JP2005532788A - 血管新生の制御に関与する遺伝子、それらを含有する医薬組成物およびそれらの用途 - Google Patents

血管新生の制御に関与する遺伝子、それらを含有する医薬組成物およびそれらの用途 Download PDF

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Abstract

本発明は、血管新生機構に関与することが明らかになった遺伝子のヌクレオチド配列、それらの相補配列、アンチセンス配列、該遺伝子のコード部分によってコードされたポリペプチド配列ならびに該ポリペプチド配列に対する抗体を含有する血管新生領域での治療組成物に関する。本発明は、さらに、該遺伝子を過少発現または過剰発現する遺伝子修飾細胞、それらを含有し、血管新生異常の治療に有用な治療組成物に関する。本発明は、また、血管新生異常の診断および／または予後の方法ならびに該異常の治療において活性な化合物をスクリーニングする新規方法に関する。

Description

本発明は、血管新生機構の制御不調に起因する疾患の治療に有用な医薬組成物の領域に属するものである。
それは、それらの機能が今日まで確認されておらず、それらの血管新生機構に関与していることが本出願人によって初めて明らかにされた新規遺伝子の配列の一部を、さらには、それらの機能の少なくとも一つが先に確認されていたが、それらが内皮細胞を構成する遺伝子として血管新生機構に関与することが本出願人が本発明の枠内で実施した研究によって初めて証明された遺伝子配列の一部を含有する組成物に関するものである。これらの遺伝子は、添付の配列表中のヌクレオチド配列によって同定される。本発明は、血管新生過程の臨床的研究、この過程に関連のある諸疾患の予後、診断および治療ならびに薬理学的、薬理遺伝学的または薬理シグナル論的研究の実施においてそれらの用途が見出されるところの前記遺伝子によってコードされた因子類のポリペプチド配列に関するものでもある。
血管新生は、それによって新規な血管が形成される重要な過程である。この過程は、生殖、発生、さらには瘢痕形成などの多くの正常な生理学的現象において必須のものである。これらの正常な生物現象においては、血管新生は厳密に制御・調節されている。すなわち、それは、数日間の短い期間の間誘発され、その後は完全に抑制される。しかし、多くの疾患が侵襲的で制御されない血管新生と関連している。たとえば、関節炎は、侵襲性の新生血管による軟骨の損傷に起因する疾患である。糖尿病網膜症では、新生血管による網膜の侵襲によって患者が失明するに至る；眼球の血管新生が失明の主因であり、この血管新生は、眼疾患患者の約２０％に影響を及ぼしている。最後に、腫瘍の増殖および転移は、新血管生成と関連しており、血管新生に依存している。腫瘍は、新生血管を刺激して、これを成長させる。さらに、これらの新生血管は、腫瘍が抜け出して血液循環に加わる経路を提供し、肝臓、肺、骨などの遠隔の部位への転移を惹起させることとなる。
心血管疾患、末梢動脈性疾患、血管または脳の病変などの他の疾患においては、血管新生が、重要な治療上の基礎となりうる。すなわち、損傷を受けた部位における血管新生の促進が、損傷を受けた血管に対する側行および代替新生血管の形成に至らせ、かくして、関連組織の生存に必要な血液を、従って酸素およびその他の栄養因子および生物学的因子を供給することができる。
内皮細胞による新生血管の形成は、内皮細胞の移動、増殖および分化を包含する。これらの生物学的現象の制御は、遺伝子発現に直接関連している。血管新生に関しては、絶えず増え続けている多くの研究が、血管新生の制御は内皮細胞に直接作用する諸因子間の平衡を通じて行われていることを示している。これらの因子は、一方では、とりわけＶＥＧＦ、ＦＧＦ類、ＩＬ−８、ＨＧＦ／ＳＦ、ＰＤＧＦなどの刺激因子でありうる。また、それらは、とりわけＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ｇｒｏ−αおよびβ、血小板第４因子、アンギオスタチン、ヒト軟骨細胞由来の阻害剤、トロンボスポンジン、白血病阻害因子などの阻害物質でもありうる。（イェンセン（Ｊｅｎｓｅｎ）、サージカル・ニューロロジー（Ｓｕｒｇ．Ｎｅｕｒｏｌ．）、１９９８、４９、１８９−１９５；タマタニら、カーシノジェネシス（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ）、１９９９、２０、９５７−９６２；タナカら、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．）、１９９８、５８、３３６２−３３６９；ゲー（Ｇｈｅ）ら、キャンサー・リサーチ、１９９７、５７、３７３３−３７４０；カワハラら、ヘパトロジー（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ）、１９９８、２８、１５１２−１５１７；チャンドフニ（Ｃｈａｎｄｈｕｎｉ）ら、キャンサー・リサーチ、１９９７、５７、１８１４−１８１９；イェンドラシャック（Ｊｅｎｄｒａｓｃｈａｋ）とセージ（Ｓａｇｅ）、セミナー・オン・キャンサー・アンド・バイオロジー（Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．）、１９９６、７、１３９−１４６；マイェフスキ（Ｍａｊｅｗｓｋｉ）ら、ジャーナル・オブ・インヴェスティゲーショナル・デルマトロジー（Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．）、１９９６、１０６、１１１４−１１１９）。
それゆえ、血管新生の制御は、血管新生に関連する多くの病的現象についての我々の知識を向上させるための戦略上の要となるものであり、同時に基礎的研究の要であり、また、血管新生に関連する諸疾患を処置するための新規療法を編み出すための基礎となる。
血管新生を制御するために、多くの製薬グループが、パラクリン信号、刺激因子および阻害因子、たとえば血管新生を促進または阻害する薬剤の利用に直接立脚した治療戦略を開発してきている。これらの戦略は、主として、これらの因子をそれらのポリペプチドという形で、また最近は選択された因子をコードする発現ベクターの形で、血管新生促進または阻害剤として使用することを基礎としている。
血管新生に関与する新規遺伝子を同定・確認できる方法に焦点が合わせられている。それは、ＦＲ２７９８６７４として公表されたフランス特許出願およびＷＯ０１／２１８３１２として公表されたＰＣＴ国際特許出願の対象となっている。この方法は、血管新生調節因子として記述されているすべての細胞外因子、すなわち血管新生因子、血管新生抑制因子ならびに細胞外マトリックスの種々の構成要素を考慮に入れて、血管新生を調節する本質的な機構を忠実に表現するという特徴をもっている。この方法の本質は、十分明確な４つの条件を介してこれら種々の細胞外因子を利用することにある。細胞外マトリックスの十分明確な一構成成分および／またはいくつかの構成成分の混合物を用いて内皮細胞を培養し、４つの実験条件のもとに置く。それらの条件とは、
内皮細胞を刺激しない対照条件。
内皮細胞を１つまたはいくつかの血管新生因子によって刺激する血管新生条件。
内皮細胞を１つまたはいくつかの血管新生因子によって刺激し、１つまたはいくつかの血管新生抑制因子の存在下に置く血管新生阻害条件。
内皮細胞を１つまたはいくつかの血管新生抑制因子によって刺激する別の対照条件。
これら４つの条件によって、血管新生、すなわち血管新生状態および／または血管新生阻害状態に特異的なｍＲＮＡ標品を得ることができ、正の調節因子および負の調節因子を含めて、血管新生の調節に関与する細胞構成成分をコードする遺伝子を見出すことができる。それゆえ、上記の方法は、すべての血管新生因子および血管新生抑制因子ならびに細胞外マトリックスの種々の構成成分を系統的にスクリーニングして、血管新生の調節に関与する細胞構成成分をコードする遺伝子を明らかにし、同定・確認することを可能ならしめる。さらに、内皮細胞による新生血管形成の動力学全体を通じて遺伝子発現を分析できるので、このアプローチは、遺伝子発現を血管新生の生物学的機能パラメータに結びつけることを可能ならしめるガラス器内法に相当する。
４つの実験条件を再現するための細胞外マトリックス構成成分として、血管新生因子、血管新生抑制因子ならびにＩ型コラーゲンを用い、上記の方法に従い、下記の５４の新規遺伝子の同定・確認を行った。
本出願人は、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３および配列番号：２２５により特定されているこれら５４の新規遺伝子が血管新生調節機構に関与していることを明らかにした。
より詳しくは、本発明は、（ｉ）それの発現が血管新生因子によって誘発され、血管新生抑制剤によって阻害されるところの内皮細胞の遺伝子、その相補配列またはその断片の核酸分子、（ｉｉ）該核酸分子またはその断片によりコードされたポリペプチド配列、（ｉｉｉ）（ｉ）の核酸分子の発現を阻害しうる分子または（ｉｉ）のポリペプチド配列に固定されうる分子のうちから選ばれた少なくとも１種の物質を活性成分として含有し、血管新生現象に対して作用する医薬組成物に関するものである。
特定の一実施態様に従えば、本発明の医薬組成物は、添付配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜２９０として特定したヌクレオチド配列、それらの相補配列およびそれらの対応するアンチセンス配列からなる群から選ばれた少なくとも１種の核酸またはそれらの断片のいずれかを活性成分として含有する。
本発明においては、塩基の欠失、変異または付加などの機能を変化させない二義的な構造上の修飾を示すが、添付配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列との相同性が少なくとも９０％であるヌクレオチド配列は、均等な配列であるとみなされるべきである。
他の特定の一実施態様に従えば、血管新生調節のための該医薬組成物は、すくなくとも１つの血管新生阻害配列を含有する。
特定の一実施態様に従えば、血管新生調節のための該医薬組成物は、すくなくとも１つの血管新生刺激配列を含有する。
特定の一実施態様に従えば、本発明の医薬組成物は、添付の配列表における配列番号：１〜配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０のうちから選ばれた少なくとも１種の配列のアンチセンス配列を含む１種または２種以上の血管新生阻害配列を含有する。
好ましくは、本発明の医薬組成物は、添付の配列表における配列番号：１０３〜配列番号：１０７、配列番号：１０９、配列番号：１１１および配列番号：１１３〜配列番号：１４８のうちから選ばれた１種または２種以上のアンチセンス配列を含有する。
第二の実施態様に従えば、本発明の医薬組成物は、添付の配列表における配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０および配列番号：１６のうちから選ばれた少なくとも１つの配列のアンチセンス配列を包含する１種または２種以上の血管新生刺激配列を含有する。
好ましくは、本発明の医薬組成物は、添付の配列表における配列番号：１０８、配列番号：１１０および配列番号：１１２のうちから選ばれたアンチセンス配列を含有する。
本発明はまた、添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列のうちから選ばれた少なくとも１種のポリペプチド配列を含有していることを特徴とする、血管新生に関連した疾患の診断および／または治療を目的とした医薬組成物を対象とする。
本発明においては、アミノ酸残基の欠失、変異または付加などの機能を変化させない二義的な構造上の修飾を示すが、添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列との相同性が少なくとも８５％、好ましくは９０％であるポリペプチド配列は、均等な配列であるとみなされるべきである。
本発明は、１種または２種以上の上記ポリペプチド配列の少なくとも１つの拮抗物質を含有する、血管新生関連疾患の診断および／または治療を目的とした医薬組成物をも対象とする。
拮抗物質とは、血管新生機構における該ポリペプチド配列の生物学的活性を阻害するすべての化合物をいう。
かかる拮抗物質の例としては、該ポリペプチド配列に対して親和性を有する抗体を挙げることができる。
本発明は、添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列の各々に対して親和性を有する抗体ならびにそれらを含有する治療用組成物に関するものでもある。
前記抗体は、動物、とりわけ脊椎動物、好ましくは哺乳動物を、添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列のいずれかまたは全蛋白の免疫原性を保存しているそれらの断片のいずれかによって生体内またはガラス器内で免疫処置するいずれの方法によっても得ることができる。
前記抗体は、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよい。（Ｇ・ケーラー（Ｋｏｈｌｅｒ）とＣ・ミルスタイン（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、１９７５年８月７日；２５６（５５１７）：４９５−７。）
本発明は、配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列の１つまたは２つ以上あるいは配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列に対して親和性を有する１種または２種以上の抗体もしくはこの親和性を保存する、または前記のようにして調製されたそれらの断片のいずれかを含有する治療用または診断用組成物に関するものでもある。
本発明の他の一目的は、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列のアンチセンスヌクレオチド配列に関する。
本発明の枠内において、アンチセンス配列とは、もともとのｍＲＮＡ配列の一部とハイブリダイズして、その発現、すなわちそれの蛋白質への翻訳を阻害するところの、ｍＲＮＡに対して相補的な少なくとも１０マーのＤＮＡ配列すべてを包含する。
とりわけ、本発明は、添付の配列表において配列番号：１０３〜配列番号：１４８として特定されている配列のうちから選ばれた１つの配列と少なくとも８５％、好ましくは９０％の相同性を有するアンチセンス配列を対象とする。
本発明はまた、上記定義のアンチセンス配列を少なくとも１種含有する哺乳動物発現ベクターをも対象とする。
より詳しくは、前記ベクターは、添付の配列表の配列番号：１４９〜配列番号：１９４の配列によって特定されるベクターＧＳ−Ｖ１〜ＧＳ−Ｖ４６からなる群から選ばれる。
前記配列番号：１０３〜配列番号：１４８の配列またはそれらのホモログ（相同体）の哺乳動物発現ベクターへの導入およびその後の該ベクターの哺乳動物細胞への導入によって、血管新生機構に影響を及ぼす遺伝子を過少発現する細胞株を得ることができる。
とりわけ好ましいこれらのプライマーは、後記の表Ｉに示されており、添付の配列表において配列番号：１９５〜配列番号：２２２、配列番号：２２６〜配列番号：２８３および配列番号：２９８〜２９９として特定されている。
本発明はまた、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の少なくとも１つのアンチセンス配列を少なくとも１つ含有する哺乳動物発現ベクターならびに該アンチセンスＤＮＡの発現を可能ならしめるプロモーターをも対象とする。
これらのベクターを構築するためには、特定されている配列の各々に対する特定のプライマーを設計する。
有利には、クローン化された遺伝子を含有する細菌プラスミドの断片の増幅を、クローン化された遺伝子を両側から挟むプラスミドの領域にハイブリダイズするプライマーを用いて行う。それらは、それらの両末端に、クローン化された断片には含まれておらず、発現ベクターの多部位領域に存在する制限部位をも含有している。
たとえば、本発明で使用するクローン化された断片の範囲内では、発現ベクターｐＣＩとともに利用する制限部位は、ＳａｌＩおよびＭｌｕＩ部位である。これらの両制限部位は、当該断片が細菌プラスミド中にセンス方向にクローン化されているかアンチセンス方向にクローン化されているかに応じて相互に交換可能である。
たとえば、プライマーＧＳ−ＰＧＳ−Ｆ（配列番号：２２３）およびＧＳ−ＰＧＭ−Ｒ（配列番号：２２４）は、細菌プラスミド中にセンス方向にクローン化されている断片に対して使用する。（ＧＳ−Ｎ１５）。
これらの特定のプライマーは、細菌ベクター中にセンス方向にクローン化されているすべての断片を転移させて、発現ベクターをアンチセンス方向に組み込むために、一般的に使用することができる。
プライマーＧＳ−ＰＧＭ−Ｆ（配列番号：３００）およびＧＳ−ＰＧＳ−Ｒ（配列番号：３０１）は、細菌プラスミド中にアンチセンス方向にクローン化されている断片に対して使用する。（ＧＳ−Ｎ４６）。
これらの特定のプライマーは、細菌ベクター中にアンチセンス方向にクローン化されているすべての断片を転移させて、発現ベクターをセンス方向に組み込むために、一般的に使用することができる。
本発明は、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の集合から選ばれた少なくとも１つのヌクレオチド配列またはそれらの断片のいずれかを含有する哺乳動物発現ベクターをも対象とする。
これらの構築物は、一方では、血管新生異常の細胞療法による治療を目的とした治療組成物を調製するのに、他方では、哺乳動物、とりわけヒトにおける血管新生異常の治療の有効性を確認するのに、また該哺乳動物において場合により血管新生機構に関与している遺伝子の機能を確認するのに、有用である。
従って、本発明は、添付の配列表の配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０のうちから選ばれた少なくとも１つのヌクレオチド配列を過少発現するアンチセンス配列含有ベクターを含有する遺伝子修飾細胞をも対象とする。
本発明の他の主題は、配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている少なくとも１つの配列のアンチセンス配列を少なくとも１つ含有し、さらに該アンチセンスＤＮＡの発現を可能ならしめるプロモーターを含有する発現ベクターを安定して発現する遺伝子修飾細胞株を調製する方法であって、下記の工程を包含する該方法に関するものである：
（ａ）少なくとも１種の抗生物質に対する抵抗性遺伝子を該遺伝子修飾細胞に導入する、
ｂ）工程（ａ）で得られた細胞を当該抗生物質の存在下に培養する、
ｃ）生存細胞を選択する。
本発明は、活性成分として該遺伝子修飾細胞を含有する、血管新生関連疾患診断および／または治療用医薬組成物に関するものでもある。
さらに、本発明は、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の集合のうちから選ばれた１つのヌクレオチド配列もしくはそれらの断片のいずれかを含有し、該配列を過剰発現する少なくとも１種のベクターを含有する遺伝子修飾細胞に関するものでもある。
従って、本発明は、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている少なくとも１つの配列もしくはそれらの断片の１つならびに該アンチセンスＤＮＡの発現を可能ならしめるプロモーターを含有する発現ベクターを安定して発現する遺伝子修飾細胞株を調製する方法であって、下記の工程を包含する該方法に関するものである：
（ａ）少なくとも１種の抗生物質に対する抵抗性遺伝子を該遺伝子修飾細胞に導入する、
ｂ）工程（ａ）で得られた細胞を当該抗生物質の存在下に培養する、
ｃ）生存細胞を選択する。
それゆえ、ヒト細胞を単離して、それらを、その配列が配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列である遺伝子の少なくとも１つもしくはそれらの断片の１つをコードする下記ベクターの少なくとも１つによりガラス器内でトランスフェクトすることが考えられる。これらの遺伝子修飾細胞は、つぎに、哺乳動物、好ましくはヒトという哺乳動物に投与することができる。
かかる細胞を含有する医用組成物は、単純な細胞懸濁液の形を呈することもできるが、適当な装置中に、たとえば半透膜を用いて、充填することもできる。
本発明の他の一主題は、その配列が添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている遺伝子の少なくとも１つもしくはそれらの断片の１つによってコードされた蛋白質を調製する方法である。
添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２および配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているこれらの蛋白質またはそれらの断片は、相応する適当な発現ベクターを適当な宿主に導入することによってガラス器内で組換え蛋白質の形で製造し、精製し、つぎに医用剤として使用することができる。
かかる組換え蛋白質調製方法は、下記の工程を包含する：
ａ）添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているもののうちの少なくとも１つの配列もしくはそれらの断片の１つを含有するベクターの構築、
ｂ）該ベクターの宿主細胞への導入、
ｃ）適当な培地中での該細胞の培養、
ｄ）発現された蛋白質もしくはそれらの断片の１つの精製。
本発明はまた、上記の方法によって得られた組換え蛋白質に関するものでもある。
たとえば、大腸菌などの細菌における組換え蛋白質発現系を、蛋白質または非グリコシル化ポリペプチドの発現のために利用できる。
対象となる遺伝子のコード配列または部分配列を、両末端に制限酵素部位、好ましくは発現ベクター中での遺伝子の方向付けを可能ならしめるために異なる制限酵素部位を有するこの遺伝子に対して特異的なプライマーを用いてのＰＣＲによって、増幅する。増幅されたＤＮＡを精製したのち、制限酵素によって消化し、前もって同じ酵素で消化した発現ベクターにライゲーションによって挿入する。ｐＢＲ３２２（ボリヴァー（Ｂｏｌｉｖａｒ）ら、ジーン（Ｇｅｎｅ）２（１９７７）９５−１１３）またはたとえば高発現レベルを得るためのバクテリオファージＴ７のＲＮＡポリメラーゼプロモータを含有するその誘導体、たとえば、好ましくは選択マーカー（抗生物質耐性）をコードする配列、ＤＮＡの挿入のための適当な制限酵素部位を含むマルチクローニング部位を含有するプラスミドｐＥＴ３ａ（スチュディエ（Ｓｔｕｄｉｅｒ）とモファット（Ｍｏｆｆａｔｔ）、１９８６、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ）１８９（１）：１１３−３０）などの多くのベクターを使用することができ、細胞／宿主系は、増殖因子ＦＧＦ２の生体内放射能標識に用いられ（コリン（Ｃｏｌｉｎ）ら、１９９７、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、２４９、４７３−４８０）、すでにパトリ（Ｐａｔｒｙ）ら（１９９４、フェブス・レターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ）、３４９（１）：２３−８）により記載されているものなどの誘導系であることが好ましく、それは、精製を容易にするために当該ポリペプチドの末端のポリヒスチジンテールをコードする領域を含有していてもよい。
増幅されたＤＮＡは、プラスミドに連結して、サムルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）らにより記載されている方法（１９８９、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、第二版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、ニューヨーク州コールド・スプリング・ハーバー）に従って細菌を軽質転換する。軽質転換細胞を、抗生物質含有ＬＢ寒天培地上に置き、それらの抗生物質に対して耐性のコロニーをＰＣＲによってチェックし、つぎにゲルで分析する。当該プラスミドＤＮＡは、単離して、配列を決定し、構築を確認することができる。組換え蛋白質の産生および精製は、記載されている通りにして（（パトリ（Ｐａｔｒｙ）ら、１９９４、フェブス・レターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ）、３４９（１）：２３−８）、４７３−４８０）実施することができる。簡潔に言えば、単離したコロニーを、抗生物質を添加したＬＢ培地などの液体培地に接種する。一夜インキュベートしたのち、その前培養物を播種に用いて、さらに大量の培養物を得ることができる。そのときにポリペプチドの発現が誘導され、数時間生育した細胞をつぎに遠心分離によって集める。細胞沈渣は、既知の化学的試薬により、または機械的に、たとえば超音波処理により、溶解させることができる。蛋白質は、その物理化学的諸性質に基づいて、組換えＦＧＦ２について記載されているようにして（コリン（Ｃｏｌｉｎ）ら、１９９７、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、２４９、４７３−４８０）精製でき、該蛋白質がポリヒスチジンテールによって標識されている場合には、記載されているように（タング（Ｔａｎｇ）ら、プロテイン・エクスプレッション・アンド・ピュアリフィケーション（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ）１９９７年１２月；１１（３）：２７９−８３）、このテールを介しての金属イオンキレート化剤への固定化によって精製できる。
たとえば、グリコシル化などの翻訳後修飾を有するポリペプチドを発現させるための組換え蛋白質の発現系、たとえば真核生物（酵母、植物、昆虫）の系を使用できる。
かくして、たとえば、スレークリシュナ（Ｓｒｅｅｋｒｉｓｈｎａ）ら（１９８８、ジャーナル・オブ・ベイシック・マイクロバイオロジー（Ｊ Ｂａｓｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ）、２８（４）：２６５−７８）に記載されているごとき酵母ピキア・パストーリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）中で、組換え蛋白質を産生させることができる。増幅したＤＮＡは、同様にして消化および連結ののち、好ましくは選択マーカーをコードする配列を含有するＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓの発現ベクター（スコアラー（Ｓｃｏｒｅｒ）ら、バイオテクノロジー（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（ニューヨーク）、１９９４年２月；１２（２）：１８１−４）に導入することができる。蛋白質は、細胞内蛋白質であっても、遺伝子末端に導入されたたとえば酵母サッカロマイセス・セレヴィシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のプレプロペプチド因子（クレッグ（Ｃｒｅｇｇ）ら、１９９３；スコアラー（Ｓｃｏｒｅｒ）ら、１９９３）などの分泌シグナル配列をコードする配列をベクターが含有している場合には、分泌蛋白質であってもよい。組換え蛋白質が、精製を容易にするために、末端の一つにヒスチジンテールが付加されていているものであってもよい（モズリー（Ｍｏｚｌｅｙ）ら、１９９７、フォトケミストリー・アンド・フォトバイオロジー（Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ）、６６（５）：７１０−５）。
該宿主は、細菌、酵母、昆虫細胞、哺乳動物細胞、植物細胞のうちから選ぶことが好ましい。
かかる蛋白質を含有する医用組成物の投与は、たとえば、局所、経口、皮内、経皮、静脈内の各経路によって行うことができる。
該蛋白質の断片は、それらが由来する蛋白質の拮抗物質として利用できる。たとえば、かかる断片を含有する医用組成物を動物に適宜投与することが、ある所与の疾患における血管新生機構での該蛋白質の活性低下を誘起させるのに
推奨される。
本発明は、哺乳動物、とりわけヒトにおいて血管新生関連疾患を診断する方法であって、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている１つまたは２つ以上のヌクレオチド配列の該哺乳動物の細胞中での発現を検出することからなる診断方法にも関する。
かかる診断方法は、下記の工程を包含する：
− 哺乳動物の細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現の検出、
− それの血管新生状態が既知の標準細胞集団によるこれ（ら）と同じ配列の発現の検出、
− 両細胞集団によるこれ（ら）と同じ配列の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
本発明は、哺乳動物、とりわけヒトにおける血管新生関連疾患の診断および予後の方法であって、該哺乳動物の細胞において、添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列の１つまたは２つ以上もしくは配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列の１つまたは２つ以上の過剰発現または過少発現を検出することからなる方法に関するものでもある。
好ましい一実施態様に従えば、前記の方法は、下記の工程を包含する：
ａ）哺乳動物の一細胞集団による該ポリペプチド配列、配列番号：５４〜配列番号：１０２または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列の１つまたは２つ以上の発現の検出、
ｂ）それの血管新生状態が既知の標準細胞集団によるこれ（ら）と同じ配列の発現の検出、
ｃ）両細胞集団によるこれ（ら）と同じポリペプチド配列の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
特別な一実施態様に従えば、前記の本発明の診断方法において、該当配列の発現の検出は、内皮細胞を患者由来の体液の存在下に置いたのちに実施する。
本発明は、哺乳動物、とりわけヒトにおける血管新生関連処置の治療効果を確認する方法であって、該哺乳動物において、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列の１つまたは２つ以上を過剰発現または過少発現しうる細胞集団を特定することによるものである方法に関するものでもある。
かかる治療効果確認方法は、下記の工程を包含する：
− 血管新生異常の治療を目的とした医用組成物を投与した哺乳動物の一細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５の１つまたは２つ以上の発現の検出、
− それの血管新生状態が既知の一標準細胞集団によるこれ（ら）と同じヌクレオチド配列の発現の検出、
− 両細胞集団によるこれ（ら）と同じヌクレオチド配列の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
好ましい実施態様に従えば、前記の確認方法は、哺乳動物の細胞集団について生体内、半生体内（ｅｘ ｖｉｖｏ）で、あるいはまた、該哺乳動物から単離した細胞集団についてガラス器内で実施する。
特別な一実施態様に従えば、上記の本発明の確認方法において、該当配列の発現の検出は、内皮細胞を患者由来の体液の存在下に置いたのちに実施する。
本発明は、哺乳動物、とりわけヒトの血管新生関連処置に有用な化合物をスクリーニングする方法に関するものでもある。
好ましい一実施態様に従えば、かかるスクリーニング方法は、下記の工程を包含する：
− 血管新生異常に対して治療効果を有する可能性のある化合物の存在下に置かれた哺乳動物の一細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現の検出、
− それの血管新生状態が既知の一標準細胞集団によるそれ（ら）と同じヌクレオチド配列の発現の検出、
− 両細胞集団によるそれ（ら）と同じヌクレオチド配列の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
他の好ましい一実施態様に従えば、かかるスクリーニング方法は、下記の工程をも包含する：
− 血管新生異常に対して治療効果を有する可能性のある化合物の存在下に置かれた一細胞集団による添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されている当該ポリペプチド配列または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列の１つまたは２つ以上の発現の検出、
− それの血管新生状態が既知の一標準細胞集団によるそれ（ら）と同じポリペプチド配列の発現の検出、
− 両細胞集団によるそれ（ら）と同じポリペプチド配列の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
特別な一実施態様に従えば、前記の本発明のスクリーニング方法において、該当配列の発現の検出は、内皮細胞を患者由来の体液の存在下に置いたのちに実施する。
本発明の医薬組成物によって診断または治療することのできる血管新生異常としては、つぎのものを挙げることができる：腫瘍の血管新生、網膜症、慢性関節リウマチ、クローン病、粥状硬化症、卵巣の過剰刺激、乾癬、新血管形成に関連した子宮内膜炎、バルーン血管形成による再狭窄、瘢痕形成による組織産生過多、末梢脈管疾患、高血圧、血管性炎症、レイノー病およびレイノー現象、動脈瘤、動脈再狭窄、血栓性静脈炎、リンパ管炎、リンパ節腫脹、瘢痕形成および組織修復、虚血、狭心症、心筋梗塞、慢性心疾患、うっ血性心不全などの心不全、加齢に関連した筋退化および骨粗しょう症。
本発明は、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列の１つまたは２つ以上に特定的な１つまたは２つ以上のプローブを含有する支持体を包含する、本発明のスクリーニング方法を実施するための装置をも対象とする。
本発明の枠内において、プローブとは、その配列が求める配列に対して相補的なすべての一本鎖ＤＮＡ断片をいう：それは、標識した（放射性原子または蛍光基の導入によって）プローブとのハイブリダイゼーションによって見つけることができる。プローブは「釣り針」分子の役割を果す。
好ましい実施態様に従えば、前記装置の支持体は、ガラス、金属膜、重合体膜、シリカ膜のうちから選ばれる。
かかる装置は、たとえば、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列の１つまたは２つ以上を含有するＤＮＡチップである。
本発明はまた、前述のごとき装置、特定のプライマーならびに試料から抽出した配列の増幅、それらと該装置のプローブとのハイブリダイゼーションおよびディファレンシャル・ディスプレイの実施に必要な付属品を包含する、血管新生異常関与遺伝子のディファレンシャル・ディスプレイ測定用キットを対象とする
本発明はまた、血管新生異常関与遺伝子のディファレンシャル・ディスプレイ測定用キットであって、標準細胞集団としての添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の少なくとも１つまたはそれらの断片のいずれかを発現するベクターを安定的に発現する遺伝子修飾細胞株および該ディファレンシャル・ディスプレイの測定に必要な手段を包含する前記キットを対象とする。
本発明はまた、血管新生異常関与遺伝子のディファレンシャル・ディスプレイ測定用キットであって、標準細胞集団としての添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の１つまたはそれらの断片にいずれかに対する少なくとも１つのアンチセンス配列を発現するベクターを安定的に発現する遺伝子修飾細胞株および該ディファレンシャル・ディスプレイの測定に必要な手段を包含する前記キットを対象とする。
特定された５４の遺伝子およびそれらのホモログが血管新生機構に関与していることの確認は、材料および方法の節に記載した方法に従って実施した。
この関与は、添付の図１〜１１によって説明される。
図１は、ヒト内皮細胞内でのＧＳ−Ｖ１、ＧＳ−Ｖ２、ＧＳ−Ｖ４、ＧＳ−Ｖ５、ＧＳ−Ｖ１５の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：１Ａ）ＧＳ−Ｎ１に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１で、１Ｂ）ＧＳ−Ｎ２に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２で、１Ｃ）ＧＳ−Ｎ４に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４で、１Ｄ）ＧＳ−Ｎ５に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ５で、１Ｅ）ＧＳ−Ｎ１５に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１５で、１Ｆ）ブランクベクター（対照）で、それぞれトランスフェクトされた内皮細胞。
図２は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ３、ＧＳ−Ｖ１３の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：２Ａ）ＧＳ−Ｎ３に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３で、２Ｂ）ＧＳ−Ｎ１３に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１３で、２Ｃ）ブランクベクター（対照）で、それぞれトランスフェクトされた内皮細胞。
図３は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ６、ＧＳ−Ｖ８、ＧＳ−Ｖ１０の発現が毛細管の形成を誘発することを示す：トランスフェクトされた内皮細胞、３Ａ）ＧＳ−Ｎ６に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ６；３Ｂ）ＧＳ−Ｎ８に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ８；３Ｃ）ＧＳ−Ｎ１０およびそのホモログＧＳ−Ｎ５４に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１０；３Ｄ）ブランクベクター（対照）。
図４は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ７、ＧＳ−Ｖ９、ＧＳ−Ｖ１１、ＧＳ−Ｖ１２、ＧＳ−Ｖ１４の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：４Ａ）ＧＳ−Ｎ７に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ７；４Ｂ）ＧＳ−Ｎ９に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ９；４Ｃ）ＧＳ−Ｎ１１に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１１；４Ｄ）ＧＳ−Ｎ１２に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１２；４Ｅ）ＧＳ−Ｎ１４に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１４；４Ｆ）ブランクベクター（対照）でトランスフェクトされた内皮細胞。
図５は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ１６、ＧＳ−Ｖ１７、ＧＳ−Ｖ１８、ＧＳ−Ｖ１９、ＧＳ−Ｖ２１の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：５Ａ）ＧＳ−Ｎ１６に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ６；５Ｂ）ＧＳ−Ｎ１７に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１７；５Ｃ）ＧＳ−Ｎ１８に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１８；５Ｄ）ＧＳ−Ｎ１９に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ１９；５Ｅ）ＧＳ−Ｎ２１に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２１；５Ｆ）ブランクベクター（対照）でトランスフェクトされた内皮細胞。
図６は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ２２、ＧＳ−Ｖ２４、ＧＳ−Ｖ２５、ＧＳ−Ｖ２６、ＧＳ−Ｖ２７の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：６Ａ）ＧＳ−Ｎ２２に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２２；６Ｂ）ＧＳ−Ｎ２４およびそのホモログＧＳ−Ｎ４９に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２４；６Ｃ）ＧＳ−Ｎ２５およびそのホモログＧＳ−Ｎ５０に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２５；６Ｄ）ＧＳ−Ｎ２６に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２６；６Ｅ）ＧＳ−Ｎ２７およびそのホモログＧＳ−Ｎ５１に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２７；６Ｆ）ブランクベクター（対照）でトランスフェクトされた内皮細胞。
図７は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ２８、ＧＳ−Ｖ２９、ＧＳ−Ｖ３０、ＧＳ−Ｖ３１、ＧＳ−Ｖ３２の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：７Ａ）ＧＳ−Ｎ２８に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２８；７Ｂ）ＧＳ−Ｎ２９およびそのホモログＧＳ−Ｎ５２に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２９；７Ｃ）ＧＳ−Ｎ３０に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３０；７Ｄ）ＧＳ−Ｎ３１およびそのホモログＧＳ−Ｎ５３に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３１；７Ｅ）ＧＳ−Ｎ３２に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３２；７Ｆ）ブランクベクター（対照）でトランスフェクトされた内皮細胞。
図８は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ３３、ＧＳ−Ｖ３４、ＧＳ−Ｖ３５、ＧＳ−Ｖ３７、ＧＳ−Ｖ３８の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：８Ａ）ＧＳ−Ｎ３３に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３３；８Ｂ）ＧＳ−Ｎ３４に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３４；８Ｃ）ＧＳ−Ｎ３５に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３５；８Ｄ）ＧＳ−Ｎ３７に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３７；８Ｅ）ＧＳ−Ｎ３８に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３８；８Ｆ）ブランクベクター（対照）でトランスフェクトされた内皮細胞。
図９は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ４０、ＧＳ−Ｖ４２、ＧＳ−Ｖ４３、ＧＳ−Ｖ４４、ＧＳ−Ｖ４５の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：９Ａ）ＧＳ−Ｎ４０に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４０；９Ｂ）ＧＳ−Ｎ４２に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４２；９Ｃ）ＧＳ−Ｎ４３に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４３；９Ｄ）ＧＳ−Ｎ４４に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４４；９Ｅ）ＧＳ−Ｎ４５に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４５；８Ｆ）ブランクベクター（対照）でトランスフェクトされた内皮細胞。
図１０は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ２０、ＧＳ−Ｖ２３、ＧＳ−Ｖ３６、ＧＳ−Ｖ３９、ＧＳ−Ｖ４１の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：１０Ａ）ＧＳ−Ｎ２０に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２０；１０Ｂ）ＧＳ−Ｎ２３およびそのホモログＧＳ−Ｎ４７およびＧＳ−Ｎ４８に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ２３；１０Ｃ）ＧＳ−Ｎ３６に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３６；１０Ｄ）ＧＳ−Ｎ３９に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ３９；１０Ｅ）ＧＳ−Ｎ４１に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４１；１０Ｆ）ブランクベクター（対照）でトランスフェクトされた内皮細胞。
図１１は、ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ４６の発現が毛細管の形成を阻害することを示す：１１Ａ）ＧＳ−Ｎ４６に特異的なアンチセンス転写産物をコードするＧＳ−Ｖ４６；１１Ｂ）ブランクベクター（対照）によってトランスフェクトされた内皮細胞。
材料および方法
１．細胞の培養および血管新生試験。
この場合、前記の４つの培養条件のもとでの臍帯血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用いて、血管新生の制御に関与している細胞構成成分をコードする遺伝子を特定・確認する。
それらの内皮細胞を完全培地（クロンティックス社のＥＧＭ−２）中で維持する。
モンテザーノ（Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ）ら（１９８６，プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ）、８３（１９）：７２９７−３０１）のモデルに従ったガラス器内血管新生試験において、血管新生関与遺伝子を同定・確認するために、それらの細胞を、まず初めに、完全培地中のＩ型コラーゲンゲル上にコンフルエンスになるまで播く。つぎに、標準ＨＵＶＥＣ細胞を、貧血清で、成長因子類を含まない培地：ＥＢＭ−２＋２％血清中で培養し、試験条件下で種々の因子を添加する。
ＦＧＦ２：５ｎｇ／ｍｌ〜６０ｎｇ／ｍｌの間、好ましくは１０ｎｇ／ｍｌ〜４０ｎｇ／ｍｌの間の濃度で；ＶＥＧＦ：１０ｎｇ／ｍｌ〜６０ｎｇ／ｍｌの間、好ましくは３０ｎｇ／ｍｌ〜５０ｎｇ／ｍｌの間の濃度で；ＰＦ４：０．１μｇ／ｍｌ〜５μｇ／ｍｌの間、好ましくは０．５μｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌの間の濃度で；ＴＮＦ−α：２０ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌの間、好ましくは３０ｎｇ／ｍｌ〜６０ｎｇ／ｍｌの間の濃度で；ＩＦＮ−γ：５０ｎｇ／ｍｌ〜２００ｎｇ／ｍｌの間、好ましくは８０ｎｇ／ｍｌ〜１２０ｎｇ／ｍｌの間の濃度で。
そのときには、前記の４つの培養条件下に置かれたヒト内皮細胞を、血管新生の調節・制御に関与する細胞構成成分をコードする遺伝子を特定するために使用するのである。
２．血管新生因子および血管新生抑制因子。
たとえば本発明の範囲内で使用した、それぞれ新生血管の形成または新生血管の阻害に関連あると確認された遺伝子の発現に対して影響のある血管新生因子および血管新生抑制因子を、以下に例示する：
ＶＥＧＦ＝血管内皮細胞増殖因子。
ＦＧＦ２＝塩基性線維芽細胞増殖因子。
ＨＧＦ＝肝細胞増殖因子。
ＰＦ４＝血小板因子４。
ＩＦＮ−γ＝インターフェロン−γ。
ＴＮＦ−α＝腫瘍壊死因子−α。
ＴＮＦ−αは、血管新生調節因子であり、生体内での血管新生を誘導できるが、ガラス器内では血管形成を阻害することもでき（フラーテル・シュレーダー（Ｆｒａｔｅｒ−Ｓｃｈｒｏｄｅｒ）ら、１９８７、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ）、８４（１５）：５２７７−８１）；ファジャード（Ｆａｊａｒｄｏ）ら、１９９２、アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ）、３月、１４０（３）：５３９−４４；ニイダ（Ｎｉｉｄａ）ら、１９９５、ニューロロジカル・メディシン・アンド・カイラージャリー（東京）（Ｎｅｕｒｏｌ Ｍｅｄ Ｃｈｉｒ）、３５（４）：２０９−１４）。我々のガラス器内血管新生モデルでは、ＴＮＦ-αを、血管新生阻害条件下で用いている。
３．遺伝子発現の比較。
その場合、ＤＮＡチップ、ＳＡＧＥ、定量的ＰＣＲによる増幅反応、サブトラクティヴ（差し引き）バンク構築のためのウイルスベクターあるいはディファレンシャル・ディスプレイを用いることにより、遺伝子発現を比較することができる。
本発明に導いてくれた実験の範囲内では、本出願人は、当該遺伝子同定・確認のために、ディファレンシャル・ディスプレイ手法を優先的に利用した。
ディファレンシャル・ディスプレイ
コラーゲンゲル上で種々の使用因子の存在下に培養したＨＵＶＥＣ細胞から、ＲＮイージー（ＲＮｅａｓｙ）ミニキット（キアゲン社）法に従い、メーカーが推奨するプロトコールに従ったＤＮアーゼＩ消化工程を組み込んで、全ＲＮＡを調製する。
全ＲＮＡからのディファレンシャル・ディスプレイは、リヤン（Ｌｉａｎｇ）とパーディー（Ｐａｒｄｅｅ）が記載している方法（１９９２、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１４；２５７（５０７２）：９６７−７）に従い、ＰＣＲによる増幅の間に同位体希釈αＰ３３−ＡＴＰを用いて実施し、電気泳動ゲルのオートラジオグラフィーによりバンドを視覚可能にする。
すなわち、分析培養条件に応じてゲル上に示差的に存在するＤＮＡの断片を切り分け、再増幅し、プラスミドＰＧＥＭイージーベクター（プロメガ社）中にクローン化し、配列決定し、ＢＬＡＳＴバンクに照会して、特定する。
４．特定された遺伝子の血管新生機構への関与の確認。
遺伝子の機能性の試験
第二段階では、特定された各配列の機能性を、該配列のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する発現ベクターによりトランスフェクトした内皮細胞を用いたガラス器内血管新生モデルで試験する。
これらのベクターの構築のために、特定された配列の各々に特異的なプライマーを設計する。これらのプライマーを表１に示すが、それらは添付の配列表における配列番号：１９５〜配列番号：２２２、配列番号：２６６〜配列番号：２８３および配列番号：２９８〜配列番号：２９９によって特定される。
Figure 2005532788
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これらのプライマーは、それらの末端の各々に、異なる制限酵素部位（ＳａｌＩ：ＧＴＣＧＡＣまたはＭｕｌＩ：ＡＣＧＣＧＴ）を含んでいる。
各遺伝子の増幅された断片を、前記プライマーを用いて、特定された遺伝子断片を含有する細菌プラスミドからＰＣＲによって取得する。
これらの断片を精製し、制限酵素ＳａｌＩおよびＭｌｕＩにより消化し、やはりこれらの制限酵素により消化したｐＣｉ−ｎｅｏベクタータイプの哺乳動物発現ベクター（プロメガ社）に挿入する。
各断片をアンチセンス方向に導入する。
配列ＧＳ−Ｎ１５およびＧＳ−Ｎ４６という特別な場合には、細菌プラスミド中にクローン化された断片の増幅は、クローン化された遺伝子を挟むプラスミドの領域にハイブリダイズし、それらの末端に、クローン化された断片には含まれていなくて、発現ベクターの多部位（マルチサイト）領域には存在する制限部位（ＳａｌＩおよびＭｌｕＩ部位）をも含有する配列ＧＳ−ＰＧＳ−Ｆ、ＧＳ−ＰＧＭ−ＲまたはＧＳ−ＰＧＭ−ＦおよびＧＳ−ＰＧＳ−Ｒのうちから選ばれた特定のプライマーを用いて実施する。
これらの両制限部位は、当該断片が細菌プラスミド中でセンス方向にまたはアンチセンス方向にクローン化されているかに応じて、相互に交換可能である。
普遍的プライマーであると考えられるこれらのプライマーを用いて、クローン化遺伝子の不存在下に（ブランクプラスミド）実施した試験は、増幅プラスミド断片（４０ｂｐ）を発現ベクターに組み込んだとき、それが、ガラス器内機能性試験において、新生血管の形成を変化させないことを示した。このようにして構築したこのベクターを用いて得られた結果は、ブランクベクターを用いて得られた結果（示していない）と同じであり、これらの補足塩基対が特定された配列に特異的なアンチセンス断片の作用・効果を変化させないことを示している。
一般的に言って、本発明により血管新生機構において同定された遺伝子の機能性の証明に使用できるベクターは、クローン化された遺伝子の発現を可能ならしめるプロモーター（たとえばヒトサイトメガウイルス（ＣＭＶ）の「強力」プロモーターを挙げることができる）を含めての哺乳動物発現ベクターのすべてのシステムを含んでいる。
同様に使用可能な他の構成的または誘導的発現ベクターを、網羅的なものではない以下のリストに示す：
プロメガ社によって市販されているベクター類；哺乳動物細胞における遺伝子の高レベル構成的発現のための「強力」プロモーターを有するベクター類（ｐＣＩ哺乳動物発現ベクター、発現ベクター系クローニングベクターｐＡＬＴＥＲ（Ｒ）＊−ＭＡＸ）、インヴィトロゲン社により市販されているベクター類：（ｐｃＤＮＡ３．１、−／ｈｙｇｒｏ、−／Ｚｅｏ、ｐｃＤＮＡ４／ＨｉｓＭＡｘ、−Ｅ、ｐＢｕｄＣＥ４、ｐＲｃＲＳＶ、ｐＲｃＣＭＶ２、ｐＳｅｃＴａｇ２、−／ｈｙｇｒｏ分泌ベクター類、ベクターｐＥＢＶＨｉｓ Ａ、ＢおよびＣ）、クロンテック社により市販されている哺乳動物発現ベクター（ｐＩＲＥＳ、ｐＩＲＥＳ−ＥＹＦＰ、ｐＩＲＥＳ２−ＥＧＦＰ、ｐＣＭＶ−ＭｙｃおよびｐＣＭＶ−ＨＡ）、エピトープ標識ｐＴＲＥ、ベクターＶＰ１６ミニマルドメイン（ｐｔＴＡ２、ｐｔＴＡ３およびｐｔＴＡ４）、二方向Ｔｅｔ発現ベクター類（ｐＢＩ、ｐＢＩ−ＥＧＦＰ、ｐＢＩ−Ｇ、ｐＢＩ−Ｌ）、ｐＲｅｖＴＲＥ、ｐＴＲＥ２、ｐＬＥＧＦＰ−Ｎ１レトロウイルスベクターｐＬＥＧＦＰ−Ｃ１、アデノウイルス発現系Ａｄｅｎｏ−Ｘ、ｐＣＭＳ−ＥＧＦＰ、ｐｄ１ＥＧＦＰ−Ｎ１、ｐｄ２ＥＣＦＰ−Ｎ１、ｐｄ２ＥＹＦＰ−Ｎ１、ｐＥＧＦＰ（−Ｃ１、−Ｃ２、−Ｃ３、−Ｎ１、−Ｎ２、−Ｎ３）、ｐＥＹＦＰ−Ｃ１、−Ｎ１。
そのとき、前記アンチセンス断片を含有する各ベクターは、大腸菌において生産させ、抽出し、精製し、定量する。各ベクター１μｇを、内皮細胞とともに、形質移入剤（エフェクテン、キアゲン社）の存在下に、メーカーの推奨するプロトコールに従って、インキュベートする。トランスフェクションから２４時間後、内皮細胞をトリプシン処理し、血管新生因子含有細胞外マトリックス、すなわちグラント（Ｇｒａｎｔ）らが記載しているモデル（１９８９、セル（Ｃｅｌｌ）、５８（５）：９３３−４３）によればマトリゲル、の上にひろげる。２４時間のインキュベーションののち、血管の形成を観察し、ブランクの哺乳動物発現ベクターでトランスフェクトした対照細胞と比較する。
５．遺伝子配列またはそれらの断片あるいはアンチセンス配列を含有する発現ベクターを発現する安定細胞株バンクの樹立。
当該発現系は、ベクター中にクローン化された核酸を含有する該ベクターを安定に発現するトランスフェクト細胞を選択するための、同一ベクター内のあるいはコトランスフェクションに用いられる第二のベクター中の、対抗生物質選択マーカーを含有していることができる。
この発現ベクターは、構成的発現系であっても、誘導的発現系であってもよい。
以下に記載する特別な例において、特定された各遺伝子に対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現するための安定な細胞株が、構成的発現ベクターを用い、抗生物質存在下で選択することによって得られた。
これを行うためには、上記条件下で行ったトランスフェクションの２４時間後に、ＢＡＥＣ内皮細胞をトリプシン処理し、７００μｇ／ｍｌの抗生物質Ｇ４１８（プロメガ社）の存在下に、６ウエルプレートに８００００細胞／ｍｌの割合で播く。対照のウエルには、トランスフェクトしていない細胞を播く。３時間ごとに培地を交換し、抗生物質も再添加する。８〜１０時間後に、生育抑制された細胞を除去し、抗生物質抵抗性細胞をコンフルエントな状態（２〜３週間）になったときに集め、やはり抗生物質存在下に培養フラスコへ移す。つぎに、安定細胞株を、ガラス器内での血管新生試験により、それらの血管形成能を試験する。
６．結果。
６．１ 遺伝子の特定。
ＧＳ−Ｎ１、ＧＳ−Ｎ２、ＧＳ−Ｎ３、ＧＳ−Ｎ４、ＧＳ−Ｎ５、ＧＳ−Ｎ６、ＧＳ−Ｎ７、ＧＳ−Ｎ８、ＧＳ−Ｎ９、ＧＳ−Ｎ１０（またはＧＳ−Ｎ５４）、ＧＳ−Ｎ１１、ＧＳ−Ｎ１２、ＧＳ−Ｎ１３、ＧＳ−Ｎ１４およびＧＳ−Ｎ１５と名付けた核酸配列および上記核酸ＧＳ−Ｎ１〜ＧＳ−Ｎ１３およびＧＳ−Ｎ１５によってコードされ、それぞれアンジオインドゥシン、アンジオドッキン、アンジオブラスチン、アンジオレセプチン、アンジオデンシン、アンジオパルトネリン、バソセルペンチン、アンジオスルファチン、バソレセプチン、アンジオキナシン、バソスブストラチン、アンジオシグナリン、アンジオフォキュリン、アンジオヘリシン、アンジオアシリンと名付けられた蛋白質は、従来は、なんらかの生物学的役割をもつとはみなされておらず、ましてや血管新生過程や内皮細胞の毛細血管への分化においてなんらかの役割をもつとはみなされていなかった。これらの蛋白質を以下に記述する。
上記ディファレンシャル・ディスプレイ法によって、次のｍＲＮＡを同定・確認することができた：
− ＧＳ−Ｎ１：添付の配列表の配列番号：１によって特定される１６８３ｂｐのｍＲＮＡ。遺伝子バンクＧＥＮＢＡＮＫの配列データベースのＢＬＡＳＴ（ベーシック・ローカル・アラインメント・サーチ・ツール）検索により、これを受入れ番号ＢＣ００８５０２のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１５９からヌクレオチド４５８までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ１を確認・同定した。この蛋白質は、９９個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：５４として特定され、アンジオインドゥシンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ２：添付の配列表の配列番号：２によって特定される１６４９ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＮＭ ０２２８２３のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド３６７からヌクレオチド１０７１までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２を確認・同定した。この蛋白質は、２３４個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：５５として特定され、アンジオドッキンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ３：添付の配列表の配列番号：３によって特定される５７６６ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＢ００７９６３のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド９７８からヌクレオチド２４６５までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３を確認・同定した。この蛋白質は、４９５個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：５６として特定され、アンジオブラスチンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ４：添付の配列表の配列番号：４によって特定される５２４２ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＢ０３７８３５のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１からヌクレオチド４７６２までの部分コード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４を確認・同定した。この蛋白質は、１５８６個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：５７として特定され、アンジオレセプチンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ５：添付の配列表の配列番号：５によって特定される２１５３ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＫ０２５６８２のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド３８からヌクレオチド６９１までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ５を確認・同定した。この蛋白質は、２１７個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：５８として特定され、アンジオデンシンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ６：添付の配列表の配列番号：６によって特定される３００５ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＫ０２３２８４のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド９０からヌクレオチド７７３までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ６を確認・同定した。この蛋白質は、２２７個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：５９として特定され、バソセルペンチンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ７：添付の配列表の配列番号：７によって特定される４３９７ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＢ０３３０７３のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２８６からヌクレオチド２９４３までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ７を確認・同定した。この蛋白質は、８８５個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６０として特定され、アンジオスルファチンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ８：添付の配列表の配列番号：８によって特定される５８４４ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＢ０２３１８７のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１からヌクレオチド３４５６までの部分的コード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ８を確認・同定した。この蛋白質は、１１５１個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６１として特定され、バソレセプチンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ９：添付の配列表の配列番号：９によって特定される４２６６ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＢ０１４５８７のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１からヌクレオチド３５２８までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ９を確認・同定した。この蛋白質は、１１７５個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６２として特定され、アンジオキナシンと呼ばれる。
アンジオキナシンは、ＭＡＰ４Ｋ４（添付の配列表における配列番号：２２４）、受入れ番号ＸＭ ０３８７５１（ヌクレオチド配列：４１９７ｂｐ、蛋白質配列：１１４１アミノ酸）のホモログである。
細胞が外部刺激に応答する機構の一つは、外部シグナルの細胞内部への中継を確実に行う一群の蛋白質によって構成される連鎖の動員・補充である。シグナル伝達を確実に行うことによって、この連鎖は細胞内環境を変化させ、かくして遺伝子転写を制御する（総説：アヴルーフ（Ａｖｒｕｃｈ）、１９９８、モレキュラー・アンド・セリュラー・バイオケミストリー（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、１８２、３１−４８；カリン（Ｋａｒｉｎ）、１９９８、アナルズ・オブ・ザ・ニューヨーク・アカデミー・オブ・サイエンシズ(Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．)、８５１，１３９−１４６）。これらの多数の連鎖、従って、進化を通じて高度に保存されてきたシグナル伝達経路は、まとめて、分裂促進剤によって活性化される蛋白質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路と呼ばれる（グプタ（Ｇｕｐｔａ）ら、１９９６、エンボ・ジャーナル（ＥＭＢＯ Ｊ．）、１５、２７６０−２７７０；マダーニ（Ｍａｄｈａｎｉ）とフィンク（Ｆｉｎｋ）、１９９８、トレンズ・イン・ジェネティックス（Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．）、１４、１５１−１５５）。標準的ＭＡＰＫ経路は、増殖因子が細胞表面のそれらの受容体に結合して、Ｒａｓ蛋白質、ＧＴＰアーゼを活性化することによって惹起される。この経路は、結果として、細胞外シグナルによって調節されるキナーゼ蛋白質（ＥＲＫ）の活性化をもたらし、遺伝子転写および細胞増殖に至らしめる。ＭＡＰＫに平行した経路が、浸透圧ショック、細胞毒性をもつ諸産物、ＵＶ照射あるいは炎症性サイトカイン類などのストレス因子によって刺激される。この経路が、結果として、ｃ−Ｊｕｎ−Ｎ末端キナーゼ（ＳＡＰＫ／ＪＮＫ）の名で知られているストレスにより活性化されるキナーゼ蛋白質を活性化させる（カリン（Ｋａｒｉｎ）、１９９８、アナルズ・オブ・ザ・ニューヨーク・アカデミー・オブ・サイエンシズ(Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．)、８５１，１３９−１４６）。ストレスによって活性化される第二の経路が、ＭＡＰＫｐ３８の活性化をもたらす。ストレスによる活性化の影響は、増殖、分化あるいは遺伝子転写に及び、細胞のタイプおよび刺激に応じて、細胞サイクルの休止および／またはアポトーシスに至らしめる（カリン（Ｋａｒｉｎ）、１９９８、アナルズ・オブ・ザ・ニューヨーク・アカデミー・オブ・サイエンシズ、８５１，１３９−１４６）。
血管新生の間の血管新生因子または血管新生抑制因子によって惹起されるシグナル伝達の経路においてのＭＡＰＫ１および２ならびにＭＡＰＫｐ３８の役割について多くの研究が報告しているが、この過程におけるＭＡＫＰ４については、なんらの役割も示されていない（タナカら、１９９９、ジャパン・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ（Ｊｐｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ）、９０：６４７−６５４；エルドライヒ・エプスタイン（Ｅｒｄｒｅｉｃｈ−Ｅｐｓｔｅｉｎ）ら、２０００、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ）、６０：７１２−７２１；グプタ（Ｇｕｐｔａ）ら、１９９９、エクスペリメンタル・セル・リサーチ（Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ）、２４７：４９５−５０４；
ベイス（Ｂａｉｓ）ら、１９９８、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、３９１：２４−２５；ルーソー（Ｒｏｕｓｓｅａｕ）ら、オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）、１９９７、１５：２１６９−２１７７；ショア（Ｓｈｏｒｅ）ら、１９９７、プラセンタ（Ｐｌａｃｅｎｔａ）、１８：６５７−６６５）。
ＭＡＰＫ４は、ＭＡＰＫファミリーのメンバーの一員である。このキナーゼは、ストレスおよび／または炎症性サイトカインに呼応して、ｃ−Ｊｕｎ−Ｎ末端に直接作用するキナーゼ類（ＪＮＫ）を直接燐酸化し、従って活性化する。ＭＡＰＫ４は種々の組織で発現されるが、骨格筋および脳におけるこのキナーゼの豊富な発現が認められている。ＭＡＰＫ４遺伝子欠損マウスは肝発生異常を生じ、１４日目には胚形成期において死亡する。しかし、ＭＡＰＫ４欠損細胞株は得られている。これらの株は、ＪＮＫおよび転写因子ＡＰ−１に依存する遺伝子転写がないことを特徴とする。また、ＭＡＰＫ４欠損Ｔリンパ球は、Ｔ細胞受容体の活性化に応答してのＩＬ−２産生の脱共役を示し、このことは、炎症過程においてＭＡＰＫ４／ＪＮＫが重要な役割を果すことを示唆する。ある種の癌腫におけるＭＡＰＫ４の変異は、それが腫瘍抑制因子の役割を果しうることを示す。ＭＡＰＫ４の発現および活性の調節・制御は、現在、熱心な分析・研究の対象になっているけれども、それらは、抗炎症および抗癌療法を完成するためのアプローチに含まれている。しかし、血管新生におけるＭＡＰＫ４の役割は、今日まで明らかにされていなかった。
ペドラム（Ｐｅｄｒａｍ）ら（エンドクリノロジー（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）、２００１、１４２：１５７８−８６）は、ナトリウム排泄増加ペプチドが、ＶＥＧＦ誘発血管新生を抑制または阻害することを示し、また、ｃ−Ｊｕｎ−Ｎ末端に直接作用するキナーゼ類の活性化が、ＶＥＧＦによる血管新生誘発における重要な一段階であることも示した。これに対し、ヒメネス（Ｊｉｍｅｎｅｚ）ら（オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）、２００１、２０：３４４３−３４４８）は、ｃ−Ｊｕｎ−Ｎ末端に作用するキナーゼ類の活性化が、トロンボスポンジン１による新血管形成の阻害に必要であると、報告している。
いずれにしても、これらの最近の両研究は、血管新生の調節におけるＭＡＰ４Ｋ４の特異的な役割に関するものではない。
− ＧＳ−Ｎ１０：添付の配列表の配列番号：１０によって特定される２０３４ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＸＭ ０３５６５８のものであると同定できる。
この配列は、配列ＧＳ−Ｎ５４のホモログである。
ＧＳ−Ｎ５４：添付の配列表の配列番号：１６によって特定される４７４９ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＫ０２４２４８のものであると同定できる。
ＧＳ−Ｎ１０なるｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド６１８からヌクレオチド１７８７までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ１０を確認・同定した。この蛋白質は、３８９個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６３として特定され、バソスブストラチンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ１１：添付の配列表の配列番号：１１によって特定される１８１７ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＮＭ ０３２１８１のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド４３９からヌクレオチド８９７までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ１１を確認・同定した。この蛋白質は、１５２個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６４として特定され、アンジオシグナリンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ１２：添付の配列表の配列番号：１２によって特定される４１３１ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＢ０２３２３３のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１からヌクレオチド２３８４までの部分的コード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ１２を確認・同定した。この蛋白質は、７９３個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６５として特定され、アンジオフォキュリンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ１３：添付の配列表の配列番号：１３によって特定される２５６６ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＸＭ ０１８２７３のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド４２６からヌクレオチド２３４５までのコード配列をもつ。すなわち、我々は、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ１３を確認・同定した。この蛋白質は、６３９個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６６として特定され、アンジオヘリシンと呼ばれる。
− ＧＳ−Ｎ１４：添付の配列表の配列番号：１４によって特定される１８３０ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＡＫ０２２１０９のものであると同定できる。
この配列はコード配列を含まない。
− ＧＳ−Ｎ１５：添付の配列表の配列番号：１５によって特定される６２５３ｂｐのｍＲＮＡ。ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースのＢＬＡＳＴ検索により、これを受入れ番号ＮＭ ０１４８７３のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２２８からヌクレオチド１３４０までのコード配列をもつ。すなわち、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ１５が確認・同定された。この蛋白質は、３７０個のアミノ酸から構成され、添付の配列表において配列番号：６７として特定され、アンジオアシリンと呼ばれる。
添付の配列表において配列番号：１７〜配列番号：５３および配列番号：２２５によって特定されたＧＳ−Ｎ１６〜ＧＳ−Ｎ５３と呼ぶ核酸の配列ならびにそれぞれ該核酸配列によってコードされ、添付の配列表において配列番号：６８〜配列番号：１０２によって特定された蛋白質は、血管新生または内皮細胞の毛細管への分化の過程において生物学的役割をもつと以前に確認されたことはなかった。これらの配列を以下に記述する。
− ＧＳ−Ｎ１６：添付の配列表の配列番号：１７によって特定される３１３９ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ０１１８３３（ホモ・サピエンス・ホスドゥシン様（ＰＤＣＬ））のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１６７からヌクレオチド１０７２までのコード配列をもつ。すなわち、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ１６が確認・同定された。
添付の配列表において配列番号：６８として特定される配列をもつこの蛋白質は、３０１個のアミノ酸から構成され、ＰＤＣＬと呼ばれるホスドゥシンのアナログである。
Ｇ蛋白質類（グアニン結合性蛋白質類）は、膜貫通受容体を通しての適切な細胞内エフェクターへの細胞外シグナルの伝達による膜貫通シグナル伝達の経路において重要な役割を果す（ギルマン（Ｇｉｌｍａｎ）、１９８７、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー(Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．)、５６、６１５−６４９；サイモン（Ｓｉｍｏｎ）ら、１９９１、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２５２、８０２−８０８）。リガンドが結合したのち、該受容体は、ヘテロ三量体Ｇ蛋白質のアルファサブユニット上でのＧＤＰとＧＴＰとの交換に対して触媒作用を及ぼし、これにより、それの活性化およびアルファサブユニット−ＧＴＰのベータおよびガンマサブユニットからの解離が惹起される（ギルマン（Ｇｉｌｍａｎ）、１９８７、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー、５６、６１５−６４９）。Ｇ蛋白質に依存するシグナル伝達経路は、同時に刺激および阻害という多重応答を増幅し、統合するのによく適合しており、細胞機能の上でのそれらの重要性は、それらが厳密に調節されるというものである。ＰｈＬＰ（ホスドゥシン様蛋白質）は、これらの調節要素の一つであり、それはホスドゥシンおよびそれのアイソフォームであって、Ｇ蛋白質のベータ／ガンマサブユニットに結合して、それらの機能を阻害する蛋白質類のファミリーに属する（リー（Ｌｅｅ）ら、１９８７、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）２６、３９８３−３９９０；マイルズ（Ｍｉｌｅｓ）ら、１９９３、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．）、９０、１０８３１−１０８３５；クラフト（Ｃｒａｆｔ）ら、１９９８、バイオケミストリー、３７、１５７５８−１５７７２）。網膜の光受容細胞において強く発現されるホスドゥシン（リー（Ｌｅｅ）ら、１９８７、バイオケミストリー、２６、３９８３−３９９０；ウィルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）ら、１９９６、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７１，１９２３２−１９２３７）は、光への適応に介入すると提唱されている（ウィラードソン（Ｗｉｌｌａｒｄｓｏｎ）ら、１９９６、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ、９３、１４７５−１４７９）。これに対し、ＰｈＬＰの機能はあまり知られていない。この蛋白質は、より大量に発現され（マイルズ（Ｍｉｌｅｓ）ら、１９９３、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ、９０、１０８３１−１０８３５）、やはり、高い親和性でＧ蛋白質のベータ／ガンマサブユニットに結合する（シュレーダー（Ｓｃｈｒｏｄｅｒ）とローゼ（Ｌｏｈｓｅ）、１９９６、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ、９３、２１００−２１０４；ティボー（Ｔｈｉｂａｕｌｔ）ら、１９９７、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７２、１２２５３−１２２５６）。この蛋白質は、多くのタイプの細胞中で、Ｇ蛋白質依存性のいくつかの経路を調節するホスドゥシンのホモログであると提唱されている（サヴァージュ（Ｓａｖａｇｅ）ら、２０００、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２７５巻、３９、３０３９９−３０４０７）。
しかし、今日まで、ＰｈＬＰの血管新生調節における役割はなんら記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ１７：添付の配列表の配列番号：１８によって特定される２３２６ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＢＣ０１１８６０（リボソーム蛋白質Ｌ３（ＲＰＬ３））のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、添付の配列表において配列番号：６９によって特定されているヌクレオチド１０３０からヌクレオチド２２４１までのコード配列をもつ。この４０３アミノ酸のポリペプチド配列は、ヒトリボソームたんぱく質Ｌ３（ＲＰＬ３）と同一（１００％同一）であり、これの核酸配列はより短く、受入れ番号ＢＣ００６４８３（配列番号：２８５）、ＢＣ０１２７８６（配列番号：２８６）である。
リボソーム蛋白質Ｌ３（ＲＰＬ３）は、高度に保存された蛋白質であり（ヘルヴィッヒ（Ｈｅｒｗｉｇ）ら、１９９２、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ）、２０７（３）：８７７−８５；ヴァン・ラーイ（Ｖａｎ Ｒａａｙ）ら、１９９６、ジェノミックス（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）：３７（２）：１７２−６）、リボソーム大サブユニット中に局在する。大腸菌では、この蛋白質は、２３ＳリボソームＲＮＡに結合し、リボソームのペプチジルトランスフェラーゼ中心の形成に関与することが知られている（ノラー（Ｎｏｌｌｅｒ）、１９９３、バクテリオロジー（Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．）１７５：５２９７−５３００３９；ノラー（Ｎｏｌｌｅｒ）、１９９７、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）６６：６７９−７１６）。
リボソーム蛋白質Ｌ３の差次的発現が多くの研究において証明されている：マウスの肥満研究モデルでの骨格筋において（ヴィセント（Ｖｉｃｅｎｔ）ら、１９９８、ダイアビーティズ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）４７：１４５１−８）、エネルギー平衡の調節においてＲＬＰ３を必要とするマウスの視床下部および褐色脂肪組織において（アラン（Ａｌｌａｎ）ら、２０００、フィジオロジカル・ジェノミックス（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）、３：１４９−１５６）。しかし、血管新生の間におけるあるいは血管新生の調節における差次的発現については記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ１８：添付の配列表の配列番号：１９によって特定される３９３７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ０４２７９８（蛋白質２０、リングフィンガー蛋白質２０（ＲＮＦ２０））のものであると同定できる。
このｍＲＮＡは、ヌクレオチド８９からヌクレオチド３０１６までのコード配列をもち、それの直接翻訳により、添付の配列表において配列番号：７０として特定された、９７５個のアミノ酸から構成される蛋白質ＲＮＦ２０のホモログ蛋白質（ＧＳ−Ｐ１８）を同定・確認することができる。
このＧＳ−Ｐ１８の配列は、ＧＥＮＢＡＮＫデータベース中の受入れ番号ＡＦ２６５２３０および添付の配列表中の配列番号：２８７として特定されるヌクレオチド配列から推定される蛋白質配列と完全な一致を示す。両蛋白質に対応する核酸配列は互いに９９％の相同性を示す。
蛋白質ＲＮＦ２０は、やはりあまり知られていないが、それの特徴はリングフィンガードメインに存在することである。リングフィンガー蛋白質は、シグナル伝達、発癌、アポトーシス、発生、分化、遺伝子調節、ユビキチン化などの種々の細胞過程に寄与する大型蛋白質複合体からなる構造体の形成において重要な役割を果しうる（ソーリン（Ｓａｕｒｉｎ）ら、１９９６、トレンズ・イン・バイオケミカル・サイエンシズ（Ｔｒｅｎｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．）、２１、２０８−２１４；ボーデン（Ｂｏｒｄｅｎ）、２０００、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、２９５、１１０３−１１１２；トプク（Ｔｏｐｃｕ）ら、１９９９、オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）１８、７０９１−７１００）。
今日まで、ＲＮＦ２０蛋白質が血管新生調節に関与しているとの記載はない。
− ＧＳ−Ｎ１９：添付の配列表の配列番号：２０によって特定される２１６７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＢＣ００２７８１（スプライシング因子、アルギニン／セリンリッチ４のアナログ蛋白質）のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１０７からヌクレオチド１５９１までのコード配列を呈する。すなわち、このｍＲＮＡの翻訳で生じ、添付の配列表において配列番号：７１として示されている蛋白質ＧＳ−Ｐ１９が同定・確認された。４９４個のアミノ酸からなるこの蛋白質は、ＳＲｐ７５とも呼ばれるスプライシング因子、アルギニン／セリンリッチ４（ＳＦＲＳ４）のホモログであり、同じ特徴的なドメインを示す。
ＳＲｐ７５は、Ｎ末端に、保存されたドメイン、ＲＲＭ（ＲＮＡ認識モチーフ）、グリシンリッチの領域、ＲＲＭに相同の内部領域および本質的に交互のセリン残基とアルギニン残基からなる長い（３１５アミノ酸）Ｃ末端領域を含んでいることから、ＳＲ蛋白質のファミリーに属する（ツァーラー（Ｚａｈｌｅｒ）ら、モレキュラー・アンド・セリュラー・バイオロジー（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ）１９９３年７月；１３（７）：４０２３−８）。ＳＲ蛋白質類は、構成的スプライシングに必要な核燐蛋白質のファミリーに属するが、選択的スプライシングの調節に影響を与えもする。ＳＲ蛋白質類は、モジュール構造（１つまたは２つのＲＲＭドメインと１つのＲＳドメイン）を有する。ＳＲ蛋白質類の各々のドメインは機能的モジュールである。ＲＲＭドメインの協調作用がＲＮＡ類へのそれらの結合の特異性を決定し、その一方、ＲＳドメインがスプライシング活性化因子として機能する（カセレス（Ｃａｃｅｒｅｓ）ら、１９９７、ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．）、１３８、２２５−２３８；チャンドラー（Ｃｈａｎｄｌｅｒ）ら、１９９７、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、９４、３５９６−３６０１；マエダら、１９９９、モレキュラー・アンド・セリュラー・バイオロジー（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．）、１９、１８５３−１８６３；グレイヴリー（Ｇｒａｖｅｌｅｙ）とマニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）、１９９８、モレキュラー・アンド・セリュラー（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ）、１、７６５−７７１）。種々の研究により、特定のＳＲ蛋白質類について、それらが種々の組織において差次的に発現されることから、プレｍＲＮＡの選択的スプライシングにおけるユニークな機能を示唆できるようになっている。たとえば、これらのＳＲ蛋白質類は、細胞の発生、分化の過程でのスプライシングの調節において重要であると述べられている（ツァーラー（Ｚａｈｌｅｒ）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）１９９３年４月９日；２６０（５１０５）：２１９−２２２；フー（Ｆｕ）、１９９３、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、３６５（６４４１）：８２−８；カセレス（Ｃａｃｅｒｅｓ）とクレイナー（Ｋｒａｉｎｅｒ）、１９９７、（クレイナー編）、オックスフォード大学印刷局、オックスフォード、英国、１７４−２１２頁；ヴァルカルセル（Ｖａｌｃａｒｃｅｌ）とグリーン（Ｇｒｅｅｎ）、１９９６、トレンズ・イン・バイオケミカル・サイエンシズ（Ｔｒｅｎｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ．）、２１（８）：２９６−３０１）。最近の一研究は、種々のリンパ系細胞株においてＳＲｐ７５の発現レベルが変化することを示している（ダム（Ｄａｍ）ら、１９９９、ビオキミカ・ビオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ）；１４４６（３）：３１７−３３）。
ＳＦＲＳ４またはＳＲｐ７５についても、この因子のホモログ蛋白質についても、今日まで、血管新生の調節におけるなんらの役割も記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ２０：添付の配列表の配列番号：２１によって特定される５８０１ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号Ｕ６５０９０（カルボキシペプチダーゼＤ）のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド３６からヌクレオチド４１６９までのコード配列を有する。すなわち、このｍＲＮＡの翻訳で生じ、添付の配列表において配列番号：７２として示されている蛋白質ＧＳ−Ｐ２０が同定・確認された。カルボキシペプチダーゼＤと呼ばれるこの蛋白質は、１３７７個のアミノ酸から構成されている。
このカルボキシペプチダーゼＤ（セリンペプチダーゼ類からなるＳ１０ファミリーのＣＤＰ）は、膜貫通蛋白質（１８０ｋＤａ）で、トランスゴルジ網中の蛋白質類、とりわけ増殖因子類およびそれらの受容体類：インスリン受容体、インスリン様増殖因子受容体を成熟させる（レズニク（Ｒｅｚｎｉｋ）ら、１９９８、ジャーナル・オブ・ヒストケミストリー・アンド・サイトケミストリー（Ｊ；Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．）、４６、１３５９）。このものは、諸組織中に広く分布しているカルボキシペプチダーゼＥ（ＣＰＥ様）と同じ活性をもつカルボキシペプチダーゼである。カルボキシペプチダーゼ類は、ペプチドのＣ末端部分の塩基性アミノ酸類を除去して、生物活性産物あるいはＣ末端アミド基形成のための前駆体を生成させるのに関与する（フリッカー（Ｆｒｉｃｋｅｒ）、１９８８、アニュアル・レビュー・オブ・フィジオロジー（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．）、５０、３０９−３２１；フリッカー（Ｆｒｉｃｋｅｒ）、１９９１、（編）ペプチド・バイオシンセシス・アンド・プロセッシング（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ)、１９９−２３０頁、ＣＲＣプレス、ボカ・レイトン、フロリダ州）。
ＣＰＤは、ヒトでは、３つのカルボキシペプチダーゼ様ドメイン、１つの膜貫通ドメインおよびホスファターゼＡ蛋白質（ＰＰ２Ａ）に結合できる（ヴァルラモフ（Ｖａｒｌａｍｏｖ）ら、２００１、ジャーナル・オブ・セル・サイエンス（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１１４、３１１）１つの５８残基からなる小さい細胞質ゾルテールから構成されている（ノヴィコヴァ（Ｎｏｖｉｋｏｖａ）ら、１９９９、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７４、２８８８７）。このものは、同様の酵素的性質をもつ種間で高度に保存されている蛋白質である。
ＣＰＤは、ヒトの胎盤で豊富に発現される。それは、とりわけ内皮細胞、栄養芽層細胞、羊膜上皮細胞、絨毛膜の内皮性絨毛をもつ細胞または臍帯の平滑筋の血管細胞に見出される（レズニク（Ｒｅｚｎｉｋ）ら、１９９８、ジャーナル・オブ・ヒストケミストリー・アンド・サイトケミストリー（Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．）、４６、１３５９）。ＣＰＥおよびＣＰＤは、エンドセリン１（ＥＴ−１）の前駆体の生成にも関与する。このことは、ＣＰＥおよびＣＰＤが自己分泌および／またはパラ分泌機能をもつある種の臍帯および胎盤ペプチド類の生成に関与することを示唆する。
今日まで、血管新生におけるＣＰＤ蛋白質のいかなる調節役割も記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ２１：添付の配列表の配列番号：２２によって特定される８１７１ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ００４６５２（ユビキチン特異性プロテアーゼ９）のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド６０からヌクレオチド７７５１までのコード配列を有する。すなわち、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質が同定・確認された。ＧＳ−Ｐ２１と名付けたこの蛋白質、ユビキチン特異性プロテアーゼ９は、２５６３個のアミノ酸からなる。それは、添付の配列表において配列番号：７３として特定される。
蛋白質ＵＳＰ９Ｘは、細胞分裂、増殖、分化、シグナル伝達または転写の活性化に関与する多くの基質からユビキチン残基を除去することによって、ユビキチン化反応を反転させることを機能とする酵素群であるＵＢＰ類（ユビキチンプロテアーゼ類）のファミリーに属する（リウ（Ｌｉｕ）ら、１９９９、モレキュラー・アンド・セリュラー・バイオロジー（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ）、４、３０２９−３８；ジュー（Ｚｈｕ）ら、１９９６プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、９３：３２７５−３２７９；ヴェルマ（Ｖｅｒｍａ）ら、１９９５、ジーンズ・アンド・デヴェロップメント（Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．）９：２７２３−２７３５）。蛋白質のユビキチン化は、サイトカイン類によって活性化された翻訳などの生体内諸経路の調節における重要な現象である（ベイク（Ｂａｅｋ）ら、２００１、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、９８、６３６−６４２）。ＵＢＰ類は、分岐（ダイバージェント）配列によって取り囲まれた、とりわけ基質特異性を可能ならしめるＮ末端部分の、保存コアドメインが特徴的である。このＮ末端での分岐は、ＵＢＰ類という大きいファミリーのそれぞれのメンバーの局在性を変化させ、それらに多様な機能を付与する（リン（Ｌｉｎ）ら、２００１、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７６（２３）：２０３５７−６３）。胚発生におけるＵＢＰ１０９（パルケット（Ｐａｒｋｅｔ）ら、２０００、バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ）；３４９、４４３−５３）、造血細胞の分化におけるＵＢＰ４３（リウ（Ｌｉｕ）ら、１９９９、モレキュラー・アンド・セリュラー・バイオロジー（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ）、４、３０２９−３８）などのある種のユビキチン特異性プロテアーゼがいくつかの生物学的過程に関与していると、記載され、あるいは示唆されている。ユビキチン化経路は血管新生に関与している（ラヴィ（Ｒａｖｉ）ら、２０００、１４、３４−４４；サッター（Ｓｕｔｔｅｒ）ら、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ、９７、９号、４７４８−４７５３）。しかし、ＵＳＰ９Ｘは、今日まで、血管新生調節因子としては記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ２２：添付の配列表の配列番号：２３によって特定される３８５１ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ００２５２５（ナルジリシン（Ｎ−アルギニン二塩基性コンベルターゼ（ＮＲＤ１））のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１３６からヌクレオチド３７９５までのコード配列を呈する。すなわち、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２２が同定・確認された。この蛋白質ナルジリシンは、１２１９個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：７４として特定されている。
Ｎ−アルギニン二塩基性コンベルターゼ（ＮＲＤコンベルターゼ；ナルジリシン；ＥＣ３．４．２４．６１）は、ガラス器内において二塩基性部位にあるアルギニン残基のＮ末端側でペプチド（とくにソマトスタチン−２８、ダイノルフィン−Ａ、心房性ナトリウム利尿因子などの神経内分泌ペプチド）を特異的に切断するインスリナーゼファミリーのメタロエンドペプチダーゼである（コーエン（Ｃｏｈｅｎ）ら、１９９５、メソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．）、２４８、７０３−７１６；ホスピタル（Ｈｏｓｐｉｔａｌ）ら、１９９７、バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．）、３２７、７７３−７７９）。生体内では、その正確な機能はまだよく知られていないが、同じファミリーの酵素の多くが、プロホルモンおよびプロ蛋白質の成熟に関与している（ウィンター（Ｗｉｎｔｅｒ）ら、２０００、バイオケミカル・ジャーナル、３５１、７５５−７６４）。ＮＲＤコンベルターゼ活性は、主として内分泌組織中に、多くは精巣中に存在している（シェノー（Ｃｈｅｓｎｅａｕ）ら、１９９４，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２６９、２０５６−２０６１）。それは、細胞質中および細胞表面に同時に局在化されうる（ホスピタル（Ｈｏｓｐｉｔａｌ）ら、２０００、バイオケミカル・ジャーナル、３４９、５８７−５９７）。
現在、ＮＲＤコンベルターゼの発現および活性の調節について、わずかなことが知られている。活性は、該酵素の酸性（伸縮）ドメインに結合するアミン類によって調節されているようである（チュハイ（Ｃｓｕｈａｉ）ら、１９９８、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、３７（１１）：３７８７−９４）。レチノイン酸も、ヒト神経芽細胞株において該酵素の発現を調節できることが示されている（ドゥラウイ（Ｄｒａｏｕｉ）ら、１９９７、ジャーナル・オブ・ニュロオンコロジー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．）、３１、９９−１０６）。
成熟ラットにおいて、精子形成およびそれの鞭毛での濃縮の間、ＮＲＤコンベルターゼの発現が調節されることは、雄性生殖細胞の分化におけるこの酵素の役割を示唆している（シェノー（Ｃｈｅｓｎｅａｕ）ら、１９９６、ジャーナル・オブ・セル・サイエンス（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．）１０９、２７３７−２７４５）。この酵素が、神経細胞発生において特定の役割を果すと提唱されてもいる（フマガルリ（Ｆｕｍａｇａｌｌｉ）ら、１９９８、ジェノミックス（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）４７、２３８−２４５）。最近、ＮＲＤコンベルターゼが、細胞遊走を制御するヘパリン結合性ＥＧＦタイプ増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）に特異的な新規受容体として記載された（ニシら、２００１、エンボ・ジャーナル（ＥＭＢＯ Ｊ）、２０（１３）：３３４２−５０）。
それにひきかえ、今日まで、血管新生の調節におけるそれのなんらの役割も見出されていない。
− ＧＳ−Ｎ２３：添付の配列表の配列番号：２４によって特定される１３１０７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ０１６３０３（骨髄性／リンパ球性または混合系統白血病（ＭＬＬ）のｍＲＮＡ）のものであると同定できる。
配列番号：２４により特定されたｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１８７２からヌクレオチド１０００１までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２３が同定・確認された。それは、添付の配列表において配列番号：７５として特定されている。
この配列ＧＳ−Ｎ２３は、つぎの両配列と少なくとも８６％の相同性を示す：
− ＧＳ−Ｎ４７：添付の配列表の配列番号：４８によって特定される１４２５５ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号Ｌ０４７３１のものであると同定できる。
このｍＲＮＡ配列は、コード配列をもたない。それは、９０％の相同性で、配列ＧＳ−Ｎ２３を含んでいる。
− ＧＳ−Ｎ４８：添付の配列表の配列番号：４９によって特定される１１９１０ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ００５９３３のものであると同定できる。
配列番号：４８により特定されるｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１からヌクレオチド１１９１０までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４８が同定・確認された。このＭＬＬと呼ばれる蛋白質は、３９６９個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９９として特定されている。
ヒト１１番染色体のバンドｑ２３にある急性リンパ芽球性白血病−１（ＡＬＬ）−１または骨髄性／リンパ球性または混合系統白血病（ＭＬＬ）の遺伝子、さらにはヒトトリソラックス（ＨＲＸ）と呼ばれる遺伝子は、いくつものタイプの白血病と関連する局所的に再編成（欠失、部分的重複、転座）された染色体の多くの変化が起こる部位である。変化を受けた遺伝子から導かれる構造上の変異体である蛋白質が、造血細胞前駆細胞の悪性の形質転換を惹起すると推定される（ニルソン（Ｎｉｌｓｏｎ）、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ）、１９９６、９３（４）：９６６−７２；コバヤシら、１９９５、ルキーミア・アンド・リンフォマ（Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）、１７（５−６）：３９１−９）。
蛋白質ＭＬＬは、そのＣ末端部分に局在する２００アミノ酸の高度に保存されたジンクフィンガーおよびＳＥＴドメインからなるモチーフを有する大きい核蛋白質である。この蛋白質は、胚形成の間に大量に発現される；いくつかの研究によって、この蛋白質は、ホメオボックス遺伝子Ｈｏｘの正の調節因子であることが示されている（ユー（Ｙｕ）ら、１９９５、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）（ロンドン）３７８、５０５−５０８）。蛋白質ＭＬＬは、発生における転写維持に関与し、多重形態形成過程で機能すると記述されている（ユー（Ｙｕ）ら、１９９８、９５巻１８号、１０６３２−１０６３６）。蛋白質ＭＬＬは、細胞増殖および発生胚中での生存の同時調節においてある役割を果すと示唆されている（ハンソン（Ｈａｎｓｏｎ）ら、１９９９、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ）、９６、２５号、１４３７２−１４３７７）。
今日まで、蛋白質ＭＬＬについて、血管新生の調節におけるいかなる役割も記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ２４：添付の配列表の配列番号：２５によって特定される１０３３０ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号Ｕ７２９３７（ＤＮＡ依存性ヘリカーゼおよびＡＴＰアーゼ(ＡＴＲＸ)、選択的スプライシングの産物２）のものであると同定できる。
この配列は、下記配列と少なくとも９５％同一のそれのホモログである：
− ＧＳ−Ｎ４９：添付の配列表の配列番号：５０によって特定される１０４５２ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号Ｕ７２９３６のものであると同定できる。
配列番号：２５として特定されているｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２１６からヌクレオチド７６９４までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２４が同定・確認された。ＡＴＲＸ産物２と呼ばれるこの蛋白質は、２４９２個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：７６として特定されている。
配列番号：５０により特定されるｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド９５０からヌクレオチド７８１６までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳によって生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４９が同定・確認された。ＡＴＲＸ産物１と呼ばれるこの蛋白質は、２２８８個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：１００として特定されている。
配列番号：７６および１００により特定される蛋白質は、９０％相同性である。
ＡＴＲＸ（同義語ＸＮＰ、ＸＨ２）遺伝子は、１９９５年に同定・確認されて以来、多くの疾患の遺伝子であることが示されており、Ｘ染色体に関連する種々の症候群がこの遺伝子の変異に関連している（総説：ギボンズ（Ｇｉｂｂｏｎｓ）とヒッグズ（Ｈｉｇｇｓ）、２０００、アメリカン・ジャーナル・オブ・メディカル・ジェネティックス（Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ）、９７（３）：２０４−１２）。この遺伝子は、ヘリカーゼおよびＡＴＰアーゼからなるスーパーファミリーのサブグループＳＮＦ２の一蛋白質をコードし（ピケッツ（Ｐｉｃｋｅｔｔｓ）ら、１９９６、ヒューマン・モレキュラー・ジェネティックス（Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ）５（１２）：１８９９−９０７）、これのドメインは、蛋白質ＡＴＲＸが、クロマチンの構造および／または機能への影響を介して、転写調節においてある役割を果すことを示唆するが、その正確な役割は未知である。血管新生の調節におけるいかなる役割も、今日まで記述されていない。
− ＧＳ−Ｎ２５：添付の配列表の配列番号：２６によって特定される１７７７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ００６４７６（シアル酸−ＣＭＰトランスポーター、メンバー１（ＳＬＣ３５Ａ１））のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２８からヌクレオチド１０４１までのコード配列を呈する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２５が、同定・確認された。シアル酸−ＣＭＰトランスポーターと呼ばれるこの蛋白質は、３３７個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：７７として特定されている。
− ＧＳ−Ｎ５０：添付の配列表の配列番号：２２５によって特定される１８７４ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＥＣ００８３７２のものであると同定できる。配列番号：２２５によって特定されたｍＲＮＡの配列は、コード配列をもたない。
ＣＭＰ−シアル酸トランスポーターは、グリコシル化、とりわけシアリル化による成熟過程に関与する；それは、細胞質ＣＭＰ−シアル酸の、ゴルジ装置なるコンパートメントでの膜蛋白質または分泌蛋白質ならびに脂質のシアリル化に必要なゴルジ装置の膜を通しての輸送を可能ならしめる（ヒルシュベルク（Ｈｉｒｓｃｈｂｅｒｇ）とスナイダー（Ｓｎｉｄｅｒ）、１９８７、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、５６、６３−８８；ヒルシェベルク（Ｈｉｒｓｃｈｂｅｒｇ）、１９９６、オルガネラー・イオン・チャンネルズ・アンド・トランスポーターズ・ソサイアティ・オブ・ジェネラル・フィジオロジスト（Ｏｒｇａｎｅｌｌａｒ Ｉｏｎ Ｃｈａｎｎｅｌｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｓｔ）第４９回年次シンポジウム（Ｄ・Ｅ・クラップハム（Ｃｌａｐｈａｍ）とＢ・Ｅ・エールリッヒ（Ｅｈｒｌｉｃｈ）編）、１０５−１２０頁、ロックフェラ−大学印刷局、ニューヨーク）。ＣＭＰ−シアル酸の輸送の制御・調節も、腫瘍細胞表面においてシアリル化の増大が観察されていること（サンター（Ｓａｎｔｅｒ）ら、１９８９、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、１８１、２４９−２６０；サイトーら、１９９２、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２６７、５７００−５７１１；ブレサリエ（Ｂｒｅｓａｌｉｅｒ）ら、１９９６、ガストロエンテロロジー（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）、１１０、１３５４−１３６７；ゴアリク（Ｇｏｒｅｌｉｋ）ら、１９９７、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．）、５７、３３２−３３６）およびＣＭＰ−シアル酸トランスポーターを阻害すると腫瘍細胞の増殖および転移が減じること（Ｂ・Ｅ・ハーヴェー（Ｈａｒｖｅｙ）とＰ・トーマス（Ｔｈｏｍａｓ）（１９９３）バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）１９０、５７１−５７５）以外は、あまり知られていない。しかし、今日まで、血管新生調節へのこのトランスポーターの関与はなんら報告されていない。
− ＧＳ−Ｎ２６：添付の配列表の配列番号：２７によって特定される３９８２ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号Ｕ２６７１０のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド３２３からヌクレオチド３２７１までのコード配列を呈する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２６が、同定・確認された。このｃｂｌ−ｂと呼ばれる蛋白質は、９８２個のアミノ酸から構成されている。
それは、添付の配列表において配列番号：７８として特定されている。
Ｃｂｌ−ｂは、種を通じて高度に保存されているＣｂｌファミリーに属する。Ｃｂｌ蛋白質類は、それらのＮ末端の、ホスホチロシン類に結合すると推定されるドメインおよびＣ末端部分のリングフィンガーモチーフによって特徴付けられ、哺乳動物のＣｂｌ蛋白質類は、プロリンに富む領域、保存されたチロシン残基およびロイシンジッパーモチーフを含有する。Ｃｂｌ蛋白質類は、受容体蛋白質からチロシンキナーゼへのシグナル伝達に関与し、また、抗原およびサイトカイン受容体がそれらの細胞質テールに会合することによって、これら受容体のシグナルの連続性を確保する。Ｃｂｌ蛋白質は、細胞活性化後、これらの受容体のチロシンキナーゼモジュールおよび燐酸化チロシン類によって動員される。Ｃｂｌは、ドッキング蛋白質として機能し、アダプターＣｒｋおよびＶａｖのファミリーを含むＳＨ２およびＳＨ３ドメイン含有分子と会合する。Ｃｂｌ蛋白質類は、チロシンキナーゼ受容体のシグナル伝達の負の調節因子として（スミット（Ｓｍｉｔ）ら、クリティカル・レビュー・オブ・オンコジェネシス（Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｏｎｃｏｇ）１９９７；８：３５９−７９）、また、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーなどの受容体のシグナル伝達の正のモジュレーターとして（アーロン（Ａｒｒｏｎ）ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）２００１年８月１０日；２７６：３００１１−７）提唱されている。
造血細胞を含めて、多くの組織および細胞で大量に発現される（キーン（Ｋｅａｎｅ）ら、オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）１９９５年６月１５日；１０（１２）：２３６７−７７）蛋白質Ｃｂｌ−ｂは、リンパ球活性化の開始に関与する（バッハマイエル（Ｂａｃｈｍａｉｅｒ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）２０００、４０３：２１１−６；ファング（Ｆａｎｇ）ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）２００１；２７６：４８７２−８）。ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の調節サブユニットＰ８５が、それの基質であると同定されている。Ｃｂｌ−ｂは、それのユビキチンＥ３蛋白質に対するリガーゼ活性により、このＰ８５サブユニットを負の方向に調節する（Ｄ・ファング（Ｆａｎｇ）、ネイチャー・イミュノロジー（Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ）２００１年９月；２（９）：８７０−５）。Ｃｂｌ−ｂは、上皮成長因子受容体ＥＧＦＲのシグナル伝達の負の調節因子でもある（エッテンバーグ（Ｅｔｔｅｎｂｅｒｇ）ら、オンコジーン(Ｏｎｃｏｇｅｎｅ)１９９９；１８：１８５５−６６；エッテンバーグ（Ｅｔｔｅｎｂｅｒｇ）らジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）２００１；２７６：２７６７７−８４）。
これに対し、今日まで、Ｃｂｌ−ｂが血管新生調節においてなんらかの役割を果すことは記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ２７：添付の配列表の配列番号：２８によって特定される３３８５ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ３９５２９のものであると同定できる。
この配列は、つぎの配列と８６％の相同性を示す：
− 添付の配列表の配列番号：５１によって特定される４４６１ｂｐのｃＤＮＡ（ＤＫＦＺｐ５６４Ｄ１７３）。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＡＬ１１０２１２のものであると同定できる。相当するコード配列はない。
配列番号：２７として特定されるｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１０７からヌクレオチド４５１までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２８が単離・同定された。ヒストンＨ２Ａ．Ｆ／Ｚ変異体（Ｈ２ＡＶ）と呼ばれるこの蛋白質は、１１４個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：７９として特定されている。
真核生物の場合、クロマチンの基本単位は、ヌクレオソームである。ヌクレオソームは、八量体蛋白質のまわりに巻かれた１４６ｂｐのＤＮＡ配列、ヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４からなる（リュジェレ（Ｌｕｇｅｒｅｔ）ら、１９９７、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、３８９、２５１−２６０）。ヌクレオソームの構造の不均一性が、転写調節の機構となりうる。この不均一性は、ヒストンのアセチル化、燐酸化、メチル化、ユビキチン化などの翻訳後修飾によるか（ミッツェン（Ｍｉｚｚｅｎ）ら、コールド・スプリング・ハーバー・シンポジウム・オン・クォンティテイティヴ・バイオロジー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｓｙｍｐ Ｑｕｎａｔ Ｂｉｏｌ）１９９８；６３：４６９−８１；ワークマン（Ｗｏｒｋｍａｎ）とキングストン（Ｋｉｎｇｓｔｏｎ）、１９９８、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー(Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．)、６７：５４５−５７９）、またはヌクレオソームへのヒストン変異体の取り込みによって惹起される。ヒストンの様々な変異体が、特定の目的でのヌクレオソーム構造の特殊化を可能ならしめる；たとえば、精子に特異的なヒストンの変異体は、精子形成時に産生されるＤＮＡの劇的なコンパクション（緊密化）を容易にする（ウルフ（Ｗｏｌｆｆｅ）ら、１９９８、クロマチン（Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ）：構造と機能（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ）、第３版、アカデミックプレス、サンディエゴ；デネッケ（Ｄｏｅｎｅｃｋｅ）ら、１９９７、アドヴァンシズ・イン・エクスペリメンタル・メディシン・アンド・バイオロジー(Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．)、４２４、３７−４８）。
ヒストンＨ２Ａ．Ｆ／Ｚは、種間を通じて高度に保存されており、所与の種においてＳ期のヒストンＨ２Ａから実質的に分岐するヒストンＨ２Ａの変異体の一ファミリーである（ジャクソン（Ｊａｃｋｓｏｎ）ら、１９９６、トレンズ・イン・バイオケミカル・サイエンシズ（Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．）、２２１、４６６−４６７；ジアング（Ｊｉａｎｇ）ら、１９９８、バイオケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）、２４５、６１３−６１７）。Ｈ２Ａ．Ｆ／Ｚの正確な機能は未知であるが、このヒストンは、転写調節においてある役割を果すことができる。なぜなら、テトラヒメナにおいて、それの発現が転写上活性な大核と関連しており、ショウジョウバエにおいては、発生の間のクロマチンへのそれの取込みが、接合子遺伝子発現の始まりと同時に起こるからである（クラークソン（Ｃｌａｒｋｓｏｎ）ら、１９９９、ＤＮＡ・アンド・セル・バイオロジー（ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．）、１８、４５７−４６２；スタージェル（Ｓｔａｒｇｅｌｌ）ら、１９９３、ジーンズ・アンド・デヴェロップメント（Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．）、７、２６４１−２６５１）。
これに対し、今日まで、ヒストンＨ２Ａ．Ｆ／Ｚについて、血管新生調節におけるいかなる役割も知られていない。
− ＧＳ−Ｎ２８：添付の配列表の配列番号：２９によって特定される１１２８ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ００１３２０のものであると同定できる。
この配列は、ＧＥＮＢＡＮＫデータベース中の受入れ番号Ｍ３０４４８として特定され、添付の配列表において配列番号：２８９として特定される配列と７７％の相同性をもつ。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド９７からヌクレオチド７４４までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２８が同定・確認された。カゼインキナーゼＩＩと呼ばれるこの蛋白質は、ベータサブユニットが２１５個のアミノ酸で構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８０として特定される。
カゼインキナーゼＩＩ（ＣＫＩＩ）は、真核細胞の細胞質ゾルならびに核中に局在している偏在性セリン／スレオニンキナーゼである。ＣＫＩＩは、１００を超える基質を燐酸化し、それら基質の多くが、細胞分裂の制御およびシグナル伝達に関与している（総説：アジェンデ（Ａｌｌｅｎｄｅ）とアジェンデ（Ａｌｌｅｎｄｅ）、１９９５、ザ・ファセブ・ジャーナル（Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ）、９巻、３１３−３２３）。ＣＫＩＩは、２つのアルファおよび／またはアルファ’触媒サブユニットおよび２つの調節（ベータ）サブユニットからなる四量体の形で存在する。ベータサブユニットは、アルファおよび／またはアルファ’サブユニットを安定化するように作用し、基質の特異性および該酵素の動力学的性質にも影響するようである（ドブロヴォルスカ（Ｄｏｂｒｏｗｏｌｓｋａ）ら、１９９９、モレキュラー・アンド・セリュラー・バイオケミストリー（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ）、１９１（１−２）：３−１２）。いくつかの研究により、カゼインキナーゼの活性は、インスリン、ＩＧＦ−Ｉ，ＥＧＦなどのホルモン類または増殖因子類によって刺激されることが示されている（ソマーコーン（Ｓｏｍｍｅｒｃｏｒｎ）ら、１９８７、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ）、８４、８８３４−８８３８；クラールルント（Ｋｌａｒｌｕｎｄ）ら、１９８８、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２６３、１８７２−１５８７５；アッカーマン（Ａｃｋｅｒｍａｎ）とオシャロフ（Ｏｓｈｅｒｏｆｆ）、１９８９、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６４、１１９５８−１１９６５）。この活性化の結果、カゼインキナーゼのベータサブユニットの燐酸化が増大する（アッカーマン（Ａｃｋｅｒｍａｎ）ら、１９９０、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ、８７、８２１−８２５）。さまざまな研究により、腫瘍中での調節されなくなったＣＫＩＩの発現が示されている。最近の研究は、腫瘍細胞中でのＣＫＩＩの過剰発現が、腫瘍細胞の増殖の反映であるのみならず、それが腫瘍の病理生物学的特徴をも反映しうることを示している。ＣＫＩＩの調節不調は、これらの細胞のアポトーシス活性に影響を与えうるであろう（総説：トーフィック（Ｔａｗｆｉｃ）ら、２００１、ヒストロジー・アンド・ヒストパソロジー（Ｈｉｓｔｏｌ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ）、１６（２）：５７３−８２）。この酵素は、腫瘍形成においてある役割をもちうると記載されている（ユー（Ｙｕ）ら、ジャーナル・オブ・セリュラー・バイオケミストリー（Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ）、１９９９、７４（１）：１２７−３４）。
これに対し、血管新生過程でのＣＫＩＩまたはそのベータサブユニットの差次的発現については、なんら記載されておらず、血管新生調節における役割もなんら示されていない。
− ＧＳ−Ｎ２９：添付の配列表の配列番号：３０によって特定される１８２０７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＡＦ１５６１００のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２３０からヌクレオチド１７１４０までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ２９が同定・確認された。ヘミセンチンと呼ばれるこの蛋白質は、５６３６個のアミノ酸で構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８１として特定される。
この配列ＧＳ−２９は、下記の配列ＧＳ−Ｎ５２を包含し、それと９９％の相同性を示す。
− ＧＳ−Ｎ５２：添付の配列表の配列番号：５２によって特定される８５４６ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＡＪ３０６９０６のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、添付の配列表において配列番号：１０１として特定されている２６７３アミノ酸の蛋白質ＧＳ−Ｐ５２をコードする配列を有する。
最近の記載では、ヘミセンチンは、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞外マトリックスの一蛋白質であり、基底膜への細胞の付着およびその表面での転移に関与する（フォーゲル（Ｖｏｇｅｌ）とヘッジコック（Ｈｅｄｇｅｃｏｃｋ）、２００１、デヴェロップメント（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、１２８（６）：８８３−９４）。血管新生調節におけるそれの役割は、現時点では記載されていない。この蛋白質は、フィビュリン（ｆｉｂｕｌｉｎ）ファミリーに属するフィビュリン−６の配列を含む。フィビュリン類は、細胞外マトリックスおよび血液の蛋白質であり、そのうちもっともよく研究されている２つのメンバーがフィビュリン１およびフィビュリン２である（アレッサンド（Ａｌｅｘａｎｄｅ）とデトゥイラー（Ｄｅｔｗｉｌｅｒ）、１９８４、バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．）、２１７、６７−７１；アーグレイヴズ（Ａｒｇｒａｖｅｓ）ら、１９９０、ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．）、１１１、３１５５−３１６４；クルーゲ（Ｋｌｕｇｅ）ら、１９９０、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー(Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．)、１９３、６５１−６５９；パン（Ｐａｎ）ら、１９９３、ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．）、１２３、１２６９−１２７７）。それらは、フィブロネクチン、ラミニン、フィブリノーゲンなどの細胞接着に関与する蛋白質と相互作用し（ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ら、１９９４、ジャーナル・オブ・セル・サイエンス（Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ）、１０７（第１部）、３２９−３８；トラン（Ｔｒａｎ）ら、１９９５、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７０（３３）：１９４５８−６４；ゴディナ（Ｇｏｄｙｎａ）ら、１９９５、マトリックス・バイオロジー（Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ）、１４（６）：４６７−７７）、あるいは血管新生阻害因子であるエンドスタチンと相互作用し（ササキら、１９９８、エンボ・ジャーナル（ＥＭＢＯ Ｊ）、１７（１５）：４２４９−５６）、このことが、それらに、種々の生物学的過程における調節機能を付与する。たとえば、フィビュリン１は、ベータアミロイド前駆体蛋白質の神経栄養作用の調節において（オオサワら、２００１、ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー（Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ）、７６（５）：１４１１−２０）、ホメオスタシスおよび血栓形成において（トラン（Ｔｒａｎ）ら、１９９５、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２７０（３３）：１９４５８−６４）、ある役割を演じることができる。
これに対し、フィブロネクチン６の機能は未知であり、とりわけ、血管新生調節におけるこの蛋白質の役割については、今日まで、何ら記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ３０：添付の配列表の配列番号：３１によって特定される４３２５ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ０１５１８０のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１２３からヌクレオチド３０４１までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３０が同定・確認された。ＳＹＮＥ−２と呼ばれるこの蛋白質は、１０９２個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８２として特定される。
Ｓｙｎｅ−２蛋白質はあまりよく知られていない。最近、それは、ホモログ蛋白質であるＳｙｎｅ−１（シナプス核膜−１）蛋白質とともに記載されている。Ｓｙｎｅ−１蛋白質は、平滑筋、心筋および骨格筋の細胞中の核膜に結び付けられる。Ｓｙｎｅ−１は、シナプス核と選択的に結び付けられることが見出された最初の蛋白質として記載されており、筋接合部における核集合体の形成または維持に関与することが示唆されている（アッペル（Ａｐｐｅｌ）ら、２０００、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７５巻４１号、３１９８６−３１９９５）。Ｓｙｎｅ−２は、分布において、またより弱い発現レベルによって、Ｓｙｎｅ−１とは異なる。両ホモログ蛋白質は、細胞骨格の構造に含まれる種々の蛋白質中に存在するスペクトリンの反復ドメインを呈する（ヤン（Ｙａｎ）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）１９９３年１２月２４日；２６２（５１４２）：２０２７−３０）。
今日まで、血管新生調節におけるＳｙｎｅ−２のいかなる役割も記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ３１：添付の配列表の配列番号：３２によって特定される４２４８ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＡＦ２６１７５８のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１００からヌクレオチド１６５０までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３１が、同定・確認された。セラジン−１と呼ばれるこの蛋白質は５１６個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８３として特定される。
添付の配列表において配列番号：３２として特定されているｍＲＮＡのこの配列は、４１８７ｂｐの配列のホモログである。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号Ｄ１３６４３のものであると同定できる。それは、添付の配列表において配列番号：５３として特定されている。
このｍＲＮＡは、部分コード配列を呈する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる５２８アミノ酸の蛋白質ＧＳ−Ｐ５３が同定・確認された。それは、添付の配列表において配列番号：１０２として特定されている。
セラジン−１遺伝子は、最近、ヒト脳中に同定・確認された。セラジン−１は、ベータ−アミロイドペプチドおよび酸化的ストレスの毒性に対して細胞を保護するための重要な因子であると思われる（グリーヴ（Ｇｒｅｅｖｅ）ら、２０００、ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス（Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ）、２０（１９）：７３４５−７３５２）。これらの著者らは、セラジン−１が、細胞の生存および死の調節に関与している可能性があること、および、特定のニューロンにおけるこの蛋白質の発現低下が、アルツハイマー病における選択的易傷性の原因である可能性があることを示唆している。
これに対し、今日まで、セラジン−１について、血管新生調節における役割についての何らの記載もない。
− ＧＳ−Ｎ３２：添付の配列表の配列番号：３３によって特定される７７６４ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ００１２７１のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド７０８からヌクレオチド５９２７までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３２が、同定・確認された。ＣＨＤ２と呼ばれるこの蛋白質は、１７３９個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８４として特定される。
蛋白質ＣＨＤ２は、クロモドメインによって特徴付けられるＣＨＤ蛋白質類のファミリーに属する。「クロモ」（ｃｈｒｏｍｏ：ＣＨＲｏｍａｔｉｎ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ＭＯｄｉｆｉｅｒ）ドメインは、ヘテロクロマチンに結合するキイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）のＨＰ１蛋白質を含む種々の蛋白質中に見出される約６０個のアミノ酸からなる保存領域である；このファミリーの４つの遺伝子が、ヒトゲノム中で同定・確認されている：ＣＨＤ１、ＣＨＤ２、ＣＨＤ３およびＣＨＤ４である（ウッデッジ（Ｗｏｏｄａｇｅ）ら、１９９７、９４、１１４７２−１１４７７）。クロモドメインは、それらの蛋白質に、クロマチンのコンパクションにおける役割を付与する（パロ（Ｐａｒｏ）ら、１９９０、トレンズ・イン・ジェネティックス（Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．）６：４１６−４２１；シング（Ｓｉｎｇｈ）ら、１９９１、ニュクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．）１９：７８９−７９４；オースランド（Ａａｓｌａｎｄ）とスチュアート（Ｓｔｅｗａｒｔ）、１９９５、ニュクレイック・アシッズ・リサーチ、２３：３１６８−３１７３；クーニン（Ｋｏｏｎｉｎ）ら、１９９５、ニュクレイック・アシッズ・リサーチ、２３：４２２９−４２３３；メスナー（Ｍｅｓｓｎｅｒ）ら、１９９２、ジーンズ・アンド・デヴェロップメント（Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．）、６、１２４１−１２５４；ジェームズ（Ｊａｍｅｓ）とエルジン（Ｅｌｇｉｎ）、１９８６、モレキュラー・アンド・セリュラー・バイオロジー（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ）、６、３８６２−３８７２）。ＣＨＤ類は、第二の保存ドメイン、ＤＮＡとの結合に関与するドメインＭｙｂを含有する（クレンプナウアー（Ｋｌｅｍｐｎａｕｅｒ）とジッペル（Ｓｉｐｐｅｌ）、１９８７、エンボ・ジャーナル（ＥＭＢＯ．Ｊ．）、６：２７１９−２７２５）。これらのドメインに加えて、ＣＨＤ２は、種々の過程に関与する蛋白質、たとえば転写調節（たとえば、ＳＮＦ２、ＳＴＨ１、ブラーマ（ｂｒａｈｍａ）、ＭＯＴ１）、ＤＮＡ修復（たとえば、ＥＲＣＣ６、ＲＡＤ１６、ＲＡＤ５）、ＤＮＡ組換え（たとえばＲＡＤ５４）に関与する蛋白質中に見出されるＳＮＦ２ドメインを含有し（総説：アイゼン（Ｅｉｓｅｎ）ら、１９９５、ニュクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ）、２３（１４）：２７１５−２３）、最後に、ヘリカーゼスーパーファミリーの保存ドメイン「ヘリカーゼＤＥＡＨボックス」を含有する。ヘリカーゼ類は、核酸の巻戻しに関与する（マッツォン（Ｍａｔｓｏｎ）とカイザー・ロジャー（Ｋａｉｓｅｒ−Ｒｏｇｅｒ）、１９９０、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）５９、２８９−３２９）。ヘリカーゼ「ＤＥＡＨボックス」は、ｍＲＮＡのスプライシングおよび細胞サイクルの進行に関与することが提唱されている（ルドグレン（Ｌｕｄｇｒｅｎ）ら、１９９６、モレキュラー・バイオロジー・オブ・ザ・セル（Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ）７、１０８３−１０９４；イマムラら、１９９８、ニュクレイック・アシッズ・リサーチ、２６（９）：２０６３−８)。
ＣＨＤ類は、遺伝子転写の調節において重要な役割を演じる（デルマ（Ｄｅｌｍａｓ）ら、１９９３、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、９０、２４１４−２４１８；ウッデッジ（Ｗｏｏｄａｇｅ）ら、１９９７、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユー・エス・エイ、９４、１１４７２−１１４７７；トラン（Ｔｒａｎ）ら、２０００、ジ・エンボ・ジャーナル（Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ）、１９、２３２３−２３３１）。
最近の研究は、内皮細胞がＴＨＦ−アルファによって刺激されたときに、ＣＨＤ４が誘導されることを示している（ムラカミら、２０００、ジャーナル・オブ・アテロスクレローシス・アンド・トロンボーシス（Ｊ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ）；７（１）：３９−４４）。
いかなる研究も、血管新生調節へのＣＨＤ２の関与を示していない。
− ＧＳ−Ｎ３３：添付の配列表の配列番号：３４によって特定される４６９３ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ０４２５５５のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１７０２からヌクレオチド４１０７までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３３が、同定・確認された。ＢＲＤ２と呼ばれるこの蛋白質は８０１個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８５として特定される。
ＢＲＤ２蛋白質の役割は未知である。この蛋白質は、２つのブロモドメインを特徴とする。ブロモドメインは、最初は、機能が未知の６１〜６３アミノ酸のサイン配列として同定された保存領域である（ヘインズ（Ｈａｙｎｅｓ）ら、ニュクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．）、１９９２，２０，２６０３）。その後、このドメインが、転写またはクロマチンの改造に関与する転写因子、コアクチベーターおよび他の蛋白質中に同定・確認され、その限界が１１０アミノ酸まで広げられた。このドメインを含有していて増加しつつある蛋白質の数は、４０を超える（ジャンムーガン（Ｊｅａｎｍｏｕｇｉｎ）ら、１９９７、トレンズ・イン・バイオケミカル・サイエンシズ（Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．）、２２、１５１−１５３；ウィンストン（Ｗｉｎｓｔｏｎ）とアリス（Ａｌｌｉｓ）、１９９９、ネイチャー・ストラクチュラル・バイオロジー（Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．）６、６０１−６０４）。いくつかの蛋白質は、当該モチーフの２つのコピーを有する他のもののドメインの単独のコピーを有している。ＢＲＤ２蛋白質は、転写因子ＢＤＦ１の場合（タムクン（Ｔａｍｋｕｎ）、１９９５、カレント・オピニオン・イン・ジェネティックス・アンド・デヴェロップメント（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．）、５：４７３−４７７）あるいは転写開始に関与する多蛋白質複合体ＴＦＩＩＤのより大きいサブユニットであるＴＡＦＩＩ２５０蛋白質の場合（ジェイコブソン（Ｊａｃｏｂｓｏｎ）ら、２０００、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２８８（５４７０）：１４２２−５）と同様に、２つのブロモドメインによって特徴付けられる。このドメインの正確な機能は未知であるが、それは蛋白質−蛋白質相互作用に関与すると考えられ、クロマチンの修飾ならびに増殖を制御するものを含めての多種の真核生物遺伝子の転写調節に関与する多成分複合体の構築または活性にとって重要なものである可能性がある。燐酸化、アセチル化、メチル化、コアクチベーション、転写補強を含み、ただしこれらに限定されるものではない、クロマチンに割当てられた多様な機能が、ブロモドメインモチーフを含有するそれらの複合体を特徴付ける。それらの多能性および偏在性が、迅速で、適応性のある種々の転写応答を保証している（総説：デニス（Ｄｅｎｉｓ）、２００１、フロンティアズ・イン・バイオサイエンス（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）６、ｄ８４９−８５２）。
ブロモドメインを含有する蛋白質の差次的発現は、とりわけ、内皮細胞においてＶＥＧＦまたはｂＦＧＦによってそれの発現が誘発されるＲＩＮＧ３キナーゼに対するホモログである蛋白質のそれがすでに示されており、この蛋白質は、内皮細胞が血管新生過程の増殖期に入るのを可能ならしめるＶＥＧＦおよびｂＦＧＦによって活性化されるシグナル伝達経路の新しい標的であることが示唆されている（ベルアイバ（ＢｅｌＡｉｂａ）ら、２００１、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ）、２６８（１６）：４３９８−４０７）。
これに対し、ＢＲＤ２蛋白質が血管新生調節に関与するとは、一度も記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ３４：添付の配列表の配列番号：３５によって特定される２９８３ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＢＣ００７４２９のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２００からヌクレオチド１０６９までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３４が、同定・確認された。シンタキシン３Ａと呼ばれるこの蛋白質は２８９個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８６として特定される。
シンタキシン３Ａは、３０〜４０ｋＤａの間のサイズ、高度に疎水性で、該蛋白質の膜への固定に恐らく関与するＣ末端およびよく保存され、「コイルドコイル」の立体配座をとっていると思われる中心領域によって特徴付けられるシンタキシン／エピモルフィンのファミリーに属する。このファミリーの特異的なプロフィールは、もっともよく保存された「コイルドコイル」ドメイン領域に基づいている。シンタキシン類は、小胞の細胞内輸送および形質膜へのドッキングに関与する。最近の研究は、シンタキシン類のさまざまなアイソフォームがある一定の膜輸送蛋白質群と相互作用することができ、かくしてそれらの輸送活性を調節できることを示唆している（総説：サセナ（Ｓａｘｅｎａ）ら、２０００、カレント・オピニオン・イン・ネフロロジー・アンド・ハイパーテンション（Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ）、９（５）：５２３−７）。
シンタキシン３Ａは、同一遺伝子の選択的スプライシングで生じ、ヒトで同定・確認された２つのアイソフォーム（３Ａおよび３Ｂ）の一方である。シンタキシン３Ａの発現の増大が、すでに、ＨＬ−６０細胞の好中球分化などの種々の生物学的過程の間に、あるいは、歯状回顆粒細胞（ｄｅｎｔａｔｅ ｇｒａｎｕｌｅ ｃｅｌｌｓ）において、神経系におけるシナプス可塑性の伝播の過程で、証明されている（ロジャー（Ｒｏｄｇｅｒ）ら、１９９８、ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー（Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ）、７１（２）：６６６−６７５；マーティン・マーティン（Ｍａｒｔｉｎ−Ｍａｒｔｉｎ）ら、１９９９、ジャーナル・オブ・リューコサイト・バイオロジー（Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ）、６５（３）：３９７−４０６）。
これに対し、今日まで、血管新生過程でのシンタキシン３Ａのいかなる発現増大も記載されておらず、従って、血管新生調節への関与もなんら報告されていない。
− ＧＳ−Ｎ３５：添付の配列表の配列番号：３６によって特定される１２２２７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ０１５００１のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２０５からヌクレオチド１１１９９までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３５が、同定・確認された。ＳＨＡＲＰと呼ばれるこの蛋白質は３６６４個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８７として特定される。
ＳＨＡＲＰ（ＳＭＡＲＴ／ＨＤＡＣ１関連リプレッサー蛋白質）は、最近単離された遺伝子である（ナガセら、１９９９、ＤＮＡリサーチ（ＤＮＡ Ｒｅｓ）、６（１）：６３−７０）。ＳＨＡＲＰは、転写の潜在的リプレッサーであり、その抑制ドメイン（ＲＤ）は、ＳＭＲＴと、また、ヒストンデアセチラーゼＨＤＡＣ１およびＨＤＡＣ２を含むＮｕＲＤ（「ヌクレオソームリモデリングおよびヒストンデアセチラーゼ活性」）複合体類の少なくとも５つの構成員と、直接相互作用する。さらに、ＳＨＡＲＰは、内在するＲＮＡ結合ドメインによりステロイド受容体のＡＲＳコアクチベーターに結合し、ステロイド受容体の転写活性を消し去る。このようにして、ＳＨＡＲＰは、結合したまたは結合していない核内受容体を同時に調整する能力をもつ。ＳＨＡＲＰの発現は、それ自体がステロイドによって誘導されるもので、ホルモン応答の減衰のための単純な帰還（フィードバック）機構を示唆している（シ（Ｓｈｉ）ら、ジーンズ・アンド・デヴェロップメント（Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ）２００１年５月１日；１５（９）：１１４０−５１）。ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）類は、腫瘍抑制遺伝子の発現を抑制することによって血管新生誘導に関与することが示されている（キム（Ｋｉｍ）ら、２００１、ネイチャー・メディシン（Ｎａｔ Ｍｅｄ）、７（４）：４３７−４３）。
しかしながら、血管新生調節におけるＳＨＡＲＰ蛋白質のいかなる役割もいまだ記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ３６：添付の配列表の配列番号：３７によって特定される５３７６ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＡＦ３５２０５１のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド９２からヌクレオチド４９６２までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３６が、同定・確認された。増殖能関連蛋白質と呼ばれるこの蛋白質は１６１６個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８８として特定される。
配列番号：３７として特定されるこの配列は、添付の配列表において配列番号：２８８として特定されている９４８アミノ酸の蛋白質ＲＰＢＢ６（網膜芽細胞腫結合蛋白質６）をコードする配列と９２％の相同性を呈する。この蛋白質に対応するヌクレオチド配列は、２９９４ｂｐを含み、ＧＥＮＢＡＮＫ配列データベースにおいて受入れ番号ＮＭ ００６９１０をもつ。
増殖能関連蛋白質（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）の正確な役割は未知である。それは、それのホモログ蛋白質と同様に、蛋白質−蛋白質相互作用に関与することが既知のジンクフィンガードメインを呈する。この蛋白質は、網膜芽細胞腫蛋白質（ｐＲｂ）に結合する蛋白質ファミリーの一員、ＲＢＱ−１とも呼ばれる「網膜芽細胞腫結合蛋白質６（ＲＰＢＢ６）」に対するホモログである（サカイら、１９９５、ジェノミックス（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）、３０（１）：９８−１０１）。蛋白質ｐＲｂ（網膜芽細胞腫と呼ばれる腫瘍のサプレッサー）は、多数の蛋白質と会合することによって、細胞増殖を制御し、アポトーシスを阻害し、細胞増殖を誘発するように働く（総説：モリス（Ｍｏｒｒｉｓ）とダイソン（Ｄｙｓｏｎ）、２００１、アドヴァンシズ・イン・キャンサー・リサーチ（Ａｄｖ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ）；８２：１−５４）。
今日まで、この増殖能関連蛋白質が血管新生調節に関与するとは、記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ３７：添付の配列表の配列番号：３８によって特定される６６２６ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ００５３３８のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２４５からヌクレオチド２９８９までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３７が、同定・確認された。ＨＩＰ１蛋白質と呼ばれるこの蛋白質は９１４個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：８９として特定される。
ＨＩＰ１（「ハンチンチン相互作用蛋白質１」）は、ハンチントン病における変異遺伝子の産物ハンチンチン蛋白質に結合する１１６ｋＤａの蛋白質である（カルヒマン（Ｋａｌｃｈｍａｎ）ら、１９９７、ネイチャー・ジェネティックス（Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．）、１６、４４−５３；ハンチントン病協同研究グループ（Ｔｈｅ Ｈｕｎｇｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｇｒｏｕｐ）、１９９３、セル（Ｃｅｌｌ）７２、９７１−９８３）。ＨＩＰ１は、主として脳で発現されるが、他の組織でも検出される（ワンカー（Ｗａｎｋｅｒ）ら、１９９７、ヒューマン・モレキュラー・ジェネティックス（Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、６巻、４８７−４９５）。ＨＩＰ１の機能は、いまだあまりよく知られていないが、サッカロマイセス・セレヴィシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）において細胞骨格の機能に必須の蛋白質であるＳ１ａ２ｐと、生化学的特性および保存ドメインを共有する（カルヒマン（Ｋａｌｃｈｍａｎ）ら、１９９７、ネイチャー・ジェネティックス（Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．）、１６、４４−５３；ホルツマン（Ｈｏｌｔｚｍａｎ）ら、１９９３、ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．）１２２、６３５−６４４）。ＨＩＰ１は、ロイシンジッパードメインをも含有し、そのＣ末端部が、細胞−基質および細胞−細胞相互反応に関与する細胞骨格蛋白質タリンに相同である（リース（Ｒｅｅｓ）ら、１９９０、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）；３４７（６２９４）：６８５−９）。最近、蛋白質ＨＩＰ１が、アポトーシスに関与することが示されている（ハッカム（Ｈａｃｋａｍ）ら、２０００、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７５巻５２号、４１２９９−４１３０８）。
今日まで、ＨＩＰ１について、血管新生における何らの役割も記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ３８：添付の配列表の配列番号：３９によって特定される２３６６ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＢＣ０００３３５のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１２からヌクレオチド２２３７までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３８が、同定・確認された。ヌクレオポリン８８ｋＤａと呼ばれるこの蛋白質は７４１個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９０として特定される。
ヌクレオポリン８８（Ｎｕｐ８８）は、恐らくは核原形質内輸送に関与する核膜の蛋白質である（フォルネロッド（Ｆｏｒｎｅｒｏｄ）ら、１９９７、エンボ・ジャーナル（ＥＭＢＯ Ｊ）、１６：８０７−８１６；フォルネロッド（Ｆｏｒｎｅｒｏｄ）ら、オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）１９９６、１３：１８０１−１８０８）。Ｎｕｐ８８は、恐らくは核蛋白質の移入および核ｍＲＮＡの搬出および細胞サイクルの調節に関与している核膜孔複合体の一構成成分であるＣＡＮ／Ｎｕｐ２１４の中心ドメインと会合することが見出されている（ヴァン・デウルセン（ｖａｎ Ｄｅｕｒｓｅｎ）ら、１９９６、エンボ・ジャーナル、１５：５５７４−５５８３）。Ｎｕｐ８８は、広く分布しており、癌細胞および癌組織ならびに胎児の細胞および組織で過剰発現されることが示されている（マルチネス（Ｍａｒｔｉｎｅｚ）ら、１９９９、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）５９、５４０８−５４１１；グールド（Ｇｏｕｌｄ）ら、２０００、アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）、１５７：１６０５−１６１３）。
今日まで、Ｎｕｐ８８が血管新生調節に関与するとは記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ３９：添付の配列表の配列番号：４０によって特定される１５４３ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ０４９４８６のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド８６からヌクレオチド４１２までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ３９が、同定・確認された。ＦＫ５０６結合蛋白質１Ａと呼ばれるこの蛋白質は１０８個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９１として特定される。
ＦＫＢＰ（ＦＫ５０６結合蛋白質）類は、脊椎動物において、高い親和性をもって、免疫抑制剤ＦＫ５０６に結合する主要な蛋白質である（１９９０、トロップシューク（Ｔｒｏｐｓｃｈｕｇ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３４６：６７４−６７７；シュタイン（Ｓｔｅｉｎ）、１９９１、カレント・バイオロジー（Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．）１：２３４−２３６；シエキエルカ（Ｓｉｅｋｉｅｒｋａ）ら、１９９０、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２６５：２１０１１−２１０１５）。ＦＫＢＰファミリーの多くの構成員が、多くの組織および種々の細胞内区画において同定・確認されているが、もっともよく知られているのは、細胞質内アイソフォームであるＦＫＢＰ１２である（ギャラット（Ｇａｌａｔ）とメトカーフ（Ｍｅｔｃａｌｆ）、１９９５、プログレス・イン・バイオフィジックス・アンド・モレキュラー・バイオロジー（Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）６３、６７−１１８；ケイ（Ｋａｙ）、１９９６、バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．）３１４、３６１−３８５）。ＦＫＢＰ類は、ペプチジル・プロリル・シス−トランス・イソメラーゼ類（ＰＰＩアーゼまたはロタマーゼ）という大きいファミリーに属する。ＰＰＩアーゼは、プロリン残基を含むペプチド結合のシス−トランス異性化の触媒となることによって蛋白質の折りたたみを促進する酵素である（フィッシャー（Ｆｉｓｃｈｅｒ）とシュミット（Ｓｃｈｍｉｄ）、１９９０、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）２９：２２０５−２２１２）。ＦＫＢＰ類は、細胞シグナリング、蛋白質輸送、転写などの多くの細胞内過程に関与することが知られている。植物および動物でのＦＫＢＰ類をコードする遺伝子を遮断する研究は、細胞分裂および分化の調節におけるこのファミリーの蛋白質の重要性を強調している（総説：ハラー（Ｈａｒｒａｒ）ら、２００１、トレンズ・イン・プラント・サイエンス（Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ）；６：４２６−３１）。しかしながら、それらが表面受容体に結合するにもかかわらず、また、それらのＰＰＩアーゼ活性にもかかわらず、それらの生理学的機能は、依然明確にしなければならない状態である。最近、ＰＰＩアーゼ類は、受容体へテロ複合体中の構成成分の機能的再編成においてある役割を演じると提唱されている（シーネ・フィッシャー（Ｓｃｈｉｅｎｅ−Ｆｉｓｃｈｅｒ）とユー（Ｙｕ）、２００１、フェブス・レターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ）、４９５（１−２）：１−６）。
今日まで、ＦＫＢＰ蛋白質類が血管新生調節に関与していることは確認されていない。
− ＧＳ−Ｎ４０：添付の配列表の配列番号：４１によって特定される３８２４ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ０４２８２７のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１１５からヌクレオチド３６６３までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４０が、同定・確認された。ＳＡＬＦ蛋白質と呼ばれるこの蛋白質は１１８２個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９２として特定される。
ＳＡＬＦ蛋白質（ストーンドＢ／ＴＦＩＩＡ−アルファ／ベータ様因子）の相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）が、最近、ヒト胎盤由来ｃＤＮＡバンクから同定・確認された（アショック（Ａｓｈｏｋ）ら、１９９９、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７４巻２５号、１８０４０−１８０４８）。ＳＡＬＦの役割はいまだ特定されていないが、稀と形容されるこのｃＤＮＡは、ショウジョウバエのストーンＢ蛋白質とホモログで（アンドルー（Ａｎｄｒｅｗｅ）ら、１９９６、ジェネティックス（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）１４３、１６９９−１７１１）、またクラスリン受容体蛋白質μ１（ＡＰ４７）およびμ２（ＡＰ５０）とホモログな（テュリオー（Ｔｈｕｒｉｅａｕ）ら、１９８８、ＤＮＡ（ニューヨーク）７、６６３−６６９；ナカヤマら、１９９１、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）２０２、５６９−５７４）ドメインを含有するより拡張されたＮ末端配列をもつＡＬＦ蛋白質の配列と一致する。ＡＬＦ蛋白質（ＴＦＩＩＡ−アルファ／ベータ様因子）も、転写因子ＴＦＩＩＡアルファ／ベータの機能的ホモログである新規な因子であるが、この転写因子は、ＴＦＩＩＡガンマ因子とともに、ＴＢＰ成分（ＴＡＴＡ結合蛋白質）−ＴＡＴＡ相互作用を安定化し、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ依存性のガラス器内転写を維持することができる。ＡＬＦ蛋白質は、精巣に特異的な一般転写因子として記載されている（アショック（Ａｓｈｏｋ）ら、１９９９、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７４巻２５号、１８０４０−１８０４８）。
ＳＡＬＦの「ストーンドＢ／クラスリンＡＰ様」相同性ドメインも、膜蛋白質のクラスリン依存性輸送において潜在的な機能を示す。
チェン（Ｃｈｅｎ）ら（２００１、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ）２３；２８１（２）：４７５−８２）は、ＳＡＬＦ因子の遺伝子が、培養平滑筋細胞においてレチノイン酸（またはレチノイド）によって誘導されることを示している。
これに対し、血管新生調節へのＳＡＬＦのいかなる関与も今日まで記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ４１：添付の配列表の配列番号：４２によって特定される１３６５ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＢＣ０１０８６２のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド２７からヌクレオチド７５８までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４１が、同定・確認された。この蛋白質は２４３個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９３として特定される。
最近記載された蛋白質Ｐ２９は、サイクリン−Ｄおよび蛋白質Ｇｒａｐ２と相互作用する蛋白質ＧＣＩＰ（Ｇｒａｐ２サイクリン−Ｄ相互作用蛋白質）と相互作用する（チャン（Ｃｈａｎｇ）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ）２０００年１２月２０日；２７９（２）：７３２−７）。Ｇｒａｐ２は、免疫組織の白血球に特異的なアダプター蛋白質である（キウ（Ｑｉｕ）ら、１９９８、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、２５３、４４３−４４７）。アダプター蛋白質類は、形質膜の細胞外シグナルを細胞核へ中継する細胞内シグナル伝達の複合体形成において重要な役割を果すが、Ｇｒａｐ２は、免疫細胞のシグナル伝達および活性化における中心的連絡蛋白質である。Ｄタイプサイクリン類は、細胞外の分裂促進シグナルに応答する（シャー（Ｓｈｅｒｒ）、１９９３、セル（Ｃｅｌｌ）７３、１０５９−１０６５）。すべてのヒト組織で普遍的に発現されるＧＣＩＰ蛋白質は、Ｇｒａｐ２蛋白質およびＤサイクリン類と相互反応し、その発現は、網膜芽細胞腫（Ｒｂ）蛋白質の燐酸化を調節し、従って、増殖、分化、アポトーシスおよび細胞周期の進行において主要な役割を演じる一因子ファミリーに属する転写因子Ｅ２Ｆ１によって制御される転写経路を調節する（ネヴィンズ（Ｎｅｖｉｎｓ）、１９９８、セル・グロウス・アンド・ディファレンシエーション（Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ）９、５８５−５９３；チェラッパン（Ｃｈｅｌｌａｐｐａｎ）ら、１９９８、カレント・トピックス・イン・マイクロバイオロジー・アンド・イムノロジー（Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）２２７、５７−１０３；ダイソン（Ｄｙｓｏｎ）、１９９８、ジーンズ・アンド・デヴェロップメント（Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．）１２、２２４５−２２６２）。たとえば、ＧＣＩＰは、蛋白質Ｇｒａｐ２およびサイクリンＤにより制御されるシグナル伝達経路を介して細胞の増殖および分化を調整する上である役割を果すことが示唆されている（シャー（Ｘｉａ）ら、２０００、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ）、２７５（２７）：２０９４２−８）。核内に局在でき、種々の組織に存在できる蛋白質Ｐ２９は、ＧＣＩＰと会合することが見出されており、このことから、ＧＣＩＰの機能的調節に関与することができる（チャン（Ｃｈａｎｇ）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ）２０００年１２月２０日；２７９（２）：７３２−７）。
それゆえ、蛋白質Ｐ２９は、細胞の増殖および分化に関与するシグナル伝達経路においてある役割を果すと思われる。しかし、蛋白質Ｐ２９についても、同定されたホモログ蛋白質についても、血管新生調節における何らの役割も、今日まで、証明されていない。
− ＧＳ−Ｎ４２：添付の配列表の配列番号：４３によって特定される６１４７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＮＭ ０１３３９０のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１４９からヌクレオチド４３００までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４２が、同定・確認された。ＴＭＥＭ２と呼ばれるこの蛋白質は１３８３個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９４として特定される。
ＴＭＥＭ２の遺伝子は、最近記載されている（スコット（Ｓｃｏｔｔ）ら、ジーン（Ｇｅｎｅ）２０００；２４６（１−２）：２６５−７４）；構造の上から、ＴＭＥＭ２によってコードされる蛋白質は、膜貫通性であることが示唆されている。ＲＧＤモチーフの存在が、細胞接着における役割および細胞内シグナル伝達経路への関与を示唆している。
現在まで、この蛋白質について、何らの役割も記載されておらず、血管新生調節における何らの役割も証明されていない。
− ＧＳ−Ｎ４３：添付の配列表の配列番号：４４によって特定される４３５７ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＡＢ０２９３１６のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド３１８からヌクレオチド２８３４までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４３が、同定・確認された。ドルフィンと呼ばれるこの蛋白質は８３８個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９５として特定される。
ドルフィンと呼ばれる蛋白質は、いまだ極めてわずかしか研究されておらず、その遺伝子は最近同定・確認されたばかりである。この蛋白質は、多くの器官において普遍的に発現される。それは、ユビキチン、ＵｂｃＨ７およびＵｂｃＨ８にそのリングフィンガー／ＩＢＲを介して複合する酵素類に特異的に結合する。ドルフィンは、リングフィンガータイプのユビキチンリガーゼ類の新規な一構成員として提唱されている。この蛋白質は、中心体に局在し、恐らく、微小管機構の中心で作用するのであろう（ニワら、２００１、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ）、２８１（３）：７０６−１３）。今日まで、ドルフィンのいかなる差次的発現も、血管新生調節における役割についても、記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ４４：添付の配列表の配列番号：４５によって特定される１８０１ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＸＭ ０３２３８２（膜貫通スーパーファミリー４のメンバー２）のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド８１からヌクレオチド８１５までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４４が、同定・確認された。ＴＭ４ＳＦ２と呼ばれるこの蛋白質は２４４個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９６として特定される。
蛋白質ＴＭ４ＳＦ２は、ＣＤ９やＰＥＴＡ−３／ＣＤ１５１などの血管新生に関与しうることが知られているいくつかの構成員を含むタイプ４膜貫通スーパーファミリーに属する（クライン・ゾイヤー（Ｋｌｅｉｎ−Ｓｏｙｅｒ）ら、２０００、アルテリオスクレローシス・トロンボーシス・アンド・ヴァスキュラー・バイオロジー（Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．）、２０：３６９−９；シンコック（Ｓｉｎｃｏｃｋ）ら、１９９９、ジャーナル・オブ・セル・サイエンス（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１１２、８３３−８４４）。これに対し、ＴＭ４ＳＦ２の機能は未知である。この蛋白質は、神経芽細胞腫および神経芽細胞性白血病の表面に特異的なマーカーとして提唱されている蛋白質ＴＡＬＬＡ−１のホモログである（タカギら、インターナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ）、１９９５、６１（５）：７０６−１５）。
血管新生におけるＴＭ４ＳＦ２蛋白質の役割については、今日まで何ら記載されていない。
− ＧＳ−Ｎ４５：添付の配列表の配列番号：４６によって特定される２０８１ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＨＳＡ１３３１３３のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド１８４からヌクレオチド１７３７までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４５が、同定・確認された。Ｅｃｔｏ−ＡＴＰジホスホヒドロラーゼＩと呼ばれるこの蛋白質は５１７個のアミノ酸から構成されている。
それは、添付の配列表において配列番号：９７として特定される。
ｅｃｔｏ−ＡＴＰアーゼ（細胞表面のＡＴＰアーゼ）類は、細胞外ＡＴＰおよびＡＤＰをＡＭＰに加水分解する細胞に普遍的な酵素である（総説：プレスナー（Ｐｌｅｓｎｅｒ）、１９９５、インタナショナル・レヴュー・オブ・サイトロジー（Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｃｙｔｏｌ）、１５８：１４１−２１４）。大動脈内皮細胞および平滑筋細胞の表面にＡＴＰＤアーゼ類が存在することが証明されており、ＡＴＰおよびＡＤＰを加水分解することによってホメオスタシスおよび血小板の反応性の調節因子の役割を果しうると記載されている（ロブソン（Ｒｏｂｓｏｎ）ら、１９９７、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ）、１８５（１）：１５３−６３）。血管のＡＴＰＤアーゼは糖蛋白質ＣＤ３９の密接なホモログであり、この蛋白質は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入れ番号がＳ７３８１３であり、添付の配列表において配列番号：２９０として特定されていて、リンパ系細胞活性化抗原であり、ヒト内皮細胞によって発現されもする（カチマレック（Ｋａｃｚｍａｒｅｋ）ら、１９９６、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ）、２７１、５１、３３１１６−３３１２２）。最近、ゲプフェルト（Ｇｏｅｐｆｅｒｔ）ら（２００１、サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、Ｎｏ．１０４（２５）：３１０９−３１１５）は、ＣＤ３９発現不全を特徴とする変異マウスにおいてマトリゲル含有物体を移植することによって、移植片周囲に新生血管の形成が起こらないことを示した。これらの観察結果は、これらの著者らに、血管新生現象におけるＣＤ３９の役割を疑わせることとなった。しかし、記載された実験は、ＣＤ３９の直接的で明確な役割よりも、むしろ、それの血管新生における十分には特定されていない役割を支持している。すなわち、ＣＤ３９欠損変異マウスが存在するから、ＣＤ３９欠損マウスの胚が発生することが可能である。しかし、血管新生なしには、胚発生は不可能である。従って、ＣＤ３９が血管新生においてある役割を有していて、そのため、ＣＤ３９欠損変異マウスが生存できないか、または、ＣＤ３９が血管新生において何の役割ももたないかであろう。他の報文において、ゲプフェルト（Ｇｏｅｐｆｅｒｔ）ら（２００１、サーキュレーション、１０４（２５）：３１０９−１５）は、使用した変異マウスの内皮細胞にＣＤ３９の発現がないことを証明していない。
結局、ゲプフェルト（Ｇｏｅｐｆｅｒｔ）らの研究（２００１、サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）、１０４（２５）：３１０９−１５）は、
血管新生におけるＣＤ３９の何らかの役割の証拠を示してはいない。
ＣＤ３９およびｅｃｔｏ−ＡＴＰＤアーゼＩは、同一遺伝子の選択的スプライシングにより生じる２つの形態である可能性がある。我々の研究で用いたアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするベクターは、ＣＤ３９およびｅｃｔｏ−ＡＴＰＤアーゼＩの発現を同時に阻害できる。
本発明の範囲内でベクターＧＳ−Ｖ４５を用いて得られた結果は、その反面において、ＣＤ３９が血管新生において直接的役割を果すことを証明している。
その一方、ｅｃｔｏ−ＡＴＰＤアーゼＩについて、血管新生調節における何らの役割も今日まで記載されていないことを指摘しておかなければならない。
− ＧＳ−Ｎ４６：添付の配列表の配列番号：４７によって特定される４３３２ｂｐのｍＲＮＡ。ＢＬＡＳＴ検索により、これをＧＥＮＢＡＮＫ配列データベース中の受入れ番号ＡＪ３０６３９９のものであると同定できる。
このｍＲＮＡの配列は、ヌクレオチド５６からヌクレオチド１８２８までのコード配列を有する。それゆえ、このｍＲＮＡの翻訳で生じる蛋白質ＧＳ−Ｐ４６が、同定・確認された。この蛋白質は５９０個のアミノ酸から構成されている。それは、添付の配列表において配列番号：９８として特定される。
上に特定した各ｍＲＮＡの発現は、毛細管を形成するヒト内皮細胞において観察される。すなわち、本出願人は、これらのｍＲＮＡの各々に対応する遺伝子の差次的発現が、それらの内皮細胞による新生血管の形成を伴うことを証明したのである。
さらに、血管新生の間の上記遺伝子の発現誘導が、種々の阻害因子の存在に対して感受性であることが示される。すなわち、新生血管形成性ヒト内皮細胞を血管新生因子（表２に２欄に示す）によって刺激するとき、このｍＲＮＡの発現増大が認められるが、同じヒト内皮細胞を同じ血管新生因子によって刺激し、抗血管新生因子（表２の３欄に示す）の存在下に置く（そこでは血管新生が阻害される）ときは、この遺伝子の発現がやはり阻害されることが認められる。
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このように、遺伝子ＧＳ−Ｎ１〜ＧＳ−Ｎ５４の各々の発現とヒト内皮細胞の血管新生状態との間には直接の相関関係があることがわかる。
６．２ 特定された遺伝子の血管新生調節における役割の確認。
さらに、ヒト内皮細胞による新生血管形成におけるこれらの遺伝子の機能的役割も明らかにされた。
すなわち、添付の配列表において配列番号：１０３〜配列番号：１４８の配列によって特定されたオリゴヌクレオチドのうちから選ばれた、特定された遺伝子の各々に特異的なオリゴヌクレオチドを、発現ベクターであるｐＣＩ−ｎｅｏベクターに、アンチセンス方向に導入した。
生じたベクター、すなわち添付の配列表において配列番号：１４９〜配列番号：１９４の配列によって特定され、ＧＳ−Ｖ１〜ＧＳ−Ｖ４６と名付けたベクターを用い、ヒト内皮細胞をこのベクターによってトランスフェクトすることによって、これらの細胞でのこのｍＲＮＡをコードする遺伝子の発現を抑制した。
そのとき、ヒト内皮細胞を血管新生因子類によって刺激した。以下に示す配列の各々について、アンチセンス配列および相当するベクターを用いて得られた、表３に示す結果は、つぎのことを示している：
種々の血管新生因子の存在にもかかわらず、
− 配列番号：１〜配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１〜配列番号：１５、配列番号：１７〜配列番号：５３および配列番号：
２２５の遺伝子の発現抑制は、ヒト内皮細胞による新生血管形成を阻害し、
− 配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０および配列番号：１６の遺伝子の抑制は、ヒト内皮細胞による新生血管形成を増進させる。
これらの結果を、添付の相当する図１〜１１に示す。
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ヒト内皮細胞内でのＧＳ−Ｖ１、ＧＳ−Ｖ２、ＧＳ−Ｖ４、ＧＳ−Ｖ５、ＧＳ−Ｖ１５の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ３、ＧＳ−Ｖ１３の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ６、ＧＳ−Ｖ８、ＧＳ−Ｖ１０の発現が毛細管の形成を誘発することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ７、ＧＳ−Ｖ９、ＧＳ−Ｖ１１、ＧＳ−Ｖ１２、ＧＳ−Ｖ１４の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ１６、ＧＳ−Ｖ１７、ＧＳ−Ｖ１８、ＧＳ−Ｖ１９、ＧＳ−Ｖ２１の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ２２、ＧＳ−Ｖ２４、ＧＳ−Ｖ２５、ＧＳ−Ｖ２６、ＧＳ−Ｖ２７の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ２８、ＧＳ−Ｖ２９、ＧＳ−Ｖ３０、ＧＳ−Ｖ３１、ＧＳ−Ｖ３２の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ３３、ＧＳ−Ｖ３４、ＧＳ−Ｖ３５、ＧＳ−Ｖ３７、ＧＳ−Ｖ３８の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ４０、ＧＳ−Ｖ４２、ＧＳ−Ｖ４３、ＧＳ−Ｖ４４、ＧＳ−Ｖ４５の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ２０、ＧＳ−Ｖ２３、ＧＳ−Ｖ３６、ＧＳ−Ｖ３９、ＧＳ−Ｖ４１の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。 ヒト内皮細胞におけるＧＳ−Ｖ４６の発現が毛細管の形成を阻害することを示す。
【配列表】
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Claims (44)

  1. （ｉ）それの発現が血管新生因子によって誘導され、血管新生抑制剤によって阻害される内皮細胞の遺伝子の核酸分子、それの相補配列または断片、（ｉｉ）該核酸分子によってコードされたポリペプチド配列またはそれの断片、（ｉｉｉ）（ｉ）に記載の核酸分子の発現を阻害しうるアンチセンス核酸分子または（ｉｉ）に記載のポリペプチド配列に固定されうる抗体のうちから選ばれた少なくとも１種の物質を活性成分として含有する、血管新生現象に対して活性な医薬組成物。
  2. 活性成分として、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列、それらの相補配列およびそれらの対応するアンチセンス配列からなる群から選ばれたヌクレオチド配列あるいはそれらの断片のいずれかを含有することを特徴とする、血管新生に関連した疾患の診断および／または治療を目的とした請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 添付の配列表の配列番号：１〜配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１〜配列番号：１５、配列番号：１７〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０のうちから選ばれた少なくとも１つの配列のアンチセンス配列を包含する１種または２種以上の血管新生阻害性配列を含有することを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
  4. 添付の配列表の配列番号：１０３〜配列番号：１０７、配列番号：１０９、配列番号：１１１および配列番号：１１３〜配列番号：１４８のうちから選ばれた１つまたは２つ以上のアンチセンス配列を含有することを特徴とする請求項３に記載の組成物。
  5. 添付の配列表の配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０および配列番号：１６のうちから選ばれた少なくとも１つの配列のアンチセンス配列を含有する１つまたは２つ以上の血管新生刺激配列を含有することを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
  6. 前記アンチセンス配列が、添付の配列表の配列番号：１０８、配列番号：１１０および配列番号：１１２のうちから選ばれたものであることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
  7. 添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列のうちから、または配列番号：２９１〜配列番号：２９７のうちから選ばれた少なくとも１つのポリペプチド配列のうちから選ばれた少なくとも１つのポリペプチド配列を含有することを特徴とする、血管新生関連疾患の診断および／または治療を目的とした請求項１に記載の医薬組成物。
  8. 添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されている１つまたは２つ以上のポリペプチド配列または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されている１つまたは２つ以上のポリペプチド配列に結合しうる少なくとも１種の抗体を含有する請求項１に記載の医薬組成物。
  9. 添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列のいずれかに対して、または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列のいずれか、あるいはそれらの断片のいずれかに対して親和性を有することを特徴とする抗体。
  10. 動物、とりわけ脊椎動物、好ましくは哺乳動物の免疫適格細胞の、添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列または配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列のいずれかによる免疫化を包含することを特徴とする請求項９に記載の抗体を調製する方法。
  11. それがモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項９に記載の抗体。
  12. それがポリクローナル抗体であることを特徴とする請求項９に記載の抗体。
  13. 活性成分として、請求項９、１１または１２に記載の、または請求項１０の方法に従って調製された１種または２種以上の抗体もしくはそれらの断片のいずれかを含有することを特徴とする血管新生関連疾患診断および／または治療用医薬組成物。
  14. 配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４ 〜配列番号：２８８として特定されている配列のうちから選ばれたヌクレオチド配列のうちの少なくとも１０マーを含有することを特徴とするセンチセンスヌクレオチド配列。
  15. 添付の配列表において配列番号：１０３〜配列番号：１４８として特定されている配列のうちから選ばれた配列と少なくとも８５％、好ましくは９５％の相同性を有する請求項１４に記載のアンチセンス配列。
  16. 請求項１４または１５のいずれかにおいて規定されている少なくとも１つのアンチセンス配列を含有する哺乳動物発現ベクター。
  17. 配列によって特定されており、添付の配列表における配列番号：１４９〜配列番号：１９４のベクターＧＳ−Ｖ１〜ＧＳ−Ｖ４６のうちから選ばれたものであることを特徴とする請求項１６に記載のベクター。
  18. 添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の集合のうちから選ばれた少なくとも１つのヌクレオチド配列またはそれらの断片のいずれかを含有する哺乳動物発現ベクター。
  19. 請求項１６または１７のいずれかにおいて規定されたベクターの哺乳動物細胞への挿入を包含することを特徴とする、血管新生異常に関与する遺伝子を過少発現する遺伝子修飾細胞の調製方法。
  20. 添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の集合から選ばれた１つのヌクレオチド配列もしくはそれらの断片のいずれかにより特定された少なくとも１つの血管新生関連遺伝子を過剰発現することを特徴とする遺伝子修飾細胞。
  21. 添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列の集合から選ばれた１つのヌクレオチド配列により特定された少なくとも１つの血管新生関連遺伝子を過少発現することを特徴とする遺伝子修飾細胞。
  22. （ａ）少なくとも１種の抗生物質に対する抵抗性遺伝子を請求項２０または２１に記載の遺伝子修飾細胞に導入し、
    ｂ）工程（ａ）で得られた細胞を当該抗生物質の存在下に培養し、
    ｃ）生存細胞を選択する
    ことを特徴とする、請求項１７または１８のいずれかにおいて規定された発現ベクターを安定的に発現する細胞株を調製する方法。
  23. 請求項２０または２１のいずれかに記載の遺伝子修飾細胞または請求項２２に記載の方法に従って調製された遺伝子修飾細胞を含有することを特徴とする、哺乳動物、とりわけヒトにおける血管新生異常の治療および／または診断用の医用組成物。
  24. 下記の工程を包含する組換え蛋白質の調製方法：
    ａ）添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列のうちの少なくとも１つもしくはそれらの断片のいずれかを含有する発現ベクターの構築、
    ｂ）宿主細胞への該ベクターの導入、
    ｃ）適当な培地中での該細胞の培養、
    ｄ）発現された蛋白質またはそれらの断片のいずれかの精製。
  25. 請求項２４に記載の方法によって得られた組換え蛋白質またはペプチド断片。
  26. 請求項２５に記載の組換え蛋白質を含有する医用組成物。
  27. 血管新生異常が、腫瘍の血管新生、網膜症、慢性関節リウマチ、クローン病、粥状硬化症、卵巣の過剰刺激、乾癬、新血管形成に関連した子宮内膜炎、バルーン血管形成による再狭窄、瘢痕形成による組織産生過多、末梢脈管疾患、高血圧、血管性炎症、レイノー病およびレイノー現象、動脈瘤、動脈再狭窄、血栓性静脈炎、リンパ管炎、リンパ節腫脹、瘢痕形成および組織修復、虚血、狭心症、心筋梗塞、慢性心疾患、うっ血性心不全などの心不全、加齢に関連した筋退化および骨粗しょう症のうちから選ばれたものであることを特徴とする請求項１〜８、１３、２３または２６に記載の医用組成物。
  28. 哺乳動物、とりわけヒトにおける血管新生関連疾患の診断および／または予後の方法であって、該哺乳動物の細胞において、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている１つまたは２つ以上の配列の過剰発現または過少発現をガラス器内で検出することを特徴とする前記方法。
  29. 下記の工程を包含することを特徴とする請求項２８に記載の方法：
    − 哺乳動物の細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現の検出、
    − それの血管新生状態が既知の標準細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現の検出、
    − 両細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
  30. 哺乳動物、とりわけヒトにおける血管新生関連疾患の診断および／または予後の方法であって、該哺乳動物の細胞において、添付の配列表において配列番号：５４〜配列番号：１０２として特定されているポリペプチド配列の１つまたは２つ以上もしくは配列番号：２９１〜配列番号：２９７として特定されているポリペプチド配列の１つまたは２つ以上の過剰発現または過少発現をガラス器内で検出することからなる前記方法。
  31. 下記の工程を包含することを特徴とする請求項３０に記載の方法：
    ａ）哺乳動物の第一の細胞集団による該ポリペプチド配列、配列番号：５４〜配列番号：１０２または配列番号：２９１〜配列番号：２９７の１つまたは２つ以上の発現の検出、
    ｂ）それの血管新生状態が既知の第二の標準細胞集団による該ポリペプチド配列、配列番号：５４〜配列番号：１０２または配列番号：２９１〜配列番号：２９７の１つまたは２つ以上の発現の検出、
    ｃ）該第一および第二の細胞集団による該ポリペプチド配列、配列番号：５４〜配列番号：１０２または配列番号：２９１〜配列番号：２９７の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
  32. 血管新生異常が、腫瘍の血管新生、網膜症、慢性関節リウマチ、クローン病、粥状硬化症、卵巣の過剰刺激、乾癬、新血管形成に関連した子宮内膜炎、バルーン血管形成による再狭窄、瘢痕形成による組織産生過多、末梢脈管疾患、高血圧、血管性炎症、レイノー病およびレイノー現象、動脈瘤、動脈再狭窄、血栓性静脈炎、リンパ管炎、リンパ節腫脹、瘢痕形成および組織修復、虚血、狭心症、心筋梗塞、慢性心疾患、うっ血性心不全などの心不全、加齢に関連した筋退化および骨粗しょう症のうちから選ばれたものであることを特徴とする請求項２８〜３１のいずれかに記載の診断および／または予後の方法。
  33. 内皮細胞を患者由来の体液の存在下に置いたのちに当該配列の発現の検出を行うことを特徴とする請求項２８〜３２のいずれかに記載の診断および／または予後の方法。
  34. 哺乳動物、とりわけヒトにおける血管新生関連処置の治療効果を確認する方法であって、該哺乳動物の細胞において、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列の１つによって特定される少なくとも１つの血管新生異常関与遺伝子の過剰発現または過少発現のガラス器内での検出を包含することを特徴とする前記方法。
  35. 下記の工程を包含することを特徴とする請求項３４に記載の治療効果確認方法：
    − 血管新生異常の治療を目的とした医用組成物を投与した哺乳動物の第一の細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現の検出、
    − それの血管新生状態が既知の第二の標準細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の検出、
    − 該第一および第二の細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
  36. １つまたは２つ以上のヌクレオチド配列の発現の検出を、哺乳動物の細胞集団についてガラス器内で行うことを特徴とする請求項３５に記載の治療効果確認方法。
  37. 血管新生異常が、腫瘍の血管新生、網膜症、慢性関節リウマチ、クローン病、粥状硬化症、卵巣の過剰刺激、乾癬、新血管形成に関連した子宮内膜炎、バルーン血管形成による再狭窄、瘢痕形成による組織産生過多、末梢脈管疾患、高血圧、血管性炎症、レイノー病およびレイノー現象、動脈瘤、動脈再狭窄、血栓性静脈炎、リンパ管炎、リンパ節腫脹、瘢痕形成および組織修復、虚血、狭心症、心筋梗塞、慢性心疾患、うっ血性心不全などの心不全、加齢に関連した筋退化および骨粗しょう症のうちから選ばれたものであることを特徴とする請求項３４〜３６のいずれかに記載の治療効果確認方法。
  38. 内皮細胞を患者由来の体液の存在下に置いたのちに当該配列の発現の検出を行うことを特徴とする請求項３４〜３７のいずれかに記載の治療効果確認方法。
  39. 下記の工程を包含することを特徴とする、哺乳動物、とりわけヒトの血管新生異常の治療に有用な化合物をスクリーニングする方法：
    ａ）血管新生異常に対して治療効果を有する可能性のある化合物の存在下に置かれた哺乳動物の第一の細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現の検出、
    ｂ）それの血管新生状態が既知の第二の標準細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現の検出、
    ｃ）該第一および第二の細胞集団による該ヌクレオチド配列、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０の１つまたは２つ以上の発現のレベルに差があった場合のその差の識別・確認。
  40. 内皮細胞を患者由来の体液の存在下に置いたのちに当該配列の発現の検出を行うことを特徴とする請求項３９に記載のスクリーニング方法。
  41. 請求項３９または４０に記載のスクリーニング方法を実施するために、添付の配列表において配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されているヌクレオチド配列の１つまたは２つ以上に対して特異的な１種または２種以上のプローブを包含する支持体を包含する装置。
  42. 前記支持体が、ガラス膜、金属膜、重合体膜、シリカ膜のうちから選ばれたものである請求項４１に記載の装置。
  43. 請求項４１または４２のいずれかに記載の装置、試料から抽出された配列の増幅、それらと前記装置のプローブとのハイブリダイゼーションおよびディファレンシャル・ディスプレイ測定実施に必要な特異的プライマーおよび付属品を包含する、血管新生異常関与遺伝子のディファレンシャル・ディスプレイ測定用キット。
  44. 標準細胞集団としての請求項２０または２１に記載の遺伝子修飾細胞の安定株、配列番号：１〜配列番号：５３、配列番号：２２５および配列番号：２８４〜配列番号：２９０として特定されている配列に特異的な１種または２種以上のプローブおよび前記ディファレンシャル・ディスプレイの検出および測定に必要な手段を包含する、血管新生異常関与遺伝子のディファレンシャル・ディスプレイ測定用キット。
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