JP2006045230A - T細胞エピトープペプチド - Google Patents
T細胞エピトープペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006045230A JP2006045230A JP2005222485A JP2005222485A JP2006045230A JP 2006045230 A JP2006045230 A JP 2006045230A JP 2005222485 A JP2005222485 A JP 2005222485A JP 2005222485 A JP2005222485 A JP 2005222485A JP 2006045230 A JP2006045230 A JP 2006045230A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- peptide
- cell
- cell epitope
- pollinosis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【解決手段】ヒノキ花粉症患者から樹立したT細胞ラインを、ヒノキ花粉アレルゲンの一次構造をカバーするオーバーラップペプチドで刺激することにより、ヒノキ花粉アレルゲン分子上のT細胞エピトープペプチドを同定した。
【選択図】なし
Description
ヒノキ花粉アレルゲンCha o 1(配列番号:1)及びCha o 2(配列番号:2)のアミノ酸配列に基づいて、それぞれ10残基のオーバーラップ部分を含む20残基のオーバーラップペプチド(#1-35(配列番号37)及び#2-51(配列番号:88)は14残基)を、ペプチド合成機PSSM-8(島津製作所)を用いて、Fmoc法で合成した。オーバーラップペプチドは、Cha o 1では35種類(図1/配列番号:3〜37)、Cha o 2では51種類であった(図5/配列番号:38〜88)。合成したペプチドは全てODSカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で精製し、純度は90%以上であった。精製物はLASERMAT 2000(Finnigan MAT Ltd.)でそれぞれの分子量を確認した。
ヒノキ花粉抗原をコードするCha o 1のcDNA又はCha o 2のcDNAがクローン化されているプラスミドDNA(特願平6-335089号)から、PCRによりcDNAを増幅し、末端に制限酵素の認識部位を付与した。このDNA断片をヒスチジンタグ結合タンパク発現ベクターpQE9に挿入し、大腸菌M15(pREP4)の形質転換を行った。アンピシリン耐性のクローンについて導入遺伝子の発現をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で確認した。発現タンパクはNi-NTAアガロース親和性カラムで精製した。
Cha o 1に関するT細胞ラインの樹立は次のようにして行った。即ち、19名のAla STAT(日本DPCコーポレーション)又はCAP-RAST(ファルマシア)ヒノキ陽性患者の末梢血由来リンパ球をフィコール−パック(Ficoll-Paque)比重遠心法を用いて分離した。このリンパ球(2×106個)を2mlの同一患者の血漿(10%)又はヒトAB型血清(20%、萬邦通商)添加RPMI1640培地(GIBCO社)に懸濁し、実施例2で得られた10〜30μg/mlの組換えCha o 1又は実施例1で得られたオーバーラップぺプチド混合物(0.01〜1μM)と共に24穴プレート上で3〜10日間培養した(37℃、CO2インキュベーター、TABAI社)。Cha o 1刺激を受けて活性化されたT細胞が顕微鏡下で確認できた時点で5U/mlのIL-2(ベーリンガーマンハイム社)を添加し、一晩培養した。翌日からは20U/mlのIL-2、10%又は20%ヒトAB型血清添加RPMI1640培地で毎日培地を交換しながら約10日間培養し、増殖したT細胞ラインの特異性を調べた後、一部を凍結保存した。また、Cha o 2に関するT細胞ラインの樹立は20名のヒノキ花粉症患者について同様の方法で行った。
抗原提示細胞としてEBウイルス(Epstein-Barr virus、EBV)をBリンパ球に感染させトランスフォーメーションを引き起こさせたリンパ芽球様細胞株(B細胞株)を樹立し使用した。即ち、まずEBV産生B-95-8細胞(マーモセット、ATCC CRL1612)を非働化ウシ胎児血清(FCS、GIBCO社製)20%添加RPMI1640培地で培養し、その培養上清を0.22μm滅菌用フィルターでろ過し、-80℃で凍結保存した。次にヒノキ花粉症患者のリンパ球(2×106個)にEBV液1mlを加え37℃で30分感染させた。EBV感染細胞を2回洗浄後、サイクロスポリン(サンド薬品)最終濃度200ng/ml添加20% FCS-RPMI1640培地で約20日間培養した。細胞塊が肉眼で観察できるようになった後は20% FCS-RPMI 1640培地でさらに約20日間培養し、その後使用するまで細胞を凍結保存した。
実施例4で樹立した培養B細胞株を50μg/mlのマイトマイシンC(サンド薬品)で30分処理するか、又はX線照射(50gray)した後、RPMI1640培地で4回洗浄した。このB細胞を96穴プレートに播種(10,000個/ウエル)した後、Cha o 1及びCha o 2に関して最終濃度10μg/mlの組換え体を加えた。(対照群としては最終濃度10μg/mlの溶連菌細胞壁抗原(SCW)、最終濃度10μg/mlのキャンディダ・アルビカンス(Candida Albicans)抗原(CA)、最終濃度1μg/mlのツベルクリン(Tuberculin)抗原(PPD)を加えた。)その後B細胞株を樹立した同一患者のT細胞ライン(20,000個/ウエル)を各ウエルに播種し48時間培養後0.5μCi[3H]チミジンをウエルに添加しさらに16時間培養した。細胞をセルハーべスター(ベルトールド)を用いてガラスフィルター上に捕集後、細胞内に取り込まれた[3H]チミジン量を液体シンチレーションカウンターにて測定し、細胞増殖応答を確認した。
Claims (10)
- ヒノキ花粉アレルゲンCha o 1の少なくとも一つのT細胞エピトープを含み、かつ、図4のペプチド番号#1-2(配列番号:4)、#1-4(配列番号:6)、#1-5(配列番号:7)、#1-6(配列番号:8)、#1-7(配列番号:9)、#1-8(配列番号:10)、#1-10(配列番号:12)、#1-11(配列番号:13)、#1-12(配列番号:14)、#1-14(配列番号:16)、#1-15(配列番号:17)、#1-16(配列番号:18)、#1-19(配列番号:21)、#1-20(配列番号:22)、#1-21(配列番号:23)、#1-22(配列番号:24)、#1-23(配列番号:25)、#1-24(配列番号:26)、#1-25(配列番号:27)、#1-26(配列番号:28)、#1-27(配列番号:29)、#1-30(配列番号:32)、#1-31(配列番号:33)、#1-32(配列番号:34)、#1-33(配列番号:35)及び#1-34(配列番号:36)で示されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列の一部を有するペプチド。
- ヒノキ花粉アレルゲンCha o 2の少なくとも一つのT細胞エピトープを含み、かつ、図8のペプチド番号#2-5(配列番号:42)、#2-7(配列番号:44)、#2-8(配列番号:45)、#2-9(配列番号:46)、#2-10(配列番号:47)、#2-11(配列番号:48)、#2-12(配列番号:49)、#2-13(配列番号:50)、#2-14(配列番号:51)、#2-15(配列番号:52)、#2-16(配列番号:53)、#2-17(配列番号:54)、#2-18(配列番号:55)、#2-19(配列番号:56)、#2-20(配列番号:57)、#2-21(配列番号:58)、#2-22(配列番号:59)、#2-23(配列番号:60)、#2-24(配列番号:61)、#2-25(配列番号:62)、#2-26(配列番号:63)、#2-27(配列番号:64)、#2-30(配列番号:67)、#2-31(配列番号:68)、#2-32(配列番号:69)、#2-33(配列番号:70)、#2-34(配列番号:71)、#2-35(配列番号:72)、#2-36(配列番号:73)、#2-37(配列番号:74)、#2-38(配列番号:75)、#2-40(配列番号:77)、#2-41(配列番号:78)、#2-42(配列番号:79)及び#2-43(配列番号:80)で示されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列の一部を有するペプチド。
- 少なくとも2つ以上のT細胞エピトープを含む、請求項1又は2記載のペプチド。
- 春期樹木花粉症患者由来のT細胞の活性を刺激及び/又は抑制する作用を有し、かつ、請求項1又は2記載のペプチドのアミノ酸配列が、置換、欠失または挿入されたアミノ酸配列を有するペプチド。
- 請求項1〜4に記載のペプチドを有効成分とする、春期樹木花粉症に対するペプチド免疫療法用組成物。
- 春期樹木花粉症に対するペプチド免疫療法用組成物の調製のための請求項1〜4に記載のペプチドの使用。
- 請求項1〜4に記載のペプチドを投与することを含む、春期樹木花粉症を治療又は予防する方法。
- 請求項1〜4に記載のペプチドを有効成分とする、春期樹木花粉症の診断に用いる試薬。
- 春期樹木花粉症の診断に用いる試薬の調製のための請求項1〜4に記載のペプチドの使用。
- 請求項1〜4に記載のペプチドを投与することを含む、春期樹木花粉症を診断する方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005222485A JP4176750B2 (ja) | 1996-06-14 | 2005-08-01 | T細胞エピトープペプチド |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15352796 | 1996-06-14 | ||
JP2005222485A JP4176750B2 (ja) | 1996-06-14 | 2005-08-01 | T細胞エピトープペプチド |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50144798A Division JP3734040B2 (ja) | 1996-06-14 | 1997-06-12 | T細胞エピトープペプチド |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008032516A Division JP4176821B2 (ja) | 1996-06-14 | 2008-02-14 | T細胞エピトープペプチド |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006045230A true JP2006045230A (ja) | 2006-02-16 |
JP4176750B2 JP4176750B2 (ja) | 2008-11-05 |
Family
ID=36024214
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005222485A Expired - Fee Related JP4176750B2 (ja) | 1996-06-14 | 2005-08-01 | T細胞エピトープペプチド |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4176750B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008035790A (ja) * | 2006-08-07 | 2008-02-21 | Hiroshima Univ | 新規ダニアレルゲンおよびその利用 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06508994A (ja) * | 1991-07-12 | 1994-10-13 | イミユロジク・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン | 日本杉花粉からのアレルゲン性蛋白質及びペプチド |
JPH07503362A (ja) * | 1991-10-16 | 1995-04-13 | イミュロジク ファーマスーティカル コーポレイション | レコンビトープペプチド |
JPH07118295A (ja) * | 1993-10-20 | 1995-05-09 | Meiji Milk Prod Co Ltd | スギ花粉アレルゲンのt細胞エピトープペプチド及びそのアナログペプチド |
WO1995027786A1 (en) * | 1994-04-08 | 1995-10-19 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Pharmaceutical formulations for treating japanese cedar pollen allergy |
JPH0847392A (ja) * | 1993-11-05 | 1996-02-20 | Meiji Milk Prod Co Ltd | スギ花粉アレルゲンCry j IIエピトープ |
JPH08502163A (ja) * | 1992-09-01 | 1996-03-12 | イミュロジック ファーマスーティカル コーポレイション | 杉花粉由来のアレルゲン性蛋白質及びペプチド |
JPH08127591A (ja) * | 1994-09-10 | 1996-05-21 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ペプチドとその用途 |
JPH08505284A (ja) * | 1992-11-12 | 1996-06-11 | イミュロジック ファーマスーティカル コーポレイション | 杉花粉由来のアレルゲン性蛋白質及びペプチド |
JPH08176192A (ja) * | 1994-12-21 | 1996-07-09 | Meiji Milk Prod Co Ltd | ヒノキ花粉アレルゲン |
-
2005
- 2005-08-01 JP JP2005222485A patent/JP4176750B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06508994A (ja) * | 1991-07-12 | 1994-10-13 | イミユロジク・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン | 日本杉花粉からのアレルゲン性蛋白質及びペプチド |
JPH07503362A (ja) * | 1991-10-16 | 1995-04-13 | イミュロジク ファーマスーティカル コーポレイション | レコンビトープペプチド |
JPH08502163A (ja) * | 1992-09-01 | 1996-03-12 | イミュロジック ファーマスーティカル コーポレイション | 杉花粉由来のアレルゲン性蛋白質及びペプチド |
JPH08505284A (ja) * | 1992-11-12 | 1996-06-11 | イミュロジック ファーマスーティカル コーポレイション | 杉花粉由来のアレルゲン性蛋白質及びペプチド |
JPH07118295A (ja) * | 1993-10-20 | 1995-05-09 | Meiji Milk Prod Co Ltd | スギ花粉アレルゲンのt細胞エピトープペプチド及びそのアナログペプチド |
JPH0847392A (ja) * | 1993-11-05 | 1996-02-20 | Meiji Milk Prod Co Ltd | スギ花粉アレルゲンCry j IIエピトープ |
WO1995027786A1 (en) * | 1994-04-08 | 1995-10-19 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Pharmaceutical formulations for treating japanese cedar pollen allergy |
JPH08127591A (ja) * | 1994-09-10 | 1996-05-21 | Hayashibara Biochem Lab Inc | ペプチドとその用途 |
JPH08176192A (ja) * | 1994-12-21 | 1996-07-09 | Meiji Milk Prod Co Ltd | ヒノキ花粉アレルゲン |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MOLECULAR IMMUNOLOGY, vol. 33 (4/5), JPN4000411133, March 1996 (1996-03-01), US, pages 451 - 60, ISSN: 0000808907 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008035790A (ja) * | 2006-08-07 | 2008-02-21 | Hiroshima Univ | 新規ダニアレルゲンおよびその利用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4176750B2 (ja) | 2008-11-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4176821B2 (ja) | T細胞エピトープペプチド | |
US8343500B2 (en) | Peptide composition | |
KR101519840B1 (ko) | Fⅷ 펩타이드 및 혈우병 환자 내성화시 그의 용도 | |
O'HEHIR et al. | House dust mite allergy: from T‐cell epitopes to immuno‐therapy | |
Rogers et al. | Recombinant Fel d I: Expression, purification, IgE binding and reaction with cat-allergic human T cells | |
Bohle et al. | Characterization of T cell responses to Hev b 3, an allergen associated with latex allergy in spina bifida patients | |
US5710126A (en) | T cell epitopes of ryegrass pollen allergen | |
Wu et al. | Major T cell epitope‐containing peptides can elicit strong antibody responses | |
PL196830B1 (pl) | Modyfikowane alergeny rekombinacyjne pyłku Graminae, sposób ich otrzymywania, zawierające je preparaty farmaceutyczne i sposób ich otrzymywania oraz ich zastosowanie do immunospecyficznej terapii alergii i wytwarzania leków do immunospecyficznej terapii alergii | |
NZ252013A (en) | T cell receptor epitopes for short ragweed pollen | |
KR102165486B1 (ko) | 펩타이드 | |
EP0714440A1 (en) | T cell epitopes of ryegrass pollen allergen | |
JP4218987B2 (ja) | ペプチド免疫療法治療剤 | |
JP3649460B2 (ja) | スギ花粉アレルゲンCry j IIエピトープ | |
KR101673889B1 (ko) | Fⅷ-유래 펩타이드 | |
JP3868480B2 (ja) | ライグラス花粉アレルゲンのt細胞エピトープ | |
JP5149002B2 (ja) | 低下したアレルギー誘発性および維持されたt細胞反応性を有するイネ科からのi型のアレルゲンの変異体 | |
JP4176750B2 (ja) | T細胞エピトープペプチド | |
CA2362928A1 (en) | Vaccine for house dust mite allergen using naked plasmid dna | |
US7112333B1 (en) | T cell epitopes of ryegrass pollen allergen | |
KR100562821B1 (ko) | T세포에피토프펩티드 | |
JP4176820B2 (ja) | スギ花粉アレルゲンCryjIIエピトープ | |
JP4085092B2 (ja) | アレルギー疾患に対するペプチド免疫療法剤 | |
JP2005336204A (ja) | アレルギー疾患に対するペプチド免疫療法剤 | |
WO2006059131A1 (en) | T-cell modulation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070309 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20071219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080214 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20080818 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20080820 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110829 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110829 Year of fee payment: 3 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110829 Year of fee payment: 3 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110829 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120829 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120829 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130829 Year of fee payment: 5 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |