JP2005114359A - 血液中のグルコースの測定方法およびそれに用いるセンサ - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 作用電極14、対電極15および試薬部19を含む分析部を有し、前記試薬部19が、血液成分の酸化還元酵素およびメディエータを有し、前記メディエータの存在下、血液成分を前記酸化還元酵素で酸化還元し、その際に生じる酸化還元電流を前記両電極14,15で検出する血液成分測定用センサにおいて、前記試薬部19に、さらに赤血球を溶血するための溶血剤(例えば、コール酸ナトリウム)を含有させ、前記酸化還元電流の測定の際に、前記溶血剤により赤血球を溶血させ、赤血球外部に流出したヘモグロビンと前記メディエータとを反応させ、この反応により生じる電流も併せて検出することにより、ヘマトクリットによる影響を補正する。
【選択図】 図1
Description
ラウリル硫酸ナトリウム(SDS)、
N,N-ビス(3-D-グルコンアミドプロピル)コールアミド (BIGCHAP )、
3−〔(3−コールアミドプロピル)ジメチルアンモニオ〕−1−プロパンスルホネート (CHAPS)、
N,N-ビス(3-D-グルコンアミドプロピル)デオキシコールアミド (deoxy-BIGCHAP )、
3−〔(3−コールアミドプロピル)ジメチルアンモニオ〕−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホネート (CHAPSO)、
n−デカノイル−N−メチルグルカミド (MEGA - 10)、
n−ノナノイル−N−メチルグルカミド (MEGA - 9)、
n−オクタノイル−N−メチルグルカミド (MEGA - 8)、
n - オクチル-β-D-チオグルコシド、
n - オクチル-β-D-マルトシド、
n - オクチル-β-D-グルコシド、
スクロースモノラウレート(SM1200)、
スクロースモノカプレート(SM1000)および
スクロースモノコレート等
があげられる。
0.02〜5.0mMを添加して溶解させる。そして、この溶液を、前記基板の分析部上(作用電極および対電極上)に滴下し、乾燥させることで試薬部が形成できる。前記乾燥は、自然乾燥でも温風を用いた強制乾燥でもよいが、高温過ぎると酵素が失活するおそれがあるから、50℃前後の温風が好ましい。
(試薬部組成)
・ 酵素(PQQ-GDH)
・ メディエータ(フェリシアン化カリウム)
・ 親水性高分子(CMC)
・ 酵素安定化剤(マルチトール)
・ 結晶均質化剤(タウリン)
・ 膜タンパク質可溶化剤(コール酸ナトリウム ; 1.2mM )
一方、100mg/dLおよび400mg/dLの2種類のグルコース濃度について、Hctを25%、45%および65%に調整したヒト全血の試料6種類を作製した。
(比較例)
溶血剤を使用しなかった以外は、実施例1と同様にしてセンサにおいて電流を測定した。この結果を図4のグラフに示す。図4のグラフも、図3のグラフと同様に、Hct値45%を基準とし、これから他のHct値における検出電流の乖離(%)を示すグラフである。
(膜タンパク質可溶化剤)
・タウロコール酸ナトリウム(1.2mM )
・タウロデオキシコール酸ナトリウム(1.2mM )
・グリココール酸ナトリウム(1.2mM )
このようにして作製したセンサを用いて、100mg/dLおよび400mg/dLの2種類のグルコース濃度について、Hctを25%、45%および65%に調整したヒト全血の試料6種類を実施例1と同様の手順でそれぞれ測定を行った。膜タンパク質可溶化剤として、タウロコール酸ナトリウムを使用したものを図6に、タウロデオキシコール酸ナトリウムを使用したものを図7に、グリココール酸ナトリウムを使用したものを図8にそれぞれ示す。図6、図7および図8のグラフは、Hct値45%を基準とし、これから他のHct値における検出電流の乖離(%)を示すグラフである。なお、電流測手条件および測定回数nも実施例1と同様である。
12 スペーサー
13 カバー
14 作用電極
15 対電極
16 検出電極
17 血液導入用の流路
18 空気抜孔
19 試薬部
Claims (20)
- メディエータの存在下、血液成分を酸化還元酵素で酸化還元し、その際に生じる酸化還元電流を電極で検出し、前記電流値を前記成分量に換算する血液成分の測定方法であって、前記酸化還元電流の検出の際に、赤血球を溶血させ、赤血球外部に流出したヘモグロビンと前記メディエータとを反応させ、この反応により生じる電流も併せて検出することにより、ヘマトクリットによる影響を補正して前記血液成分を測定することを特徴とする方法。
- 前記溶血が、膜タンパク質可溶化剤により実施される請求項1記載の方法。
- 前記膜タンパク質可溶化剤が、コール酸系界面活性剤である請求項2記載の方法。
- 前記コール酸系界面活性剤が、コール酸、コール酸ナトリウム、コール酸メチルエステル、ケノデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸ナトリウム、ジフェニルグリコール酸(ベンジル酸)、デオキシコール酸、デオキシコール酸ナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸、グリココール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸、グリコデオキシコール酸ナトリウム、グリコール酸、グリコール酸ナトリウム、グリコリトコール酸ナトリウム、リトコール酸、チオグリコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム、ウルソデオキシコール酸ナトリウムおよびウルソデオキシコール酸からなる群から選択される少なくとも一つである請求項3記載の方法。
- 前記膜タンパク質可溶化剤の量が、1回の測定当り、0.01mM〜100mMの範囲である請求項2から4のいずれかに記載の方法。
- 前記メディエータが、フェリシアン化カリウムである請求項1から5のいずれかに記載の方法。
- 測定対象の血液成分が、グルコース、乳酸、尿酸、ビリルビンおよびコレステロールからなる群から選択される少なくとも一つである請求項1から6のいずれかに記載の方法。
- 測定対象の血液成分がグルコースであり、前記酸化還元酵素が、グルコースオキシダーゼおよびグルコースデヒドロゲナーゼの少なくとも一方である請求項1から6のいずれかに記載の方法。
- 作用電極、対電極および試薬部を含む分析部を有し、前記試薬部が、血液成分の酸化還元酵素およびメディエータを有し、前記メディエータの存在下、血液成分を前記酸化還元酵素で酸化還元し、その際に生じる酸化還元電流を前記両電極で検出する血液成分測定用センサであって、前記試薬部は、さらに赤血球を溶血するための溶血剤を有し、前記酸化還元電流の測定の際に、前記溶血剤により赤血球を溶血させ、赤血球外部に流出したヘモグロビンと前記メディエータとを反応させ、この反応により生じる電流も併せて検出することにより、ヘマトクリットによる影響を補正することを特徴とするセンサ。
- 前記溶血剤が、膜タンパク質可溶化剤である請求項9記載のセンサ。
- 前記膜タンパク質可溶化剤が、コール酸系界面活性剤である請求項10記載のセンサ。
- 前記コール酸系界面活性剤が、コール酸、コール酸ナトリウム、コール酸メチルエステル、ケノデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸ナトリウム、ジフェニルグリコール酸(ベンジル酸)、デオキシコール酸、デオキシコール酸ナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸、グリココール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸、グリコデオキシコール酸ナトリウム、グリコール酸、グリコール酸ナトリウム、グリコリトコール酸ナトリウム、リトコール酸、チオグリコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム、ウルソデオキシコール酸ナトリウムおよびウルソデオキシコール酸からなる群から選択される少なくととも一つである請求項11記載のセンサ。
- 前記膜タンパク質可溶化剤の量が、1センサ当り、0.01mM〜100mMの範囲である請求項9から11のいずれかに記載のセンサ。
- 前記メディエータが、フェリシアン化カリウムである請求項9から13のいずれかに記載のセンサ。
- 測定対象の血液成分が、グルコース、乳酸、尿酸、ビリルビンおよびコレステロールからなる群から選択される少なくとも一つである請求項9から14のいずれかに記載のセンサ。
- 測定対象の血液成分がグルコースであり、前記酸化還元酵素が、グルコースオキシダーゼおよびグルコースデヒドロゲナーゼの少なくとも一方である請求項9から14のいずれかに記載のセンサ。
- 試薬部が、さらに、親水性高分子、酵素安定化剤および結晶均質化剤を含む請求項9から16のいずれかに記載のセンサ。
- さらに、絶縁基板を有し、この上に前記作用電極および前記対電極が配置され、この部分が分析部となり、前記分析部には、さらに前記試薬部が配置され、前記分析部には、ここに血液を導入するための流路の一端が連通しており、前記流路の他端は、外部に向かって開口しており、この開口部が血液供給口となっている請求項9から17のいずれかに記載のセンサ。
- さらに、スペーサーおよびカバーを有し、前記絶縁基板の上に、前記スペーサーを介して前記カバーが配置されている請求項18記載のセンサ。
- さらに、検出電極を有し、この検出電極は、前記血液供給口から前記分析部よりも後方に位置し、この検出電極により、前記分析部に血液が導入されたことを検出する請求項9から19のいずれかに記載のセンサ。
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