JP2005345718A - 蛍光顕微鏡および遮光部材 - Google Patents

Abstract

【課題】 試料周囲からの迷光を効果的に遮断し、コントラストの良い蛍光像を得ることができる蛍光顕微鏡および遮光部材を提供する。
【解決手段】 落射蛍光観察時に、ステージ２上に載置された観察試料３とステージ２上部に位置する対物レンズ８先端との間の光路を遮光部材１８で覆うようにする。
【選択図】 図１

Description

本発明は、ステージ上に載置した試料から発せられる蛍光を観察する蛍光顕微鏡および遮光部材に関するものである。

最近、医学および生物学などの分野において生物組織細胞上で蛍光標識を施した蛋白や遺伝子などを観察するものとして蛍光観察が知られている。

このような蛍光観察は、明視野では観察できない透明な細胞や蛋白質が可視化されるため、その局在や移動を知るのに極めて有効な手段である。

ところで、蛍光観察を行う顕微鏡は、基本的には通常の明視野顕微鏡に蛍光装置を取付けたもので、対物レンズを通してステージ上の観察試料に照明光を当てる同軸落射型の照明系を用いた正立顕微鏡が主流となっている。

図１０は、このような正立顕微鏡を適用した蛍光顕微鏡の一例を示すもので、不図示の光源からの光を励起フィルタ１０１に入射し特定の波長光を選択し、この選択された光を、励起光波長域では反射特性を有し、蛍光波長域では透過特性を有するダイクロイックミラー１０２で反射させ、対物レンズ１０３を介し励起光として観察試料１０４に照射し、観察試料１０４より発せられる蛍光を対物レンズ１０３、ダイクロイックミラー１０２を透過し、吸収フィルタ１０５により蛍光波長域のみ透過させ、鏡筒１０６を介して接眼レンズ１０７により蛍光観察を行なうようにしている。

この場合、観察試料１０４から発せられる蛍光は極めて微弱であり、このため、観察者が接眼レンズ１０７より鮮明な蛍光を観察するには、観察試料１０４周辺から侵入する迷光を遮断することが極めて重要になってくる。

そこで、従来、このような蛍光観察では、観察試料１０４周辺から侵入する迷光をできるだけ除去するため、暗室で蛍光観察を行なったり、顕微鏡本体に布を被せるなどの方法が考えられている。

また、例えば、特許文献１に開示されるように、ステージ部上に置いた試料を、その直下の対物レンズにより拡大観察する倒立顕微鏡において、ステージ部上の試料を覆うように遮光部材を被着させるようにしたものも提案されている。
特開２００３−１８５９３２号公報

ところが、蛍光観察を暗室で行なう方法は、特別に暗室を用意しなければならず、そのために高額な費用がかかってしまい、さらに、暗室内で顕微鏡を操作するための各種操作スイッチの位置の把握が難しく、操作性が悪化してしまう。

このような問題を解決する方法として、各種操作スイッチを発光させるようにした顕微鏡もある。このような発光タイプの操作スイッチを用いれば、暗室内での操作性を損なうことがなくなるが、今度は、これら操作スイッチから発する光が迷光として観察光路に侵入し、試料から発せられる微弱な蛍光の観察に障害となってしまう。

また、顕微鏡本体に布を被せて蛍光観察を行なう方法では、遮光を必要とする試料周囲より広い範囲を布で覆ってしまうため、布が顕微鏡本体からずり落ちないように観察者は観察姿勢を維持しつつ、各部位を手探りで操作しなければならず、さらに、探り当てた操作部に布が纏わりついて通常の操作が困難になるなど、操作性が著しく悪化するという問題があった。

さらに、特許文献１のものは、倒立顕微鏡にのみ有効であり、正立顕微鏡タイプのものへの適用が難しい。また、対物レンズと試料との間の光路は、顕微鏡本体内部にあるものの開放されているので、迷光が侵入するおそれがあり、試料から発せられる微弱な蛍光の観察に障害になるという問題もある。さらに、試料を収めるために一般的に用いられるシャーレの外周と遮光部材の外周が大きく異なるため、試料に遮光部材を被せたまま、試料の位置決めを行うのは困難である。

本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、試料周囲からの迷光を効果的に遮断し、コントラストの良い蛍光像を得ることができる蛍光顕微鏡および遮光部材を提供することを目的とする。

請求項１記載の発明は、ステージ上に載置された試料に光を導く照明光学系と、前記試料から発せられる蛍光を前記ステージ上に位置される対物レンズを介して観察する観察光学系と、前記ステージと前記対物レンズとの間の光路を覆うように設けられ、外部からの光を遮光する遮光部材とを具備したことを特徴としている。

請求項２記載の発明は、請求項１記載の発明において、前記遮光部材は、伸縮可能な筒状体からなり、一方の開口部を前記対物レンズに保持し、他方の開口部で前記試料周囲を覆うとともに、該他方の開口部を前記ステージ面に当接するように配置されることを特徴としている。

請求項３記載の発明は、請求項２記載の発明において、前記遮光部材は、前記対物レンズの作動距離の範囲以上に前記伸縮方向の長さが設定されることを特徴としている。

請求項４記載の発明は、請求項２または３記載の発明において、前記遮光部材は、伸縮可能な筒状体として蛇腹状部に形成されることを特徴としている。

請求項５記載の発明は、請求項１記載の発明において、前記遮光部材は、筒状の遮光布からなることを特徴としている。

請求項６記載の発明は、請求項１記載の発明において、前記遮光部材は、筒状で中間部に弛み部を有する弾性部材からなり、一方の開口部を前記対物レンズに保持し、他方の開口部に前記試料を保持するようにしたことを特徴としている。

請求項７記載の発明は、請求項６記載の発明において、前記ステージは前記試料を保持する試料保持手段を有し、前記遮光部材は、前記他方の開口部で前記試料保持手段を保持するようにしたことを特徴としている。

請求項８記載の発明は、請求項６記載の発明において、前記ステージは、前記試料を載置する回転自在な中座を有し、前記遮光部材は、前記他方の開口部で前記試料周囲を覆うとともに、該他方の開口部を前記中座面に当接するように配置されることを特徴としている。

請求項９記載の発明は、請求項１乃至８のいずれかに記載の発明において、前記遮光部材は、周囲に前記試料の操作手段を挿入する１つ以上の開閉可能な穴部を有することを特徴としている。

請求項１０記載の発明は、ステージ上に載置された試料に光を導く照明光学系と、前記試料から発せられる蛍光を前記ステージ上に位置される対物レンズを介して観察する観察光学系とを具備する蛍光顕微鏡に用いられる遮光部材であって、前記ステージと前記対物レンズとの間の光路を覆うように設けられ、外部からの光を遮光することを特徴としている。

本発明によれば、試料周囲からの迷光を効果的に遮断し、コントラストの良い蛍光像を得ることができる蛍光顕微鏡を提供できる。

以下、本発明の実施の形態を図面に従い説明する。

（第１の実施の形態）
図１は、本発明の第１の実施の形態の正立顕微鏡を適用した蛍光顕微鏡の概略図を示している。

図１において、１はベースで、このベース１上には、ステージ２が設けられている。このステージ２には、観察試料３が載置されている。

ベース１には、支柱４が直立して設けられている。この支柱４には、焦準部６を介してベース１上と平行になるように支持アーム５が設けられている。焦準部６は、不図示のピニオンとラックからなる昇降機構を介して支柱４に設けられ、焦準ダイアル６ａの操作により支持アーム５を支柱４に沿って上下動可能にしている。

支持アーム５の先端には、ズーム鏡筒７が固定されている。このズーム鏡筒７のステージ２側下端部には、ねじ込み方式の対物レンズ８が装着されている。この対物レンズ８は、焦準部６の操作による支持アーム５の上下動により観察光軸ａ方向に移動し観察試料３との相対距離を変化させることで、観察試料３にピント合わせできるようになっている。また、ズーム鏡筒７は、ズームハンドル７ａの操作により倍率を可変できるようになっている。

ズーム鏡筒７の上端部には、投光管９が設けられている。この投光管９は、支持アーム５と平行な方向に沿って配置されている。投光管９の一方端部には、光源１０が配置されている。光源１０は、蛍光観察に使用される例えば水銀ランプやキセノンランプからなっている。光源１０には、光源１０を点灯させるための電源装置１１が接続されている。

投光管９の中空部には、光源１０から発せられる光路１０ａ上に沿って不図示の照明光学系とともに、励起フィルタ１２、ダイクロイックミラー１３が配置されている。励起フィルタ１２は、光源１０の光のうち特定の波長光を選択するものである。ダイクロイックミラー１３は、励起フィルタ１２で選択された光を励起光波長域では反射し、蛍光波長域では透過するような特性を有するものである。そして、ダイクロイックミラー１３で反射した光を観察光軸ａに沿って対物レンズ８に導入し、励起光として観察試料３に照射し、観察試料３より発せられる蛍光を対物レンズ８よりダイクロイックミラー１３を透過させるようになっている。

ダイクロイックミラー１３の透過光路には、吸収フィルタ１４と鏡筒１５が配置されている。吸収フィルタ１４は、ダイクロイックミラー１３を透過した蛍光のうち、不要な波長領域の光を除去して蛍光の波長のみを透過するものである。鏡筒１５は、対物レンズ８とともに構成される観察光学系１６を内蔵するとともに、着脱可能な接眼レンズ１７を有し、吸収フィルタ１４を透過した蛍光を観察光学系１６を介して接眼レンズ１７に導入し観察者による目視観察を可能にしている。

対物レンズ８の先端部には、遮光部材１８が装着されている。この遮光部材１８は、観察試料３と対物レンズ８の間の光路を覆うように設けられ、外部からの光を遮光するもので、観察光軸ａに沿って伸縮可能な筒状体、例えば、図２（ａ）に示すような蛇腹状部１８１を形成している。この場合、蛇腹状部１８１は、ズーム鏡筒７での変倍により変化する対物レンズ８のＷＤ（作動距離）の範囲を考慮して、このＷＤの範囲以上に観察光軸ａ方向の長さが設定されている。また、遮光部材１８は、両端部に開口部１８ａ、１８ｂが形成されている。一方の開口部１８ａは、円筒状になっていて、その内径は、対物レンズ８の外周部を嵌め込んで保持するような寸法になっている。また、他方の開口部１８ｂも円筒状になっていて、その内径寸法は、観察試料３の直径より大きく形成されている。

そして、このような遮光部材１８は、図２（ｂ）に示すように、落射蛍光観察の際に、一方の開口部１８ａに対物レンズ８の外周部を嵌め込んで保持し、他方の開口部１８ｂでステージ２上の観察試料３周囲を覆うように取り付けられる。このとき、他方の開口部１８ｂの端面をステージ２上面に当接させ、外部からの光が侵入しないように観察試料３周囲をしっかり覆うようにする。

なお、遮光部材１８は、蛍光観察時に観察試料３と相対する個所なので、特に中空部内周面は自家蛍光の少ない材料のもの使用することが望ましい。

次に、このように構成した顕微鏡で蛍光観察を行う場合について説明する。

この場合、上述したように対物レンズ８の先端部に遮光部材１８を装着する。このとき、遮光部材１８の一方の開口部１８ａに対物レンズ８の外周部を嵌め込んで保持し、他方の開口部１８ｂ端面をステージ２上面に当接させてステージ２上の観察試料３周囲を遮光する。

この状態から、光源１０から光が発せられると、この光は投光管９の照明光学系を介して励起フィルタ１２に入射し特定の波長光が選択される。そして、この選択された光は、ダイクロイックミラー１３で反射し、対物レンズ８を介し励起光として観察試料３に照射される。また、観察試料３より発せられる蛍光は、対物レンズ８、ダイクロイックミラー１３を透過し、さらに吸収フィルタ１４により蛍光波長域のみ透過し、鏡筒１５の観察光学系１６を介して接眼レンズ１７に達し、観察者により目視観察される。

この場合、対物レンズ８先端に装着された遮光部材１８により観察試料３周囲が覆われることにより、外部からの迷光が観察試料３側に入り込むのを確実に防止することができる。また、遮光部材１８の蛇腹状部１８１は、ズーム鏡筒７での変倍により変化する対物レンズ８のＷＤ（作動距離）の範囲を考慮して観察光軸ａ方向の長さが設定されているので、ズーム鏡筒７により倍率を変える毎に遮光部材１８を取外して交換する必要がなく、継続して蛍光観察を続けることができる。さらに、例えば、蛇腹状部１８１をプラスチックのようなある程度硬い素材で形成すれば、対物レンズ８に装着したまま上方に折りたたむことができる。

従って、このようにすれば、落射蛍光観察時に、ステージ２上に載置された観察試料３とステージ２上部に位置する対物レンズ８先端との間の光路を遮光部材１８で覆うようにしたので、蛍光観察時の観察試料３周囲からの迷光が効果的に遮断され、コントラストの良い蛍光像を観察者に提供することができる。また、観察試料３周辺の限られたスペースのみ暗室化できるので、試料周辺以外の部位の操作を妨げることがない。

また、遮光部材１８は、蛇腹状部１８１を形成し、対物レンズ８のＷＤの範囲を考慮して観察光軸ａ方向の長さが設定されているので、観察倍率及び対物レンズ倍率が変化しても同一の遮光部材１８により試料周囲の迷光を遮断することができる。

さらに、遮光部材１８を対物レンズ８に装着したまま観察試料３側を折りたたむことで、他方の開口部１８ｂ側を持ち上げることができるので、ステージ２上の観察試料３の交換を行なうことができるとともに、蛍光観察以外において簡易的な格納状態を得ることができる。

さらにまた、構成に必要な部品が少なく形状も簡単なため、製造が容易で、価格的にも安価にできる。

なお、上述した第１の実施の形態では、遮光部材１８の一方の開口部１８ａに対物レンズ８の外周部を嵌め込むようにしたが、遮光部材１８の固定個所は、対物レンズ８に限らない。例えば、図１と同一部分には同符号を付した図３（ａ）（ｂ）に示すように筒状にした遮光布２１を用意し、この遮光布２１の一方開口部をリング状バネ２２を用いてズーム鏡筒７の外周に挟み込んで固定するような方法も考えられる。また、筒状の遮光部材を、対物レンズ８に対して観察光軸ａ方向にスライド可能に支持し、落射蛍光観察時には、上方から引き下ろされて観察試料３の周囲を覆い、観察試料３の交換や、遮光が不要の場合は、対物レンズ８側に引き上げるように構成したものでもよい。また、剛体で形成された筒状の遮光部材で、一方開口部にねじ部を設け、この遮光部材を取り付ける対物レンズ８の外枠にもねじ部を設け、これらねじ部にビスをねじ込むことで、遮光部材の装着、固定、または対物レンズ８のＷＤに応じた遮光部材の取付位置の調節を行なうような方法を用いることもできる。その他、観察試料３と対物レンズ８先端との空間を遮光手段で満たすことが可能な構成であれば、特に取付け個所、締結法、素材などは問わない。

（変形例）
図４は、第１の実施の形態の変形例の要部の概略構成を示すもので、図１と同一部分には、同符号を付している。

この場合、対物レンズ８を取り付けたズーム鏡筒７には、遮光部材２３が設けられている。この遮光部材２３は、筒状の弾性部材で形成されたもので、観察試料３の周囲を覆うようになっている。また、遮光部材２３の側面には、穴部２４が複数形成されている。これら穴部２４は、観察試料３を操作するための操作手段としてのピンセット２５を挿入するもので、このピンセット２５の太さよりも、やや小さい開口径を有している。この場合、遮光部材２３を弾性部材で形成することで、穴部２４は、図５（ａ）に示すように、挿入物の大きさに併せて弾性変形するため、ピンセット２５を挿入した際も隙間をなくし、周囲の迷光の進入を防ぐことができるようにしている。また、穴部２４は、ピンセット２５を使用しない場合は、図５（ｂ）に示すように栓方式の蓋２６１を用いて閉じられるようにしている。

このように遮光部材２３の周囲に開閉可能な複数の穴部２４を設けることにより、蛍光観察時で遮光部材２３により観察試料３の周囲が覆われている状況でも、観察者は、観察試料３を見ながら両手でピンセット２５などを使い観察試料３を操作するようなことができる。

この場合、先に述べたピンセット２５の他に、マニピュレータ等も使用することができる。また、穴部２４は、穴本体に開閉自在に開閉蓋を組付けた蓋付き構造のものや、絞り口形状にした構造のものであってもよい。

（第２の実施の形態）
次に、本発明の第２の実施の形態を説明する。

図６は、本発明の第２の実施の形態の正立顕微鏡を適用した蛍光顕微鏡の概略図を示すもので、図１と同一部分には同符号を付している。

この場合、図７（ａ）に示すように対物レンズ８の先端外周部には、円周方向に沿って溝８ａが形成されている。

対物レンズ８の先端部には、筒状の遮光部材２６が装着されている。この遮光部材２６は、筒状の弾性部材からなるもので、一方の開口部２６１を肉厚に形成するとともに、その開口端に中心方向に延びる突出部２６１ａを形成している。また、遮光部材２６は、中間部を弛み部２６２に形成し、さらに、他方の開口部２６３を円筒状に形成している。ここで弛み部２６２は、観察試料３の水平方向の移動を保障するためのものである。

そして、このような遮光部材２６は、一方の開口部２６１に対物レンズ８の外周部を挿入するとともに、突出部２６１ａを溝８ａに嵌合する。また、他方の開口部２６３にステージ２上に載置された観察試料３の外周を嵌め込んで保持する。このとき、他方の開口部２６３の端面をステージ２上面に当接させ、対物レンズ８先端からステージ２上面までを密閉して外部からの光が侵入しないようにしている。

従って、このようにすれば、遮光部材２６の一方の開口部２６１を対物レンズ８の先端部に固定し、他方の開口部２６３に観察試料３の外周を嵌め込んで保持するようにしたので、対物レンズ８先端からステージ２上面までの空間を密閉でき、外部からの迷光が入り込むのを確実に防止することができる。また、遮光部材２６は、中間部を弛み部２６２に形成し、弾性部材による張力が観察試料３側に作用するのを抑制するとともに、水平方向にも変形可能な構成としたので、例えば、観察者が観察像を見ながら、図７（ａ）に示す状態から、同図（ｂ）（ｃ）に示すようにステージ２上で観察試料３を図示矢印方向の左右に移動させるようにしても観察試料３周囲の遮光を確保することができる。これにより、このような場合も、遮光部材２６を取外すなどする必要がなく継続して観察を続けることができることから蛍光観察の作業の効率化を実現できる。

（変形例１）
図８（ａ）（ｂ）は、第２の実施の形態の変形例１の要部の概略構成を示すもので、図６と同一部分には、同符号を付している。

この場合、ステージ２上に、試料保持部材２７が一体に設けられている。この試料保持部材２７は、遮光部材２６の他方の開口部２６３の内径に嵌合するような外径寸法を有している。また、この試料保持部材２７は、上面に矩形状の穴部２７ａが形成されている。この穴部２７ａは、スライドガラス２８を嵌め込み可能にしたものである。

そして、蛍光観察時には、試料保持部材２７の穴部２７ａにスライドガラス２８を落とし込み、その後、遮光部材２６の他方の開口部２６３に試料保持部材２７を嵌め込んで保持する。

従って、このようにすれば、観察試料がスライドガラス２８の場合、蛍光観察を行いながらのステージ２上でま位置決めを簡単に行なうことができる。

なお、試料保持部材２７の矩形状の穴部２７ａは、スライドガラス２８を嵌め込み可能な矩形状をしているが、スライドガラス２８の着脱を簡単にするため、穴部２７ａの縦または横方向の寸法をスライドガラス２８の対応する寸法よりやや大き目に形成したり、図８（ｂ）に示すように穴部２７ａの側縁の位置部に切欠部２７ｂを設けるようにしてもよい。

（変形例２）
図９（ａ）（ｂ）は、第３の実施の形態の変形例１の要部の概略構成を示すもので、図６と同一部分には、同符号を付している。

この場合、ステージ２は、対物レンズ８の直下に円形をした凹部２ａが形成されている。この凹部２ａには、円板状の中座２９が配置されている。この中座２９は、観察試料３が載置されるもので、凹部２ａに対して着脱可能で、さらに回転自在になっている。

そして、遮光部材２６の一方の開口部２６１に対物レンズ８の外周部を挿入するとともに、突出部２６１ａを溝８ａに嵌合する。また、他方の開口部２６３に観察試料３を緩めに嵌合する。この場合、開口部２６３の端面を中座２９上面に当接させ、対物レンズ８先端から中座２９までを密閉して外部からの光が侵入しないようにする。

遮光部材２６の他方の開口部２６３の内周面には、潤滑シート３１が貼り付けられている。この場合、潤滑シート３１の貼り付け範囲は、観察試料３の高さよりも僅かに高い位置まで及ぶようにしている。

従って、このようにしても、第２の実施の形態と同様に、遮光部材２６により対物レンズ８先端から中座２９上面までの空間を密閉でき、外部からの迷光が入り込むのを確実に防止することができる。また、中座２９を回転させることで、遮光部材２６を取り付けたまま観察試料３を回転移動させることができる。このとき、遮光部材２６の開口部２６３の内周面と観察試料３の間には、潤滑シート３１が介在しているので、中座２９の回転を容易にできる。また、遮光部材２６は、弛み部２６２により水平方向にも変形可能となっているので、遮光部材２６を外すことなく観察試料３を水平方向に移動することもできる。これにより、観察試料３を回転または水平移動させながら継続して観察を続けることができるようになり、蛍光観察の作業の効率化を実現できる。

なお、上述では、遮光部材２６の開口部２６３の内周面に中座２９の回転を容易にするため潤滑シート３１を貼付けるようにしたが、これに代えて、開口部２６３の内周面に潤滑油を塗布したり、開口部２６３内周面のみを鏡面素材で構成するなど、遮光部材２６と中座２９との間、あるいは遮光部材２６と観察試料３との間で摩擦軽減効果を持つものであれば、他の手段を用いることもできる。

その他、本発明は、上記実施の形態に限定されるものでなく、実施段階では、その要旨を変更しない範囲で種々変形することが可能である。

さらに、上記実施の形態には、種々の段階の発明が含まれており、開示されている複数の構成要件における適宜な組み合わせにより種々の発明が抽出できる。例えば、実施の形態に示されている全構成要件から幾つかの構成要件が削除されても、発明が解決しようとする課題の欄で述べた課題を解決でき、発明の効果の欄で述べられている効果が得られる場合には、この構成要件が削除された構成が発明として抽出できる。

本発明の第１の実施の形態の正立顕微鏡を適用した蛍光顕微鏡の概略図を示す図。 第１の実施の形態に用いられる遮光部材の概略図を示す図。 第１の実施の形態の他の例の要部の概略図を示す図。 第１の実施の形態の変形例の要部の概略図を示す図。 第１の実施の形態の変形例の作用を説明するための図。 本発明の第２の実施の形態の正立顕微鏡を適用した蛍光顕微鏡の概略図を示す図。 第２の実施の形態に用いられる遮光部材を説明するための図。 第２の実施の形態の変形例１の要部の概略図を示す図。 第２の実施の形態の変形例２の要部の概略図を示す図。 従来の正立顕微鏡を用いた蛍光顕微鏡の概略図を示す図。

符号の説明

１…ベース、２…ステージ、２ａ…凹部
３…観察試料、４…支柱、５…支持アーム、６…焦準部
６ａ…焦準ダイアル、７…ズーム鏡筒
７ａ…ズームハンドル、８…対物レンズ
８ａ…溝、９…投光管、１０…光源
１０ａ…光路、１１…電源装置
１２…励起フィルタ、１３…ダイクロイックミラー
１４…吸収フィルタ、１５…鏡筒
１６…観察光学系、１７…接眼レンズ
１８…遮光部材、１８ａ．１８ｂ…開口部、１８１…蛇腹状部
２１…遮光布、２２…リング状バネ
２３…遮光部材、２４…穴部、２５…ピンセット
２６１…蓋、２６…遮光部材、２６１…一方の開口部
２６１ａ…突出部、２６２…弛み部、２６３…他方の開口部
２７…試料保持部材、２７ａ…穴部、２７ｂ…切欠部、
２８…スライドガラス、２９…中座、３１…潤滑シート

Claims (10)

1. ステージ上に載置された試料に光を導く照明光学系と、
   前記試料から発せられる蛍光を前記ステージ上に位置される対物レンズを介して観察する観察光学系と、
   前記ステージと前記対物レンズとの間の光路を覆うように設けられ、外部からの光を遮光する遮光部材と
   を具備したことを特徴とする蛍光顕微鏡。
2. 前記遮光部材は、伸縮可能な筒状体からなり、一方の開口部を前記対物レンズに保持し、他方の開口部で前記試料周囲を覆うとともに、該他方の開口部を前記ステージ面に当接するように配置されることを特徴とする請求項１記載の蛍光顕微鏡。
3. 前記遮光部材は、前記対物レンズの作動距離の範囲以上に前記伸縮方向の長さが設定されることを特徴とする請求項２記載の蛍光顕微鏡。
4. 前記遮光部材は、伸縮可能な筒状体として蛇腹状部に形成されることを特徴とする請求項２または３記載の蛍光顕微鏡。
5. 前記遮光部材は、筒状の遮光布からなることを特徴とする請求項１記載の蛍光顕微鏡。
6. 前記遮光部材は、筒状で中間部に弛み部を有する弾性部材からなり、一方の開口部を前記対物レンズに保持し、他方の開口部に前記試料を保持するようにしたことを特徴とする請求項１記載の蛍光顕微鏡。
7. 前記ステージは前記試料を保持する試料保持手段を有し、前記遮光部材は、前記他方の開口部で前記試料保持手段を保持するようにしたことを特徴とする請求項６記載の蛍光顕微鏡。
8. 前記ステージは、前記試料を載置する回転自在な中座を有し、前記遮光部材は、前記他方の開口部で前記試料周囲を覆うとともに、該他方の開口部を前記中座面に当接するように配置されることを特徴とする請求項６記載の蛍光顕微鏡。
9. 前記遮光部材は、周囲に前記試料の操作手段を挿入する１つ以上の開閉可能な穴部を有することを特徴とする請求項１乃至８のいずれかに記載の蛍光顕微鏡。
10. ステージ上に載置された試料に光を導く照明光学系と、前記試料から発せられる蛍光を前記ステージ上に位置される対物レンズを介して観察する観察光学系とを具備する蛍光顕微鏡に用いられるものであって、
    前記ステージと前記対物レンズとの間の光路を覆うように設けられ、外部からの光を遮光することを特徴とする遮光部材。

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