JP2005530500A5

JP2005530500A5 -

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Publication number: JP2005530500A5
Application number: JP2004511453A
Authority: JP
Filing date: 2003-05-21
Publication date: 2006-07-06
Anticipated expiration: 2023-05-21

Description

他の態様においては、ランゲルハンス前駆細胞からインビトロにおいて提供される免疫細胞を生成させる方法は、臍帯血、末梢血または骨髄からCD34+細胞をハーベストすること、ならびに最初に、細胞を、幹細胞因子約20ng/ml、GM-CSF約500U/ml、およびTNF-α約2.5ng/mlを含む無血清培地中で、少なくとも下記の１つ：細胞のCD1aもしくはHLA-DRの発現の増加、またはバーベック顆粒の存在、を引き起こすのに充分な期間培養されることを含む。培養期間は、少なくとも約４日であってもよく、約１０日まで延長されてもよい。その後培養は、幹細胞因子約20ng/ml、GM-CSF約500U/ml、TNF-α約2.5ng/ml、Fms様チロシンキナーゼ３（FLT-3）約20ng/ml、およびTGF-β1約0.5ng/mlを含む無血清培地中で、少なくとも下記の１つ：細胞のCD1aもしくはHLA-DRの発現の増加、またはバーベック顆粒の存在、を引き起こすのに充分な期間継続される。

他の態様においては、分化培地は無血清である。無血清培地は、当分野において既知の基礎培地または成分を用いてつくってもよい（例えばDMEM(ダルベッコ改変イーグル培地(Dulbecco's Modified Eagle's Medium))、PRGM (前立腺上皮細胞増殖培地（Prostate Epithelial Cell Growth Medium)Part # CC-3166, Biowhittaker, Inc. )、ハムF12培地(Ham's F12 medium)、MEM (最小必須培地)、マッコイ5A培地(McCoy's 5A medium)、MCDB 153(分子細胞および発生生物学153培地(Molecular Cell and Developmental Biology 153 medium))、KGM(ケラチノサイト増殖培地(Keratinocyte growth Medium)、Biowhittaker)、EpiLife (Cascade Biologics, Inc.)、または199培地（Medium 199））。１つの様態においては、無血清培地は、約３：１の比のDMEM:F12であり、レチノイン酸などの追加の定義された（無血清の）成分、または本明細書に記載の他の定義された成分が補充される。

ADAのgag遺伝子に特異的なプライマーを、ワールドワイドウェブ（world wide web）上でWhitehead Institute (Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, MA)から提供されているPrimer 3 ゲノムソフトウェアを用いて設計した。プライマーセットは：フォワードプライマー、5'CAGCATGTCAGGGAGTAGGG-3' (SEQ ID NO：1)；およびリバースプライマー、5'TTGTCTATCGGCTCCTGCTT-3' (SEQ ID NO：2) であり、Great American Gene Company (Ramona, CA)から購入した。

Claims

膣上皮細胞および免疫細胞からなる、空気−液体界面で培養された、子宮頚−膣組織相当物。
その上で子宮頚−膣組織相当物が培養される支持体をさらに含む、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
ウイルス、バクテリア、寄生虫、および真菌からなる群から選択される性感染病原体に感染することができる、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
性感染病原体がHIVである、請求項３に記載の子宮頚−膣組織相当物。
アレルギー型反応または刺激型反応を惹起することができる、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
無血清培地で生成する、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
膣上皮細胞、免疫細胞、または両方がヒト由来である、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
膣上皮細胞、免疫細胞、または両方が、初代細胞、継代された初代細胞、形質転換細胞、および不死化細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
初代または継代された初代膣上皮細胞が、正常ヒト子宮頚部組織、正常ヒト子宮頚管組織、病態のヒト子宮頚部組織、および病態のヒト子宮頚管組織からなる群から選択される組織由来である、請求項８に記載の子宮頚−膣組織相当物。
免疫細胞が、ランゲルハンス細胞、ランゲルハンス前駆細胞（CD34+）、単球（CD14+）、未熟樹状細胞（CD1a+、CD4+）、成熟樹状細胞（CD86+、HLA-DR++）、T細胞（CD3+）、マクロファージ、またはこれらのいずれかの組合せを含む、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
免疫細胞がランゲルハンス前駆細胞または単球からインビトロで産生される、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
支持体が、人工膜、細胞外マトリックス成分、コラーゲン混合物、インビボ由来の結合組織、混合コラーゲン−線維芽細胞格子、混合細胞外マトリックス−線維芽細胞格子、およびプラスチックからなる群から選択される、請求項２に記載の子宮頚−膣組織相当物。
混合コラーゲン−線維芽細胞格子が、膣線維芽細胞からなる、請求項１２に記載の子宮頚−膣組織相当物。
混合コラーゲン−線維芽細胞格子が、さらにT細胞（CD3+）からなる、請求項１３に記載の子宮頚−膣組織相当物。
免疫細胞がHLA-DRを発現している、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
有核基底層細胞および有核基底上層細胞を有することを特徴とする、請求項１に記載の子宮頚−膣組織相当物。
漸次的にグリコーゲンの含有量を増加させ、かつ核の含量を減少させる基底上層の外側に、細胞層を有することを特徴とする、請求項１６に記載の子宮頚−膣組織相当物。
主に基底層および基底上層に存在する免疫細胞を有することを特徴とする、請求項１６に記載の子宮頚−膣組織相当物。
ステップ：
膣上皮細胞および免疫細胞を提供すること；
細胞を播種すること；そして
分化に適切な条件下で、播種された細胞を空気−液体界面で共培養すること（co-culturing）、
を含む、子宮頚−膣組織相当物を製造する方法。
共培養するステップの前に、細胞の増殖に適切な条件下で、増殖培地中で、播種された細胞を共液中培養するステップをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
共液中培養するステップの増殖培地が、無血清増殖培地である、請求項２０に記載の方法。
播種するステップにおいて、各細胞種が、1×10 ³ 〜1×10 ⁷ 細胞／cm ² で播種される、請求項１９に記載の方法。
播種するステップが、免疫細胞に対して膣上皮細胞が1：1の比で行われる、請求項１９に記載の方法。
播種するステップが、免疫細胞に対して膣上皮細胞が1：1〜10000：1の比で行われ、そして、共培養するステップが、免疫細胞の生存を増加するかまたは増殖を惹起する添加剤が補充された無血清培地中で行われる、請求項１９に記載の方法。
比が、免疫細胞に対して膣上皮細胞が20：1〜50：1である、請求項２４に記載の方法。