JP2004516232A

JP2004516232A - Ｃｌａ異性体の調製方法

Info

Publication number: JP2004516232A
Application number: JP2001578388A
Authority: JP
Inventors: アスイエイルセボ，; ペールクリスチャンセボ，
Original assignee: コンリンコ，インコーポレイテッド
Priority date: 2000-04-24
Filing date: 2001-04-24
Publication date: 2004-06-03
Also published as: NO20025084D0; EP1276709A2; WO2001081290A3; NO327744B1; CA2406228C; AU5762701A; AU2001257627B2; DE60114176D1; EP1276709B1; DE60114176T2; ATE307108T1; US6380409B1; ES2247105T3; WO2001081290A2; NO20025084L; CA2406228A1

Abstract

共役リノール酸異性体を含む、新規組成物を、ガスクロマトグラフィー中のコントロールのために、または動物飼育研究のために使用し得る。共役リノール酸の精製した異性体を処理して、ＣＬＡの２つの異性体を含有した調製物を生成し得る。この調製物は、そのままの状態で使用し得るか、またはさらに処理して２つの異性体を分離し得る。これらの異性体は、これらの遊離脂肪酸形成において使用され得るかあるいはアルキルエステルまたはトリグリセリドに転換され得る。さらに、これらの異性体は、食料品または飼料のための補助剤として有用である。

Description

【０００１】
（発明の分野）
本発明は、脂質の生化学に関し、詳細には、共役リノール酸の種々の異性体の調製に関する。
【０００２】
（発明の背景）
１９７８年に、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎの研究者らは、調理された牛肉中に含まれる突然変異誘発を阻害するようである物質の同定を得た。この物質は、共役した二重結合を有するリノール酸（Ｃ１８：２）の位置異性体の混合物であることが見出された。ｃ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｃ１２異性体は、非常に多量存在するが、どの異性体が観察された生物学的活性の原因であるかは不確定である。９，１１異性体が動物組織のリン脂質画分にいくらか優先的に取り込まれかつ組み込まれ、そして１０，１２異性体はその程度が低いようであることが、標識された取り込み研究より記述されてきた（Ｈａら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５０：１０９７（１９９０））。
【０００３】
共役リノール酸（ＣＬＡと称する）に関する生物学的活性は、多様でありかつ複雑である。現在、作用の機構についてほとんど知られていないが、進行中のいくつかの前臨床研究および臨床研究は、作用の生理学的様式および生化学的様式に新たな光を与えるようである。ＣＬＡの抗発癌性特性は、十分実証されてきた。ＣＬＡの投与は、Ｂｉｒｔら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５２：２０３５ｓ（１９９２）によって実証されるようにラット乳腺腫瘍形成を阻害する。Ｈａら（上記）は、マウス噴門洞新生物形成モデルにおいて、同様の結果を報告した。ＣＬＡはまた、インビトロで標的ヒト黒色腫、結腸直腸癌細胞および乳癌細胞に対する強力な細胞傷害性剤として同定された。
【０００４】
ＣＬＡ作用の機構は未だ不明であるが、免疫系のいくつかの成分が、少なくともインビボで関与し得るという証拠が存在する。米国特許第５，５８５，４００号（Ｃｏｏｋら、本明細書中に参照として援用される）は、ＣＬＡを含有する食餌を投与することによって、Ｉ型またはＩｇＥ過敏性によって媒介される、動物でのアレルギー性反応を減弱するための方法を開示する。約０．１〜１．０％の濃度でのＣＬＡはまた、白血球を保存するに効果的なアジュバントであることが示された。米国特許第５，６７４，９０１号（Ｃｏｏｋら）（本明細書中に参照として援用される）は、遊離酸または塩のいずれかの形態でのＣＬＡの経口または非経口の投与が、細胞性免疫に関与するＣＤ−４およびＣＤ−８のリンパ球亜集団における上昇をもたらしたことを開示した。外因性腫瘍壊死因子での前処置により生じる不利な効果は、ＣＬＡが投与された動物中のＣＤ−４細胞およびＣＤ−８細胞のレベルの上昇または維持により間接的に緩和され得る。最後に、米国特許第５，４３０，０６６号（Ｃｏｏｋら）（参考として本明細書中に援用される）は、免疫刺激による体重減少および食欲不振を予防する際のＣＬＡの効果を記載する。
【０００５】
上記のＣＬＡの有力な治療的適用および薬理的適用とは別に、栄養補助食品としてのＣＬＡの使用に関して、非常に興奮させられている。ＣＬＡは、身体構成に対して非常に一般化された効果を発揮することが見出されている。特に、脂肪組織塊と脂肪のない組織塊との区画を再指向する。米国特許第５，５５４，６４６号（Ｃｏｏｋら）（参考として本明細書中に援用される）は、栄養補助食品としてＣＬＡを利用する方法を開示し、ここで、ブタ、マウスおよびヒトは、０．５％ＣＬＡを含有する食品を給餌された。各種において、脂肪含量における顕著な減少が、タンパク質質量において付随する増加とともに観察された。これらの動物において、ＣＬＡの添加による食餌の脂肪酸含量の増加は、体重の増加をもたらさないが、身体内の脂肪および無脂肪（ｌｅａｎ）の再分布に関連したことは興味深い。目的の別の食餌現象は、食餌転換に対するＣＬＡ補填の効果である。米国特許第５，４２８，０７２号（Ｃｏｏｋら、本明細書中に参考として援用される）は、動物食餌（トリおよび哺乳動物）へのＣＬＡの組み込みがＣＬＡ補填トリおよび哺乳動物におけるかなりの体重増加を導く食餌変換の効果を増加することを示すデータを提供した。食品動物飼育者にとってＣＬＡ補填の潜在的な有利な効果は、明白である。
【０００６】
ＣＬＡにおける目的の別の重要な供給源、およびその初期の商業的潜在性を強調するものは、それがヒトおよび動物などによって消費される食品および食餌の中に天然に存在することである。特に、ＣＬＡは、反芻動物からの産物中に豊富である。例えばＣＬＡが、種々の乳製品において調査された、いくつかの研究が実施されてきた。Ａｎｅｊａら、Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．，４３：２３１（１９９０）は、牛乳からヨーグルトへの加工がＣＬＡの濃縮を生じることを観察した。（Ｓｈａｎｔａら、ＦｏｏｄＣｈｅｍ．，４７：２５７（１９９３））は、処理する温度および乳清の添加における組合わせた増加が、プロセスチーズの調製の間ＣＬＡ濃度を増加したことを示した。別の研究において、Ｓｈａｎｔａら、Ｊ．ＦｏｏｄＳｃｉ．６０：６９５（１９９５）は、処理および貯蔵の条件は明らかにはＣＬＡ濃度を減少しないがいずれの増加も観察されなかったことを報告した。実際、いくつかの研究は、季節的変動または動物間の変動は牛乳のＣＬＡ含量における３倍もの差異の原因であり得ることを示した（例えば、Ｐａｒｏｄｉら、ＪＤａｉｒｙＳｃｉ．，６０：１５５０（１９９７）を参照のこと）。また、食物因子は、ＣＬＡ含量の変動に関係している（Ｃｈｉｎら、Ｊ．ＦｏｏｄＣｏｍｐ．Ａｎａｌ．，５：１８５（１９９２））。天然の供給源におけるこのＣＬＡ含量の変動に起因して、規定された量の種々の食品の摂取は、ヒト（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）または動物が最適用量を受けて所望の栄養効果を達成することを確保することを保障しない。
【０００７】
治療的適用および栄養的適用の両方のためのＣＬＡの規定された市販の供給源の開発において、大量の規定された材料の産生のためのプロセスが必要とされる。従来のアプローチによって産生されるほとんどのＣＬＡ産物についての問題は、その異質性、およびバッチ間でのアイソフォームにおける実質的な変化である。最近の文献は、この変化について実証し、そしてＣＬＡの生産者が自分達の製品の複雑な性質を評価することの必要性を示す（Ｃｈｒｉｓｔｉｅら、ＪＡＯＣＳ、７４（１１）：１２３１（１９９７）を参照のこと）。
【０００８】
獣脂の代わりに多量の硬化油およびショートニングを摂取することは、トランス脂肪酸量の高い食餌を生じる、という事実にもまた、多くの注意が払われてきた。例えば、Ｈｏｌｍａｎら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：４８３０（１９９１））は、硬化油を給餌されたラットは異常なポリ不飽和脂肪酸異性体のラット肝における蓄積を生じることを示した。これは、天然に存在するポリ不飽和脂肪酸の正常な代謝を妨害するようである。従って、ＣＬＡの種々の異性体の化学的分析および生物学的分析に対して強い要求が存在する。
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、脂質の生化学に関し、詳細には、共役リノール酸（オクタデカジエン酸）の種々の異性体の調製に関する。本発明は、いずれの特定のオクタデカジエン酸異性体の産生にも限定されない。実際に、ｃ９，ｔ１１オクタデカジエン酸、ｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸、ｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸、ｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸、ｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸、ｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸、ｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸、ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸、ｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸、およびｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸が挙げられるが、これらに限定されない種々の異性体が調製され得る。この異性体は、遊離脂肪酸、アルキルエステル、またはアシルグリセリドとして提供され得る。従って、いくつかの実施形態において、本発明は、前述の異性体のうちの１つを２５％よりも多く含む組成物を提供する。さらに他の実施形態において、本発明は、前述の異性体のうちの１つを４０％よりも多く含む組成物を提供する。さらに他の実施形態において、本発明は、前述の異性体のうちの１つを５０％よりも多く含む組成物を提供する。もう一度述べると、この異性体は、遊離脂肪酸、アルキルエステル、またはアシルグリセリドとして提供され得る。いくつかの他の好ましい実施形態において、本発明は、５０％よりも多くのｃ１１，ｔ１３ＣＬＡを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、６０％よりも多くのｃ１１，ｔ１３ＣＬＡを含む組成物を提供する。
【００１０】
特に好ましい実施形態において、本発明は、共役リノール酸の異性体の残基を含むアシルグリセロールの混合物を提供し、ここで、前記アシルグリセロールの脂肪アシル含有量は、以下からなる群から選択される共役リノール酸異性体の少なくとも２５％である：ｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸、ｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸、ｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸、ｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸、ｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸、ｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸、ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸、ｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸、およびｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸。他の特定の好ましい実施形態において、本発明は、共役リノール酸の異性体の残基を含むアシルグリセロールの混合物を提供し、ここで、前記アシルグリセロールの脂肪アシル含有量は、以下からなる群から選択される共役リノール酸異性体の少なくとも４５％である：ｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸、ｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸、ｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸、ｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸、ｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸、ｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸、ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸、ｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸、およびｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸。なおさらなる特定の好ましい実施形態において、本発明は、共役リノール酸の異性体の残基を含むアシルグリセロールの混合物を提供し、ここで、前記アシルグリセロールの脂肪アシル含有量は、以下からなる群から選択される共役リノール酸異性体の少なくとも５０％である：ｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸、ｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸、ｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸、ｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸、ｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸、ｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸、ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸、ｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸、およびｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸。
【００１１】
他の実施形態において、本発明は、共役リノール酸の異性体を含む組成物を提供し、ここで、この組成物は、少なくとも２５％のオクタデカジエン酸の第１異性体、および少なくとも２５％の前記第１異性体の姉妹異性体（ｓｉｓｔｅｒｉｓｏｍｅｒ）を含むか、または実質的にこれらからなる。本発明は、姉妹異性体のいずれの対にも限定されない。実際、種々の姉妹異性体対が考えられ、この姉妹異性体は、以下を含むが、これらに限定されない：ｃ９，ｔ１１オクタデカジエン酸およびｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸およびｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸およびｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸およびｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸およびｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸およびｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸、ｃ４，ｔ６オクタデカジエン酸およびｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸およびｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸、ならびにｔ１３，ｃ１５オクタデカジエン酸およびｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸。この異性体は、遊離脂肪酸、アルキルエステル、またはアシルグリセリドとして提供され得る。
【００１２】
なお他の実施形態において、本発明は、オクタデカジエン酸異性体の対および／または個々のオクタデカジエン酸異性体を調製する方法を提供し、これらは以下：ａ）第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体を提供する工程；およびｂ）この第１オクタデカジエン酸異性体を、共役結合系が移動するような条件下で処理し、それによってオクタデカジエン酸の少なくとも第１異性体および第２異性体を含む混合物を形成する工程、を包含する。なおさらなる実施形態において、この方法は、工程ｃ）オクタデカジエン酸の少なくとも第１異性体および第２異性体を分離し、第２の精製されたオクタデカジエン酸異性体を提供する工程、をさらに包含する。本発明の他の実施形態において、この条件は、部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体を加熱する工程を包含する。なおさらなる実施形態において、この分離する工程は、ガス液体クロマトグラフィによって達成される。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｃ９，ｔ１１オクタデカジエン酸およびｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸およびｃ９，ｔ１１オクタデカジエン酸である。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸およびｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸およびｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸である。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸およびｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸およびｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸である。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸およびｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸およびｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸である。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸およびｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸およびｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸である。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸およびｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸およびｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸である。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸およびｃ４，ｔ６オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｃ４，ｔ６オクタデカジエン酸およびｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸である。他の実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸およびｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸およびｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸である。いくつかの実施形態において、この第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体は、ｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸およびｔ１３，ｃ１５オクタデカジエン酸の１つであり、そして第２のオクタデカジエン酸異性体は、もう一方のｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸およびｔ１３，ｃ１５オクタデカジエン酸である。
【００１３】
なおさらなる実施形態において、本発明は、上記の方法によって生成される組成物を提供する。いくつかの実施形態において、第二の異性体は、第一の異性体の３０％よりも高い濃度で存在する。他の実施形態において、第二の異性体は、第一の異性体の４０％よりも高い濃度で存在する。なおさらなる実施形態において、第二の異性体は、第一の異性体の２０％と８０％との間の濃度で存在する。
【００１４】
（定義）
本明細書において用いる場合、「共役リノール酸」または「ＣＬＡ」とは、任意の、共役リノール酸、またはオクタデカジエン遊離脂肪酸をいう。この用語は、分子の任意の位置で２つの共役炭素間二重結合を有する、リノール酸の全ての位置的および幾何的な異性体（アイソマー）を包含し、そして示すことが意図される。ＣＬＡは、普通のリノール酸が、炭素原子９および１２で二重結合を有するという点で、普通のリノール酸とは異なる。ＣＬＡの例としては、以下：２，４−オクタデカジエン酸、４，６−オクタデカジエン酸、６，８−オクタデカジエン酸、７，９−オクタデカジエン酸、８，１０−オクタデカジエン酸、９，１１−オクタデカジエン酸、および１０，１２−オクタデカジエン酸、１１，１３−オクタデカジエン酸、の位置異性体のシス異性体およびトランス異性体（「Ｅ／Ｚ異性体」）が挙げられる。本明細書において用いる場合、「ＣＬＡ」は、単一の異性体、２つ以上の異性体の選択された混合物、および天然の供給源から得られた異性体の非選択的混合物、ならびに合成ＣＬＡおよび半合成ＣＬＡを包含する。
【００１５】
本明細書において用いる場合、用語「異性化された共役リノール酸」は、化学的方法（例えば、水性アルカリ異性化、非水性アルカリ異性化、またはアルカリアルコレート異性化）によって合成されたＣＬＡをいう。
【００１６】
本明細書において用いる場合、用語「共役リノール酸部分」とは、共役リノール酸または誘導体を含む任意の化合物または複数の化合物をいう。例としては、共役リノール酸の脂肪酸、アルキルエステル、およびトリグリセリドが挙げられるがこれらに限定されない。
【００１７】
本明細書において用いる場合、ＣＬＡの「トリグリセリド」は、グリセロール骨格の上の３つの位置（例えば、ＳＮ−１、ＳＮ−２、またはＳＮ−３の位置）の任意または３つ全ての位置においてＣＬＡを含むことが意図される。従って、ＣＬＡを含有するトリグリセリドは、ＣＬＡの位置異性体および幾何異性体のうちいずれかを含み得る。本明細書において用いる場合、「アシルグリセロール」とは、グリセロール分子上の利用可能な位置のうちのいずれか１つの位置での１つ（モノアシルグリセロール）、２つ（ジアシルグリセロール）、または３つ（トリアシルグリセロールまたはトリグリセリド）の脂肪酸残基を有するグリセロール分子をいう。トリグリセリドまたはアシルグリセロールの混合物は、様々な量のＣＬＡの特定の異性体を含有し得、この異性体は、トリグリセリドを生成するために使用されるＣＬＡにおける特定の異性体の濃度に依存し、そして酵素学的手順を使用してトリグリセリドまたはアシルグリセロールを作製する場合、利用されるリパーゼの特異性に依存する。従って、得られたトリグリセリドまたはアシルグリセロールの混合物または組成物を、全混合物または組成物内に含まれる特定のＣＬＡ異性体の（割合に基づく）量に関して特徴付けることは簡便である。非限定的な例によって、グリセロール骨格上の種々の位置においてＣＬＡ残基を含有するトリグリセリドまたはアシルグリセロール組成物は、特定の共役リノール酸異性体が混合物中のトリグリセリドのＳＮ−１、ＳＮ−２、およびＳＮ−３の位置のいずれかの位置の少なくとも２５％を占める場合、この共役リノール酸異性体の少なくとも２５％の脂肪アシル残基含有量を有すると言われ得る。別の観点から見ると、脂肪アシル残基が鹸化によって除去される場合、得られる脂肪酸塩の混合物は、少なくとも２５％の特定の異性体を含む。
【００１８】
本明細書において用いる場合、ＣＬＡの「エステル」は、アルコールまたは任意の他の化学基（生理学的に受容可能な、天然に存在するアルコール（例えば、メタノール、エタノールまたはプロパノール）が挙げられるがこれらに限定されない）に対してエステル結合を通じて結合したＣＬＡの位置異性体および幾何異性体のいずれかおよび全てを含むことが意図される。従って、ＣＬＡのエステルまたはエステル化されたＣＬＡは、ＣＬＡの任意の位置異性体および幾何異性体を含み得る。
【００１９】
ＣＬＡの「天然に存在しない（非天然）異性体」としては、ｃ１１，ｔ１３；ｔ１１，ｃ１３；ｔ１１，ｔ１３；ｃ１１，ｃ１３；ｃ８，ｔ１０；ｔ８，ｃ１０；ｔ８，ｔ１０；ｃ８，ｃ１０；ならびにオクタデカジエン酸のトランス−トランス異性体が挙げられるがこれらに限定されない。しかし、この定義は、オクタデカジエン酸のｔ１０、ｃ１２、およびｃ９，ｔ１１の異性体を含まない。「天然に存在しない異性体」はまた、ＣＬＡがアルカリ異性化によって合成されるとき、これらの異性体が一般に低量で生成されるので、ＣＬＡの「マイナー異性体」とも呼ばれ得る。
【００２０】
本明細書において用いる場合、「低不純物」ＣＬＡとは、遊離脂肪酸、アルキルエステル、およびトリグリセリドを含み、１％未満の８，１０−オクタデカジエン酸、１１，１３−オクタデカジエン酸、またはトランス−トランスオクタデカジエン酸の総量を含む、ＣＬＡ組成物をいう。
【００２１】
本明細書において用いる場合、「ｃ」は、シス配向における化学結合を包含し、そして「ｔ」は、トランス配向における化学結合をいう。ＣＬＡの位置異性体が「ｃ」も「ｔ」もなしに命名されるならば、その命名は、４つ全ての可能性のある異性体を含む。例えば、１０，１２−オクタデカジエン酸は，ｃ１０，ｔ１２；ｔ１０，ｃ１２；ｔ１０，ｔ１２；およびｃ１０，ｃ１２−オクタデカジエン酸を包含するが、ｔ１０，ｃ１２−オクタデカジエン酸またはＣＬＡは、単一の異性体のみをいう。
【００２２】
本明細書において用いる場合、用語「オイル（油）」とは、長鎖脂肪酸（例えば、ＣＬＡ）、トリグリセリド、または他の長鎖炭化水素基を含む、自由流動性の液体をいう。長鎖脂肪酸としては、ＣＬＡの種々の異性体が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２３】
本明細書において用いる場合、用語「生理学的に受容可能なキャリア」とは、油状の医薬品とともに通常用いられる任意のキャリアまたは賦形剤をいう。このようなキャリアまたは賦形剤としては、オイル、デンプンおよび糖（例えば、スクロースおよびラクトース）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２４】
本明細書において用いる場合、用語「経口送達ビヒクル」とは、医薬品を経口的に送達する任意の手段をいい、カプセル、丸剤、錠剤、およびシロップが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２５】
本明細書において用いる場合、用語「食品（ｆｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔ）」とは、ヒト、非反芻動物、または反芻動物による消費に適切な任意の食物または飼料をいう。「食品」とは、調製され包装された食物（例えば、マヨネーズ、サラダドレッシング、パン、またはチーズ食品）、または動物用飼料（例えば、押し出されたおよびペレット化された動物用飼料または粗混合飼料）であり得る。「調製された食品」とは、ヒトまたは動物の消費について承認された予め包装された任意の食物を意味する。
【００２６】
本明細書において用いる場合、用語「フードスタッフ」とは、ヒトまたは動物の消費に適した任意の物質をいう。
【００２７】
本明細書において用いる場合、用語「揮発性有機化合物」とは、所定の温度で部分的に、または完全にガス状態で存在する、任意の炭素含有化合物をいう。揮発性有機化合物は、有機化合物（例えば、ＣＬＡ）の酸化から形成され得る。揮発性有機化合物の例としては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、２−ブテナール、エタノール、３−メチルブタナール、４−メチルペンタノン、ヘキサナール、ヘプタナール、２−ペンチルフランおよびオクタナールが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２８】
本明細書において用いる場合、用語「金属酸化剤キレート剤」とは、金属をキレート化する任意の抗酸化剤をいう。例としては、レシチンおよびクエン酸エステルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２９】
本明細書において用いる場合、用語「部分的に精製する」とは、目的の成分からいくらかの不純物を除去する任意のプロセス（例えば、共役リノール酸調製物から望ましくない異性体を除去すること）を意味する。それによって、精製された成分の割合は、サンプル中で増大する（すなわち、目的の成分が濃縮される）。
【００３０】
本明細書において用いる場合、用語「姉妹（ｓｉｓｔｅｒ）異性体」とは、いくつかの処理（例えば、加熱）によって相互変換され得る共役リノール酸異性体の対をいう。姉妹異性体の例は、下記の表１で提供される。
【００３１】
本明細書において用いる場合、用語「共役結合系」とは、糖鎖：−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−（すなわち、単結合によって分離された２つの二重鎖）の糖鎖の不飽和二重結合の配置をいう。
【００３２】
本明細書において用いる場合、用語「移動」とは、糖鎖における共役結合系を参照するのに使用される場合、糖鎖内の不飽和の炭素間二重結合の転位をいい、その結果、二重結合は、その鎖の上位または下位に移動される。
【００３３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、脂質生化学に関し、詳細には、共役リノール酸の種々の異性体の調製物に関する。リノール酸の共役位置ヘの二重結合の転位は、触媒（例えば、高温でのニッケルまたはアルカリ）を用いた処理の間、および自動酸化の間に生じることが示されている。理論的に、９，１１−オクタデカジエン酸および１０，１２−オクタデカジエン酸（ｃ９，ｃ１１；ｃ９，ｔ１１；ｔ９，ｃ１１；ｔ９，ｔ１１；ｃ１０，ｃ１２；ｃ１０，ｔ１２；ｔ１０，ｃ１２およびｔ１０，ｔ１２）の８つの可能な幾何異性体は、ｃ９，ｃ１２−オクタデカジエン酸の異性化から形成される。リノール酸の異性化についての一般的な機構は、Ｊ．Ｃ．Ｃｏｗａｎ（ＪＡＯＣＳ７２：４９２−９９［１９５０］）により記載された。二重結合は、活性化触媒との衝突の結果によって分極されると考えられる。次いで、分極した炭素原子およびその隣接炭素は、自由に回転し、この力は、不完全な炭素原子を本質的に平面にするような力である。次いで、システムが衝突の結果として定められたこれらの力を解放するように作動する場合、シスおよびトランスの両異性体が形成される。特定のＣＬＡの異性体の形成は、熱力学的に支持される。これは、共役二重結合周囲の５つの炭素原子の共面特性および共鳴ラジカルの空間的衝突に起因する。９，１１異性体および１０，１２異性体の相対的により高い分布は、明らかに、ｃ９，ｔ１１またはｔ１０，ｃ１２幾何異性体のさらなる安定化から生じる。
【００３４】
ガスクロマトグラフィーの進歩は、研究者がＣＬＡのサンプルの異性体組成を正確に決定するのを可能にする。これらの研究は、８つより多い異性体が共役の間に実際に形成されることを実証する。Ｃｈｒｉｓｔｉｅらの研究において（ＪＡＯＣＳ７４（１１）：１２３１［１９９７］）、ＣＬＡの市販のサンプルの異性体分布は、以下のようであることが報告された：８，１０（１４％）；９，１１（３０％）；１０，１２（３１％）および１１，１３（２４％）。Ｃｈｒｉｓｔｉｅらによる別の研究において（Ｌｉｐｉｄｓ３３（２）：２１７−２１［１９９８］）、市販のＣＬＡ調製物の以下のＣＬＡ異性体組成が報告された：ｔ１１，ｔ１３（７４％）；ｔ１０，ｔ１２（１．２３％）；ｔ９，ｔ１１（１．１８％）；ｔ８，ｔ１０（０．４６％）；ｃ１１，ｔ１３およびｔ１１，ｃ１３（２１．７％）；ｃ１０，ｔ１２およびｔ１０，ｃ１２（２９．０％）；ｃ９，ｔ１１およびｔ９，ｃ１１（２９．５％）；ｃ８，ｔ１０およびｔ８，ｃ１０（１２．３％）；ｃ１１，ｃ１３（０．９６％）；ｃ１０，ｃ１２（０．８８％）；ｃ９，ｃ１１（０．８８％）；ならびにｃ８，ｃ１０（０．２０％）。これらの研究から理解され得るように、特定の異性体の形成が支持されるにもかかわらず、ＣＬＡの他の異性体は、アルカリ異性化ＣＬＡ調製物の組成に強く寄与し得る。
【００３５】
（Ａ．共役二重結合の移動）
本発明は、ＣＬＡの異なる異性体について濃縮された組成物を生成するための方法を提供する。本発明のいくつかの実施形態において、部分的に精製されたまたは濃縮されたＣＬＡの異性体は、二重結合系の移動を引き起こす条件下で処理される。好ましい実施形態において、この条件は、少なくとも１つの異性体を約２００〜２４０℃、好ましくは、約２２０℃まで加熱することを含む。他の実施形態において、この条件は、部分的に精製されたまたは濃縮された異性体を密封容器中において窒素下で反応させることをさらに含む。表１を参照すると、欄１の異性体の調製物を使用して、欄２の相当量の対応する異性体を含有する調製物を生成し得る。初期変換反応の後、この調製物は、開始異性体および「姉妹」異性体の両方を含有する。同様に、欄２の異性体の調製物を使用して、欄１の相当量の対応する異性体生成し得る。両異性体を含有する調製物は、姉妹異性体を（例えば、ガスクロマトグラフィーによって）精製するためにさらに処理され得る。当業者に理解されるように、１つより多い部分的に精製された異性体で開始して、それによって４つ、６つ、８つまたはそれ以上の異性体を含有する調製物を生成することが可能である。さらなる実施形態において、精製された姉妹異性体の調製物は、当該分野で公知の方法（例えば、ガス液体クロマトグラフィー）によって、初期異性体およびその姉妹異性体を含有する処理された調製物から調製され得る。
【００３６】
【表１】

実施例において実証されるように、精製されたｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸の処理は、ｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸の生成を生じる。同様に、濃縮されたかまたは部分的に精製されたｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸を使用して、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸を生成し得る。部分的に精製された異性体が姉妹異性体を生成するために処理された後に、得られる調製物は、好ましくは、部分的に精製された初期異性体と比較して、約２０％より多い姉妹異性体を含有する。他の実施形態において、得られる調製物は、部分的に精製された初期異性体と比較して、約４０％より多い姉妹異性体を含有する。なおさらなる実施形態において、得られる調製物は、部分的に精製された初期異性体と比較して、約２０％と８０％との間の姉妹異性体を含有する。なお他の実施形態において、得られる調製物は、重量／重量基準で、約２０％より多い姉妹異性体を含有するか、または本質的にそれからなる（例えば、調製物は、約２０ｇの姉妹異性体および約８０ｇの部分的に精製された初期異性体を含有する）。さらなる実施形態において、得られる調製物は、重量／重量基準で、約４０％より多い姉妹異性体を含有する。なおさらなる実施形態において、調製物は、重量／重量基準で、約２０％と８０％との間の姉妹異性体を含有する。
【００３７】
（Ｂ．精製異性体および姉妹（ｓｉｓｔｅｒ）異性体対の使用）
上記の精製異性体および姉妹異性体対は、多くの使途を有する。本発明のいくつかの実施形態において、これらの精製異性体または姉妹異性体対は、ガスクロマトグラフィーおよび液体クロマトグラフィーにおける基準としての使途を見出す。これらの異性体の精製または富化された供給源は、未同定の異性体を示す未同定のピークを今まで含み得た商業的ＣＬＡ産物の分析のための基準として使用され得る。
【００３８】
本発明の他の実施形態において、この精製異性体または姉妹異性体対を含む調製物は、動物の食餌研究において、栄養補助剤として使用される。精製異性体および姉妹異性体対が、動物の食餌研究におけるコントロールとして使用され得、その結果、この異性体の生物学的効果（例えば、器官および細胞内の区分け、脂質生合成に対する効果、および代謝）が研究され得ることが意図される。この異性体は、遊離脂肪酸、アルキルエステル（例えば、ＣＬＡのメチルエステルもしくはエチルエステル）、トリグリセリド、またはこれらの組み合わせとして提供され得る。いくつかの好ましい実施形態において、この異性体は、経口的に提供される。他の実施形態において、この異性体は、適切なキャリア（例えば、デンプン、スクロースまたはラクトース）と共に、錠剤、丸剤、糖衣剤、カプセル剤、溶液、液体、スラリー、懸濁液およびエマルジョンに処方され得る。好ましくは、この異性体処方物は、抗酸化剤（Ｃｏｎｔｒｏｘ（Ｇｒｕｎａｕ（Ｈｅｎｋｅｌ），Ｉｌｌｅｒｔｉｓｓｅｎ，ＤＥ）、Ｃｏｖｉ−ＯＸ（Ｇｒｕｎａｕ（Ｈｅｎｋｅｌ），Ｉｌｌｅｒｔｉｓｓｅｎ，ＤＥ）、レシチン、およびビタミンＣの油溶性形態が挙げられるが、これらに限定されない）を含む。この異性体は、水溶液、油性溶液、または上記の他の形態のいずれかで提供され得る。本発明の錠剤またはカプセル剤は、腸溶性コーティングでコートされ得、このコーティングは、約６．０〜７．０のｐＨで溶解する。小腸で溶解するが胃で溶解しない適切な腸溶性コーティングは、酢酸フタル酸セルロースである。いくつかの実施形態において、この異性体は、軟性ゼラチンカプセル剤として提供される。ＣＬＡはまた、多くの他の経路のいずれかによって提供され得る。これらの経路としては、静脈内、筋内、動脈内、髄内、クモ膜下腔内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、局所的、舌下または直腸手段が挙げられるが、これらに限定されない。処方および投与のための技術のさらなる詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（ＭａａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版に見出され得る。
【００３９】
有効量の異性体が、種々の食品（動物飼料、および飲料を含む）における補助剤として提供され得る。この出願の目的のために、「ＣＬＡ異性体を含む食品」は、外来性のＣＬＡ異性体が添加された、任意の天然の食品、加工食品、ダイエット食品または非ダイエット食品をいう。同様に、「ＣＬＡを含む食品」は、外来性のＣＬＡ異性体が添加された任意の動物食餌をいう。ＣＬＡは、遊離脂肪酸、共役リノール酸のエステルの形態で、または油含有のＣＬＡの部分トリグリセリドまたは全トリグリセリドとして添加され得る。従って、ＣＬＡは、種々の食品（ダイエット飲料、ダイエットバー、補助剤、加工凍結食、キャンディー、スナック製品（例えば、チップス）、加工肉製品、牛乳、チーズ、ヨーグルトおよび任意の他の脂肪または油含有食品が挙げられるが、これらに限定されない）に直接含まれ得る。
【００４０】
本発明のさらなる実施形態において、この異性体調製物は、揮発性有機化合物を除去するために、さらに精製されて得る（例えば、分子蒸留または吸着によって）。従って、本発明のいくつかの実施形態において、１００ｐｐｍ未満の揮発性有機化合物、および好ましくは５ｐｐｍ未満の揮発性有機化合物を有する異性体調製物の提供が意図される。
【００４１】
（実験）
以下の実施例は、本発明の特定の好ましい実施形態および局面を実証およびさらに例示するために提供され、そして本発明の範囲を限定するものとして解釈されない。
【００４２】
以下の実験の開示において、以下の略語を適用する：Ｍ（モル濃度）；ｍＭ（ミリモル濃度）；μＭ（マイクロモル濃度）；ｋｇ（キログラム）；ｇ（グラム）；ｍｇ（ミリグラム）；μｇ（マイクログラム）；ｎｇ（ナノグラム）；Ｌまたはｌ（リットル）；ｍｌ（ミリリットル）μｌ；（マイクロリットル）；ｃｍ（センチメートル）；ｍｍ（ミリメートル）；ｎｍ（ナノメートル）；℃（摂氏度）；ＫＯＨ（水酸化カリウム）；ＨＣＬ（塩酸）；およびＨｇ（水銀）。
【００４３】
（実施例１）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸からのｃ１１，ｔ１３オクタジエン酸の生成を記載する。５０ｇのＫＯＨを、中程度の加熱下で、ポリエチレングリコール中に溶解させた。次いで、１００ｇの９８％リノール酸をこの混合物に添加し、そしてこの混合物を１５０℃に加熱して３時間攪拌した。次いで、この混合物を冷却し、そして熱水で数回洗浄し、次いで中程度の加熱で減圧下で乾燥させた。得られたＣＬＡ混合物は、ｃ９，ｔ１１およびｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸ならびに微量のＣＬＡ異性体からなった。この混合物を、酸性メタノール中の還流沸騰によってメチルエステルに変換した。５０ｇの共役遊離脂肪酸を、４．５％の硫酸を含むメタノールに溶解させ、そして水浴中で１時間還流条件下で沸騰させた。この混合物を冷却し、下層を廃棄した。４．５％硫酸を含む新鮮なメタノールを添加し、そしてこの混合物を還流条件下でさらに１時間沸騰させた。冷却後、このメチルエステル混合物を水で数回洗浄し、次いで、中程度の加熱で減圧下で乾燥させた。１０ｇのメチルエステルをアセトン中に溶解させ、そして冷凍庫で一晩−６０℃で冷却した。固体沈殿物を、濾過によって回収し、そしてアセトン中に再溶解し、そして再び−６０℃で一晩冷却した。この沈殿物を減圧下で乾燥させ、ＧＬＣ分析によって９７％のｔ１０，ｃ１２ＣＬＡを含むことを示した。この分析装置は、自動サンプラーを備えたＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＧＬＣからなった。カラムは、高い極性の溶融シリカ型であった。以下のプログラム設定を使用した：
注入：スプリットレス（Ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ）（２５０℃）
検出：フレームイオン化検出器（２８０℃）
キャリア：ヘリウム（ｐｓｉｇ）
オーブンプログラム：８０℃〜１３０℃（４５℃／分）、その後１℃／分で２２０℃まで、そして２２０℃で１０分間
カラム：ＷＣＯＴＦＵＳＥＤＳＩＬＩＣＡ０．２５ｍｍ×１００ｍ、ＣＰ−ＳＩＬ８８ｆｏｒＦＡＭＥ、ｄｆ＝０．２。
【００４４】
次いで、１ｇの精製ｔ１０，ｃ１２異性体を、密封管内で窒素で覆って、２２０℃で２時間加熱した。冷却後、得られたメチルエステルを、ＧＣによって上記のように分析した。混合物中のｔ１０，ｃ１２相対含量を、５２．３２％に減少させ、ｃ１１，ｔ１３異性体は、４１．９６％のレベルで存在した（表２を参照のこと）。
【００４５】
【表２】

（実施例２）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｃ９，ｔ１１オクタジエン酸からのｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を、商業的供給源（Ｍａｔｒｅｙａ、ＳｔａｔｅＣｏｌｌｅｇｅ、ＰＡ）から、またはルーメン微生物による発酵（例えば、本明細書中で参考として援用される米国特許第５，６７４，９０１号を参照のこと）から得ることができる。精製ｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｔ８，ｃ１０オクタジエン酸に変換する。
【００４６】
（実施例３）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｃ７，ｔ９オクタジエン酸からのｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｃ７，ｔ９オクタジエン酸を、分取スケールのガスコロマトグラフィーによって得ることができる。精製ｃ７，ｔ９オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｔ６，ｃ８オクタジエン酸に変換する。
【００４７】
（実施例４）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｔ１１，ｃ１３オクタジエン酸からのｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｔ１１，ｃ１３オクタジエン酸を、分取スケールのガスコロマトグラフィーによって得ることができる（例えば、実施例１に記載のプロセスに従って）。精製ｔ１１，ｃ１３オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｃ１２，ｔ１４オクタジエン酸に変換する。
【００４８】
（実施例５）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｃ６，ｔ８オクタジエン酸からのｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｃ６，ｔ８オクタジエン酸を、分取スケールのガスコロマトグラフィーによって得ることができる。精製ｃ６，ｔ８オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｔ５，ｃ６オクタジエン酸に変換する。
【００４９】
（実施例６）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｃ５，ｔ７オクタジエン酸からのｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｃ５，ｔ７オクタジエン酸を、分取スケールのガスコロマトグラフィーによって得ることができる。精製ｃ５，ｔ７オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｔ４，ｃ６オクタジエン酸に変換する。
【００５０】
（実施例７）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｃ４，ｔ６オクタジエン酸からのｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｃ４，ｔ６オクタジエン酸を、分取スケールのガスコロマトグラフィーによって得ることができる。精製ｃ４，ｔ６オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｔ３，ｃ５オクタジエン酸に変換する。
【００５１】
（実施例８）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｔ１２，ｃ１４オクタジエン酸からのｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｔ１２，ｃ１４オクタジエン酸を、分取スケールのガスコロマトグラフィーによって得ることができる。精製ｔ１２，ｃ１４オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｃ１３，ｔ１５オクタジエン酸に変換する。
【００５２】
（実施例９）
（ＣＬＡ異性体の調製）
本実施例は、ｔ１３，ｃ１５オクタジエン酸からのｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸の生成を記載する。精製ｔ１３，ｃ１５オクタジエン酸を、分取スケールのガスコロマトグラフィーによって得ることができる。精製ｔ１３，ｃ１５オクタジエン酸を、密封管に窒素下でｃ９，ｔ１１オクタジエン酸を配置し、そして２２０℃で約２時間加熱することによって、高い割合（例えば、２５％〜５０％）のｃ１４，ｔ１６オクタジエン酸に変換する。
【００５３】
（実施例１０）
（直接エステル化によるＣＬＡのトリアシルグリセロールの調製）
固定したＣａｎｄｉｄａａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼ（１．２５ｇ）を、グリセロール（１．２２ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）および所望のＣＬＡ異性体の混合物に添加する。この混合物をマグネチックスターラーホットプレート上、６５℃、０．０１〜０．５Ｔｏｒｒの持続減圧下で、緩やかに攪拌する。この反応の進行の間に生成した揮発性の水を、液体窒素冷却トラップ中に持続的に凝縮する。４８時間後、この反応を中断し、ｎ−ヘキサンを添加し、そして酵素を濾過によって濾別する。この有機相を、炭酸ナトリウムのアルカリ性水溶液で処理して、過剰の遊離脂肪酸を除去する（必要な場合）。この有機溶媒（適切な場合、無水硫酸マグネシウムで乾燥後）を、ロータリーエバポレーターで減圧下で除去し、続いて、高減圧処理によって実質的に純粋な生成物を得る。化学量論量の遊離脂肪酸を使用する場合、標準化水酸化ナトリウムによる滴定を適用して、粗反応生成物の遊離脂肪酸含有量を決定する。
【００５４】
（実施例１１）
（ＣＬＡ異性体を含む飼料）
この実施例は、本発明のＣＬＡ遊離脂肪酸、トリグリセリドおよびエステルを含む典型的な動物飼料を提供する。ＣＬＡ異性体調製物は、遊離脂肪酸、アルキルエステル、トリグリセリドまたはそれらの組み合わせの形態であり得る。本発明を、任意の特定の処方物に限定することを意図しない。実際は、種々の濃度におけるＣＬＡ異性体は、種々の飼料における用途を見出すことを意図する。
【００５５】
（Ａ．ブタの開始期食料）
【００５６】
【表３】

（Ｂ．ブタのための飼育期−仕上げ期食料（４０−２４０ＬＢＳ［１８−１０９ＫＧＳ］）
【００５７】
【表４】

（Ｃ．ブタの飼育期−仕上げ期食料（ブタ１２１−２４０ＬＢＳ［５５−１０９ＫＧＳ］）
【００５８】
【表５】

（１．ブタの微量鉱物再混合物の組成および分析）
【００５９】
【表６】

（２．ブタビタミンプレミックスの組成）
【００６０】
【表７】

（Ｄ．雌鶏用の１８％タンパク質層食料）
【００６１】
【表８】

（Ｅ．ブロイラー用の開始期食料および仕上げ期食料）
【００６２】
【表９】

（Ｆ．飼育期／仕上げ期シチメンチョウ食料）
【００６３】
【表１０】

（Ｇ．乾燥ドッグフード処方）
【００６４】
【表１１】

（Ｈ．やや湿気のあるドッグフードの処方）
【００６５】
【表１２】

（実施例１２）
（トリアシルグリセリドの生成）
ＣＬＡ異性体を、上記の方法に従って調製し、１５０℃および圧力１０^−２ｍｂａｒで分子蒸留プラントにて蒸留した。次いで、１０００ｋｇのこの蒸留生成物を、９７ｋｇの純粋なグリセロールおよび８０ｋｇリパーゼと混合した。この反応を、減圧下で攪拌しながら、５５℃で１２時間進行させた。そのトリアシルグリセリド生成物を、分子蒸留装置にて蒸留して、未反応脂肪酸を除去した。
【００６６】
（実施例１３）
（ｃ１１、ｃ１３ＣＬＡの合成）
この実施例は、約６０％のＣＬＡのｃ１１、ｃ１３異性体を含むＣＬＡサンプルの生成を記載する。簡潔には、９５％のｔ１０、ｃ１２脂肪酸エチルエステル混合物の２つの部分、各３０ｇを、７０ｍｌの試験管に移した。この試験管を窒素でパージし、密封した。この試験管を、１００℃の水浴中で１分間予熱し、次いで、２２０℃の油浴に直接移した。２時間後、この試験管の１つを、油浴から取り出し、そして冷却した。他方の試験管を、さらに１時間後に取り出し、次いで、冷却した。最初のサンプルと２つの加熱したサンプルの異性体プロフィールを、ＧＣによって決定した（表１３）。
【００６７】
３つのサンプルを、それぞれ２つの加熱したサンプルから回収し、そして７０ｍｌの試験管に脂肪１グラムあたり３．５ｍｌ、４．５ｍｌまたは５．５ｍｌのアセトンに希釈した（表１４）。次いで、アセトン溶液を含む試験管を、フリーザー中で−６０℃に冷却した。３日後、サンプルを、上清画分から回収した。上清画分の異性体プロフィールをＧＣによって決定した（表１５）。
【００６８】
最初のサンプル（約９９％の総ＣＬＡ、０．９％のオレイン酸）の２２０℃での２時間および３時間の加熱は、ｔ１０、ｃ１２異性体のｃ１１、ｔ１３への部分的な変換を起こした。加熱したサンプルは、３５〜４５％のｃ１１、ｔ１３異性体を含んだ（表１３）。異性体の正確な含量は、選択されたＧＣ条件下での不完全な分離に起因して決定され得なかった。
【００６９】
２時間加熱されたサンプルの結晶化は、より良い（より固体の）結晶を与えることだけ、３時間加熱したサンプルの結晶化と異なった。３時間加熱したサンプルは、どろどろした結晶を与える。上清画分の分析により、２時間加熱したサンプルの結晶化が、上清画分においてより高い含有量のｃ１１、１３を伴うより良い分離を与えることが明かになった。これらの上清画分におけるｃ１１、ｔ１３ＣＬＡおよびｔ１０、ｃ１２ＣＬＡの含有量は、それぞれ、５６〜６０％および２７〜３０％であった。ｃ１１、ｔ１３の含有量は、より小さい脂肪／アセトン比を有するサンプルの上清分画においてわずかにより高かった（表１５）。
【００７０】
【表１３】

＊加熱したサンプルにおいて、ｃ９、ｔ１１の欄において与えられた値は、ｃ９、ｔ１１からの同様の変換によるｃ９、ｔ１１およびｔ８、ｃ１０を示す。ｃ１０、ｃ１２およびｃ１１、ｃ１３の量について与えられた値は、ＧＣによって積分した値である。これらの値は、クロマトグラフィーにおける不完全な分離による本当の含有量からはずれ得る。
【００７１】
【表１４】

＊２つの加熱したサンプルを、等量に希釈した。
【００７２】
【表１５】

＊加熱したサンプルにおいて、ｃ９、ｔ１１の欄において与えられた値は、ｃ９、ｔ１１からの同様の変換によるｃ９、ｔ１１およびｔ８、ｃ１０を示す。ｃ１０、ｃ１２およびｃ１１、ｃ１３の量について与えられた値は、ＧＣによって積分した値である。これらの値は、クロマトグラフィーにおける不完全な分離による本当の含有量からはずれ得る。
【００７３】
上記から明らかなことは、本発明は、ＣＬＡ異性体の新規の組成物を調製するための方法を提供することである。これらのＣＬＡ異性体は、種々の目的（以下が挙げられるが、これらに限定されない：ガスクロマトグラフィーコントロールおよび飼料研究のためのコントロールのために、ならびにヒトおよび動物のための栄養補助食品）のために使用され得る。
【００７４】
上記明細書に言及されたすべての刊行物および特許が、本明細書中に参考として援用される。本発明の記載された方法および系の種々の改変および変更は、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明は、特定の好ましい実施形態に関して記載されているが、特許請求された本発明が、このような特定の実施形態に過度に限定されるべきでないことが、理解されるべきである。実際、食料科学、畜産分野、医学分野、生化学分野または関連分野における当業者に明らかである本発明を実施するための記載された様式の種々の改変が、上記の特許請求の範囲内にあることが意図される。

Claims

方法であって、該方法が、以下：
ａ）共役結合系を有する、第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体を提供する工程；および
ｂ）該部分的に精製されたオクタデカジエン異性体を処理する工程であって、該異性体が、該共役結合系が移動するような条件下で処理され、
それによって、少なくとも該第１の部分的に精製されたオクタデカジエン異性体および第２のオクタデカジエン異性体を含む混合物を形成する、工程、
を包含する、方法。
請求項１に記載の方法であって、以下の工程：
ｃ）前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体と、前記第２のオクタデカジエン異性体とを分離し、第２の部分的に精製されたオクタデカジエン異性体を提供する工程、
をさらに包含する、方法。
前記条件が、前記部分的に精製されたオクタデカジエン酸を加熱する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
前記分離する工程がガス液体クロマトグラフィーによって達成される、請求項２に記載の方法。
前記オクタデカジエン酸がアルキルエステルを含む、請求項１に記載の方法。
請求項１に記載の方法の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｃ９，ｔ１１オクタデカジエン酸およびｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸のうちの１つであり、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸およびｃ９，ｔ１１オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸およびｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸のうちの１つであり、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸およびｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸およびｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸のうちの１つであり、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸およびｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸およびｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸のうちの１つであり、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸およびｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸およびｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸のうちの１つであり、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸およびｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸およびｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸のうちの１つであって、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸およびｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸およびｃ４，ｔ６オクタデカジエン酸のうちの１つであり、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｃ４，ｔ６オクタデカジエン酸およびｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸およびｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸のうちの１つであり、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸およびｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体が、ｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸およびｔ１３，ｃ１５オクタデカジエン酸のうちの１つであって、そして、前記第２のオクタデカジエン酸異性体が、ｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸およびｔ１３，ｃ１５オクタデカジエン酸のうちのもう一方である、方法。
請求項１に記載の方法であって、
少なくとも前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体および第２のオクタデカジエン酸異性体を含む、前記混合物を用いて、アシルグリセロールを合成する工程をさらに包含する、方法。
前記アシルグリセロールがトリグリセリドである、請求項１５に記載の方法。
請求項１に記載の方法によって生成される、組成物。
請求項１５に記載の方法によって生成される、組成物。
前記第２の異性体が、前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体の３０％より大きい濃度で存在する、請求項１７に記載の組成物。
前記第２の異性体が、前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体の４０％より大きい濃度で存在する、請求項１７に記載の組成物。
前記第２の異性体が、前記第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体の２０％と８０％との間の濃度で存在する、請求項１７に記載の組成物。
方法であって、該方法が、以下：
ａ）共役結合系を有する、第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体を提供する工程；
ｂ）該第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体を処理する工程であって、該異性体が、該共役結合系が移動するような条件下で処理され、
それによって、該第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体および第２のオクタデカジエン酸異性体を含む混合物を形成する、工程；ならびに
ｃ）該第１の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体と、該第２のオクタデカジエン酸異性体とを分離して、第２の部分的に精製されたオクタデカジエン酸異性体を提供する工程、
を包含する、方法。
前記条件が、実質的に精製されたオクタデカジエン酸異性体を加熱する工程を包含する、前記請求項２２に記載の方法。
前記分離する工程が、ガス液体クロマトグラフィーで達成される、請求項２２に記載の方法。
共役リノール酸の異性体を含む組成物であって、ここで該組成物が、オクタデカジエン酸の第１の異性体を少なくとも２５％含み、そして、該第１の異性体の姉妹異性体を少なくとも２５％含む、組成物。
前記共役リノール酸がアルキルエステルであるか、または該共役リノール酸がアルキルエステルを含む、請求項２５に記載の組成物。
前記共役リノール酸異性体が、アシルグリセロール組成物中に含まれる、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｃ９，ｔ１１オクタデカジエン酸であり、そして前記姉妹異性体がｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｔ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｃ４，ｔ６オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
前記第１の異性体が、ｔ１３，ｃ１５オクタデカジエン酸であって、そして前記姉妹異性体がｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸である、請求項２５に記載の組成物。
アシルグリセロールの混合物を含む組成物であって、ここで、該アシルグリセロールが、以下：
ｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸、ｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸、
ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸、ｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸、
ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸、ｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸、
ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸、ｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸、
ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸、ｔ４，ｃ６オクタデカジエン酸、
ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸、
ｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸、およびｃ１４，ｔ１６オクタデカジエン酸、
からなる群より選択された脂肪アシル残基を、少なくとも２５％含む、組成物。
前記アシルグリセロールがトリグリセリドである、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｔ８，ｃ１０オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ１１，ｔ１３オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ７，ｔ９オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｔ６，ｃ８オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｔ１１，ｃ１３オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ１２，ｔ１４オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ６，ｔ８オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｔ５，ｃ６オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ５，ｔ７オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ４，ｔ６オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｔ３，ｃ５オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｔ１２，ｃ１４オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ１３，ｔ１５オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。
前記脂肪アシル残基が、ｃ１４，ｔ１５オクタデカジエン酸である、請求項３７に記載の組成物。