JP2005098722A - スクリーニング方法およびスクリーニング装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ウェル中に試薬と蛍光標識された細胞とを注入しておき、ニポウ方式の共焦点スキャナを用いて、光軸方向に焦点位置を変化させ、各焦点位置において前記ウェルに励起光を照射し、細胞から発生する蛍光を受け、細胞のスライス画像に基づいて細胞の活性度などを測定する。
【選択図】 図1
Description
図3は特許文献1に記載のスクリーニング装置の構成図である。この装置は、カメラに対して1−100倍の倍率を持つ標準的な対物レンズと、電源2を持つ光源(例えば、100W水銀−アーク灯または75Wキセノンンランプ)を使用するZeiss Axiovert倒立型蛍光顕微鏡のような倒立型蛍光顕微鏡1が使用される。顕微鏡対物レンズ上にはXY方向にプレート4を移動させるためのXYステージ3がある。
このようにして、試薬の細胞に対する作用効果を検出することができる。
(1)光学的な蛍光顕微鏡では、同時に細胞の上から下までのすべての部分にピントの合った画像は得られず、焦点ボケしたぼやけた画像しか得られない。したがって、細胞全体にわたる形態や活性度(ADMETOX:absorption, distribution, metabolism, excretion and toxicity:吸収・分布・代謝・排泄・毒性)などが把握できる綺麗でかつSN比の良い正確な画像は得られない。
(2)光源の熱エネルギーが強く、細胞に悪影響を与える。
(3)観測に先立って、対物レンズの焦点位置調整を行う必要がある。
本発明の他の目的は、励起光の照射光量を少なくし細胞に対して励起光の悪影響が出ないようにしたスクリーニング装置を提供することにある。
ウェル中に試薬と蛍光標識された細胞とを注入しておき、
ニポウ方式の共焦点スキャナを用いて、光軸方向に焦点位置を変化させつつ前記ウェルに励起光を照射し、細胞から発生する蛍光を受け、細胞のスライス画像に基づいて細胞の活性度などを測定するようにしたことを特徴とする。
試薬と蛍光標識された細胞とが複数のウェルに注入されてなるプレートを用意しておき、このウェルに励起光を照射して細胞から発生する蛍光を受け細胞の蛍光画像を得るセンサ部と、このセンサ部からの蛍光画像信号に適宜の処理を施す画像処理部と、この画像処理部の出力を表示する表示部を備え、細胞の動態などを観察測定するスクリーニング装置であって、
前記センサ部は、ニポウ方式の共焦点スキャナと、対物レンズと、この対物レンズの焦点位置を光軸方向に移動させる焦点位置可変手段と、前記共焦点スキャナの出力画像を撮像するカメラを含み、前記焦点位置可変手段により対物レンズの焦点位置を光軸方向に移動させつつ、共焦点スキャナから対物レンズを介して前記細胞に励起光を照射し、細胞の光軸方向に異なる複数のスライス画像を得るように構成されたことを特徴とする。
(1)ニポウ方式の共焦点スキャナを用いると共に、対物レンズの焦点位置を光軸方向に変化させてサンプルの画像を観察するため、高速に、綺麗で正確(SN比の良い)な画像を得ることができる。
(2)従来に比べて励起光の熱エネルギーが弱く、細胞に悪影響を与えないで観測できる。
(3)従来のように観測に先立って対物レンズの焦点位置調整を行う必要はない。
レーザ光源110から発生した励起光としてのレーザ光は、ニポウ方式の共焦点スキャナ120を通り、対物レンズ130によりプレート400のサンプル401上に集束する。レーザ光により励起され発光したサンプルからの蛍光は対物レンズ130を経由して共焦点スキャナ120に戻って来て、カメラ150に入力される。カメラ150ではサンプル401のXY平面の蛍光像が得られる。この場合、ニポウ方式の共焦点スキャナを使用しているため、高速で、しかも綺麗で正確な(SNの良い)画像が得られる。
図2において、励起光であるレーザ121は、マイクロレンズディスク122に配置された各マイクロレンズ123により個別の光束に集光され、ダイクロイックミラー124を透過後、ピンホールディスク(ニポウディスクともいう)125に設けられた個々のピンホール126を通過し、対物レンズ130によりサンプル401に集光される。
ここで使用されるダイクロイックミラー124は、励起光121を透過し、サンプル401からの蛍光を反射するように設計されている。
そして本装置では従来の装置とは異なり高速で、綺麗な正確なSN比の良い画像が得られることから、容易に細胞ごとの動態などを正確に得ることができる。
処理した画像は中央処理装置500により表示部600に表示される。
中央処理装置500は、また、機構制御部200、アクチュエータ140、画像処理部300を適宜制御する。
センサ部100からのレーザ光(励起光)によりサンプルが照射され、細胞から蛍光が発生する。この蛍光は対物レンズ130、アクチュエータ140を通って、共焦点スキャナ120上に結像する。その像(細胞画像)はカメラ150で読取られる。
なお、画像処理では、例えば、3次元データ処理によりカメラ150で得られた複数のスライス画像から1枚の2次元画像(重ね合わせ画像)としたり、蛍光の発現量の違いに応じて画像を色分けするなどの処理も行う。また、画像処理に、ハフ変換処理も含めることもできる。
このようにして、従来の蛍光顕微鏡を用いた装置では得られない綺麗でSN比の良い性格な画像を観測することができる。
例えば、実施例では3次元対物レンズ130をピエゾアクチュエータ140でZ軸方向に走査するようにしたが、遠・中・近などのマルチヘッドを用いて3次元処理するようにしてもよい。
あるいはまた、対物レンズ130をピエゾアクチュエータで駆動するのではなく、対物レンズ130と共焦点スキャナ120の間に電圧制御型の可変焦点レンズを挿入して電圧制御により対物レンズのサンプルへの焦点位置を移動させるようにしてもよい。
また、ニポウ方式の共焦点スキャナにおいて、その出力画像をラインセンサを用いて検出するようにしてもよい。これによれば、同時性と更なる高分解能性を同時に達成することができる。この場合、ラインセンサとして、マルチカラーラインセンサを用いてもよい。
110 レーザ光源
120 共焦点スキャナ
121 レーザ
122 マイクロレンズディスク
123 マイクロレンズ
124 ダイクロイックミラー
125 ピンホールディスク
126 ピンホール
127 部材
128 回転軸
129 リレーレンズ
130 対物レンズ
140 アクチュエータ
150 カメラ
151 受光素子
200 機構制御部
300 画像処理部
400 プレート
401 サンプル
500 中央処理装置
600 表示部
Claims (10)
- ウェル中に試薬と蛍光標識された細胞とを注入しておき、
ニポウ方式の共焦点スキャナを用いて、光軸方向に焦点位置を変化させ、各焦点位置において前記ウェルに励起光を照射し、細胞から発生する蛍光を受け、細胞のスライス画像に基づいて細胞の活性度などを測定するようにしたスクリーニング方法。 - 複数のスライス画像または長焦点画像に基づいて細胞の活性度などを測定するようにしたことを特徴とする請求項1に記載のスクリーニング方法。
- 試薬と蛍光標識された細胞とが複数のウェルに注入されてなるプレートを用意しておき、このウェルに励起光を照射して細胞から発生する蛍光を受け細胞の蛍光画像を得るセンサ部と、このセンサ部からの蛍光画像信号に適宜の処理を施す画像処理部と、この画像処理部の出力を表示する表示部を備え、細胞の動態などを観測するスクリーニング装置であって、
前記センサ部は、ニポウ方式の共焦点スキャナと、対物レンズと、この対物レンズの焦点位置を光軸方向に移動させる焦点位置可変手段と、前記共焦点スキャナの出力画像を撮像するカメラを含み、前記焦点位置可変手段により対物レンズの焦点位置を光軸方向に移動させ各焦点位置において、共焦点スキャナから対物レンズを介して前記細胞に励起光を照射し、細胞の光軸方向に異なる複数のスライス画像を得るように構成されたことを特徴とするスクリーニング装置。 - 前記画像処理部は、前記複数のスライス画像または長焦点画像に基づいて細胞の画像を求める機能を備えたことを特徴とする請求項3に記載のスクリーニング装置。
- 前記センサ部の焦点位置可変手段は、対物レンズまたはセンサ部全体を光軸方向に移動することを特徴とする請求項3または4に記載のスクリーニング装置。
- 前記センサ部の焦点位置可変手段は、ピエゾアクチュエータを用いたことを特徴とする請求項5に記載のスクリーニング装置。
- 前記センサ部は、互いに焦点位置の異なるマルチヘッドを使用して、マルチヘッドを切り換えることにより焦点位置を移動させるようにしたことを特徴とする請求項3または4に記載のスクリーニング装置。
- 前記センサ部は、励起光として赤外光を使用し、2光子吸収を誘起して前記細胞から蛍光を発生させるようにしたことを特徴とする請求項3ないし7のいずれかに記載のスクリーニング装置。
- 前記ウェルに注入された細胞があらかじめ量子ドットを用いて染色されており、
前記センサ部は、前記細胞に短波長のレーザ光を照射し、識別機能を持つ分光特性を持つフィルターを介して、共焦点スキャナの出力画像をカメラで撮像するように構成したことを特徴とする請求項3ないし8のいずれかに記載のスクリーニング装置。 - 前記センサ部は、前記共焦点スキャナの出力画像をラインセンサを用いて検出するように構成したことを特徴とする請求項3ないし9のいずれかに記載のスクリーニング装置。
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2003
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