东洋芽孢杆菌8％(20亿孢子/克)，十二烷基硫酸钠3％，木质素磺酸钠5％，甲基萘磺酸钠甲醛缩合物2％，硅藻土补足至100％。

对比例5： 30％极细链格孢激活蛋白水分散粒剂

本对比例与实施例8的区别在于活性成分中只含有极细链格孢激活蛋白30％，其他农药助剂或辅料一致。

对比例6： 30％中生菌素水分散粒剂

本对比例与实施例8的区别在于活性成分中只含有中生菌素30％，其他农药助剂或辅料一致。

制备方法：将活性分组极细链格孢激活蛋白与活性组分中生菌素，与助剂和填料按配方的比例混合均匀，经气流粉碎成可湿性粉剂，再加入一定量的水混合挤压造粒，经干燥筛分后制得水分散粒剂产品。

试验内容：防治白菜软腐病的药效试验

试验地点：河北省唐山市玉田县选择有典型白菜软腐病试验方法：

用药前调查白菜软腐病病情基数、总株数、病株数及病株基数，于发病初期施药，每七天施药一次，共施药3次，末次施药后7天、14天分别调查病情指数并计算防治效果。相关公式如下：

病情指数＝{[∑(各级叶片发病数*该级代表值)]/(调查总叶片数*最高级代表值)}*100％

防治效果(％)＝{(空白对照区病情指数-药剂处理区病情指数)/空白对照区病情指数}*100％

试验结果如下：

表2.极细链格孢激活蛋白与中生菌素复配对白菜软腐病防治效果

测定结果(表2)表明，本发明所述含有极细链格孢激活蛋白和中生菌素的杀菌组合物，极细链格孢激活蛋白和中生菌素的重量比为0.5～3.5∶1范围内，特别是2∶1时，对玉白菜软腐病防效明显提高，通过极细链格孢激活蛋白和中生菌素的复配，能够有效防治玉白菜软腐病，防治效果优于对比药剂，持效期长。在试验范围内对标靶作物无不良影响，防效均在85％以上。

综上所述，本发明一种含有极细链格孢激活蛋白和中生菌素的杀菌组合物的复配作用明显，组合物制成的药剂药效明显高于单剂，而且对植株的病害防治效果均超过85％，而且药剂的见效快、用量少、持续时间长、杀菌控制谱更宽，农药残留量更低，其不仅节约了成本，还对环境更加友好，所以本发明的研发与推广具有重要意义。

以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种杀菌组合物，其特征在于，包含极细链格孢激活蛋白和中生菌素两种活性组分，所述极细链格孢激活蛋白和所述中生菌素的重量比为0.5～3.5：1。

2.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，所述极细链格孢激活蛋白和所述中生菌素的重量比为2：1。

3.根据权利要求1或2所述的杀菌组合物，其特征在于，还含有微生物菌剂。

4.根据权利要求3所述的杀菌组合物，其特征在于，所述微生物菌剂选自东洋芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌中的至少一种。

5.根据权利要求3所述的杀菌组合物，其特征在于，所述微生物菌剂的有效活菌数总量大于5亿/克。

6.根据权利要求3所述的杀菌组合物，其特征在于，还包含农药助剂和/或辅料。

7.根据权利要求6所述的杀菌组合物，其特征在于，由占所述杀菌组合物总重量1～30％的活性组分、5～10%的微生物菌剂和60～94％的农药助剂或辅料制成农药上允许的剂型。

8.根据权利要求7所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物的剂型为水剂、悬浮剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。

9.权利要求1～8中任意一项所述杀菌组合物在农业领域防治谷类、蔬菜、果树细菌或真菌性病害中的应用。

10.权利要求1～8中任意一项所述杀菌组合物在农业领域防治白菜软腐病、玉米青枯病中的应用。